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UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE RECURSOS NATURALES RENOVABLES
CONSERVACION DE SUELOS Y AGUA












ENUMERACION DE MICROORGANISMOS DEL SUELO


CURSO : MICROBIOLOGIA DEL SUELO


INTEGRANTES : ACOSTA ASTO, Daily
BAILON OBREGON, Benjamn
DIAZ PAREDES, Janeth
DAMIAN LUJAN, Admir
LOPEZ ANGULO, Richard
OLORTEGUI UTIA, Liseth
FIGUEREDO CRDENAS Alejandra Mara


DOCENTE : ING. GUERE SALAZAR, Fiorela Vanesa.


TINGO MARIA PERU
2013


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I. INTRODUCCIN
Microbiologa es el estudio de los organismos microscpicos, deriva
de 3 palabras griegas: micros (pequeo) bios (vida) y logos (ciencia) que
conjuntamente significan el estudio de la vida microscpica.
Para mucha gente la palabra microorganismos le trae a la mente un
grupo de pequeos criaturas que no se encuadran en ninguna de las categoras
de la pregunta clsicas es animal, vegetal o mineral? Los microorganismos son
diminutos seres vivos que individualmente son demasiado pequeos como para
verlos a simple vista.
Los microorganismos del suelo destruyen los productos de desecho e
incorporan el gas nitrgeno del aire en compuestos orgnicos as como reciclan
los productos qumicos en el suelo agua y aire: ciertas bacterias y algas juegan un
papel importante en la fotosntesis ,que es un proceso que genera nutrientes y
oxgeno a partir de luz solar y CO2 siendo un proceso crtico para el
mantenimiento de la vida sobre la tierra : los hombres y algunos animales
dependen de las bacterias que habitan en sus intestinos para realizar la digestin
y sntesis de algunas vitaminas como son la K y algunos de complejo B .Los
microorganismos tambin tienen aplicaciones industriales ya que se utilizan en la
sntesis de productos qumicos como son acetona, cidos orgnicos, enzimas,
alcohol y muchos medicamentos.
Nosotros podemos hacernos una idea de cmo se han desarrollado
nuestros actuales conceptos de microbiologa repasando los acontecimientos
histricos que han cambiado nuestras vidas.


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La microbiologa es una ciencia biolgica que estudia la estructura,
fisiologa, gentica ecologa y las aplicaciones socioeconmicas de los
microorganismos. Es decir, de aquellos seres vivientes comprendidos en los
reinos Fung (hongos), Protista y Monera (bacterias), incluyendo a los virus y a
otros organismos moleculares. La microbiologa utiliza tcnicas como la
esterilizacin, el empleo de medios de cultivo, el anlisis molecular y bioqumica,
para el aislamiento y crecimiento de los microorganismos.

Objetivos General 1.1.
Determinar la enumeracin de microorganismo del suelo en el bosque
reservado de la universidad nacional agraria de la selva (BRUNAS).





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II. REVISION DE LITERATURA
Desarrollo histrico de la microbiologa 2.1.
Como otras ciencias, la microbiologa actual ha seguido tambin un
desarrollo histrico, que por razones didcticas aqu se ha dividido en seis
periodos se mencionarn cuatro de ellos.

a. Periodo especulativo (3 millones de aos a.c. 1676)

Este periodo se inicia desde los 3 a 2.5 millones de aos A.C con la
evolucin del gnero homo. Al desarrollarse las primeras prcticas agrcolas y el
procesamiento emprico de los alimentos (1000-7000 A.C) el hombre inicia
inconscientemente su relacin eterna con los microorganismos. Fueron los
sumerios, babilonios y, ms exquisitamente, los egipcios los que emplearon
directamente a los microorganismos al desarrollar la fabricacin del pan y la
cerveza. Otras culturas ms recientes tambin han utilizado los microorganismos
particularmente en su alimentacin, bebidas alcohlicas han estado presentes en
las culturas asiticas, africanas, europeas y americanas; los alimentos
fermentados han sido desde sus orgenes fundamentales en la dieta de los
asiticos. Ms tarde, Fracastoro (1546) sugiere que organismos invisibles eran los
causantes de las enfermedades. Otros como Robert Hooke (1664) describieron
observaciones microscpicas de hongos .Pero fue en octubre de 1676 Anthony
Van Leeuwenhoek; (1632-1723) publica en la revista PHILOSOPHICAL
TRANSACTIONS OF THE ROYAL SOCIETY, su primer articul sobre
observaciones microscpicas y la primera persona en describirlos
microorganismos en detalle, a los cuales denomino animculos.




