Resistencia A Estres Abiotico PDF

Agrobiotecnologa
Curso 2011
Tolerancia a estreses abiticos

Alejandro Mentaberry
Departamento de Fisiologa, Biologa Molecular y Celular Facultad de Ciencias Exactas y Naturales Universidad de Buenos Aires
Sumario
Estreses abiticos Problemas y prdidas producidas por estreses abiticos Respuestas a estreses abiticos Solutos compatibles Estrategias para aislar genes de tolerancia a estreses abiticos en plantas Uso de genmica funcional para la bsqueda de genes de tolerancia a estreses abiticos Bsqueda de genes regulados por factores de transcripcin inducibles por estreses abiticos Ejemplos de tolerancia frente a diferentes estreses abiticos:
Solutos compatibles Bomba de Na+/H+ Sobrexpresin de citoquininas Factores de transcripcin Protenas LEA Citrato sintetasa
Agrobiotecnologa
Referencias
Estreses abiticos
Las plantas son frecuentemente sometidas a estreses, condiciones externas que adversamente afectan su crecimiento, desarrollo o productividad. Los estreses pueden ser biticos, provocados por otros organismos, o abiticos, causados por condiciones desfavorables en el ambiente fsico o qumico. Los estreses disparan un amplio rango de respuestas en la planta, desde alteraciones en la expresin gentica y el metabolismo celular, a cambios en la tasa de crecimiento y rendimientos de los cultivos. La tolerancia o sensibilidad a los estreses depende de las especies, del genotipo y del estado de desarrollo de la planta.
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Diferentes factores ambientales que resultan en estreses abiticos
Tomado de: Holmberg and Blow, Trends in Plant Science, 1998.
La mayora de estos factores ambientales induce estrs osmtico
Demandas y restricciones futuras de la agricultura
Se espera que la poblacin mundial duplique su nmero para el ao 2050. En ese momento, la poblacin mundial alcanzar los 11.000 millones de personas, de las cuales el 90% residir en pases en desarrollo. La produccin de alimento deber duplicarse o triplicarse para entonces. En Latinoamrica slo el 7% del total de tierra es cultivable. Los esfuerzos por satisfacer las demandas de una poblacin en aumento han conducido al cultivo de suelos de pastoreo y, en algunos casos, de tierras forestales, as como tambin de tierras marginales (suelos salinos, cidos, etc.).
Agrobiotecnologa
Problemas y prdidas producidas por estreses abiticos
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Muchas tierras cultivables se pierden debido al exceso de uso o al mal manejo de los suelos
La produccin alimentaria en aumento es el principal factor de presin ejercido sobre los recursos de la tierra. Esto acenta la degradacin de los suelos y conduce a fenmenos de desertificacin y prdida de los mismos. Ms de 3.500 millones de ha (25% de la superficie total) estn afectadas por la desertificacin a nivel mundial. En Sudamrica, la desertificacin afecta unos 250 millones de ha. Las principales causas de desertificacin son la salinidad y la sequa.
Agrobiotecnologa
El acceso a la alimentacin de ms de 900 millones de personas corre peligro debido a que las tierras de las que dependen estn amenazadas por este problema.
Las aplicaciones biotecnolgicas contribuirn a la recuperacin de suelos inapropiados para el cultivo
Para aumentar la produccin agrcola y preservar los suelos se requiere implementar polticas sociales y econmicas de largo plazo, introducir nuevas formas de manejo agronmico e incrementar la investigacin cientfica y tecnolgica. Las aplicaciones biotecnolgicas, en particular el uso de cultivos transgnicos, prometen incrementar la produccin agrcola disminuyendo los costos de produccin.
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El uso de plantas tolerantes a estreses abiticos podra permitir el uso y la recuperacin de tierras afectadas por salinidad, acidez, sequa, etc.
Rendimientos y prdidas promedio de los principales cultivos

Rendimiento mximo Cultivo Maz Trigo Soja Sorgo Avena Cebada Papa Remolacha
a b
Rendimiento promedio (Kg/Ha) 4.600 1.880 1.610 2.830 1.720 2.050 28.300 42.600
Prdidas promedio (Kg/Ha) Biticasa 1.952 726 666 1.051 924 765 17.775 17.100 Abiticasb 12.700 11.900 5.120 16.200 7.960 8.590 50.900 61.300
Prdidas abiticas (% rend. max.) 65,8 82,1 69,3 80,6 75,1 75,4 54,1 50,7
(Kg/Ha) 19.300 14.500 7.390 20.100 10.600 11.400 94.100 121.000
Adaptado de: Buchanan, Gruissem and Jones. Biochemistry and Molecular Biology of Plants, 2000.
Los estreses biticos incluyen enfermedades, insectos y malezas.
Los factores abiticos ambientales incluyen, pero no se limitan a, sequa, salinidad, inundacin, y altas y bajas temperaturas.
La incidencia de los factores ambientales sobre los rendimientos es mayor en las zonas tropicales
Tomado de: Chispeels y Sadava, Plants, Genes and Crop Biotechnology, 2003..
Rendimiento clima templado (Tm/ha) a Cultivo Papa Batata Arroz Maz Trigo Promedio 18,1 13,6 4,1 4,0 3,0 Rcord 126.0 (USA) 65,0 (USA) 10,5 (Japn) 22,2 (USA) 14,1 (USA)
Rendimiento clima tropical (Tm/ha) Promedio 8,7 6,9 2,0 1,4 1,4 Rcord 60,0 (Amrica Central) b --7,4 (Asia) b 12,9 (Zimbabwe) 10,3 (Asia, Zimbabwe, Amrica Central) 10,3 (Asia) 9,6 (Zimbabwe) 4,8 (Zimbabwe) 100
Sorgo
2,3 1,7
20,1 (USA) 8,6 (USA 7,3 (Japn) (Jap 100
1,2 1,0 1,0 15,7
Soja % rendimiento rcord r
1,6 20,8
a Las zonas subtropicales y templadas se consideran templadas. Las zonas entre 23,5 latitud Norte y 23,5 latitud Sur se consideran tropicales. b Asia est representada por Filipinas, Thailandia e India. Centro Amrica est representada por Mxico y Colombia.
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Agricultura
Industria
Uso domstico
El uso de agua en la agricultura se ha incrementado siguiendo una funcin lineal en los ltimos 70 aos
Uso de agua (Km cubicos)
La creciente demanda de agua es uno de los problemas ms acuciantes que enfrentar la agricultura intensiva
El desarrollo de las tierras ridas y semiridas es un problema geo-econmico importante de la Argentina
Aproximadamente 60 millones de hectreas estn sometidos a procesos erosivos en la Argentina
Cada ao se suman unas 650.000 hectreas a los procesos de erosin
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Unos 9,5 millones de personas estn localizadas en tierras ridas o semiridas
Respuestas a estreses abiticos
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Respuesta de las plantas a niveles letales o sub-letales de estrs

