Manual Procedimientos Lab Clinico PDF

Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin
AUTORIDADES DEL MINISTERIO DE SALUD
DR. JOS GUILLERMO MAZA BRIZUELA

MINISTRO DE SALUD
DR. JOS ERNESTO NAVARRO MARN
VICEMINISTRO DE SALUD
DR. HUMBERTO ALCIDES URBINA
DIRECTOR GENERAL DE SALUD
DR. JOS ROBERTO RIVAS AMAYA
DIRECTOR DE REGULACIN
DR. MARIO VICENTE SERPAS MONTOYA
DIRECTOR DE VIGILANCIA DE LA SALUD
DRA. ENA GARCA
DIRECTORA DE PLANIFICACIN.
LIC. JUDITH ZARATE DE LPEZ
DIRECTORA ADMINISTRATIVA
LIC. MARA GUADALUPE DE GUZMN
JEFE LABORATORIO CENTRAL DR. MAX BLOCH
CRDITOS
Lic. Mara Guadalupe de Guzmn
Jefe Laboratorio Central Dr. Max Bloch
Lic. Patricia Lissette Mira Gmez
Sub-Jefe, Laboratorio Central Dr. Max Bloch
Lic. Ana Vilma Guevara de Aguilar
Jefe rea Clnica, Laboratorio Central Dr. Max

Bloch.
Lic. Blanca Sonia Velsquez de Prez
Coordinadora de Gestin de la Calidad,

Laboratorio Central Dr. Max Bloch.
Lic. Ana Telma Mndez de Pineda
Coordinadora rea Inmunohematologa,

Laboratorio Central Dr. Max Bloch
Lic. Ana Vilma de Vsquez
Coordinadora de Proyectos, Laboratorio

Central Dr. Max Bloch.
Lic. Amada Gloria de Baires
Jefe Seccin de Coprologa y Urianlisis,

Lic. Zandra Jimnez de Fuentes
Jefe Seccin de Bacteriologa, Laboratorio

Lic. Ana Patricia Amaya
Jefe Seccin de Qumica Cnica, Laboratorio

Lic. Marmin Ruth Carrillo de Sosa
Jefe Seccin Malaria y Serologa e

Inmunologa, Laboratorio Central Dr. Max
Bloch.
Lic. Jssica Carolina de Rivera
Profesional de Laboratorio Clnico, Laboratorio

Lic. Lisette Esmeralda Ruiz
Supervisora de Laboratorios de la Regin

Central de Salud.
Lic. Ana Mara de Mendoza

Metropolitana de Salud.
Lic. Jorge Julio Mndez Len
Supervisor de Laboratorios de la Regin

Occidental de Salud.
Lic. Herminia Vsquez de Lpez

Paracentral de Salud.
Lic. Lorena Anglica Villacorta

Oriental de Salud.
Lic. Mara Victoria Martnez
Jefe de Laboratorio de la Unidad de Salud

Daz del Pinal, Regin Central de Salud.
Lic. Mercedes Arely Ramos

Lourdes Coln, Regin Central de Salud.
Tec. Ana Mara Chachagua
Jefe de Laboratorio de la Unidad de Salud El

Refugio, Regin Occidental de Salud.
Lic. Elia Luz Estrada

Cara Sucia, Regin Occidental de Salud.
Profesionales de Laboratorio Clnico y

Laboratoristas
Unidades de Salud del primer nivel de

atencin.
COORDINACIN
Lic. Blanca Sonia Velsquez de Prez
Coordinadora de Gestin de la Calidad,

ASESORA TCNICA
Dra. Carla Mara Schnenberg
Colaborador Tcnico, Direccin de Regulacin

del MSPAS.
DIAGRAMACIN Y DISEO
Julio Adalberto Castillo
Coordinador Centro de Cmputo, Laboratorio

Red de Laboratorios Clnicos de Regin Occidental:

SIBASI Santa Ana
Tc. Marta Isabel Morn
U/S Candelaria Frontera
Lic. Jos Elas Morales
U/S Casa del Nio
Lic. Ena Elizabeth Alfaro de Ochoa
U/S Coatepeque
Tc.Luis Alberto Hernndez
U/S El Congo
Tc .Luisa Beatriz Castro Santamara
U/S El Palmar
Tc. Oscar Oswaldo Aviles
U/S Santa Brbara
Lic. Alma Carpio de Rivas
U./S. San Rafael
Lic .Emma Victoria Campos
U/S Toms Pineda
Lic. Erika Barrera de Sigenza
U.S Texistepeque
SIBASI Ahuachapn
Lic. Regina Elizabeth Callejas
U/S Ahuachapn
Tc. Carmen Isabel de Portillo
U/S Apaneca
Tc. Juan Carlos Linares Ibarra
U/S Ataco
Lic. Claudia M. Lipe Vizcarra
U/S Atiquizaya
Lic. Elia Luz Estrada Chamul
U/S Cara Sucia
Tc .Ana Maria Chachagua
U/S El Refugio
Lic. Jos Roberto Salazar
U/S Guaymango
Lic .Sandra Elizabeth Gutirrez
U/S Las Chinamas
Lic. Digna Esperanza Escobar
U/S La Hachadura
Tc .Carlos Alberto Carpio Brizuela
U/S. Tacuba
SIBASI Sonsonate
Lic. Xiomara Marleny Turcios Luna
U/S Acajutla
Lic .Norma lvarez de lvarez
U/S Armenia
Tc .Silvia Guadalupe Ramrez
U/S Izalco
Lic. Guadalupe de Garca
U/S Sonzacate
Lic. Nuria del Carmen Morales
U/S San Julin
Lic. Irma Velsquez de Aguirre
U/S Juayua
Financiado por: Agencia Espaola de Cooperacin Internacional

ASISTENCIA TECNICA AGENCIA ESPAOLA
DE COOPERACION INTERNACIONAL
Dra. Margarita Valencia Aruz

Ing. Javier Espejo
PRESENTACIN
l Ministerio de Salud Pblica y Asistencia Social a travs de la Direccin de Vigilancia

de la Salud y a iniciativa del Laboratorio Central Dr. Max Bloch, ha elaborado el presente manual que contiene los procedimientos tcnicos que deben realizarse en los Laboratorios
Clnicos del Primer Nivel de Atencin de este Ministerio.

Este documento se ha desarrollado con la finalidad de contar con un instrumento que contenga la secuencia de los pasos necesarios, que aseguren la correcta ejecucin de todos los procedimientos tcnicos de cada uno de los Laboratorios, y de esta manera contribuir al ordenamiento y
estandarizacin de los mismos.

Por lo anterior, este Despacho Ministerial pone a disposicin de todos los profesionales
involucrados en los procesos descritos, el presente documento denominado: Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin.

Los contenidos de esta publicacin deben incorporarse en las actividades diarias de los
Laboratorios Clnicos de los establecimientos del Primer Nivel de Atencin, a fin de garantizar la
emisin de resultados confiables, comparables y oportunos, que colaboren a mejorar la condicin
de salud de la poblacin.
Dr. Jos Guillermo Maza Brizuela.

Ministro de Salud.
NDICE
1. INTRODUCCIN
2.0 OBJETIVOS....................................................................................................................... 1
2.1. OBJETIVO GENERAL ............................................................................................... 1
2.2. OBJETIVOS ESPECFICOS ...................................................................................... 1
3. BIOSEGURIDAD ................................................................................................................. 2
4. CONTROL DE CALIDAD .................................................................................................... 4
4.1. CONTROL DE CALIDAD EN COPROLOGA ............................................................ 5
4.2. CONTROL DE CALIDAD EN URIANLISIS .............................................................. 5
4.3. CONTROL DE CALIDAD EN QUMICA CLNICA ...................................................... 6
4.4. CONTROL DE CALIDAD EN HEMATOLOGA .......................................................... 6
4.5. CONTROL DE CALIDAD EN INMUNOLOGA ........................................................... 6
4.6. CONTROL DE CALIDAD EN MICROBIOLOGA ....................................................... 7
5. COPROLOGA..................................................................................................................... 8
5.1. EXAMEN FSICO DE HECES ................................................................................... 9
5.2. EXAMEN MICROSCPICO DE HECES .................................................................... 11
5.3. PRUEBA DE AZUL DE METILENO ............................................................................ 14
5.4. COLORACIN DE ZIELH NEELSEN MODIFICADA PARA LA INVESTIGACIN `
DE COCCIDIOS ................................................................................................................ 17
6. URIANLISIS ...................................................................................................................... 20
6.1. TOMA DE MUESTRA PARA ANLISIS DE ORINA .................................................... 21
6.2. EXAMEN FSICO DE ORINA ..................................................................................... 22
6.3. EXAMEN QUMICO DE ORINA ................................................................................. 24
6.4. EXAMEN MICROSCPICO DEL SEDIMENTO URINARIO ...................................... 27
7. QUMICA CLNICA ............................................................................................................. 30
7.1. TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA EXMENES DE QUMICA
CLNICA ............................................................................................................................ 31
7.2. GLUCOSA SANGUNEA ............................................................................................ 34
7.3. COLESTEROL ........................................................................................................... 37
7.4. TRIGLICRIDOS ....................................................................................................... 40
7.5. CIDO RICO ........................................................................................................... 43
8. HEMATOLOGA .................................................................................................................. 46
8.1. TOMA DE MUESTRA DE SANGRE CAPILAR PARA EXMENES
HEMATOLGICOS
.............................................................................................................. 47
8.2. TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA EXMENES
HEMATOLGICOS ............................................................................................................ 49
8.3. PREPARACIN Y TINCIN DEL FROTIS SANGUNEOS ........................................
52
8.4. EXAMEN MICROSCPICO DEL FROTIS SANGUNEO PARA FRMULA

