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Biotecnología Ambiental

PROYECTO INTERCICLO

BIOINSECTICIDAS MICROBIANOS

BIOTECNOLOGÍA AMBIENTAL

Ámbar Urgiles, Paula Jarrín, Nicole Navas, Oscar Arana

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Biotecnología Ambiental

1. INTRODUCCIÓN

Uno de los resultados de la biotecnología agrícola es el impulso de la industria de los bioinsecticidas,

los cuales tienen como objetivo primordial proteger al ambiente y mejorar la calidad de los alimentos.
Esta industria considera el uso de agentes microbianos de control o entomopatógenos (bacterias,
hongos, virus, protozoarios y nemátodos), organismos entomófagos (depredadores y parasitoides),
compuestos orgánicos, así como organismos y plantas transgénicas para el control de insectos plaga.
Los bioinsecticidas son productos que contienen a este tipo de entomopatógenos como ingrediente
activo, o bien metabolitos del microorganismo que se extraen mediante procedimientos que no alteran
su composición. Estos productos han demostrado su actividad tóxica para el control de plagas, causan
un daño mínimo al ambiente, no dejan residuos tóxicos en alimentos y no son un factor de riesgo para
cáncer o alteraciones neurológicas en humanos. (García, 2008)

El primer bioinsecticida disponible comercialmente, se produjo en la década de 1930 y desde entonces

se han producido muchos bioinsecticidas, la mayoría de los cuales son hongos hifomicetos
entomopatógenos. (Cupe & Delgado, 2021)

Dentro de los bioinsecticidas microbianos se destacan varios agentes biológicos con propiedades
únicas y altamente especializadas. Entre ellos, los hongos entomopatógenos como Beauveria
bassiana y Metarhizium anisopliae han llamado la atención por su capacidad para infectar y controlar
plagas específicas. Estos hongos actúan penetrando el exoesqueleto del insecto, provocando una
infección sistémica y, en última instancia, la muerte del huésped. Por otro lado, las proteínas
cristalinas producidas por bacterias del género Bacillus, lideradas por Bacillus thuringiensis, son
tóxicas para las larvas de diversos insectos. Estas soluciones microbianas no sólo ofrecen una
alternativa eficaz al control de plagas, sino que también tienen un menor impacto ambiental y menos
potencial de resistencia que los pesticidas químicos tradicionales. En este contexto, exploraremos en
profundidad técnicas, su uso en la actualidad y ventajas y desventajas específicas de los
bioinsecticidas microbianos.
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2. TÉCNICAS QUE INTERVIENEN INVOLUCRADAS EN LA ELABORACIÒN DE

BIOINSECTICIDAS MICROBIANOS

Aislamiento y Cultivo de Microorganismos

Identificaciòn del Lugar de Muestreo

Para la realización de cualquier tipo de muestreo, previamente se debe elaborar un plan de
muestreo que contenga la información y programación relacionada con los objetivos del
muestreo. Para el plan del muestreo de suelos, es necesario definir claramente los objetivos
que permitan un óptimo proceso de levantamiento de la información necesaria para la
descripción del sitio. (Zamora Rodríguez, 2005)

Aislamiento bacteriano

Es la separación de un determinado microorganismo del resto de microorganismos que le

acompañan. El método más usual es la siembra por estrés sobre un medio de cultivo sólido
adecuado dispuesto en una placa de petri.Para ello se toma una pequeña cantidad de muestra
con un asa de platino y se reparte sobre la superficie del medio de cultivo. Sobre el medio
quedan separadas e inmovilizadas las células bacterianas. Tras la incubación en condiciones
adecuadas, cada célula viable origina una colonia visible resultado de sucesivas divisiones
celulares. Cada colonia bacteriana tiene unas características determinadas en cuanto a su
forma, borde, elevación, tamaño , consistencia, etc. Los tipos de bacterias presentes en la
muestra original son visibles como tipos diferentes de colonias. A partir de colonias
separadas suficientemente es posible obtener un cultivo puro de cada uno de los tipos de
bacterias presentes en la muestra original.(Corrales & Mishel, 2021)

Identificación de la cepa Microbiana.

