UNIVERSIDAD ANDRES BELLO

FACULTAD DE CIENCIAS BIOLGICAS

DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BIOLGICAS

LABORATORIO DE BIOLOGA CELULAR BIO-131

GUA N 6:
MITOSIS, MEIOSIS Y FECUNDACIN

INTRODUCCIN
Tal como enuncia la Teora Celular todos los organismos estn compuestos de clulas y
todas las clulas provienen de una clula preexistente. La capacidad de reproducirse es
una propiedad fundamental de la clula, la cual est finamente regulada, de modo que la
informacin gentica se conserve y se mantenga un equilibrio y una continuidad
genealgica entre las clulas preexistentes y las clulas nuevas.
Objetivo General del laboratorio:
Reconocer las diferentes etapas de la divisin celular, sealando las caractersticas ms
relevantes de cada fase; reconocer los procesos de gametognesis, identificando los
diferentes tipos celulares involucrados e identificar vulos recin fecundados, a travs de la
observacin de la reaccin cortical del vulo.

CICLO CELULAR
As como los seres superiores cumplen con un ciclo de vida en el que nacen, crecen, se
reproducen y mueren, las clulas en crecimiento pasan por el llamado Ciclo Celular. ste
comprende dos etapas fundamentales, la interfase y la divisin propiamente tal, que
ocurre por los procesos de mitosis o meiosis (Fig. 1).
La interfase es el perodo ms largo del ciclo celular y corresponde al tiempo que toma
una clula entre una divisin mittica y la siguiente, o sea que puede entenderse como un
perodo en el cual la clula se prepara para dividirse. Durante este tiempo, la clula
aumenta lentamente su tamao y duplica su material gentico en una secuencia ordenada
de eventos que pueden subdividirse en tres etapas principales, G1, S y G2.
Despus de una divisin celular, las clulas hijas resultantes comienzan la interfase de un
nuevo ciclo celular en la etapa G1. Durante esta etapa la clula retoma su actividad
biosinttica que durante la mitosis es muy baja, llevndola nuevamente a sus niveles
normales. Luego pasa a la fase S. sta es una etapa de sntesis, en la cual la clula
sintetiza ADN y termina cuando el contenido de ADN se ha duplicado y los cromosomas
se han replicado. La etapa siguiente es G2, en ella la clula se prepara para su divisin
mediante un perodo de rpido crecimiento y un punto de control que determina si el
ADN necesita ser reparado por daos desde la ltima divisin, por lo que la divisin no
contina mientras no se complete la reparacin del ADN; si el dao en el ADN es muy
extenso, la clula entra en un proceso de apoptosis o muerte celular programada.
Despus de esta serie de etapas la clula se encuentra lista para una nueva divisin,
entrando en la fase M (mitosis).

FIGURA 1: Ciclo celular completo.

MITOSIS
Durante la mitosis una clula se divide y da origen a dos clulas hijas genticamente
iguales entre s. Lo que ocurre con el material gentico es una separacin equitativa de dos
conjuntos cromosmicos iguales entre s y al de la clula original. Esto es posible gracias a
que en la fase S de la interfase el material gentico y las protenas que constituyen la
cromatina han sido duplicados. La mitosis completa de una clula demora
aproximadamente una hora, durante la cual ocurren muchos eventos diferentes, los que se
han agrupado en 4 etapas (Fig. 3):
1. Profase: Dentro del ncleo la cromatina se condensa para formar los
cromosomas. Al principio stos se ven como filamentos largos y finos, pero al
trmino de la profase son ms cortos y gruesos, ubicndose cerca de la envoltura
nuclear. Los centrolos se han duplicado y se encuentran en polos opuestos de la
clula. Finalmente, la envoltura nuclear se rompe y la profase termina.
2. Metafase: Los cromosomas condensados al mximo se ubican en el centro o
ecuador de la clula gracias a la ayuda del huso mittico, que es un complejo
conjunto de microtbulos que se orientan de polo a polo de la clula cerca de los
centrolos. Los microtbulos se unen a los cromosomas al insertarse en el
cinetocoro de cada centrmero. Durante la metafase cada cromosoma est
compuesto por dos cromtidas, cada una de las cuales posee un cinetocoro (Fig. 2).

FIGURA 2: Esquema de un cromosoma metafsico.

