Extracción y caracterización de alcaloides de Brugmansia sp (solanáceae) y de C.

americana
Leidy Johanna Madroñero1 113870 Luz Adriana Pedraza Herrera1 113812 1 departamento de Biología- universidad Nacional de Colombia

Objetivos: y y Realizar extracción de alcaloides a partir de flores de Brugmansia sp y de Curatella americana Identificar los alcaloides extraídos mediante pruebas con reactivos de precipitación y por cromatografía de capa delgada.

Introducción: La palabra alcaloide proviene Etimológicamente del árabe alkaly y del griego eidos aspecto, (de aspecto alcalino), los alcaloides son compuestos nitrogenados derivados del metabolismo secundario de las plantas en estado libre, como sales y como N-óxidos, generalmente son sintetizados a partir de aminoácidos y reaccionan como bases frente a los ácidos. Los alcaloides se dividen en cuatro clases: Alcaloides verdaderos, Pseudoalcaloides, Alcaloides imperfectos. Protoalcaloides,

La función que cumplen los alcaloides en las plantas aún no es clara, sin embargo se piensa que úeden intervenir en procesos como de desecho o almacenamiento de nitrógeno sobrante o no metabolizado, también se los ha asociado con procesos de protección a la planta de depredadores debido a su sabor amargo (Arango G. 2008); por otra parte se ha demostrado que los alcaloides pueden servir como reguladores del crecimiento, se ha visto que los alcaloides derivados de la putrescina se incrementan notablemente durante la germinación de algunas plantas como la cebada, cuando se encuentran en suelos deficientes de potasio (Evans WC. 2000). El fundamento de la extracción se basa en el carácter básico de los alcaloides y en el hecho de su existencia en las plantas como sales de ácidos orgánicos o como combinaciones solubles de otras sustancias , entre los principales se encuentran: los ácidos tíglico, 3-metil butírico, benzoico, cinámico, hidroxifenil propiónico, trópico y tricarboxílicos, y además con otro tipo de sustancias como taninos y fenoles (París M. 1981). Para la extracción de alcaloides se debe tener en cuenta que debido a que los alcaloides son compuestos de carácter básico, su solubilidad en los diferentes solventes varía en función del pH, es decir según el estado en que se encuentre sí están en forma de base, son solubles en solventes orgánicos no polares como benceno, éter etílico, cloroformo, diclorometano, acetato de etilo. En forma de sales, son solubles en solventes polares agua, soluciones ácidas e hidroalcohólicas. Para la detección de alcaloides se utilizan reactivos como: la solución de yodo-yoduro de potasio (Reactivo de Wagner), mercurio tetrayoduro de potasio (reactivo de Mayer), tetrayodo bismuto

solución de ácido pícrico (reactivo de Hager). p-dimetilamino benzaldehido (reactivo de Ehrlich). 2008) Metodología: pesar el material vegetal tomar la fase acuosa adicionar NH4OH extraer con CHCl3. ácido sílico túngtico (reactivo de Bertrand). Pruebas de identificación de alcaloides *resultados del grupo que trabajó con hojas de brugmansia. adicionar NH4OH extraer con H2SO4 tomar fase orgánica agregar CHCl3-éter etlílico transvasar el filtrado a un embudo de decantación deshidratar con sulfato de sodio-anhidro agitar y calentar filtrar distribuir en 5 tubos de ensayo más un vial concentrar y realizar las pruebas de identificación: reactivos de precipitado y cromatografía Resultados: Reactivos precipitado/extracto Reactivo de mayer Reactivo de hager Reactivo de valser Ácido tánico Reactivo de bouchardat Reactivo de dragendorff de Flores brugmansia (-) (-) (-) (-) (-) (-) de Curatella americana (-) (-) (-) (-) (-) (-) Observaciones Hojas de Brugmansia* No hubo formación de (+) precipitado No hubo formación de (+) precipitado No hubo formación de (+) precipitado No hubo formación de (+) precipitado No hubo formación de (+) precipitado No hubo formación de (+) precipitado Tabla 1. nitración de alcaloides (reacción de Vitali-Morin se usa para alcaloides en estado base) (Arango G. .de potasio (reactivo de Dragendorff).