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b. Periodo especulativo (3 millones a.c, 1676)

Aparicin Genero Homo (3 A 2.5 millones A. A. C)
Practicas Agrcolas (10,000 7000 A. A. C), Procesamiento Emprico de los
Alimentos
Egipcios M .O. Pan y Cerveza Otras Culturas: asiticas, Africanas,
Europeas, Americanas
Bebidas Alcohlicas Alimentos Fermentados
Fracastoro (1546) = M .O. Enfermedades
Robert Hooke (1664) = Observaciones Microscpicas Hongos

c. Periodo de la observacin (1676-1867)

Despus que las publicaciones de Leewenhoek demostraron la
existencia delos microorganismos fue necesario, sin embargo, esperar cerca de
200 aos para que la microbiologa tenga un avance rpido. Esto fue debido
principalmente al predominio en aquella poca de la Teora de la Generacin
espontnea. Este fue un periodo de duro enfrentamiento filosfico entre los
diversos cientficos que termino con tal Teora. Hombres como Francesco Redi
(1626 1698) Lzaro Spallanzani (1729-1799), Jhon Tyndall (1820-1893) y.
principalmente, Louis Pasteur (1822-1895), dieron la victoria e impulsaron
vigorosamente a la microbiologa.

La idea de la generacin espontnea se remonta a la cultura griega,
los cuales crean que las ranas y gusanos crecan espontneamente a partir del
lodo, incluso existan recetas: llenando una tinaja con trapos y colocndola en un
sitio apartado durante semanas al final crecan ratones a partir de trapos. En el
siglo XVII el italiano Francesco Redi demostr en 1668 que los gusanos
encontrados en la carne podrida eran las larvas que provenan de los huevos que
previamente haban depositado en la carne las moscas y no el producto dela
generacin espontnea. Sin embargo una cosa eran huevos de moscas y otra los
microorganismos que solo se podan ver, con la ayuda del microscpico. En 1745
Jhon Needham hirvi trozos de carne para destruir los organismos preexistentes y
los coloco en un recipiente abierto. Al cabo de un tiempo observo colonias de

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microorganismos sobre la superficie y concluyo que se generaban
espontneamente a partir de la carne.
En 1769, Lzaro Spallanzani repiti el experimento pero tapando los
recipientes, no apareciendo las colonias, lo que contradeca la teora de la
generacin espontnea. Pero Needham argumento que el aire era esencial para
la vida incluida la generacin espontnea de microorganismos y este aire haba
sido excluido en los experimentos de Spallazani.

e. El periodo de la gentica microbiana (1941-1970)

A inicios de la dcada de los 40 no estaba plenamente confirmada la
participacin de los cidos nucleicos como los agente fundamentales en la
transmisin hereditaria de los organismos vivientes. Si bien los trabajos de
Mendel haban dado origen a la gentica, no se incluia a los microorganismos y,
en todo caso, era un misterio su comportamiento gentico. Fueron G, W. Beadie y
E.L Tatum quienes en1941, probaron la relacin entre los genes y las enzimas
encontrar mutantes auxotroficos (incapaces de sintetizar un metabolismo y,
entonces, dependientes del suministro extenso de este) del hongo Neurospora.
En 1943, Max Delbruck y Salvatore Luria encontraron mutaciones
espontneas en bacterias. Un ao ms tarde, O.T. Avery, C.M. Macleed y M.
Mccarty probaron contundentemente que el DNA era la molcula hereditaria y que
las bacterias podan transferir genes mediante la transformacin, J.Lederberg y
E.L. Tatum (1946) demostraron que algunas bacterias tambin podan transferir
genes mediante contacto clula (conjugacin). En 1952, F.H.C.Crick, J.D. Watson
y W.Wilkins propusieron el modelo estructural del DNA.
En este periodo, tambin, se inicia la utilizacin de los nuevos
conceptos dela gentica de microorganismo para lograr mejorar las
caractersticas culturales e incrementar las capacidades metablicas de los
microorganismos utilizados en la produccin industrial. Se considera que el uso
de la Muta gnesis con estos propsitos es casi inmediato al hallazgo de
mutantes de Neurospora. La Muta gnesis con estos propsitos es casi inmediata

