Biocncer 1, 2004

PROLIFERACION TUMORAL
Pedro C. Lara Jimnez (1), Domingo Navarro Bosch (2) y Marta Lloret Sez Bravo (1)
(1)

Servicio de Oncologa Radioterpica

Hospital General de Gran Canaria Dr. Negrn
(2)

Laboratorio de Fisiologa
Centro de Ciencias de la Salud
Universidad de Las Palmas de Gran Canaria
Instituto Canario de Investigacin del Cncer (ICIC)

NDICE:
1.

CINTICA CELULAR
Ciclo celular
Apoptosis
Cuantificacin de la proliferacin y de la apoptosis

2.

CINTICA TUMORAL
Compartimentos celulares
Parmetros de cintica
Modelos de crecimiento

3.

CRECIMIENTO TUMORAL:
Heterogeneidad tumoral y metastatizacin

4.

BIBLIOGRAFA

1.

CINTICA CELULAR
1.1

Ciclo celular
Se denomina ciclo celular a la sucesin de eventos que tienen como resultado la

duplicacin del material gentico y la segregacin en dos copias que dotarn a las dos clulas hijas. El
ciclo celular se divide en cuatro fases: G1,S,G2 y M (Figura 1).
La fase G1 ( "Gap" o intervalo) sigue a una divisin celular y es previo a la replicacin del DNA.
Su duracin es de unas 6 horas. En esta fase se produce el crecimiento plstico de la clula,
incrementando su tamao, y desarrollando una situacin de sntesis continua de sus estructuras. En este
momento, las clulas toman su decisin de dividirse y por tanto de progresar a lo largo del ciclo celular
o bien entrar en estados alternativos como la diferenciacin o la quiescencia celular (Fase G0). En este
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Pedro Carlos Lara Jimnez et al.

punto denominado START o punto de restriccin R, la clula debe salir de G1 y entrar en fase S, para
iniciar la replicacin del DNA. La decisin de continuar con el ciclo celular, depende de que las
condiciones propias y ambientales sean adecuadas (nutrientes, factores de crecimiento, inhibidores,
contacto clula a clula, etc). En la fase S (Sntesis) se duplica el DNA y tiene una duracin de 6 a 8
horas. As, cada cromosoma pasa a tener dos molculas de DNA de cadena doble (cromtidas), la
original y la copia. En la fase G2 las clulas se preparan para la divisin celular. Tiene una duracin de
3-4 horas. Al final de la misma, se sita un segundo punto de decisin, previo al comienzo de la mitosis,
el punto de control G2-M. Su funcin es asegurarse de que el DNA no contiene errores y est preparado
para segregarse en la mitosis. Una vez superado este control, la clula entra en mitosis (M) que se
subdivide en 4 fases. Previamente, los cromosomas sufren un fenmeno de condensacin y se empieza
a formar el huso mittico a travs de la organizacin de los microtbulos en dos cuerpos polares. En la
profase desaparece la membrana nuclear, unindose los cromosomas a los microtbulos en la zona
central de la clula (metafase). Hacia el final de esta fase, se define otro punto de control (M), que
permitir continuar con la mitosis, solo si la disposicin de los cromosomas en el huso mittico es la
adecuada. En la anafase, las cromtidas se separan y migran hacia los polos celulares. Una vez estos son
alcanzados (telofase), la clula se divide por la zona central dando lugar a dos nuevas clulas.

Figura 1
Una gran variedad de protenas, controla y coordina el ciclo celular en clulas eucariotas. Las
principales son las quinasas dependientes de ciclina (Cyclin-Dependent Kinases "CDKs"), que consisten
en dos subunidades mayores, una cataltica y otra substrato (ciclina). Existen varios tipos de subunidades
catalticas, cuya actividad quinasa depende de su asociacin con las ciclinas. Esta actividad quinasa,
permite fosforilar protenas, lo que se traduce en cambios en la actividad o estructura de las mismas.
-2-

