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PROGRAMA DE ESTUDIO:
Período académico : VI
Docente responsable :
2022
Presentación
1. INDICADOR DE LOGRO
- Prepara diferentes concentraciones de suspensiones celulares
2. MATERIALES E INSTRUMENTOS
MATERIALES:
- Beaker graduado de 250 ml 1 x mesa
- Espátula de metal c/mango de madera 1 x mesa
- Gradilla p/tubos de ensayo 13x100 mm 1 x mesa
- Tubos de ensayo 13x100 mm 10 x mesa
- Bagueta de vidrio 1 x mesa
- Agujas para sistema vacutainer 1 x mesa
- Tubos con EDTA al vacío 1 x mesa
- Holder o capuchón 1 x mesa
- Ligadura 1 x mesa
- Papel Parafilm c/s
- Algodón c/s
- Puntas para micropipeta color amarillo 10-100 uL 25 unidades
- Puntas para micropipeta color azul 100-1000 uL 25 unidades
- Pipetas pasteur de plástico 4 x mesa
REACTIVOS
- Cloruro de sodio (10 g)
- Agua destilada
EQUIPOS
- Balanza mecánica triple brazo (1/mesa) o balanza semianalitica
- Micropipeta 10-100 uL
- Micopipeta 100-1000 uL
- Centrifuga para tubos
3. PROCEDIMIENTO
Preparación de solución salina fisiológica
a. Determinar la tara de la balanza a emplear y calibrar el fiel.
b. Seleccionar la cantidad a pesar: solución peso/volumen
Considerar la siguiente concentración:
Cloruro de sodio …………………………0.85 g
Agua destilada ………………………….100 ml
c. Preparar las cantidades indicadas por el docente.
Lavado de glóbulos rojos:
1. Obtener la muestra de sangre empleando un tubo con anticoagulante (EDTA)
siguiendo el protocolo universal (se sugiere grupo O Rh positivo).
2. Centrifugar la muestra para separar el plasma de los hematíes. Pasar el plasma a
otro tubo limpio y rotulado.
3. Con la micropipeta colocar 0.5 – 1 ml de glóbulos rojos en un tubo limpio.
4. Completar con solución salina hasta 1 cm del borde. Se debe agregar lentamente
por las paredes evitando así hemolisis de los hematíes.
5. Centrifugar a 3500 RPM por 2 minutos o 1000 RPM por 5 minutos para
sedimentar las células.
6. Extraer la solución salina empleando un gotero (NO DECANTAR PARA EVITAR
PERDIDA DE CELULAS).
7. Re suspender los hematíes (primer lavado)
8. Repetir los pasos 4, 5 y 6 dos veces (en total aplicar tres lavados). En el último
lavado la solución salina debe ser clara, sin signos de hemolisis. Retirar al máximo
la solución salina empleando un gotero.
9. Para preparar la suspensión de hematíes utilizar los hematíes sedimentados de
acuerdo al volumen que se necesite.
Preparación de suspensión de glóbulos rojos
- Preparar suspensiones de glóbulos rojos al 5% en solución salina (tomar 5 partes
de hematíes lavados con 95 partes de solución salina.
Ejemplo: 1000 uL de suspensión de glóbulos rojos al 5%
50 uL de hematíes lavados con 950 uL de solución salina
RESULTADOS
- La solución de cloruro de sodio al 0.9%, llamado también solución salina
fisiológica es isotónica por tanto mantiene un perfecto equilibrio en relación a la
concentración de agua intra y extra celular.
- La solución salina debe utilizarse de ser posible recién preparada.
- Durante todo el proceso de lavado de los hematíes deberá observase una
suspensión homogénea libre de hemolisis.
4. INFORME
El estudiante redacta un informe con las siguientes partes:
- Caratula
- Introducción
- Marco teórico
- Materiales y métodos
- Resultados
- Conclusiones
- Cuestionario
- Bibliografía
Cuestionario
1. Mencione 5 pruebas empleadas en Banco de Sangre en la que se utilicen solución
de glóbulos rojos lavados.
