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Inmunoensayo
Inmunoensayo
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Preparacin de
Anticuerpos Policlonales y Monoclonales
Los reactivos para anticuerpo se desarrollan a partir de anticuerpos
policlonales como monoclonales. El antisuero policlonal (suero
sanguneo que contiene los anticuerpos deseados) se genera en
animales, siendo los ms comunes ovejas, conejos, o cabras.
Los animales producen el antisuero igual que un ser humano
como mecanismo de defensa al ser expuestos a un antgeno. El
antisuero contiene una mezcla de anticuerpos, cada uno de los
cuales puede unirse a diferentes puntos de unin del antgeno o
eptope.
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Preparacin de
Anticuerpos Policlonales y Monoclonales
El proceso de preparacin de un anticuerpo comienza cuando le se
inyecta a un animal una solucin que contenga el antgeno de
inters. A este antgeno de inters a veces se lo denomina
sustancia inmungena, debido a que puede estimular una
respuesta inmunolgica. Transcurrido un tiempo, y en algunos
casos con mltiples inyecciones, el sistema inmunolgico del
animal produce anticuerpos para el antgeno que fue inyectado. Se
toma sangre del animal, y se separa el suero. Este suero
generalmente es rico en anticuerpos que reconocen el antgeno y
se lo denomina antisuero.
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Preparacin de
Anticuerpos Policlonales y Monoclonales
El antisuero por lo general contiene una mezcla de anticuerpos que
reconocen y se unen al mismo antgeno, pero pueden combinarse
con diferentes eptopes (ver Figura 1-2). Un antgeno que contenga
mltiples puntos de unin para los anticuerpos se denomina
antgeno multivalente. Estos tipos de anticuerpos, presentes como
una mezcla diversa, se denominan anticuerpos policlonales.
Preparacin de
Anticuerpos Policlonales y Monoclonales
Los anticuerpos monoclonales se diferencian de los anticuerpos
policlonales en que son muy especficos para un eptope simple en
un antgeno multivalente (ver Figura 1-3). Se producen a partir de
una lnea celular simple usando tecnologa para hibridomas y
lneas celulares de mieloma de ratn. Las hibridomas son clulas
tumorales productoras de anticuerpos que producen varias copias
del mismo anticuerpo y se desarrollan fcilmente en poblaciones
celulares de laboratorio.
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Preparacin de
Anticuerpos Policlonales y Monoclonales
Una ventaja de los anticuerpos monoclonales es que la lnea
celular hibridoma que los produce es potencialmente inmortal y
que puede producir los mismos anticuerpos en forma constante e
indefinida. Un antisuero policlonal producido por inmunizacin de
animales puede variar de un animal a otro, y un antisuero til
puede ya no estar ms disponible si el nico animal que lo produce
muere.
Preparacin de
Anticuerpos Policlonales y Monoclonales
Las hibridomas se producen en mltiples etapas
(ver Figura 1-4) :
Inyectando un antgeno especfico en un animal
husped (tpicamente un ratn)
Aislando clulas productoras de anticuerpos (clulas B)
del bazo del ratn
Fusionando estas clulas B con un tipo especfico de clula tumoral
que se desarrolla fcilmente en poblaciones y produce anticuerpos
Aislando hibridomas logrados (clulas fusionadas) que produzcan
anticuerpos especficos para el antgeno de inters
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Preparacin de
Anticuerpos Policlonales y Monoclonales
En los inmunoensayos, ambos anticuerpos monoclonales y
policlonales se usan para detectar antgenos, cada uno con
fortalezas especficas para aplicaciones particulares. Es probable
que los inmunoensayos que detectan anticuerpos en sueros de
pacientes supongan la deteccin de anticuerpos policlonales
generados por el sistema inmunolgico del paciente.
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Clulas plasmticas
productoras de
anticuerpos
Los tumores de
hibridomas se
mantienen vivos
en el ratn
Figura 1-4
Procedimiento para
generar anticuerpos
monoclonales
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Figura 1-5 Los anticuerpos marcados permiten la deteccin de complejos antgeno/anticuerpo en los inmunoensayos
Figura 1-6 El antgeno marcado tambin permite la deteccin de complejos antgeno/anticuerpo en los inmunoensayos
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Formato Competitivo
As, en un inmunoensayo competitivo, el hecho de que se mida
menos marca en el ensayo significa que hay ms antgeno
marcado (muestra) presente. La concentracin de antgeno en la
muestra est inversamente
relacionada a la
concentracin de marca
que se mide en el formato
competitivo
(Figura 1-7).