DIFERENCIAL ...................................................................................................................
55
8.5. FROTIS DE SANGRE PERIFRICA ..........................................................................
58
8.6. HEMATOCRITO .........................................................................................................
61
8.7. HEMOGLOBINA .........................................................................................................
63
8.8. RECUENTO DE LEUCOCITOS .................................................................................
66
8.9. RECUENTO DE PLAQUETAS (Mtodo directo en cmara) .....................................
69
8.10. ESTIMADO DEL NMERO DE PLAQUETAS ..........................................................
72
8.11. RECUENTO DE RETICULOCITOS ..........................................................................
74
8.12. VELOCIDAD DE ERITROSEDIMENTACIN ..........................................................
76
8.13. TIEMPO DE SANGRAMIENTO ................................................................................
78
8.14. TIEMPO DE COAGULACIN ...................................................................................
80
8.15. CONCENTRADO DE STROUT ................................................................................
82
8.16. GOTA GRUESA ........................................................................................................
84
9. INMUNOLOGA ...................................................................................................................
85
9.1. TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA EXMENES DE

INMUNOLOGA .................................................................................................................
86
9.2. PRUEBA RPIDA DE REAGINA (Mtodo RPR) .......................................................

9.3. DETECCIN DE ANTICUERPOS DEL VIRUS DE LA INMUNODEFICIENCIA
HUMANA (Prueba rpida) .................................................................................................
89
93
9.4. ANTGENOS FEBRILES.............................................................................................
96
9.5. TIPEO SANGUNEO ..................................................................................................
99
9.6. DETERMINACIN DE VARIANTE Du ....................................................................... 102

9.7. PRUEBA DE EMBARAZO ......................................................................................... 105
10. MICROBIOLOGA BSICA ...............................................................................................
108
10.1. PREPARACIN DE UN EXTENDIDO DE MUESTRA .............................................
109
10.2. EXAMEN MICROSCPICO (Coloracin de Gram) .................................................
111
10.3. DIRECTO AL FRESCO DE SECRECIN VAGINAL ................................................
114
10.4. DIRECTO DE SECRECIN VAGINAL COLOREADO CON GRAM ........................ 116

10.5. DIRECTO DE SECRECIN URETRAL COLOREADO CON GRAM ....................... 118
10.6. DIRECTO PARA CIDO ALCOHOL RESISTENTE (Tuberculosis) .......................... 120
11. REVISIN Y ACTUALIZACIN ......................................................................................... 121
12. GLOSARIO DE TRMINOS ............................................................................................. 122
13. ABREVIATURAS ............................................................................................................... 126
14. ANEXOS ............................................................................................................................ 127
15. BIBLIOGRAFIA .................................................................................................................. 145
1. INTRODUCCIN
os laboratorios clnicos representan un apoyo primordial para el rea mdica, ya que a

travs de los anlisis realizados en ellos se pueden diagnosticar diferentes patologas
y establecer el tipo de tratamiento que se debe administrar al paciente. Es por eso, que conscientes
de la gran importancia y con la finalidad de alcanzar un trabajo de calidad, es indispensable contar
con un manual que presente de manera formal y sistemtica los procedimientos de la Red de
Laboratorios de los establecimientos del Primer Nivel de Atencin en Salud.

El siguiente manual se ha elaborado de forma sencilla y prctica para que su contenido
sea de fcil aplicacin por el personal que desarrolla estas actividades diarias. Su contenido esta
dividido en ocho apartados: en el primero estn contenidos los aspectos ms importantes de
bioseguridad en el Laboratorio; en el segundo se describe el control de calidad que debe llevarse
en los diferentes anlisis; y en los seis apartados siguientes se detallan los procedimientos que se
realizan en las diferentes reas, en el siguiente orden: Coprologa, Urianlisis, Qumica Clnica,
Hematologa, Inmunologa y Microbiologa bsica.