Existe tambin una gran variedad de ciclinas, que son necesarias en diferentes momentos del ciclo
celular, fluctuando por tanto sus niveles en las distintas fases. As algunas estn elevadas en fase
G1(ciclinas D y E), otras en G2/M o ciclinas mitticas (A y B). Estas variaciones en la formacin de
complejos CDK-ciclina, es la reponsable de cambios en la actividad de ciertas protenas, que promueven
la progresin del ciclo celular. As las ciclinas G1 se unen a CDKs durante G1 permitiendo el inicio de la
fase S, mientras que las ciclinas mitticas se unen a CDKs durante la fase G2, favoreciendo la entrada
en mitosis.
La regulacin de los diversos puntos de control es compleja. El proceso central en la regulacin
de este "restriction checkpoint"(punto de control de restriccin, R), es la fosforilacin o defosforilacin
de la protena codificada por el gen retinoblastoma (Rb). Cuando Rb est hipofosforilada, inhibe a E2F,
evitando que ste induzca la expresin de genes que regulan la sntesis de DNA. La fosforilacin de Rb
conlleva alteraciones, que impiden su unin y por tanto la inhibicin de E2F, quedando esta libre para
promover la sntesis de DNA.
El punto de restriccin R se regula por diversas CDKs, reguladas a su vez por inhibidores (CDKIs)
y otros moduladores. p21 CIP/WAF1, p27KIP1 y p57KIP2 inhiben tanto los complejos ciclina D-CDK4/6
como a los complejos ciclina E-CDK2 y ciclina A-CDK2 . p16INK4a, p15INK4b, p18INK4c y p19INK4d,
interfieren de forma ms selectiva sobre los complejos ciclina D-CDK4/6.
La sntesis de ciclina D es inducida por factores de crecimiento y disminuida por inhibidores de
la proliferacin. La formacin del complejo ciclina D-CDK4/6 provoca la fosforilacin de Rb (completada
posteriormente por ciclina E-CDK2), liberando a E2F. Adems el complejo ciclina D-CDK4/6, secuestra
los inhibidores de CDK2 (p21 CIP/WAF1, p27KIP1), lo que reduce el efecto inhibidor de estos CKIs sobre
ciclina E-CDK2, incrementando la capacidad de fosforilacin de CDK2 sobre Rb.
Es evidente que alteraciones que conlleven altos niveles de ciclinas (D,E), sobreactivacin de
CDK4/6 2 o prdidas de inhibidores de quinasas dependientres de ciclinas(CDKIs) como p16INK4a,
favorecern la progresin del ciclo celular mediante, la supresin de este punto de control. Otras
alteraciones en relacin con Rb que causaran este fenmeno, seran el secuestro de la protena por
oncoprotenas virales o la prdida (deleccin) del propio gen.
Otro gen central en la regulacin de este punto de restriccin es el gen p53. As, ante la
presencia de un dao en el DNA, p53 se acumula induciendo la expresin de p21 CIP/WAF1, lo que
conlleva el bloqueo de este punto de control R a travs de la inhibicin de los complejos ciclina D-CDK4/6
y complejos con CDK2. Una vez reparado el dao, p53 reinicia el ciclo mediante la sobreexpresin de
MDM2. Si el dao no es reparado, p53 induce apoptosis o muerte celular programada, entre otros
induciendo al gen proapopttico Bax.
Delecciones, mutaciones en el gen p53, secuestro proteico (infeccin HPV) etc, supondran por
tanto alteraciones de la progresin celular similares a las descritas previamente.
En la fase S, el complejo ciclina A-CDK2 induce cambios en la estructura del DNA, controlando algunos
aspectos de la sntesis de DNA.

-3-

Pedro Carlos Lara Jimnez et al.

Otro de los puntos de control es el llamado G2/M, cuya funcin principal es asegurar la integridad
del DNA, evitando la transmisin de mutaciones debidas a alteraciones cromosmicas. Su regulacin est
controlada por la ciclina B y la quinasa Cdc2/CDK1. Los complejos ciclina B1-Cdc2/CDK1 son activados
y translocados desde el citoplasma al ncleo favoreciendo la mitosis. La degradacin de la ciclina B en
la transicin metafase-anafase, provoca la inactivacin de Cdc2/CDK1 y la finalizacin de la mitosis. Las
clulas tumorales, suelen tener alterado este punto de control.
El punto de control M, evita los errores en la formacin del huso acromtico y de la placa
ecuatorial y asegura el adecuado reparto de material gentico entre las dos clulas hijas.
Todos estos puntos de control, permiten que la ordenada progresin a travs del ciclo celular,
se produzca cuando la integridad del material gentico est asegurada, permitiendo adems la influencia
de seales externas. La activacin de estos controles y la subsequente detencin del ciclo celular,
permite evitar la progresin de clulas con daos en el DNA. Estos daos pueden ser causados por
factores externos (drogas,radiaciones etc,) o por causas propias de la clula (reordenamientos genticos,
DNA parcialmente degradado por accin de nucleasas, acortamiento de los telmeros ("envejecimiento
celular"). La progresin de clulas con daos graves, dar lugar a la inestabilidad gentica y la
adquisicin por parte de la clula de caractersticas oncognicas.
En general la proliferacin celular est sometida a la presencia de factores externos (factores
de crecimiento, interacciones con otras clulas, nutrientes, etc). Los factores de crecimiento son
generalmente protenas, que actan mediante uniones de alta afinidad a estructuras moleculares
especificas presentes en la membrana celular, llamadas receptores. Estos factores de crecimiento pueden
ser inductores (en su gran mayora) o supresores (TGFb) de la proliferacin celular, a travs de la
promocin de la diferenciacin celular, la movilidad y la adhesin celular entre otros.
Los factores de crecimiento producidos por las clulas, actan sobre otros elementos celulares por
mecanismo endocrino (clulas situadas a distancia), mecanismo paracrino (clulas adyacentes) o por
mecanismo autocrino (sobre s misma). De forma sucinta, una vez unido el factor de crecimiento a su
receptor, se inicia una cascada de procesos bioqumicos denominada sistema de transduccin de seales,
que permite la llegada de esta seal proliferativa hasta el ncleo, donde, por ejemplo, por induccin de
la expresin de Ciclina D, se favorece la proliferacin celular.
Los receptores de factores de crecimiento tienen 3 zonas o dominios importantes.

