UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA

FACULTAD DE AGRONOMÍA

ESCUELA PROFESIONAL DE AGRONOMÍA

INFORME 06 y 07

“METODOS DE ESTERILIZACION”

DOCENTE : SANCHEZ ROMERO, Luis Alberto

INTEGRANTES : MALLQUI MEDRANO, Kuennen Ivan

VELA MARCOS, Jerlith Evelin

CURSO : MICROBIOLOGIA VEGETAL

CICLO : 2022 – II

Tingo María– Perú

2023
 I. INTRODUCCION

Microbiología es el estudio de los organismos microscópicos, deriva de 3 palabras griegas:

micros (pequeño) BIOS (vida) y logos (ciencia) que conjuntamente significan el estudio de la vida
microscópica.

Para mucha gente la palabra microorganismos le trae a la mente un grupo de pequeñas

criaturas que no se encuadran en ninguna de las categorías de la pregunta clásicas ¿es animal,
vegetal o mineral? Los microorganismos son diminutos seres vivos que individualmente son
demasiado pequeños como para verlos a simple vista. Los microorganismos del suelo destruyen los
productos de desecho e incorporan el gas nitrógeno del aire en compuestos orgánicos así como
reciclan los productos químicos en el suelo agua y aire: ciertas bacterias y algas juegan un papel
importante en la fotosíntesis ,que es un proceso que genera nutrientes y oxígeno a partir de luz solar
y CO2 siendo un proceso crítico para el mantenimiento de la vida sobre la tierra : los hombres y
algunos animales dependen de las bacterias que habitan en sus intestinos para realizar la digestión y
síntesis de algunas vitaminas como son la K y algunos de complejo B .Los microorganismos
también tienen aplicaciones industriales ya que se utilizan en la síntesis de productos químicos
como son acetona, ácidos orgánicos, enzimas, alcohol y muchos medicamentos. Nosotros podemos
hacernos una idea de cómo se han desarrollado nuestros actuales conceptos de microbiología
repasando los acontecimientos históricos que han cambiado nuestras vidas.

La microbiología es una ciencia biológica que estudia la estructura, fisiología, genética

ecología y las aplicaciones socioeconómicas de los microorganismos. Es decir, de aquellos seres
vivientes comprendidos en los reinos Fungí (hongos), Protista y Monera (bacterias), incluyendo a
los virus y a otros organismos moleculares. La microbiología utiliza técnicas como la esterilización,
el empleo de medios de cultivo, el análisis molecular y bioquímica, para el aislamiento y
crecimiento de los microorganismos.

I.1. Objetivo

 Determinar la enumeración de microorganismo en las hojas de los vegetales en el

laboratorio de microbiología de la universidad nacional agraria de la selva.
 II. REVISIÓN LITERARIA
II.1. Desarrollo histórico de la microbiología

Como otras ciencias, la microbiología actual ha seguido también un desarrollo

histórico, que por razones didácticas aquí se ha dividido en seis periodos se mencionarán cuatro
de ellos.

a. Periodo especulativo (3 millones de años a.c. – 1676)

Este periodo se inicia desde los 3 a 2.5 millones de años A.C con la evolución del
género homo. Al desarrollarse las primeras prácticas agrícolas y el procesamiento empírico de
los alimentos (1000-7000 A.C) el hombre inicia inconscientemente su relación eterna con los
microorganismos. Fueron los sumerios, babilonios y, más exquisitamente, los egipcios los que
emplearon directamente a los microorganismos al desarrollar la fabricación del pan y la
cerveza. Otras culturas más recientes también han utilizado los microorganismos
particularmente en su alimentación, bebidas alcohólicas han estado presentes en las culturas
asiáticas, africanas, europeas y americanas; los alimentos fermentados han sido desde sus
orígenes fundamentales en la dieta de los asiáticos. Más tarde, Fracastoro (1546) sugiere que
organismos invisibles eran los causantes de las enfermedades. Otros como Robert Hooke (1664)
describieron observaciones microscópicas de hongos. Pero fue en octubre de 1676 Anthony
Van Leeuwenhoek; (1632-1723) publica en la revista “PHILOSOPHICAL TRANSACTIONS
OF THE ROYAL SOCIETY”, su primer articuló sobre observaciones microscópicas y la
primera persona en describirlos microorganismos en detalle, a los cuales denomino
animálculos.

b. Periodo especulativo (3 millones a.c. 1676)

 Aparición Género Homo (3 A 2.5 millones A. A. C)

 Prácticas Agrícolas (10,000 –7000 A. A. C), Procesamiento Empírico de los
Alimentos
 Egipcios M.O. Pan y Cerveza Otras Culturas: asiáticas, africanas, europeas,
americanas
 Bebidas Alcohólicas Alimentos Fermentados
 Fracastoro (1546) = M.O. Enfermedades
 Robert Hooke (1664) = Observaciones Microscópicas Hongos
 c. Periodo de la observación (1676-1867)

Después que las publicaciones de Leeuwenhoek demostraron la existencia delos

microorganismos fue necesario, sin embargo, esperar cerca de 200 años para que la
microbiología tenga un avance rápido. Esto fue debido principalmente al predominio en aquella
época de la Teoría de la Generación espontánea. Este fue un periodo de duro enfrentamiento
filosófico entre los diversos científicos que termino con tal Teoría. Hombres como Francesco
Redi (1626 –1698) Lázaro Spallanzani (1729-1799), Jhon Tyndall (1820-1893) y.
principalmente, Louis Pasteur (1822-1895), dieron la victoria e impulsaron vigorosamente a la
microbiología.