En un ambiente desfavorable, una planta podra enfrentar las siguientes situaciones:
- Estrs letal que puede conducir a la muerte de la planta debido al incremento de los procesos de senescencia. - Estrs sub-letal o estrs letal precedido por un estrs sub-letal durante el cual pueden producirse cambios adaptativos que permiten la supervivencia de la planta (tolerancia).
Estas adaptaciones pueden ocurrir a nivel molecular, (expresin gnica y sntesis . proteica) o a nivel bioqumico . (sntesis de nuevos metaboltos), . lo que conduce a respuestas . celulares y fisiolgicas alteradas.
Tomado de: Grover et al., Current Science, 2001.
Respuesta de las plantas a niveles letales o sub-letales de estrs

A nivel de toda la planta:
- Reducciones en la germinacin de las semillas - Reducciones en el establecimiento de las plntulas - Pobre vigor de los brotes - Decrecimiento en la extensin de las races - Enrollamiento y senescencia de las hojas - Disminucin de la tasa fotosinttica - Reduccin en la viabilidad del polen - Reduccin y llenado incompleto de los granos
.
.
A nivel celular o subcelular:

- Niveles incrementados de diferentes osmolitos (sequa y salinidad) - Represin general de la biosntesis de protenas (sequa y salinidad) - Cambios selectivos en los niveles de K+/Na+ (sequa y salinidad) - Incremento en la insaturacin de los lpidos de membrana (descenso de temperatura) - Regulacin positiva de la gluclisis y enzimas requeridas para la fermentacin alcohlica (anaerobiosis; innundaciones)
Respuestas a estreses ambientales
, cido jasmnico, cido abscsico, etileno, Ca 2+
Las plantas responden al estrs tanto a nivel celular como del conjunto de los tejidos. Los estreses constituyen seales ambientales que son percibidas y reconocidas por las plantas. Las seales son transducidas en las clulas y transmitidas a travs de la planta. Tpicamente, la transduccin de seales a nivel celular resulta en la alteracin de la expresin gentica, lo que a su vez influye sobre el metabolismo y el desarrollo de la planta.
Demarcacin funcional de las rutas de sealizacin de estreses inducidos por salinidad y sequa
Adaptado de: Zhu, Annual Review in Plant Biology, 2002.
Las rutas de sealizacin del estrs hdrico y salino son inducidas por exceso de Na+ o por cambios osmticos. Las rutas de sealizacin inica y osmtica derivan en la restauracin de la homeostasis a nivel celular y de la planta.
recepcin
Rutas de transduccin de seales involucradas en las respuestas a estreses abiticos
Sensores:
histidina kinasa, canales ionicos, Hsfs, GPCR, RLKs
Seal de estrs
membrana plasmtica
MAPKKK
Ca2+
Ca2+
transduccin de seales
MAPKK
CaM, CaN CDPK CaM, CaN, CaM, CDPK CDPK
SOS3
MAPKK
Fosforilacin de protenas
SOS2
Factores de transcripcin
Efectores/ niveles de accin
antioxidantes, osmolitos
protenas de tipo LEA
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Proteccin de macromolculas, reparacin de daos, homeostasis osmtica Proteccin celular, reparacin de daos, homeostasis osmtica
Transportadores inicos
homeostasis ionica
MPK, MPKK, MPKKK, : MAP quinasa, MAPK quinasa y MAPKK quinasa, respectivamente; CaM: Calmodulina; CDPK: protena quinasa dependiente de calcio; SOS3, SOS2: protena quinasas (Salt overly sensitive); LEA: protenas abundantes en la embriognesis tarda; Hsfs: factores de choque trmico; GPCR: receptor acoplado a protena G; RLKs: quinasas de tipo receptor
Control transcripcional de las respuestas a estrs

estrs bitico y heridas
sequa y alta salinidad calor AJ fro
ABA
AREB/ABF (bZIP) NAC HDZF
DREB1D/CBF4 (AP2/ERF)
MYB
MYC
DREB2 (AP2/ERF)
DREB1/CBF (AP2/ERF)
MYBR
MYCR
ABRE
NACR
HDZR
DRE/CRT
Expresin de genes inducibles por estrs
Tolerancia a estrs
Adaptado de: Nakashima y Yamaguchi-Shinozaki, Abiotic stress adaptation in plants, 2010.
Los factores de transcripcin que controlan respuestas inducibles por estrs estn representados por elipses. Los elementos que actan en cis controlando la trascripcin inducida por el estrs estn representados como cajas. Los crculos pequeos sobre los factores de transcripcin representan modificaciones (tales como fosforilaciones) inducidas por el estrs que resultan en su activacin.
Funciones bioqumicas asociadas con la tolerancia al estrs hdrico
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Adaptada de: Bohnert and Jensen, Trends in Biotechnology, 1996.
El esquema incluye tres espacios que estn definidos por la membrana plasmtica y el tonoplasto. Se muestran los efectos de la accin de protenas relacionadas con la tolerancia al dficit de H2O. El esquema se focaliza en los eventos bioqumicos y no incluye eventos de sealizacin o rutas que conducen a alterar la expresin gnica.
Respuestas de tolerancia al estrs hdrico

Las respuestas de tolerancia a estrs hdrico se basan en:
Aumentar la actividad de bombas Na2+/H+ . en las membranas plasmticas de clulas de raz . y en los tonoplastos del mesfilo y de otros tejidos . (exportacin y compartimentacin de sodio) Controlar la expresin, actividad y propiedades de . los sistemas de transporte de potasio y la actividad . de las acuoporinas Controlar el flujo de agua y el nivel de turgencia . . incrementando la produccin de solutos compatibles . (ajuste osmtico) Proteger las enzimas, complejos proteicos y estructuras . de membrana incrementando la capacidad de detoxificacin . de radicales hidroxilos y la produccin de osmoprotectores. .
Solutos compatibles
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Parmetros que determinan el ajuste osmtico
turgencia
tensin
p = p = + 0,5 Mpa s = 2,0 MPa w = 1,5 MPa
0 MPa
s = 1,2 MPa w = 1,2 MPa
Dficit de H2O
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con ajuste osmtico
Suelo
w = 1,2 MPa
sin ajuste osmtico
Adaptado de: Buchanan, Gruissem and Jones, Biochemistry and Molecular Biology of Plants, 2000.
W : potencial de H2O W = S + P
S : potencial de soluto P : potencial de presin
El movimiento de agua hacia dentro o fuera de la clula depende del gradiente de potencial de agua (w) a travs de la membrana plasmtica
w externo = 0 MPa
Membrana plasmtica Valores intracelulares Pared celular Vacuola Rodeada por la membrana del tonoplasto
p = + 0,5 MPa s = 1,6 MPa w = 1,1 MPa

