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METODOS DE FRACCIONAMIENTO

METODOS DE FRACCIONAMIENTO

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LES INVITO A …….

M. en C. GUILLERMO ESCAMILLA GUERRERO INSTITUTO NACIONAL DE PEDIATRIA MÈXICO D.F.

PRINCIPIOS
• FUNCION DE SOLUCION ADITIVA/ANTICOAGULANTE:

»ESTABILIZADOR METABOLICO »PREVENIR COAGULACION

PRINCIPIOS
• • • • • C. E………………. 1 – 6 °C C. P……………….. 20 – 24 °C PMN………………. 20 – 24 °C PFC…………………...< -18 °C GAH.………………...< -18 °C

VIDA DE ALMACENAMIENTO 75% DE LOS ERITROCITOS ORIGINALMENTE TRANSFUNDIDOS ESTEN EN EL RECEPTOR 24 HORAS DESPUÉS .

CONTROL EN LA RECOLECCIÓN DE SANGRE La sangre que va a ser donada debe ser colectada por: » Personal entrenado » Bajo la supervisión de un médico calificado » Utilizando plásticas un sistema cerrado de bolsa » Métodos asépticos » Una sola punción venosa limpia. .

PROCESAMIENTO. ALMACENAMIENTO.CONTENEDORES DE PLÁSTICO RECIPIENTE SEGURO DURANTE LA COLECCIÓN. TRANSPORTACIÓN Y ADMINISTRACIÓN DE SU CONTENIDO .

CONTENEDORES DE PLÁSTICO NOM-139-SSA1-1995 QUE ESTABLECE LAS ESPECIFICACIONES SANITARIAS DE LAS BOLSAS PARA RECOLECTAR SANGRE .

CONTENEDORES DE PLÁSTICO NOM-140-SSA1-1995 QUE ESTABLECE LAS ESPECIFICACIONES SANITARIAS DE LAS BOLSAS PARA FRACCIONAR SANGRE .

ATÓXICO. LIBRE DE PIRÓGENOS Y NO REACTIVO TISULAR .BOLSA PARA FRACCIONAR SANGRE ARTÍCULO DE USO MÉDICO. ESTÉRIL. ELABORADO CON MATERIALES PLÁSTICOS. METÁLICOS Y LÁTEX.

BOLSA PARA FRACCIONAR SANGRE CONSISTE EN UNA SERIE DE BOLSAS UNIDAS PUEDE UNA ADITIVA TUBOS DE ENTRE SÍ. UNA DE LAS CUALES CONTENER SOLUCIÓN MEDIANTE DIMENSIONES .

CONTENER UNIDA A ANTICOAGULANTE TUBO EQUIPADO CON .BOLSA PARA FRACCIONAR SANGRE LA BOLSA PRINCIPAL UN Y UN DEBE ESTAR AGUJA.

A UN TUBO •LOS RESTANTES ESTAN OBTURADOS CON UN DIAFRAGMA DE PLÁSTICO PARA PUNCIÓN. TRANSPARENTE O TRANSLÚCIDO. •NO RESELLABLE. PROTECTORES QUE ESTERILIDAD PROVISTO MANTENGAN DE SU .TUBOS CORTOS •PIEZAS DE PLÁSTICO FLEXIBLE. •ENSAMBLADO TRANSPORTADOR.

Descripción: Tubos cortos Tubo transportad or oa gu lan te Aguja Protector An tic .

NATURALES O SINTÉTICOS. LOS CUALES SON PROCESADOS MEDIANTE QUE PRODUCTO FORMULACIONES LA ESPECÍFICAS DEL GARANTIZAN ATOXICIDAD .BOLSA PARA FRACCIONAR SANGRE PLÁSTICO GRADO MÉDICO POLÍMEROS O COPOLÍMEROS.

BOLSA PARA FRACCIONAR SANGRE LÁTEX GRADO MÉDICO LÁTEX GARANTIZAN PRODUCTO. PROCESADO LA MEDIANTE QUE DEL FORMULACIONES ESPECÍFICAS ATOXICIDAD .

BOLSA PARA FRACCIONAR SANGRE DISEÑO • BOLSA PRIMARIA • BOLSAS SECUNDARIAS • TUBO TRANSPORTADOR • AGUJA • PROTECTOR DE LA AGUJA .

BOLSA PARA FRACCIONAR SANGRE •RECIPIENTES HERMÉTICOS •ELABORADOS A BASE DE CLORURO DE POLIVINILO O CUALQUIER OTRO PLÁSTICO •GRADO MÉDICO •SIN PIGMENTAR .

BOLSA PARA FRACCIONAR SANGRE •FLEXIBLE •TRANSLÚCIDO •INODORO O CON UN LIGERO OLOR CARACTERÍSTICO •DELIMITADO POR UN TERMOSELLADO DOBLE .

PLASTIFICADOR SUSTANCIA FLEXIBILIDAD LOGRANDOSE QUÍMICA EN EL EL QUE PERMITE PLÁSTICO. INTERCAMBIO GASEOSO (ENTRADA DE O2 Y SALIDA DE CO2) .

PLASTIFICADOR 1) DHEP DI(2-ETILEXIL-PTALATO)*** 2) TOTM TRI(2ETILEXIL-TIMELITATO). (PL-2209) 5) MEHP MONO(2-ETILEXIL PTALATO) 6) POLEOLEFIN PLASTICO (PL-732) ** . (CLX). (X-3315) 4) BTHC BUTIRIL-n-TRIHEXIL CITRATO. (PL-1240) 3) DnDP DI-n-DECILPTALATO.

