LABORATORIO DE QUMICA ORGANICA 502502

GUA No 9: ENSAYOS PARA RECONOCIMIENTO DE AMINOACIDOS

I. EL PROBLEMA
El carcter nico de cada aminocido se debe a la estructura del grupo R. En los polipptidos
los grupos R de los aminocidos a menudo se denominan cadenas laterales y pueden variar desde
un tomo de hidrgeno, hasta estructuras complejas como el grupo guanidina, el propsito de esta
prctica es identificar algunos aminocidos que presentan grupos caractersticos en las cadenas
laterales utilizando ensayos cualitativos y especficos para cada funcin.
II. FUNDAMENTO TERICO
Los aminocidos tienen un papel primordial en la formacin de los seres vivos, puesto que
constituyen los bloques fundamentales con que se forman las protenas..
Entre las principales reacciones de identificacin de los aminocidos se encuentran las siguientes:
Reaccin con la ninhidrina
El grupo alfa-amino de los aminocidos forma complejos coloreados con la ninhidrina: violeta
azuloso en la mayora de los aminocidos cuyo grupo amino es primario, amarillo para la prolina e
hidroxiprolina y caf para la asparagina que tiene un grupo amido en la cadena lateral. Esta
reaccin tambin identifica los grupos alfa-amino libres presentes en pptidos y protenas.
Reaccin de Milln
El anillo fenlico tiene un comportamiento caracterstico frente a las sales de Mercurio a pH cido,
formando complejos color rojo ladrillo con el anillo fenlico de la tirosina y las protenas que la
contienen.
Reaccin Xantoprotica
Los anillos aromticos presentes en algunos aminocidos reaccionan con cido ntrico concentrado
formando nitroderivados de color amarillo o anaranjado por lo cual esta reaccin permite reconocer
la presencia de Tirosina, Fenilalanina y Triptfano.
Reaccin de Sakaguchi
El grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la Arginina reacciona con soluciones de alfanaftol en presencia de Bromo en medio alcalino formando complejos coloreados rosados o rojos.
Ciencias Bsicas
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Reaccin de Ehrlich
La presencia de anillos aromticos fenlicos o nitrogenados en la cadena lateral de los
Aminocidos se puede identificar mediante la reaccin con cido sulfanlico y nitrito de Sodio por
formacin de sales de Diazonio fuertemente coloreadas permitiendo as detectar la presencia de
Tirosina e Histidina libres o formando pptidos y protenas.
Reaccin de Hopkins Cole
El anillo indlico presente en la cadena lateral de los alfa-aminocidos libres o haciendo parte de
pptidos y protenas se puede reconocer mediante reaccin con el cido glioxlico a pH cido,
puesto que forma complejos de coloracin violeta o amarillo violeta, permitiendo as identificar al
triptfano.
Reaccin con acetato de Plomo alcalino
Los Aminocidos azufrados como Metionina, Cisteina y Cistina se reconocen por la formacin de
precipitados de Sulfuro de Plomo de color gris oscuro o negro que se forman cuando reacciona con
Acetato de Plomo en medio alcalino.

III. TEMAS DE CONSULTA

El preinforme debe contener los siguientes aspectos:
Investigar la clasificacin de los aminocidos desde los siguientes puntos de vista: Esenciales y no
esenciales para el hombre, cidos y bsicos en forma molecular, polares con carga y sin carga,
apolares.
Estudiar las estructuras, nombres y abreviaturas para los veinte aminocidos que son usados en
la biosntesis de protenas.
Para cada aminocido seale la cadena lateral o el grupo R e identifique las funciones presentes.
Defina protenas
Estudie que aminocidos estn presentes en las siguientes protenas1: Colgeno, albmina,
IV. MATERIALES Y REACTIVOS
Las soluciones estn propuestas para cada grupo de trabajo en el laboratorio, por ejemplo 10 ml
de ninhidrina para un grupo, si el curso es de 8 grupos se requieren mximo 80 ml de ninhidrina.
Materiales
15 Tubos de ensayo
2 Pipetas graduadas de 1 ml.
2 Pipetas graduadas de 2 ml.
2 Pipetas graduadas de 5 ml.
2 Vasos de precipitados de 250 ml.
1 Vasos de precipitados de 600 ml.
1 Embudo ordinario
1 Erlenmeyer de 125 ml.
1 Gradilla para tubo de ensayo
1 Pinza metlica para tubo de ensayo
1 Placa refractaria
1

El profesor le asignar alguna protena para su experiencia en el laboratorio.

Ciencias Bsicas
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1 Aro con nuez

Material general
Soportes
Para prevenir la contaminacin de los reactivos: las soluciones que no estn en frasco gotero
deben tener una pipeta exclusiva y el monitor debe estar pendiente, que las pipetas no sean
intercambiadas durante al prctica.