Se espera que este manual sea una gua efectiva y til para lograr la estandarizacin de
los procedimientos y calidad de los resultados obtenidos en los Laboratorios Clnicos del Ministerio
de Salud.
2. OBJETIVOS
2.1 OBJETIVO GENERAL

- Proporcionar a la Red de Laboratorios clnicos del Ministerio de Salud, un instrumento
que facilite el desarrollo adecuado, sistematizado y estandarizado de los procedimientos
tcnicos que se realizan en los laboratorios del Primer Nivel de Atencin.
2.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

- Brindar una herramienta que permita realizar los procedimientos tcnicos de laboratorio
uniformemente, de manera que se eviten desviaciones en su desarrollo.
- Ordenar todos los procedimientos tcnicos de los Laboratorios Clnicos del Primer Nivel
de Atencin, en un solo documento apropiado para responder a las necesidades de este
nivel.
- Contribuir a la aplicacin de las medidas de bioseguridad y controles de calidad que deben

cumplirse, cuando se desarrolle un procedimiento tcnico.
- Contar con un instrumento que sirva de gua para la evaluacin y monitoreo de las
actividades de laboratorio.
3. BIOSEGURIDAD
l elemento ms importante de la bioseguridad es el cumplimiento estricto de las

prcticas y tcnicas de laboratorio estndar, pues ninguna medida, ni siquiera un
excelente equipo sustituyen el orden y cuidado con el que deben ejecutarse los procedimientos.
Todas las personas que trabajan en un laboratorio deben conocer los riesgos potenciales a los
que se exponen y ser versados en las prcticas y tcnicas requeridas para manipular materiales
infecciosos en forma segura.
Cuando ocurre un accidente es fundamental que se haga un anlisis de sus causas y se adopten
medidas correctivas para evitar su repeticin.
Los accidentes biolgicos se producen generalmente por:

- Aerosoles.
- Inoculacin accidental.
- Derrames y salpicaduras:
- Salpicaduras en cara y ojos.
- Derrames en la recepcin de muestras.
- Heridas causadas por objetos punzantes o cortantes.
- Salpicaduras en la superficie de trabajo y fuera de la zona de trabajo.
Es de primordial importancia que todos los profesionales de Laboratorio conozcan:

- Los agentes, sustancias y productos peligrosos que existen en el laboratorio.
- La metodologa de trabajo del laboratorio.
- El equipamiento del laboratorio.
- Las medidas a tomar en caso de emergencia.
- Los lineamientos y procedimientos contenidos en el Manual de Bioseguridad de los
Laboratorios Clnicos edicin actualizada, al cual deben referirse.

La importancia de respetar y hacer cumplir todo lo anterior.
El Jefe de Laboratorio es responsable de velar por el cumplimiento de las normas y reglamentos

que aseguren la proteccin del personal; pero todo el personal es responsable no slo de su
propia seguridad sino tambin la de sus compaeros de trabajo y el medio ambiente.
4. CONTROL DE CALIDAD
l Control de calidad del laboratorio implica todo un conjunto de medidas encaminadas

a lograr una adecuada confiabilidad de los resultados de laboratorio y tiene como
propsito garantizar que los resultados obtenidos sean acordes al estado de salud del paciente.
El control de calidad es, por tanto, el mtodo mediante el cual se mide la calidad real, compararla
con los estndares y actuar sobre la diferencia. Tiene dos objetivos fundamentales: mantener bajo
control el proceso y eliminar las causas de errores.
La calidad se obtiene y se mejora a lo largo de todo el proceso por lo que el control de calidad debe
ejercerse en las tres fases del proceso: la fase pre-analtica, analtica y post-analtica.
La mayora de las tcnicas analticas cuantitativas implican diversas operaciones que estn sujetas
a cierto grado de imprecisin y cierta posibilidad de error. El objetivo del control de calidad radica
en asegurar que los productos finales, es decir los valores analticos que son producidos por un
laboratorio clnico, sean suficientemente fiables y adecuados a la finalidad que persiguen. Este
objetivo se cumple a medida que todo el personal del laboratorio sea consciente de las causas de
las imprecisiones analticas y de las tcnicas disponibles para su deteccin, correccin y control.
Entre las principales variables que pueden evitar imprecisiones podemos citar:
- Forma adecuada de obtencin de las muestras.
- Calidad y estabilidad de los reactivos analticos.
- Preparacin y capacitacin del personal tcnico.
- Limpieza, mantenimiento y uso adecuado de las pipetas automticas.
- Manuales para el usuario y mantenimiento de los equipos a utilizar.
- Transferencia de los resultados sin prdidas, ni alteraciones, para la elaboracin de los
informes.
A continuacin se detallan aspectos principales de control de calidad en las diferentes reas:
4.1 CONTROL DE CALIDAD EN COPROLOGA

- El tiempo transcurrido entre la toma de la muestra y la observacin microscpica debe
ser no mayor de tres horas para observar formas activas.
- Tener especial cuidado en la utilizacin de frascos adecuados y limpios.
- Efectuar el control de calidad del lugol y solucin salina 0.85% en el Laboratorio
Central.
- Todos los laboratorios deben enviar al Laboratorio Central para control de calidad el
10% de lminas de azul de metileno (PAM) realizadas.
- Los laboratorios del Primer Nivel de Atencin deben participar en el control de calidad
externo que le enve el Nivel Central.
4.2 CONTROL DE CALIDAD EN URIANLISIS