POLEOLEFIN PLÁSTICO (PL-732) •COPOLIMERO DE ETILEN-BUTILENESTIRENO •COPOLIMERO DE POLIPROPILEN-ESTIERNO •COPOLIMERO DE ACETATO DE ETILENVINILO .

lípidos y/o calor.15 de octubre 2001 . • El DEHP (ftalato) puede lixiviar (migrar) desde el PVC al entrar en contacto con los líquidos. • El DEHP (ftalato) es un tóxico probado para el aparato reproductivo y para desarrollo en animales de laboratorio.CLORURO DE POLIVINILO • El DEHP (ftalato) no se une químicamente al PVC. Health Care Without Harm Fact Sheet “Exposición al DEHP durante el Cuidado Médico de Niños: Una causa para la preocupación”.

CAMBIOS DURANTE EL ALMACENAMIENTO 1) CAMBIO DE COLORACIÓN 2) TURBIDEZ DEL ANTICOAGULANTE/ CONTAMINACIÓN POR BACTERIAS 3) CONTAMINACIÓN POR HONGOS 4) PÉRDIDA DE LA FLEXIBILIDAD 5) PERMEABILIDAD A GASES .

SOLUCIONES ANTICOAGULANTES PRESERVADORAS SOLUCIONES QUE EJERCEN UN DOBLE PAPEL: • DE PREVENIR LA COAGULACIÓN • Y DE PRESERVAR Y MANTENER LA FUNCIÓN CELULAR ( ESPECIFICAMENTE LA ERITROCITARIA ) .

SOLUCIONES ANTICOAGULANTES PRESERVADORAS FUNCIÓN UNIR EL CALCIO IONICO. INHIBIENDO LA COAGULACIÓN DE LA SANGRE CON LOS OTROS FACTORES DEL PLASMA .

3 DPG •ÁCIDO CÍTRICO: EVITA LA ALCALINIZACIÓN DE LA SANGRE DURANTE SU CONSERVACIÓN A 4°C .ANTICOAGULANTES •CITRATO SÓDICO: ACTÚA COMO QUELANTE DEL CALCIO IMPIDIENDO SU COAGULACIÓN •DEXTROSA: SUBSTRATO ENERGÉTICO PARA LA GENERACIÓN CONTINUA DE ATP POR VÍA GLUCOLÍTICA •FOSFATOS: MANTIENEN AL 2.

LA SANGRE RECOGIDA CON HEPARINA DEBE UTILIZARSE ANTES DE 48 HORAS Y DE PREFERENCIA DENTRO DE LAS PRIMERAS 24 HORAS. PERO NO UN CONSERVANTE. .HEPARINA ES UN ANTICOAGULANTE.

SOLUCIONES ANTICOAGULANTES Tipo I I´ II III Solución anticoagulant e ACD FORMULA A ACD FORMULA B CPD CPDA 1 Contenido 67.5 o 75.0 ml 112.5 o 125 mL 63 o 70 mL 63 o 70 mL .

0 24.ACD (ácido-citratodextrosa) • •ÁCIDO CITRÍCO MONOHIDRATADO g •DEXTROSA MONOHIDRATADA g •AGUA INYECTABLE cbp ml CITRATO TRISODICO DIHIDRATADO g 22.5 1000 15 ml DE ANTICOAGULANTE ACTUAN SOBRE 100 ml DE SANGRE .0 8.

PROPORCIONA LA FUENTE DE ÁCIDO CÍTRICO APORTA A LA SOLUCIÓN UN pH CERCANO A 5. .4 A 4° C.1 A TEMPERATURA AMBIENTE Y DE 7. LA MEZCLA DE ACD-PLASMA TIENE UN pH DE 7. DEXTROSA ENERGÍA.ACD SOLUCIÓN ESTÁNDAR (1943) CITRATO PRODUCE UNA QUELACIÓN DEL CALCIO ACTUANDO COMO ANTICOAGULANTE.

5 2.CPD (citrato-fosfato-dextrosa) •CITRATO TRISÓDICO DIHIDRATADO g •ÁCIDO CÍTRICO MONOHIDRATADO g •DEXTROSA MONOHIDRATADA g •FOSFATO MONOBÁSICO DE SODIO g •AGUA INYECTABLE cbp ml 26.3 3.27 25.22 1000 .

pH LIGERAMENTE MAS ELEVADO QUE ACD (5. .5 A 4° C.CPD FOSFATO CONTRIBUYE AL DEPÓSITO DE FOSFATO DE ADENOSINA. MEJOR VIABILIDAD DE LOS ERITROCITOS.3 DPG DURANTE CERCA DE UNA SEMANA CON MENOR DISMINUCIÓN DEL pH A 4° c. 7.5 SOLO. CON SANGRE Y MANTIENE EL NIVEL DE 2.

5 g 2.CPD-A (citrato-fosfato-dextrosaadenina) •CITRATO TRISÓDICO DIHIDRATADO 26.3 •ÁCIDO CÍTRICO MONOHIDRATADO •DEXTROSA MONOHIDRATADA •FOSFATO MONOBÁSICO DE SODIO •AGUA INYECTABLE cbp g 3.27 g 25.22 g 1000 ml 14 ml DE ANTICOAGULANTE ACTUAN SOBRE 100 ml DE SANGRE TIEMPO DE CONSERVACIÓN 35 DÍAS .