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al hallazgo de mutantes Neurospora. La Mutagenesis es aun utilizada en los
programas de mejoramiento gentico de microorganismo de uso industrial El
periodo anterior fue sin duda muy rico en descubrimiento gentico y molecular los
cuales continan actualmente. Sin embargo, en 1973 se public un artculo en el
que se demostraba la factibilidad de introducir y expresar genes forneos en
bacterias. Particularmente el gen de las omatostaina, una hormona de mamferos,
pudo ser expresado en Escherichia coli.
Esto dio lugar al resurgimiento y modernizacin de la Biotecnologa,
es decir, de la aplicacin de ingeniera de los procesos biolgicos desarrollados
por clulas microbianas, vegetales o animales, por sus componentes o partes,
con la finalidad de obtener bienes y servicios. Actualmente se produce en forma
industrial varias protenas humanas, animales y vegetales empleado
microorganismo. La formacin de industrias biotecnolgicas ya ha causado una
nueva Revolucin industrial, cuyo mximo nivel e podra alcanzar recin en las
primeras dcadas del prximo siglo.
Microbiologa y tecnologa 2.2.
Como ciencia la microbiologa contribuye no solo descubriendo de la
verdad, sino tambin al desarrollo socioeconmico de la humanidad. La aplicacin
econmica de la microbiologa depende de un buen balanceentre tres
componentes. Materia prima (constante) (MP, Tecnologa (T) ynivel de la
microbiologa (M).
Dentro de las diferentes sociedades actualmente existentes en el
mundo se pueden encontrar cuatro variaciones.
La primera corresponde a Japn y varios pases asiticos
La segunda a la ex Unin Sovitica
La tercera a Europa y EEUU
Y la cuarta a los pases del Sur (Tercer Mundo).


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Microbiologa del suelo 2.3.
Existe una gran diversidad de microorganismos que viven en el suelo.
El nmero y tipos de microorganismos presentes en el suelo dependen de
diversos factores ambientales como son los nutrientes, humedad, aireacin,
temperatura, pH, prcticas agrcolas, etc. Existen del orden de varios miles de
millones de bacterias por gramo de suelo. La mayor parte son hetertrofos, siendo
comunes los bacilos esporulados, los actinomicetos que son los responsables del
olor a tierra mojada, y en la rizosfera (regin donde el suelo y las races de las
plantas entran en contacto) especies de los gneros Rhizobium y Pseudomonas.
Ciclos biogeoqumicos 2.3.1.
El planeta Tierra acta como un sistema cerrado en el que las
cantidades de materia permanecen constantes. Sin embargo, s existen continuos
cambios en el estado qumico de la materia producindose formas que van desde
un simple compuesto qumico a compuestos complejos construidos a partir de
esos elementos. Algunas formas de vida, especialmente las plantas y muchos
microorganismos, usan compuestos inorgnicos como nutrientes. Los animales
requieren compuestos orgnicos ms complejos para su nutricin. La vida sobre
la Tierra depende del ciclo de los elementos qumicos que va desde su estado
elemental pasando a compuesto inorgnico y de ah a compuesto orgnico para
volver a su estado elemental. Los microorganismos son esenciales en estas
transformaciones qumicas
Ciclo del nitrgeno
La fijacin biolgica de nitrgeno, crucial en el ciclo biogeoqumico del
nitrgeno, es considerada, despus de la fotosntesis, como el proceso
bioqumico ms importante para el mantenimiento de la vida sobre la Tierra.
FIJACIN DE N2
La llevan a cabo las bacterias diazofrficas para su propio
crecimiento. Slo cuando mueren se liberan al medio los compuestos orgnicos

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nitrogenados que se transforman en nitrato y amonio, que ya pueden asimilarse
por las plantas o por otros microorganismos.
Azospirillum basilense
Bacteria fijadora de N2 que se encuentra con frecuencia en la
rizosfera del maz y otras gramneas. Adems produce fitohormonas que
favorecen el desarrollo de las plantas