Formato Competitivo
En el formato competitivo de un solo paso (ver Figura 1-8), tanto el
reactivo del antgeno marcado (Ag*) como la muestra sin marcar (o
analito de la muestra) compiten por una cantidad limitada de
anticuerpo.
Formato Competitivo
En el formato competitivo de dos pasos, la concentracin de
anticuerpo del reactivo se encuentra presente en exceso
comparada con la concentracin de antgeno. El reactivo del
anticuerpo primero se incuba con una muestra que contenga
antgenos de inters, luego en el segundo paso, se agrega el
antgeno marcado.
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Formato Competitivo
Recuerde que en el formato competitivo, menor concentracin de
antgeno marcado unido indica mayor concentracin de antgeno
presente en la muestra.
Los formatos de ensayos competitivos de dos pasos proporcionan
una sensibilidad mejorada, comparados con los formatos de
ensayos de un solo paso.
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Tcnicas de Inmunoensayo
Homogneas y Heterogneas
A las tcnicas de inmunoensayo que requieren la separacin del
complejo unido Ab-Ag* se las conoce como inmunoensayos
heterogneos. Aquellas que no requieren separacin se
denominan inmunoensayos homogneos.
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Tcnicas de Inmunoensayo
Homogneas y Heterogneas
Las tcnicas homogneas generalmente se han aplicado a la
medicin de pequeos analitos como por ejemplo las drogas de
abuso y teraputicas. Debido a que las tcnicas homogneas no
requieren la separacin de la unin Ab-Ag* del Ag* libre,
generalmente son ms fciles y ms rpidas de realizar.
Tubo de
Reaccin
Reactivo de
Anticuerpo de Fase
Slida (]-Ab)
Tcnica
Homognea
Muestra (Ag)
Tcnica
Heterognea
Reactivo de
Anticuerpo
Marcado (Ab*)
Se mide el complejo
Ab-Ag
Aislar y Lavar el
Complejo ]-Ab- Ag- Ab*
Figura 1-12
Inmunoensayos homogneos y
heterogneos
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Resumen
Inmunoensayos son pruebas que usan complejos de anticuerpo y
antgeno (tambin denominados inmunocomplejos) para medir la
presencia de un analito especfico en una muestra.
Anticuerpos son protenas que normalmente produce el sistema
inmunolgico en respuesta a una sustancia extraa.
Antgenos son las molculas a las que se unen los anticuerpos,
que en el cuerpo podran ser un un agente patgeno invasor, o las
molculas extraas inyectadas a un animal con el fin de provocar
la respuesta inmunolgica.
Anticuerpos se componen de dos regiones principales, la regin
Fab (antgeno especfico) y la regin Fc.
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Resumen
Las preparaciones de anticuerpo son antisueros policlonales,
que reconocen mltiples puntos en los antgenos, o anticuerpos
monoclonales, que reconocen puntos simples en los antgenos.
En los inmunoensayos, se marca el anticuerpo o antgeno con el
fin de obtener una seal perceptible que corresponda a la
concentracin del analito.
Los inmunoensayos pueden ser competitivos o no competitivos. En
los inmunoensayos competitivos, la concentracin de antgeno
es inversamente proporcional a la concentracin de la seal. En
los inmunoensayos no competitivos, la concentracin de
antgeno es directamente proporcional a la concentracin de la
seal.
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Resumen
Inmunoensayos homogneos no requieren la separacin de los
complejos no unidos de los complejos unidos y de ah que sean
ms rpidos y ms fciles de llevar a cabo que los inmunoensayos
heterogneos.
Inmunoensayos heterogneos requieren la separacin de los
complejos no unidos, a menudo utilizando un reactivo de fase
slida como una partcula magntica o una esfera plstica.
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Revisin
Los anticuerpos monoclonales y los anticuerpos policlonales:
A. Pueden proveer especificidad y sensibilidad
para medir los analitos
B. Son inmunoglobulinas
C. Se unen al antgeno a travs de la regin de unin Fab
D. Todas las opciones anteriores
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Revisin
Los anticuerpos monoclonales y los anticuerpos policlonales:
A. Pueden proveer especificidad y sensibilidad
para medir los analitos
B. Son inmunoglobulinas
C. Se unen al antgeno a travs de la regin de unin Fab
D. Todas las opciones anteriores
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Revisin
Enumere tres clases de marcas usados en las tcnicas de
inmunoensayo:
1. ________________________________________
2. ________________________________________
3. ________________________________________
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Revisin
Enumere tres clases de marcas usados en las tcnicas de
inmunoensayo :
Enzimas
1. ________________________________________
Compuesto radioactivo
2. ________________________________________
Compuestos generadores de luz
3. ________________________________________
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Revisin
Un anticuerpo monoclonal individual se une a varios puntos
diferentes (eptopes) en un analito.
