PRCTICAS DEL LABORATORIO

DE MICROBIOLOGA:
BACTERIOLOGA Y MICOLOGA
M PAZ MERINO
JIMNEZ MIREIA
LLINARES
MARCELO
Autoras: M Paz Merino jimenez, Mireia Llinares Marcelo

Maquetacin: Patricia Penavella Soto

Edita: Educlia Editorial, S.L.

Imprime: Publidisa SA

ISBN: En curso

Depsit Legal: En curso

Printed in Spain/Impreso en Espaa.

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PREFACIO

El Cuaderno de Prcticas de Microbiologa es un trabajo

fundamental en el desarrollo de la asignatura de
FUNDAMENTOS Y TECNICAS DE ANALISIS
MICROBIOLOGICOS. Dicha asignatura lleva una carga
terica que paralelamente tiene que ir desarrollada con
prcticas que se realizan en el laboratorio. Por ello debe
existir una consecucin en la ejecucin de las prcticas al
mismo tiempo que se vaya impartiendo la teora.

Con este cuaderno el desarrollo de las prcticas seguira

un orden, fundamental para cumplir los protocolos de
actuacin en el laboratorio de Microbiologa. El alumno
siguiendo los pasos de dicho cuaderno ir desarrollando la
prctica con correccin hasta la obtencin de los resultados
finales que es lo que se pretende.
INDICE CUADERNO DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA

MANEJO DEL MICROSCOPIO

RECONOCIMIENTO DE MATERIAL

DISTRIBUCION DE MICROORGANISMOS EN LA NATURALEZA.

ESTERILIZACIN POR CALOR SECO.

ESTERILIZACIN POR CALOR HMEDO.

ACTIVIDADES DE ESTERILIZACIN Y DESINFECCIN.

PREPARACIN DE MEDIOS DE CULTIVO

CNICAS DE SIEMBRA Y AISLAMIENTO

URINOCULTIVO

PLEGADO DE UN FILTRO

INDICA LA MORFOLOGIA, DISPOSICION Y MOVILIDAD DE LAS

BACTERIAS VIVAS QUE CONTIENE LA MUESTRA.

PREPARACIN DE COLORANTES Y REACTIVOS PARA LA TINCION

SIMPLE Y TINCION NEGATIVA.

PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARA TINCIONES

DIFERENCIALES:TINCION DE AAR

PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARA TINCIONES

DIFERENCIALES:TINCION DE AAR

PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARA TINCIONES

DIFERENCIALES:TINCION DE ESPORAS

PREPARACIN DE REACTIVOS Y COLORANTES PARA TINCIONES

DIFERENCIALES:TINCION DE CAPSULAS
REALIZACION DE UNA TINCION SIMPLE.

REALIZACION DE UNA TINCION NEGATIVA.

REALIZACION DE UNA TINCION DE GRAM

REALIZACION DE UNA TINCION DE ZIEHLNEELSEN O ACIDO

ALCOHOL RESISTENTE.

REALIZACION DE UNA TINCION DE ESPORAS

REALIZACION DE TINCION DE CAPSULAS. METODO DE BURRI O

DE LA TINTA CHINA.

PRUEBAS BIOQUMICAS.

ANTIBIOGRAMA.

HACER UNA SIEMBRA EN CONDICIONES ANAEROBIAS

TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DEL PORTAOBJETOS

TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DEL CUADRADITO

DE AGAR

TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DEL HOYO EN PLACA

TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DEL CUBRE

ESCAVADO EN PLACA

TECNICA DE SIEMBRA DE HONGOS:TCNICA DE LA GOTA

PENDIENTE

TECNICA DE VISUALIZACION DE HONGOS: VISUALIZACIN

DIRECTA CON LA TCNICA DE LA CINTA ADHESIVA.
PRCTICA 26. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL

PORTAOBJETOS.
VISIN MACROSCPICA

MATERIAL

Alcohol

Mechero Bunsen

Portaobjetos

Placa Petri

Papel filtro

Agua destilada

Medio de cultivo Sabouraud

Pipeta Pasteur estril

Asa de siembra

Muestra de hongos

Estufa Pasteur

TCNICA

1. Preparar 100 ml de medio de cultivo Sabouraud (Prctica 7.6).

2. Limpiar el portaobjetos con alcohol, secar y flamear.

3. Cubrir el portaobjetos con una fina capa de medio de cultivo (todava en estado lquido) con
la ayuda de una pipeta Pasteur estril.