Fijacin de n2 en simbiosis
Las bacterias de la familia Rhizobiaceae, conocidas con el nombre
genrico de rizobios, se caracterizan por infectar las clulas de las races de las
plantas leguminosas y formar ndulos (Figura 1), estructuras caractersticas de la
interaccin bacteria-planta en el interior de las cuales unas clulas especializadas,
los bacteroides (Figura 2) reducen el N2 a amonio.
La fijacin simbitica de N2 es un proceso no contaminante y
respetuoso con el medio ambiente, por lo que debera emplearse para disminuir el
empleo excesivo de fertilizantes nitrogenados
Caractersticas fsicas del suelo 2.3.2.
Hay diferentes tipos de suelo y sus caractersticas varan
dependiendo de la localizacin y el clima. Los suelos difieren con profundidad,
propiedades fsicas, composicin qumica y origen. Estos pueden clasificarse
como suelo. Minerales y orgnicos. Los suelos minerales contienen materia slida
mayormente inorgnica. Los suelos orgnicos contienen poca materia inorgnica.
Composicin del suelo 2.3.3.
El suelo est compuesto de diversas capas. A dichas capas se les
llama horizontes y cada una se caracteriza por su composicin abitica y/o
bitica.

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Horizonte A
Aqu encontramos los minerales y la materia orgnica en distintos
estados de descomposicin. En esta capa se localiza el humus. El humus se
define como el conjunto de residuos orgnicos, vegetales y animales que se
incorporan al suelo y cuya degradacin es difcil de realizar por microorganismos.
La importancia de ste, es que mejora la textura y estructura del suelo,
aumentando as su capacidad de retener agua y reduciendo los cambios en el pH.
Adems sirve como reserva de materiales nutritivos en el suelo.
Horizonte B
En esta capa encontramos partculas finas y minerales.
Horizonte C
Este se compone de materia mineral solamente.
Horizonte D
Esta capa posee roca slida bajo el suelo, es importante para la
formacin de acuferos. En Puerto Rico los acuferos se localizan al norte de la
isla, siendo stos muy importantes como reserva de agua.
Material slido del suelo 2.3.4.
El material slido que forma parte del suelo es muy diverso y se divide
en dos clases: material orgnico y material inorgnico.
Material inorgnico

1. Partculas coloidales: Provienen de la erosin de las rocas subyacentes y estn
constituidos por minerales arcillosos. Tienen gran capacidad de adsorcin
convirtindose en almacenes de agua y nutrientes para las plantas.


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2. Minerales: Los principales son el cuarzo y diversos silicatos procedentes de la
disgregacin de las rocas gneas y metamrficas.

3. xidos: Principalmente los xidos de hierro de ah la tpica coloracin ocre. Y
en menor proporcin los xidos de magnesio, titanio, aluminio y cinc.

4. Los carbonatos: El principal es el carbonato clcico, son una gran fuente de
carbono con abundante presencia en el suelo.

Material orgnico:
Consiste en una mezcla de biomasas, plantas parcialmente
degradadas, organismos vivos microscpicos y el humus. El humus es el residuo
originado por la accin de hongos y bacterias sobre las plantas y esta compuesto
por una fraccin soluble y una fraccin insoluble: la humina. Este componente
desempea un papel importante en los procesos fsicos y qumicos que tienen
lugar en el suelo.
Propiedades caractersticas de los suelos 2.3.5.
Cada suelo se caracteriza por sus propiedades fsicas y qumicas. El
conocimiento de las caractersticas fsico-qumicas de un suelo, nos permitir
prever la dinmica de las sustancias contaminantes:
1. LA POROSIDAD: Condiciona la movilidad de los compuestos solubles y de los
voltiles.
2. LA TEMPERATURA: De ella dependen los procesos de alteracin de los
materiales originarios o la difusin de los contaminantes
3. LOS PROCESOS CIDO-BASE: Influyen en el grado de descomposicin de la
materia orgnica y de los minerales, en la solubilidad de algunos contaminantes y
en conjunto, los procesos controlados por el pH del suelo.
4. LAS REACCIONES REDOX: Originados en el metabolismo de los
microorganismos del suelo, afectan a elementos naturales y contaminantes.

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5 LAS PROPIEDADES COLOIDALES: Explican los procesos de agregacin e
inmovilizacin de partculas.
6. LAS INTERACCIONES SUPERFICIALES: Como por ejemplo la adsorcin
entre componentes del suelo y otros compuestos ya sean naturales o
contaminantes.
7. LA CAPACIDAD DE INTERCAMBIO INICO: Corresponde a la cantidad de
iones metlicos que una determinada cantidad de suelo es capaz de intercambiar.
Estos intercambios son vitales para que los iones metlicos puedan acceder a la
planta.
8. La modificacin o transformacin por contaminacin, deforestacin, de alguno
de los factores que conforman un suelo implica un desequilibrio que afecta al
resto de los factores y activa normalmente, procesos de regresin en ese suelo.