Verdadero
Falso
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Revisin
Un anticuerpo monoclonal individual se une a varios puntos
diferentes (eptopes) en un analito.
Verdadero
Falso
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Revisin
En los formatos de inmunoensayos no competitivos, la seal
medida es tpicamente _____________
a la concentracin de analito de la muestra.
A. Proporcional
B. Inversamente proporcional
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Revisin
En los formatos de inmunoensayos no competitivos, la seal
medida es tpicamente _____________
a la concentracin de analito de la muestra.
A. Proporcional
B. Inversamente proporcional
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Revisin
Qu tcnica de inmunoensayo se prefiere para proporcionar la
mayor sensibilidad y la mayor especificidad?
A. Competitiva de un paso
B. No competitiva de dos pasos
C. Competitiva de dos pasos
D. No competitiva de un paso
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Revisin
Qu tcnica de inmunoensayo se prefiere para proporcionar la
mayor sensibilidad y la mayor especificidad?
A. Competitiva de un paso
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Figura 2-1 Los radioinmunoensayos (RIA) utilizan una marca de istopo radioactivo
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Figura 2-3
Deteccin de
fluorescencia en
complejos de conjugado
de fluorescena
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Figura 2-5 Los complejos ms pequeos en FPIA dan como resultado una seal de fluorescencia ms baja
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Figura 2-7
Componentes
de MEIA
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Figura 2-8
Proceso de la
tcnica MEIA
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Figura 2-9
marca de
quimioluminiscencia
para CMIA de
Abbott ARCHITECT
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Fase Slida
Etapa de
Separacin
MEIA
Micropartcula
de Ltex
Matriz de Fibra
de Vidrio
Enzima Fosfatasa
Alcalina
Detector de
Fluorescencia
CMIA
Micropartcula
Magntica
Imn
Compuesto
Quimioluminiscente
Tubo Fotomultiplicador
de Quimioluminiscencia
Tecnologa
Marca
Tecnologa de Deteccin
Resumen
Existen cinco tcnicas de inmunoensayo que se resumieron en
este captulo.
Radioinmunoensayo (RIA): El anticuerpo o el antgeno se marcan con
radioactividad, y se usan en un formato no competitivo o competitivo.
Inmunoensayo enzimtico (EIA): El anticuerpo o el antgeno se marcan
con una enzima que convierte un sustrato en un producto con una seal
resultante que se mide, como por ejemplo cambio de color.
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Resumen (cont.)
Inmunoensayo por Polarizacin de Fluorescencia (FPIA): Tpicamente se
marca el antgeno con una marca fluorescente y compite con el antgeno sin
marcar de la muestra. La rotacin relativamente lenta de las molculas grandes,
como tambin la capacidad de las partculas de movimientos lentos de polarizar la
luz se utilizan para obtener una medicin del nmero de partculas grandes de
anticuerpo-antgeno-fluorescena en la solucin. En este formato competitivo, la
concentracin de analito presente es indirectamente proporcional a la
concentracin de seal medida.
Inmunoensayo por Micropartcula (MEIA): Se cubre una micropartcula de fase
slida con anticuerpos en contra de un antgeno de inters, y se usa para capturar
el analito. Se marca el anticuerpo para la deteccin con un enzima al igual que en
EIA. La concentracin de analito es proporcional a la cantidad de seal medida.
Un formato sndwich no competitivo produce resultados que son directamente
proporcionales a la cantidad de analito presente.
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Resumen (cont.)
Inmunoensayo Magntico Quimioluminiscente (CMIA):
Una marca quimioluminiscente se conjuga con el anticuerpo o antgeno,
y produce luz cuando se lo combina con su sustrato. Esta tcnica es muy
similar a MEIA, aunque la reaccin quimioluminiscente ofrece alta
sensibilidad y facilidad para la medicin. Un formato sndwich no
competitivo produce resultados que son directamente proporcionales a la
cantidad de analito presente.
