CUADERNO DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA

AUTORAS: M PAZ MERINO JIMENEZ MIREIA LLINARES MARCELO

Autoras: M Paz Merino jimenez, Mireia Llinares Marcelo Maquetacin: Patricia Penavella Soto Edita: Educlia Editorial, S.L. Imprime: Publidisa SA ISBN: En curso Depsit Legal: En curso Printed in Spain/Impreso en Espaa. Todos los derechos reservados. No est permitida la reimpresin de ninguna parte de este libro, ni de imgenes ni de texto, ni tampoco su reproduccin, ni utilizacin, en cualquier forma o por cualquier medio, bien sea electrnico, mecnico o de otro modo, tanto conocida como los que puedan inventarse, incluyendo el fotocopiado o grabacin, ni est permitido almacenarlo en un sistema de informacin y recuperacin, sin el permiso anticipado y por escrito del editor. Alguna de las imgenes que incluye este libro son reproducciones que se han realizado acogindose al derecho de cita que aparece en el artculo 32 de la Ley 22/18987, del 11 de noviembre, de la Propiedad intelectual. Educlia Editorial agradece a todas las instituciones, tanto pblicas como privadas, citadas en estas pginas, su colaboracin y pide disculpas por la posible omisin involuntaria de algunas de ellas.

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PREFACIO

El Cuaderno de Prcticas de Microbiologa es un trabajo fundamental en el desarrollo de la asignatura de FUNDAMENTOS Y TECNICAS DE ANALISIS

MICROBIOLOGICOS. Dicha asignatura lleva una carga terica que paralelamente tiene que ir desarrollada con prcticas que se realizan en el laboratorio. Por ello debe existir una consecucin en la ejecucin de las prcticas al mismo tiempo que se vaya impartiendo la teora. Con este cuaderno el desarrollo de las prcticas seguira un orden, fundamental para cumplir los protocolos de actuacin en el laboratorio de Microbiologa. El alumno siguiendo los pasos de dicho cuaderno ir desarrollando la prctica con correccin hasta la obtencin de los resultados finales que es lo que se pretende.

INDICE CUADERNO DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA

1. MANEJO DEL MICROSCOPIO 2. RECONOCIMIENTO DE MATERIAL 3. DISTRIBUCION DE MICROORGANISMOS EN LA NATURALEZA. 4. ESTERILIZACIN POR CALOR SECO. 5. ESTERILIZACIN POR CALOR HMEDO. 6. ACTIVIDADES DE ESTERILIZACIN Y DESINFECCIN. 7. PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO 8. CNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO 9. URINOCULTIVO 10. PLEGADO DE UN FILTRO 11. INDICA LA MORFOLOGIA, DISPOSICION Y MOVILIDAD DE LAS BACTERIAS VIVAS QUE CONTIENE LA MUESTRA. 12. PREPARACIN DE COLORANTES Y REACTIVOS PARA LA TINCION SIMPLE Y TINCION NEGATIVA. 13. PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES TINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE AAR 14. PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES TINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE AAR 15. PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES TINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE ESPORAS 16. PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES TINCIONES DIFERENCIALES:TINCION DE CAPSULAS PARA

PARA

PARA

PARA

17. REALIZACION DE UNA TINCION SIMPLE. 18. REALIZACION DE UNA TINCION NEGATIVA. 19. REALIZACION DE UNA TINCION DE GRAM 20. REALIZACION DE UNA TINCION DE ZIEHLNEELSEN O ACIDO ALCOHOL RESISTENTE. 21. REALIZACION DE UNA TINCION DE ESPORAS 22. REALIZACION DE TINCION DE CAPSULAS. METODO DE BURRI O DE LA TINTA CHINA. 23. PRUEBAS BIOQUMICAS. 24. ANTIBIOGRAMA. 25. HACER UNA SIEMBRA EN CONDICIONES ANAEROBIAS 26. TECNICA DE PORTAOBJETOS SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DEL

27. TECNICA DE SIEMBRA CUADRADITO DE AGAR

DE

HONGOS:TCNICA

DEL

28. TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DEL HOYO EN PLACA 29. TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DEL CUBRE ESCAVADO EN PLACA 30. TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DE LA GOTA PENDIENTE 31. TECNICA DE VISUALIZACION DE HONGOS: VISUALIZACIN DIRECTA CON LA TCNICA DE LA CINTA ADHESIVA.