Factores que contribuyen al nmero y tipo de microorganismos 2.3.6.
en el suelo
Composicin del suelo (cantidad y tipo de nutrientes.), Caractersticas
fsicas del suelo (grado de aeracin, humedad, temperatura y pH.), Tipo de
plantas en el suelo (el sistema de races influye en el nmero y tipo de
organismos presentes.
Flora Microbiana en el Suelo 2.3.7.
En un suelo frtil podemos encontrar races de plantas superiores,
diversos animales y una gran cantidad de microorganismos.
2.3.7.1. Bacterias

Estas exceden la poblacin de todos los otros grupos de
microorganismos. Encontramos todo tipo de bacterias desde autotrficas,
heterotrficas, aerbicas y anaerbicas.

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2.3.7.2. Hongos

Cientos de especies se encuentran en el suelo, generalmente cerca
de la superficie donde prevalece una condicin aerbica. Los hongos son los
descomponedores de celulosa, lignina y pectina. La importancia del hongo en el
suelo es que mejora la estructura fsica mediante la acumulacin de sus micelios
en l. Adems los hongos forman unos agregados que ayudan a retener agua.
2.3.7.3. Algas
Mayormente encontramos algas verdes y diatomeas en la superficie o
cerca de sta ya que necesitan luz para llevar a cabo fotosntesis. Estas juegan
un papel importante en suelos erosionados o desrticos, ya que como son
fotosintticos inician la acumulacin de materia orgnica en esa rea.
2.3.7.4. Protozoarios
Son importantes en la cadena alimentaria, ya que su modo de
nutricin es la ingestin de bacterias controlando as la poblacin bacteriana.
2.3.7.5. Virus
Este grupo incluye fagos, virus de plantas y virus de animales.
2.3.7.6. La rizsfera
Es la capa de suelo que se encuentra adyacente a las races. Esta
regin se caracteriza por una alta poblacin microbiana. Las bacterias que crecen
en la rizsfera se ven afectadas positivamente por substancias que liberan las
plantas como aminocidos, vitaminas y otros.
A la vez el crecimiento de las plantas se ve afectado por substancias
liberadas por la poblacin microbiana.

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Interaccin entre los microorganismos del suelo 2.3.8.
2.3.8.1. Relaciones simbiticas

Neutralismo
Es esta relacin dos especies ocupan el mismo ambiente sin que se
afecte una o la otra (neutral.)
Mutualismo
Es una asociacin donde cada uno de los organismos envueltos se
benefician (relacin positiva.
Comensalismo
Es esta relacin un organismo se beneficia mientras que el otro no se
afecta (relacin positiva). Un ejemplo lo observamos en los hongos que degradan
celulosa a glucosa y otros compuestos, las bacterias no pueden degradar
celulosa, pero s glucosa beneficindose de esta forma.
Antagonismo
Esto se observa cuando una especie afecta adversamente el
ambiente de otra especie, produciendo diferentes substancias inhibidoras o
antibiticas (relacin negativa. Un ejemplo lo vemos en la produccin de
sustancias inhibidoras como: antibiticos, cianuro (producido por hongos),
metano, sulfuros, enzimas lticas (stas rompen la pared celular de las bacterias).
Los medios de cultivo en microbiologa 2.3.9.
THOMAS. Et al. (1991). Uno de los sistemas ms importantes para la
identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias
alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el
que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de
cultivo diferentes.

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Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de
cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura,
grado de humedad y presin de oxgeno adecuado, as como un grado correcto
de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo
contaminante.
La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos
similares en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la
base de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y
Peptona a la que se aadirn otros ingredientes.
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la
preparacin de medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del
agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones
no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas
que crecen en l.
Caractersticas De Las Colonias Bacterianas 2.3.10.
Para conocer mejor las caractersticas de los microorganismos es
necesario estudiarlas en un medio puro. Un cultivo puro es aquel que contiene
una clase de microorganismo, por eso se debe evitar la contaminacin. Para esto
se debe cultivar con la cantidad de nutrientes y los medios necesarios. (Brock
1999).
La solucin acuosa con los nutrientes necesarios se llaman medio de
cultivo. Un medio de cultivo requiere de una fuente de carbono, nitrgeno y otros
nutrientes. La clula requiere de dos tipos de nutrientes: macro y
micronutrientes. El carbono es muy importante porque a partir de ste la clula
fabrica material celular. El siguiente elemento ms abundante es el nitrgeno ya
que forma parte de protenas, cidos nuclicos y otros constituyentes
celulares. Algunos otros macronutrientes son el fsforo, el azfre, el potasio,
magnesio, calcio, sodio y hierro. Entre los micronutrientes son metales que