3. Anafase: La caracterstica principal de esta etapa es el movimiento de los
cromosomas hacia los polos de la clula. Esto ocurre gracias al acortamiento de
los microtbulos del huso mittico.
4. Telofase: Sobre los cromosomas que estn en los polos de la clula se forma la
envoltura nuclear. La cromatina se descondensa y el ncleo aumenta de tamao
por hidratacin. El ncleo resultante es esfrico y en l se puede observar el
nuclolo.
Citodiresis: En clulas animales esta etapa ocurre por un estrangulamiento del sector del
citoplasma que se encuentra entre los dos ncleos nuevos gracias a una gran concentracin
local de microfilamentos, lo que implica un gasto de energa. En clulas vegetales existe la
pared celular y esta etapa ocurre por la formacin de un tabique entre los dos ncleos
nuevos. El tabique se forma por vesculas del sistema de Golgi y finalmente se forman las
dos membranas plasmticas a cada lado del tabique, quedando completa la divisin celular.

FIGURA 3: Esquema general de la mitosis.

MEIOSIS
En todos los ciclos de reproduccin sexual la nueva generacin de individuos se origina
por la fusin de dos clulas haploides que provienen de los organismos progenitores. Estas
clulas son los gametos y se obtienen mediante el proceso de Citodiresis que ocurre en
todos los organismos con reproduccin sexual. La meiosis implica la produccin de
clulas haploides, las que se mantienen como tales hasta el momento de la fecundacin, en
el que los gametos se fusionan y el nuevo organismo obtiene un estado diploide. La
meiosis ocurre slo en las clulas germinales de las gnadas y da como resultado gametos,
ya sean vulos o espermios, segn el sexo del organismo.
La meiosis implica una etapa de duplicacin del ADN y dos divisiones celulares
sucesivas para formar as cuatro clulas haploides que contienen la mitad del material
gentico original a partir de cada clula que entra en este proceso. Los eventos ms
destacados de la meiosis son: duplicacin del ADN nuclear, apareamiento de los
cromosomas homlogos, dos divisiones celulares sucesivas y finalmente, la formacin de
clulas hijas haploides.
Durante este proceso hay una activa transcripcin y sntesis de protenas celulares,
producindose una gran variabilidad gentica que se obtiene gracias a los fenmenos de
crossing-over y permutacin de los cromosomas, lo que asegura una muy baja
posibilidad de obtener gametos genticamente iguales. Lo anterior es una ventaja al
momento de adaptarse a un medio dinmico en constante cambio y otorga la
individualidad de los organismos.
Un ncleo diploide contiene dos juegos de cromosomas muy similares entre s, cada
uno de los cuales proviene de uno de los padres. Estas dos versiones de cada cromosoma
son los llamados cromosomas homlogos. Cuando los cromosomas se duplican por
replicacin de ADN, las copias del cromosoma replicado en un principio permanecen
fuertemente asociadas y se llaman cromtidas hermanas.
En una divisin meitica (Fig. 6) en que las clulas que se forman son haploides, cada
clula hija debe contener slo un miembro de cada cromosoma homlogo, el de origen
materno o el de origen paterno, obtenindose as slo la mitad del nmero original de
cromosomas.
Despus de la replicacin del ADN, cada par de cromosomas duplicados se empareja con
su homlogo y forman una estructura llamada bivalente que posee cuatro cromtidas.
Cuando la primera divisin celular ocurre, cada clula hija contiene dos copias de uno de
los cromosomas homlogos. En la segunda divisin celular los cromosomas no se
duplican; slo se ubican en el centro de la clula en el huso mittico y las cromtidas
hermanas se dividen como en una mitosis normal.
La meiosis se divide en varias etapas, stas se nombran de la misma forma que las etapas
de la mitosis, pero se les agrega un nmero I o II segn se trate de la primera o segunda
divisin celular, as, la meiosis se divide en:

I.

Profase I: sta es la primera etapa de la meiosis y tambin es la de mayor

duracin. En ella ocurre el proceso de crossing-over en el que los cromosomas
homlogos intercambian parte de su ADN por un proceso denominado
recombinacin gentica. Esto cambia el contenido del ADN de los gametos
respecto al del organismo progenitor y ocurre cuando los cromosomas homlogos
se encuentran muy juntos. Los lugares en los que ocurre recombinacin se llaman
quiasmas.

La profase est dividida en 5 etapas.