2. ¿Qué es una solución de baja potencia iónica, para que se emplea en Banco de
Sangre?
3. Defina los siguientes términos:
- Aglutininas (1 ejemplo)
- Aglutinógeno (1 ejemplo)
- Iso anticuerpo (1 ejemplo)
- Auto anticuerpo (1 ejemplo)
- Anticuerpos inmunes (1 ejemplo)
- Aloanticuerpo (1 ejemplo)
- Suero antiglobulina humana
5. RUBRICA DE EVALUACIÓN
6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
- Manual Técnico de la AABB. Ed. AABB18° Edición 2018
- Linares J. Inmunohematología y transfusión, principios y procedimientos.
Caracas, Venezuela: Cromotip; 1986. 102-103
- Cortés A. y col. Inmunohematología básica y aplicada. Cali, Colombia:
GCIAMT; 2014. 103-133
PRÁCTICA No. 2: GRUPO SANGUINEO: PRUEBA CELULAR – PRUEBA SERICA
SEMANA 13
1. INDICADOR DE LOGRO
- Reconoce y determina los grupos sanguíneos humanos principales ABO y Rhesus
- Analiza y comprende las interacciones de las reacciones antígeno-anticuerpo de
aglutinación.
2. MATERIALES E INSTRUMENTOS
MATERIALES:
- Tubos de ensayo de 13 x 100 mm 15 x mesa
- Gradilla para tubos de ensayo 13 x 100 mm 1 x mesa
- Pipeta pasteur de plástico 4 x mesa
- Aguja para sistema al vacío 21G x 1 1 x mesa
- Holder o capuchón 1 x mesa
- Ligadura 1 x mesa
- Tubo al vacío c/anticoagulante EDTA 1 x mesa
- Papel Parafilm c/s
- Algodón c/s
- Punta para micropipeta 10-100 ul 30 unidades
- Punta para micropipeta 100-1000 ul 30 unidades
REACTIVOS:
- Solución salina fisiológica 0.85% 1 litro
- Alcohol
- Suero anti-A
- Suero anti-B
- Suero anti-D
EQUIPOS
- Centrifuga
- Micropipeta de 10-100 ul
- Micropipeta de 100-1000 ul
3. PROCEDIMIENTO
Prueba celular o globular
1. Colocar 2 gotas de anti-A en un tubo de ensayo rotulado y limpio.
2. Colocar 2 gotas de anti-B en un tubo de ensayo rotulado y limpio.
3. Colocar 2 gotas de anti-D en un tubo de ensayo rotulado y limpio.
4. Agregar a cada tubo una gota de suspensión al 5% de glóbulos rojos a evaluar.
5. Mezclar suavemente el contenido de los tubos y centrifugar 3 400 RPM x 15 segundos
o 1 000 RPM x 1 minuto.
6. Resuspender suavemente los botones celulares y examinar para detectar
aglutinación.
7. Leer, interpretar y registrar los resultados de la prueba. Comparar los resultados de
la prueba celular con los obtenidos en la prueba sérica.
Prueba sérica
1. Rotular tres tubos de ensayo impíos como A1, B y O
2. Agregar 2 gotas de suero a cada tubo
3. Agregar 1 gota de células del reactivo A1 al tubo marcado A1
4. Agregar 1 gota de células del reactivo B al tubo marcado B
5. Agregar 1 gota de células del reactivo O al tubo marcado O
6. Mezclar suavemente el contenido de los tubos y centrifugar a 3 400 RPM x 15
segundos o 1 000 RPM x 1 minuto.
7. Resuspender suavemente los botones celulares y examinar para detectar
aglutinación.
8. Leer, interpretar y registrar los resultados de la prueba. Comparar los resultados de
la prueba serica con los obtenidos en la prueba celular.
INTERPRETACION
- La aglutinación de los glóbulos rojos en estudio y la aglutinación en las pruebas
del suero constituyen resultados positivos de las pruebas.