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forman parte de enzimas. Los factores de crecimiento incluyen vitaminas,
aminocidos, purinas y pirimidinas. (Brock 1999) .
Los dos grupos de medios de cultivos son los qumicamente definidos
y los indefinidos o complejos. Los primeros se preparan aadiendo a agua
destilada cantidades precisas de compuestos purificados, por eso se conoce la
composicin exacta. A veces no es necesario conocer exactamente la
composicin qumica. Los medios complejos usan lisados de sustancias
nutritivas. (Brock 1999).
Los medios de cultivo pueden ser preparados para usarse en estado
lquido o como geles semislidos. Un medio de cultivo lquido puede pasar a
semislido agregndole un agente solidificante que normalmente es el agar. En
las cajas de Petri, es donde se hacen los medios de cultivos con agar. (Brock
1999).
Para evitar contaminantes se debe utilizar la tcnica asptica. Los
contaminantes areos son los que presentan el problema ms comn. Las
transferencia asptica de un tubo a otro se realiza con un asa o una aguja que ha
sido esterilizada por calentamiento. Los cultivos tambin piden ser transferidos a
placas. (Brock 1999).
Mtodos de aislamiento 2.3.11.
THOMAS. Et al. (1991). El aislamiento de bacterias a partir de
muestras naturales se realiza, en la mayora de los casos, mediante la produccin
de colonias aisladas en cultivos slidos. El crecimiento explosivo de las bacterias
permite producir un gran nmero de ellas a partir de una nica clula inicial de
forma que, tras un periodo de incubacin en las condiciones ambientales
adecuadas, se produce una colonia observable a simple vista y formada por
individuos iguales (un clon bacteriano).
Sin embargo, no todos los microorganismos presentes en las
muestras ambientales son cultivables (microorganismos no cultivables). Esto es
debido a dificultades intrnsecas en el cultivo (microorganismos parsitos de

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otros), al desconocimiento de los requerimientos especficos de cultivo, y a la
existencia de grupos de microorganismos que deben mantenerse en equilibrio
para poder sobrevivir (casos de sintrofa por ejemplo).
Se estima que en slo en torno al 1% de las bacterias del suelo al 0,1
- 0,01 % de las bacterias marinas son cultivables. Existen procedimientos de
enriquecimiento del nmero de bacterias de ambientes naturales para facilitar su
aislamiento. Uno de ellos es la Columna de Winogradski que crea un
microcosmos para enriquecer el nmero de ciertos tipos de microorganismos
presentes en ambientes naturales con objeto de facilitar su aislamiento.
Medida del crecimiento y enumeracin de microorganismos 2.3.12.
THOMAS. Et al. (1991). Existen diferentes sistemas para detectar y
medir el crecimiento de microorganismos. Los principales, se enumeran a
continuacin:
2.3.12.1. Recuento directo
Consiste en la observacin al microscopio de volmenes muy
pequeos de suspensiones de bacterias. Se usan unos portaobjetos especiales
denominados cmaras de Petroff-Hausser. Para que la medida sea correcta es
necesario que la densidad de clulas sea del orden de 105 por ml.
2.3.12.2. Medida de la masa de clulas
El sistema se basa en que las clulas en suspensin dispersan la luz
causando la turbidez del cultivo. La turbidez depende de la masa en suspensin y,
por tanto, midiendo esta se puede estimar aquella. Este es el parmetro de
medida ms fcil de usar en los cultivos de laboratorio. La densidad de clulas
debe ser del orden de 105 por ml.
2.3.12.3. Recuento de viables
Consiste en sembrar un volumen determinado de cultivo o muestra
sobre el medio de cultivo slido adecuado para estimar el nmero de viables
contando el nmero de colonias que se forman puesto que cada una de estas

