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Capitulo 8
Capitulo 8
8.1.
INTRODUCCIN
El uso de clulas vivas para la produccin de productos qumicos crece
anualmente con ritmos asombrosos. Tanto microorganismos (bacterias, hongos, algas) como
clulas humanas, vegetales o animales se utilizan para la produccin varios productos
qumicos, como por ejemplo insulina, antibiticos, biosurfactantes. Son responsables
tambin de la produccin de alcohol va fermentacin, produccin de quesos, vinos,
champagne, etc. Tambin los procesos biolgicos son muy usados en el tratamiento de
residuos y efluentes.
8.2.
celular en dos grandes grupos: eucariotas y procariotas (ver Figura 8.1). Las clulas
eucariotas son considerablemente ms grandes que las procariotas, pero adems de esta
tienen otras diferencias en la estructura intracelular. Las clulas eucariotas tienen un ncleo
bien definido que est rodeado por una membrana para proteger las molculas de DNA que
constituyen el material gentico. Por otro lado, las clulas procariotas tienen una regin
nuclear que no est rodeada por una membrana y que contiene una nica molcula de DNA.
Las eucariotas a su vez se dividen en organismos multicelulares (donde las clulas tienen
funciones especficas) y los organismos unicelulares (donde todas las clulas llevan a cabo
la misma funcin). Las eubacterias y las archaebacteria tienen una qumica celular
diferente. Las primeras incluyen a la mayora de las bacterias que son usadas en los
tratamientos biolgicos, la mayora de los organismos que viven en el aire y agua y la
mayora de los organismos patgenos de humanos y otros mamferos. Las archaebacteria
incluyen algunas especies anaerbicas, como tambin algunas otras que viven en
condiciones extremas (alta temperatura, bajo PH, etc.). Las eubacterias y archaebacteria se
refieren simplemente como bacterias.
8.1
Captulo 8
Organismos Vivos
Procariotas
Eubacteria
Eucariotas
Arquibacteria
Organismos Unicelulares
(protozoo, algas, hongos)
Organismos Multicelulares
(animales, plantas)
Los virus son un grupo de partculas no vivientes que estn ntimamente relacionadas
con los organismos vivos. No tienen estructura celular y no pueden llevar a cabo tareas
metablicas, de reproduccin u otro tipo de actividad. Los virus son parsitos que necesitan
infectar clulas vivas para convertirse en activos y reproducirse
8.3.
nica libre. Esta definicin hace que dentro de los microorganismos se encuentren tanto las
clulas procariotas como los organismos unicelulares de las eucariotas.
8.3.1. Bacterias
Las bacterias tienen tres formas generales: esfrica, bastn y espiral. Un dibujo
simplificado de una clula bacteriana se presenta en la Figura 8.2. Las bacterias tienen una
capa en alguna medida "desorganizada" que est compuesta por polisacridos y es
conocida como cpsula. Tienen tambin una pared rgida y una membrana que encapsula el
citoplasma donde ocurren las reacciones. El ncleo contiene los componentes genticos de
la clula. La mayora de las bacterias pueden moverse y lo hacen con el flagelo. El tamao
de las bacterias depende de la etapa de crecimiento en la que se encuentren. Una clula que
no ha tenido nutrientes suficientes puede ser tan chica como 0.2 m de dimetro. Sin
embargo las bacterias de laboratorio tienen un dimetro que oscila entre 0.5 y 1.0 m,
mientras que las del tipo bastn son de 0.5 x 3 m.
8.2
Captulo 8
Cpsula
Membrana
Inclusin granular
Flagelo
Pared
Citoplasma
Plasmid
Regin nuclear
Las bacterias se clasifican en las aerbicas (que necesitan oxgeno para vivir) y las
anaerobias (que crecen slo en ausencia de oxgeno).
Algunas bacterias son capaces de formar endoesporas (esporas dentro de la clula).
Las bacterias pasan a este estado cuando las condiciones de crecimiento le son muy
adversas, es una tcnica de supervivencia. Cuando las condiciones de crecimiento mejoran,
vuelven al estado vegetativo. Las esporas son muy resistentes al calor y no son muy fciles
de destruir con radiacin o agentes qumicos.
8.3.2.
