ANTIBIOTICOS PRODUCCION DE PENICILINA

Definicin y Procedencia. Un antibitico es una sustancia qumica producida por un organismo vivo que muestra actividad inhibidora o germicida frente a microorganismos. La actividad antibitica se califica en ocasiones de: antibacteriana, antif ngica o antimicrobiana. Produccin de antibiticos. Los antibiticos son producidos por ciertos hongos, bacterias, actinomicetos, algas y lquenes. !l origen m"s importante y f#rtil de antibiticos de importancia comercial es el g#nero $treptomyces de los actinomicetos. %uchos mohos producen antibiticos, tales como la penicilina que es el e&emplo m"s destacado producido por los mohos. !n la produccin de antibiticos muchos de los detalles especficos siguen siendo, con algunas e'cepciones secretos industriales. Produccin de Penicilina. Para la produccin de penicilina se siguen los siguientes pasos: () Aislamiento de mohos. %#todo de incubacin directa. Para este m#todo se hace lo siguiente: a) $e prepara un medio de cultivo de bacterias, el m"s usado es el Staphylococcus aureus. Para el cultivo de estas bacterias se preparan tres medios de nutricin, que son los siguientes: %edio (. *uya composicin es la siguiente: Peptona +,, g. -idroli.ado pancre"tico de caseina /., g. !'tracto de levaduras 0,, g. 1lucosa (,, g. 2gar (3,, g. 2gua destilada c.s. hasta (,,,,, ml. P- 4 +,3 4 +,+ tras la esterili.acin %edio 5. Denominado agar base, su composicin es la siguiente: Peptona +,, g. !'tracto de levaduras 0,, g. 2gar (,3 g. 2gua destilada c.s. hasta (,,,,, ml. P- 4 +,3 4 +,+ tras la esterili.acin.

%edio 0. Denominado caldo de cultivo, su composicin es la siguiente: Peptona 3,, g. !'tracto de levaduras 0,, !'tracto de carne de buey (,3 g. *L6a 0,3 g. 75-P*/ 0,+8 g. 7-5P9/ (,05 g. 2gua destilada c.s. hasta (,,,,, ml. !l sembrado de bacterias se obtiene de la siguiente forma: !l microorganismo obtenido :$taphylococcus aureus) en tubos inclinados con el medio (, se inocula al caldo de cultivo :medio 0), este caldo se de&a incubar a 0;<* por (+ a 5/ horas= 5 ml. De este caldo se me.clan con (,, ml. del medio (, que se ha fundido y enfriado a /8<* y se tiene listo el cultivo de bacterias. Posteriormente en una ca&a petri de 5, ' (,, mm. se hecha 5( ml. de agar base :medio 5), se de&a solidificar y se a>ade / ml. de agar sembrado :cultivo de bacterias) y se reparte uniformemente haciendo oscilar la placas. b) Las ca&as petri con sembrado de bacterias se incuban a 5< 0;<* durante uno a dos das, despu#s se de&a caer sobre la superficie peque>as partculas de suelo :fresco o enriquecido), se de&a incubar por espacio de 3 a (, das. c) Despu#s de los das indicados se observan las ca&as petri, los organismos antagonistas producir"n .onas claras alrededor de sus colonias como resultado de la inhibicin del crecimiento de las bacterias adyacentes o de su destruccin. d) !stos microorganismos :mohos) se aislan en colonias o cultivos puros y se anali.a las caractersticas deseadas de las ra.as productoras de penicilina, que son principalmente del grupo Penicillium notatun chrysogenun. e) Pruebas de seleccin del moho aislado: !sta prueba se reali.a en medio de cultivo de bacterias (Staphylococcus aureus). Para #sto el cultivo de moho aislado se somete a crecimiento en un medio que se prepara de la siguiente forma: se a>ade (? en volumen de lquido de remo&o de ma. :33? de slidos) a la solucin e.ape@ a&ustando el p- a ;, adicionando 5? de agar y distribuyendo 5, ml. en cada tubo de ensayo, luego se vierte en ca&as petri y se siembra el moho aislado y se incuba= al mismo tiempo se preparan placas testigo con dos cultivos diferentes de P. Notatun o P. Chrysogenun conocidos como buenos productores de penicilina, cada placa se debe incubar por espacio de + das a 5/<*. 2l final del periodo de incubacin se cortan / o 3 muestras con un sacabocados y se coloca en la superficie del medio de agar sembrado con Staphylococcus aureus, las pla.as se incuban durante una noche a 0;<* y las .onas de inhibicin se mide empleando una lupa con una precisin no inferior a ,,53mm. y los resultados se comparan con los testigos. 5. Produccin de penicilina. La penicilina se puede producir por medio de cultivo superficial o sumergido. !n los medios de cultivo superficial el moho crece en la superficie de capas poco profundas del medio de fermentacin. !n los medios de cultivo sumergido, el moho se desarrolla sumergido en el medio de fermentacin.

