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Instituto Politcnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biolgicas


Departamento de Microbiologa
Fisiologa y Bioqumica Microbiana
Prctica No.3

Determinacin de actividad de Succinato


Deshidrogenasa de Escherichia coli.

Profesores:

Elaborado por:
Grupo: 6QV2
Equipo 2 Seccin 1
Xometl Ruiz Diana Iris

Criterio
Hiptesis
Objetivos
Resultados
Discusin
Conclusiones
Bibliografa

Valor
(%)
2
2
2
5
3
1

Obtenido

HIPOTESIS
Si E. coli es un organismo que transporta la glucosa de manera ms rpida en
comparacin con succinato,obtendremos un mayor crecimiento de E. coli si se
cultiva con glucosa y un menor crecimiento si es cultivada con succinato.
Con base en que la enzima succinato deshidrogenasa es una enzima inducible, su
actividad se ver afectada de acuerdo con la fuente de carbono (glucosa o

succinato) en que se desarrolle el microorganismo, por tanto, el microorganismo


crecido con succinato, presentara una mayor actividad de la succinato
deshidrogenasa, en compacion con los microorganismos crecidos en glucosa.

OBJETIVOS PATICULARES
Construir una cadena artificial de electrones en Eschericia coli cultivada bajo
diferentes condiciones para as determinar la actividad enzimtica de succinato
deshidrogenasa y en base a sta y a su crecimiento analizar la funcin fisiolgica de
la enzima en E. coli.

OBJETIVOS ESPECIFICOS:
Determinar cul es el papel fisiolgico de la enzima Succinato Deshidrogenasa en
Escherichia coli
Comparar el crecimiento celular de Escherichia coli y determinar qu fuente de
carbono es mejor para su desarrollo.
Observar el efecto que ejerce el empleo de diferentes fuentes de carbono en el
desarrollo celular de Escherichia coli.

Resultados
a) Efecto de la fuente de carbono en el crecimiento de E. coli.
Tabla 1. Efecto de la fuente de Carbono en el crecimiento de
Escherichia coli.

Cultivos previos
en:

Crecimiento
(Absorbencia a 600 nm.)

Matraces con
medio base
ms:

Inicial

Final

Diferencia

1 Succinato

0.627

0.829

0.202

Glucosa

0.650

1.043

0.393

3 Succinato

0.608

0.905

0.297

4 Glucosa

0.617

0.989

0.372

Succinato

Glucosa

sustrato

Figura 1. Representacin grafica de la diferencia entre las lecturas efectuadas con


las 2 fuentes de carbono en el crecimiento de E. coli.

b) Efecto de la fuente de Carbono en la actividad de la Succinato


Deshidrogenasa.
Tiempo

% de Transmitancia a 600 nm. de las suspensiones celulares


crecidas en las fuentes de Carbono.

(Segundos
)

0
30
60
90
120
150
180
210
240
270
300
330
360
390
420
450
480
510

1
Succinato Succinato
%T
T
4,4
0
5,4
1
6,9
2,5
8,6
4,2
10,7
6,3
13,2
8,8
16,2
11,9
19,9
15,5
24,2
19,7
29
24,6
34,5
30,3
40,9
35,7
47,7
43,3
53,6
49,2
57,2
52,8
58,2
53,8
58,5
54,1
58,6
54,2

2
Succinato Glucosa
%T
T
5,1
0
5,8
0,7
6,5
1,4
7,2
2,1
8
2,9
8,7
3,6
9,5
4,4
10,3
5,2
11,1
6
11,9
6,8
12,7
7,6
13,4
8,3
14,2
9,1
14,9
9,8
15,6
10,5
16,3
11,2
17
11,9
17,6
12,5

3
Glucosa Succinato
%T
T
4
0
5,5
1,5
6,9
2,8
8,4
4,4
10,3
6,2
12,5
8,5
15,2
11,2
18,3
14,3
22
18
26,4
22,4
31,4
27,4
37,2
33,2
43,5
39,5
49,6
45,6
54,2
50,2
55,8
51,8
56,1
52,1
56,3
52,3

4
Glucosa Glucosa
%T
T
3,1
0
3,6
0,5
3,9
0,8
4,3
1,2
4,7
1,6
5,1
2
5,5
2,4
5,9
2,8
6,2
3,1
6,6
3,5
7
3,9
7,4
4,3
7,8
4,7
8,2
5,1
8,6
5,5
8,9
5,8
9,3
6,2
9,6
6,5

Efecto de la fuente de carbono en la actividad de succinato deshidrogenasa


60.0
50.0
40.0
Succinato -Succinato
Succinato - Glucosa

T% A 600nm 30.0

Glucosa- Succinato
Glucosa- Glucosa

20.0
10.0
0.0

100

200

300

400

500

600

Tempo (segundos)

Figura 2. Cambio del % de Transmitancia a 600 nm. de las diferentes


suspensiones celulares empleadas contra un blanco de regulador de fosfatos,
medidas cada 30 segundos en un intervalo de 5 minutos.