- Correlacionar de lo observado en el examen qumico y microscpico de los siguientes
Sparmetros:

a)Nitritos positivos con bacterias presentes en el sedimento.
b)Leucocitos por L con leucocitos presentes en el sedimento.
- Correlacionar la presencia de leucocitos con la presencia de bacterias observadas en el

sedimento urinario.
- El tiempo transcurrido entre la toma de la muestra y el procesamiento de la misma debe

ser idealmente no mayor de dos horas.
4.3 CONTROL DE CALIDAD EN QUMICA CLNICA

- Llevar un registro diario del control de temperatura de las refrigeradoras y baos de
Mara.
- Calibrar el espectrofotmetro cada vez que se cambie la fuente de luz y al menos cada
mes.
- Registrar diariamente todas las lecturas de estndares y sueros controles internos los
cuales sern procesados en cada corrida.
- La separacin del suero del paquete globular no debe ser mayor de dos horas despus
de obtenida la muestra. Una vez separados los sueros se deben refrigerar si no se procesan
inmediatamente.
- Observar diariamente los reactivos en busca de turbidez o cambio de color. En caso de
deterioro se recomienda no utilizar.
externo que le enve el Nivel Central cada ao.
4.4 CONTROL DE CALIDAD EN HEMATOLOGA

- Investigar los resultados de hemoglobina cuando que no se correlacionen con el valor del
hematocrito.
- Determinar los tiempos de coloracin de los frotis con colorante Wright, siempre que se
cambie el lote de colorante.
externo de hematologa que les enve el Nivel Central cada ao.
4.5 CONTROL DE CALIDAD EN INMUNOLOGA

- Seguir rigurosamente las instrucciones del fabricante para la preparacin de los reactivos.
- Dejar que las muestras y reactivos lleguen a temperatura ambiente antes de iniciar los
procedimientos.
- Evitar la combinacin de reactivos de diferentes Set.
- Llevar un registro diario del control de temperatura de las refrigeradoras y baos de
Mara.
- Procesar los controles de las casas comerciales y el control interno en cada tiraje de
muestras.
Elaborar un protocolo de trabajo por cada tiraje de muestras.
Los laboratorios del Primer Nivel de Atencin deben participar en el control de calidad externo
de inmunologa que les enve el Nivel Central cada ao.
4.6 CONTROL DE CALIDAD EN MICROBIOLOGA

En la toma de muestra se deben controlar los siguientes aspectos:
- Tomar la muestra del sitio representativo del proceso infeccioso.
- Evitar la contaminacin de la muestra.
- Coleccionar el volumen adecuado de la muestra y en el frasco apropiado.
En la coloracin se deben controlar los siguientes aspectos:
- El control de calidad de los colorantes se debe realizar con cada nuevo lote (control de
calidad ejercido por el Laboratorio Central).
- Tener especial cuidado con el alcohol acetona, pues de este depende que la coloracin
sea excesiva o dbil.
- Controlar la no contaminacin de colorantes como la safranina o fucsina bsica, los cuales
se pueden contaminar fcilmente.
Controlar la fijacin de la preparacin pues el exceso de calor produce dao en la pared celular de
las bacterias que pueden afectar, la retencin de los colorantes.
5. COPROLOGA
5.1 EXAMEN FSICO DE HECES

5.1.1. PROPSITO:
Por medio de la observacin macroscpica de la muestra de heces determinar el color la consistencia,
presencia de mucus, sangre, restos alimenticios o parsitos en estado larvario.
5.1.2. MUESTRA REQUERIDA:
5 gramos de heces recin emitidas, instruir al paciente que colecte en el frasco la porcin de muestra
que evidencia el dao intestinal (Mucus, sangre, parsitos). No son recomendables las muestras
obtenidas con laxantes o enemas.
5.1.3. MATERIALES:
- Frascos plsticos de boca ancha y tapn de rosca con capacidad para 2 onzas.
- Aplicadores de madera.
- Guantes descartables.
- Marcador de vidrio.
- Papel lente.
5.1.4. PROCEDIMIENTO:
- Observar el color de la muestra.