Hongos
Los hongos, que no se pueden mover, pueden utilizar material orgnico e inorgnico
para crecer. Entre los hongos ms conocidos cabe mencionar: las levaduras, moho y hongos
comestibles.
Respecto a las bacterias los hongos son menos numerosos, crecen a velocidades
relativamente ms lentas, y los procesos metablicos que pueden desarrollar son ms
restringidos. Suelen ser ms tolerantes a los medios cidos pero ms sensitivos al contenido
de humedad.
8.4.
LA CLULA BACTERIANA
8.4.1. Composicin qumica de las clulas
La composicin de las clulas bacterianas depende del tipo de bacteria. En la tabla
8.3
Captulo 8
Porcentaje
Funcin fisiolgica
en peso seco
Carbono
50
Oxgeno
20
Nitrgeno
14
Hidrgeno
Fsforo
Azufre
Potasio
Sodio
Calcio
0.5
Magnesio
0.5
Cloro
0.5
Hierro
0.2
Elementos traza
0.3
8.4
Captulo 8
Composicin elemental
Candida utilis
CH1.83O0.46N0.19
Klebsiella aerogenes
CH1.75O0.43N0.22
Saccharomyces cerevisiae
CH1.82O0.58N0.16
Escherichia coli
CH1.94O0.52N0.25P0.025
Pseudomonas fluorescens
CH1.93O0.55N0.25P0.021
Aerobacter aerogenes
CH1.83O0.55N0.26P0.024
Penicillium chrysogemun
CH1.64O0.52N0.16
Aspergillus niger
CH1.72O0.55N0.17
Promedio
CH1.81O0.52N0.21
8.5
Captulo 8
Inumerable
1 ml
1 ml
1 ml
1 ml
1 ml
1 ml
1 ml
99 ml
99 ml
Dilucin
1:100
Dilucin
1:10000
9 ml
9 ml
Dilucin
1:100000
Dilucin
1:1000000
8.5.
CRECIMIENTO DE BACTERIAS
.La mayora de las bacterias se reproducen por medio de una fisin binaria (ver
Figura 8.4).
8.6
Captulo 8
El tiempo que tardan en formarse 2 clulas de una clula comn se llama tiempo de
generacin, pero como coincide con el tiempo en que se duplica el nmero de clulas se
denomina tambin tiempo de duplicacin. Este tiempo vara significativamente segn la
especie bacteriana y segn las condiciones del medio de cultivo. En la Tabla 8.3 se
presentan tiempos de duplicacin para distintas especies en medios complejos a las
temperaturas ptimas de crecimiento.
Temperatura, C
Tiempo de duplicacin, h
Vibrio natriegens
37
0.16
Bacillus stearothermophilus
60
0.14
Escherichia coli
40
0.38
Bacilus subtilis
40
0.43
Pseudomonas putida
30
0.75
Vibrio marinus
15
1.35
8.6.
de las clulas (ver Tabla 8.2). Sin embargo, la presencia de nutrientes en cantidad
adecuada no es suficiente, los nutrientes deben estar tambin en un estado adecuado para
su asimilacin.
Los medios de cultivo pueden ser medios sintticos o complejos. Los medios
sintticos son aquellos que tienen una composicin qumica bien definida. Los medios
8.7
Captulo 8
8.6.2.
PH
8.6.3. Temperatura
La temperatura es uno de los factores ambientales ms importantes que afectan al
crecimiento y a la supervivencia de los microorganismos. Las especies bacterianas crecen
generalmente bien en rangos estrechos de temperatura. Las bacterias mesfilas crecen
bien entre 15 y 45C , siendo el rango ptimo entre 25 y 35 C. Las psycrfilas
se
desarrollan adecuadamente debajo de los 20C. Las termfilas tienen un buen desarrollo
ln de la velocidad de crecimiento
entre 45 y 65 C.
