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Universidad de Chile Facultad de Ciencias Departamento de Qumica Licenciatura Ciencias mencin Qumica

Informe de Laboratorio N2 Determinacin de la concentracin de cafena

Autores:

lvaro Etcheverry Mariana Montanares Daniela Bobadilla Nicols Faras aetcheverry@ug.uchile.cl mariana.montanares@gmail.com danii.bobadilla@gmail.com nicolasfariasr@gmail.com

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Fecha de entrega: 20/04/2012 RESUMEN Este laboratorio consisti en la determinacin de la concentracin de cafena en bebidas y analgsicos mediante el rea de la seal cromatogrfca. Para ello se realiz una curva de rea [g/L]= 350967,24119 * (masa inyectada [mg]) -1818,08802 calibracin inyectando en el HPLC muestras de cafena de concentracin conocida, obteniendo como resultado una ecuacin de la recta de: Luego utilizando los valores obtenidos en la curva de calibracin se realiza la inyeccin en el HPLC de muestras de bebidas y analgsicos existentes en el comercio para analizar su contenido de cafena, obteniendo como resultados: Coca-cola normal 197,436mg en una botella de 250mL, Coca-cola light 147,224mg en una botella de 250mL, caf 1,976mg en una taza de 200mL, t 0,761mg en una taza de 200mL, bebida energtica (Kem Extreme) 1,891mg en 500mL y cafiaspirina 2,076mg en una tableta.

INTRODUCCIN El HPLC o cromatografa lquida de alta precisin es en definitiva una cromatografa en fase lquida en columna a la cual se aplica una sobrepresin que permite acelerar el proceso de separacin y para obtener un anlisis cuantitativo de la muestra en cuestin. La columna utilizada en este caso corresponde a una C-18. Como bien sabemos, la cafena es un alcaloide slido de color blanco que acta como una droga psicoactiva y estimulante, la cual se encuentra presente en varios bebestibles que consumimos comnmente, tales como el t, caf, coca-cola (normal y light), bebidas energizantes, analgsicos, en las que est cuantificada la cantidad exacta de cafena que se puede consumir por mL (en el caso de las bebidas) o por mg (analgsicos). En la parte experimental se utiliz una solucin madre de cafena preparada de 1g / L, de la que se extrajo 1 mL y se afor hasta 10 mL, la que denominaremos solucin 2. A partir de sta ltima se hicieron las distintas extracciones desde 100 g/L hasta 900 g/L mezclndolas con agua desionizada en las proporciones exactas para la obtencin de 1 mL y luego siendo inyectadas en el HPLC para obtener la curva de calibracin absoluta. El cromatograma de las muestras en cuestin dar una serie de picos los cuales estn correlacionados con las reas de cada estndar y que tienen directa relacin con la concentracin de las muestras de cafena inyectadas, lo que generar una curva de calibracin absoluta.

Ahora, para el clculo de la cantidad de cafena inyectada a partir de los datos obtenidos en la curva de calibracin, se debe tener en cuenta la ecuacin de la recta y la ecuacin de dilucin: y(x)= mx n (1) X corresponder a la cantidad de muestra inyectada (g) Y(x) corresponder al rea de la muestra

sta frmula ser utilizada para el clculo de la masa inyectada en el caso de las bebidas y el analgsico. Debido a las diversas diluciones realizadas y con los volmenes y concentraciones correspondientes conocidas, se utilizar la siguiente frmula: C1 x V1 = C2 x V2 (2) Para la obtencin de la masa inyectada de los estndares de cafena/agua, se considerar el volumen del loop de 20 L: Masa cafena inyectada = C2 x VLoop (3)

Figura 1: Estructura de la cafena.

PARTE EXPERIMENTAL 1. Datos brutos obtenidos: En primer lugar se realizo la curva de calibracin con una solucin de cafena de concentracin conocida, con diferentes diluciones. Tabla N1: rea medida para cada una de las masas inyectadas de cafena. Conc. Cafena L L Agua Masa Inyectada (g) rea [V*s] STD STD 0,01 100 900 0,02 7949 0,01 200 800 0,04 14080 0,01 400 600 0,08 34341 0,01 600 400 0,12 56908 0,01 1000 0 0,2 62626 0,1 200 800 0,4 130816 0,1 400 600 0,8 245646 0,1 600 400 1,2 427963 0,1 1000 0 2 709009

Utilizando el software OriginPro 8.5 se obtiene el siguiente grfico:


Masa inyectada versus Area y= 350967,24119x - 1818,08802

600000

Area [Vs]

300000

Masa inyectada [g]

Grfico N1: Curva de calibracin masa inyectada versus rea de la seal cromatogrfica.

