HAPLOIDES

1. Porque es mejor obtener haploides de polen que de anteras?

Sabemos que el polen tiene una carga genética de n (haploides) y las anteras 2n
(diploides), debido a esto se usa polen, porque el objetivo es obtener plantas haploides, es
decir, con solo la mitad de la carga genética. Esto evita una posible contaminación en el
cultivo presentando plantas diploides siendo que se desea haploides.

2. cual es el uso o aplicaciones practicas que hace el fitomejorador de los haploides?

Fija sistemas genéticos de gametos individuales, que sean reducidos y fáciles de evaluar en
cualquier etapa del proceso de mejoramiento; se obtendrán así líneas homocigóticas sin pasar
por el proceso de endogamia normal.

4. Cuáles son los aspectos importantes de la fisiología de las plantas como donantes de anteras y
polen?

El fotoperiodo, la intensidad de la luz, la temperatura y la nutrición mineral de las plantas

donantes influyen en el rendimiento de los embriones procedentes de microsporas. Estas deben
ser óptimas, ya que si por algún motivo la planta sufre algún tipo de estrés pueden modificar la
respuesta de genotipos recalcitrantes.

5. DIGA LOS COMPONENTES MÁS CARACTERÍSTICOS DEL MEDIO DE CULTIVO DE ANTERAS?

Normalmente se utilizan dos medios de cultivo, uno para la inducción de callos a partir del polen
inmaduro y otro para la regeneración de plántulas a partir de los callos.

Los medios de cultivo están constituidos por dos grandes grupos de sustancias. El primer grupo o
medio basal, está formado por nutrimentos inorgánicos (macro y micro elementos). Hidratos de
carbono, vitaminas y en algunos casos, otros aditivos orgánicos. El segundo grupo de sustancias lo
constituyen los reguladores de crecimiento de tipo hormonal. Varios laboratorios han tratado de
optimizar la composición de los medios de cultivos para el cultivo de anteras de arroz, pero en
ocasiones las conclusiones difieren unas de otras. Estas diferencias pueden deberse a la influencia
que ejercen el genotipo, las condiciones ambientales y fisiológicas de la planta donante, el estado
de desarrollo del polen y pretratamiento dado a las anteras. Sin embargo, esto no le resta
importancia a la composición del medio de cultivo ya que es común que, para un mismo genotipo,
la frecuencia de inducción varíe según la composición del medio.

Nutrimentos inorgánicos y vitaminas: el creciente y la diferenciación de callos están

determinados por las concentraciones de sales inorgánicas, especialmente las de amonio: por eso
la relación entre la concentración de amonio y la de nitrato es uno de los principales factores en la
composición del medio. Las altas concentraciones de amonio presente en el medio MS (Murashige
y Skoog) inhiben la formación del callo de micro esporas de arroz y de otros cereales.

Las proteínas del medio basal satisfacen la necesidad que tiene el polen de cofactores enzimáticos

6. POR QUE ES TAN IMPORTANTE PARA LOS FITOMEJORADORES EL CULTIVO DE ANTERAS?

Es importante porque:

 El cultivo de anteras permite eliminar las generaciones segregantes, lo cual representa

economía de tiempo, mano de obra y espacio en la producción de variedades de arroz
 Se pueden obtener líneas homocigotas en solo 8-9 meses, contabilizados a partir de la
siembra de una generación F1 o F2.
 Mediante el cultivo de anteras se pueden obtener líneas con características específicas
para determinados ecosistemas, como es el caso del arroz de riego en climas templados
 Acelerar la diversificación y amplificación de la base genética presente en el germoplasma
de arroz
 Obtención de líneas haploides dobladas para estudios genéticos relacionados con aspectos
de fitopatología, entomología, Etc.
 Eficiencia de selección

El cultivo de anteras permite recobrar un mayor número de líneas fértiles

7. EXPLIQUE POR QUE EL CULTIVO DE ANTERAS DE ARROZ HA SIDO UN CASO MUY EXITOSO
PARA SU MEJORAMIENTO

Ha sido exitoso porque se ha evaluado variedades de arroz en menor tiempo y con características
de alto potencial de rendimiento, buena calidad del grano, fortaleza del tallo y reacción de
resistencias a piricularia (Pyricularia grisea), virus de la hoja blanca (VHB) y sogata (Tagosodes
orizicolus), además por sus reducciones en el costo.