En el Leptoteno cada cromosoma se condensa, permaneciendo unido por sus extremos a
la envoltura nuclear. Los cromosomas ya se han replicado y consisten en dos cromtidas
hermanas que se encuentran muy juntas.
En el Cigoteno los cromosomas homlogos comienzan a aparearse por sus extremos en
puntos muy cercanos a la envoltura nuclear. Luego, como en una especie de cierre, los
cromosomas continan aparendose para alinearse en toda su extensin, quedado los
genes homlogos enfrentados. Esta estructura se llama complejo sinaptonmico (Fig. 4),
donde los cromosomas homlogos as apareados son un bivalente que en realidad es una
ttrada ya que cada uno de los dos cromosomas est duplicado.

FIGURA 4: Complejo Sinaptonmico.

En el Paquiteno, que puede durar varios das, ocurren las recombinaciones en que se
intercambia el material gentico de cada cromosoma con su homlogo.
En el Diploteno los cromosomas homlogos se desaparean, el complejo sinaptonmico se
deshace y los cromosomas homlogos quedan separados, aunque permanecen unidos a
travs de los quiasmas. En esta etapa y en toda la profase I, ocurre sntesis de ARN.
En la Diacinesis la sntesis de ARN cesa, los cromosomas se condensan intensamente y
se sueltan de la envoltura nuclear que comienza a desaparecer. Los cromosomas

homlogos siguen unidos a travs de los quiasmas (Fig. 5) en los lugares donde ha
ocurrido recombinacin.

FIGURA 5: Quiasmas.

En este punto termina la Profase I y comienzan las etapas de divisin celular propiamente
tal:
II.

Metafase I: En esta etapa desaparecen los quiasmas. Los centrolos se encuentran

duplicados y se mueven hacia los polos de la clula. Se organiza el huso mittico y
los cromosomas se ubican por pares homlogos en el centro de la clula, de
modo que cada cromosoma de un par homlogo se orienta hacia un polo diferente
de la clula, sin importar si es paterno o materno, lo que genera diferentes
distribuciones posibles de cromosomas, aumentndose la variabilidad gentica del
proceso.

III.

Anafase I: Los cromosomas migran hacia polos opuestos de la clula,

segregndose los cromosomas homlogos en los extremos opuestos de ella, gracias
a la depolimerizacin y polimerizacin de los microtbulos del huso mittico.

IV.

Telofase I: Alrededor de los cromosomas en cada extremo de la clula se

reconstituye la envoltura nuclear. La cromatina se descondensa y casi
simultneamente, ocurre la divisin del citoplasma o citodiresis.

Despus de la primera divisin cada clula resultante tiene la mitad del nmero de
cromosomas original, pero cada cromosoma se encuentra duplicado y compuesto por
dos cromtidas hermanas. Ahora comienza la segunda divisin celular, sin que se
produzca una nueva duplicacin del ADN.
V.

Profase II: La cromatina se condensa nuevamente en cromosomas y la envoltura

nuclear desaparece.

VI.

Metafase II: Los cromosomas se ubican en el centro de la clula y el huso mittico

se une a ellos de modo que cada cromtida hermana se orienta hacia un polo
distinto de la clula.

VII.
VIII.

Anafase II: Cada cromtida hermana migra hacia un polo distinto de la clula.
Telofase II: Alrededor de los cromosomas en cada polo de la clula se
reconstituye la envoltura nuclear, se descondensan los cromosomas y ocurre la
divisin del citoplasma.

Cada clula resultante despus de la segunda divisin meitica es haploide, ya que

tiene slo la mitad de los cromosomas originales de la especie y cada cromosoma tiene
slo una cromtida.

FIGURA 6: La meiosis.

FECUNDACIN
En el proceso de fecundacin (Fig. 7) los gametos haploides se fusionan para dar
origen a un nuevo organismo diploide. Cuando esto ocurre, el vulo se activa para
comenzar el desarrollo del nuevo individuo y los ncleos de ambos gametos se fusionan
para formar el genoma del nuevo organismo.

FIGURA 7: Esquema del proceso de fertilizacin.

La fecundacin es un proceso especie-especfico, lo que quiere decir que los espermios y
vulos de cada especie se reconocen entre s a travs de molculas especiales de adhesin,
lo que impide que espermios de una especie fertilice vulos de una especie diferente.
Aunque muchos espermios ataquen a un mismo vulo (Fig. 8), un vulo slo puede ser
fecundado por un espermio. La poliespermia se encuentra bloqueada gracias a una
despolarizacin rpida de la membrana del vulo, el cambio de las cargas a travs de la
membrana impide que un segundo espermio pueda fusionarse. Esto es importante, porque
si ms de un espermio inyecta su ncleo en un vulo se forma ms de un huso mittico y la
segregacin de los cromosomas durante la divisin celular es anormal, resultando en
embriones alterados o no viables.