Mohos usados. 6ing n otro detalle tiene mayor importancia en la produccin en un antibitico que la seleccin de una capa seleccionada apropiada. Las cepas m"s usadas para la produccin de la penicilina son: P. Notatun y P.Crysogenun. Medios de esporulacin. !n la produccin de penicilina es necesario desarrollar r"pidamente gran n mero de esporas para la inoculacin y resiembra. $e tiene varios m#todos de esporulacin de los cuales se e'pondr" uno de ellos. Para el medio de esporulacin se cortan en cubos de un centmetro de lado pan integral fresco :libre de inhibidos de mohos) y se esterili.a con vapor en capas finas en matraces !rlenmeyer. !l pan enfriado se inocula masivamente con esporas de mohos y se incuba a 53< A 5;<* durante / A 3 das, despu#s de sacar los cultivos de pan se puede guardar durante al menos dos semanas a /,< !l plan cubierto de esporas se puede pulveri.ar perfectamente a los + 4 ; das y se usa para la inoculacin. Mtodos de inoculacin. !n los m#todos de cultivo superficial, la superficie del medio se inocula con esporas secas, bien solos o me.cladas con alg n tipo de material de tipo de harina de trigo. !n m#todos de cultivo sumergido al medio de inolucin se puede hacer con esporas secas, con esporas sin germinar, en suspensin o con gr"nulos inoculantes. !n un procedimiento de produccin de penicilina, las esporas del moho se usan para sembrar un medio de germinacin de matraces, despu#s de un periodo de incubacin en el sacudidor se transfiere los contenidos de los matraces a recipientes especiales de metal, este tanque especial se conecta ac#pticamente al tanque de siembra y se impulsa al interior del fermentador la suspensin del moho utili.ando aire est#ril. Materias primas. !n la seleccin de materias primas para la produccin de penicilina es esencial considerar las necesidades nutricias del hongo, las condiciones ptimas para la acumulacin de la penicilina y la subsiguiente e'traccin y purificacin de la penicilina. Buentes de carbono. La lactosa es la me&or fuente de carbono para la produccin de penicilina, us"ndose una concentracin del +?. Cambi#n puede usarse 0? de lactosa, almidn de ma., y de'trina de ma.. 2 peque>as velocidades de alimentacin se puede usar glucosa y sacarosa en ve. de lactosa. Buentes de nitrgeno. Las sustancias usadas como fuente de nitrgeno son: nitrato sdico, sulfato, acetato, y lactato amnico, lquido de remo&o de ma. y otros materiales. !lementos minerales. *iertos elementos :P, 7, %g, $, %n, *u) parecen esenciales o al menos beneficiosos para la produccin de penicilina, aunque algunos de ellos se encuentran en el lquido de remo&o de ma.. Los diferentes minerales se suministran en forma de 7h 5P9/, %g$D/, ;-5,. Las concentraciones de estas sales en el medio son: 7- 5P9/, ,,,(D %, %g$9/;-5, ,,,,5 % y 6a6,0 ,,,(D %.