40 30 20 10
T, C
Figura 8.5: Velocidad de crecimiento de la E. Coli en funcin de la temperatura
8.8
Captulo 8
Como regla del pulgar por cada aumento de 10C, la velocidad de biotransformacin
aumenta cerca de 2 veces. Esta aproximacin es slo vlida hasta una determinada
temperatura arriba de la cual la velocidad comienza a decrecer. Los aumentos de
temperatura en una primera etapa permiten alcanzar mayores velocidades de degradacin
debido a un aumento de la actividad microbiana, un aumento de la solubilidad de los
nutrientes en agua, entre otras razones. En general a temperaturas mayores que 40 C el
crecimiento de bacterias decae debido a la desnaturalizacin de enzimas y protenas. A
temperaturas cercanas a los 0C, el crecimiento se detiene. Como regla general las bacterias
resisten mejor las bajas temperaturas, ya que para esos casos se pueden encapsular y
recobrar su actividad cuando las condiciones mejoran. En cambio cuando son sometidas a
temperaturas elevadas las clulas mueren. En la Figura 8.5 se presenta la velocidad de
crecimiento de una bacteria (E. coli) en funcin de la temperatura.
8.7.
qumicas que tienen lugar en una clula. El objetivo final de todas estas reacciones es la
produccin de nuevas clulas. El metabolismo se divide en dos grandes procesos:
8.9
Captulo 8
anabolismo o biosntesis (proceso que requiere energa para construir el material celular)
y catabolismo (proceso que libera energa en el cual los microorganismos oxidan
compuestos). Ambos procesos estn organizados en pequeos pasos, por ejemplo para la
oxidacin de glucosa (azcar de 5 carbonos) se requiere de 20 reacciones. Los procesos de
anabolismo y catabolismo estn ntimamente relacionados. Los microorganismos requieren
una fuente de carbono para el metabolismo. Como el metabolismo requiere energa para
conducir las reacciones metablicas, los microorganismos tambin necesitan una fuente de
energa. La mayora de los organismos de inters en bioremediacin usan los compuestos
orgnicos como fuente de carbn y energa. La energa para el crecimiento es derivada de la
oxidacin de compuestos qumicos (microorganismos quimiotrpicos) o de la luz
(microorganismos fototrpicos).
En general todas las reacciones que se llevan a cabo en los procesos celulares
requieren la participacin de protenas especiales denominadas enzimas que actan como
catalizadores. Los microorganismos actan como reactores y las enzimas como
catalizadores. El crecimiento microbiano es dependiente de la cantidad de energa libre
liberada durante las reacciones y de la eficiencia con que esa energa es capturada. Los
organismos vivos utilizan energa qumica a travs de reacciones del tipo xido-reduccin. El
flujo de electrones durante las reacciones redox genera energa, el proceso de transferencia
de electrones desde el donante al aceptor final es realizado mediante los "portadores de
electrones (electron carriers)". Los compuestos adenosine fosfatos son compuestos muy
importantes en el proceso de generacin de energa. El ATP (Adenosine Trifosfato - ver
Figura 8.6) tiene un papel fundamental en la generacin de energa, cuando se hidroliza
produce ADP (Adenosine Difosfato - ver Figura 8.7) con una energa libre de -31 kJ/mol. Lo
que pierde el ATP es un enlace fosfato. El ATP es el medio por el cual la clula almacena
temporariamente la energa obtenida de los nutrientes o de la luz. La Adenanine presente
en las molculas de ATP y ADP es un cido nucleico presente en el ADN. En la Figura 8.8
se presenta el mecanismo de fermentacin de glucosa a alcohol y CO2, donde se observa el
papel del ATP y ADP en este proceso.
OH
OH
P
O
OH
O
P
O
OH
O
CH2
O
H
Figura 8.6. ATP
H
OH
Adenine
OH
8.10
Captulo 8
OH
OH
OH
O
CH2
Adenine
O
H
H
OH
OH
8.11
Captulo 8
8.8.
muchos sustratos participan de la reaccin (ver composicin de las clulas Tabla 8.1).
Entonces el mtodo tradicional usado para las reacciones qumicas no resulta vlido para las
biolgicas.
Consideremos que se conduce una nica reaccin biolgica global y que la biomasa
est caracterizada por un nico componente (X) (Modelo de la Caja Negra). La Figura 8.9
muestra la utilizacin de los sustratos para la obtencin de los productos de la reaccin
biolgica.
Sustratos (Si)
Biomasa (x)
Productos (Pi)
(8.1)
donde,
i, i, = coeficientes estequiomtricos, mol.