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Revisin
Enumere cuatro tecnologas de deteccin del inmunoensayo
(5 posibles)
1. ___________________________________________
2. ___________________________________________
3. ___________________________________________
4. ___________________________________________
5. ___________________________________________
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Revisin
Enumere cuatro tecnologas de deteccin del inmunoensayo
(5 posibles)
Radioinmunoensayo
1. ___________________________________________
Inmunoensayo enzimtico
2. ___________________________________________
Inmunoensayo por polarizacin de fluorescencia
3. ___________________________________________
Inmunoensayo por micropartcula
4. ___________________________________________
Inmunoensayo magntico quimioluminiscente
5. ___________________________________________
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Revisin
En la tecnologa FPIA:
A. La seal medida es directamente proporcional
a la concentracin de analito
B. La molcula Ag-Fluorescena rota rpidamente
y emite luz polarizada
C. Tanto el analito marcado como el analito sin marcar de la
muestra compiten por los puntos de unin del anticuerpo
D. Todas las opciones anteriores
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Revisin
En la tecnologa FPIA:
A. La seal medida es directamente proporcional
a la concentracin de analito
B. La molcula Ag-Fluorescena rota rpidamente
y emite luz polarizada
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Revisin
La tecnologa FPIA se aplica usando cul de las siguientes
opciones?:
A. Ensayo homogneo
B. Formato no competitivo
C. MEIA
D. Ensayo heterogneo
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Revisin
La tecnologa FPIA se aplica usando cul de las siguientes
opciones?:
A. Ensayo homogneo
B. Formato no competitivo
C. MEIA
D. Ensayo heterogneo
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Revisin
Qu tipo de fase slida utiliza MEIA?:
A. Micropartculas magnticas
B. Placas de microttulo
C. Micropartculas de ltex
D. Esferas de 1/4 pulgada
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Revisin
Qu tipo de fase slida utiliza MEIA?:
A. Micropartculas magnticas
B. Placas de microttulo
C. Micropartculas de ltex
D. Esferas de 1/4 pulgada
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Revisin
Cul de las siguientes opciones tpicamente representa
la marca ms sensible?
A. Quimioluminiscencia
B. Enzima
C. Fluorescencia
D. Micropartcula
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Revisin
Cul de las siguientes opciones tpicamente representa
la marca ms sensible?
A. Quimioluminiscencia
B.
C.
D.
Enzima
Fluorescencia
Micropartcula
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Preciso
Da en el
centro del
blanco
Da en el
mismo
blanco
Sensible
Capacidad de
excluir falsos
negativos
Especfico
Capacidad de
excluir falsos
positivos
Figura 3-1
Exactitud, precisin,
sensibilidad,
especificidad en los
inmunoensayos
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Figura 3-4
Efecto hook en concentraciones elevadas
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Figura 3-6
Cmo HAMA
genera un falso
negativo
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Resumen
Exactitud significa que el ensayo est dando la respuesta
correcta, midiendo la cantidad de analito realmente presente en la
muestra.
Precisin significa que el ensayo mide la cantidad de analito de
una manera reproductible cada vez.
Sensibilidad clnica y especificidad clnica se refieren a la
capacidad del ensayo de generar resultados exactos y
reproductibles que minimicen la cantidad de falsos positivos y
falsos negativos que ocurran.
Calibradores son muestras de concentracin conocida usados
para establecer los parmetros del analizador o instrumentos.
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Resumen
Controles son muestras de concentracin conocida que se usan
para monitorear la exactitud y la precisin de un analizador y un
ensayo.
El efecto hook en concentraciones elevadas, tambin
denominado efecto prozona es un tipo de interferencia que puede
reducir la exactitud y la precisin de los inmunoensayos. Bajo
condiciones de exceso de antgeno, el ensayo lee una
concentracin de antgeno inferior a la que realmente se encuentra
presente.
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Resumen
Otro tipo de interferencia se debe a la presencia de anticuerpos
humanos anti-ratn (HAMA) que pueden estar presentes en el
suero de pacientes que hayan sido tratados con anticuerpos de
ratn para alguna terapia, o se hayan expuesto a ratones de
alguna otra manera.
Los inmunoensayos de dos pasos pueden reducir la
interferencia de un efecto hook en concentraciones elevadas o
la presencia de anticuerpos HAMA.
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Revisin
La capacidad de un ensayo de dar en forma reproductible con una
concentracin fijada se denomina:
A. Especificidad
B. Sensibilidad
C. Precisin
D. Exactitud
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Revisin
La capacidad de un ensayo de dar en forma reproductible con una
concentracin fijada se denomina:
A. Especificidad
B. Sensibilidad
C. Precisin
D. Exactitud
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Revisin
Con cul de las siguientes opciones puede eliminarse
la interferencia de efecto hook por exceso de antgeno?:
A. Metodologa de inmunoensayo de dos pasos
B. Metodologa de inmunoensayo de un paso
C. Disminucin del reactivo de anticuerpo
D. Disminucin del reactivo de soporte slido
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Revisin
Con cul de las siguientes opciones puede eliminarse
la interferencia de efecto hook por exceso de antgeno?:
A. Metodologa de inmunoensayo de dos pasos
B. Metodologa de inmunoensayo de un paso
C. Disminucin del reactivo de anticuerpo
D. Disminucin del reactivo de soporte slido
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Revisin
La interferencia de HAMA puede eliminarse
metodologas de inmunoensayo de dos pasos.