4. Dejar secar el medio.

5. Recortar un crculo de papel de filtro de la misma medida que la placa de Petri.

6. Colocarlo en el fondo de la placa y humedecerlo con un poco de agua destilada para

mantener el ambiente hmedo para el crecimiento del hongo.

7. Con el asa de siembra esterilizada y humedecida con agua estril tomar un poco de
muestra.

8. Colocar la muestra en el centro del portaobjetos realizando un pequeo movimiento

circular con el asa.

9. Colocar el portaobjetos en la placa de Petri.

10. Incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES

1
7

Preparar 100 ml de Sabouraud

Tomar muestra

3
2

Cubrir con medio Sabouraud

Limpiar portaobjetos

Cortar crculo de papel de filtro

Dejar secar

8
6

Sembrar en el centro del porta

Humedecer
INDICAR EL RESULTADO MACROSCPICO OBTENIDO
VISIN MICROSCPICA

MATERIAL

Cubreobjetos

Pipeta Pasteur

Colorante azul de lactofenol

Muestra ya incubada (tcnica del portaobjetos)

Pinzas

Mechero Bunsen

Microscopio

TCNICA

1. En el portaobjetos donde habamos realizado la tcnica, echamos una gota de azul de

lactofenol.

2. Poner un cubreobjetos encima.

3. Observar al microscopio a 40x.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES

Gota azul en porta

Cubre sobre la muestra

3

Observar al microscopio
INDICAR EL RESULTADO MICROSCPICO OBTENIDO
PRCTICA 27. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL

CUADRADITO DE AGAR.
VISIN MACROSCPICA

MATERIAL

Alcohol

Mechero Bunsen

Placa Petri con medio agar Sabouraud

Bistur

Pinzas

Asa de siembra

Muestra con hongos

Portaobjetos

Cubreobjetos

Placa Petri vaca

Papel filtro

Agua destilada

2 capilares de microhematocrito

Estufa

Regla

Tijeras

TCNICA

1. Dibujar en un papel un cuadradito de 15x15 cm. Colocar sobre Sabouraud y cortar un cuadrado siguiendo las
lneas dibujadas anteriormente con la ayuda de

un bistur.

2. Con unas pinzas estriles coger el cuadradito de agar y ponerlo en el centro de un portaobjetos. El
portaobjetos deber haberse limpiado anteriormente con alcohol y flameado.
3. Coger con el asa de siembra, esterilizada y humedecida, un poco de muestra.

4. Sembrar tocando con el asa en los cuatro laterales del cuadrado.

5. Colocar un cubreobjetos limpio sobre el agar.

6. Colocar el portaobjetos en una placa con papel de filtro humedecido y dos capilares.

7. Incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES

2
1

Cortar cuadrado de agar Colocar en portaobjetos

3 4

Coger muestra Sembrar en los laterales

Colocar en la cmara hmeda

Colocar cubreobjetos
5

6
INDICAR EL RESULTADO MACROSCPICO OBTENIDO
VISIN MICROSCPICA

MATERIAL

Portaobjetos

Cubreobjetos

Pipeta Pasteur

Colorante azul de lactofenol

Muestra ya incubada (tcnica del cuadradito de agar)

Pinzas

Mechero Bunsen

Microscopio

TCNICA A

1. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos.

2. Con unas pinzas esterilizadas cogemos el cubreobjetos que habamos puesto sobre el
cuadradito de agar.

3. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta.

4. Poner el cubre sobre la gota de azul.

5. Observar al microscopio a 40x.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES

Limpiar portaobjetos
Coger el cubre

Poner cubre sobre la gota de azul

Poner gota de azul

TCNICA B

1. Coger un cubreobjetos, limpiar con alcohol y flamear.

2. Con las pinzas esterilizadas retiramos el cuadradito de agar que quedar sobre el
portaobjetos.

3. En el portaobjetos ponemos una gota de azul de lactofenol. 4. Poner el cubreobjetos

limpio sobre la gota de azul.