Si= Sustrato i
PI= Producto i
X= biomasa
i Si + i Pi + X = 0
(8.2)
En la ecuacin 8.2 los coeficientes estequiomtricos son negativos para los reactivos
y positivos para los productos. Los sustratos incluyen fuentes de carbn (FC), fuentes de
8.12
Captulo 8
nitrgeno (FN), Fuente de O (FO), y el resto de los elementos que conforman una clula
microbiana (ver composiciones promedio, Tabla 8.2). Se suele atribuir un coeficiente
estequiomtrico igual a 1 a alguno de los sustratos, en general se le asigna tal valor a la
fuente de carbono. Si dividimos la ecuacin (8.2) por 1, resulta:
N
S1 + i / 1 Si + (i / 1 ) Pi + ( / 1) X = 0
2
(8.3)
(8.4)
rs1
1
rs i
i
(o rx ) rPi
=
(8.5)
rs i = Ys1s i rs1
= Ys1x rs1
rPi = Ys1Pi rs1
(8.6)
de modo que:
8.8.1.
(8.7)
Yji
= h 1
rPi = gPi (o molPi ) / gpeso sec o h
Los gramos de peso seco (gPS) se refieren a los gramos de peso seco de biomasa.
De acuerdo a las unidades definidas para las velocidades de reaccin, los coeficientes de
rendimiento tendrn las siguientes unidades:
8.13
Captulo 8
Ys1s i = gs i / gs1
Ys1x = gbiomasa(oPS ) / gs1
Ys1Pi = gPi / gs1
8.8.2. Determinacin
de
los
coeficientes
estequiomtricos
Balances
elementales
Para plantear los balances de elementos, los cuales son una herramienta para
determinar coeficientes estequiomtricos, es necesario conocer la composicin elemental de
cada reactivo y producto. Consideremos la siguiente reaccin biolgica, que corresponde al
crecimiento de las saccharomyces cerevisae (habitualmente usadas para la fermentacin
alcohlica) en forma aerbica sobre glucosa
Sacchromyces
cerevisae
Balance de H
2 + 3 Ys1s3 1.70Ys1x -2Ys1P2 =0
Balance de O
1+2 Ys1s2 -0.46Ys1x -2Ys1P1 - Ys1P2 =0
Balance de N
Ys1s3 - 0.17 Ys1x =0
Hay 5 rendimientos que determinar ( o lo que es lo mismo 6 coeficientes
estequiomtricos),
sin
embargo
disponemos
de
ecuaciones
linealmente
8.14
Captulo 8
8.9.
CINTICA DE CRECIMIENTO
La velocidad con que ocurre una reaccin biolgica puede ser modelada asumiendo
diferentes hiptesis. En la figura 8.10 se presentan los diferentes modelos aplicables a las
reacciones biolgicas.
8.15
Captulo 8
No segregado
Modelos No
Modelos
Estructurados
Estructurados
"CAJA NEGRA"
Segregado
CASO REAL
Los modelos segregados son complejos ya que a las clulas se las reconoce como
discretas. Estos modelos pueden reconocer como diferentes a las "clulas ms viejas" de
las "clulas ms jvenes". En cambio en los modelos no segregados se considera que una
"clula promedio" puede representar toda la poblacin.
Los modelos estructurados modelan a la clula (a la biomasa) como un sistema de
componentes mltiples (ribosomas, enzimas, membranas,etc.). Como caso ms simple, se
presentan los modelos no estructurados donde todos los componentes celulares se
representan por una nica concentracin, la de la biomasa (X). Una reaccin biolgica real
debera ser representada por un modelo segregado estructurado. Sin embargo, los modelos
no segregados no estructurados son usados por su simplicidad matemtica y por su
S1 P
8.16
Captulo 8
ES *
S1 + E
1
K2
3
ES1*
P + E
[ ]
0 = k [S ][E ] k [ES ] k [ES ]
rP = k 3 ES1*
1 1
*
1
(8.8)
*
1
(8.9)
1 1
2
(8.10)
adems la concentracin de enzimas totales ( lo cual es un dato conocido) debe cumplir con
la siguiente ecuacin:
[E ] = [ET ] / kk1[+Sk1]
2
k2 + k3
+ 1 =
3
[ET ] / k1[S1] + k 2 + k3 =
k 2 + k3
E (k + k 3 )
E = T 2
k1[S1] + k 2 + k 3
(8.11)
[ ]
8.17
Captulo 8
ET (k 2 + k 3 )
k1[S1]
k1[S1] + k 2 + k 3
k1[S1][ET ]
*
ES1 =
=
k2 + k3
k1[S1] + k 2 + k 3
[ ]
(8.12)
k k [S ][E ] V
[S ]
rP = 1 3 1 T = max 1
k1[S1] + k 2 + k 3 [S1] + K m
(8.13)
En una reaccin biolgica son varios los sustratos que participan en ella, las bacterias
crecen y utilizan muchsimas enzimas para llevar a cabo la reaccin biolgica deseada. Si se
quisiera describir detalladamente las reaccin deberamos usar un modelo segregado y
estructurado, lo cual es muy complejo y escapa a este captulo que debe considerarse como
introductorio a la temtica de bioreactores.
