UFPS Ocaña Asignatura: BIOQUIMICA

Ing. Ambiental Semestre: Segundo

Profesor: Ramón José Lobo Jácome

Reconocimiento de pruebas para carbohidratos

Introducción:

Los glícidos (glúcidos) o azúcares, son químicamente hablando, aldehídos o cetonas

polihidroxilados, o productos derivados de ellos por oxidación, reducción o polimerización.
El primer nombre alude al carácter dulce de la mayoría de los glúcidos (glícidos) simples y
el segundo de azúcar a una forma más clásica.
Pueden ser: monosacáridos, oligosacáridos y polisacáridos. Los oligosacáridos van de dos
dímeros hasta diez unidades monoméricas. Los polisacáridos pueden ser homo y
heteroposisacáridos

Justificación:

Para reconocer e identificar la argumentación vista, es necesario ahondar en efectuar una

prueba físico-química que permita familiarizarnos con los carbohidratos y a la vez observar
las reacciones particulares de ellas.

Objetivos:

Reconocer e identificar cada una de los carbohidratos que se analizan.

Entender y comprender el mecanismo de análisis cualitativo.
Diferenciar monosacáridos de los oligosacáridos y determinar los tiempos de viraje de color.
Reconocer cuales carbohidratos son reductores o no.

Fundamento teórico:

La identificación de carbohidratos es un problema analítico frecuente en bioquímica. Se

recurre a una serie de reacciones químicas y a ciertas propiedades físicas y fisico-químicas
características de los azúcares.

Al estudiar las propiedades químicas de estos compuestos y tratar de establecer sus

estructuras moleculares se ha encontrado que dichas sustancias ofrecen diversas reacciones
características de aldehídos y cetonas y además de presentar múltiples grupos hidroxilos en
la cadena van a determinar ciertas propiedades de los carbohidratos, tales como isomería
óptica, solubilidad, capacidad de formar puentes de hidrógeno.

Existen reactivos que fácilmente deshidratan a los carbohidratos, glícidos, que en presencia
de compuestos fenólicos dan sustancias coloreadas y es como el reactivo de Molisch, el cual
permite identificar carbohidratos en general, cuyo derivado suyo respondan positivamente a
esta prueba, monosacáridos, oligosacáridos, polisacáridos e incluso glucoproteínas.
Otros reactivos, dan prueba positiva cuando en sus estructuras moleculares de cadena abierta
con su grupo carbonilo libre y se puede oxidar fácilmente con llevando una a reducción de
un reactivo, con inclusión de iones metálicos, ion cúprico, para cuproso produciendo un
precipitado rojo para la prueba de Barboed.

Por el contrario otros reactivos interaccionan con todo azúcar que posea un grupo carbonilo
libre o un conjugado de un carbono anomérico en la estructura cíclica, casi todo se basan en
la reducción del ión Cu+2 con la formación de óxido cuproso, el tiempo que tarda en realizarse
la reducción a una temperatura controlada, da idea del tipo de carbohidrato reductor, pero su
identificación precisa requiere la formación de derivados cuya forma cristalina y punto de
fusión son determinables, tales reactivos son Benedict, Fehling, Teniendo con estos azúcares
reductores y no reductores.

Además de las pruebas de Molisch, Barboed, Fehling, los azúcares pueden ofrecer muchas
otras reacciones que permitan detectarlos e identificarlos, sea en conjunto o por grupos
específicos, como el de seliwanoff específico para cetosas libres, forman un precipitado rojo,
en la prueba de Bial es específico para pentosas dando una coloración azul verdoso.

Materiales:

Tubos de ensayo, gradilla, pipeta, pinzas, baño serológico

Metodología y procedimiento:

Reacción de Molisch. A cada uno de los tubos de ensayo, coloque 1 ml de disolución de

prueba de carbohidratos conocido o de la muestra, adicione dos gotas de Molisch evitando
que toque las paredes del tubo. Sin agitar agregue ahora ácido sulfúrico concentrado sin
trastornar la interfase y déjelo deslizar por las paredes del tubo. No agite, observe el color
que se desarrolla a partir de la interfase de los dos líquidos. La presencia de un color morado
violáceo indica carbohidrato. Haga la prueba con una sustancia conocida.

Prueba de Barboed. Tome 1 ml de carbohidrato y adicione 3 ml de reactivo de Barboed a

cada tubo. Coloque los tubos en el baño María y anote el tiempo de aparición de los primeros
signos de reducción. Retiremos el tubo y contra un fondo blanco observemos si se ha
producido un precipitado rojo indicativo de monosacáridos. Los monosacáridos gastan unos
tres minutos, los disacáridos alrededor de 20 minutos.

Para las pruebas de Benedict, Fehling, Bial y Seliwanoff. Prepare una serie de tubos
debidamente rotulados, cuatro de cada disolución de muestra y cuatro de su problema ( al 1
% en agua) o sea 20 tubos en total. Ponga 1 ml de disolución de cada uno agregue 1 ml de
cada reactivo correspondiente. Sumerja los tubos de una misma serie, simultáneamente en
un baño de maría hirviente. Anote el tiempo que tarda en aparecer el color, el tono del mismo
en cada tubo. Si después de 15 minutos no aparece ningún color o cambio anote la reacción
como negativa.

Complete el cuadro

Carbohidrato Benedict Fehling Bial Seliwanoff

Glucosa
Fructosa
Sacarosa
Ribosa
Rafinosa
Muestras

Datos y Resultados:

Determinar cualitativamente las coloraciones de cada uno de las muestras, anotar el tiempo
de aparición de la coloración, clase de azúcar reductor o no.

Cuestionario:

Para la(s) muestra(s) entregada(s) determinar si es carbohidrato? Si es azúcar reductor,

cetosa? O pentosa?
Describa las reacciones de Molisch, Benedict, Fehling? y Seliwanoff?

Bibliografía.

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Conn y Stumpf Bioquímica fundamental Limusa 1984
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Ramsey y Bronk Biología Química