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Manual Laboratorio Genetica
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UNIVERSIDAD AUTNOMA
BENITO JUAREZ DE OAXACA
ESCUELA DE VETERINARIA Y ZOOTECNIA
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INDICE
1.- DETERMINACIN DE GRUPOS SANGUNEOS Y TITULACIN DE ANTISUEROS
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Fig. 1.- Antgenos que distinguen los grupos sanguneos (sistema ABO)
Es importante destacar que estos genes son codominantes. Los individuos que expresan
los alelos A y B tendrn oligosacridos con los dos tipos de modificaciones. As, se
distinguen 4 grupos: A, B, AB y O. La importancia transfusional de estos antgenos radica
en que los individuos de un grupo sintetizan anticuerpos frente a los oligosacridos que no
estn en sus hemates (Tabla 1). Estos anticuerpos, que se denominan isoaglutininas y que
suelen ser IgM, aparecen en grandes cantidades en circulacin sin necesidad de
exposicin previa a sangre de otros grupos. La razn parece estar en la reactividad cruzada
de sustancias presentes en bacterias de la flora intestinal.
Grupo sanguneo
Genotipo
Ag eritrocitarios
A
IAIA, IAi
A
B
IBIB, IBi
B
AB
AB
II
AyB
O
Ii
H
Tabla 1.- Grupos sanguneos, genotipo, antgenos y ab sricos
Ab sricos
Anti-B
Anti-A
Anti-A, Anti-B
Sistema Rhesus
Se han identificado ms de 40 antgenos del sistema Rh aunque no se sabe cuntos genes
son responsables de este sistema. Son protenas integrales de membrana con un
contenido lipdico alto. D es el antgeno Rh ms inmunognico y por tanto el ms
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Tubos de 10x70 mm
Pipetas de 5-40, 40-200 y 200-1000l y puntas
Lancetas de un solo uso.
% en la clase
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A
B
AB
O
Rh negativo
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Plasma 1
Plasma 2
Plasma 3
Plasma 4
Plasma 5
Titulacin
Dilucin:
Aglutinacin (++,
+, +/- ,- )
1/8
1/16
1/32
1/64
Eptopes
ABO se encuentran en muchas otras clulas aparte de los eritrocitos.
Se han descrito 11 subgrupos de A. Los ms importantes son A1 y A2. Las diferencias son
cuantitativas. Los hemates A1 tienen en membrana aprox. un milln de copias, mientras
que los A2 tienen 250 000.
Aproximadamente un 78% de los individuos A son A1 y 22% son A2. La sangre AB tambin
puede dividirse en tipos A1B y A2B. Los A o B dbiles darn aglutinacin con anti-AB pero
no con los otros antisueros. Aproximadamente el 1% de las muestras de sangre elegidas al
azar contienen aglutininas que pueden dar anormalidades en la determinacin de
anticuerpos sricos. Pueden ser anti-A1, anti-H, -anticuerpos, o sueros de mieloma que
producen roleaux o bien anticuerpos adquiridos por transfusiones o de origen materno en
nios. En otros casos los anticuerpos pueden no detectarse, por ejemplo en
inmunodeficiencias o en ancianos o en recin nacidos. En algunos individuos el gen H est
ausente. Este fenotipo h homozigtico se denomina Bombay. Los individuos de fenotipo
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Frecuencia (%) en
caucsicos USA
40
11
4
Frecuencia (%) en
asiticos USA
28
27
5
Frecuencia (%) en
negros USA
27
20
4
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O
Rh negativo
45
15%
40
Menor del 15%
49
Menor del 15%
ISOINMUNIZACIN Rh
La prevalencia de la formacin de Ab -Rh depende de la dosis de clulas recibidas. 1ml de
clulas sensibiliza al 15% de individuos expuestos, mientras que 250 ml sensibilizan al 6070%. Despus de la exposicin, tan pronto como a las 4 semanas, se detectan Ab IgM
dbiles, seguido de una conversin rpida a IgG. Una segunda exposicin a tan solo 0.03
ml de eritrocitos puede desencadenar una formacin rpida de IgG.