Monod en 1942 desarroll una ecuacin muy simple para representar los procesos
biolgicos que funciona en general muy bien. Para ello asumi que si bien pueden existir
muchos sustratos, uno de ellos ser el limitante. En este modelo se asume que la produccin
de biomasa depende exclusivamente de la concentracin de este sustrato limitante. Para
una reaccin biolgica del tipo SX, la velocidad de crecimiento de biomasa puede
representarse como sigue:
= =max
s
s + Ks
(8.14)
donde
max=velocidad especfica de crecimiento mxima, h-1
Ks=constante de saturacin, g/l
S=concentracin de sustrato limitante, g/l
Como puede observarse la ecuacin (8.14), que es semiemprca, es anloga a la de
Michaelis-Menten. En efecto se deriva de suponer que una nica enzyma con una cintica
del tipo Michaelis-Menten es la responsable del consumo de S y conjuntamente que la
8.18
Captulo 8
3.5
m ax
m ax
2.5
Ks
m ax /2
1.5
Ks
0.5
0
0
10
15
20
25
30
rs=Yxs
(8.15)
(8.16)
(8.17)
El modelo de Monod no considera que parte del sustrato puede utilizarse para
mantenimiento. Si aceptamos que esto puede ocurrir, las reacciones que tienen lugar son:
Energa
como rs=1/Ysx , se verifica:
8.19
Captulo 8
r s=
1
Ysxtrue
ms
(8.18)
donde,
ms= a la velocidad de consumo de s utilizado para mantener el desarrollo metablico
(energa), y no para el crecimiento de las clulas, gs/gPS h. Se trata de una velocidad que se
considera en general de orden 0 con respecto a la concentracin de sustrato.
Ysxtrue= se denomina coeficiente de rendimiento verdadero
El coeficiente global de rendimiento se calcula como sigue:
Ysxglobal =
=
rs
1
Ysxtrue
(8.19)
ms
Ysxglobal =
=
rs
1
1
Ysxtrue
ms
(8.20)
Ms de un sustrato limitante
= max1
s1
s1 + K s1
max2
s2
(8.21)
s2 + K s2
= max
s
s2 / K i + s + K s
(8.22)
8.20
Captulo 8
= max
8.10.
1
1+ p / Ki
s + Ks
(8.23)
CULTIVO BATCH
Basado en la fisin binaria de las clulas, sera razonable pensar que el crecimiento
de las bacterias es del tipo exponencial. Este tipo de crecimiento, en un reactor discontinuo,
puede darse hasta un punto en el que los nutrientes empiezan a acabarse u otros factores
ambientales limiten el crecimiento. En la Figura 8.12 se presenta una curva de crecimiento
tpica para un medio de cultivo que ha sido inoculado al tiempo 0 en un TAD. Se supone que
las condiciones del medio de cultivo son ptimas (i.e., adecuados nutrientes, temperatura,
etc.). Bajo estas condiciones se reconocen 4 fases en el ciclo del crecimiento: demora, fase
exponencial, fase estacionaria y muerte.