La identificación bacteriana se realiza mediante características fenotípicas que son
características observables por el operador como la morfología, desarrollo y propiedades
bioquímicas y metabólicas de la bacteria. Además, existen metodologías moleculares en la
cual su identificación es mucho más exacta permitiendo conocer la naturaleza del
microorganismo. (Yamamoto, 2022)

Identificación Fenotípica
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Las observaciones fenotípicas se los puede apreciar a través de un microscopio en la cual se

observa el color, forma, tamaño y textura, el microscopio ayuda a la observación de la
morfología celular del microorganismo de esta manera se puede lograr identificar la identidad
de la bacteria. Este método es una forma más convencional para la identificación
microbiana.Bacillus thuringiensis es una bacteria Gram Positiva entomopatógena utilizada
como pesticida ya que producen múltiples proteínas que funcionan como insecticidas
teniendo una especificidad altamente selectiva de cada proteína en relación con determinados
insectos.Esta bacteria se la encuentra en suelos ricos en materia orgánica, otros factores como
la el pH del suelo y humedad. (Corrales & Mishel, 2021)

Pruebas Bioquímicas
Son usadas para analizar la actividad metabólica del microorganismo. En estos procesos la
intervención de la fermentación, producción de enzimas específicas y otras características
bioquímicas distintas ayudan a la identificación de los microorganismos.(Vázquez et al.,
2010)

Pruebas Moleculares
Microorganismos no siempre muestran una característica específica ya que una cepa puede
llegar variar ciertas características, dificultando así la identificación real de dicho
microorganismo. Los ensayos moleculares aportan un alto porcentaje de significancia para la
identificación del mismo, codificando la variedad de genes procedentes del microorganismo
teniendo resultados más exactos.(Corrales & Mishell, 2021)

Cultivo y Fermentación
Los medios de cultivo pueden ser clasificados teniendo en cuenta criterios muy diversos.
Hasta el momento, no existe una clasificación única; sólo algunos autores o casas comerciales
coinciden en las clasificaciones más sencillas, basadas, por ejemplo, en el estado físico
(sólidos, semisólidos o semilíquidos y líquidos), o en la escala en que se emplean (de
laboratorio o industriales). (Rodríguez & Martínez, 2016)

SEGÚN LA PROMOCIÓN DEL CRECIMIENTO DE DETERMINADOS

MICROORGANISMOS

De enriquecimiento: Por lo general son medios líquidos, pudiendo ser semisólidos en algunos
casos, que contienen sustancias que estimulan el crecimiento de los microorganismos y
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permiten el desarrollo de la población microbiana a partir de un número reducido de células

de determinados gérmenes que pueden encontrarse en presencia de otros que, hallándose en
condiciones favorables, pudieran frenar el desarrollo de los primeros. (Rodríguez &
Martínez, 2016,)
Selectivos: En su mayoría son sólidos, contienen sustancias que inhiben el crecimiento de
determinados microorganismos, o sea, previene el crecimiento de especies acompañantes
indeseables.(Rodríguez & Martínez, 2016,)
Electivos: Toleran el crecimiento de varias especies de microorganismos y a la vez facilitan
la identificación de colonias de interés, garantizándoles los nutrientes mínimos necesarios
para su desarrollo.(Rodríguez & Martínez, 2016,)

Aislamiento de la cepa microbiana

El aislamiento de cepas del microorganismo y su caracterización constituyen pasos
importantes para la obtención de un biopreparado, pues permiten la selección inicial de cepas
que tengan características adecuadas para la estimulación del crecimiento. El aislamiento
microbiano se realiza cuando yo deseo obtener más replicación es de una misma cepa con
características definidas para la multiplicación de más microorganismos que conserven las
características elegidas.

3. INVESTIGACIÓN 1
“EVALUACIÓN DE TRES BIOINSECTICIDAS ENTOMOPATÓGENOS PARA EL CONTROL
DE GUSANO COGOLLERO (Spodoptera frugiperda) DEL CULTIVO DE MAÍZ (Zea mays), EN
CONDICIONES CONTROLADAS”

● Área de aplicación

El maíz es uno de los principales granos en el Ecuador, pues tiene un significado vital para
los pueblos indígenas. Es uno de los principales productos agrícolas de mayor consumo por
ser parte de la dieta diaria de la población del país y como fuente de alimento concentrado
como el balanceado para la cría de animales.