PRCTICA 26. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL PORTAOBJETOS.

VISIN MACROSCPICA
MATERIAL Alcohol Mechero Bunsen Portaobjetos Placa Petri Papel filtro Agua destilada Medio de cultivo Sabouraud Pipeta Pasteur estril Asa de siembra Muestra de hongos Estufa Pasteur

TCNICA 1. Preparar 100 ml de medio de cultivo Sabouraud (Prctica 7.6). 2. Limpiar el portaobjetos con alcohol, secar y flamear. 3. Cubrir el portaobjetos con una fina capa de medio de cultivo (todava en estado lquido) con la ayuda de una pipeta Pasteur estril. 4. Dejar secar el medio. 5. Recortar un crculo de papel de filtro de la misma medida que la placa de Petri. 6. Colocarlo en el fondo de la placa y humedecerlo con un poco de agua destilada para mantener el ambiente hmedo para el crecimiento del hongo. 7. Con el asa de siembra esterilizada y humedecida con agua estril tomar un poco de muestra. 8. Colocar la muestra en el centro del portaobjetos realizando un pequeo movimiento circular con el asa. 9. Colocar el portaobjetos en la placa de Petri. 10. Incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES

Preparar 100 ml de Sabouraud

Limpiar portaobjetos

Cubrir con medio Sabouraud

Dejar secar

Cortar crculo de papel de filtro

Humedecer

Tomar muestra

Sembrar en el centro del porta

INDICAR EL RESULTADO MACROSCPICO OBTENIDO

VISIN MICROSCPICA
MATERIAL Cubreobjetos Pipeta Pasteur Colorante azul de lactofenol Muestra ya incubada (tcnica del portaobjetos) Pinzas Mechero Bunsen Microscopio

TCNICA 1. En el portaobjetos donde habamos realizado la tcnica, echamos una gota de azul de lactofenol. 2. Poner un cubreobjetos encima. 3. Observar al microscopio a 40x. PROCEDIMIENTO EN IMGENES

Gota azul en porta

Cubre sobre la muestra

Observar al microscopio

INDICAR EL RESULTADO MICROSCPICO OBTENIDO

PRCTICA 27. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL CUADRADITO DE AGAR.

VISIN MACROSCPICA
MATERIAL Alcohol Mechero Bunsen Placa Petri con medio agar Sabouraud Bistur Pinzas Asa de siembra Muestra con hongos Portaobjetos Cubreobjetos Placa Petri vaca Papel filtro Agua destilada 2 capilares de microhematocrito Estufa Regla Tijeras

TCNICA 1. Dibujar en un papel un cuadradito de 15x15 cm. Colocar sobre el papel la placa con agar Sabouraud y cortar un cuadrado siguiendo las lneas dibujadas anteriormente con la ayuda de un bistur. 2. Con unas pinzas estriles coger el cuadradito de agar y ponerlo en el centro de un portaobjetos. El portaobjetos deber haberse limpiado anteriormente con alcohol y flameado. 3. Coger con el asa de siembra, esterilizada y humedecida, un poco de muestra. 4. Sembrar tocando con el asa en los cuatro laterales del cuadrado. 5. Colocar un cubreobjetos limpio sobre el agar. 6. Colocar el portaobjetos en una placa con papel de filtro humedecido y dos capilares. 7. Incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES

Cortar cuadrado de agar

Colocar en portaobjetos

Coger muestra

Sembrar en los laterales

Colocar cubreobjetos

Colocar en la cmara hmeda

INDICAR EL RESULTADO MACROSCPICO OBTENIDO

VISIN MICROSCPICA
MATERIAL Portaobjetos Cubreobjetos Pipeta Pasteur Colorante azul de lactofenol Muestra ya incubada (tcnica del cuadradito de agar) Pinzas Mechero Bunsen Microscopio

TCNICA A 1. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos. 2. Con unas pinzas esterilizadas cogemos el cubreobjetos que habamos puesto sobre el cuadradito de agar. 3. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta. 4. Poner el cubre sobre la gota de azul. 5. Observar al microscopio a 40x. PROCEDIMIENTO EN IMGENES 1 2

Limpiar portaobjetos

Coger el cubre

Poner gota de azul

Poner cubre sobre la gota de azul

TCNICA B 1. Coger un cubreobjetos, limpiar con alcohol y flamear. 2. Con las pinzas esterilizadas retiramos el cuadradito de agar que quedar sobre el portaobjetos. 3. En el portaobjetos ponemos una gota de azul de lactofenol. 4. Poner el cubreobjetos limpio sobre la gota de azul. 5. Observar al microscopio a 40x.