FIGURA 8: Microfotografa electrnica de un vulo rodeado de espermios.

La fertilizacin comienza cuando la cabeza de un espermio contacta la cubierta

gelatinosa de un vulo. Esto gatilla en el espermio la llamada reaccin del acrosoma, en la
que el contenido de la vescula del acrosoma se libera al medio externo. Este proceso
consiste en enzimas hidrolticas que ayudan a penetrar a travs de la capa vitelina para llegar
a la membrana plasmtica. Cuando las dos membranas plasmticas entran en contacto
se fusionan, y as se produce la entrada del ncleo del espermio hacia el interior del
vulo. Una vez fertilizado el vulo pasa a llamarse cigoto.
Una vez que los dos pro-ncleos se encuentran en el interior del vulo, deben migrar para
encontrarse y poder fusionarse. Este movimiento se realiza por medio del citoesqueleto. Los
cromosomas se juntan cuando las envolturas nucleares desaparecen en preparacin a la
primera divisin celular, dando trmino al proceso de fecundacin y comenzando el
desarrollo embrionario.

ACTIVIDADES PRCTICAS
A)
Observacin microscpica del proceso de fecundacin in vitro de un
enquinodermo tpico Tetrapygus niger (Molina) (Echinodermata) o de un bivalvo
tpico Mytilus chilensis (Hup) (Mytilidae).
Los equinodermos (Echinodermata: Echinoidea) son organismos invertebrados
exclusivamente marinos, de cuerpo relativamente esfrico y de simetra radial pentamrica.
La caracterstica principal de este grupo de animales es la presencia de un esqueleto
formado por capas calcreas que pueden articularse entre s o presentarse fusionadas,
formando una concha esqueltica rgida. En la forma tpica el esqueleto posee tubrculos o
espinas que se proyectan dando a la superficie un aspecto rugoso o espinoso. (Fig. 9).

FIGURA 9: Esquema de la morfologa externa e interna de un equinodermo tipo.

Por otra parte, los bivalvos se caracterizan por presentar una concha dura en la que el
carbonato clcico es el componente principal. La clase Bivalva, comprende quizs las
formas ms populares como lo son las ostras, los mejillones (choritos), las almejas, las
arcas o pepitonas y las vieiras o pectnidos. Todas se caracterizan por tener el cuerpo
comprimido por dos valvas unidas dorsalmente por medio de un gozne o ligamento, un pie
muscular caracterstico y una cavidad que encierran los rganos, agrupados en una masa
visceral rodeada por un manto, el cual secreta la concha calcrea externa.
Dentro de los bivalvos existen especies que desarrollaron diversas especializaciones,
permitindoles vivir en distintos ambientes, ya sea en forma libre o fija a sustratos duros
por una estructura llamada biso (Fig. 10).

FIGURA 10: Esquema de la morfologa externa e interna de un bivalvo tipo.

ACTIVIDAD PRCTICA N 1:
Con el objeto de obtener especmenes de erizo negro o chorito adecuados para nuestro
trabajo prctico, se escogieron ejemplares vivos y se mantuvieron en un acuario con agua
de mar filtrada, suministrando una adecuada oxigenacin del medio con una bomba de
aire.
En los erizos regulares se observan cinco gnadas suspendidas a lo largo de los
interambulacros en el lado interno del caparazn. De cada gnada parte un gonoducto corto
que se extiende aboralmente abrindose a un gonoporo localizado sobre una de las cinco
placas genitales. Una forma de detectar el sexo de los individuos es mediante el color de
las gnadas (amarillas en los machos y rojizas en las hembras), ya que estos animales no
presentan dimorfismo sexual externo.
Para tener acceso a las gnadas hay que realizar cortes de las placas crneas mediante un
bistur o una tijera fina en el extremo aboral, teniendo especial cuidado de no romper las
estructuras internas.
En los choritos las gnadas estn compuestas por conductos ciliados ramificados desde
donde se abren numerosos sacos o folculos, se encuentran rodeando el intestino y estn
muy prximas, siendo a veces muy difcil separarlas. Cuando las gnadas o el tejido
gonadal han alcanzado la plena madurez, son fciles de ver y ocupan gran parte del cuerpo
blando del animal. Los gonoductos que transportan los gametos hasta la cavidad corporal
se desarrollan, aumentan de tamao y se pueden observar a simple vista. El color es la
caracterstica que permite diferenciar a machos de hembras, siendo las gnadas de los
primeros de color amarillo y en el caso de las hembras de color caf oscuro.
Una vez identificadas las gnadas se toma una muestra de gametos masculinos de
los ejemplares con gnadas amarillas, presionado suavemente sobre la gnada hasta
poder aspirar con una pipeta Pasteur la solucin lquida que se libera. Este
procedimiento permite obtener espermatozoides maduros, los que deben ser