- Una suspensión celular homogénea después de la resuspención del botón celular
es un resultado negativo de la prueba
- Una escala recomendada para la lectura de aglutinación, es el sistema que utiliza
una interpretación de 0 a 4 cruces (0 a 4+).
Score Interpretación
4+ Un botón sólido de glóbulos rojos, fondo o sobrenadante transparente
3+ Uno o dos grumos grande o varios grumos grandes, fondo transparente
2+ Varios grumos de tamaño mediano, fondo ligeramente turbio
1+ Grumos pequeños y muchos glóbulos rojos libres, fondo turbio
1/2+ Escasos grumos muy pequeños como arenilla, fondo turbio
0 Negativo
HP Hemólisis parcial
HT Hemólisis total
4. INFORME
El estudiante redacta un informe con las siguientes partes:
- Caratula
- Introducción
- Marco teórico
- Materiales y métodos
- Resultados
- Conclusiones
- Cuestionario
- Bibliografía
Cuestionario
- ¿Qué aglutininas tienen los pacientes de grupo A1B Rh positivo?
- ¿Por qué debe trabajarse con antisueros anti-D en la rutina de tipificación de este
sistema?
- Los antígenos ABH se encuentran en secreciones, fundamente eso
5. RUBRICA DE EVALUACIÓN
1. INDICADOR DE LOGRO
- Analiza y comprende la utilidad de determinar el factor RH y su variante.
2. MATERIALES E INSTRUMENTOS
MATERIALES:
- Tubos de ensayo de 13 x 100 mm 10 x mesa
- Gradilla para tubos de ensayo 13 x 100 mm 1 x mesa
- Pipeta pasteur de plástico 4 x mesa
- Aguja para sistema al vacío 21G x 1 1 x mesa
- Holder o capuchón 1 x mesa
- Ligadura 1 x mesa
- Tubo al vacío c/anticoagulante EDTA 1 x mesa
- Papel Parafilm (cortado) c/s
- Algodón c/s
- Punta para micropipeta 10-100 ul 20 unidades
- Punta para micropipeta 100-1000 ul 20 unidades
REACTIVOS:
- Solución salina fisiológica 0.85% 1 litro
- Alcohol
- Suero anti-D
- Suero de Coombs – Anti Ig G C3d
EQUIPOS
- Centrifuga
- Baño maría
- Micropipeta de 10-100 ul
- Micropipeta de 100-1000 ul
3. PROCEDIMIENTO
Determinación del factor Rh. Método en tubo
- Preparar una suspensión de glóbulos rojos al 5%.
- Colocar en un tubo limpio 1 gota de suspensión de glóbulos rojos al 5% mas 2
gotas de anti-D.
- Colocar el tubo a 37°C en baño maría por 30 minutos.
- Centrifugar a 1 000 RPM x 1 minuto.
Resultado
- Examinar el líquido que se encuentra en el fondo del tubo de ensayo, colocando
el tubo en posición casi horizontal y observar la aglutinación.
Interpretación
RH positivo Se observa pequeñas aglutinaciones de hematíes en un liquido claro
RH negativo Los hematíes permanecen suspendidos y no se observan
aglutinaciones
Determinación de variante Du
1. Colocar una gota de antisuero anti-D en un tubo limpio y rotulado.
2. Añadir una gota de la suspensión al 5% en solución salina de hematíes problema.
3. Mezclar e incubar durante 30 minutos a 37°C.
4. Centrifugar a 1 000 RPM x 1 minuto.
5. Resuspender suavemente el sedimento de hematíes y examinar en busca de
aglutinación. Si se observa en este punto una aglutinación intensa, se concluye como
Rh positivo (D+). NO SERA NECESARIO CONTINUAR CON LA FASE COOMBS.
6. Si los hematíes problema no se hubieran aglutinado o muestren una aglutinación
dudosa, se procede a realizar tres lavados con solución salina.