La enfermedad hemoltica del RN ocurre por paso de sangre del feto Rh+ a la madre Rh(durante el embarazo o durante el parto). Los Ab IgG pueden atravesar la placenta
produciendo la hemlisis de los eritrocitos fetales. Inmunizacin Rh se presenta en el 89% (16% segn Rosen) de las mujeres Rh- tras el parto del primer hijo Rh+ ABOcompatible y en el 1.5-2% (7% segn Rosen) cuando el hijo Rh+ es ABO-incompatible. La
inmunizacin Rh puede evitarse casi totalmente si se administra una dosis alta de anti Rh
(Rh Ig) a las 28 semanas de gestacin (300 g, que no elevan el ttulo de anti Rh materno
por encima de 1/4 y no daa al feto) y a las 72 horas del parto (o de la dosis
potencialmente sensibilizante de clulas Rh+). Una dosis de 300 g de Rh Ig
intramuscular previene la inmunizacin por exposicin a hasta 30 ml de clulas Rh+.
Puede utilizarse como profilaxis en casos de aborto o amniocentesis. La administracin de
Rh Ig a mujeres embarazadas no tiene efecto perjudicial para el feto. Una vez que el
individuo est inmunizado, la administracin de Rh Ig es ineficaz.
PREGUNTAS
Qu proporcin de tipos sanguneos encontr entre los integrantes del grupo? Cmo
explicara el resultado?
Cules son ttulos promedios para las aglutininas y , entre los integrantes del grupo?
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PRCTICA 2
PROCESOS GENTICOS. EXPRESIN GNICA EN PROCARIOTAS (OPERN)
I.- Introduccin
El objetivo de esta prctica es el de observar procesos clave del funcionamiento de
los seres vivos, como son, en primer lugar, respuestas de regulacin de la expresin gnica
frente a estmulos ambientales, concretamente la accin de un inductor sobre una serie
de genes bacterianos organizados en un opern. En segundo lugar, se estudiarn los
procesos destinados al crecimiento y reproduccin asexual (mitosis) o sexual (meiosis),
que, en organismos eucariotas conllevan una condensacin de los cromosomas y posterior
reparto de los mismos, tras un intercambio de material gentico en el caso de la meiosis.
La evolucin de la estructura de los cromosomas se puede seguir mediante tinciones
especficas y el uso del microscopio ptico.
II.- Induccin de genes nod de Sinorhizobium meliloti por flavonoides exudados por la
raz de alfalfa (Medicago sativa)
Las rizobiceas (rizobios) son un grupo muy heterogneo de bacterias que
comparten la caracterstica de establecer simbiosis fijadoras de nitrgeno atmosfrico con
leguminosas. Para establecer esta relacin, las bacterias han de encontrarse en las
inmediaciones de la raz de la planta (rizosfera) e interactuar con la misma, originando una
serie de reacciones en la planta que desencadenarn la formacin de un rgano mixto
nuevo, el ndulo simbitico, en el cual se proporciona un entorno controlado, as como
los nutrientes necesarios para que la bacteria pueda efectuar el proceso de fijacin de N2.
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Tomar dos tubos Eppendorf y aadir a cada uno de ellos 1mL del cultivo de
Sinorhizobium meliloti
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IV.- Preguntas
1. Qu se observa tras la incubacin?
2. Por qu tambin toma color azul la muestra sin luteolina?
3. Qu tipo de opern es el de los genes nod? Dibuja un esquema
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MITOSIS Y MEIOSIS
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Prctica
Se observar el proceso de mitosis en clulas del meristemo apical de la raz de
cebolla. Este tejido est formado por clulas indiferenciadas que se dividen
activamente. Para la observacin del proceso, se realizar una tincin previa del
material gentico, con orcena actica.