Imagen 1. 200). Los resultados obtenidos para las siete pruebas de identificación realizadas fueron negativos. en soluciones acuosas. agregando H2SO4. esto ayuda a extraer los alcaloides presentes. teniendo en cuenta dos principios relacionados con los alcaloides. reactivo de valser. son sales complejas (Arango GJ. Se usaron reactivos yodados en dónde los alcaloides froman complejos con los metales como: mercurio tetrayoduro de potasio (reactivo de Mayer). Para un mejor rendimiento en la extracción se recomienda. americana y de la muestra control Brugmansia sp. en estado de base. La tabla 1. tetrayodo bismuto de potasio (reactivo de Dragendorff). (Maldoni B. ya. el siguiente paso fue. en un solvente orgánico. De esta manera nuestros alcaloides quedaron. tugsteno y otros . 2008). basadas en la capacidad que tienen sustancias nitrogenadas como los alcaloides. las diferencias en la solubilidad de los alcaloides en su estado de base. 1991). formando precipitados. se debe calentar la muestra. pasarlos a sales. ahora en la fase acuosa. y el reactivo de bouchardat. como primer paso. para su extracción fue necesario. Cromatografía de capa delgada. tenía como objetivo disolver los alcaloides en una solución acuosa ácida (HCl 5%) para que con la adición de sales de metales pesados pudiera formarse los precipitados. Discusión de resultados: En la práctica realizada se buscó obtener los alcaloides de Brugmansia sp y de Curatella americana mediante extracción ácido-base. los alcaloides pueden solubilizarse en solventes orgánicos como el CHCl3. primero. Así como también se usaron pruebas con reactivos que generan . La adición de ácido HCl. Ya con los alcaloides en su estado base.éter etílico. alcalinizar con NH4OH. en estado de sal (extractos ácidos) para combinarse con el yodo y metales pesados como bismuto. Debido a que los alcaloides en las plantas se encuentran en forma de sales de ácidos orgánicos o como combinaciones solubles de otras sustancias (Evans et al. se realizaron pruebas de precipitación. Muestra los resultados de la identificación de los alcaloides realizada para los extractos de C. mercurio. o en su estado de sal. no hubo formación de precipitado con ninguno de los reactivos usados. la capacidad que tienen los alcaloides de reaccionar como bases frente a la adición de un ácido y segundo. estos precipitados. además de agitar. después de la alcalinización y adición del solvente que.

propanol y butanol y para la definición de bandas se usan la dietilamina o el amoniaco (MacCalley. todos los resultados fueron negativos. según (Arteaga et al. 1991). Para la fase móvile se usan solventes como el cloroformo. que se encuentran distribuidos en varios órganos de la planta en diferentes proporciones. para ajustar la polaridad pueden usarse alcoholes como metanol. de nuestra extracción. así como falsos negativos porque algunos alcaloides forman complejos que no precipitan (Martínez A. Lo reportado en la bibliografía contrasta totalmente con los resultados negativos obtenidos. tabla 2. por lo tanto lo más probable. Sin embargo. es necesario tener en cuenta que estas reacciones. así que nuestros resultados fueron congruentes con la bibliografía consultada. acetona. esto implica que la cromatografía realizada no fue efectiva. 1980). En relación a Curatella americana. 1999 y El-azizi et al. no calentamos la muestra patrón. no fue posible tampoco observar la presencia de estas manchas para brugmansia sp. no se ha reportado la presencia de alcaloides de ningún tipo.precipitados cristalinos como la solución de ácido pícrico (reactivo de Hager) y otros reactivos como el ácido tánico. Otra de las pruebas que se realiza para la identificación y separación de los alcaloides obtenidos es la cromatografía en capa delgada que una herramienta amplio uso para evaluar la presencia de estos compuestos. pero que no fue eluída por la fase móvil. . después de la adición del ácido. se determina como positivo para alcaloides cuando hay la presencia de manchas anaranjadas. las flores son. orgánica y acuosa son dos pasos críticos y dónde se corre un alto riesgo de equivocarse (Maldoni B. y Reineckato de amonio para detectar presencia de de alcaloides de amonio cuaternario y N-óxido. no son específicas y pueden darse falsos positivos debido a la contaminación con proteínas. alfa-benzopironas y otros compuestos nitrogenados que dan positivo con estos reactivos. La fase estacionaria empleada para la separación de alcaloides más común es la gel de sílice G. En nuestra extracción.) el órgano de la planta en donde hay un mayor contenido de alcaloides. (Alexandre et al. y es también posible que hayamos descartado la fase acuosa.40 y 0-45 (Grajales G. esto pudo haber sido debido a que la fase móvil perdió sus propiedades al estar expuesta a una constante apertura de la cámara. camarinas. cuando se hace el revelado con dragendorff. es que se haya cometido algún error durante el procedimiento. este debería migrar a una distancia igual (RFs iguales) a la del patrón usado. encontrándose también apoescopolamina y 6 hidroxi 3 tigloiloxitropano. el calentamiento de la muestra después de agregar la base y el solvente orgánico así como la separación de las fases. Esto explicaría. 2008) además de separación de otros alcaloides presentes. 1997) Para la extracción realizada con flores de Brugmansia sp. 1993) (ver anexo1. en dónde deberían mostrarse la presencia de varias manchas. nuestro extracto problema. acetato de etilo. Con respecto a la atropina se detectó la aparición de una mancha anaranjada. debido a que en esta planta se han reportado por cromatografía la presencia de bandas a RFs correspondientes a escopolamina entre 0. por qué. 2002). Sin embargo Brugmansia es una planta que se caracteriza por su alto contenido de Alcaloides derivados del tropano. El patrón nos indica que sí en nuestros extractos tenemos ese compuesto. el patrón usado fue la atropina. Debido a que nuestra extracción no se produjo la extracción de alcaloides. principalmente de escopolamina y de atropina. no se logró una extracción exitosa.