- Observar la consistencia de la muestra.
- Utilizar un aplicador de madera para buscar la presencia de mucus en la muestra.
- Observar la presencia de restos alimenticios en la muestra.
- Anotar los hallazgos.
5.1.5. FUENTES DE ERROR:
Ingesta de medicamentos y algunos alimentos con colorantes.
- Frascos sucios.
- Contaminacin de las heces con orina.
5.1.6. FORMA DE REPORTE:

- COLOR: Caf, amarillo, verde, rojo, aclico (blanco), negro.
- CONSISTENCIA: Dura, cbalos, blanda, pastosa y lquida.
- PRESENCIA DE MUCUS: Negativo o Positivo.
- RESTOS ALIMENTICIOS: Escasos, moderados o abundantes.
Valores de referencia:
- COLOR: Caf.
- CONSISTENCIA: Pastosa a blanda.
- PRESENCIA DE MUCUS: No debe observarse.
- RESTOS ALIMENTICIOS: Escasos.
5.1.7. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista.
10
5.2 EXAMEN MICROSCPICO DE HECES

5.2.1. PROPSITO:
Analizar microscpicamente una muestra de heces en busca de la presencia de leucocitos,
parsitos protozoarios y metazoarios en sus diferentes estadios.

5 gramos de heces recin emitidas. No son recomendables las muestras obtenidas con laxantes o
enemas.
5.2.3. MATERIALES Y REACTIVOS:

- Lminas porta objeto.
- Laminillas cubre objeto.
- Lpiz marcador de vidrio.
- Aplicaciones de madera.
- Solucin salina 0.85%.
- Solucin de Lugol para heces. (Anexo 1)
- Papel lente.
5.2.4. EQUIPO:
- Microscopio
- Identificar la lmina porta objeto
- Colocar en un extremo de la lmina portaobjeto una gota de solucin salina al 0.85%.
- Seleccionar la parte ms representativa de la muestra (mucus o sangre, si hay presencia
de estos).
11
- Agregar con un aplicador 1 a 2 mg de material fecal seleccionada y emulsionar.

- Cubrir la preparacin con una laminilla cubreobjeto, colocndola
en ngulo de 45
sobre el borde de la preparacin y bajndolo con cuidado a fin de que no queden burbujas
entre el cubre y el porta objeto.
- Colocar en el otro extremo del portaobjeto, una gota de lugol para heces y repetir el
procedimiento anterior.
- Observar en forma sistemtica al microscopio, con el objetivo 10x y luego con el 40x.
- Reportar todo lo observado. (Anexo 2)
Con solucin salina 0.85%, los trofozoitos y quistes de los protozoarios se observan en forma natural
y con lugol se visualizan las estructuras internas, ncleos y vacuolas.

- Desecacin de la preparacin.
- Preparacin muy gruesa o delgada.
- Intensidad de luz inadecuada.
- Contaminacin de la muestra con orina.
- Dejar transcurrir ms de 3 horas despus de la recoleccin para observar formas activas
en la muestra.
- Omitir la preparacin y observacin con lugol.
- No examinar en forma sistemtica.
- Muestra de heces escasa o seca en el frasco.

PARSITOS: Anotar el nombre del gnero y especie, as como su estado evolutivo.
LEUCOCITOS: Reportar el nmero de leucocitos por campo.
ERITROCITOS: Reportar el nmero de eritrocitos por campo.
RESTOS ALIMENTICIOS: Escasos, moderados o abundantes.
12
LEVADURAS: Escasas, moderadas o abundantes.

RESTOS DE GRASA: Reportar de moderado a abundante.
PARSITOS: No se deben observar.
LEUCOCITOS: No se deben observar.
ERITROCITOS: No se deben observar.
RESTOS ALIMENTICIOS: de escasos a moderados.
LEVADURAS: No se deben observar.
RESTOS DE GRASA: Reportar de moderado a abundante.
5.2.8. RESPONSABLE:
13
5.3 PRUEBA DE AZUL DE METILENO

5.3.1. PROPSITO:
Es la bsqueda de leucocitos polimorfonucleares y mononucleares en una muestra lquida coloreada
con azul metileno lo que permite identificar si se trata de un proceso viral o bacteriano.

5gr. de heces frescas y lquidas, instruir al paciente sobre la forma de colectar la muestra.
5.3.3. MATERIALES Y REACTIVOS

- Lmina portaobjeto.
- Aceite de inmersin.
- Papel filtro.
- Embudo.
- Bandeja o soporte de coloracin.
- Colorante de azul metileno 0.1%.
- Papel toalla.
- Fsforos.
- Papel lente.
5.3.4. EQUIPO:
- Contador diferencial de clulas.
14
- Microscopio.
- Mechero.
5.3.5. PROCEDIMIENTO
- Filtrar el colorante antes de utilizar.
- Identificar el portaobjeto a utilizar.
- Realizar el extendido de muestra en las dos terceras partes de la lmina.
- Dejar secar a temperatura ambiente.
- Fijar al calor pasndolo rpidamente sobre la llama de un mechero tres veces en forma
horizontal.
- Cubrir la lmina con azul de metileno de 30 a 60 segundos.
- Eliminar el azl de metileno tomando el portaobjeto por el extremo numerado inclinndolo
hacia delante, y lavar dejando caer una corriente de agua a baja presin sobre la parte en
que no hay extendido, la que escurrir suavemente sobre la pelcula.
- Observar al microscopio con objetivo de inmersin 100x.
- Contar 100 clulas blancas o leucocitos diferenciando los polimorfonucleares de los
mononucleares.