3 DPG. LA ADENINA HACE FALTA PARA LA FORMACIÓN DE ATP. CPDA-2 contiene mayores cantidades de glucosa y adenina. .25 milimol / 1 DE ADENINA A LA SOLUCIÓN DE CPD EN SU ACCIÓN DE CONSERVANTE. LA CPD-adenina MANTIENE EL NIVEL DE 2. la incidencia de reacciones febriles o urticantes tras su transfusión es muy baja. Presenta el hematócrito deseado.CPDA 0.

ADSOL •CITRATO DE SODIO USP •MANITOL USP •DEXTROSA USP •ADENINA •AGUA INYECTABLE 900 mg 750 mg 2.2 mg 27 mg 100 ml TIEMPO DE CONSERVACIÓN 42 DÍAS .

UTILIZADA PARA MANTENER LA CONCENTRACIÓN DE ATP EN EL MISMO .ADENINA LA ADENINA ES TOMADA POR EL ERITROCITO E INCORPORADA A LA RESERVA.

Solución aditiva Solución que en conjunto con el anticoagulante protege la vida de los eritrocitos .

. 60 % •Almacenamiento por 42 días a T° 1 .24 ° C •La solución aditiva deberá mezclarse con los eritrocitos dentro de las 72 hrs.VENTAJAS DE LAS SOLUCIONES ADITIVAS •Recuperación máxima de plasma y CE con Hto. •Para plaquetas almacenar y transportar la sangre a 20 .6 ° C •Con CPDA-1: Plasma o PRP separado dentro de las primeras 6 u 8 hs. posterior a la extracción.

.3 DPG .SOLUCIONES REJUVENECEDORAS 1..RESTABLECIMIENTO DE LA VIABILIDAD 2.RECUPERACIÓN DE LOS NIVELES 2.

EXTRACCIÓN • Punción limpia • Rápida • Mezcla continua y suave con el anticoagulante • Intervalo de sangrado 4 – 10 minutos • Hasta 15 minutos .

TECNICAS GENERALES DE FRACCIONAMIENTO – Precipitación espontánea • Reposo 24-48 horas a 4°C – Interacción diferencial campos fisicos: • Centrifugación • electroforesis – Interacción diferencial con medios sólidos: • intercambio iónico • Ultrafiltración • cromatografía .

TECNICAS GENERALES DE FRACCIONAMIENTO – Solubilidad diferencial: • Crioprecipitación (temperaturas menores a –30°C) • “salting out” con sales neutras • sistemas de bipartición en mezclas de solvente orgánico /agua .

TECNICAS GENERALES DE FRACCIONAMIENTO Los métodos de mayor empleo en los bancos de sangre son: • La centrifugación – Alta revolución y tiempo corto – Baja revolución y tiempo largo • Crioprecipitación – Incubación 72 horas a –70°C – Precipitación con mezclas criogénicas: » Alcohol/ hielo seco » Acetona/hielo seco » Alcohol/acetona/hielo seco .

SISTEMAS DE CENTRIFUGACION Eritrocitos Leucocitos Plaquetas Sangre Tota .

entrifugación Suave “DOS CAPAS” } Plasma Rico en Plaquet } Concentrado de Glóbul Rojos .

Centrifugación Fuerte “TRES CAPAS” } } } Plasma Buffy Coat Concentrado Globular .

p.CENTRIFUGAS DE FRACCIONAMIENTO Fuerza centrífuga relativa (FCR) ó g=(0.00001118) (r) (r.m) 2 .

.

.

p.m. • • • Número de plaquetas. pH y función plaquetaria en C. del factor lX en plasma . Volúmenes obtenidos basados en lo que establece la NOM Actividad del Factor Vlll y factor l en crioprecipitados y/o en plasma fresco congelado total.P.P(concentrado plaquetario) y Crioprecipitados. En tanto que desprovisto de factor Vlll. C. Tiempo de fraccionamiento y revoluciones para la obtención de PRP(plasma rico en plaquetas).LOS PUNTOS CLAVE EN EL CONTROL DE CALIDAD DEL FRACCIONAMIENTO SON • • Control de las centrífugas refrigeradas: temperatura y r.

• Período entre la recolección y el fraccionamiento. • Recolección de sangre. • Condiciones de transporte. • Velocidad de congelación del plasma. • Condiciones de almacenamiento. .FACTORES QUE AFECTAN LA CALIDAD DEL PRODUCTO • Relación de sangre/anticoagulante.

DE ERITROCITOS 180-350 ML 1-6 SEGÚN ANTIOGULANTE NINGUNA CONC. DE ERITROCITOS POBRE EN LEUCOS 180 A 350 1A6 SEGÚN EL ANTICOAGU-LANTE CONTENIDO MAXIMO DE LEUCOS / UNIDAD 1X109 CONC.CONCENTRADOS DE ERITROCITOS UNIDAD VOLUMEN EN mL TEMP DE CONSERVACION EN 0C VIGENCIA CARACTERISTI CAS ESPECIALES CONC. DE ERITROCITOS LAVADO 180 A 350 1A6 4 A 24 HORAS A PARTIR DE SU PREPARACION PLASMA AUSENTE POBRE EN LEUCOCITOS Y PLAQUETAS .