Reactivos por cada grupo de trabajo:

10 ml de cido sulfrico concentrado
12 ml de cido ntrico concentrado
10 ml de cido actico concentrado
Se requiere la preparacin de los siguientes reactivos:
10 ml de Reactivo de ninhidrina : disolver 100 mg. de nilhidrina en 10 ml. de etanol a 95% y
completar a 100 ml con agua destilada
10 ml de Reactivo de millon:.disolver 1 g de mercurio en 1 ml. De cido ntrico concentrado,
calentar suavemente, dejar enfriar y completar a 60 ml con agua
5 ml de Reactivo de sakaguchi: cuidadosamente disolver 2 g. De bromo en 100 ml. De NaOH al 5%
10 ml de Reactivo de Hopkins cole: cido actico impurificado con trazas de cido glioxlico
Soluciones
30 ml de Hidrxido de sodio 40%.
20 ml de Hidrxido de sodio 10 %.
10 ml de Hidrxido de amonio 10%
20 ml de cido clorhdrico 2%.
20 ml de Acetato de plomo 10%.
20 ml de Sulfato de cobre 0.5%.
10 ml de Nitrito de sodio 0.5% (fresco).
10 ml de cido sulfanlico 0.5% en HCl.
50 ml de Alfa-naftol 0.15%.
15 ml de Soluciones al 0.1% en agua acidulada de los siguientes aminocidos
Cistena metionina.
Glutamina asparragina.
Lisina ornitina.
Tirosina.
Fenil-alanina.
Prolina.
Arginina.
Histidina.
Triptfano.
Alanina.
Albmina de huevo: separar la clara de un huevo y diluir en relacin 1: 10 con agua destilada
Harina de trigo: dispersar 10 g. de harina de trigo en 100 ml. de agua caliente y filtrar a travs de
gasa doble
No olvide pedir al profesor la muestra problema que va a analizar2

Soluciones problema sugeridas: colgeno, albmina, gelatina, y las que el profesor considere

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V. PROCEDIMIENTO
Realice todos los ensayos en tubos limpios y secos
Ensayo con ninhidrina
Rotule cinco tubos de ensayo identificando cada uno como: blanco, alanina, problema, albmina de
huevo, y protena de trigo. A cada uno de los tubos de ensayo agregue 1 mL. de las respectivas
sustancias que indica el rtulo usando agua destilada para el tubo marcado como blanco. Adicione
a cada tubo 1 mL. de reactivo de Ninhidrina, caliente en bao de agua a ebullicin por 10 min.
Observe los colores desarrollados y anote los resultados.
Ensayo de Millon
Rotule 6 tubos de ensayo identificados cada uno como: blanco, tirosina, fenil-alanina, problema,
albmina de huevo y protena de trigo. A cada uno de ellos agregue 2 mL. de la solucin
correspondiente y 1 mL. de reactivo de Millon. Caliente en bao de agua en ebullicin por 10 min.
observe los colores desarrollados y anote los resultados.
Ensayo Xantoprotico
Rotule 6 tubos de ensayo de la misma manera que para el ensayo de Millon. Agregue a cada tubo
2 mL. de la solucin correspondiente y 2 mL. de cido ntrico concentrado. Caliente en bao de
agua a ebullicin, la aparicin de una coloracin amarilla es una prueba positiva para aminocidos
aromticos. Deje enfriar y agregue a cada tubo de ensayo 1.5 mL. de NaOH 40%, el cambio de
color a anaranjado confirma la prueba.
Reaccin de Sakaguchi
Rotule 5 tubos de ensayo como: blanco, arginina, problema, albmina de huevo y protena de trigo.
Agregue a cada uno 5 mL. de las soluciones correspondientes, enfre en bao de hielo por 10 min.
y luego adicione 1 mL. de NaOH 40%, deje enfriar 10 min. ms y luego agregue 5 mL. de -naftol
y 3 gotas de Reactivo de Sakaguchi, la aparicin de un color rosado o rojo es prueba positiva para
el grupo guanidinio.
Reaccin de Ehlrich
En 5 tubos de ensayo rotulados como: blanco, triptfano, problema, albmina de huevo, protena
de trigo. Agregue a cada tubo en el siguiente orden: 1 mL de cido sulfanilico 0.5% y 1 mL. de
Nitrito de sodio, mezcle bien y deje en reposo durante 15 min. luego a cada tubo agregue 1 mL. de
la solucin correspondiente al rtulo. Mezcle y adicione a cada tubo 0.5 mL. de NH4OH 10%.
Observe y anote los resultados.
Reaccin de Hopkins Cole
Rotule 5 tubos de ensayo como: blanco, triptfano, problema, albmina de huevo y harina de trigo.
Adicione a cada uno 2 mL. de la solucin correspondiente y 2 mL. del reactivo de Hopkins Cole.
Mezcle bien el contenido y adicione a cada tubo por las paredes lenta y cuidadosamente, sin
mezclar 1 mL. de cido sulfrico concentrado, la formacin de un anillo violeta en la interfase es
prueba positiva para el triptfano.
Reaccin con acetato de Plomo alcalino
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Rotule 6 tubos de ensayo como: blanco, metionina, cisterna, problema, albmina de huevo y
protena de trigo. En cada uno agregue 2 mL. de la solucin correspondiente, 2 mL. de NaOH 10%
y 0.5 mL. de acetato de Plomo al 10%. Caliente en bao de agua a ebullicin por 5 min. La
formacin de un precipitado gris oscuro o negro es prueba positiva para aminocidos azufrados.
VII. PARA EL ANLISIS DE LA PRACTICA
Con base en los resultados obtenidos para la solucin problema, indique las caractersticas
estructurales e identifique hasta donde sea posible el tipo de aminocidos que contienen las
protenas analizadas.
Con base en los resultados obtenidos para los materiales biolgicos que se ensayaron indique qu
tipo de aminocidos se encuentran presentes.
Escriba las estructuras de los aminocidos que analiz en cada prueba e identifique el grupo que
estaba reaccionando o el responsable de la coloracin positiva del ensayo..
VIII. BIBLIOGRAFA
BOHINSKI. 1991 Bioqumica. 5ed., Pearson. Mxico.
Mathews Van Holde . 2004 Bioqumica. 3 Ed Pearson. Espaa
Fesenden and fesenden. 2002. Qumica orgnica. Interamericana. Mxico

Ciencias Bsicas
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