Lquido de remo&o de ma.. !l uso de lquido de remo&o de ma. en el medio de fermentacin, aumenta grandemente los rendimientos de penicilina, el lquido de remo&o de ma. debe tener la siguiente composicin: $lidos /, 4 +,? 2cido l"ctico (5 4 5;? ' 6itrgeno total ;,/ 4 ;,8? ' 6itrgeno amnico 5,+ 4 0,0? ' 2. car reductor en glucosa (,3 4 (/? ' *eni.as (8 4 5,? ' ' E referido a producto seco. -arina de semillas de algodn. Puede usarse como sustituyente del lquido de remo&o de ma.. Precursores. $ustancias utili.adas en la produccin de antibiticos :penicilina) para incrementar el rendimiento del producto. Los precursores m"s usados son: fenil ac#tico que favorece la produccin de la penicilina 1 por P. *hrisogenun. !l "cido pAhidro'ifenil ac#tico incrementa la produccin de penicilina F 2mino"cido LAcistina, LAcinteina y valinas. Condiciones de fermentacin. Cemperatura. La temperatura ptima para la produccin de penicilina parece ser de 5/<*. Gegulacin de p-. !s esencial la regulacin de p- durante la fermentacin, ya que un p- alto o ba&o origina considerables p#rdidas de penicilina. !l p- de fermentacin debe mantenerse de 3 a ;.3. !l p- del medio resulta afectado por el tipo y cantidad de a. car presente, cantidad de lquido de remo&o de ma., e'istencia de amortiguadores, etc. 2ireacin. La adecuada aireacin es esencial para mantener rendimientos ptimos de penicilina ya que los mohos son microorganismos aerobios. Caylor describe en un m#todo usado por #l, que es conveniente una insuflacin de aire ((.3,, litros por hora para un fermentador de 5,.,,, litros de capacidad. Presin. !l uso de presin en los tanques para incrementar la efectividad de la aireacin es una pr"ctica com n en los procesos de produccin. $e reali.a generalmente las fermentaciones en tanques a una presin de (,3 atmsferas. La reduccin de presin a ,,(3 atmsferas no afecta la produccin, pero una presin mayor a 0 atmsferas reduce la produccin del mismo. 2gitacin. !l uso de un tipo apropiado de agitacin y a una velocidad adecuada suele me&orar los rendimientos de penicilina, pues comunica una velocidad de aireacin constante durante la fermentacin. 2gentes antiespumantes. La eliminacin de la espuma e'cesiva me&ora el rendimiento de la penicilina. !ntre las sustancias antiespumantes que se usan est"n las siguientes: *itrato de tributilo, octadecanol, en solucin al 0? en aceite de manteca de cerdo, octadecanol al 0? en aceite de soya.