DE CONSERVACION EN 0C MINIMOS EN EL 75% O + DE LAS UNIDADES VIGENCIA MAXIMA APARTIR DE LA RECOLEC-CION CONCENTRA-DO DE LEUCOS ( NEUTROFI-LOS ) POR AFERESIS VARIABLE 20 a 24 horas 1 X 1010 24 horas POR FRACCIONAMIENTO DE SANGRE TOTAL CONCENTRA-DO DE PLAQUETAS 45 A 60 mL 20 a 24 horas 5.CONCENTRADOS DE LEUCOS Y PLAQUETAS TIPO DE UNIDAD FUENTE DE OBTENCION VOLUMEN TEMP.5 x 1010 24 a 72 horas POR AFERESIS 200 a 250 mL 20 a 24 horas 3 x 1011 24 horas a 5 dias .

PLASMAS Y CRIOPRECIPITADOS TIPO DE UNIDAD VOLUMEN EN mL MINIMOS EN EL 75% o TEMP.VIGENCIA MAXIMA A + DE LAS UNIDAD CION EN 0C PARTIR DE LA RECOLECCION PLASMA FRESCO 150 a 180 por Proteina 60 g/ L fraccionamiento Factor VIII 1 U/mL 450 a 750 por aferesis Fibrinogeno 160 mg/dL -18 o menor 12 meses 6 hrs. DE CONSERVA. Una vez descongelado 150 a 180 por fraccionamiento PLASMA ENVEJECIDO 450 a 750 por aferesis Proteina 60 g/L 18 o menor 1a6 5 años 26 dias con ACD o CPD 40 dias con CPDA Factor VIII : 80 UI CRIOPRECIPI-TADO 10 a 25 mL -18 o menor 12 meses 6 horas una vez descongelado .

“ Lo que no se define no se puede medir. Y lo que no se mejora se degrada siempre” Lord Kelvin . Lo que no se mide no se puede mejorar.

028 g/ml .DENSIDAD DE PRODUCTOS BIOLOGICOS Densidad de sangre o de sus fracciones sanguíneas • Sangre de varón • Sangre de mujer • Concentrado eritrocitario • Plasma 1.093 g/ml 1.057 g/ml 1.053 g/ml 1.

30 Volumen 450 ml ±10 % ( + anticoagulante) Conservar entre +1ºC y +6ºC Vigencia máxima (como fresca) después de la recolección: 6 hrs. Pasado ese lapso se considerará SANGRE TOTAL.(ST) .SANGRE FRESCA (TOTAL) • • • • NOM p.

• < 300 ml Dar de Baja • Si < 6 hrs se puede fraccionar en 4.495 Peso (g) 615 -715 • 300 .SANGRE TOTAL.404 ml Usar solo el C E o dar de baja toda la unidad. ALTERNATIVAS EN CUANTO A SU VOLUMEN Volumen (ml) 405 . .

CONCENTRADOS ERITROCITARIOS (C. • Otras determinaciones que permiten evaluar la calidad del concentrado eritrocitario: • Cuantificación de Hb total del C.E.E. g/dl • Hematocrito (%) . es igual al de la sangre fresca (total).) • • • • • • NOM p 31 Requisitos: Volumen : 180ml a 350 ml Temperatura de conservación : +1ºC a +6ºC Vigencia máxima : según el anticoagulante Caracteres especiales : ninguno Identificación de las unidades (etiqueta) y su inspección física.

pobre en leucocitos y plaquetas .CE LAVADO (por inversión) • • • • • • • • NOM p31 Vol. Eritrocitos recuperados: > 63% Vigencia máxima: 4 hrs. a partir de su preparación Caracteres especiales: plasma ausente. de conservación: +1ºC-+6ºC Hematocrito : 68-80 % Leucocitos eliminados: > 75 %. Neto: 180-350 ml Temp.

• pH: 6.0 (en el 75% o más de las unidades al límite de su vigencia).CONCENTRADO PLAQUETARIO • NOM p 32: obtenidas por fraccionamiento de sangre fresca a temperatura entre +18ºC y 24ºC. • Temperatura de conservación: +20ºC a +24ºC y en agitación suave*. . • Vigencia máxima a partir de la recolección: 24 a 72 Hrs.5 x 1010 (en el 75% o más de las unidades al límite de su vigencia). • Plaquetas/bolsa: 5. • Volumen: 45 a 60 ml.

CONCENTRADO PLAQUETARIO
• Identificación de las unidades: igual que para sangre total pero agregando a la fecha de caducidad la hora y en las condiciones de almacenamiento, que éste debe ser de +21ºC a +24ºC y con agitación suave. • Otros estudios útiles: – Inspección física – Contaminación con eritrocitos y leucocitos – Funcionalidad plaquetaria (retracción de coágulo agregometría)

ALGO PARA LAS PLQS???

18% presentan swirling (a los 5 días) (bertollini: transfusion 1996;36:128-132)

Technical Approaches for Bacterial Detection

•Culture •% Oxygen in Air •Metabolic substrates/products –Glucose –Lactic acid/Lactate –Carbon Dioxide –pH –Bicarbonate –Plasma Oxygen •Cell Growth •Culture •% Oxygen in Air •Cell Markers –Observations •Clumping/color •Swirling –Gram stain –Wright Stain –Acridine Orange Stain –Antibiotic probes –Antibody probes –Epifluorescence microscopy •Molecular Biology –PCR –rRNA

Adapted in part from: Mitchell, Brecher: Transfusion Medicine Reviews 1999; 13:132-44

.

