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Hurtado
PROTOPLASTOS
Cultivo y aplicaciones
Protoplasto:
Clula vegetal desprovista de
pared celular, por proceso mecnico o enzimtico. Membrana plasmtica completamente expuesta. Estado transitorio, permite manipulacin de esas clulas. Mantiene potencialidades de clulas vegetales completas.
1892 Primer aislamiento de protoplastos vivos de cebolla por mtodos mecnicos. 1919 Primer aislamiento enzimtico, clulas de levadura.
APLICACIONES
Produccin de hbridos por fusin de protoplastos. Manipulaciones genticas.
Estudio de procesos fisiolgicos y
bioqumicos.
METODOLOGA
1. Aislamiento y factores que lo afectan 2. Purificacin 3. Determinacin de viabilidad 4. Cultivo 5. Regeneracin
de los protoplastos
Fuente de material
Tratamientos pre-enzimticos
Tratamientos enzimticos Osmolaridad
2) Purificacin
3) Viabilidad
Toma de oxgeno
Actividad fotosinttica
Tinciones
4) Cultivo
Medio de cultivo: MS, B5 (lquido o slido)
Osmolaridad
Densidad de plaqueo Condiciones de almacenamiento
Material vegetal
5) Regeneracin
Organognesis/Embriognesis somtica
HIBRIDACIN SOMTICA
Aislamiento de protoplastos
Regeneracin de plantas
HIBRIDACIN SOMTICA
MECANISMO DE FUSIN oTRES FASES: Aglutinacin Fusin de membranas Redondeamiento de protoplastos fusionados oTRATAMIENOS: PEG Alto pH Ca+2
PROTOPLASTO A
PROTOPLASTO B
HIBRIDACIN SOMTICA
AGREGACIN
FUSIN
DIVISIN CELULAR
CLULAS HBRIDAS
difcil, y a partir de productos de fusin an ms. Ploida de los hbridos es impredecible. Dificultades para recobrar la ploida normal. Hbridos con frecuencia presentan problemas de esterilidad.
(Brassica oleracea) a rbano (B. rapa) y a colza (B. napus). Earle y Dicson, 1994). Transferencia de resistencia a atrazina en Brassicas (Christey et al. 1991). Transferencia de esterilidad masculina en Nicotiana (Zelcer et al. 1978). Diversos hbridos somticos en especies ornamentales y flores de corte.