EXPERIMENTO 10

PRUEBAS CUALITATIVAS PARA LA IDENTIFICACIN DE LPIDOS

REQUISITOS Repasar las estructuras de los lpidos y sus reacciones. 1. FUNDAMENTOS

OBJETIVOS Poner de manifiesto ciertas propiedades de los lpidos, algunas de las cuales pueden servirnos para su identificacin

Los lpidos, son un grupo heterogneo de compuestos, de naturaleza antiptica, es decir que contienen regiones hidrofbicas y regiones hidroflicas (figura 1). La mayor parte de los lpidos abundantes en la naturaleza (triacilgliceroles), estn formados por cidos grasos de cadenas hidrocarbonadas pares, saturados o insaturados (en CIS, figura 2). Los lpidos llevan a cabo mltiples funciones en el organismo, como: almacenamiento de energa, de transporte, cumplir funciones hormonales, actuar como vitaminas, formar parte de las membranas celulares confirindoles la propiedad de permeabilidad selectiva, al permitir el paso o no de algunas sustancias y en determinada direccin, as como la conduccin nerviosa y el transporte activo como la bomba de Na+/K+. A diferencia de los carbohidratos, protenas y cidos nucleicos, no forman polmeros, son mas bien molculas pequeas que presentan una fuerte tendencia a asociarse mediante fuerzas no covalentes. Algunas de las propiedades de los lpidos pueden ser usadas para su reconocimiento, ya que pueden reaccionar con una variedad de agentes originndose productos coloreados, desprendimiento de vapores, formacin de jabones (figura 3), entre otros. Figura 1 Cabeza-Cola de los cidos grasos

CH3 COLA

O C OH CABEZA

HO C O CABEZA COLA CH3

122

Figura 2 ionizacin CH3

Isomera CIS-TRANS de los cidos grasos, puentes de hidrgeno con el agua y su

COOH CIS

CH3 TRANS H O H O

COOH

CH3 TRANS

OH H O H

R-COOH
HC HC

R-COO

+ H+

cido Oleico CIS (p.f. 13o -16o) COOH

H 3C

CH HC

cido Eladico TRANS (p.f. 44o) COOH

Figura 3
3HC

Saponificacin de un cido graso

COOH NaOH

cido Palmtico

Cabeza Polar
3HC

COONa Cola Apolar

Palmitato de sodio (Jabn)

123

1.1

Fundamentos qumicos de las pruebas para lpidos.

1.1.1 Prueba de acrolena La positividad de esta reaccin indica la presencia de glicerina y se manifiesta por el desprendimiento de vapores blancos irritantes de olor desagradable, cuya reaccin se muestra en la siguiente figura. Figura 4 Reaccin de la prueba de la acrolena
CH2OH CHOH CH2OH GLICERINA SO4HK,
2

CH2 CH C O H ACROLEINA

H2 O

1.1.2 Prueba de fusin (para investigar fsforo) La positividad de esta reaccin indica la presencia de fsforo inorgnico. Las sustancias orgnicas dan la reaccin positiva, siempre que se haga una hidrlisis previa. La reaccin positiva se manifiesta por la reaccin de un precipitado amarillo de fosfomolibdato de amonio. (Figura 5) Figura 5 Reaccin de la prueba de fusin pH cido (P) (NH4)3 [ p ( Mo3 O10 ) 4 ] (Fosfomolibdato de amonio)

(NH4)6Mo7O24. 4H2O (Molibdato de amonio) 1.1.3 Prueba de Iodo:

La positividad de esta reaccin indica la presencia de cidos grasos de la serie etilnica. La reaccin positiva se manifiesta por la desaparicin del color del Yodo, debido a que enlaza en el doble enlace (figura 6) Figura 6 Reaccin de la prueba de Iodo I2 I I | | CH3-(CH2)7-CH-CH-(CH2)7-COOH (Di-iodo-9,10-c.esterico)

CH3-(CH2)7-CH=CH-(CH2)7-COOH (cido oleico) 1.1.4 Prueba de Lieberman

Se basa en la reaccin coloreada (verde) que dan aquellas sustancias que tienen como ncleo el ciclo pentanoperhidrofenantreno. 124

1.1.5

Prueba de saponificacin

Es una prueba para identificar cidos grasos, por lo tanto, general para los lpidos que los contengan. Los jabones se define qumicamente como, las sales metlicas de los cidos grasos superiores. La figura 7 muestra la formacin de un jabn Figura 7 Prueba de saponificacin CH2OH | CH.OH | CH2OH Glicerol +

CH2-OOC-(CH2)14-CH3 | CH-OOC-(CH2)14-CH3 | CH2-OOC-(CH2)14-CH3 Tripalmitoil-glicerol (Tripalmitina)

3 CH3-(CH2)14-COONa
Palmitato de sodio (Jabn)

2.