CONTAMINACIÓN .

. • CONGELADO. si se congela dentro de las seis primeras horas de su recolección.PLASMA FRESCO (CONGELADO) • NOM: p 32: • Obtenido por centrifugación dentro de las seis primeras horas de su recolección.

PLASMA FRESCO (CONGELADO) • • • • • • • • NOM: p 32: Volumen neto: 150-180 ml Proteínas: 60g/dl Factor VIII: 1 UI / ml Fibrinógeno: 160 mg/dl Temp. de conservación: -18ºC o menor Vigencia máxima: 12 meses (6 hrs. . una vez descongelado) Identificación y aspecto físico igual que ST.

Otra opción: • Temp.+6ºC y su vigencia máxima será: con ACD o CPD: 26 días. de conservación: +1ºC . de conservación: -18ºC o menor y su vigencia máxima a partir de su recolección será de 5 años. con CPDA 40 días .PLASMA ENVEJECIDO (DESPROVISTO DE CRIOPRECIPITADO) • NOM: p 32: • Volumen: 150-180 ml • Proteínas: 60 g/l • Temp.

CRIOPRECIPITADO • NOM: p 33: • Volumen: 10 a 25 ml • Factor VIII: 80 UI • Temp. conservación: -18ºC o menor • Vigencia máxima: 12 meses (6 hrs una vez descongelado) .

11) 12 meses (6 hrs una vez descongelado) .336 Fibrinógeno (opcional):100 .8 UI UI / crio: 191 .67 g* Volumen neto: 31 .CRIOPRECIPITADO • • • • • • • • De acuerdo con la NOM se pueden mezclar tres unidades (reconstituyendo con SSI).8. Requisitos: Peso bruto: 46 .5 .350 mg/unidad Vigencia máxima: (NOM inciso 9.52 ml Factor VIII: UI / ml: 4.

M en C GUILLERMO ESCAMILLA GUERRERO BANCO DE SANGRE INP .

  Con la aplicación de esta fórmula se puede estandarizar el empleo de cualquier marca de centrífuga refrigerada en fraccionamiento. índice de contaminación de glóbulos rojo y blancos. (ver sección de concentrados plaquetarios) 03/22/11 . El control de calidad aplicable a centrífugas refrigeradas es mediante la obtención de porcentajes de recuperación en concentrados plaquetarios.

y la empresa debe serlo.y la En un orden Social Eficaz. 39 .dicho orden ha de conferir responsabilidades y también atribuciones a todos sus miembros Drucker..      Control de calidad diario de antisueros y células de fenotipo conocido. Crioprecipitado. En un orden Social Eficaz.. Sangre total. Paquete globular.. Pruebas pre-transfusionales para: Plasma Concentrado plaquetario.

 Volumen sanguíneo obtenido:  Obtener el peso promedio de la bolsa con anticoagulante y sin aguja más las bolsas satélites.053 gr/ml en mujeres  Observar si la bolsa presenta:  Defectos de fabricación  La presencia de aire que no debe ser > 3 cm de diámetro  Observar que esté bien sellado el tubo colector  Revisar que no exista hemólisis  Presencia de coágulos  Color rojo característico .057 gr/ml en varones  1.  Pesar la BOLSA RECOLECTORA con sangre total y restarles el peso del inciso (1).  Relacionar el peso obtenido con la densidad para traducir a mililitros el volumen sangrado  1.

 Actividad del Factor VIII y Factor I en crioprecipitados y/o en Plasma fresco congelado total. Control de las centrífugas refrigeradas: temperatura y revoluciones por minuto. Plasma y Crioprecipitado: Número de plaquetas. Concentrado Plaquetario. Volúmenes obtenidos en Paquete Globular. en tanto que del Factor IX en plasma desprovisto de Factor VIII. Concentrado Plaquetario y Crioprecipitados. Tiempo de fraccionamiento y revoluciones para la obtención de Plasma Rico en Plaquetas. pH y función plaquetaria en Concentrados plaquetarios. .

      Práticas actuales para la manufactura de buenos productos (current Good Manufacturing Practices. Juran. Premio Nacional de Calidad Malcolm Baldrige Gemba Kaizen . GMP) de FDA ISO 9000 en la Comunidad Europea Asociación Americana de Bancos de Sangre (AABB) Comité Nacional de Normas de Laboratorio Clinico (NCCLS) Demming. ODI.

La acción incorrecta ejecutada correctamente La acción incorrecta ejecutada incorrectamente La acción correcta ejecutada correctamente La acción correcta ejecutada incorrectamente dui t cax E t Ejecución .

El problema identificado y corregido en el sitio de trabajo: $1  Identificado y corregido después de que deja el sitio de trabajo. antes de que alcanza al cliente:  $10  Identificado y corregido después de que alcanza al cliente  $100 .

Sangre es una droga sujeta al cGMP (CFR21. parte 211)  El personal debe ser entrenado y competente (documentado por examen de capacitación) antes de empezar el trabajo  Todos los procesos deben ser validados  Mantenimiento preventivo y calibración de los equipos  Calificación del los proveedores  .

Las etiquetas de sangre deben ser controladas  Todos los procedimientos deben estar reglamentados (Standard Operating Procedures)  Todo debe documentarse por escrito  Informes de errores y accidentes deben ser investigados y rectificados  Auditoría periódica de los sistemas  Perfeccionamiento continuo  .