Verdadero
Falso
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Revisin
La interferencia de HAMA puede eliminarse
metodologas de inmunoensayo de dos pasos.
Verdadero
Falso
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Revisin
Los anticuerpos HAMA se producen como resultado de:
A. Exposicin del paciente a ratones
o a protenas de ratn
B. Contaminacin de la muestra
con protenas de ratn
C. Inmunizacin
D. Alergias a los alimentos
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Revisin
Los anticuerpos HAMA se producen como resultado de :
A. Exposicin del paciente a ratones
o a protenas de ratn
B. Contaminacin de la muestra
con protenas de ratn
C. Inmunizacin
D. Alergias a los alimentos
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Revisin
Los calibradores son muestras de individuos que se sabe que
estn dentro del rango normal usados para verificar el
funcionamiento del instrumento.
Verdadero
Falso
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Revisin
Los calibradores son muestras de individuos que se sabe que
estn dentro del rango normal usados para verificar el
funcinamiento del instrumento.
Verdadero
Falso
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Ejemplos de Pruebas
que Utilizan Inmunoensayos
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Hormona
Categora de
Anlisis
Punto Primario de
Accin
Funcin
Tirotrofina (TSH)
Tiroides
Glndula Tiroidea
Tiroxina (T4) y
Triyodotironina (T3)
Tiroides
Tejido Corporal
General
Tiroides
Tejido Corporal
General
Cortisol
Metablico
Tejido Corporal
General
Hormona
Foliculoestimulante (FSH)
Fertilidad
Ovarios, Testculos
Fertilidad
Ovarios, Testculos
Prolactina
Fertilidad
Glndula Mamaria
Estrgeno
Fertilidad
rganos Sexuales
Femeninos. Auxiliar.
Progesterona
Fertilidad
Estructura
Reproductiva
Femenina. Auxiliar.
Testosterona
Fertilidad
rgano Sexual
Masculino. Auxiliar.
Gonadotrofina Corinica
Humana (hCG)
Embarazo/
Fertilidad
Ovarios, Testculos
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Marcador de Lesin
Cardaca
Descripcin
Troponina-I
Mioglobina
Protena que se
encuentra en el corazn
y otros msculos,
importante para
transportar el oxgeno a
las clulas musculares
Creatinine
Kinase-MB (CKMB)
Pptido
Natriurtico del
tipo B (BNP)
Hormona de la protena
que se libera del
ventrculo izquierdo del
corazn cuando est
daado
CRP de Alta
Sensibilidad
(hsCRP)
Protena liberada en el
suero en respuesta a
una lesin, infeccin, e
inflamacin
Hepatitis
La hepatitis es la inflamacin del hgado, y pueden causarla
virus, bacterias, frmacos, toxinas o la ingestin excesiva de
alcohol. En parte, debido al desarrollo de los inmunoensayos, se
han identificado cinco virus distintos que causan hepatitis: Hepatitis
A, Hepatitis B, Hepatitis C, Hepatitis D, y Hepatitis E. Cada virus
puede ser individualizado usando tcnicas de inmunoensayo (ver
Tabla 4-3).
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Vas de Transmisin
Aparicin
Incubacin
Mortalidad
Virus de la Hepatitis A
(HAV): Picornaviridae;
enterovirus pequeo, ARN
de una sola hebra
Va Fecal Oral
Generalmente
abrupto
15 45 das
Virus de la Hepatitis B
(HBV): Hepadnaviridae;
virus ADN de cadena doble
parcialmente
Agujas contaminadas,
transfusiones con
sangre no analizada,
tatuajes, contacto sexual
Generalmente
insidioso
Promedio de 60 90
das
0.5 1.0%
Virus de la Hepatitis C
(HCV): Flaviviridae; virus
ARN de una sola hebra
Similar a HBV
Insidioso
2 26 semanas
Virus de la Hepatitis D
(HDV):
virus ARN de una sola hebra
Similar a HBV
Generalmente
abrupto
21 90 das
2 20% con
coinfeccin, hasta un
30% con
sobreinfeccin
Virus de la Hepatitis E
(HEV):
Apariencia de calicivirus;
virus ARN de una sola hebra
Ingestin de agua
contaminada, higiene
personal deficiente
Generalmente
abrupto
Promedio de 40 das
Extensin 15 60 das
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Hepatitis
Todos los tipos de hepatitis virales afectan las clulas hepticas.