171-177. Evans. Facultad de Química Farmacéutica. Martínez.. D. 36-40 6.. 69: 360±361. & M. y tomo 2. Brossi. debido a errores experimentales cometidos. W. 700-703. Medellín. Depto. Brugmansia sp se caracteriza por la presencia de varios alcaloides derivados del tropano como escopolamina y de atropina. de Farmacia. tomo 1. Svoboda. durante la extracción. 5. J.. M. El-Azizi. and Knapp. (1991) ³Alkaloids: Isolation and Purification´ Journal of Chemical Education. Es necesario tener en cuenta que en pasos como el calentamiento y la separación de fases. Alexandre M. J.T. Slatkin. J. L. París. Ed. 1997´. ³Notas del Curso de Farmacognosia y Fitoquímica. 67. (1999)Studies on the antiinflamatory and analgesic activity of Curatella americana L. Gabriel Jaime Arango Acosta. 68. según lo reportado por la bibliografía. Ed. 2000. Vols 23: 31Orlando.V (2002) analysis of the chinchona alkaloids BY high performance liquid chromatogrphy A: 967: 1-19 2. Pera y M. Curatella americana es una planta que no tiene alcaloides. Etnopharmacol. L. B. M. E... Saundders. McCalley. A. Schiff. 15 TH ed.Pharmacognosie´. A. P. 8.C. 1981 10. 9. M.. Chemical constituents of Curatella americana (dilleniaceae). universidad de Antioquia. (1984 1987) Alkaloids. alcaloides y compuestos nitrogenados. 11. Fla: Academic Press. Hurabielle ³Abrégé de Matière Médicale . M. Chemistry and Pharmacology. 7. (2008)elicitación de raíces normales cultivadas in vitro de Brugmansia candida (solánaceae) con precursores de alcaloides del tropano. (1993) Reguero ³Brugmansia : Una especie promisoria para la producción de alcaloides del tropano´ Revista Colombiana de Ciencias Químio-Farmacéutica. Ateya. M. Nº 21. Piuvezam M. 4. H.. Arteaga de G. 1997. Araujo C y Thomas G. . 2008. apoescopolamina y 6 hidroxi 3 tigloiloxitropano. (1980). Maldoni. Journal of Pharmaceutical Sciences. D. Paris. Masson. y y Bibliografía: 1. ³Trease and Evans -Pharmacognosy³. A. Universidad de Antioquia. 3. Edinburgh.Conclusiones: y y La extracción no fue exitosa. pueden cometerse errores con mayor frecuencia. Grajales G. G..

1993) .34 Tallos 0.15 Frutos (cápsulas) 0. Distribución de los alcaloides en Órganos vegetales (Arteaga et al. Órgano de la planta Alcaloides totales expresados como % de atropina Hojas 0.24 Flores 0.Anexo 1.16 Semillas 0.38 Tabla 2.

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