H2 O
Clula plasmolizada:
externo
> w
interno
w externo = 2,5 MPa

Membrana plasmtica
Valores intracelulares
p =
0 MPa
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s = 2,0 MPa w = 2,0 MPa

H2O
externo
< w
interno
Ajuste osmtico en una clula del mesfilo en una hoja de espinaca sometida a exceso de sal
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Los iones de sodio y cloruro, que pueden interrumpir el metabolismo en el citoplasma, se concentran en la vacuola. Por el contrario, la concentracin de glicina-betana es alta en los cloroplastos y el citoplasma, pero baja en la vacuola.
Funciones sugeridas de compuestos que se producen en las plantas como respuesta al estrs hdrico
Grupo de productosa Iones Componente especfico Potasio Funciones sugeridas Ajuste osmtico, requisitos de macronutrientes, exclusin / exportacin de sodio Osmoproteccin Protenas relacionadas con patognesis Detoxificacin de radicales Ajuste osmtico Osmoprotector Ajuste osmtico Osmoprotector, reserva de carbono Reserva de carbono, ajuste osmtico Osmoprotector, ajuste osmtico Osmoprotector Osmoprotector Osmoprotector Proteccin contra la fotoinhibicin Balance inico, proteccin de la cromatina
Adaptado de: Bohnert and Jensen, Trends in Biotechnology, 1996. a
Protenas
LEA/dehidrinasb Osmotinab SOD/catalasa Prolina Ectona Sacarosa Fructanos Acclicos (ej., manitol) Cclicos (ej., pinitol) Glicina betana -alanina betana Dimetilsulfonio propionato Carotenoides, antocianinas, betalanas Espermina, espermidina
Aminocidos Amidinas Azcares Polioles Aminas cuaternarias
Pigmentos y carotenoides Poliaminas
No todos los compuestos que se acumulan se encuentran en todas las especies; las rutas bioqumicas son especficas para rdenes y familias de plantas. Las LEAs (late-embryogenesis abundant proteins) y las dehidrinas, as como las protenas relacionadas con la patognesis, son ejemplos del reclutamiento de protenas con otra funcin en las respuestas de estrs abitico.
Estructuras qumicas de solutos celulares compatibles
NH3(CH2)3NH (CH2)4NH (CH2)3NH3
Espermina
Compuestos con amonios cuaternarios
Colina-O-sulfato
Los solutos compatibles preservan la capa de hidratacin de las macromolculas
La capa de hidratacin de las macromolculas no es perturbada por los solutos compatibles.
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Protena desnaturalizada: Protena intacta: molculas de H2O pocas molculas de H2O unidas rodeando a la protena en forma a la protena; alta entropa altamente ordenada; baja entropa
Estrategias para aislar genes de tolerancia a estreses abiticos
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Las respuestas al estrs abitico involucran mecanismos complejos
estreses primarios
sequa salinidad polucin qumica frio calor
estreses secundarios
Adaptado de: Vinocur and Altman, Current Opinion in Biotechnology, 2005.
estrs osmtico estrs oxidativo
Disrrupcin de la homeostsis osmtica e inica; daos a protenas funcionales y estructurales y a membranas celulares
Sensado, percepcin y transduccin de seales
Osmosensores (ej., AtHK1), enzimas que clivan fosfolpidos (ej., PDL), segundos mensajeros (ej., Ca2+, PtdOH, ROS), MAP quinasas, sensores de Ca2+ (ej., SOS3), quinasas dependientes de Ca 2+ (ej., CDPKs)
Control transcripcional
Factores de transcripcin (ej., CBF/DREB, ABF, HSF, bZIP, MYC/MYB
Detoxificacin
(SOD, PX)
Chaperonas
(Hsp, SP1, LEA, COR)
Mecanismos de respuesta al estrs
Activacin gnica
Osmoproteccin
(prolina, glicina-betana, polioles azcares)
Movimiento de agua e iones (acuoporinas, transportadores de iones)
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Restablecimiento de la homeostsis celular, proteccin funcional y estructural de protenas y membranas celulares
Tolerancia al estrs
ABF: ABRE binding factor; AtHK1: histidin quinasa 1 de Arabidopsis thaliana; bZIP: basic leucine zipper transcription factor; CBF/DREB: C-repeatbinding factor/dehidratationresponsive binding protein; CDPK: protein quinasa dependiente de Ca2+; COR: cold-responsive protein; Hsp: Heat-shock protein; LEA: late embryogenesis abundant; MAP: mitogen-activated protein; MYC/MYB: familias de actores de transcripcin PLD: fosfolipasa; Ptd-OH: cido fosfatdico; PX: peroxidasa; ROS: especies reactivas de oxgeno; SOS: salt overly sensitive SOD: superoxidodismutasa; SP1: stable protein 1
Estrategias para desarrollar plantas tolerantes al estrs mediante ingeniera gentica

Adaptado de: Vinocur and Altman, Current Opinion in Biotechnology, 2005.
Genes y protenas asociadas a estreses

Com ponentes de rutas de sealizacin, factores de transcripcin
Hsps, chaperonas y protenas LEA
Transporte de agua e iones
Detoxificacin y scaveging de ROS
Mejoramiento vegetal y marcadores moleculares (ej., QTLs)
Tolerancia adquirida a estrs
Transformacin gentica
Osm olitos, osm oprotectores
Poliam inas
Metabolism o de carbono
Otros m ecanism os de respuesta a estrs (ej., apoptosis)

Hsp: heat shock protein LEA: late embryogenesis abundant ROS: reactive oxygen species
Metabolitos asociados a estreses
La tolerancia adquirida al estrs puede ser incrementada modificando la expresin de genes y protenas o por la sobrexpresin de metabolitos asociados al estrs. La tolerancia es un carcter que depende de la actividad concertada de muchos genes, protenas y rutas metablicas. La tolerancia a los estreses abiticos puede desarrollarse por ingeniera gentica o mejoramiento asistido con marcadores moleculares y quantitative trait loci (QTLs).
Estrategias para desarrollar plantas tolerantes al estrs mediante ingeniera gentica
Buscar organismos que vivan bajo condiciones medioambientales extremas de estrs
Estudiar los organismos bajo condiciones estresantes y no estresantes
Aislar y clonar aquellos genes que confieren la tolerancia al estrs
Caracterizar el producto gnico en un sistema modelo procariota
Agrobiotecnologa
Introducir el gen en un sistema vegetal y estudiarlo bajo estrs
Introducir el gen en un cultivo y proceder con ensayos de campo