El Departamento de Calidad esta completamente separado del Departamento de Producción  El encargado de Calidad tiene la autoridad de interrumpir producción cuando procesos o productos no están de acuerdo con especificaciones  El producto no puede ser distribuido antes de revisión y aprobación por el departamento de Calidad  .

 Objetivo › Ejemplo: para mejorar el proceso de colección de muestras de pacientes  Estudio y gráfico de flujo del proceso  Definición de › Puntos de control críticos (PCC) › Elementos importantes (EI) que preceden los PCC › Verificación del sistema (medidas cuantitativas) .

 PCC  La solicitud  La identificación del enfermo  Colección y transporte de la muestra al banco de sangre .

 Elementos

importantes

› Nombre y apellido, numero de › › › ›

identificación, cuarto, cama, etc.. El tipo y cantidad de muestra Dia y hora de solicitud y de colección Firma de la enfermera o médico Prioridad

 Verificación

› Análisis de no. y fuente de errores

Elementos importantes

› Pregunte el nombre del paciente antes de la

Verificación

colección › Verifique el apellido y no. en la pulsera del paciente › Verifique el apellido y no. en la solicitud, los tubos de ensayo y la pulsera › Use alternativas para identificación si es necesario (paciente inconsciente)
› No. de pacientes con identificación

inadecuada, pabellón del hospital › Observación directa de flebotomía

El conjunto de procedimientos que aseguran que un proceso, un procedimiento, un sistema de computación o un instrumento desempeñan conforme especificaciones pre-determinadas  La verificación es realizada por los fabricantes y por los usuarios. Se examina el proceso entero para documentar que los resultados deseados son los resultados obtenidos

onda de calor. ascensores mal funcionando. . los sistemas deben ser revalidados (agujas. computadoras. apagón de electricidad. etiquetas nuevas etc... Siempre que hay un cambio. etc.)  Validación debe incluir situaciones críticas como sobrecarga.

 Errores son oportunidades para mejora  Deben analizarse errores en detalle › › › › ¿Cuál fue la causa? ¿Podrían evitarse? ¿El proceso actual facilita la repetición? ¿Como evitar la repetición? ¿Debemos cambiar procedimientos? ¿Entrenamiento? ¿Equipo? .

.Debemos analizar riesgos potenciales y planear la investigación por adelantado  Por ejemplo. cuando nosotros participamos en los programas de proficiencia  › Recibimos muestras para pruebas de proficiencia regularmente › Nosotros tenemos una norma para recibir las muestras › Pero.. .

 ¡Una vergüenza! Sin embargo. los procesos y tendencias para predecir el potencial para un error  ¡Vergüenza es no tener un plan escrito para estudiar fracasos en programas de proficiencia antes de que ellos pasen!  .  Vergüenza es no haber analizado continuamente los datos del laboratorio. la vergüenza no es recibir una mala nota..… en lugar de 100% correctos nosotros somos sólo 40% correctos..

082 gr/dl 1.026 gr/dl 1.El fraccionamiento o separación de los componentes de la sangre se basa en el principio de que los diferentes componentes tienen diferentes pesos específicos:  Plasma : Plaquetas: Monocitos: Linfocitos: Neutrofilos: Glóbulos rojos: 1.070 gr/dl 1.058 gr/dl 1.100 g/ml .062 gr/dl 1.

30  Volumen 450 ml ±10 % ( + anticoagulante)  Conservar entre +1ºC y +6ºC  Vigencia máxima (como fresca) después de la recolección: 6 hrs. (ST)  . Pasado ese lapso se considerará SANGRE TOTAL.NOM p.

ANTICOAGULANTE DENSIDAD      VIGENCIA 48 hrs 21 días 21 días 35 días 45 días ---- Heparina --ACD 1.02610 gr/dl CPDA con manitol ---- .02146 gr/dl CPD 1.02347 gr/dl CDPA -1 1.

     Pesos aproximados de las bolsas transfer (Baxter). sin aguja y sin anticoagulante. Incluyen 5 g del tubo colector. Bolsa cuádruple 116 g Bolsa triple 91 g Bolsa doble 66 g Bolsa sencilla (primaria) 40 g Bolsa satélite 24 g .

053 1.057 1.Densidad de sangre o de sus fracciones sanguíneas     Sangre de varón g/ml Sangre de mujer g/ml Concentrado eritrocitario Plasma 1.093 g/ml .028 g/ml 1.

9 g  La bolsa de recolección más el anticoagulante pesa:  116 g + 69 g = 185 g  .5) (1.02146) = 68. D=P/V P=DXV  Peso de 67.Bolsa cuádruple (Baxter) = 116 g  Con 67.5 ml de ACD =(67.5 ml de ACD.

5 a 700.  Rangos permitidos:  Hombre: 613 a 708 gr  Mujer: 611.3 gr .057: 428 a 523 gr  En mujeres: densidad de 1.5 a 521.Si extraemos 405 a 495 ml de sangre:  En varones: densidad de 1.3 gr  El peso bruto: Peso de la sangre+ peso del anticoagulante + peso de la bolsa vacía.053: 426.

Valores de referencia:450 ml +/.( pb+ pa) / D.10 %  (405 ml a 495 ml)  VNE = PB . Donde: PB: peso bruto pb: peso de la bolsa pa: peso del anticoagulante  . de la sangre.