MATERIALES Y MTODOS Tubos de ensayo, mechero y pinzas de madera

2.1 Materiales

2.2 Mtodos Prueba 2.2.1. P. Solubilidad 2.2.2. P. Coloracin 2.2.3. P. Acrolena Procedimiento En un tubo de ensayo colocar: Sustancia problema Probar solubilidad por separado con ter, cloroformo y agua. Mezclar y observar. Sustancia problema Solucin del colorante Sudn IV Agitar, dejar en reposo y observar, los lpidos toman la coloracin. Sustancia problema1 g. de la sustancia problema. SO4HK. Calentar fuertemente y observar si se desprenden vapores blancos irritantes, de olor desagradable. Volumen 1 ml 1 2 ml 1 0,5 1 ml

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Prueba 2.2.4. P. Fusin

Procedimiento En un tubo de ensayo colocar: Sustancia problema Mezcla de carbonato de sodio y nitrato de potasio (se prepara en el momento de usarla Carbonato de sodio al 2% y nitrato potsico al 2%. El reactivo se prepara con dos partes de carbonato sdico y una parte de nitrato potsico) Agua caliente (+80C Mezclar y dejar en reposo durante 10 cido ntrico Mezclar, calentar suavemente a la llama sin dejar hervir Molibdato de amonio 4% Mezclar y observar. La positividad se manifiesta por la formacin de un precipitado de fosfomolibdato de amonio. Sustancia problema Cloroformo. Mezclar Reactivo de Hbl Mezclar y observar. Reaccin (+) desaparicin del color del Yodo. Esperar 5 para ver la reaccin Sustancia problema Anhdrido actico. Agitar H2SO4 concentrado Agitar suavemente y observar Reaccin (+) coloracin verde.. Sustancia problema (En una cpsula de porcelana colocar) Calentar 80C En un tubo de ensayo colocar: 1.5 ml de KOH al 85% y 1 ml. de glicerina, calentar 80C. Agregar esta mezcla al contenido de la cpsula Calentar a la llama. Dejar enfriar y observar Colocar en tubo de ensayo una porcin del producto obtenido, agregar 5 ml. de agua y agitar. Esto se hace con el fin de observar sus propiedades espumantes

Volumen 0,5 ml 2 ml

2 ml 10 min 1 1 ml 1 ml 1 ml 1 gota 0,5 ml 1 ml 6 ml 0.5 ml

2.2.5 P. Iodo

2.2.6 P. Lieberman

2.2.7. P. Saponificacin

2 min

3. 1. 2. 3. 4. 5. 6.

AUTO-EVALUACIN. Diga cules son los fundamentos qumicos de las pruebas estudiadas. Cuales son las aplicaciones prcticas de las pruebas. Para el colesterol diga cuales pruebas y porque sern positivas. Defina los siguientes trminos: aminocidos, protenas, anlisis cualitativo, cuantitativo. Dibuje las reacciones para formar un jabn con 3 molculas de cido oleico Efectu un enlace ester. 126

4.

Marcha analtica

LIPIDOS
Insolubles en agua Solubles en los solventes orgnicos Se colorean con colorantes especiales Prueba de Acrolena (+) Vapores irritantes de acrolena Glicridos o Fosfoglicridos Prueba de fusin (Investigar fsforo) (+) Precipitado Fosfoglicridos (-) No hay precip. Grasas neutras (+) Color verde Colesterol (-) Otros colores Cridos Esfingomielinas Cerebrsidos (-) no hay acrolena Colesterol, cridos, esfingomielinas o cerebrsidos

(-) Color del Yodo

(+) Desaparece el color del Yodo

Prueba de Fusin (investigar Fsforo)

Ac. grasos saturados Saponificable

Ac. grasos etilnicos Saponificable (-) No hay precipit. Practicar Saponificacin (+) Precipitado Esfingomielinas 127 Cridos Cerebrsidos

5.

INFORME 10 (PRUEBAS CUALITATIVAS PARA LPIDOS) Nombres N del mesn N del estudiante Desarrollo Informe Definitiva

Apellidos Grupo de prcticas Fecha Calificaciones Entrada

1. Complete el siguiente cuadro con la informacin deseada. En la casilla N0 Muestra, coloque el numero de cada tubo de las muestras problemas que se le entrego. Use los signos (+) o (-), para reportar la positividad o negatividad de la reaccin. Sobre la base de los resultados de sus pruebas, Ud. puede identificar la muestra problema y escribir la composicin mas resaltante en las casillas correspondientes. N0 Muestra Solubilidad Agua ter Cloroformo P. coloracin P. acrolena P. fusin P. Lieberman P. Iodo P. Saponificacin Nombre Del lpido de la muestra problema

Anote para cada tubo la composicin del lpido identificado por Ud. segn las reacciones que utilice

Nota: El informe debe ser entregado al finalizar la prctica, sin anexar hojas.

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