Los individuos infectados con un virus de hepatitis tienden a
padecer sntomas generalizados, que en la primera etapa son
similares a la gripe. Los sntomas incluyen fatiga, dolor
muscular/articular, prdida del apetito, nuseas, diarrea,
fiebre e ictericia.
Debido a que los sntomas no son especficos, se requieren
inmunoensayos para distinguir entre los virus especficos. Las
pruebas de hepatitis se utilizan tanto para screening como para
monitoreo. Por favor consulte la Gua de Entrenamiento sobre
Hepatitis de Abbott Diagnstico para obtener ms detalles.
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Marcadores Tumorales
Las clulas tumorales pueden producir protenas que se detectan
en suero por medio del inmunoensayo, y estas protenas se
conocen como marcadores tumorales. Los marcadores tumorales
generalmente son especficos para un cierto tipo de cncer. La
medicin de los marcadores tumorales puede ser til para el
diagnstico y monitoreo de diferentes tipos de cncer, y estas
pruebas pueden usarse para detectar cncer y monitorear la
progresin del tratamiento (ver Tabla 4-4).
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Clases
Ejemplo
Hormonas
Antgenos
Oncofetales
Alfafetoprotena (AFP)
Prstata
Marcadores
de
Carbohidratos
Cncer de Mama
Ca 125
Antgenos del
Grupo
Sanguneo
CA 19-9
Pncreas, Tracto GI
Ca 50
Pncreas, Tracto GI
Ca 72-4
Ovario, Tracto GI
CA 242
Pncreas, Tracto GI
Mieloma Mltiple
Macroglobulinemia Waldenstrom
Protenas
Marcadores Tumorales
Idealmente, los marcadores tumorales seran 1) especficos para el
rgano objetivo, y 2) producidos en una concentracin lo
suficientemente grande como para ser detectados con exactitud en
pacientes con cncer pero no en una poblacin normal.
Desafortunadamente, con la posible excepcin de PSA
(marcador comn usado para indicar la presencia de cncer de
prstata), rara vez se logran ambas caractersticas.
Por lo tanto, en la prctica clnica, los marcadores tumorales se
usan ms como ayuda en el diagnstico en combinacin con otras
pruebas de diagnstico (p. ej., MRI), y para monitorear la
progresin de la enfermedad despus de su deteccin y
tratamiento.
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Marcadores Tumorales
El porcentaje y la magnitud de la reduccin de los marcadores
tumorales se usa para evaluar la eficacia del tratamiento. Despus
del tratamiento, el marcador tumoral debera reflejar si aquel ha
sido exitoso.
Un descenso del nivel del marcador tumoral reflejara una
respuesta positiva al tratamiento mientras que un mnimo cambio
en el nivel del marcador tumoral reflejara una respuesta pobre al
tratamiento.
Si el tratamiento es exitoso, entonces una vez que el nivel del
marcador tumoral se ha estabilizado en un nuevo nivel inferior, las
mediciones de seguimiento del marcador programadas en forma
regular son de ayuda para determinar la estabilidad de la
enfermedad.
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Pruebas Congnitas
Tambin se encuentran disponibles los inmunoensayos que miden
ciertos agentes infecciosos que son especialmente perjudiciales si
un feto est expuesto. Estos ayudan a diagnosticar proactivamente
alguna infeccin de la paciente y a prevenir un dao en ella o en el
feto (Tabla 4-5).
Prueba
Toxo G y Toxo M
CMV G y CMV M
Pruebas Congnitas
Las pruebas para exposicin a la Rubeola, Toxoplasmosis, y CMV
son de especial importancia para el screening de embarazadas y
gente con inmunosupresin. Los recin nacidos, pacientes con
SIDA, pacientes con cncer, y quienes hayan recibido un
transplante de rgano son susceptibles de enfermarse si se
exponen a estas enfermedades, mientras que las personas con
sistemas inmunolgicos normales luchan contra las infecciones en
forma exitosa. Los recin nacidos pueden padecer alguna infeccin
si sus madres estn expuestas durante el embarazo.
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Pruebas Congnitas
Existen pruebas para detectar anticuerpos IgM e IgG que son
especficos para virus particulares en los pacientes. Si un paciente
es positivo en anticuerpos IgM, recientemente ha estado expuesto
al virus y se encuentra preparando una pronta respuesta
inmunolgica. Si un paciente es positivo en anticuerpos IgG,
estuvo expuesto por lo menos varios meses antes de la prueba, y
puede ser un infectado crnico.
El tipo de anticuerpo que se encuentra en los recin nacidos
tambin puede ayudar al mdico a descubrir si el infante adquiri
en forma pasiva anticuerpos de la madre, o si l se infect con el
virus. Estas pruebas proporcionan informacin importante acerca
de infecciones actuales y pasadas en poblaciones susceptibles.