 Volumen sanguíneo disponente) Donde:  hombre: 70 ml/kg  mujer: 65 ml/kg total (VST)= Factor (peso      Peso bruto = 680 g Varón de 75 kg VNE = 680 g .057 = 468 ml VST= 70 ml/kg (75 kg) = 5250 Volumen máximo de extracción al disponente: 450ml ± 10% .(116 + 69) / 1.

Volumen (ml) Peso (g) 405 - 495 615 -715  300 - 404 ml Usar solo el C E o dar de baja
toda la unidad.

< 300 ml Dar de Baja  Si < 6 hrs se puede fraccionar en 4.

     

  

NOM p 31 Requisitos: Volumen : 180ml a 350 ml Temperatura de conservación : +1ºC a +6ºC Vigencia máxima : según el anticoagulante Caracteres especiales : ninguno Identificación de las unidades (etiqueta) y su inspección física, es igual al de la sangre fresca (total). Otras determinaciones que permiten evaluar la calidad del concentrado eritrocitario: Cuantificación de Hb total del C.E. g/dl Hematocrito (%)

 Valores  VN

de referencia: 180 ml a 350 ml

= (PB - pb p) / Densidad del C.E.
PB: Peso bruto pb p: peso de bolsa primaria Densidad CE: 1.093 gr/dl

 Donde:

 Hemoglobina libre en ml de plasma (mg / ml)  Hemoglobina libre en bolsa ( mg / bolsa) .  Cálculo de plasma en ml / bolsa. Cálculo del # eritrocitos / bolsa.

093  = 348 g . Ejemplo:  Peso bruto del C.E. Volumen neto = (PB -pb p)/ 1.40 g / 1.8 ml . = 348 g  C.093 = 281.E.

    .Hb (gr/dl) Hto (%) Leucocitos /µ Leucocitos totales= (Leucocitos/µ ) (1000)(VNCE)  Observación de hemolisis en microhematocrito  Control Bacteriológico  Coágulos  Aire en la bolsa.

a 3500 rpm  Medir con una regla el paquete globular y agregar un volumen igual de sol.  .94 mg/dl  100 .Valores de referencia : 35 .salina.230 mg/bolsa  TECNICA  Centrifugar el segundo tubo (que ha permanecido intacto).3 min.

CALCULOS:  Hb libre mg/ml = DOprob x conc Std / DOStd   Hb libre / =[ (GRT)x[Hb↑]pmg%]/100 bolsa .

6 63 .8 .8 .26.4.6 227.94 99.228.2 .8 .394. NETO (ml) Hb mg% Hto % GRT ml PLASMA ml Leucocitos/µ Leucocitos totales (109) Hb ↑ mg% Hb ↑ mg/bolsa 354 .384 22.9 .12 600 1.0 35 .79.426 294 .4 .           PESO BRUTO (gr) PESO NETO (gr) VOL.93 5500 .3 74.457 321 .

pobre en leucocitos y plaquetas . de conservación: +1ºC-+6ºC Hematocrito : 68-80 % Leucocitos eliminados: > 75 %. Eritrocitos recuperados: > 63% Vigencia máxima: 4 hrs. a partir de su preparación Caracteres especiales: plasma ausente. Neto: 180-350 ml Temp.        NOM p31 Vol.

pb p (4 g 0 r) ]/1.093 GRT= VN (Hto)/100 GBT= (GB/µ )(1000)(VN) Después: VN = [PB-pb p(24gr) ]/1.093 Hb mg% Hto(%) GBT & GRT .Antes: VN= [PB.

centrifugar a 4ºC por 15 min. Mezclar el CE perfectamente y ayudados con un rodillo mezclar la sangre del tubo colector con el resto. Invertida la bolsa. . a 3500 rpm Transferir únicamente el CE a una bolsa estéril de 300 ml que contenga 60-70 ml de SSI.     REQUIERE CONDICIONES ESTÉRILES Lavar el CE CON 250-350 ml de SSI. mezclar.

%recuperación de eritrocitos: ml GR en CE lavado x 100/ml GR en CE  %de leucocitos en el CE lavado: leucos de CE lavado x 100/leucos en CE  %eliminación de leucocitos: 100 .% de leucocitos presentes  .

52 75.209 47.96.42 .7 .5 .9 635.7 .83.5 .         PESO BRUTO (gr) VN (ml) Hto% GRT SSI GB/µ GBTx109 % GB % GR RECUPERACION          260 .87 1063 .1963 0.0.5 162 .340 218 .79.286 68. .

de conservación: -18ºC o menor  Vigencia máxima: 12 meses (6 hrs.  .Volumen neto: 150-180 ml  Proteínas: 60g/dl  Factor VIII: 1 UI / ml  Fibrinógeno: 160 mg/dl  Temp. una vez descongelado)  Identificación y aspecto físico igual que ST.

con CPDA 40 días  . Otra opción:  Temp.+6ºC y su vigencia máxima será: con ACD o CPD: 26 días. de conservación: -18ºC o menor y su vigencia máxima a partir de su recolección será de 5 años. de conservación: +1ºC .NOM: p 32:  Volumen: 150-180 ml  Proteínas: 60 g/l  Temp.