INDICAR EL RESULTADO MICROSCPICO OBTENIDO

PRCTICA 28. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL HOYO EN PLACA.

VISIN MACROSCPICA
MATERIAL Alcohol Mechero Bunsen Placa de Petri (la que hemos usado en la prctica 27) Cubreobjetos Asa de siembra Muestra con hongos Pinzas

TCNICA 1. Con un asa de platino esterilizada cogemos un poco de muestra. 2. Cogemos la placa que hemos usado en la prctica anterior, y sembramos en las paredes del hoyo que ha quedado tras sacar el cuadradito de agar. 3. Con una pinza estril colocar sobre el hoyo sembrado un cubreobjetos (previamente lavado con alcohol y flameado). 4. Cerrar la placa e incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES 1 2

Coger un poco de muestra

Sembrar paredes del hoyo

Colocar cubreobjetos

INDICAR EL RESULTADO MACROSCPICO OBTENIDO

VISIN MICROSCPICA
MATERIAL Portaobjetos Pipeta Pasteur Colorante azul de lactofenol Muestra ya incubada (tcnica del hoyo en placa) Pinzas Mechero Bunsen Microscopio

TCNICA 1. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos. 2. Con unas pinzas esterilizadas cogemos el cubreobjetos que habamos puesto sobre el hoyo. 3. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta. 4. Poner el cubre sobre la gota de azul. 5. Observar al microscopio a 40x.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES 1 2

Limpiar portaobjetos

Coger el cubre

Poner gota de azul

Poner cubre sobre la gota de azul

INDICA RESULTADO MICROSCPICO OBTENIDO

PRCTICA 29. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL CUBRE ESCAVADO EN PLACA.
VISIN MACROSCPICA
MATERIAL Alcohol Mechero Bunsen Placa de Petri con medio de cultivo Sabouraud. Cubreobjetos Asa de siembra Muestra con hongos Pinzas

TCNICA 1. Con unas pinzas estriles, colocar 3 4 cubreobjetos limpios en un ngulo de 45 o en la placa con medio Sabouraud. 2. Coger un poco de muestra con un asa de siembra estril. 3. Sembrar donde se juntan el cubreobjetos con la superficie del medio. 4. Cerrar la placa e incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo

PROCEDIMIENTO EN IMGENES 1 2

Cubreobjetos en ngulo de 45 o

Coger muestra

Sembrar

Cerrar e incubar

INDICAR EL RESULTADO MACROSCPICO OBTENIDO

VISIN MICROSCPICA
MATERIAL Portaobjetos Pipeta Pasteur Colorante azul de lactofenol Muestra ya incubada (tcnica del cubre inclinado en placa) Pinzas Mechero Bunsen Microscopio

TCNICA 1. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos. 2. Con unas pinzas esterilizadas cogemos uno de los cubreobjetos que habamos puesto en la placa. 3. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta. 4. Poner el cubre sobre la gota de azul. 5. Observar al microscopio a 40x.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES 1 2

Limpiar portaobjetos

Coger el cubre

Poner gota de azul

Poner cubre sobre la gota de azul

INDICAR EL RESULTADO MICROSCPICO OBTENIDO

PRCTICA 31. TCNICA DE VISUALIZACIN DE HONGOS. VISUALIZACIN DIRECTA CON LA TCNICA DE LA CINTA ADHESIVA.
MATERIAL Alcohol Mechero Bunsen Pipeta Pasteur estril Cinta adhesiva transparente Portaobjetos Azul de lactofenol Muestra con hongos Microscopio

TCNICA 1. Limpiar un portaobjetos con alcohol, secar y flamear. 2. Cortar un trozo de cinta adhesiva y pegarlo a la parte de la muestra donde se encuentran los hongos. 3. Poner una gota de azul de lactofenol en el portaobjetos. 4. Colocar la cinta adhesiva sobre la gota de azul de lactofenol. 5. Observar al microscopio a 40x.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES 1 2

Limpiar portaobjetos

Tomar muestra

Gota de azul en porta

Colocar cinta sobre la gota

INDICAR EL RESULTADO MICROSCOPICO OBTENIDO