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Pruebas Metablicas
Los inmunoensayos tambin estn disponibles para una amplia
variedad de indicadores de funciones metablicas y deficiencias
nutricionales. Las deficiencias especficas pueden surgir como
resultado de dietas inadecuadas, o como indicio de alguna
enfermedad fisiolgica, como la anemia. Existen mltiples formas
de anemia que requieren un cuidadoso diagnstico y tratamiento.
Algunos ejemplos de estos tipos de pruebas y sus indicaciones se
detallan en la Tabla 4-6.
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Pruebas Metablicas
Prueba
Ferritina
Vitamina
B12
Folato
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Resumen
Este captulo se centr en ejemplos de inmunoensayos
comnmente usados en el entorno clnico. Se describieron seis
categoras de pruebas.
Hormonas Endcrinas: Entre los ensayos para una variedad de
hormonas tiroideas, de fertilidad, y de embarazo se incluyen las pruebas
para tirotrofina, hormona foliculoestimulante, testosterona, y otras.
Indicadores de Dao Cardiovascular: Los ensayos para las protenas
liberadas por el msculo daado del corazn tras un ataque cardaco son
tiles para el diagnstico y tratamiento de esta condicin. Entre las
pruebas se incluyen aquellas para medir troponina, mioglobina, Creatinine
Kinase-MB, Pptido Natriurtico del tipo B , y otros marcadores cardacos.
Antgenos de Hepatitis: Los ensayos para cada una de las cinco cepas
de virus de Hepatitis se utilizan con fines de diagnstico y monitoreo.
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Resumen
Antgenos Tumorales: Los ensayos para antgenos especficos
producidos por clulas cancergenas pueden usarse para diagnstico y
monitoreo, e incluyen antgeno especfico de prstata (PSA) para cncer
de prstata y alfa fetoprotena (AFP) para cncer testicular, entre otros
ejemplos.
Agentes Infecciosos Congnitos: Los ensayos de suero para los
anticuerpos IgM e IgG en personas expuestas a agentes infecciosos
como la Rubeola, Toxoplasmosis, y Citomegalovirus (CMV) son tiles
para diagnosticar y monitorear la posible infeccin, particularmente en
mujeres embarazadas para determinar el riesgo de defectos de
nacimiento de sus hijos.
Metablicos: Los ensayos para protenas y vitaminas que intervienen en
el metabolismo pueden medirse, incluyendo la ferritina como medida de
los niveles de almacenamiento de hierro, y las vitaminas B12 y folato.
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Revisin
Las pruebas para cul de las siguientes opciones no se
cuantifican rutinariamente usando inmunoensayos:
A. TSH
B. AFP
C. Glucosa
D. Folato
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Revisin
Las pruebas para cul de las siguientes opciones no se
cuantifican rutinariamente usando inmunoensayos :
A. TSH
B. AFP
C. Glucosa
D. Folato
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Revisin
Una prueba para hCG se clasificara como:
A. Ensayo para tiroides
B. Marcador de hepatitis
C. Marcador de embarazo
D. Marcador de cncer
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Revisin
Una prueba para hCG se clasificara como :
A. Ensayo para tiroides
B. Marcador de hepatitis
C. Marcador de embarazo
D. Marcador de cncer
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Revisin
Cul de los siguientes son los cinco virus principales
que causan hepatitis viral:
A. HBV1, HBV2, HBV3, HBV4,
y Virus de Epstein-Barr
B. HAV, HBV, HCV, HDV, HEV
C. Ictericia y sus cuatro subtipos
D. Ninguna de las opciones anteriores
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Revisin
Cul de los siguientes son los cinco virus principales
que causan hepatitis viral :
A. HBV1, HBV2, HBV3, HBV4,
y Virus de Epstein-Barr
B. HAV, HBV, HCV, HDV, HEV
C. Ictericia y sus cuatro subtipos
D. Ninguna de las opciones anteriores
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Revisin
Los paneles de la hepatitis viral se usan para:
A. Diagnstico
B. Monitoreo
C. Screening
D. Todas las opciones anteriores
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Revisin
Los paneles de la hepatitis viral se usan para:
A. Diagnstico
B. Monitoreo
C. Screening
D. Todas las opciones anteriores
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Revisin
Un paciente que es positivo por anticuerpos IgG para Rubeola
estuvo expuesto recientemente al virus y est preparando una
respuesta inmunolgica temprana.
Verdadero
Falso
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Revisin
Un paciente que es positivo por anticuerpos IgG para Rubeola
estuvo expuesto recientemente al virus y est preparando una
respuesta inmunolgica temprana.