En 1769, Lázaro Spallanzani repitió el experimento, pero tapando los recipientes, no

apareciendo las colonias, lo que contradecía la teoría de la generación espontánea. Pero
Needham argumento que el aire era esencial para la vida incluida la generación espontánea de
microorganismos y este aire había sido excluido en los experimentos de Spallazani.

d. El periodo de la genética microbiana (1941-1970)

A inicios de la década de los 40 no estaba plenamente confirmada la participación de

los ácidos nucleicos como los agentes fundamentales en la transmisión hereditaria de los
organismos vivientes. Si bien los trabajos de Mendel habían dado origen a la genética, no se
incluia a los microorganismos y, en todo caso, era un misterio su comportamiento genético.
Fueron G, W. Beadie y E.L Tatum quienes en1941, probaron la relación entre los genes y las
enzimas encontrar mutantes auxotroficos (incapaces de sintetizar un metabolismo y, entonces,
dependientes del suministro extenso de este) del hongo Neurospora.

En 1943, Max Delbruck y Salvatore Luria encontraron mutaciones espontáneas en

bacterias. Un año más tarde, O.T. Avery, C.M. Macleed y M. Mccarty probaron
contundentemente que el DNA era la molécula hereditaria y que las bacterias podían transferir
genes mediante la transformación, J. Lederberg y E.L. Tatum (1946) demostraron que algunas
bacterias también podían transferir genes mediante contacto célula (conjugación). En 1952,
F.H.C.Crick, J.D. Watson y W. Wilkins propusieron el modelo estructural del DNA.
II.2. Microbiología y tecnología

Como ciencia la microbiología contribuye no solo descubriendo de la verdad, sino

también al desarrollo socioeconómico de la humanidad. La aplicación económica de la
microbiología depende de un buen balance entre tres componentes. Materia prima (constante)
(MP, Tecnología (T) y nivel de la microbiología (M).

Dentro de las diferentes sociedades actualmente existentes en el mundo se pueden

encontrar cuatro variaciones.

 La primera corresponde a Japón y varios países asiáticos

 La segunda a la ex Unión Soviética
 La tercera a Europa y EEUU
 Y la cuarta a los países del Sur (Tercer Mundo).

II.3. Los medios de cultivo en microbiología

THOMAS. Et al. (1991). Uno de los sistemas más importantes para la identificación
de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales
preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es
el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado
más de 10.000 medios de cultivo diferentes.

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe
reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de
oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo
debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo
microorganismo contaminante.

La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en

composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios
de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros
ingredientes.
 El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios
de cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al
enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las
bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él.

II.4. Características de las colonias bacterianas

Para conocer mejor las características de los microorganismos es necesario

estudiarlas en un medio puro. Un cultivo puro es aquel que contiene una clase de
microorganismo, por eso se debe evitar la contaminación. Para esto se debe cultivar con la
cantidad de nutrientes y los medios necesarios. (Brock 1999).

Las soluciones acuosas con los nutrientes necesarios se llaman medio de cultivo. Un
medio de cultivo requiere de una fuente de carbono, nitrógeno y otros nutrientes. La célula
requiere de dos tipos de nutrientes: macro y micronutrientes. El carbono es muy importante
porque a partir de éste la célula fabrica material celular. El siguiente elemento más abundante
es el nitrógeno ya que forma parte de proteínas, ácidos nucleicos y otros constituyentes
celulares. Algunos otros macronutrientes son el fósforo, el azufre, el potasio, magnesio,
calcio, sodio y hierro. Entre los micronutrientes son metales que forman parte de enzimas.
Los factores de crecimiento incluyen vitaminas, aminoácidos, purinas y piramiditas. (Brock
1999).

Los dos grupos de medios de cultivos son los químicamente definidos y los
indefinidos o complejos. Los primeros se preparan añadiendo a agua destilada cantidades
precisas de compuestos purificados, por eso se conoce la composición exacta. A veces no es
necesario conocer exactamente la composición química. Los medios complejos usan lisados
de sustancias nutritivas. (Brock 1999).