depositados en un vaso de precipitados pequeo. Repitiendo el mismo

procedimiento con los ejemplares de gnadas rojas o caf oscuras (hembras), se
obtienen vulos maduros, los que al igual que en el caso anterior, deben ser
depositados en un vaso precipitado pequeo para su posterior observacin al
microscopio.
Ya obtenidos los gametos se debe adicionar a cada vaso precipitado 2 ml de agua
de mar filtrada, con el objeto de resuspender las clulas y evitar que se deshidraten.
Una gota de la solucin que contiene a los gametos de ambos sexos deben ser
depositada, utilizando un gotario, en ambos extremos de un portaobjetos excavado
rotulado, identificando claramente qu extremo es el que contiene cada muestra.
En el centro del mismo portaobjetos debe ser depositada una gota de la solucin
que contiene gametos femeninos y sobre sta una de gametos masculinos,
procurndose as el contacto entre ellos y la posterior fecundacin.
Antes de llevar la muestra al microscopio deposite sobre las muestras un
cubreobjeto y aplicando sus conocimientos de microscopa, observe la muestra con
los objetivos 4X, 10X y 40X.
Describa brevemente sus observaciones, caracterizando la estructura de los gametos
y su comportamiento en cada una de las muestras.

B)
Observacin microscpica de preparaciones permanentes de tejidos vegetales
en distintas etapas de la mitosis.
ACTIVIDAD PRCTICA N2:
Aplicando sus conocimientos de microscopa observe la preparacin de mitosis en
raz de clulas vegetales de Allium cepa (L.).

Identifique en el tejido observado clulas que se encuentren en distintas etapas de la

mitosis, indique sus caractersticas principales realizando un dibujo simple,
esquemtico y claro.

C)
Observacin microscpica de una preparacin permanente de tejidos en
meiosis.
ACTIVIDAD PRCTICA N3:
Aplicando sus conocimientos de microscopa observe la preparacin de
gametognesis femenina y masculina en tejido ovrico y testicular de Rattus
norvegicus (Berkenhout), respectivamente.
Identifique en la preparacin observada clulas en distintas etapas de maduracin,
describiendo sus caractersticas principales en un dibujo simple, esquemtico y claro.

D)
Observacin microscpica de preparaciones permanentes de gametos
masculinos.
ACTIVIDAD PRCTICA N4:
Observe detalladamente la morfologa de las clulas espermatozoides de Bos
taurus (Linnaeus) y Rattus norvegicus (Berkenhout). Realice un esquema de sus
estructuras caractersticas.

BIBLIOGRAFA
Biologa Celular y Molecular. De Robertis y de Robertis.
11 ed., 2da impresin, 1998, Ed. El Ateneo, Bs. Aires.
Elementos de Biologa Celular y Gentica. Parte 3. Transmisin de la Informacin y
Reproduccin. Varios Autores.1 ed., 1985, Departamento de Biologa Celular y Gentica,
Facultad de Medicina, Universidad de Chile.
Molecular Biology of the Cell. Alberts, Bray, Lewis, Raff Roberts & Watson. 3th ed.,
1994, Garland Publishing Inc., New York & London.
Zoologa de los Invertebrados. Barnes, R., 2 edicin, 1969, Ed. Interamericana, Mxico.
Histologa humana. Stevens, Alan. 3 ed., 2006.
Histologa [recurso electrnico]: Texto y atlas color con biologa celular y molecular.
Ross, Michael H. 5a. ed.; 2007.

Materiales Laboratorio. Mitosis, Meiosis y Fecundacin

Materiales por grupo (3 alumnos por grupo)
2 unidades de erizo negro o chorito maltn.
3 microscopios.
Preparaciones histolgicas (1 de cada una):
Mitosis (catafilo de cebolla),
Corte de testculos,
Corte de ovario,
Muestra de espermatozoides de toro y rata.
1 Tijera.
1 pinza.
2 gotarios.
1 porta objeto escavado.
Cubre objetos
2 vasos pp. 50 ml
Lpiz rotulador
Por curso:
Agua de mar filtrada.
Televisor con microscopio.
3 Aceite de inmersin.
3 Solucin limpiadora.
Papel ptico.