Bioanálisis clínico

EXAMEN QUIMICO DE ORINA

INVESTIGACION DE CUERPOS CETONICOS:

DETERMINACIÓN DE ACETONA:

Método : Imbert.

Fundamento : Es una modificación de l reacción de legal. Se basa en el reconocimiento de la acetona

por medio del nitroprusiato.

Muestra : Orina de la mañana o de 24 horas.

Reactivos :

 Reactivo de Imbert.
 Amoníaco concentrado.

Técnica :

1.- Se coloca 1 mL de orina en un tuvo de ensayo.

2.- Agregar 2 a 4 gotas del reactivo de Imbert y mezclar.

3.- Dejar correr por las paredes del tubo inclinado amoniaco, de forma de tener dos capas.

4.- De ser positiva la reacción aparece un anillo de color violeta.

Fuentes de error:

1.- Algunos medicamentos pueden dar una reacción positiva, como por ej: los salicilatos, las
aspirinas y el piramidón.

2.- Eliminación de fuentes de error:

a) Se coloca 1 mL. de orina en un tubo de ensayo y se evapora por calentamiento hasta la

mitad del volumen.

b) Se enfría y se restituye el volumen original con agua destilada.

c) Se aplica la reacción de Imbert. De persistir la reacción se trata de un falso positivo por

medicamentos.

DETERMINACIÓN DE ACIDO B-HIDROXIBUTIRICO:

Método : Hart.

Fundamento : Se basa en la previa eliminación de la cetona y el ácido diacético. El ácido B-

hidroxibutírico se oxida con el agua oxigenada, transformándose en acetona, la cual es
reconocida por el nitroprusiato del reactivo de Imbert dando un anillo de color violeta en
la interfase de las dos capas.

Muestra : Orina de la mañana o de 24 horas.

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Reactivos :

 Reactivo de Imbert.
 Ac. acético.
 Agua oxigenada.

Técnica :

1.- Se diluye 1 mL de orina con 1 mL de agua destilada.

2.- Se adiciona unas gotas de ácido acético.

3.- Se evapora por ebullición hasta la mitad del volumen con llama baja, cuidando de que no
salpique.

4.- Se enfría y se completa el volumen con agua destilada.

5.- Agregar algunas gotas de agua oxigenada. Se calienta un poco y se enfría.

6.- Se le aplica la reacción de Imbert. De ser positiva la reacción aparece un anillo de color violeta
en la interfase.

DETERMINACIÓN DE ACIDO DIACETICO:

Método : Gerhard.

Fundamento : Se basa en que el ácido diacético reacciona con el cloruro férrico dando un color
burdeo.

Muestra : Orina de la mañana o de 24 horas.

Reactivos :

 Ácido acético.
 Cloruro férrico al 10 %o.

Técnica :

1.- En un tubo de ensayo se colocan 2 mL. de orina.

2- De no estar ácida la orina, se le adicionan gotas de ácido acético.

3.- Adicionar gotas de cloruro férrico hasta precipitar los fosfatos.

4.- Filtrar y agregar gotas de cloruro férrico. De ser positiva la reacción aparece un color cereza o
rojo vinoso.

Fuentes de error:

1.- Tratar de no agregar en exceso cloruro lo que se manifiesta por el color. De ser así agregar
orina hasta desaparecer el color.

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2.- Presencia de medicamentos.

3.- Eliminación de fuentes de error:

a) A 1 mL. de orina acidificada se le agrega igual cantidad de agua destilada.

b) Se evapora por ebullición hasta la mitad del volumen, enfriar y completar el volumen con
agua destilada.

c) Precipitar los fosfatos igual que antes y filtrar.

d) Al filtrado agregar gotas de cloruro férrico. De persistir la reacción se trata de un falso positivo
por medicamentos.

DETERMINACION DE PIGMENTOS BILIARES:

Método : Lugol.

Fundamento : Se basa en que el yodo del Lugol oxida a la bilirrubina, transformándola en biliverdina
de color azul verdoso.

Muestra : Orina de la mañana o de 24 horas.

Reactivos : Reactivo de Lugol.

Técnica :

1.- En un tubo de ensayo se coloca 1 mL de orina.

2.- Se le agrega 1 gota de reactivo de Lugol.

3.- De ser positiva la reacción aparece un anillo de color verdoso en la zona de separación de las
dos capas.

Método : Fouchet.

Fundamento : Se basa en que el cloruro de bario produce un precipitado de sulfato de bario que
absorbe a la bilirrubina, la que se oxida por acción del cloruro férrico a biliverdina de
color azul verdoso.

Muestra : Orina de la mañana o de 24 horas.

Reactivos :

 Reactivo de Fouchet.
 Cloruro de bario 10%.

Técnica :

1.- A 2 mL. de orina filtrada se le agrega 1 mL. de cloruro de bario.

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2.- Filtrar y lavar el papel filtro con 2 mL. de cloruro de bario.