- Extendidos gruesos.
- Fijacin con excesivo calor.
- Lminas sucias o grasosas.
- Arrastrar la prepracin con un lavado brusco
15

Reportar el porcentaje de leucocitos encontrados con el predominio del que tenga mayor
porcentaje.
Polimorfonucleares
........... por ciento.
Mononucleares
.... por ciento.
Interpretacin:
Predominio de polimorfonucleares se asume que existe un proceso infeccioso de origen
bacteriano.
Predominio de Mononucleares se asume que el proceso infeccioso es de origen viral.
5.3.8. RESPONSABLE:
16
5.4 COLORACIN DE ZIELH NEELSEN MODIFICADA PARA

LA INVESTIGACIN DE COCCIDIOS
5.4.1. PROPSITO:
La bsqueda de los ooquistes de coccidios en una coloracin teida con Zielh Neelsen modificada,
la cual se basa en el comportamiento cido resistente de la cubierta de estos parsitos, que se tien
de rojo, destacndose sobre un fondo azul.

5 gr de heces fecales o esputo.

- Lminas portaobjeto esmerilada.
- Fucsina fenicada.
- Azl de metileno.
- Papel filtro.
- Embudo.
- Alcohol cido.
- Papel toalla.
- Fsforos.
- Papel lente.
17
5.4.4. EQUIPO:
- Mechero.
- Microscopio.
- Filtrar los colorantes antes de utilizar.
- Identificar la lmina en el extremo esmerilado.
- Hacer un extendido de materia fecal sobre un portaobjeto en las dos terceras partes de la
lmina (No ejercer presin para hacer e extendido).
- Dejar secar el extendido a temperatura ambiente.
- Fijar con calor pasndolo rpidamente tres veces sobre la llama de un mechero en forma
horizontal.
- Cubrir la preparacin con Fucsina fenicada por 20 minutos.
- Eliminar la fucsina tomando el portaobjeto por el extremo numerado inclinndolo hacia
delante, y lavar dejando caer una corriente de agua a baja presin sobre la parte en que no
hay extendido, la que escurrir suavemente sobre la pelcula.
- Decolorar con alcohol cido por 2 minutos.
- Lavar con agua de chorro hasta que no hayan restos de colorante.
- Cubrir la preparacin con azul de metileno por 1 minuto.
- Lavar con agua de chorro hasta que no hayan restos de colorante.
- Observar al microscopio toda la preparacin con el objetivo 40x en busca de estructuras
semejantes a los ooquistes del coccidio. (Anexo 2)
- Identificar con el objetivo de inmersin 100x.
18

- No filtrar los colorantes.
- Realizar extendidos muy gruesos.
- No dejar el tiempo suficiente para el secado del extendido.
- Omitir la fijacin o excesivo calor al fijar la preparacin.
- Incumplir los tiempos de coloracin.
- Cubrir la preparacin con insuficiente fucsina.

En presencia de ooquistes:
Reportar: Se observan ooquistes de Isospora belli o Criptosporidium sp. o Cyclospora
cayetanensis, segn lo encontrado.
En ausencia de ooquistes en la preparacin:

Reportar: No se observan ooquistes.
5.4.8. RESPONSABLE:
19
6. URIANLISIS
20
6.1 TOMA DE MUESTRA PARA ANLISIS DE ORINA

6.1.1. PROPSITO:
Obtener una muestra de orina con el volumen y condiciones adecuadas para realizar un anlisis
fsico, qumico y microscpico.

30 mL de orina de chorro intermedio, recomendable la primera miccin de la maana.
6.1.3. MATERIALES:
Frascos plsticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL limpio y seco.
- Limpiar cuidadosamente los genitales.
- Descartar el inicio y el final de la miccin; recolectar la orina de la porcin intermedia. (En
el caso de la mujer separar los labios genitales).
- Destapar y depositar la muestra de orina en un frasco plstico, transparente, limpio, de
boca ancha con tapn de rosca y capacidad de 30 a 40 mL.
- Tapar el frasco inmediatamente.

- Limpieza de genitales inadecuada.
- Frascos sucios.
- Tiempo prolongado entre la recoleccin y la entrega en el laboratorio.
- No descarte del inicio y final de la miccin.
6.1.6. RESPONSABLE:
Paciente con instrucciones previas proporcionadas por el personal de laboratorio.
21
6.2 EXAMEN FSICO DE ORINA

6.2.1. PROPSITO:
Por medio de la observacin directa de la muestra de orina determinar el color y el aspecto de sta,
lo cual puede sugerir una patologa del tracto urinario u otras enfermedades que estn en diferente
localizacin, pero que sus manifestaciones secundarias son a nivel del rin.