8. algunas ventajas del cultivo de anteras:

 Las células del polen de los hibridos F1 contienen la dotación genética de

las plantas paternas y las recombinaciones esperadas según las
proporciones mendelianas. Debido a que estas células son haploides,
permiten seleccionar eficazmente los recombinantes deseados.

 Una vez se duplican las células haploides, se generan rápidamente líneas

homocigóticas.

 Al ser las células homocigóticas, cada individuo habrá fijado su genotipo y

no sufrirá segregación adicional
  Se pueden crear y acrecentar reservas citogenéticas y citoplasmáticas de
los principales cultivos.

9. técnicas para mejorar producción y frecuencia de haploides.

1. Ginogenesis: Este es el desarrollo de una ovocelula sin fertilizar ya sea como

resultado de la polinización retardada a través del uso de polen abortivo (pre-
expuesta a la irradiación ionizante) o mediante el uso de polen extranjero (a veces
incluso el polen de la misma especie). La ginogenesis es encontrada
especialmente en cruces interespecificos. Ej: el cruce entre Solanum tuberosum y
Solanum phureja lo cual se producen patatas dihaploides, que fueron tetraploides
originalmente. con la ginogénesis es vital que surge un endospermo viable, de lo
contrario el embrión aborta in vivo.

2. Androgenesis: en este caso el nucleo de la celula huevo es eliminado o

inactivado antes de la fertilización. El individuo haploide será producido por el
desarrollo de la celula huevo contenida en el nucleo masculino.

3. eliminación del genoma que surge como resultado de cierta cruza (intergenérico
e interespecífico). la fertilización se produce, pero poco después un genoma se
elimina dando lugar a un embrión que sólo tiene un genoma presente, y por
consiguiente es haploide. Un ejemplo importante de esto es el cruce
interespecifico entre Hordeum vulgare y H. bulbosum, lo que resulta en la
producción de un haploide H. vulgare. Este sería referido otra vez mas tarde.

4. Semigamia: en este caso el nucleo de la celula huevo y el nucleo generativo del

grano de polen germinado se divide independientemente, resultando en una
quimera haploide.

5. Tratamiento quimico: el azul de tolueno, hidrazidomaleico, oxido nitroso y

colchisina. Por la adición de cloranfenicol y parafluorfenilalanina, la eliminación de
los cromosomas puede ser inducida.

6. Choques con altas o bajas temperaturas.

7. Irradiación con rayos-x o luz ultravioleta.

10. Del punto de vista de los fitomejoradores y de los genetistas: ¿cuáles son las
ventajas de los haploides? (pg.246)

 Homocigocidad rápida
  El cultivo de anteras puede ser una fuente útil de variación gametoclonal
para el mejoramiento intravarietal.

 Permitir la expresión e identificación de alelos recesivos

 Permitir la rápida introducción de caracteres citoplasmáticos en un fondo

genético homocigótico.

 Obtener la purificación de líneas de restauración de la esterilidad

masculina.

 Utilizarlos como receptores para la transferencia de genes mediante

microinyección o electroporacion.

11. Cuales son las partes de la planta, y cuales las formas de obtener haploides in
vitro? (pg.247-8)

Las formas de las plantas son:

Esporofito haploide

Gametofito maduro

Esporofito maduro

cigoto

las formas de obtener haploides in vitro son:

androgénesis

ginegenesis

parrtenogenesis

eliminación de cromosomas

PROTOPLASTOS
protoplastos

1.