Verdadero
Falso
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Bibliografa y Sugerencias
para una Estudio ms Profundo
Harlow E, Land D, eds. Antibodies: A Laboratory Manual.
New York: Cold Spring Harbor Laboratory; 1988.
Wild D, editor. The Immunoassay Book. New York:
Stockton Press;1994.
Moore WT, Eastman RC, eds. Diagnostic Endocrinology.
Toronto: BC Decker; 1990.
Kricka L. Human anti-animal antibody interferences
in immunological assays. Clin Chem. 1999; 45:942-956.
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Glosario
Afinidad medida de la atraccin entre un punto simple del
antgeno y un anticuerpo simple con ese punto.
Analito sustancia, conjunto de sustancias, o factor
que se analizar.
Anticuerpo glicoprotena producida por los linfocitos B en
respuesta a la exposicin a un antgeno y se une especficamente
a ese antgeno.
Antgeno sustancia que es capaz, bajo condiciones apropiadas,
de inducir una respuesta inmune especfica y de reaccionar con el
producto de esa respuesta (anticuerpo o especficamente linfocitos
T sensibilizados).
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Glosario
Exceso de antgeno la presencia de exceso de antgeno en
relacin con la concentracin de anticuerpo, provoca una
desestimacin de la concentracin de antgeno (a veces
denominado efecto prozona).
Antisuero suero que contiene anticuerpos.
Avidez la intensidad combinada de reactividades de un
anticuerpo y un antgeno, representando la afinidad neta de todos
los puntos de unin en el antisuero.
Calibrador material de caractersticas conocidas (concentracin,
actividad, reactividad) usado para calibrar o ajustar un
procedimiento de ensayo. El material debera tener las mismas
caractersticas de rendimiento que las muestras para la prueba en
ese procedimiento.
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Glosario
Quimioluminiscencia emisin de luz a travs de una reaccin
qumica que incluye la oxidacin de un compuesto orgnico por
medio de un oxidante (por ejemplo perxido de hidrgeno).
Sensibilidad clnica la capacidad de una prueba para clasificar
correctamente a los pacientes que padecen una enfermedad
produciendo un resultado de la prueba verdadero positivo.
Especificidad clnica la capacidad de una prueba para clasificar
correctamente a los pacientes que no padecen una enfermedad
produciendo un resultado de la prueba verdadero negativo.
Curva de respuesta de concentracin describe la relacin
entre la seal del ensayo y la concentracin de analito.
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Glosario
Eptope regin nica en un antgeno que se une a un anticuerpo
especfico.
ELISA (Enzimo-inmunoensayo) inmunoensayo que utiliza un
anticuerpo marcado con un marcador enzimtico. El cambio en la
actividad enzimtica como resultado de la reaccin enzimaanticuerpo-antgeno es proporcional a la concentracin de
antgeno y se puede medir.
Resultado falso positivo de un ensayo resultado positivo de
una prueba que se obtiene de una muestra realmente negativa.
Resultado falso negativo de un ensayo resultado negativo de
una prueba que se obtiene de una muestra que realmente contiene
un analito.
Polarizacin por fluorescencia ocurre cuando una molcula
absorbe luz a una longitud de onda y reemite luz a una longitud de
onda mayor.
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Glosario
HAMA (Anticuerpo Human Anti Ratn) producido en los seres
humanos como respuesta inmune luego de una exposicin a
anticuerpos de ratn.
Inmunocomplejos complejos formados por la unin de
molculas de antgenos y anticuerpos, con o sin fijacin del
complemento.
Inmunoglobulina protena compuesta por cadenas pesadas y
livianas y que funciona como un anticuerpo.
Anticuerpos monoclonales anticuerpos que se producen in
vitro por una lnea celular que se origina en una clula simple.
Todas las molculas son de tipo y subtipo simple y poseen una
especificidad antignica simple.
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Glosario
Inmunoensayo no competitivo inmunoensayo en el cual el
analito de la muestra y el analito marcado se presentan en forma
consecutiva al anticuerpo de la reaccin.
Precisin punto hasta el cual los anlisis de replicacin de una
muestra concuerdan entre s. Estadsticamente, es lo contrario de
la varianza de una medicin o clculo.
Radioinmunoensayo (RIA) ensayo cuantitativo para la
deteccin de reacciones antgeno-anticuerpo usando sustancia
marcada radioactivamente para medir la unin de sustancia sin
marcar a un anticuerpo especfico o receptor.
Ensayo sndwich se usa para describir un inmunoensayo, que
combina analitos entre dos anticuerpos especficos.
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Gracias
Abbott Divisin Diagnstico
Global Marketing: Inmunoqumica
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