Adaptado de: Holmberg and Blow, Trends in Plant Science, 1998.
Craterostigma plantagineum es una planta poiquilohdrica modelo para el estudio de tolerancia a la deshidratacin
Los dos azcares ms prominentes hallados en C. plantagineum son 2-octulosa y estaquiosa. 2-octulosa predomina en las hojas y es convertido en sacarosa durante la deshidratacin. Estaquiosa predomina en las races, tanto en condiciones normales como bajo deshidratacin
Arriba: C. plantagineum (Planta de la Resurreccin). Abajo: efecto de la deshidratacin. Planta totalmente trgida (izquierda); planta deshidratada (centro); planta hidratada por 12 h (derecha).
Tomado de: Bartels and Salamini , Plant Physiology , 2001.
Thellungiella halophila es una planta halfila modelo para el estudio de la tolerancia a salinidad
Tomado de: Vinocur and Altman, Current Opinion in Biotechnology, 2005.
Thellingiella halophila es una pequea halfila altamente tolerante al estrs salino. Tiene un ciclo de vida corto y comparte muchas similitudes biolgicas y moleculares con Arabidopsis thaliana. La fotografa muestra plantas de T. halophila y A. thaliana cultivadas durante 7 das en medio saturado con 0, 200 y 600 mM de NaCl.
Thellungiella halophila es una planta halfila modelo para el estudio de la tolerancia a salinidad
Uso de genmica funcional para la bsqueda de genes de tolerancia a estreses abiticos

rd29A nAChRE -tubulin
Tomado de: Seki et al., The Plant Cell, 2001.
Anlisis de la expresin gentica frente a estrs inducido por fro utilizando microarreglos de 1.300 genes de Arabidopsis. Los genes sealados en la imagen corresponden a controles positivos (rd29A), negativos (nAChRE) y a controles internos no inducibles (-tubulina). Se utilizaron sondas realizadas con ADNc de plantas estresadas y no estresadas con fro. La coloracin roja indica induccin gnica; la coloracin verde, inhibicin. Lo puntos en amarillo indican que no hay cambios en la expresin gnica.
Identificacin de genes inducibles por estrs abitico
Tomado de: Seki et al., The Plant Journal, 2002.
Clasificacin de genes inducibles o reprimibles por fro, sequa y salinidad mediante anlisis con microordenamientos. Los nmeros entre parntesis (panel izquierdo) indican genes cuya induccin es mayor de cinco veces para el estrs en cuestin y menor de tres veces para los restantes.
Identificacin de genes de Arabidopsis thaliana inducidos por estreses de fro, sequa y salinidad
Tomado de: Seki et al., The Plant Journal, 2002.
Anlisis por Northern blot para tres genes altamente inducibles por salinidad (RAFL08-19-G15), sequa (RAFL08-08-O14) y fro (RAFL04-12-P22). Se muestra la expresin de un gen constitutivo (RAFL05-14-L02) como control interno.
Identificacin de genes regulados por factores de transcripcin inducibles por estreses abiticos
Estrategia para identificar genes inducidos por fro y sequa que son blanco del factor de transcripcin DREB1A (Dehydration Responsive Element Binding Protein)
Agrobiotecnologa
Identificacin de genes inducibles por estrs abitico
Genes inducibles por Sequa y fro: 16

Genes especficos inducidos por sequa: 5 FL6-55, FL5-2D23, FL2-56, FL5-3J4, rd20
Genes que son blanco de DREB1A: 12

rd29A, cor15a, kin1, kin2, rd17, erd10, FL35a3, FL5-77, FL5-2122, erd4, FL5-94, FL3-27
Genes inducibles por fro: 2 FL5-90, DREB1A
Genes que no son blanco de DREB1A: 4

FL5-3M24, FL5-3A15, FL5-2O24, FL5-1A9
Los genes inducibles por fro y sequa fueron clasificados en dos grupos: los que son blancos de la accin de DREB1A y los que no son inducibles por este gen.
Secuenciacin de alto rendimiento

Roche / 545 FLX (2004) o Titanium 2009 Desarrollo de plataformas automatizadas para secuenciacin masiva Illumina Solexa Genome analyzer (2006) Applied Biosystems SOLIDTM System (2007) Pacific Biosciences SMRT (2010) Ion Torrent (2010)
Secuenciacin de alto rendimiento

Plataforma de secuenciacin Qumica de secuenciacin ABI 3730xl Genome Analyzer Secuenciacin automtica por el mtodo de Sanger Amplificacin in vivo va clonado de ADN 700-900 pb Roche 454 Titanium Pirosecuenciacin sobre soporte slido PCR en emulsin Illumina Genome Analyzer Secuenciacin por sntesis con terminadores reversibles Bridge PCR ABI SOLID Pacific Biosciences Secuenciacin por sntesis
Secuenciacin por ligacin
Mtodo de amplificacin del templado Longitud de lectura Produccin de secuencia
PCR en emulsin
Ninguna (molcula nica) 1-10 kpb
300-400 pb
100 pb
75 pb
0,03-0,07 Mb/h
13 Mb/h
25 Mb/h
21-28 Mb/h
Pronunciado descenso en el costo de secuenciacin por base secuenciada Datos cualitativos (secuencia) y cuantitativos (abundancia de la secuencia) Posibilidad de incluir muchas situaciones por corrida
Identificacin de genes inducibles por estreses abiticos mediante enfoques transcriptmicos
Planta no estresada (estado de referencia)
Planta estresada (estado experimental)
ARNm
ARNm
ADNc
ADNc
Secuenciacin masiva
Secuenciacin masiva
Anlisis bioinformtico. Seleccin de genes candidado Anlisis de funcin gnica
Agrobiotecnologa
Clonado de genes candidatos Ensayos en sistemas modelo
Tolerancia a estreses abiticos Solutos compatibles
Agrobiotecnologa
Transformacin de tabaco con el gen de manitol-1P deshidrogenasa de Escherichia coli
- Se transformaron plantas de tabaco con una construccin gentica que contena el gen mtlD de E. coli bajo el promotor de 35S de CaMV. - Se realizaron experiencias de crecimiento en medios de alta concentracin salina. - Se evalu la altura de la parte area y el peso fresco de las plantas. - Las plantas transgnicas toleraron mayores niveles de salinidad.
Glucosa 6-fosfato Fructosa Fructosa 1,6-difosfato
Fructosa 6-fosfato
Agrobiotecnologa
mtlD
Manitol 1-fostato deshidrogenasa Fosfatasa no Fosfatasa especfica inespecfica
Manitol 1-fosfato
Manitol
Transformacin de tabaco con el gen de manitol-1P deshidrogenasa de Escherichia coli
NT NT T NT T
Tomado de: Tarczynski et al., Science, 1993.
Plantas de tabaco transgnicas que acumulan manitol y plantas control a los 30 das de crecimiento en medio de cultivo conteniendo 250 mM de NaCl. NT: no transgnica; T: transgnica.
Races de plantas de tabaco que acumulan manitol y plantas control a los 30 das en medio de cultivo sin sales (izquierda) y conteniendo 250 mM de NaCl (derecha). NT: no transgnica; T: transgnica.
Ruta de sntesis de D-ononitol y de D-pinitol en la planta del hielo (Mesembryanthemun crystallinum)