Prevencin de la contaminacin. !s muy importante prevenir la contaminacin del medio de fermentacin, la contaminacin produce la r"pida destruccin de la penicilina, para evitar se debe esterili.ar todos los tanques de fermentacin, tuberas o instalaciones en las que puede tener contacto la penicilina. !s necesario utili.ar aire esterili.ado para la aireacin, los agentes antiespumantes tambi#n se deben esterili.ar antes de introducir al tanque de fermentacin. Aislamiento y purificacin de la penicilina . !l ob&eto del aislamiento consiste en separar las cantidades relativamente mnimas de antibitico de las c#lulas productoras y del considerable volumen del medio agotado. La primera fase es el proceso de recuperacin es la separacin del micelio o c#lulas por filtracin o centrifugacin. $e pueden usar filtros contnuos de vaco, filtros de HirdAIoung, centrfugas de cesto u otra instalacin, dependiendo de la naturale.a de las c#lulas. La segunda fase importante consiste en e'traer el antibitico del medio de produccin agotado, con disolventes, por adsorcin, por precipitacin o por una combinacin de estos m#todos. La e'traccin en disolventes puede efectuarse en e'tractores a cortacorriente como los del tipo Podhielnia@, en tornos, en frascos, en el sistema de distribucin de 1raig o de otras formas dependiendo del volumen del material y del ob&etivo perseguido. Para la e'traccin se puede usar acetato de amilo, #ter, cloroformo, acetona y otros disolventes seg n la solubilidad del antibitico, posibilidad pr"ctica, y otros factores. La temperatura, la regulacin del p- son factores muy importantes para la consecusin de elevados rendimientos de e'traccin de antibiticos. La adsorcin se puede reali.ar sobre carbn activo, resinas de intercambio inico u otros materiales. La purificacin se reali.a por e'traccin adicional con disolventes, destilacin, sublimacin, cromatogr"fica en col mna o por otros procedimientos dependiendo de la naturale.a del antibitico, su costo y otros factores. !l antibitico se esterili.a, elimin"ndole los pirgenos :sustancias que producen reacciones febriles) por filtracin a trav#s de filtros $eit., moleculares u otros bacterianos de tipo apropiado. Comprobacin ensayo y certificacin. $e reali.an ensayos para la comprobacin de la potencia del antibitico y prueba de esterilidad, pirgenos, humedad y otras caractersticas seg n se requiera. La potencia de la penicilina se determina de una manera similar al m#todo de aislamiento de cultivos de mohos puros. !s decir se emplean los mismos medios de cultivo para las bacterias, el mismo tipo de bacteria, slo se diferencia en que en ve. de las partculas de suelo se coloca la penicilina obtenida, y al mismo tiempo penicilinas patrones despu#s de la incubacion se mide las .onas claras alrededor del antibitico y se los compara con el antibitico patrn y los resultados de comparacin se evalua por medio de gr"ficas y de esta manera se puede conocer la potencia de la penicilina obtenida. %#todos de valoracin de la penicilina. !ntre los m#todos de valoracin de penicilina se tienen los siguientes:

%#todo del cilindro y placa :m#todo microbiolgico). %#todo yodom#trico :metodo qumico). Propiedades de la penicilina. La penicilina es activa frente a ciertas bacterias 1ramApositivas en presencia de sangre, pus y fluidos org"nicos. Puede ser considerada como at'ica, ya que es posible administrar dsis muy grandes durante un periodo de tiempo sin efectos per&udiciales. !n un peque>o porcenta&e se pueden presentar alergias individuales a la penicilina. Urticaria, ardor y pica.n son algunas de las respuestas que se observan en personas sensibles. $eg n Jelch y colaboradores la penicilina produce una inhibicin parcial de la fagocitsis. La penicilina es soluble en agua, muy soluble en acetona, acetado de amilo, ciclohe'ano, dio'ano, acetato de etilo, etanol y #ter, y poco soluble en benceno, cloroformo y tretracloruro de carbono. !s inestable frente a un gran n mero de agentes por !&. la descomponen los "cidos y alcalis fuertes. $e inactiva por los agentes o'idantes, debe evitarse el contacto con ciertos metales pesados como cobre, plata, plomo y mercurio ya que tienden a destruir la penicilina. Destruye tambi#n la penicilinasa, en.ima producida por algunos mohos, levaduras y bacterias. Las soluciones acuosas de la penicilina son inestables y se debe conservar refrigeradas, tambi#n el pinfluye en la estabilidad de la solucin acuosa. Cipos de penicilina. Los tipos m"s comunes de penicilina son: Penicilina B, 1, F, 7., cuyas estructuras se indicar"n despu#s. La mayor parte de las penicilinas son me.clas generalmente de los tipos B, 1, 7, aunque la penicilina 1 es la que se produce en mayor cantidad y la que se considera m"s pr"ctica. La penicilina 1 sdica cristalina debe contener al menos D,? de penicilina 1.