extracelular, que permite la unin con el ligando (factor de crecimiento), lo que induce
la dimerizacin del receptor.

transmembranal, que sirve de anclaje en la membrana

-4-

Proliferacin Tumoral

citoplasmtico, que tiene capacidad quinasa, fosforilando aminoacidos propios

(mayoritariamente de tirosina, tirosin-quinasas) autofosforilndose o transfosforilndose,
e induciendo nuevas fosforilaciones en protenas que se unen a sus residuos de tirosina
fosforilados. Estas protenas tienen a su vez actividad quinasa, consiguiendose la
transmisin de la seal (amplificada y diversificada) hasta el ncleo, a travs de la
activacin sucesiva y posterior translocacin nuclear de algunas de estas
proteinquinasas. Este sistema de transduccin de seales, induce la expresin de
mediadores de la proliferacin celular.

1.2

Apoptosis
Debe existir un balance entre proliferacin y muerte celular, de forma que el tejido no

crezca indefinidamente. Este tipo de muerte celular, se debe a la decisin de la propia clula de morir,
tambin llamada apoptosis, muerte genticamente programada, o "suicidio celular". Es por tanto un
mecanismo de indudable importancia, en el modelado de nuestro organismo (periodo embrionario) y en
el mantenimiento adecuado de nuestras funciones. Este proceso se debe a la activacin de mecanismos
especficos regulados por decenas de genes. De forma sucinta, la presencia de un dao en el DNA induce
la sobreexpresin de p53, que detiene el ciclo celular. Si el dao no es reparado, p53 induce la expresin
de Bax, un gen de la familia de BCL-2 con la que comparte gran parte de su estructura, y con la que
puede forma heterodmeros. Si Bax predomina, la clula entrar en apoptosis. Si BCL-2 predomina, la
clula entrar de nuevo en ciclo, portando graves defectos en su DNA, que puede comportar la
adquisicin de capacidades oncognicas. La regulacin de este fenmeno es mucho ms compleja, pero
se mantiene una estructura fina de genes inductores e inhibidores de la apoptosis. La caracterstica
fundamental de la apoptosis es la rotura del DNA en fragmentos homogneos de aproximadamente 180
pares de bases.
La muerte celular debida a deprivacin de nutrientes, agentes txicos etc, tienen unas
caractersticas distintas y se denomina necrosis.

Apoptosis

Necrosis

Programada genticamente y selectiva

Accidental, no programada, no selectiva

No inflamacin

Reaccin inflamatoria

Encogimiento y fragmentacin celular

Aumento del volumen y ruptura celular

Organelas intracelulares no alteradas

Ruptura de organelas intracelulares.

Fragmentos homogneos de ADN

Fragmentos de ADN heterogneos

Tabla 1. Caractersticas diferenciales de la apoptosis y la necrosis

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Pedro Carlos Lara Jimnez et al.

1.3

Cuantificacin de la proliferacin y de la apoptosis

La estimacin de la capacidad proliferativa de los tumores y de la expresin del

fenmeno apopttico, no es una cuestin balad. Existe una correlacin entre apoptosis y proliferacin
en tejidos sanos, pero tambin en tumores (Figura 2). Una mayor tasa de proliferacin se ha asociado
con peor pronstico en la mayora de los tumores, y una peor respuesta a los tratamientos oncolgicos
con quimioterapia y radioterapia. As mismo, el porcentaje basal de clulas apoptticas o la capacidad
de inducir la muerte celular por diversos tratamientos, han demostrado un relevante papel pronstico
y predictivo de respuesta a tratamientos oncolgicos.