5. Observar al microscopio a 40x.

INDICAR EL RESULTADO MICROSCPICO OBTENIDO

PRCTICA 28. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL

HOYO EN PLACA.
VISIN MACROSCPICA

MATERIAL

Alcohol

Mechero Bunsen

Placa de Petri (la que hemos usado en la prctica 27)

Cubreobjetos

Asa de siembra

Muestra con hongos

Pinzas

TCNICA

1. Con un asa de platino esterilizada cogemos un poco de muestra.

2. Cogemos la placa que hemos usado en la prctica anterior, y sembramos en las paredes del
hoyo que ha quedado tras sacar el cuadradito de agar.

3. Con una pinza estril colocar sobre el hoyo sembrado un cubreobjetos (previamente lavado
con alcohol y flameado).

4. Cerrar la placa e incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo.
PROCEDIMIENTO EN IMGENES

Sembrar paredes del hoyo

Coger un poco de muestra

Colocar cubreobjetos

INDICAR EL RESULTADO MACROSCPICO OBTENIDO

VISIN MICROSCPICA

MATERIAL

Portaobjetos

Pipeta Pasteur

Colorante azul de lactofenol

Muestra ya incubada (tcnica del hoyo en placa)

Pinzas

Mechero Bunsen

Microscopio

TCNICA

1. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos.

2. Con unas pinzas esterilizadas cogemos el cubreobjetos que habamos puesto sobre el hoyo.

3. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta.

4. Poner el cubre sobre la gota de azul.

5. Observar al microscopio a 40x.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES

Poner gota de azul

Limpiar portaobjetos

3
Coger el cubre

Poner cubre sobre la gota de azul

INDICA RESULTADO
MICROSCPICO OBTENIDO
PRCTICA 29. TCNICA DE SIEMBRA DE HONGOS. TCNICA DEL

CUBRE ESCAVADO EN PLACA.

VISIN MACROSCPICA

MATERIAL

Alcohol

Mechero Bunsen

Placa de Petri con medio de cultivo Sabouraud.

Cubreobjetos

Asa de siembra

Muestra con hongos

Pinzas

TCNICA

1. Con unas pinzas estriles, colocar 3 4 cubreobjetos limpios en un ngulo de 45 o en la

placa con medio Sabouraud.

2. Coger un poco de muestra con un asa de siembra estril.

3. Sembrar donde se juntan el cubreobjetos con la superficie del medio.

4. Cerrar la placa e incubar a 25oC el tiempo necesario para el crecimiento del hongo
PROCEDIMIENTO EN IMGENES 3

Sembrar

Cubreobjetos en ngulo de 45 o
2
 4

Coger muestra

Cerrar e incubar

INDICAR EL RESULTADO
MACROSCPICO OBTENIDO
VISIN MICROSCPICA

MATERIAL

Portaobjetos

Pipeta Pasteur

Colorante azul de lactofenol

Muestra ya incubada (tcnica del cubre inclinado en placa)

Pinzas

Mechero Bunsen

Microscopio

TCNICA

1. Cogemos un portaobjetos, lo limpiamos con alcohol y lo flameamos.

2. Con unas pinzas esterilizadas cogemos uno de los cubreobjetos que habamos puesto en la
placa.

3. Ponemos una gota de azul de lactofenol en el porta.

4. Poner el cubre sobre la gota de azul.

5. Observar al microscopio a 40x.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES
3

Poner gota de azul

Limpiar portaobjetos

2
 4

Coger el cubre

Poner cubre sobre la gota de azul

INDICAR EL RESULTADO
MICROSCPICO OBTENIDO
PRCTICA 31. TCNICA DE VISUALIZACIN DE HONGOS.
VISUALIZACIN DIRECTA CON LA TCNICA DE LA CINTA
ADHESIVA.

MATERIAL

Alcohol

Mechero Bunsen

Pipeta Pasteur estril

Cinta adhesiva transparente

Portaobjetos

Azul de lactofenol

Muestra con hongos

Microscopio

TCNICA

1. Limpiar un portaobjetos con alcohol, secar y flamear.

2. Cortar un trozo de cinta adhesiva y pegarlo a la parte de la muestra donde se encuentran

los hongos.

3. Poner una gota de azul de lactofenol en el portaobjetos.

4. Colocar la cinta adhesiva sobre la gota de azul de lactofenol.

5. Observar al microscopio a 40x.

PROCEDIMIENTO EN IMGENES

Tomar muestra

Limpiar portaobjetos

4
Gota de azul en porta

Colocar cinta sobre la gota

INDICAR EL RESULTADO MICROSCOPICO OBTENIDO