Alberto Jess Trejo Avila Microbiologa QI 6to. Semestre. Fecha de Entrega: 05/05/2016.

Aislamiento e identificacin de microorganismos de inters industrial

El primer paso en el desarrollo de cepas para la produccin industrial es el aislamiento de los
microorganismos involucrados, de sus hbitats naturales. Los microorganismos de importancia
industrial son, generalmente, bacterias, actinomicetos, hongos y algas. Estos organismos se
encuentran casi en todas partes, pero las principales fuentes de obtencin del rea industrial son
suelos, lagos y ros.
Una gran variedad de procedimientos complejos de asilamiento han sido desarrollados, pero
ningn mtodo puede revelar por s mismo todos los microorganismos presentes en una muestra.
Los cultivos de enriquecimiento son tcnicas muy valiosas desarrolladas a principios de los 90s. El
principio bsico involucrado es la seleccin. A menudo, se desea aislar bacterias que son
relativamente escasas, lo que supone un problema. Normalmente, las bacterias son aisladas unas
de otras usando la tcnica de estriado, en donde se usan un medio y una serie de condiciones de
incubacin que sean selectivas para el organismo deseado y contraselectiva para los no deseados,
para luego obtener los organismos en cultivo axnico. (Gilmore, s.f.)
Para que un cultivo de enriquecimiento cumpla su funcin es necesario un inculo adecuado del
organismo de inters. Por lo tanto, el primer paso para el aislamiento de un microorganismo es
tomar la muestra del hbitat adecuado. Los cultivos de enriquecimiento se establecen sembrando
el inculo en un medio selectivo al microorganismo que se quiere obtener, bajo las condiciones
ptimas para su crecimiento. La primera vez que se aisl la bacteria fijadora del Nitrgeno
Azotobacter por el microbilogo Martinus Beijerinck, se hizo a travs de esta tcnica, usando un
medio de enriquecimiento que no contiene nitrgeno fijado y fue incubado con aire, para que esta
bacteria crezca fijando el nitrgeno disponible. As, se estara realizando una contraseleccin de las
bacterias no fijadoras del nitrgeno, o aquellas que lo hacen de forma anaerobia. (Madigan, 2009)
Generalmente, al usar la tcnica del cultivo de enriquecimiento para aislar un microorganismo, se
produce un sesgo. Al haber una alta concentracin de recursos en el cultivo, a diferencia del hbitat
natural en donde se encuentran los microorganismos, se pueden aislar aquellos que crecen ms
rpidamente con los nutrientes adecuados, pero que son componentes menores del ecosistema
microbiano, y no son aquellos de mayor inters. Esta es una de las desventajas principales de esta
tcnica. (Prescott, et al., 2004).
Para obtener un cultivo axnico a partir de un cultivo de enriquecimiento, se utilizan varias tcnicas.
Por ejemplo, para los organismos que forman colonias sobre placas de agar, la siembra por estras
es rpida y fcil. Si se escoge una colonia bien aislada y se vuelve a sembrar por estras varias
veces seguidas, lo normal es obtener un cultivo axnico.