Va ubicua; no inducible por estrs en Arabidopsis thaliana
Pool de glucosa 6 -fostato

inps1 Inositol 1 -fosfato sintetasa Fosfoinostidos, fosfolpidos, fitatos
Va ubicua y su extensin, la cual es inducible por estrs en Mesembryanthemum crystallinum
Pool de myo -inositol 1 -fosfato

imp1 Inositol monofosfatasa
myo-inositol
imt1 Inositol O-metiltransferasa
D-glucuronato -1-fosfato, sntesis de pared celular, galactinol para azcares de rafinosa
D-Ononitol
oep1 Ononitol epimerasa
D-Pinitol
Adaptada de: Bohnert and Jensen. Trends in Biotechnology,1996.
La ruta de sntesis de D-ononitol y D-pinitol a partir de glucosa 6-P es inducible por sequa y/o salinidad en varias familias de plantas halfilas. En la planta del hielo (Mesembryanthemun crystallinum) se ha demostrado la induccin coordinada de la transcripcin de inps1 y imt1. En cambio, inps1 no se induce bajo estrs y el gen imt1 no est presente en Arabidopsis thaliana.
Expresin constitutiva del gen de la mio-inositol O-metiltransferasa de Mesembryanthemum crystallinum en Nicotiana tabacum
mio-inositol
D-ononitol
Tomado de: Sheveleva et al., Plant Physiol.,1997.
Agrobiotecnologa
Acumulacin de mio-inositol y D-ononitol en plantas de tabaco no transformadas (SR1) y en una lnea transgnica (I5A) transformada con el gen de imt1 de M. crystallinum en condiciones de carencia de riego. Las plantas fueron privadas de agua durante 8 das. Las plantas I5A exhibieron mayor tasa fotosinttica, mayor nivel de fijacin de CO2 y mayor recuperacin de la fotosntesis que los controles en condiciones de estrs .
Rutas biosintticas presentes en diferentes organismos para la sntesis de glicina betana

Rutas de dehidrogenacin/oxidacin de la Rutas de deshidrogenacin/oxidacin decolina la colina a) Plantas
CMO: colina monooxigenasa COD: colina oxidasa CDH: colina deshidrogenasa
colina b) Escherichia coli
betana aldehdo
glicina betana
BADH: betana aldehdo deshidrogenasa GSMT: glicina sarcosina metiltransferasa SDMT: sarcosina dimetiltransferasa
colina
betana aldehdo
glicina betana
Fd(red) / Fs(ox): ferredoxina en forma reducida u oxidada SAH: S-adenosilhomocistena SAM: S-adenosilmetionina
c) Arthrobacter globiformis
colina Ruta de metilacin de la glicina *
glicina betana
glicina
sarcosina
(N-metilglicina)
N,N-dimetilglicina
glicina betana
* La ruta de metilacin de la glicina fue identificada en dos microorganismos halfilos: Actinopolyspora halophila y Ectothiorhodospira halochocloris
Adaptado de: Murata and Chen Curr. Opin. Plant Biol., 2002.
Transformacin de Arabidopsis thaliana con el gen de colina oxidasa de Arthrobacter globiformis

- Se transformaron plantas de Arabidopsis thaliana con una construccin que contiene el gen codA de la bacteria del suelo Arthrobacter globiformis dirigido por el promotor 35S de CaMV. Se agreg una seal de transporte a cloroplastos a la secuencia del transgn para permitir la acumulacin de la enzima en dicha organela.
p35S rbcS tr
codA
tnos
- El contenido de glicina-betana en hojas de plantas transgnicas aument respecto del control. - Las plantas transgnicas exhiben tolerancia al estrs salino y a altas y bajas temperaturas.
Contenido (mol g-1 peso fresco) Control Colina Glicinabetana 1,5 0,3 0,0 Lnea 1 1,4 0,3 0,9 0,2 Lnea 2 0,8 0,2 1,2 0,2 Lnea 3 1,0 0,3 0,8 0,3
Tomado de: Hayashi et al., The Plant Journal, 1997.

Efecto del estrs salino sobre la germinacin y el crecimiento de plantas transgnicas y control
Tamao de la planta (cm) NaCl (mM) 0 100 200 300
Control Lnea 1 Lnea 2 Lnea 3
3,0 0,3 3,0 0,2 0,2 0,0 2,5 0,3 0,1 0,0 0,8 0,1 0,0 0,2 0,0
3,0 0,3 3,0 0,2 2,0 0,1 2,2 0,1 0,1 0,0 0,7 0,1 0,1 0,0 0,2 0,0
Se hicieron germinar 5 semillas de plantas controles y 5 semillas de cada una de las lneas transgnicas en placas de Petri suplementadas con varias concentraciones de NaCl. Despus de incubar a 0oC por 2 das, las placas se incubaron a 22oC para permitir la germinacin y el crecimiento de plntulas. Se midi la altura total de las plantas desde el tope de la parte area hasta la punta de la raz a los 5 das de transferir las semillas a 22oC.
Tomado de : Hayashi et al., The Plant Journal, 1997.
Efecto del estrs salino en plantas transgnicas y controles desarrolladas
Agrobiotecnologa
5 cm
Se cultivaron plantas controles sin transformar y transgnicas en medio hidropnico por 30 das. Las plantas se transfirieron luego a medio suplementado con 200 mM de NaCl y se las incub por 10 das con luz.
A: Planta control no transgnica B: Planta transgnica