MAMA

Prez, Tesis 1998

Figura 2

Existen diversas tcnicas para estimar la extensin de la expresin de estos fenmenos en los
tumores, algunas de las cuales describimos de forma resumida. As, en laminillas diagnsticas, teidas
con hematoxilina eosina, puede realizarse el recuento de mitosis y clulas apoptticas, lo que permitir
informacin aproximada de acerca de estos fenmenos en un paciente concreto. (Figura 3).
Sin embargo, las clulas proliferativas, no siempre estn en mitosis, y por otra parte hay clulas
apoptticas, en las que an no se han hecho visibles los cambios morfolgicos que requieren su
diagnstico de visu. De esta forma se utilizan tcnicas de inmunohistoqumica, que en principio
permitiran mejorar estos aspectos de deteccin, a la vez que podran hacer mas objetiva su evaluacin.
-6-

Proliferacin Tumoral

La inmunotincin con Ki67 permite detectar todas las clulas en ciclo celular, por lo que podra ser una
buena medida de la fraccin de crecimiento (Figura 4). Los ensayos TUNEL, que marcan la incorporacin
de bases nitrogenadas en el DNA fragmentado permitiran detectar precozmente la apoptosis.

Figura 3

Figura 4

-7-

Pedro Carlos Lara Jimnez et al.

Sin embargo, estas tcnicas de inmunohistoqumica permiten la evaluacin de un nmero

limitado de clulas. La utilizacin de citometra de flujo favorece el anlisis de miles de clulas en
espacios de tiempo corto. Tanto la proliferacin, estimada a partir del porcentaje de clulas en fase S,
como la apoptosis estimada mediante la tincin con yoduro de propidio y annexina V, son tcnicas
adecuadas de medida. Es posible realizar tcnicas mas complejas de biologa molecular o hibridacin in
situ.
2.

CINTICA TUMORAL
2.1

Compartimentos celulares:

Fraccin de crecimiento. Es el porcentaje de clulas proliferativas, en ciclo

celular. Representa por tanto, la proporcin de clulas del tumor que contribuye
al crecimiento del mismo. El tamao de la fraccin de crecimiento vara en un
mismo tumor, en funcin de las condiciones ambientales, acceso a nutrientes,
oxigenacin, etc. Estas condiciones estn directamente realacionadas entre
otros aspectos, con el volumen tumoral y por ende la distancia a los capilares
nutricios. As el tamao de la fraccin de crecimiento es inversamente
proporcional al volumen tumoral.

Clulas en fase G0

Clulas
proliferantes

Clulas estriles

Clulas muertas

Fig 5: Compartimentos celulares de un tejido

Fraccin de prdida celular. Es el porcentaje de clulas que pierde el tumor.

Entre las causas se encuentran la muerte celular, bien por apoptosis o necrosis
(falta de nutrientes y oxigenacin) y la mestatatizacin. Efectivamente la
presencia de un microambiente tumoral hostil, asociado a la presencia de
-8-

Proliferacin Tumoral

subclones tumorales con capacidad de mestatatizacin provocan la prdida

celular hacia otros rganos. La fraccin de prdida celular se incrementa de
forma proporcional con el volumen tumoral.

Fraccin de clulas quiescentes. Es el porcentaje de clulas que se

encuentran en fase G0, y que pueden ser reclutadas para entrar en ciclo celular,
si las circunstancias ambientales o la presencia de fuertes estmulos
proliferativos, as lo demandan.

Fraccin de clulas estriles o diferenciadas. Es el porcentaje de clulas

que no contribuyen al crecimiento tumoral.

2.2

Parmetros de cintica celular:

Tiempo de ciclo: es el tiempo que tarda una clula en completar un ciclo

completo, desde una mitosis a la siguiente. El tiempo de ciclo, muestra grandes
variaciones de unas poblaciones celulares a otras.

Tiempo de duplicacin: es el tiempo que tarda un tumor en duplicar su

volumen. Este tiempo de duplicacin, no es el mismo para todos los tumores,
ni se mantiene estable durante toda la vida del tumor. As cuando, el volumen
tumoral es pequeo, la accesibilidad a los nutrientes y al oxigeno, supondrn
unas mejores condiciones ambientales, por lo que la fraccin de crecimiento
ser grande y la fraccin de prdida celular y de quiescencia ser pequea.
Como consecuencia, el tiempo que tardar el tumor en duplicar su tamao, ser
corto. Sin embargo cuando el tumor ha incrementado su volumen, el
microambiente tumoral, ser peor, debido a la falta de nutrientes y oxigenacin
en grandes regiones del mismo, por lo que la fraccin de crecimiento ser
menor y las fracciones de prdida celular y quiescencia sern mayores. Como
consecuencia su tiempo de duplicacin ser mas largo.