Tambin existe el mtodo del tubo de dilucin en agar, en donde se diluye un cultivo mixto en tubos
de agar fundido, lo que da lugar a colonias extendidas por todo el agar en vez de crecer
nicamente en la superficie de la placa. Los tubos de dilucin son tiles para purificar organismos
anaerobios como las bacterias fottrofas del azufre. Un cultivo se purifica mediante diluciones
sucesivas de suspensiones de clulas en tubos con medio con agar fundido. Al repetir este
procedimiento utilizando una colonia del tubo de mayor dilucin como inculo para una nueva serie
de diluciones, se obtienen finalmente cultivos axnicos.
La tcnica del nmero ms probable (NMP) es un mtodo para estimar el nmero de algn
microorganismo en especfico en una muestra. Consiste en realizar diluciones seriadas de un
inculo en un medio lquido hasta que el ltimo tubo de la serie no muestre crecimiento. Al repetir
este procedimiento varias veces, se pueden obtener cultivos axnicos.
Los compuestos fenlicos estn asociados con la industria de la gasolina, los solventes, la industria
farmacutica, metalrgica, textil, entre otras. Se ha reportado una alta concentracin de fenoles en
el agua de desechos industriales. Estos compuestos son txicos incluso en niveles bajos y
suponen una amenaza para la biosfera por su naturaleza recalcitrante. La necesidad de eliminar la
contaminacin causada por estos compuestos, ha llevado al desarrollo de nuevas tecnologas que
enfatizan la detoxificacin y destruccin de los contaminantes. Existen mtodos fisicoqumicos que
cumplen con este propsito, pero son caros y producen algunos materiales txicos secundarios.
Por lo tanto, en el artculo seleccionado se estudi el aislamiento y seleccin de cepas
bacteriolgicas que son capaces de degradar el fenol de diferentes efluentes contaminados.
Las muestras fueron tomadas de aguas de desecho de la industria petroqumica, del papel, y de
colorantes textiles. Fueron almacenadas en botellas estriles a 4C.
En el estudio realizado por Kotresha, & Vidyasagar en 2013 se suspendi 1mL de muestra en 10
mL de agua destilada, para despus ser agitada y filtrada. Del resultante, se tom 0.1 mL de cada
muestra y se sembr por extensin en una placa de petri con agar nutritivo, y mezclas de agar con
sales minerales y distintas concentraciones de fenol, creando as un cultivo de enriquecimiento,
que promueve la aparicin de microorganismos degradadores de fenol. Adems, el fenol es un
compuesto que inhibe el crecimiento de una gran cantidad de microorganismos, como hongos y
bacterias, a ciertas concentraciones (Pizzolitto, et al., 2015). Todas las placas de petri fueron
incubadas a 37C por una semana.
Las colonias que crecieron inicialmente en el medio con fenol, se re-sembraron mediante
diluciones en placas de MSAM con la misma concentracin de fenol, de esta forma se obtienen
cultivos axnicos ya que se realizan diluciones que contienen clulas de los microorganismos
aislados, y se selecciona el de mayor dilucin. Las muestras aisladas que mostraron un
crecimiento consistente en el medio, fueron seleccionados para ms estudios.

Las bacterias aisladas fueron caracterizadas con base a sus propiedades morfolgicas, fisiolgicas
y bioqumicas. Basadas en esas propiedades las dos bacterias que presentaron mayor capacidad
de degradacin del fenol fueron identificadas de acuerdo al manual Bergey de Bacteriologa
Determinativa.
Un total de 65 aislamientos de bacterias fueron obtenidos de diferentes muestras recolectadas de
distintos lugares. Todos los aislados fueron capaces de usar el fenol como nica fuente de carbono
y energa. Entre los aislados, dos de ellos mostraron ms de 1200 mg/L de degradabilidad del
fenol, resultando ser los ms eficientes. Como se mencion anteriormente, el fenol en altas
concentraciones es txicos para microorganismos, plantas y animales incluyendo el ser humano. A
pesar de los mtodos qumicos y fsicos que se usan actualmente, la degradacin microbiolgica
de los cenobticos txicos est ganando importancia. Los dos microorganismos aislados que
resultaron ser ms eficientes para el proceso de degradacin del fenol fueron el PVK-12 y el PVK26. De esta forma, la degradabilidad del fenol de esos microorganismos puede ser mantenida y
usada en tratamientos a gran escala.
En conclusin, la importancia del conocimiento de los procesos de aislamiento, seleccin e
identificacin de bacterias, es muy amplia. Actualmente en la gran mayora de las industrias se
utiliza algn procedimiento en el que se involucren los microorganismos, y como se mencion en el
anlisis del artculo, no es importante nicamente para la fabricacin de nuevos productos, sino
que tambin se pueden utilizar para la limpieza y restauracin de la contaminacin que se genera
despus de los procesos de produccin industriales.

Referencias
Madigan, M., Martinko, J., Dunlap, P., Clark, D. (2009) Brock. Biologa de los microorganismos.12a.
edicin. Madrid, Espaa: Pearson Educacin. Pp. 724-726.
Prescott, L., Harley, J. & Klein, D. (2004). Microbiologa (5 edicin). Madrid, Espaa: McGraw-Hill.
P. 114
Pizzolitto, R., Barberis, C., Dambolena, J. Herrera, J., Zunino, M. Magnoli, C., Rubinstein, H.,
Zygadlo, J., Dalcero, M. (2015) Inhibitory Effect of Natural Phenolic Compounds on Aspergillus
parasiticus Growth. J. Chem 2015 (2015).
Gilmore,

D.

(s.f).

Enrichment

Culture.

Delta

State

University.

Recuperado

de:

http://www.clt.astate.edu/dgilmore/Research%20students/enrichment_culture.htm el 3 de Mayo del

2016.
Kotresha, D. & Vidyasagar, G. Isolation of phenol degrading bacterial strains from industrial
effluents in India. Int. J. Bioassays, 2013, 02 (12). Pp. 1608 1611.