Mtodo
1.- Pretratamiento con HCl (8%)
- Cortar 2 cm de los extremos apicales de la raz
- Sumergir por 10 min., en HCl al 8%
- Secar los pices en papel secante
2.- Fijacin y tincin de la muestra
-cortar el extremo apical de la raz y colocarlo sobre un vidrio de reloj.
- aadir gotas de orcena hasta cubrir la raz.
- calentar el vidrio de reloj hasta observar vapor blanco.
Cuidar que nunca se seque la raz.
- dejar enfriar durante 5 min y repetir la operacin.
- dejar enfriar 10 min.
3.- Preparacin de la muestra.
- colocar el meristemo teido sobre un portaobjetos.
- cortar en 5-6 trozos con un bistur.
- aadir una gota de orcena fresca y colocar un cubreobjetos.
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Metafase I: las ttradas se alinean en el ecuador de la clula. Las fibras del huso se
enlazan al centrmero de cada par homlogo y los eventos subsiguientes son similares a
la mitosis.
Anafase I: las ttradas se separan y los cromosomas son arrastrados a los polos opuestos
por las fibras del huso. Los centrmeros en la Anafase I permanecen intactos.
Telofase I: es similar a la de la mitosis, salvo que al final cada clula slo posee un grupo
de cromosomas replicados. Dependiendo de la especie, se puede formar (o no) la nueva
membrana nuclear. Algunos animales pueden dividir sus centrolos durante esta fase.
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Profase II: la membrana nuclear (si se form durante la Telofase I) se disuelve, y aparecen
las fibras del huso, al igual que en la profase de la mitosis.
Metafase II: es similar a la de la mitosis, con los cromosomas en el plano ecuatorial y las
fibras del huso unindose a las caras opuestas de los centrmeros, en la regin del
cinetocoro.
Anafase II: el centrmero se divide y las cromtidas, ahora cromosomas, son segregadas a
los polos opuestos de la clula.
Telofase II: es idntica a la Telofase de la mitosis. La citocinesis separa a las clulas.
La consecuencia de la meiosis es la formacin a partir de una nica clula diploide (2n
cromosomas), de cuatro distintas con un nmero cromosmico n (haploide).
Prctica
Se observarn las diferentes fases de la meiosis tras teir con orcena lacto-propinica
preparaciones obtenidas por aplastamiento a partir de testculos de ortpteros,
clsicamente empleados para estudios citogenticos debido a que estas especies son de
fcil adquisicin y mantenimiento en el laboratorio. Adicionalmente, poseen un nmero
reducido de cromosomas de gran tamao y se pueden distinguir con facilidad las
diferentes etapas de la meiosis. En el tbulo seminfero de ortpteros las clulas que
cursan la espermatognesis se encuentran en grupos denominados CISTOS. Todas las
clulas que componen un mismo cisto son sincrnicas, es decir, estn en el mismo estadio
de la meiosis por lo que resulta relativamente fcil visualizar las distintas etapas meiticas
en una misma preparacin.
Mtodo
1. Tincin de la muestra
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2. Preparacin de la muestra
- Colocar sobre el tbulo un cubreobjetos y utilizando la punta de un lpiz y
con presin muy suave dispersar el material.
- Con un trozo de papel de filtro, eliminar la orcena que ha rebosado por los
laterales del cubreobjetos y, con cuidado de no moverlo, realizar el aplastado
presionando fuertemente con el dedo pulgar sobre una superficie plana.
- Observar la preparacin
Preguntas
1. Por qu no es necesario en este caso calentar la muestra durante la
tincin con orcena?
2. Cuntos cromosomas tiene el saltamontes Corthippus jucundus macho?
3. Adems de las fases de la meiosis, qu otros procesos se observan?
4. Se aparean todos los cromosomas durante la profase I?
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II.- MATERIAL
- Portaobjetos
- Agarosa
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