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deriva de una clula aislada. Para que la medida sea correcta desde el punto de
vista estadstico, es necesario contar ms de 300 UFC.
En ciertas ocasiones en las que la densidad de microorganismos es
demasiado baja, stos se pueden recolectar por filtracin a travs de una
membrana (de 0.2 m de tamao de poro) y posterior colocacin de la membrana
en un medio de cultivo adecuado para que se formen las colonias.
2.3.12.4. Medida del nmero de partculas
Usando contadores electrnicos de partculas. Estos sistemas no nos
indican si las partculas corresponden a clulas vivas o muertas; pero nos pueden
dar una idea del tamao de las partculas.
2.3.12.5. Medida de parmetros bioqumicos
Tales como la cantidad de ADN, ARN, protenas, peptidoglicano, etc.
por unidad de volumen de cultivo.
2.3.12.6. Medida de actividad metablica

De las bacterias como que respiran producen una disminucin del
potencial redox del medio en que se encuentran como consecuencia del consumo
de oxgeno (utilizacin de colorantes sensibles a oxidacin-reduccin tales como
el azul de metileno).















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III. MATERIALES Y METODOS
Materiales 3.1.
Caldo peptonado 1% 90 ml
Agar Plate Count + manitol 1% (sal)
Tubos con caldo diluyente
Matraz
Papel filtro
Pipetas de 1 a 10 ml
Embudo
Estufa
Placa Petri
Metodologa 3.2.
Trabajo de campo 3.2.1.
Se realiz la ubicacin de la zona para la extraccin de la muestra de suelo










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Trabajo de gabinete 3.2.2.
Muestra de suelo desecado o hmedo (250 gr)



Se pes 10 gr de muestra de suelo













Los 10 gramos de suelo se le aadieron al matraz contenido con 90 ml de caldo
peptonado al 0.1 %. Agitar bien la solucin.







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Despus de agitar hay q llevar a filtrar la solucin


Despus del filtrado hay que sacar 1 ml de la solucin para agregar al primer tubo
de ensayo, y as a cada tubo respectivamente.




1 ml de
Solucin
Filtrado



1 ml 1 ml 1 ml


10
-2
10
-3
10
-4
10
-5




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Sembrar por profundidad un inoculo de 0.25 1 ml (de las dos ltimas
disoluciones), medio Plate Count manitol 1%.





Incubar a temperatura ambiente (28 30c) por 24 a 48 horas.


Despus de los 24 a 48 horas, se procede a realizar el recuento de colonias
utilizando un equipo de cuenta colonias, luego se aplic la formula respectiva de
enumeracin de M. O. por gramo. Formula: M.O./gr de suelo = # colonias X
Inoculo de siembra X Factor de dilucin.


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IV. RESULTADOS
Determinacin de microorganismos en la muestra del suelo. 4.1.
La prctica de enumeracin de colonias tiene la finalidad de
determinar la fertilidad del suelo, debido a que los microorganismos son
extremadamente numerosos en un suelo frtil, es decir que un gramo de tierra
sana contiene aproximadamente diez mil millones de bacterias. Todos los
microorganismos descomponen la materia orgnica y reciclando as los
nutrientes, mayormente son organismos aerobios, los cuales tambin pueden
pertenecer al grupo de los patgenos.

Del muestreo del suelo del BRUNAS, se utiliz 10 gramos de suelo
para inocular utilizamos el mtodo de incorporacin. Utilizamos un factor de
dilucin de 10
4
con un inoculo de 1 ml.
Se aplicara la siguiente formula, despus del conteo de colonias:

Microorganismos en el suelo = nmero de colonias inoculo de siembra factor
de dilucin.

Microorganismos en el suelo = 10 1 ml 10
4
colonias/gr de suelo.
Microorganismos en el suelo = 100 000 colonias/gr de suelo.




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V. DISCUSION

Despus de 24 horas de haber hecho la siembra, se observ que no
haba habido crecimiento en la placa. Se observ 50 colonias en la placa de
agar. Si se tratara de una bacteria, la forma de crecimiento era circular, el borde
era entero y no tena elevacin por lo que era plana. El hecho de que no hayan
crecido puede deberse a que tal vez se tom muy poco al realizar el raspado de la
placa. Podra deberse tambin a que al realizar el raspado para tomar la colonia
de la placa previamente sembrada el asa estuviera todava muy caliente, tanto
que matara a las bacterias que se tomaron y para el momento de realizar la
siembra en la placa hubieran muy pocas o ninguna viva.


25

VI. CONCLUSION

El punto blanco observado en la placa podra ser una colonia
bacteriana o una burbuja del agar.

El conteo de los microorganismos del muestreo del suelo del BRUNAS
dio como resultado un alto ndice de microorganismo en gramos de
suelo, concluimos que es un suelo altamente frtil.