7. Después del lavado final, descartar totalmente la solución salina y secar el borde del
tubo.
8. Añadir 1 gota de antiglobulina humana. Puede utilizarse un reactivo poliespecifico o
anti IgG.
9. Mezclar suavemente y centrifugar a 1 000 RPM por 1 minuto.
10. Resuspender suavemente y examinar en busca de aglutinación y anotar el resultado
de la prueba
Resultado
Interpretación
Rh positivo de la Variante Du Presencia de aglutinación.
Rh negativo Ausencia de aglutinación.
4. INFORME
El estudiante redacta un informe con las siguientes partes:
- Caratula
- Introducción
- Marco teórico
- Materiales y métodos
- Resultados
- Conclusiones
- Cuestionario
- Bibliografía
Cuestionario
- ¿Qué es antígeno Du fuerte?
- Diferencia entre Du hereditario y Du de interacción genética
- ¿Qué es el Rh nulo y la relación con el síndrome Rh nulo?
- ¿Qué es el antígeno LW?
- ¿Cuál es la importancia de los anticuerpos anti-Rh?
5. RUBRICA DE EVALUACIÓN
6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
- Manual Técnico de la AABB. Ed. AABB18° Edición 2018
- Linares J. Inmunohematología y transfusión, principios y procedimientos.
Caracas, Venezuela: Cromotip; 1986. 102-103
- Cortés A. y col. Inmunohematología básica y aplicada. Cali, Colombia:
GCIAMT; 2014. 103-133
- Norma técnica N° 11 a 14 – MINSA /DGSP – V.01. Manual de calidad Sistema
de Gestión de la Calidad PRONAHEBAS 2004
PRÁCTICA No. 4: DETERMINACION DE TEST DE COOMBS DIRECTO – PREPARACION DE
CELULAS CONTROL COOMBS
SEMANA 16
1. INDICADOR DE LOGRO
- Determina la sensibilización in vivo como in vitro de los hematíes en estudio
2. MATERIALES E INSTRUMENTOS
MATERIALES:
- Tubos de ensayo de 13 x 100 mm 10 x mesa
- Gradilla para tubos de ensayo 13 x 100 mm 1 x mesa
- Pipeta pasteur de plástico 4 x mesa
- Aguja para sistema al vacío 21G x 1 1 x mesa
- Holder o capuchón 1 x mesa
- Ligadura 1 x mesa
- Tubo al vacío c/anticoagulante EDTA 1 x mesa
- Papel Parafilm (cortado) c/s
- Algodón c/s
- Punta para micropipeta 10-100 ul 30 unidades
- Punta para micropipeta 100-1000 ul 30 unidades
REACTIVOS:
- Solución salina 0.85% 1 litro
- Alcohol
- Suero anti-D
- Suero de Coombs – Anti Ig G C3d
EQUIPOS
- Centrifuga
- Baño maría
- Micropipeta de 10-100 ul
- Micropipeta de 100-1000 ul
3. PROCEDIMIENTO
Técnica para la prueba de Coombs Directo
1. Preparar una suspensión de hematíes al 5% de la muestra a estudiar.
2. Dispensar 2 gotas de la suspensión en un tubo de ensayo.
3. Lavar 4 veces con solución salina fisiológica. En el último lavado decantar
completamente.
4. Agregar 2 gotas del reactivo de Coombs. Centrifugar 1 000 x 1 minuto.
5. Leer y anotar resultados
Resultado
Interpretación
TCD positivo Se observa aglutinación.
TCD negativo No se observa aglutinación.
5. RUBRICA DE EVALUACIÓN
6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
- Manual Técnico de la AABB. Ed. AABB18° Edición 2018
- Linares J. Inmunohematología y transfusión, principios y procedimientos.