2.3

Modelos de crecimiento
Gran parte de la vida de un tumor, discurre de forma subclnica. As clsicamente se ha

definido un "umbral de deteccin clnica" por debajo del cual la enfermedad tumoral, aunque presente
no es detectable por la exploracin clnica o las pruebas diagnsticas. De forma terica, es necesaria la
presencia de 109 clulas en el tumor, lo que correspondera a un centmetro de dimetro, para traspasar
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Pedro Carlos Lara Jimnez et al.

este umbral. Existen dos modelos de crecimiento, el exponencial y el gompertziano. 109 clulas es el
umbral de deteccin clnica.
En el modelo exponencial: la fraccin de crecimiento y el tiempo de

duplicacin permanecen constantes. (Figura 6).

109

Figura 6

En el modelo gompertziano: Los parmetros anteriores varan con el

volumen del tumor y el microambiente tumoral, es decir, que los tumores
pequeos crecen ms rpido, pero al aumentar el tamao, la fraccin de
crecimiento disminuye (por muerte celular, falta de "alimento", de O2....).
(Figura 7).

109

Figura 7

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Proliferacin Tumoral

3.

CRECIMIENTO TUMORAL
Los tumores son heterogneos. Si bien su origen es monoclonal (un tumor procede de una

misma clula), la constante promocin celular, permite la aparicin de mutaciones, que sobrepasando
los mecanismos de control, originan subclones celulares, con diferente carga gentica y expresin
fenotpica, constituyendose un tumor clnico de caracter policlonal. Estas subpoblaciones tienen
diferentes caractersticas: afinidad, capacidad de metastatizacin, expresin de fenotipo receptorial para
hormonas o factores de crecimiento, sensibilidad o resistencia a frmacos. Esta heterogeneidad tumoral
es una de las principales limitaciones en el diagnstico, estimacin del pronstico y efectividad de los
tratamientos de los cnceres en la prctica clnica diaria.(Figura 8).
El fenmeno que define la malignidad de un tumor es la aparicin metstasis. El proceso de la
mestatatizacin se inicia temprano, en la etapa de crecimiento subclnico de la enfermedad. No todos
los subclones que componen un tumor tienen igual tendencia a la metastatizacin. Esta heterogeneidad
tumoral, limitar, como ya hemos descrito, la posibilidad de control tumoral por tratamientos oncolgicos
e impedir la estimacin pronstica exacta para cada paciente concreto (Figura 9).

Metastasis

109

109

Figura 9

Figura 8

4.

BIBLIOGRAFA

1.

Abend M.Reasons to reconsider the significance of apoptosis for cancer therapy. Int J Radiat Biol. 2003
Dec;79(12):927-41.
Fridman JS, Lowe SW Control of apoptosis by p53. Oncogene. 2003 Dec 8;22(56):9030-40.
Kastan MB. Biologa Molecular del cncer: el ciclo celular. En En: VT DeVita, S Hellman, SA Rosenberg. Cancer: Principios
y prctica de oncologa (5 edicin). Lippincott-Raven. Philadelphia, 1997; 121-134.
Liang P, Pardee AB.Analysing differential gene expression in cancer. Nat Rev Cancer. 2003 Nov;3(11):869-76.
Perez S.Rivero L, Rey A, Santana C, Lara P Apoptosis en cncer de mama operable. Relacin con los receptores
hormonales, ki67,p53 y sobreexpresin de cerb-2 En Dorta J, Diaz-Chico BN, Blasco,Gutierrez A Ed;Oncologa Molecular
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2.
3.
4.
5.

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Pedro Carlos Lara Jimnez et al.

6.
7.
8.
9.

Oltvai ZN, Milliman CL, Korsmeyer SJ. Bcl-2 heterodimerizes in vivo with a conserved homolog Bax, that accelerates
programmed cell death Cell 1993; 74:609
Vermeulen K, Van Bockstaele DR, Berneman ZN.The cell cycle: a review of regulation, deregulation and therapeutic
targets in cancer. Cell Prolif. 2003 Jun;36(3):131-49
Yu J, Zhang L.Apoptosis in human cancer cells. Curr Opin Oncol. 2004 Jan;16(1):19-24.
Yamasaki L.Role of the RB tumor suppressor in cancer. Cancer Treat Res. 2003;115:209-39.

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