La provincia de Los Ríos posee un gran número de agricultores que se dedican a este cultivo,
y son muchos los daños que hacen estas plagas, en especial el gusano cogollero (Spodoptera
frugiperda) afectando directamente al rendimiento del cultivo. (Jaén & Avilés, 2020)
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El gusano cogollero afecta al maíz desde que es pequeño y no lo deja desarrollar,se lo va

comiendo desde adentro o bien otros empiezan por fuera, ya depende de su tamaño si logran
perforar todas las hojas hasta encontrarse con la mazorca y esconderse en ella también. Si
estas larvas no son controladas podrían significar gran perdida dentro del cultivo y por ende
gran pérdida económica para los agricultores.

● Finalidad

El presente trabajo tiene como finalidad aplicar bioinsecticidas en el control del gusano
cogollero en condiciones controladas y seleccionar la dosis y bioinsecticidas eficaces en el
control de plagas. (Jaén & Avilés, 2020)

Sabemos que la mayoría de pesticidas son químicos y estos al usarse constantemente afectan
a la fauna benéfica para el propio cultivo, sin mencionar lo malo que es para la salud humana
y animal y el desequilibrio biológico que provoca, es por eso que se busca una solución al
mismo problema que en este caso es el gusano cogollero, pero desde distintos enfoques o
microorganismos, y esto para determinar cual es más efectivo y de igual forma determinar su
dosis eficaz.

● Proceso

Se realizó un diseño al azar con un arreglo factorial 3x3 en 3 repeticiones. Los tratamientos se realizó
utilizando bioinsecticidas con la dosis recomendada.

A. Bioinsecticidas
a. Beauveria bassiana
b. Metarhizium anisopliae
c. Bacillus thuringiensis
B. Dosis
a. Alta (25 ccl-1 )
b. Media (20 ccl -1 )
c. Baja (15 ccl -1 )
C. Tratamientos
a. T1: Beauveria bassiana + Dosis Alta (25 ccl -1 )
b. T2: Beauveria bassiana + Dosis Media (20 ccl -1 )
c. T3: Beauveria bassiana + Dosis Baja (15 ccl -1 ) 23
d. T4: Metarhizium anisopliae + Dosis Alta (25 ccl -1 )
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e. T5: Metarhizium anisopliae + Dosis Media (20 ccl -1 )

f. T6: Metarhizium anisopliae + Dosis Baja (15 ccl-1 )
g. T7: Bacillus thuringiensis + Dosis Alta (25 ccl-1 )
h. T8: Bacillus thuringiensis + Dosis Media (20 ccl-1 )
i. T9: Bacillus thuringiensis + Dosis Baja (15 ccl-1 )

Se registra la mortalidad de los insectos muertos en los tratamientos a las 24, 48, 72, 96, 120, 144,
168, 192 horas despues de la aplicación de los diferentes bioinsecticidas con sus resspectivas dosis.

Se determina el porcentaje de eficiencia de los tratamientos utilizando el porcentaje de mortalidad de

las larvas, aplicando la fórmula de Schneider-Orelli

%MLT : Porcentaje de insectos muertos

%MLC : Porcentaje de insectos muertos en el control

● Resultado

Tabla 1.- Número de insectos muerto hasta las 24 horas

Fuente (Jaén & Avilés, n.d.)

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Tabla 2.- Número de insectos muertos hasta las 48 horas

Fuente (Jaén & Avilés, n.d.)

Tabla 3.- Número de insectos muertos hasta las 72 horas

Fuente (Jaén & Avilés, n.d.)

Tabla 4.- Número de insectos muertos hasta las 96 horas

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Fuente (Jaén & Avilés, n.d.)

Tabla 5.- Número de insectos muertos hasta las 120 horas

Fuente (Jaén & Avilés, n.d.)

Tabla 6.- Número de insectos muertos hasta las 144 horas

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Fuente (Jaén & Avilés, n.d.)

Tabla 7.- Número de insectos muertos hasta las 168 horas

Fuente (Jaén & Avilés, n.d.)

Tabla 8.- Número de insectos muertos hasta las 192 horas

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Fuente (Jaén & Avilés, n.d.)