Caracas, Venezuela: Cromotip; 1986. 102-103
- Cortés A. y col. Inmunohematología básica y aplicada. Cali, Colombia:
GCIAMT; 2014. 103-133
- Norma técnica N° 11 a 14 – MINSA /DGSP – V.01. Manual de calidad Sistema
de Gestión de la Calidad PRONAHEBAS 2004
PRÁCTICA No. 5: DETERMINACION DE TEST DE COOMBS INDIRECTO
SEMANA 17
1. INDICADOR DE LOGRO
- Determina y analiza la utilidad de realizar el test de Coombs indirecto
2. MATERIALES E INSTRUMENTOS
MATERIALES:
- Tubos de ensayo de 13 x 100 mm 10 x mesa
- Gradilla para tubos de ensayo 13 x 100 mm 1 x mesa
- Pipeta pasteur de plástico 4 x mesa
- Aguja para sistema al vacío 21G x 1 2 x mesa
- Holder o capuchón 1 x mesa
- Ligadura 1 x mesa
- Tubo al vacío c/anticoagulante EDTA (tapa lila) 1 x mesa
- Tubo al vacío s/anticoagulante (tapa rojo) 1 x mesa
- Papel Parafilm (cortado) c/s
- Algodón c/s
- Punta para micropipeta 10-100 ul 30 unidades
- Punta para micropipeta 100-1000 ul 30 unidades
REACTIVOS:
- Solución salina 0.85% 1 litro
- Alcohol
- Suero de Coombs – Anti Ig G C3d
- Albumina bovina al 22%
EQUIPOS
- Centrifuga
- Baño maría
- Micropipeta de 10-100 ul
- Micropipeta de 100-1000 ul
3. PROCEDIMIENTO
Técnica para la prueba de Coombs Indirecto
Fase I
1. Preparar una suspensión de hematíes “O” positivo al 5%.
2. Colocar 2 gotas de suero del paciente en estudio en un tubo de ensayo.
3. Dispensar una gota de la suspensión de glóbulos rojos en el tubo de ensayo con el
suero problema.
4. Centrifugar 1 000 RPM x 1 minuto.
5. Observar el sobrenadante para detectar hemolisis.
6. Desprender suavemente el botón de células del fondo del tubo para observar si hay
aglutinación. Anotar los resultados.
Fase II
7. Dispensar 2 gotas de albumina bovina al 22 %, mezclar y centrifugar por 1 minuto.
8. Incubar a 37°C por 30 minutos.
9. Centrifugar 1 000 RPM x 1 minuto.
10. Observar el sobrenadante para detectar hemolisis.
11. Desprender suavemente el botón de células del fondo del tubo y anotar los
resultados.
Fase III
12. Lavar 4 veces con solución salina. En el ultimo lavado decantar bien toda la solución
salina.
13. Agregar 2 gotas del reactivo antiglobulina humana poliespecifica, mezclar.
14. Centrifugar inmediatamente por 1 minuto.
15. Leer desprendiendo suavemente el botón de células. Anotar los resultados.
16. Agregar una gota de células control de coombs, si es que la prueba es negativa.
17. Centrifugar, leer y anotar los resultados.
Resultados
Interpretación
TCI positivo Se observa aglutinación.
TCI negativo No se observa aglutinación.
4. INFORME
El estudiante redacta un informe con las siguientes partes:
- Caratula
- Introducción
- Marco teórico
- Materiales y métodos
- Resultados
- Conclusiones
- Cuestionario
- Bibliografía
Cuestionario
- ¿Cuál es el fundamento del test de Coombs indirecto?
- Mencione tres causas de error que pueden causar resultados falsos
- Defina que es un anticuerpo incompleto
- ¿Qué finalidad tienen las células control coombs?
5. RUBRICA DE EVALUACIÓN
6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
- Manual Técnico de la AABB. Ed. AABB18° Edición 2018
- Linares J. Inmunohematología y transfusión, principios y procedimientos.