Induccin de daos visibles en hojas de plantas controles y transgnicas por bajas temperaturas A B
Agrobiotecnologa
Se cultivaron plantas transgnicas y controles durante 30 das y se las incub a 5oC bajo luz continua por 7 das. A continuacin, las plantas fueron incubadas en condiciones normales por 2 das.
A: Planta control no transgnica B: Planta transgnica
Tolerancia a altas temperaturas en plantas de Arabidopsis thaliana que expresan el gen de colina oxidasa de Arthrobacter globiformis No transgnica
22 C 50 C 22 C
Transgnica
50 C
40 C
55 C
40 C
55 C
Tomado de: Alia et al., The Plant Journal, 1998.
Efecto de altas temperaturas durante la imbibicin y subsiguiente germinacin de semillas de plantas no transgnicas y transgnicas. La semillas fueron imbibidas a 22, 40, 50 y 55oC por 1 hora y luego sembradas en placas. Luego de incubarlas a 4oC por 2 das, las semillas fueron mantenidas a 22oC por 3 das.
Comportamiento frente a distintas formas de estrs de plantas modificadas para sobrexpresar glicina betana
Especies
Arabidopsis thaliana
Gen
codA codA codA codA codA codA cox cox codA codA cox betA betA / betB codA betA (modificado)
Acumulacin mxima
1,2 mol g 1 pf 1,2 mol g 1 pf 1,2 mol g 1 pf 1,2 mol g 1 pf 1,2 mol g 1 pf 1,2 mol g 1 pf 19 mol g 1 ps 13 mol g 1 ps 0,82 mol g 1 pf 0,3 mol g 1 pf 13 mol g 1 ps * 0,035 mol g 1 pf 5,3 mol g 1 pf 5,0 mol g 1 pf
Tolerancia aumentada
Fro Fro, salinidad Calor Luz intensa Salinidad Heladas Heladas, salinidad Sequa, salinidad Salinidad Salinidad Salinidad Salinidad Fro, salinidad Fro, salinidad Sequa, salinidad
Brassica napus Brassica juncea Diospyros kaki Nicotiana tabacum
Oryza sativa
* No se dispone de datos Adaptado de: Chen and Murata, Curr. Opin. Plant Biol., 2002. codA: gen de colina oxidas de E. coli; cox: gen de colina colina oxidasa de A. globiformis; BetA y BetB: genes de betana deshidrogenasa y de betana aldehido deshidrogenasa de E. coli;
Tolerancia frente a distintas formas de estrs de plantas modificadas para producir otros solutos compatibles
Solutos compatibles Fructano Gen sacB sacB mt1D mt1D mt1D mt1D imt1 Anti-proDH P5CF127A S6PDH TPS1 TPS1 TPS1 otsA, otsB Planta hospedadora Tabaco Remolacha azucarera Arabidopsis Tabaco Tabaco Tabaco Tabaco Arabidopsis Tabaco Caqui Tabaco Papa Tabaco Tabaco Acumulacin mxima 0,35 mg g 1 pf 0,5 % ps 10 mol g 1 pf 6 mol g 1 pf 3,8 mg g 1 ps 7 mol g 1 pf 35 mol g 1 pf 600 g g 1 pf 4 mg g 1 pf 61,5 mol g 1 pf 3,2 mg g 1 ps * * 90 g g 1 pf Tolerancia aumentada Sequa Sequa Salinidad Salinidad Salinidad Estrs oxidativo Sequa, salinidad Heladas, salinidad Salinidad Salinidad Sequa Sequa Sequa Sequa
Manitol
D-ononitol Prolina Sorbitol Trehalosa
Adaptado de: Chen and Murata, Curr. Opin. Plant Biol., 2002.. * No se dispone de datos Anti-proDH: ADNc antisentido del gen de prolina deshidrogenasa de A. thaliana; imt: gen de myo-inositol O-metil transferasa de M. crystallinum; mt1D: gen de la manitol-1-fosfato deshidrogenasa de E. coli; otsA y otsB: genes de trehalosa-6-fosfato sintetasa y de treahalosa-6-fosfato fosfatasa de E. coli; P5CS: gen de -pirrolina-5-carboxilato sintetasa de V. aconitifolia; P5CF127A: gen mutado de -pirrolina-5-carboxilato sintetasa de V. aconitifolia; SacB: gen de la levanosacarasa de B. subtilis; S6PDH: gen de la sorbitol-6-fosfato deshidrogenasa de manzano; TPS1: gen de la trehalosa-6-fosfato sintetasa de levadura.
Tolerancia a estreses abiticos Bombas de Na+/H+
Agrobiotecnologa
Regulacin de la homeostasis de Na+ y K+ por la ruta SOS

