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PRCTICA NMERO 1
COLORACIN DE GRAM
REALIZADO POR:
Guzmn Prez Jhenny
Torres vila Jess
Alegre paredes Nadyd
Aguilar Villareal Geraldine
Morillo Herrera Ketty
COLORACIN DE GRAM.
OBJETIVO:
Comprender los pasos necesarios para realizar la tincin de Gram
Reconocer los microorganismos Gram positivos y negativos.
FUNDAMENTOS DE LA PRCTICA:
La tincin de Gram fue creada por Hans Christian Gram a fines del siglo XIX y puede
utilizarse para separar la mayora de las especies bacterianas en dos grandes grupos, a
saber, las que captan el colorante bsico, cristal violeta (es decir las bacterias gran
positivas), y las que pierden ese colorante por el lavado con el decolorante alcohol o
acetona (es decir las bacterias gram negativas).
INTRODUCCIN:
El tamao de la mayora de las clulas
bacterianas es tal que resultan difciles de ver
con el microscopio ptico. La principal
dificultad es la falta de contraste entre la clula
y el medio que la rodea. El modo ms simple de
aumentar el contraste es la utilizacin de
colorantes.
Si se desea simplemente aumentar el contraste
de las clulas para la microscopa, son
suficientes los procedimientos que usan un solo
colorante llamado de tincin simple. Sin
embargo, a menudo se utilizan mtodos que no
tien de igual modo todas las clulas, es el
proceso denominado tincin diferencial. Uno muy usado en
microbiologa es la tincin Gram. Basndose en su reaccin a la
tincin Gram, las bacteras pueden dividirse en dos grupos:
grampositivas y gramnegativas. Esta tincin tiene gran importancia
en taxonoma bacteriana ya que indica diferencias fundamentales de
la
pared
celular
de
las
distintas
bacterias.
Mientras que las bacterias gramnegativas son constantes en su
reaccin, los microorganismos grampositivos pueden presentar
respuestas variables en ciertas condiciones (son gramlbiles). Por
ejemplo, los cultivos viejos de algunas bacterias grampositivas
pierden la propiedad de retener el cristal violeta, y en consecuencia,
se tien por la safranina apareciendo como gramnegativas. Anlogo
efecto se produce en ocasiones por cambio en el medio del
organismo, o por ligeras modificaciones en la ejecucin de la tcnica.
Por este motivo, es preciso atenerse, en la prctica, al procedimiento
establecido.Para explicar el mecanismo de la tincin de gram se han
Productos
que se
utilizan
1) Cristal
violeta
2) Lugol
solucin
iodada
3) Alcohol
color violeta.
4) Safranina Clulas no decoloradas;
Clulas decoloradas; se
quedan teidas de color
tien de color rosado.
violeta.
El mecanismo de la tincin Gram esta reseado en el siguiente
esquema:
MTODO:
MATERIALES:
Cultivo de bacterias ( E. Coli y Streptococcus)
Portaobjetos
Cubreobjetos
Asas de inoculacin
Mechero Bunsen
Hisopos
Colorantes: Cristal Violeta, Lugol, Safranina.
Agua destilada
Alcohol Acetona
Aceite de Imersin
Microscopio
2. Coloracin:
a) 1 minuto en cristal violeta de Hucker (colorante
inicial)
b) se lava con agua destilada
c) 1 minuto en lugol (mordiente)
d) se decolora con alcohol de 95 (decolorante)
e) se lava con agua destilada
f) 1 minuto en fucsina bsica (colorante de contraste)
g) se lava con agua corriente
h) se seca suavemente y sin frotar con papel de filtro
Una vez que la preparacin est totalmente seca, poner
una gota muy pequea de aceite de cedro y observar al
microscopio con el objetivo de inmersin.
3. Observacin
Debe utilizarse el objetivo de
inmersin.
Se coloca una gota de aceite
de cedro sobre la
preparacin. Se enfoca,
preferentemente, con el
micromtrico.
Despus de utilizar el
objetivo de inmersin debe
limpiarse con xilol .
RESULTADOS:
Staphylococcus
EscherichiaColi
CONCLUSIONES:
Las diferencias de composicin de las paredes de las bacterias
grampositivas, que contienen una gruesa capa de peptidoglucano con
numerosos enlaces cruzados de acido teicoico, y las paredes de las
clulas gramnegativas, en las que la capa de peptidoglucano es ms
delgada, explican las diferencias de la tincin de Gram entre estos
dos grupos principales de bacterias es probable que la gran cantidad
de enlaces cruzados de acido teicoico de los microorganismos gram
positivos contribuya a su capacidad de resistir la decoloracin con
alcohol.(Fig. 2) Si bien el colorante de contraste puede ser captado
por los microorganismos gram positivos, su color violeta no se
altera.
DISCUCINES:
La tincin de gram es la tcnica principal utilizada para el examen
microscpico de las bacterias. Casi todas las bacterias de
importancia clnica pueden detectarse con este mtodo.
Las nicas excepciones son:
Los microorganismos que se hallan casi con exclusividad
dentro de las clulas husped (p. ej., clamidias).
2.
3.
4.
6.
fromhttp://www.academia.edu/6245506/TINCION_DE_GRAM_Y_OBSERVACIO
N_MICROSCOPICA.
7.
ANEXOS
1.
2.