Caracas, Venezuela: Cromotip; 1986. 102-103
- Cortés A. y col. Inmunohematología básica y aplicada. Cali, Colombia:
GCIAMT; 2014. 103-133
- Norma técnica N° 11 a 14 – MINSA /DGSP – V.01. Manual de calidad Sistema
de Gestión de la Calidad PRONAHEBAS 2004
PRÁCTICA No. 6: PRUEBA DE COMPATIBILIDAD. PRUEBA CRUZADA MAYOR Y MENOR
SEMANA 18
1. INDICADOR DE LOGRO
- Compatibiliza donante y receptor e interpreta los resultados relacionándolo a las
anemias y otras entidades clínicas.
2. MATERIALES E INSTRUMENTOS
MATERIALES:
- Tubos de ensayo de 13 x 100 mm 10 x mesa
- Gradilla para tubos de ensayo 13 x 100 mm 1 x mesa
- Pipeta pasteur de plástico 4 x mesa
- Aguja para sistema al vacío 21G x 1 2 x mesa
- Holder o capuchón 1 x mesa
- Ligadura 1 x mesa
- Tubo al vacío c/anticoagulante EDTA (tapa lila) 1 x mesa
- Tubo al vacío s/anticoagulante (tapa rojo) 1 x mesa
- Papel Parafilm (cortado) c/s
- Algodón c/s
- Punta para micropipeta 10-100 ul 30 unidades
- Punta para micropipeta 100-1000 ul 30 unidades
REACTIVOS:
- Solución salina 0.85% 1 litro
- Alcohol
- Suero de Coombs – Anti Ig G C3d
- Albumina bovina al 22%
EQUIPOS
- Centrifuga
- Baño maría
- Micropipeta de 10-100 ul
- Micropipeta de 100-1000 ul
3. PROCEDIMIENTO
Técnica para la prueba de Coombs Indirecto
Fase I
1. Preparar una suspensión de hematíes del donante al 5% en solución salina, lavados
previamente.
2. En un tubo de ensayo colocar 2 gotas del suero del receptor.
3. Dispensar 1 gota de la suspensión de los hematíes del donante y centrifugar.
4. Observar el sobrenadante para detectar hemolisis. Desprender suavemente el botón
de células del fondo del tubo para observar si hay aglutinación. Anotar los resultados.
Fase II
5. Dispensar 2 gotas de albumina bovina al 22%, mezclar y centrifugar por 1 minuto,
leer.
6. Incubar a 37°C por 15 – 30 minutos, luego centrifugar.
7. Observar el sobrenadante para evidenciar hemolisis. Desprender suavemente el
botón de células del fondo del tubo y anotar resultados.
Fase III
8. Lavar 4 veces con solución salina. En el ultimo lavado, decantar bien toda la solución
salina.
9. Agregar 2 gotas del reactivo antiglobulina humana poliespecifico, mezclar.
10. Centrifugar x 1 minuto. Leer desprendiendo suavemente el botón de células. Anotar
los resultados.
Resultados
Interpretación
Prueba cruzada compatible No se observa aglutinación.
Prueba cruzada incompatible Se observa aglutinación.
4. INFORME
El estudiante redacta un informe con las siguientes partes:
- Caratula
- Introducción
- Marco teórico
- Materiales y métodos
- Resultados
- Conclusiones
- Cuestionario
- Bibliografía
Cuestionario
- En que se diferencia la prueba cruzada de la técnica de la variante Du
- ¿Cuál es el fundamento de la prueba cruzada menor?
- Si no cuento con albumina bovina, puedo reemplazarlo con otro u otros
reactivos ¿habrá diferencias?
5. RUBRICA DE EVALUACIÓN
6. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
- Manual Técnico de la AABB. Ed. AABB18° Edición 2018
- Linares J. Inmunohematología y transfusión, principios y procedimientos.
Caracas, Venezuela: Cromotip; 1986. 102-103
- Cortés A. y col. Inmunohematología básica y aplicada. Cali, Colombia:
GCIAMT; 2014. 103-133
- Norma técnica N° 11 a 14 – MINSA /DGSP – V.01. Manual de calidad Sistema
de Gestión de la Calidad PRONAHEBAS 2004