H+
exportacin
compartimentalizacin
exclusin
Agrobiotecnologa
Adaptado de: Zhu. Annual Review in Plant Biology, 2002.
El estrs por alta concentracin de Na+ da lugar a una seal mediada por Ca2+ que activa el complejo de kinasas SOS3-SOS2, el que a su vez estimula la actividad de intercambio Na+/H+ de SOS1 y regula la expresin de distintos genes a nivel transcripcional y post-transcripcional.
Tolerancia a estrs salino en plantas de tomate transformadas con el gen nhx1 de la bomba vacuolar de Na+/H+ de Arabidopsis thaliana
A B
Tomado de: Zhang and Blumwald. Nature Biotechnology, 2001
Plantas controles (A) y transgnicas (B) crecidas en 5 mM NaCl
Plantas controles (C) y transgnicas (D) crecidas en 200 mM NaCl
A: Frutos de plantas controles B: Frutos de plantas transgnicas
Tolerancia a estrs salino en plantas de Brassica napus transformadas con el gen nhx1 de la bomba vacuolar de Na+/H+ de Arabidopsis thaliana
Plantas transgnicas y control crecidas en 200 mM de NaCl
Tomado de: Zhang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001.
X1OE1
X1OE2
X1OE3
Controles
Las diferentes lneas transgnicas presentan niveles de expresin X1OE1: nivel alto; X1OE2: nivel medio; X1OE3: nivel bajo
Tolerancia a estrs salino en plantas de Paspalum dilatatum transformadas con el gen nhx1 de Arabidopsis thaliana
Se transformaron plantas de P. dilatatum con una construccin que permite expresar el gen nhx1 de A. thaliana en forma constitutiva
WT
WT
Texto: Arial 24
Gentileza: Ing. Agr. G. Schrauf
Plantas transgnicas (T) y control (WT) regadas con 250 mM NaCl
Tolerancia a estreses abiticos Sobrexpresin de citoquininas
Agrobiotecnologa
Tolerancia a estrs hdrico en tabaco transformado con el gen ipt bajo un promotor inducible por senescencia
La salinidad y la sequa aceleran el proceso de . senescencia en las plantas. Bajo un estrs no letal, las plantas tienden a florecer . ms rpidamente. El estrs modifica la relacin fuente/sumidero Las citoquininas retrasan el proceso de senescencia
El retraso de la senescencia originada por el estrs puede proveer mecanismos de supervivencia mediante la activacin de mecanismos de evasin (regulacin del turn-over proteico, mayor eficiencia en el uso de agua, consumo de nutrientes de almacenamiento, retraso de la floracin inducida por estrs) Se expres un gen de la enzima isopentenil transferasa (IPT) bajo un promotor inducible por senescencia para mantener niveles ptimos de citoquininas y retrasar el estrs inducido por este proceso. La IPT es el factor limitante de la biosntesis de citoquininas.
Agrobiotecnologa
El promotor utilizado proviene del gen de una quinasa tipo receptor asociada a senescencia (SARK) de Phaseolus vulgaris. El gen SARK es inducido por este proceso.
SARK
IPT
No transgnica
Transgnica
Agrobiotecnologa
Fila superior: sin riego segunda semana Fila inferior: riego restaurado, tercera semana
Gentileza Dr. E. Blumwald
La tolerancia a estrs hdrico puede visualizarse como un carcter de productividad en condiciones de escasez de agua
Agrobiotecnologa
Plantas transgnicas y control cultivadas en condiciones de riego diario normal (derecha) y bajo 30% del riego diario normal (izquierda)
Peso fresco de plantas
Produccin de semillas
Peso fresco (g/planta)
Rendimiento de semillas Peso seco (g semilla/planta)
semillas /planta
Agrobiotecnologa
1 L/da
0,3 L/da
Sequa
Tolerancia a estreses abiticos Expresin de factores de transcripcin
Agrobiotecnologa
Transformacin de plantas de Arabidopsis thaliana con el gen del factor de transcripcin Hahb-4 de girasol
La disponibilidad de agua regula la expresin del gen hahb-4 en los diferentes rganos de la planta
Agrobiotecnologa
Hahb-4 es un factor de transcripcin de girasol que pertenece a la familia Hd-Zip. Los factores de este tipo contienen un dominio de unin a ADN asociado con un cierre de leucinas y estaran involucrados en procesos del desarrollo vinculados a factores ambientales.
Gentileza Dr. R. Chan
Plantas transformadas con el gen Hahb-4 (derecha ) y no transgnicas (izquierda) sometidas a sequa.
WT
WT
Plantas de Arabidopsis thaliana de 28 das postgerminacin sometidas a estrs hdrico extremo
Agrobiotecnologa
Las mismas plantas que en el panel superior a las 24 h de resumido el riego normal
WT
WT
Ensayos de campo con plantas de trigo transformadas con el gen Hahb-4 de girasol
4000 Yield (kg ha-1) 3000 a 2000 1000 0
Ta .IV .ii .a .1 2 Ty pe Ta .IV . ii .a .3 Ta .IV . ii .a .4 Ta .IV . ii .a .6 BI 3
Ta.IV.ii.a.12
Villalonga
ab
b ab ab a
39 5451S 62 3712W
Villalonga
2000
ild
Monte Buey
1500
Yield (kg ha-1)
32 5508S 62 2728W
1000
500
Monte Buey
Wild type
Ta.IV.ii.a.3
Ta.IV.ii.a.4
Ta.IV.ii.a.6
Gentileza Ing. Agr. G. Watson
00 4
Tolerancia a estreses abiticos Protenas LEA
Agrobiotecnologa
Sobreexpresin del gen hva1 de cebada (Hordeum vulgare L.) en plantas transgnicas de arroz
Se transformaron plantas de arroz con el gen hva1 de cebada que codifica una protena LEA (Late Embryogenesis Abundant). La secuencia se puso bajo la direccin del promotor de actina de arroz. Las plantas transgnicas exhibieron mayor crecimiento de hojas y races en condiciones de estrs.
Agrobiotecnologa
Tomado de: Xu et al., Plant Physiol., 1996.
Planta control no transgnica (NT) y dos lneas transgnicas (36, 41) que fueron sometidas a tres ciclos consecutivos de estrs hdrico de 7 das cada uno, consistentes en 5 das sin riego seguidos por 2 das con riego.
Tolerancia a estreses abiticos Citrato sintetasa
Agrobiotecnologa
Tolerancia a aluminio en plantas de tabaco transformadas con el gen de citrato sintetasa de Pseudomonas aeruginosa
- Los suelos cidos y con alta concentracin de aluminio resultan txicos para las races, las cuales no son capaces de desarrollarse y absorber los nutrientes disponibles. - El exudado de cidos orgnicos produce la quelacin del aluminio produciendo tolerancia al mismo. - Se transformaron plantas de Nicotiana tabacum con una construccin que contiene el gen de citrato sintetasa (csb) de la bacteria Pseudomonas aeruginosa dirigido por el promotor 35S de CaMV. - Se cuantificaron los niveles de citrato en la planta y del exudado por las races, en races transgnicas con CSb y controles sin transformar.
Lnea
Control CSb-4 CSb-11 CSb-15 CSb-18
Niveles de citrato (mmol por gramo de peso fresco)
Eflujo de citrato (nmol por plntula por hora)
0,43 0,05 1,41 0,07 1,62 0,08 2,31 0,10 4,47 0,35
57 7,2 105 12,2 111 12,6 163 14,3 231 15,3

Tomado de: de la Fuente et al., Science, 1997.
- Las plantas transformadas toleraron altas concentraciones de aluminio.
Tolerancia a aluminio en plantas de tabaco transformadas con el gen de citrato sintetasa de Pseudomonas aeruginosa
A B
A: Plantas controles germinadas en medio con (derecha) y sin (izquierda) 300 M de aluminio, 2 semanas post-germinacin. B y C: Plantas controles (B) y CSb-18 (C) germinadas en medio conteniendo 0, 75, 300 y 1000 M de aluminio, 10 das post-germinacin. D y E: Plntulas CSb-4 y CSb-18 de una semana germinadas en 200 M de aluminio. H: Segregacin del fenotipo de tolerancia a aluminio en la progenie de CSb-18 luego de 4 semanas de crecimiento en medio con 300 M de aluminio. Las flechas indican las plntulas susceptibles. F, G, I y J: Tincin con hematoxilina de los pelos y la punta de las races de plntulas de 7 das tratadas por 1 h con 100 M de aluminio. (F) y (I) son controles y (G) y (J) plntulas CSb-18.
Tolerancia a aluminio en plantas de papaya transformadas con el gen de citrato sintetasa de Pseudomonas aeruginosa
Agrobiotecnologa
Plantas de papaya (Carica papaya) control y transformadas con el gen csb a los 30 das de cultivo en presencia de 300 M de aluminio. Izquierda: planta de papaya transgnica; derecha: planta transformada con el vector vaco.
Incremento de la captacin de fsforo en plantas de tabaco que expresan el gen de la citrato sintetasa de Pseudomonas aeruginosa
En suelos alcalinos (compuestos fosforados con calcio y magnesio) y cidos (compuestos fosforados con hierro y aluminio) la disponibilidad de fsforo soluble es baja. El exudado de cidos orgnicos por parte de las races aumenta su disponibilidad. Se introdujo en plantas de tabaco el gen de citrato sintetasa de Pseudomonas aeruginosa bajo el promotor 35S de CaMV. Las plantas que expresaron la citrato sintetasa fueron capaces de solubilizar y absorber el fsforo inmovilizado en suelos alcalinos. actividad CS (mg CoA min-1mg-1 protena) 225 11 430 14 595 18 eflujo de citrato (nmol por plntula por hora) 57 7,2 105 12,2 231 15,3
Tomado de: Lpez-Bucio et al., Nature Biotechnology, 2000.
Lnea 1522 (control) CSb-4 Csb-18
A B C
Crecimiento y productividad de lneas de tabaco CSb sometidas a distintos tratamientos con fsforo. Se cultivaron plantas transgnicas (CSb-4 y CSb-18) y control (1522) en suelo alcalino estril de bajo contenido de fsforo, con o sin agregado de fsforo. Las plantas fueron fotografiadas luego de 4 meses en el invernculo.
1522 A
CS-4
CS-18
B1522
CS-4
CS-18
1522 CS-4
CS-18
A: Plantas cultivadas sin agregado de P.

