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Trabajo Practico 7 Amilasa
Trabajo Practico 7 Amilasa
CINTICA ENZIMTICA
TRABAJO PRCTICO N 6
ESTUDIO CINETICO DE LA ENZIMA ALFA-AMILASA.
INTRODUCCION.
La cintica enzimtica tiene por objeto el estudio de la velocidad de las reacciones
catalizadas por enzimas, as como los factores que en ella influyen y los mecanismos por
los cuales transcurren.
La velocidad de las reacciones enzimticas se puede medir:
- por la cantidad de sustrato que desaparece en la unidad de tiempo
- por la cantidad de producto que aparece en la unidad de tiempo
En esta prctica de laboratorio se comprobar la influencia de la concentracin del sustrato
(S) y de la enzima (E) en la cintica del alfa-amilasa en su accin sobre los enlaces alfa 1-4
del almidn. Para ello nos basaremos en la desaparicin del almidn en la unidad de tiempo
mediante el seguimiento de la reaccin de color que produce el mismo, as como sus
productos de hidrlisis con el Iodo en disolucin de Ioduro de potasio (Reactivo de Lugol).
Dado que el almidn est integrado por dos fracciones, la amilosa y la amilopectina, debe
tenerse en cuenta las reacciones que ambas producen (as como sus respectivos productos
de hidrlisis) con el reactivo de Lugol:
AMILOSA AMILOPECTINA + Amilasa -------------- AMILODEXTRINAS
+IODO = resultado Color azul violeta
Lugol
Tubos de ensayo.
placa de porcelana,
vasos de precipitado,
cronmetro,
Mechero
Gradilla
Termmetro
PIPETAS
EXPERIMENTO 1:
ESTUDIO DE LA INFLUENCIA de la CONCENTRACIN DE LA ENZIMA
PROCEDIMIENTO:
1. Tome 4 tubos de ensayo y aada a cada uno 2 ml de disolucin de almidn al 0,25
%.
2. Agregue en cada tubo 3 ml de agua
3. Aada a cada tubo 1; 2; 3 y 4 ml de disolucin del enzima respectivamente, Aada
primero el agua y luego la disolucin del enzima, pues de lo contrario la reaccin
comenzar a verificarse y usted no tendr en cuenta el tiempo transcurrido.
Inmediatamente despus de adicionar la solucin del enzima en cada tubo ponga
en marcha el cronmetro y comience a medir el tiempo del experimento.
4. En cada intervalo de 5 minuto ensaye en la placa de cermica la reaccin de la
solucin experimental con el Lugol: para ello slo tiene que extraer 0.5 ml del tubo
con la enzima y el almidn colocarlo en la placa y luego adicionar una gota de HCl
puro (cido clorhdrico) y dos gotas del reactivo de Lugol. Observe y anote el color
para cada tiempo y cada tubo ensayados.
5. Determine por el procedimiento anterior el tiempo que tarda cada uno de los tubos
en no dar reaccin alguna con el reactivo de Lugol, la mezcla de las dos gotas debe
quedarse del color original del Lugol. Si desea puede adicionar en una excavadura
unas gotas de agua y Lugol para tenerlo como solucin de control.
Construya una tabla de datos brutos que contemple el nmero de cada tubo, el volumen de
la enzima (ml.), Tiempo total de reaccin (min), Velocidad de la reaccin (1/t)
6. Con estos datos construya un grfico de c(E) en el eje ordenado contra velocidad de
reaccin (vol/t) en el eje de abscisas.
REPORTE DE LABORATORIO.
Experimento # 1: Estudio de la influencia de la concentracin del enzima.
1. Describa qu caractersticas estructurales del almidn permiten su identificacin
mediante las disoluciones de yodo, y el efecto de la amilasa salival sobre los enlaces
del almidn (esto ser la Introduccin de su informe). Describa en este aparatado la
pregunta de investigacin puesta a prueba, la hiptesis y las predicciones, seale las
variables involucrados as como el mtodo que utiliz para controlar al menos una
de las variables control.
2: Materiales y Mtodo: explique con SUS PALABRA LOS MTODOS UTILIZADOS.
3. RESULTADOS: Anexe la tabla y el grfico de velocidad de reaccin contra c(E),
tomando como concentracin del enzima el volumen de la solucin utilizado en cada tubo.
Por qu se puede tomar como velocidad de reaccin el inverso del tiempo?. DESCRIBA
LOS RESULTADOS
3. CONCLUSIONES Y EVALUACIN: Plantee las conclusiones a que puede arribar de
los resultados del experimento. EXPLIQUE LOS RESULTADOS ENCONTRADOS
4. Resuma las dificultades encontradas en el ensayo DEBIDO A LOS ERRORES DE
DISEO EXPERIMENTAL
3. RESULTADOS: Anexe la tabla y el grfico elaborados segn las indicaciones del trabajo
prctico, tomando como valor de c(S) la concentracin de sustrato en cada caso. Por qu
en este caso para calcular la velocidad de la reaccin es necesario dividir el volumen de
sustrato entre el tiempo? DESCRIBA LOS RESULTADOS
4. CONCLUSIN Y EVALUACIN: Analice el grfico y plantee las conclusiones a que
puede llegaren este caso. EXPLIQUE LOS RESULTADOS
5. Describa las dificultades presentadas en este ensayo PUNTUALIZANDO EN LOS
ERRORES DEL DISEO.