Tabla 9.- Total de insectos muertos

Fuente (Jaén & Avilés, n.d.)

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Tabla 10.- Eficiencia de los bioinsecticidas

Fuente (Jaén & Avilés, n.d.)

● B. bassiana mostró el 72% de mortalidad sobre S. frugiperda, en cambio M. anisopliae y B.

thuringiensis obtuvieron mortalidades de 57 y 51% respectivamente.
● Las dosis de mayor control fue la dosis Alta (25 ccl-1 ) que registró 7 larvas muertas, con un
porcentaje del 72% de mortalidad.
● El entomopatógeno B. bassiana en dosis Alta (25 ccl-1 ) presentó la mayor tasa de mortalidad
con 9.00 insectos muertos, mostrando un porcentaje de control de 90%.
● La mayor eficacia la obtuvo el entomopatógeno B. bassiana en dosis Alta (25 ccl-1 ) con un
porcentaje del 89.63%, con lo cual controló el 90% de insectos en estudio.

4. ANÁLISIS DE VENTAJAS Y DESVENTAJAS

La clasificación de los bioinsecticidas de origen microbiano está clasificados a base de bacterias,

virus, hongos y parásitos; siendo el más destacado las bacterias, usado en un 60% para la elaboración
de los bioinsecticidas microbiológicos. (Cupe & Delgado, 2021)
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Aspecto Ventajas Desventajas

Efectividad Alta especificidad contra Puede que necesite condiciones

insectos objetivo ambientales específicas par ser
eficaz

Resistencia Poca probabilidad de desarrollo Algunas cepas pueden volverse

de resistencia en plagas menos efectivas con el tiempo

No toxicidad Baja toxicidad para humanos, A pesar de ser menos tóxicos,

animales, medio ambiente en algunos pueden ser riesgosos
general para ciertos organismos

Sostenibilidad Prácticas agrícolas más Más costosos de producir y

sostenibles con el medio aplicar que los insecticidas
ambiente químicos

Persistencia Biodegradables y tienen un La persistencia puede ser

impacto ambiental menor a menor por lo que podría
largo plazo requerir aplicaciones
frecuentes

Diversidad Existe gran variedad de La eficacia puede depender de

microorganismos que permiten la selección precisa de la cepa
abordar diferentes plagas y su compatibilidad con la
especie de plaga específica

Los bioinsecticidas microbianos ofrecen varias ventajas importantes como alternativa para el control
de plagas agrícolas. Su alta especificidad les permite atacar selectivamente a los insectos,
minimizando los impactos negativos en los organismos no objetivo y protegiendo la biodiversidad.
Esta selectividad también reduce la posibilidad de que las plagas desarrollen resistencia y superen las
limitaciones de los pesticidas químicos. Además, la baja toxicidad de estos bioinsecticidas para
humanos, animales y otros organismos no objetivo es esencial para la seguridad ambiental.
Promueven prácticas agrícolas sostenibles, reducen la dependencia de pesticidas químicos y
promueven un enfoque más equilibrado y respetuoso con el medio ambiente. La biodegradación de
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estas sustancias limita su persistencia en el medio ambiente, reduciendo así los riesgos a largo plazo
asociados a la acumulación de residuos. La diversidad de microorganismos disponibles proporciona
versatilidad al control de plagas, permitiendo adaptarse a diferentes condiciones y necesidades
agrícolas.

A pesar de estas ventajas, los bioinsecticidas microbianos no están exentos de problemas. Su eficacia
puede depender de condiciones ambientales específicas, limitando su utilidad en determinados
entornos. Además, la eficacia puede disminuir con el tiempo a medida que las plagas se adaptan, lo
que enfatiza la importancia de un manejo cuidadoso. Aunque algunos bioinsecticidas son menos
tóxicos, pueden representar un riesgo para ciertos organismos no objetivos y, a menudo, son más
costosos de producir y usar que los pesticidas químicos tradicionales, lo que genera desafíos
financieros para algunos agricultores. En resumen, los bioinsecticidas microbianos ofrecen una
alternativa valiosa y sostenible para el control de plagas, pero su eficacia depende de una cuidadosa
consideración de varios factores.
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References

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