III. MATERIALES Y MÉTODOS O METODOLIGIA

III.1. Materiales
 10 mg de hojas
 Tubo de ensayo
 Placa petri
 Mortero
 Peptona
 Tubo de ensayo
 Pipetas de 1 a 10 ml
 Estufa
 Matraz

III.2. Metodologia
III.2.1. Trabajo en el laboratorio

Se cortó hojas de plátano en cuadrado 10 gr y se colocó en una placa Petri.

Figura 1: Se pesó 10 gr de hoja picada

Figura 2: Se añadió 90 ml de peptona junto

a las hojas
 Después del filtrado hay que sacar 1 ml de la solución para agregar al primer tubo
de ensayo, y así a cada tubo respectivamente

1 ml de Solución

Filtrado

1 ml 1 ml 1 ml
 10-1 10-2 10-3 10-4

Sembrar por profundidad un inoculo de 0.25 – 1 ml (de las dos últimas disoluciones),
medio Plate Count manitol 1%.

Incubar a temperatura ambiente (28 – 30°c) por 24 a 48 horas.

Después de los 24 a 48 horas, se procede a realizar el recuento de colonias

utilizando un equipo de cuenta colonias, luego se aplicó la formula respectiva de enumeración
de M. O. por gramo. Formula: M.O./gr de hoja = # colonias X Inoculo de siembra X Factor de
dilución.
 IV. RESULTADOS

La práctica de enumeración de colonias tiene la finalidad de determinar la fertilidad

de las hojas, debido a que los microorganismos son extremadamente numerosos en una hoja
mes fértil, es decir que un gramo de sustancia sana contiene aproximadamente diez mil
millones de bacterias. Todos los microorganismos descomponen la materia orgánica y
reciclando así los nutrientes, mayormente son organismos aerobios, los cuales también
pueden pertenecer al grupo de los patógenos.

Para el muestreo de las hojas, se utilizó 10 gramos dede hojas picadas para inocular
utilizamos el método de incorporación. Utilizamos un factor de dilución de 104 con un inoculo
de 1 ml.

Se aplicará la siguiente formula, después del conteo de colonias:

Microorganismos en el suelo = número de colonias × inoculo de siembra × factor de dilución.

Microorganismos en las hojas = 10 × 1 ml × 104 colonias/gr de suelo.

Microorganismos en las hojas = 100 000 colonias/gr de suelo.

 V. DISCUSIONES

Después de 24 horas de haber hecho la siembra, se observó que no había habido

crecimiento en la placa. Se observó en ambas muestras 40 colonias en la placa de agar. Si se
tratara de una bacteria, la forma de crecimiento era circular, el borde era entero y no tenía
elevación por lo que era plana. El hecho de que no hayan crecido puede deberse a que tal vez
se tomó muy poco al realizar el raspado de la placa. Podría deberse también a que al realizar
el raspado para tomar la colonia de la placa previamente sembrada el asa estuviera todavía
muy caliente, tanto que matara a las bacterias que se tomaron y para el momento de realizar
la siembra en la placa hubiera muy pocas o ninguna viva.

Figura 3: cultivo de bacterias despues de 24 horas

 VI. CONCLUSIONES

 El punto blanco observado en la placa podría ser una colonia bacteriana o una
burbuja del agar.

 El conteo de los microorganismos del muestreo de hojas se dio como resultado un

alto índice de microorganismo en gramos de hojas de vegetales, concluimos que la
hoja del vegetal estaba en un buen estado.

 El contenido de microorganismos de los vegetales es de 100 000 colonias/gr de

suelo.

 Todos los microorganismos descomponen la materia orgánica y reciclando así los

nutrientes, mayormente son organismos aerobios.

VII. REVISIÓN BIBLIOGRAFÍCA

 BURGES. A. 1960. Introducción a la microbiología del suelo. Edit. Acribia. Zaragoza. 84-
109 p.

 THOMAS. D; BROCK; MICHAEL. T. y MADIGAN. 1991. Microbiología. 6 ta Edición.

Edit. Prentice Hallitom. Mexico.605 p.

 HAYNES, WC, WICKERHAM, LJ Y HESSELTINE, 1955. El mantenimiento

de cultivos de microorganismos de importancia industrial. Apol.
Microbiología. 361-368 Pág.
 López, MJ y Ramos, A. 1978. Producción xantana de las aguas residuales de
oliva molino. Int. Biodet. Biodegr. 263-270 Pág.

 SUTHERLAND, IW 1994. Las relaciones estructura - función en ex

polisacáridos microbianos. Biotech. Adv. 448 Pág.

 VELA, G.R. Y ROSENTHAL, S. 1972. El efecto de peptona en Azotobacter

morfología. J. Bacteriol. 260-266 Pág.

 SIVILA de CARY, R., 1993. “Comportamiento de la microflora del suelo bajo

un agroecosistema de rotación de cultivo en la region de Huaraco”, en
Revista Ecológica en Bolivia (por publicarse).

 MAYEA S, NOVO SR, VALIN0 A., 1982. Introducción a la microbiología del

suelo, Pueblo y Educación, Habana, Pág. 187.