Nmero de clulas
Crecimiento
Exponencial
Fase
Estacionaria
Demora
Muerte
Tiempo, horas
Figura 8.12: Curva tpica de crecimiento de una poblacin bacteriana en un sistema batch
Esta fase corresponde al tiempo que le lleva a la bacteria adaptarse al nuevo medio
cultivo. Durante esta fase el crecimiento es prcticamente nulo. La fase de demora puede ser
corta si las bacterias se inoculan en un medio similar al medio en el cual se haban
Captulo 8 Introduccin a Bioreactores
8.21
Captulo 8
dC j
dt
= rj
(8.24)
dx
= rx *
dt
(8.25)
donde x tiene unidades de gps/cm3s, rx* las mismas unidades. Comnmente la velocidad de la
reacciones se denota con la letra , que tiene unidades de inversa de tiempo, de modo que
es necesario multiplicarla por x para balancear las unidades
dx
= x
dt
(8.26)
donde,
x= concentracin de clulas (biomasa), gramos de peso seco/cm3
t= tiempo, h
= constante de proporcionalidad definida como velocidad de crecimiento especfico, h-1
(esta velocidad especfica es funcin, entre otras variables, de la temperatura y
concentraciones de sustrato).
x0
= dt
(8.27)
8.22
Captulo 8
x
ln
x0
= t
(8.28)
x = x 0 exp(kt )
(8.29)
(8.30)
td=ln2/
(8.31)
La velocidad de crecimiento puede ser representada por la cintica del tipo Monod
(8.14), si es as es funcin de la concentracin del sustrato. Sin embargo, durante el
crecimiento exponencial de una bacteria, puede suponerse que S>> Ks, de manera que se
verifica que =max, la velocidad procede con un valor constante e independiente de S.
Ejemplo 8.1
Se han medido 34000 bacterias/l uego de 4 horas de haber inoculado un
medio. Despus de 24 horas el nmero de bacterias aument a 5.2 106/l.
Asumiendo que la fase de demora es despreciable, calcular:
1. La velocidad especfica de crecimiento.
2. El nmero de bacterias que fueron inoculadas.
Solucin:
1. ln(N2/N1)= (t2-t1)
= ln(5.2 106/34000)/(24-4)=0.25 h-1
2. De la ecuacin 8.29:
N0=N e-kt
N0=34000 bact/l e-0.25x4= 12500 clulas/l
8.23
Captulo 8
8.10.4. Muerte
(8.30)
S X + P
Muerte
Los balances de masa que debiramos considerar para el esquema anterior, considerando
los valores absolutos de los rendimientos, son:
Sustrato:
s
dS
= Yxs1 x = Yxs1 max x
dt
s + Ks
Biomasa:
s
dx
= x x = max x x
dt
s + Ks
Producto:
dP
= Yxp1 x
dt
Un sistema que contemple que parte del sustrato se consuma para realizar tareas de
mantenimiento o generacin de energa y adems que la biomasa pueda morir, implica el
siguiente esquema cintico:
8.24
Captulo 8
X + P
Energa
Muerte
Los balances de masa para el esquema, considerando los valores absolutos de los
rendimientos, son:
Sustrato:
s
dS
= Yxs1 x ms x = Yxs1 max x ms x
dt
s + Ks
Biomasa:
s
dx
= x x = max x x
dt
s + Ks
Producto:
dP
= Yxp1 x
dt
S X + P
los balances de masa, considerando los valores absolutos de los rendimientos, son:
Sustrato:
s
dS
= Yxs1 x = Yxs1 max x
dt
s + Ks
Biomasa:
s
dx
= x = max x
dt
s + Ks
Producto:
s
dP
=Y xp1 x = Yxp1 max x
dt
s + Ks
Slo un balance es requerido resolver, el resto de los componentes pueden determinarse por
estequiometra.
Ejemplo 8.2
La fermentacin de glucosa a etanol se lleva a cabo en un reactor TAD
usando S. cerevisae. Las concentracin inicial de glucosa es de 250 g/dm3, la
concentracin de clulas inicial es de 1.0 g/dm3. La velocidad de reaccin
sigue una cintica del tipo Monod, los parmetros cinticos son: max=0.33 h-1,
Ks=1.7g/dm3, Yxs=0.08g/g.
1) Grafique la concentracin de biomasa y sustrato vs. Tiempo, suponiendo
que todo el sustrato se consume para dar biomasa.
8.25
Captulo 8
Solucin:
8.26
Captulo 8
Solucin cont.:
8.27
Captulo 8
8.11.
8.28
Captulo 8
F , C0
F,C
Supongamos que en el reactor de la figura 8.15 se lleva a cabo la siguiente reaccin biolgica:
8.29
Captulo 8
(8.30)
Donde:
F=caudal de entrada, l/h
Cs1,o=concentracin del sustrato 1 a la entrada, mols1/l o gs1/l.