2.

3.
4.
5.Nombre seis (6) de los componentes generales del medio Kao para protoplastos. Diga cual es y
para que se utiliza el componente de los estabilizadores osmoticos?
6.Describa los procesos de la regeneración de la pared celular, y división celular durante el
desarrollo del cultivo de protoplastos.
7. Nombre y explique c/u. de las cinco (5) formulas para la evaluación de la eficiencia del cultivo de
protoplastos (TS,CCR,FAD,FRD y EC)
 1. Defina el término ¨protoplastos¨ y sus aplicaciones generales

El termino protoplastos se refiere a componentes vivos de las células vegetales que están
rodeados solo por la membrana plasmática; en realidad, constituyen células desnudas de una
planta. Muchos protoplastos pueden resintetizar la pared celular, dividirse, formar colonias e
incluso regenerar plantas. La capacidad para producir un organismo altamente diferenciado, a
partir de una sola célula somática, es una característica única de los protoplastos de las plantas
superiores. Debido a la ausencia de la pared celular, los protoplastos son adecuados para diversas
y diferentes manipulaciones genéticas que no serían posibles con plantas o células intactas. Los
protoplastos sirven además como herramientas únicas para muchas investigaciones fisiológicas,
biofísicas y bioquímicas.

2. En que consiste el método enzimático para el aislamiento de protoplastos y cuáles son

las tres principales factores a considerar para el

El método enzimático para el aislamiento de los protoplastos consiste en incubar las células en una
mezcla de enzimas que degradan la pared celular. Los principales factores que se deben considerar
para el éxito de este método son:

a. El tipo de enzimas que se usaran

b. La composición del medio en que ellas actuaran
c. El material de origen de los protoplastos.
3. Cuáles son las diferentes fuentes para la obtención de protoplastos y cuales serían las
más adecuadas

Es posible aislar protoplastos de cualquier tipo de planta, órgano o tejido, pero los fuentes que se
usan corrientemente son mesófilo foliar y tejidos cultivados in vitro como células en suspensión,
callos, y ápices de plántulas generadas in vitro. El mesófilo es una fuente adecuada de
protoplastos. Se utilizan, en general, hojas completamente abiertas de plantas jóvenes, o brotes
nuevos; a menudo se prefiere las hojas de brotes de cultivos in vitro a las hojas de plantas
cultivadas en invernadero.

4. Nombre los cuatro procedimientos para el aislamiento de protoplastos y explique en

detalle uno de ellos.
Los cuatros procedimientos para el aislamiento de protoplastos son los siguientes

Procedimiento I: purificación de enzimas

Procedimiento II: aislamiento de protoplastos del mesófilo

Procedimiento III: aislamiento de protoplastos de suspensión celular

Procedimiento IV: asilamiento de protoplastos de puntas de brotes.

Procedimiento I: purificación de las enzimas. La viabilidad de los protoplastos aislados se puede

mejorar purificando las enzimas de sales y otras impurezas. Se procede asi:

 disuelva 5g de la preparación enzimática en 20 ml de un amortiguador de fosfato 1mM

 Después de una hora, centrifugar la solución a 12,000g durante 10 minutos, para remover
las impurezas insolubles.
 Lleve la fracción sobrenadante a una columna de Sephanex G50(4x20cm)y recoja
fracciones de elución de 20 x 10 ml
 A los 280 minutos mida el contenido de proteínas de cada fracción. Reúna las fracciones
que contienen proteína y almacénelas a 4ºC.

6. Anote seis ventajas de la producción de híbridos somáticos

 Variación genética
 Obtener híbridos que sexualmente no son posibles por incompatibilidad
  Lograr reproducción sexual de híbridos
 Bajo vigor hibrido
 Los protoplastos proveen sistemas para investigar la fisiología y genética de la
célula vegetal, incluyendo estudios de genómica y proteómica.
 La generación de nuevos híbridos somáticos y cíbridos los cuales no pueden ser
obtenidos a partir de los métodos tradicionales.