Posteriormente se inyect cada una de las muestras obteniendo el rea del pico cromatogrfico en cada caso: Tabla N 2: rea del pico cromatogrfico obtenido para cada muestra.
Muestra Coca-Cola Normal Coca-Cola Light Caf T Energtica Cafiaspirina Masa inyectada [g] 6,32E-01 4,71E-01 1,98E-01 7,61E-02 1,89E-01 4,15E-01 rea [V*s] 223557 167165 71157 28517 68176 147534

2. Tratamiento de datos: Mediante la ecuacin de la recta obtenida en la curva de calibracin se calcula la concentracin de cada una de las soluciones de bebida y analgsico. Las soluciones inyectadas estn diluidas de la siguiente forma: Coca-cola Normal y Coca-cola Light: 1 mL de bebida diluida y aforado en 25 mL, se debe calcular el contenido de cafena en una botella de 250 mL de bebida. T y Caf: 1 mL de bebida diluida y aforado en 50 mL, se debe calcular el contenido de cafena en una taza de 200 mL de infusin. Bebida energtica: 1 mL de bebida diluida y aforado en 50 mL, se debe calcular el contenido de cafena en una botella de 500 mL de bebida. Cafiaspirina: 0,6544g. de tableta diluido y aforado a 100 mL, a partir de esa dilucin tomar 100 L y diluir y llevar a un volumen total de 2 mL. Tabla N 3: Concentracin y masa de cafena en cada una de las muestras.
Muestra Coca-Cola Normal Coca-Cola Light Caf T Energtica Cafiaspirina rea [V*s] 223557 167165 71157 28517 68176 147534 Masa inyectada [g] 6,32 x10-1 4,71 x10-1 1,98 x10-1 7,61 x10-2 1,89 x10-1 4,15 x10-1 Concentraci n inyectada [g/L] 3,16x10-2 2,36 x10-2 9,88 x10-3 3,80 x10-3 9,45 x10-3 2,08 x10-2 Concentraci n total [g/L] 0,7897427 0,5888976 4,94 x10-1 1,90 x10-1 4,73 x10-1 4,15 x10-2 Masa cafena [mg] 197,436 147,224 1,976 0,761 1,891 2,076

DISCUSIN En los valores obtenidos en la presente sesin de laboratorio hay un gran porcentaje de error. Por una parte, se prepararon soluciones de concentraciones bajas, lo que junto a la inyeccin de la muestra (giro del loop) constituyen una fuente de error considerable, debido a que para la primera, cualquier cantidad de muestra que quede en la micropipeta repercute de sobremanera en la cantidad de muestra que se inyectar y para la segunda, puede haber un desfase en la accin de inyectar y de encender el programa para que comience a determinar los datos que se ve manipulado cuando inyectan diferentes personas. Existe una fuente de error menor correspondiente a la triangulacin de los datos en el grfico. Para ejemplificar estos errores se pueden analizar los valores de cafena calculados, as tenemos para la cafiaspirina una masa de 2.076 mg, que estn demasiado lejos de los 40 mg que dice en el envase que contiene cada pastilla1, como tambin hay errores en los que se obtuvo ms cantidad de cafena como en las Cola-Cola normal y Coca-Cola light con valores de 197.436 mg y 147.224 mg respectivamente, que est muy lejos de los 23 mg y 31 mg que informa el productor2. El anlisis por HPLC es muy usado y ampliamente respaldado, de modo que entrega valores slidos y confiables, por lo cual los errores estn directamente relacionados con la manipulacin, preparacin e inyeccin de las muestras, debido a esto es que para entregar un anlisis optimo es que se deben realizar varias inyecciones de las muestras y obtener valores de un mismo rango para asegurar un resultado reproducible. CONCLUSIONES Se puede concluir que: Las mediciones realizadas en el equipo de HPLC son un protocolo de anlisis muy utilizado, pero para ello debe ser realizado por una persona con prctica ya que el error observado durante este prctico es debido mayoritariamente a la poca prctica en los alumnos en la inyeccin debido al giro del loop. En la curva de calibracin se obtuvo una ecuacin de la recta de: rea [g/L]= 350967,24119 masa inyectada [mg] -1818,08802 Se obtuvieron los siguientes resultados de cantidad de cafena en cada muestra: Coca-cola normal 197,436mg en una botella de 250mL. Coca-cola light 147,224mg en una botella de 250mL.

1 2

http://www.aspirina.cl/productos/aspirina_cafi.php http://productnutrition.thecoca-colacompany.com/ingredients

BIBLIOGRAFA -

Caf 1,976mg en una taza de 200mL. T 0,761mg en una taza de 200mL. Bebida energtica 1,891mg en 500mL. Cafiaspirina 2,076mg en una tableta.

SKOOG, Douglas A. y West, Donald M. Anlisis Instrumental, 2da Edicin. Mxico, McGraw-Hill, 1992.