e P.
B y C: Plantas cultivadas con el agregado de 22 108 mg de PO4H2Na por kg de suelo, respectivamente
1522
CS-4
CS-18
D: Frutos de plantas cultivada con 22 ppm de PO4H2Na E: Vista superior de una maceta conteniendo la planta CSb-18 en que se observan precipitados de citrato de calcio (flechas). F-H: Tincin de races de la planta CSb18 con Tryptan blue. F: planta no inoculada. G y H: planta inoculada con la micorriza Glomus fasciculatum
H
Efecto de citrato en la acumulacin de biomasa de plantas de tabaco cultivadas en medio conteniendo una fuente insoluble de fosfato Se cultivaron plantas transgnicas (CSb-4 y CSb-18) y control (1522) en medio (pH 8,0) suplementado o no con 1 mM de cido ctrico. Las fuentes soluble e insoluble de fosfato (PO4H2Na y Ca10(PO4)6(OH)2) se ajustaron a 1 mM. Las plntulas se cosecharon a los 15 das y se determin el peso seco. Datos promedio de tres experimentos independientes.
Sin
Ejemplos de otros genes utilizados para conferir tolerancia a estreses abiticos
Umezawa et al., Current Opinion in Biotechnology, 2006.
Referencias
1.
2.
3. 4.
5.
6.
Agrobiotecnologa
7.
8.
Umezawa, T., Fujita, M., Fujita, Y., Yamaguchi-Shinozaki, K. And Shinozaki, K. Engineering drought tolerance in plants: discovering and tailoring genes to unlock the future. Current Opinion in Biotechnology, 17:113-122, 2006. Vinocur, B. And Altman, A. Recent advances in engineering plant tolerance to abiotic stress: achievements and limitations. Current Opinion in Biotechnology, 16:123-132, 2005. Zhu, J.-K. Salt and drought stress signal transduction in plants. Annual Review in Plant Biology, 53:247-273, 2002. Iba, K. Acclimative response to temperature stress in higher plants: approaches of gene engineering for temperature tolerance. Annual Review of Plant Biology, 53:225-245, 2002. Seki, M., Narusaka, M., Ishida, J., Nanjo, T., Fujita, M., Oono, Y., Kamiya, A., Nakajima, M., Enju, A., Sakurai, T., Satou, M., Akiyama, K., Taji, T., Yamaguchi-Shinozaki, K., Carninei, P., Kawai, J., Hayashizaki, Y. and Shinozaki, K. Monitoring the expression profiles of 7000 Arabidopsis genes under drought, cold and high-salinity stresses using a full-length cDNA microarray. The Plant Journal, 31:279-292, 2002. Chen, H.H. and Murata, N. Enhancement of tolerance of abiotic stress by metabolic engineering of betaines and other compatible solutes. Current Opinion in Plant Biology, 5:250-257, 2002. Zhang, H.X. and Blumwald, E. Transgenic salt-tolerant tomato plants accumulate salt in follage but not in fruit. Nature Biotechnology, 19:765768, 2001. Zhu, J.-K. Plant salt tolerance. Trends in Plant Sciences, 6:66-71, 2001.

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Agrobiotecnologa

Tolerancia a estreses abiticos

Diferentes factores ambientales que resultan en estreses abiticos

Tomado de: Holmberg and Blow, Trends in Plant Science, 1998.

La mayora de estos factores ambientales induce estrs osmtico

Demandas y restricciones futuras de la agricultura

Problemas y prdidas producidas por estreses abiticos

Las aplicaciones biotecnolgicas contribuirn a la recuperacin de suelos inapropiados para el cultivo

Rendimientos y prdidas promedio de los principales cultivos

(Kg/Ha) 19.300 14.500 7.390 20.100 10.600 11.400 94.100 121.000

Los estreses biticos incluyen enfermedades, insectos y malezas.

20,1 (USA) 8,6 (USA 7,3 (Japn) (Jap 100

1,2 1,0 1,0 15,7

Soja % rendimiento rcord r

Uso de agua (Km cubicos)

El desarrollo de las tierras ridas y semiridas es un problema geo-econmico importante de la Argentina

Aproximadamente 60 millones de hectreas estn sometidos a procesos erosivos en la Argentina

Cada ao se suman unas 650.000 hectreas a los procesos de erosin

Unos 9,5 millones de personas estn localizadas en tierras ridas o semiridas

Respuestas a estreses abiticos

Respuesta de las plantas a niveles letales o sub-letales de estrs

Respuesta de las plantas a niveles letales o sub-letales de estrs

A nivel celular o subcelular:

Respuestas a estreses ambientales

, cido jasmnico, cido abscsico, etileno, Ca 2+

Adaptado de: Zhu, Annual Review in Plant Biology, 2002.

Rutas de transduccin de seales involucradas en las respuestas a estreses abiticos

CaM, CaN CDPK CaM, CaN, CaM, CDPK CDPK

Efectores/ niveles de accin

protenas de tipo LEA

Control transcripcional de las respuestas a estrs

sequa y alta salinidad calor AJ fro

Expresin de genes inducibles por estrs

Funciones bioqumicas asociadas con la tolerancia al estrs hdrico

Respuestas de tolerancia al estrs hdrico

Parmetros que determinan el ajuste osmtico

p = p = + 0,5 Mpa s = 2,0 MPa w = 1,5 MPa

s = 1,2 MPa w = 1,2 MPa

con ajuste osmtico

sin ajuste osmtico

S : potencial de soluto P : potencial de presin

p = + 0,5 MPa s = 1,6 MPa w = 1,1 MPa

w externo = 2,5 MPa

s = 2,0 MPa w = 2,0 MPa

Tolerancia a estreses abiticos

Aminocidos Amidinas Azcares Polioles Aminas cuaternarias

Pigmentos y carotenoides Poliaminas

Estructuras qumicas de solutos celulares compatibles

NH3(CH2)3NH (CH2)4NH (CH2)3NH3

Compuestos con amonios cuaternarios

Los solutos compatibles preservan la capa de hidratacin de las macromolculas

La capa de hidratacin de las macromolculas no es perturbada por los solutos compatibles.

Estrategias para aislar genes de tolerancia a estreses abiticos

Las respuestas al estrs abitico involucran mecanismos complejos

Adaptado de: Vinocur and Altman, Current Opinion in Biotechnology, 2005.

estrs osmtico estrs oxidativo

Sensado, percepcin y transduccin de seales

Factores de transcripcin (ej., CBF/DREB, ABF, HSF, bZIP, MYC/MYB

Mecanismos de respuesta al estrs

Estrategias para desarrollar plantas tolerantes al estrs mediante ingeniera gentica

Genes y protenas asociadas a estreses

Hsps, chaperonas y protenas LEA