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Identificacin de biomoleculas, 2013-2 Informe Final Bioqumica

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Determinacin de una sustancia desconocida a partir de pruebas de laboratorio


Carolina Valencia, Juan Felipe Orozco Torres, Juan David Castaeda Cdigo: 20112180073, 20122180075, 20122180020
Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas, Facultad de Medio Ambiente y Recursos Naturales, Programa de Ingeniera Ambiental Bogot D.C, Cundinamarca, Colombia Diciembre-2013 Resumen Palabras clave: Muestra problema, carbohidrato, disacrido, sacarosa, azcar no reductor. 1. INTRODUCCIN 1.1. Metodologa Para la identificacin de la muestra problema se plantearon con anterioridad una serie de posibles purebas para la identificacin, tambin se recolecto informacin de las reacciones que sucederan si las pruebas llegaran a dar positivas. Despues de esto, se desarrollaron estos procedimientos en el laboratorio, para asi comprobar prcticamente el reconocimiento de la muestra problema. 2. PROCEDIMIENTO 2.1. Prueba de Molicsh Aadir 1mL de la solucin de carbohidrato en un tubo de ensayo, despus de esto, agregar 2 gotas del reactivo de Molisch y mezclar. Posteriormente agregar cuidadosamente 0,5mL de H2SO4 concentrado por las paredes del tubo. 2.2. Prueba de Barfoed A 1mL de reactivo de Barfoed agregar 0,5mL de solucin de carbohidrato en un tubo de ensayo y mezclar. Colocar el tubo en bao de agua hirviendo. 2.3. Prueba de Benedict A 2mL del reactivo de Benedict aadir 8 gotas de la muestra problema en un tubo de ensayo. Mezclar y calentar la solucin en bao Mara durante 5 minutos. 2.4. Prueba de Sacarosa A 5mL de la muestra de carbohidrato agregar 5 gotas de HCl concentrado, calentar durante 5 minutos en un bao de agua hirviendo, enfriar y luego agregar NaOH hasta que la solucin sea neutra o dbilmente alcalina. Con la solucin hidrolizada realizar la prueba de Seliwanoff. Aadir 1mL del reactivo de Seliwanoff a 0,5mL de la solucin de carbohidrato en un tubo de ensayo. Mezclar y colocar el tubo en un bao de agua hirviendo por 4 minutos.

3. RESULTADOS 3.1. Prueba de Molisch Al mezclar la muestra problema con el reactivo de Molisch y agregar los 0,5mL de H2SO4 se obtuvo el resultado mostrado en la

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Figura 1 lo cual nos indica que la muestra problema es positiva para carbohidratos.

3.4. Prueba de Sacarosa Para realizar la prueba de la sacarosa, primero se agregan 5 gotas de HCl concentrado a 5ml de la muestra problema, y se deja calentando en un bao de agua hirviendo durante 5 minutos. Luego, se agrega suficiente NaOH para neutralizar la solucin.

Figura 1. Anillo de Furfural 3.2. Prueba de barfoed En la prueba de Barfoed, al agregar 0,5mL de la muestra problema en 1mL del reactivo de Barfoed, y esperar aproximadamente 6 minutos en el bao de agua hirviendo, se observ que no se generaba un precipitado rojo antes de los 6 minutos, lo que nos indica que la muestra problema no es un monosacrido.

Figura 4. Hidrlisis del carbohidrato. Al hidrolizar el carbohidrato se realiza la prueba de Seliwanoff, en la cual se agrega 1mL del reactivo a 0.5mL de la muestra problema, al dejar en bao mara por cuatro minutos aparece una coloracin roja intensa lo cual evidencia la presencia de cetohexosas.

Figura 2. Muestra problema al trmino de la prueba de Barfoed. 3.3. Prueba de Benedict En la prueba de Benedict, se agrego 1mL de fehling a y 1mL de fehling b, en remplazo del reactivo, al calentar en bao mara, no se observ cambio alguno despus de 6 minutos, por lo cual se determino que no es un azcar reductor.

Figura 5. Prueba positiva para sacarosa. 4. DISCUSIN 4.1. Prueba de Molisch La reaccin de Molisch es una de las reacciones de deshidratacin. Se toma cualquier material que se sospeche pueda contener glcidos, como por ejemplo un trozo de papel o unas gotas de leche. SSe

Figura 3. Muestra problema la trmino de la prueba de Benedict.

4.2. Prueba de Lucas

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Con el reactivo de Lucas no existe reaccin ya que este est diseado para diferenciar alcoholes primarios, secundarios y terciarios de esto podemos concluir que nuestra muestra es quizs no es un alcohol secundario ni terciario.

Figura 10. Reaccin prueba de Lucas

4.3. Prueba del xido crmico En este caso no existe reaccin ya que el xido crmico oxida un alcohol primario a aldehdo, en este caso no hay reaccin, esto quiere decir que nuestra muestra no es un alcohol primario.

Figura 11. Reaccin prueba del xido crmico

4.4. Prueba del Nitrito de sodio Corresponde a una reaccin de sustitucin aromtica electrfilica, en donde el fenol reacciona con el in nitrosonio (NO+), el cual se forma al mezclar el nitrito de sodio (NaNO2) con cido sulfrico (H2SO4). La figura 11 ilustra el mecanismo de esta reaccin.

Figura 11. Reaccin Prueba del nitrito de sodio

4.5. Prueba del tricloruro Frrico En este caso con la prueba del tricloruro frrico hubo una reaccin, el Fe se une al grupo fenxido, la prueba es positiva ya que se produce una coloracin violeta oscura, este reactivo reconoce fenoles lo que nos lleva a la conclusin de que nos encontramos con una muestra problema de un fenol.

4.5. Prueba de temperatura

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Se agreg agua destilada la muestra problema y se introdujo un termmetro para medir la temperatura a la que la solucin presentaba turbidez, el resultado fue 20,2C lo cual coincide con la solubilidad del resorcinol en agua. su agradecimiento a la Universidad Distrital Francisco Jos de Caldas por todo el apoyo recibido durante el desarrollo del curso y a la monitora Diana Daz por su colaboracin en todas las prcticas de laboratorio y ayuda en el desarrollo de las mismas.

5. CONCLUSIONES La muestra problema resulto no ser un alcohol secundario ni terciario debido a que no reaccion con el reactivo de Lucas La muestra problema no es un alcohol primario ya que no reaccion con el xido crmico. Al realizar las pruebas de fenoles estas resultaron positivas lo cual nos dio la pista de que la muestra problema es un fenol La prueba de fusin, solubilidad y temperatura nos indic que el tipo de fenol que tenamos como muestra problema era resorcinol.

Referencias La referencias deben ser claras y completas, prefirindose material pblico y fcilmente accesible [Martnez00]. Como ejemplos (no excluyentes) de referencia bibliogrfica: [Martnez00] J. Martinez, L. Prez. 'Instrucciones de Estilo para los Autores'. Inteligencia Artificial, 20. pp. 30-54. Ed. AEPIA. (2000). [Martnez et al. 00] J. Martinez, L. Prez. 'Instrucciones de Estilo para los Autores'. Inteligencia Artificial, 20. pp. 30-54. Ed. AEPIA. (2000). Igualmente deben indicar las pginas Internet que fueron consultadas. www.ifac.com www.isa.com

Agradecimientos Los Alumnos de la asignatura: Qumica Orgnica del 2013-II Alexandra Lpez, Kevin Pez y Felipe Orozco, desean expresar

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