Volumen: 45 a 60 ml. pH: 6. Vigencia máxima a partir de la recolección: 24 a 72 Hrs.0 (en el 75% o más de las unidades al límite de su vigencia).5 x 1010 (en el 75% o más de las unidades al límite de su vigencia). Plaquetas/bolsa: 5. Temperatura de conservación: +20ºC a +24ºC y en agitación suave*.      NOM p 32: obtenidas por fraccionamiento de sangre fresca a temperatura entre +18ºC y 24ºC.*/ .

que éste debe ser de +21ºC a +24ºC y con agitación suave.CONCENTRADO PLAQUETARIO   Identificación de las unidades: igual que para sangre total pero agregando a la fecha de caducidad la hora y en las condiciones de almacenamiento. Otros estudios útiles: › Inspección física › Contaminación con eritrocitos y leucocitos › Funcionalidad plaquetaria (retracción coágulo agregometría) de .

028 (densidad del plasma) de referencia = 45 a 60 ml  Valores . VOLUMEN  Peso NETO = bruto .Peso de la bolsa (satélite) / 1.

i.  El resultado se multiplica por 6 para tener plaquetas/ml  Plaquetas/bolsa =  Plaquetas/µ l x 1000 x vol.USAR MATERIAL DE PLÁSTICO CUENTA DE PLAQUETAS AUTOMATIZADA  Hacer una dilución 1:6 con s. neto   .s. y con pipeta automática.

5 a 101). Mezclar en agitador mecánico 2 a 3 min. Tomar el promedio de ambos lados. Dejar sedimentar 10 min en cámara húmeda Contar la quinta parte de la cuadrícula central. .      Cuenta de plaquetas manual: diluir 1:200 en pipetas para rojos con oxalato de amonio al 1% (0. Llenar ambos lados de la cámara de Neubauer.

neto Valores de Referencia: › Plaquetas/µ l: no mnos de 1.000.000 › Plaquetas/bolsa: no menos de 5.  Cálculos: Plaquetas/µ l = plaquetas contadas x 5 x 10 x 200 Plaquetas/bolsa = plaquetas/µ l x 1000 x vol.5 x 1010   .

      CONTAMINACIÓN CON ERITROCITOS: Hacer una dilución 1:10 con SSI (1 a 11) en la pipeta de blancos. . Mezclar Cargar ambos lados de la cámara de Neubauer. Leer la cuadrícula central y sacar promedio. Dejar sedimentar 5 min en cámara húmeda.

1 x 109 . Neto  Valores de referencia › Eritrocitos / µ l = menos de 2000 › Eritrocitos / bolsa = menos de 0. Cálculos: › Eritrocitos / µ l = GR contados x 10 x 10 › Eritrocitos / bolsa = GR / µ l x 1000 x vol.

      CONTAMINACIÓN CON LEUCOCITOS Hacer una dilución 1:10 con líquido de Turck (1 a 11) en la pipeta de blancos. Dejar sedimentar 5 min en cámara húmeda. Mezclar Cargar ambos lados de la cámara de Neubauer. Leer las cuatro cuadrículas de las esquinas. . sacar promedio de ambos lados.

 Cálculos: › leucocitos / µ l: (céls contadas x 10 x 10) / 4 › leucocitos / bolsa = leucocitos / µ l x 1000 x vol neto  Valores de referencia: › leucocitos / µ l = menos de 2000 › leucocitos / bolsa = menos de 0.2 x 108 .

 Centrifugar 10 min a 1500 rpm.  Separar el plasma rico en plaquetas (PRP) y hacer una cuenta de plaquetas.5 ml de citrato de sodio al 3.5 ml de sangre).RETRACCIÓN DEL COÁGULO: (Usar material de plástico) Tomar un pool de no menos de seis disponentes varones (0.8% + 4.  Recentrifugar los tubos y obtener plasma pobre en plaquetas (PPP)    .

P.000 / µ l con PPP: EJEMPLO: C.P.300 µ l de PPP o 50 µ l de C. 4.P.000) -1 = 23 Para tener cantidades adecuadas podemos diluir 100 µ l de C.CONCENTRADOS PLAQUETARIOS       Ajustar las plaquetas del pool y del C.1 M .1 ml de cloruro de calcio 0.P. = 1. + 2. Agregar: 0. + 1.3 ml de ssi.000 plaquetas / µ l (1.200.200. 0.000 0.150 µ l de PPP.000 / 50. Pipetear en cada uno de dos tubos de 13 x 100.5 ml plaquetas ajustadas a 50.1 ml de tromboplastina. en estudio a 50.

medir nuevamente el coágulo (b). Incubar una hora a 37ºC.Mezclar e incubar 5 mins a 37ºC. Cálculos: b x100 / a = X 100 .X = % retracción VALOR NORMAL : MAYOR DE 10 %  .  Cuidadosamente desprender el coágulo y medirlo (a).

NOM: p 33:  Volumen: 10 a 25 ml  Factor VIII: 80 UI  Temp. conservación: -18ºC o menor  Vigencia máxima: 12 meses (6 hrs una vez descongelado)  .

52 ml Factor VIII: UI / ml: 4.11) 12 meses (6 hrs una vez descongelado) .67 g* Volumen neto: 31 .350 mg/unidad Vigencia máxima: (NOM inciso 9.        De acuerdo con la NOM se pueden mezclar tres unidades (reconstituyendo con SSI). Requisitos: Peso bruto: 46 .8 UI UI / crio: 191 .8.336 Fibrinógeno (opcional):100 .5 .

 CONGELADO. si se congela dentro de las seis primeras horas de su recolección. NOM: p 32:  Obtenido por centrifugación dentro de las seis primeras horas de su recolección. .

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