El contenido de microorganismos del suelo es de 100 000 colonias/gr
de suelo.

Todos los microorganismos descomponen la materia orgnica y
reciclando as los nutrientes, mayormente son organismos aerobios.



26

VII. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS
BURGES. A. 1960. Introduccin a la microbiologa del suelo. Edit. Acribia.
Zaragoza. 84-109 p.

THOMAS. D; BROCK; MICHAEL. T. y MADIGAN. 1991. Microbiologa. 6 ta
Edicin. Edit. Prentice Hallitom. Mexico.605 p.

HAYNES, WC, WICKERHAM, LJ Y HESSELTINE, 1955. El mantenimiento
de cultivos de microorganismos de importancia industrial. Apol.
Microbiologa. 361-368 Pg.

Lpez, MJ y Ramos, A. 1978. Produccin xantana de las aguas residuales
de oliva molino. Int. Biodet. Biodegr. 263-270 Pg.

SUTHERLAND, IW 1994. Las relaciones estructura - funcin en ex
polisacridos microbianos. Biotech. Adv. 448 Pg.

VELA, G.R. Y ROSENTHAL, S. 1972. El efecto de peptona en Azotobacter
morfologa. J. Bacteriol. 260-266 Pg.

SIVILA de CARY, R., 1993. Comportamiento de la microflora del suelo bajo
un agroecosistema de rotacin de cultivo en la region de Huaraco, en
Revista Ecolgica en Bolivia (por publicarse).

MAYEA S, NOVO SR, VALIN0 A., 1982. Introduccin a la microbiologa del
suelo, Pueblo y Educacin, Habana, Pg. 187.



27


NDICE

I. INTRODUCCIN ............................................................................................ 2
Objetivos General ................................................................................... 3 1.1.
II. REVISION DE LITERATURA.......................................................................... 4
Desarrollo histrico de la microbiologa .................................................. 4 2.1.
Microbiologa y tecnologa ...................................................................... 7 2.2.
Microbiologa del suelo ........................................................................... 8 2.3.
Ciclos biogeoqumicos ......................................................................... 8 2.3.1.
Caractersticas fsicas del suelo .......................................................... 9 2.3.2.
Composicin del suelo ......................................................................... 9 2.3.3.
Material slido del suelo .................................................................... 10 2.3.4.
Propiedades caractersticas de los suelos ......................................... 11 2.3.5.
Factores que contribuyen al nmero y tipo de microorganismos en el 2.3.6.
suelo12
Flora Microbiana en el Suelo ............................................................. 12 2.3.7.
2.3.7.1. Bacterias .................................................................................... 12
2.3.7.2. Hongos ....................................................................................... 13
2.3.7.3. Algas .......................................................................................... 13
2.3.7.4. Protozoarios ............................................................................... 13
2.3.7.5. Virus ........................................................................................... 13
2.3.7.6. La rizsfera ................................................................................ 13
Interaccin entre los microorganismos del suelo ............................... 14 2.3.8.
2.3.8.1. Relaciones simbiticas ............................................................... 14
Los medios de cultivo en microbiologa ............................................. 14 2.3.9.
Caractersticas De Las Colonias Bacterianas .................................... 15 2.3.10.
Mtodos de aislamiento ..................................................................... 16 2.3.11.
Medida del crecimiento y enumeracin de microorganismos ............ 17 2.3.12.
2.3.12.1. Recuento directo ...................................................................... 17
2.3.12.2. Medida de la masa de clulas .................................................. 17
2.3.12.3. Recuento de viables ................................................................. 17
Pg.

28

2.3.12.4. Medida del nmero de partculas ............................................. 18
2.3.12.5. Medida de parmetros bioqumicos.......................................... 18
2.3.12.6. Medida de actividad metablica ............................................... 18
III. MATERIALES Y METODOS ......................................................................... 19
Materiales ............................................................................................. 19 3.1.
Metodologa .......................................................................................... 19 3.2.
Trabajo de campo .............................................................................. 19 3.2.1.
Trabajo de gabinete ........................................................................... 20 3.2.2.
IV. RESULTADOS .............................................................................................. 23
Determinacin de microorganismos en la muestra del suelo. .............. 23 4.1.
V. DISCUSION .................................................................................................. 24
VI. CONCLUSION .............................................................................................. 25
VII. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS ................................................................ 26