Cs1= concentracin del sustrato 1 a la salida, mols1/l o gs1/l.
rs1= velocidad de consumo de sustrato, mols1/gPS h o gS1/gPS h
V= Volumen de reaccin, l
x= concentracin de biomasa, gPS/l
(8.31)
(8.32)
D=1/
(8.33)
(8.34)
donde
x= concentracin de biomasa a la salida del reactor, gPS/l
= velocidad de crecimiento, h-1
8.30
Captulo 8
(-D + )x =0
(8.35)
(8.36)
En la Figura 8.16 se presentan los valores de las concentraciones del sustrato (s1) y
biomasa(x) en funcin del coeficiente de dilucin. Si el coeficiente de dilucin se aumenta en
forma excesiva el medio de cultivo "se lava" y la concentracin de clulas a la salida del
reactor cae a 0. Existe un valor ptimo de D que permite operar el reactor con una alta
velocidad de crecimiento. Este valor lo derivaremos ms adelante.
12
Concentracin, g/l
10
8
Sustrato
6
Biomasa
Dx
25
23
21
19
17
15
13
11
0
velocidad de dilucin (D), h-1
Figura
8.16:
Dependencia
de
las
concentracin
de
sustrato,
(8.37)
donde,
Cp1=Concentracin del producto 1, gp1/ l h o moles p1/l h.
rp1= velocidad de produccin del producto 1, gp1/gPS h o moles p1/gPS h.
8.31
Captulo 8
La Figura 8.17 muestra un volumen de control donde se puede observar una interfase
gas-lquido. El transporte de masa en la capa lmite deber ser considerado en los balances
de masa de los reactantes gaseosos.
Lquido
Medio de
cultivo
O2
Gas
Lq.
Cs2g
Cs2L
Cs2*
(8.38)
donde
F=caudal de entrada, l/h
Cs2,o=concentracin del sustrato 2 disuelto en el caudal F a la entrada, mols2/l o gs2/l.
Cs2= concentracin del sustrato 2 disuelto a la salida, mols2/l o gs2/l.
Cs2*= solubilidad del s2 en el medio de cultivo, mols2/l o gs2/l.
rs2= velocidad de consumo de sustrato2, mols2/gPS h o gS2/gPS h
V= Volumen de reaccin, l
8.32
Captulo 8
Cs2*
(8.39)
(8.40)
Ejemplo 8.3
Suponga que un sustrato estril se incorpora en forma continua en un
quimiostato.
1. Derive la expresin de la concentracin de salida de biomasa y sustrato
(lq.) en funcin de la velocidad de dilucin. Asuma que la reaccin
biolgica procede con una cintica del tipo Monod.
2. Grafique la concentracin de sustrato y biomasa en funcin de D. Ks=3 g/l,
max=3 h-1, Yxs=5 gs/gbiomasa, s0= 10 g/l.
3. Determine el valor de la velocidad de dilucin de "lavado
4. Estime la velocidad mxima de clulas de salida.
8.33
Captulo 8
Solucin:
9. D(s0 - s) = rs x (balance para el sustrato) (A)
D x= x (balance biomasa)(B)
rs=Yxs max s/(s+Ks)
D(s0 - s) = Yxs x max s/(s+Ks) (C)
Dividiendo A por B resulta:
(s0-s)/x=rs/
(s0-s)=Yxs x o Ysx (s0 -s) =x (D)
Reemplazando (D) en (C),
s= DKs/(max-D) (E)
2.
12
Concentraciones, g/l y DX
10
8
6
S
x
DX
2
0
0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.2
-2
D, 1/h
8.34
Captulo 8
8.12.
(8.41)
donde
A = constante, h-1
E= energa de activacin, KJ/mol
max=
A exp( E / RT )
1 + B exp( G / RT )
(8.42)
donde
A y B son constantes
E= energa de activacin, KJ/mol
DG= cambio de energa libre ocasionado durante la desnaturalizacin de las protenas,
KJ/mol.
En la figura 8.18 se observa max vs 1/T. Puede observarse que existe una
temperatura de operacin ptima que maximiza la velocidad de crecimiento.
8.35
Captulo 8
10
0.1
3.1
3.2
3.3
3.4
3.5
1000/T (1/K)
8.36