7. describa 5 procedimientos de selección para los híbridos somáticos

Selección morfológica: La selección morfológica se basa en la detección de variaciones

fenotípicas en el híbrido somático al compararlo con los progenitores Algunas
características, como el tipo de crecimiento (tallo erecto, tallo rastrero o semirastrero) y
color de la flor, han sido utilizadas para este fin.

La identificación morfológica, sin involucrar otro tipo demarcador, tiene el problema de que
es necesario cultivarla mayor cantidad de plantas posible, junto con los parentales,
durante un período de tiempo considerable, hasta que las características se manifiesten,
para luego realizar la selección al comparar los fenotipos.

Selección manual: La selección manual (o micromanipulación) de los productos de

fusión se utiliza cuando las dos poblaciones de protoplastos parentales pueden ser
identificadas fácilmente. Esto facilita la selección de los heterocariones y de los
protoplastos fusionados. Uno de los prerrequisitos para el aislamiento manual yposterior
cultivo de únicamente los heterocariontes es la posibilidad de reconocerlos fácilmente y
de distinguirlos de los homocariontes (fusionantes entreprotoplastos del mismo donador)

el ejemplo típico de este procedimiento es la fusión entreprotoplastos de mesófilo de hoja

(de coloración verde por la presencia de clorofila) con protoplastosobtenidos de
suspensiones celulares cultivadas en oscuridad (incoloros, debido a la presencia de
protoplastidios y leucoplastos

Complementación: La complementación se basa en la incapacidad de los protoplastos

parentales (o donadores) de poder regenerar plantas completas bajo ciertas condiciones
de cultivo. No obstante, y por complementariedad, los fusionantes adquieren la capacidad
de sobrevivir en las condiciones seleccionadas y regenerar plantas Durante la preparación
de los protoplastos se debe realizar una selección minuciosa de las características de
Posterior a la fusión, y si la complementación se da, el desarrollo de célulashíbridas da
lugar al crecimiento de plantas complementariedad a utilizar, algunas de las cuales
también pueden ser inducidas.

Conteo de cromosomas: El número de cromosomas de los híbridos somáticos

simétricos debe ser el resultado de la suma del número cromosómico de los donadores;
pero cuando estos híbridos son asimétricos el genoma de alguno de los donantes puede
ser eliminado parcial o totalmente

Nota:
Pruebas bioquímicas o moleculares:

 Isoenzimas: La detección de híbridos somáticos por patrones de isoenzimas ha

sido, quizá, una de las pruebas más utilizadas para la caracterización de
fusionantes, debido a que en los productos de fusión simétrica y complementaria
deberían estar presentes las isoenzimas de ambos donantes.

 Marcadores moleculares de ácidodesoxirribonucleico (ADN)

 Citometría de flujo: La citometría de flujo se basa en la medición de la

refracción de la luz al pasar por un fluido (Eeckhaut etal., 2005). Para ello,
se utiliza el sistema de fluorescencia con el marcaje de ambas poblaciones
de protoplastos parentales

8. cuáles son las dos principales vías de selección de mutantes a partir de protoplastos

 Un tipo de selección clásico es el basado en la complementación de mutantes no

alélicos por ejemplo la combinación de dos mutaciones recesivas albinas no
alélicas que permiten la detección de los híbridos simplemente por su color

 Existen otros muchos métodos de selección (incorporación de mutaciones de

deficiencia, de resistencia, etc. Por ejemplo mutantes resistentes a la lincomicina
los cuales son seleccionados en cultivos de protoplastos foliares del tabaco, esto
por su capacidad de tomar un color verde en el medio de regeneración, en
presencia del antibiótico; este tipo de resistencia es transmitida por via materna ala
población F1