DISCUSIN
Para la realizacin de esta practica, se hizo crecer E. coli en el medio Syper y
Strauss con diferentes fuentes de carbono en este caso, succinato y glucosa,para
poder observar el efecto que estas tiene en el crecimiento de la bacteria.

La importancia fisiolgica de la enzima succinato deshidrogenasa en el


metabolismo de la celula es que le va a permitir utilizar fuentes de carbono
diferentes a la glucosa, como el succinato.
De acuerdo a los resultados proporcionados, se observa que la bacteria si puede
incorporar succinato a su metabolismo, ya que present crecimiento en este medio
de cultivo, adicionado con succinato. La bacteria creci mejor en glucosa que en
succinato ya que las absorbencias iniciales de los matraces 3,4 son mayores que
las absorbencias de los matraces 1,2, (tabla 1) esto se debe a que el uso de
glucosa como sustrato utiliza dos vas centrales en condiciones aerobias, la
glicolisis y el ciclo de Krebs, lo cual genera un mayor poder reductor que se ver
reflejado en mayor sntesis de ATP, mientras que el succinato es un sustrato que
se va a incorporar en el ciclo de los cidos tricarboxlicos, pero produciendo menor
poder reductor, por lo tanto menor cantidad de ATP. El mecanismo para que E.
coli, crecida en glucosa, incorpore succinato a su metabolismo requiere una fase
de adaptacin, pues se observ menor crecimiento en el matraz de clulas
cultivadas en glucosa adicionadas con succinato en comparacin con el matraz
con clulas cultivadas en glucosa adicionadas con glucosa..
El cambio en la fuente de carbono afecta el crecimiento celular ya que las lecturas
finales de absorbencia de los matraces 1,2 y 3,4 no son iguales.
En el matraz 2 (succinato - glucosa) Se observa que el crecimiento se aceler ms
al cambiar las clulas pre incubadas en succinato por otra fuente de carbono como
glucosa, esta observacin es notoria si restamos las absorbencias iniciales de las
finales (los valores son de M1 =0.293 y M2 =0.486), mientras que para el matraz
1, donde no se cambi la fuente de carbono, las clulas continuaron replicndose
pero de una manera un tanto ms constante.
En el segundo par de matraces (3,4) se present un mejor crecimiento en glucosa
glucosa, comparado con el crecimiento glucosa succinato, los valores de
absorbencia iniciales son similares pero al cambiar la fuente de carbono, el
crecimiento en succinato fue afectado disminuyendo, lo cual es donde se observa
la fase de adaptacin, (matraz 3 Abs = 1.105) en comparacin con el de las
clulas crecidas en glucosa (matraz 4 Abs = 1.211).La succinato deshidrogenasa
es una enzima que est presente en estos procesos, en la ltima parte del ciclo de
Krebs, una conversin de succinato a fumarato, la deshidrogenacin depende de
FAD . Esta enzima est unida a la membrana de E. coli y pasa los electrones del
succinato a la CoQ, por medio del FAD para permitir que se lleva a cabo la
fosforilacin oxidativa.

Para el anlisis de la actividad de la enzima succinato deshidrogenasa se utilizo el


mtodo de Ells, que nos permite medir la succinato deshidrogenasa a 600nm. En
las lecturas de % de transmitancia se observa que la enzima succnato
deshidrogenasa de la bacteria, presenta una mayor actividad cuando creci en el
medio de cultivo Succinato y se le adiciono succinato como 2 fuente de carbono.

Para el crecimiento en el medio de cultivo succinato glucosa se vio afectada la


actividad de la enzima succinato deshidrogenasa, pero no de manera
determinante, es decir, que la enzima si presento actividad pero en menor
proporcin que la enzima en las clulas crecidas en succinato adicionadas con
succinato.
Los resultados obtenidos,nos indican que la enzima succinato deshidrogenasa es
inducible por succinato, reprimiendo a la glucosa, y que la glucosa reprime la
sntesis de enzima succinato deshidrogenasa.

CONCLUSIONES
La succinato deshidrogenasa, es inducible por succinato
La segunda fuente de carbono marca la sntesis de la enzima succinato
deshidrogensa
La glucosa es una mejor fuente de carbono que el succinato
Las bacterias a las que se les adiciona como segunda fuente de carbono, la
misma fuente con la que se cultivaron inicialmente, no presentan fase de
adaptacin.
La glucosa reprime la sntesis de succinato deshidrogenasa

BIBLIOGRAFA
Voet, D., J. Voet, Bioqumica (2007), 3 Edicin, Editorial Mdica Panamericana, EspaaMadrid.
Pars Ramn, Bioqumica de los microorganismos (2002), Editorial Revert, EspaaMadrid.