3.- Extender el papel filtro y dejar caer gotas del reactivo de Fouchet. De ser positiva la reacción
aparece un color azul o verde azulado.

DETERMINACION DE SALES BILIARES:

Método : Hay.

Fundamento : Se basa en la propiedad que tienen los ácidos biliares de disminuir la tensión
superficial de los líquidos que los contienen.

Muestra : Orina de la mañana o de 24 horas.

Reactivos : Azufre pulverizado.

Técnica :

1.- Se filtran unos 2 mL. de orina y se enfría se es que la temperatura es mayor de 30°C.

2.- Sobre la orina se espolvorea una pequeña cantidad de azufre pulverizado.

3.- Si el azufre cae con rapidez al fondo indica la presencia de sales biliares.

Nota: Esta prueba no es específica ni de alta sensibilidad.

DETERMINACIÓN DE UROBILINA:

Método : Schlesinger.

Fundamento : Se basa en que el yodo del reactivo de lugol oxida al urobilinógeno a urobilina, que a su
vez reacciona con la solución saturada alcohólica de acetato de zinc formando un
complejo de fluorescencia verdosa.

Muestra : Orina de la mañana o de 24 horas.

Reactivos :

 Solución de Lugol.
 Solución alcohólica saturada de acetato de zinc.

Técnica :

1.- En un tubo de ensayo colocar 1 mL de orina y agregar 1 gota de Lugol.

2.- Agregar 1 mL. de solución saturada alcohólica de acetato de zinc, agitar enérgicamente.

3.- Se filtra y se examina a la luz solar o con una linterna sobre un fondo negro.

Precauciones :

1.- Si existen pigmentos biliares se extraen por medio del a precipitación con una cantidad igual a
la quinta parte (de orina) de la solución de cloruro de calcio al 10 %. Fíltrese y ensáyese por el
método antes descrito.

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DETERMINACIÓN DE INDICAN:

Fundamento : Se basa en que el ácido clorhídrico descompone al indol en indoxilo y lo oxida azul de
índigo por medio del agua oxigenada, luego el cloroformo extrae el azul de índigo de la
orina.

Muestra : Orina de la mañana o de 24 horas.

Reactivos :

 Ácido clorhídrico p.a.

 Cloroformo p.a.
 Agua oxigenada.

Técnica :

1.- Agregar a 1mL. de orina igual cantidad de HCl.

2.- Agregar 0,5 mL. de cloroformo y gotas de agua oxigenada. Agitar fuertemente y dejar reposar.

3.- De ser positiva la reacción aparece un color azul, por lo común azul-celeste.

Precauciones:

1.- Si existen pigmentos biliares, los que pueden interferir con la reacción, se deben precipitar a los
pigmentos con una pequeña cantidad de acetato de plomo o tratar la muestra con 1/5 de su
volumen de solución de cloruro de calcio al 10 %.

DETERMINACION DE CLORUROS:

Método : Mohr.

Fundamento : Se basa en que los cloruros precipitan en solución neutra o algo alcalino con solución
de nitrato de plata y usando como indicador cromato de potasio. Cuando todos los
cloruros precipitan como cloruro de plata, un exceso de solución de nitrato de plata origina
un precipitado de color salmón de cromato de plata que indica el final de la reacción.

Muestra : Orina de la mañana o de 24 horas.

Reactivos :

 Solución empírica de nitrato de plata.

 Cromato de potasio al 5 %.
 Carbonato de calcio sin cloruros.
 Solución de NaCl 10 o/oo.

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Técnica :

1.- Colocar en un tubo de ensayo 1 mL. de solución de cloruro de sodio al 10 o/oo.

2.- Agregar 2 gotas de cromato de potasio.

3.- Titular con solución de nitrato de plata. Con esta titulación se verifica que la solución de nitrato de
plata sea realmente una solución empírica.

Si sol. AgNO3 gastada = 1 mL ========= 0,01 gr. de Cl-

Titulación de la muestra:

1.- Se coloca en un tubo de ensayo 1 mL. de orina.

2.- Si la orina está muy ácida de debe agregar unos cuantos centigramos de carbonato de calcio.

3.- Se le adicionan 2 gotas de solución de cromato de potasio y se valora con la solución de nitrato
de plata, agregando gota a gota hasta la aparición de una coloración salmón.

Calculo :
1mL AgNO3 ------------------------------------0,01 gr. Cl-
mL AgNO3 gastada en la titulación ------ x gr. Cl-

X gr. Cl- --------------------- 1 mL orina

X gr. Cl- ---------------------1.000 mL orina

X' = gr. Cl o/oo

Valores normales :

7 – 10 gr. o/oo

Precauciones:

1.- Se recomienda usar pipeta de 2 mL graduada.

2.- Cabe hacer notar que el color de variación es un salmón bastante pálido.

3.- Se debe tener cuidado con el nitrato de plata ya que su condición de tinción la hace bastante
difícil de eliminar de los mesones o de la piel.