30 mL de orina. Preferible la primera de la maana, 10 mL de orina en muestra de nios.
6.2.3. MATERIALES:
- Frascos plsticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL.
- Bolsa peditrica recolectora de orina.
- Papel toalla.
- Verificar que el frasco est bien identificado y completamente tapado.
- Agitar en forma circular sobre la mesa de trabajo.
- Observar color y aspecto.
- Anotar lo observado.

- Frascos sucios.
- Toma de muestra inadecuada.
- Muestras medicamentosas.
22
Tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la observacin (no mayor de 2

horas)

COLOR: Amarillo.
ASPECTO: limpia.
6.2.7. RESPONSABLE:
23
6.3 EXAMEN QUMICO DE ORINA

6.3.1. PROPSITO:
Determinar las sustancias qumicas presentes en una muestra de orina, as como su densidad y
pH, a travs de las zonas de reaccin presentes en una tira reactiva.
6.3.2 MUESTRA REQUERIDA:

30 mL de orina. Preferible la primera de la maana, 10mL de orina en muestra de nios.

- Frascos plsticos transparente de boca ancha con capacidad de 30 mL.
- Bolsa peditrica recolectora de orina.
- Tubos cnicos con capacidad de 15 mL.
- Gradilla para tubos.
- Papel toalla.
- Tiras reactivas para orina.
- Identificar el tubo cnico.
- Agitar la muestra de orina en forma circular sobre la mesa de trabajo.
- Verter la orina en el tubo cnico.
- Introducir la tira reactiva en la orina.
- Eliminar el exceso de orina colocando la tira sobre un papel absorbente.
- Esperar el tiempo recomendado por el fabricante para su lectura.
- Anotar los resultados.
Los cambios de color que aparecen despus de dos ms minutos carecen de

diagnstica.
24
importancia

- Muestras medicamentosas.
- Frascos y tubos mal lavados.
- Tiras reactivas de mala calidad o vencidas.
- Cortar las tiras reactivas.
- Leer las tiras reactivas despus del tiempo indicado por el fabricante.

pH: de 5 a 9.
DENSIDAD: de 1.000 a 1.030.
LEUCOCITOS: 0 a 500 Leucocitos por l.
NITRITOS: Positivo Negativo.
PROTENA: 0 a 1000 mg por dL.
GLUCOSA: 0 - 1000 mg por dL
CUERPOS CETNICOS: de una cruz a tres cruces.
UROBILINGENO: de <1 a 12 mg por dL.
BILIRRUBINA: de una cruz a tres cruces.
SANGRE/HEMOGLOBINA: de 0 a 250 eritrocitos por L
Siempre que en la tira reactiva no se observe un cambio de color se reportar como
negativo.
pH: de 5 a 6.
DENSIDAD: de 1.005 a 1.010 .
LEUCOCITOS: 0 Leucocitos por l .
NITRITOS: Negativo.
PROTENA: 0 mg por dL.
GLUCOSA: 0 mg por dL .
CUERPOS CETNICOS: Negativo.
25
UROBILINGENO: <1 mg por dL.

BILIRRUBINA: Negativa.
SANGRE: 0 eritrocitos por L.
6.3.7. RESPONSABLE:
26
6.4 EXAMEN MICROSCPICO DEL SEDIMENTO URINARIO

6.4.1. PROPSITO:
Observar microscpicamente en el sedimento urinario elementos celulares, cilindros, cristales,
parsitos, filamentos mucoides y bacterias. Con el fin de sugerir una patologa del tracto urinario u
otras enfermedades que estn en diferente localizacin.

15 mL de orina.
6.4.3. MATERIALES:
- Tubos cnicos de 15 mL .
- Lminas portaobjetos.
- Laminillas cubreobjetos.
- Marcador para vidrio.
- Gradillas para tubos.
6.4.4. EQUIPO:
- Reloj marcador.
- Macrocentrfuga.
- Microscopio.
- Centrifugar durante 5 minutos a 2,500 rpm .
- Descartar el liquido sobrenadante.
- Suspender el sedimento urinario golpeando ligeramente con la mano.
- Colocar una gota de sedimento entre un porta y un cubreobjeto.
- Observar la preparacin con el objetivo 10x para lograr una visin general del sedimento.
(Anexo 3)
27
Identificar los elementos formes a mayor aumento 40x.

Anotar lo observado.

- Usar portaobjetos y cubreobjetos sucios.
- Desecacin del sedimento urinario.
-
Tiempo transcurrido
microscpica.
desde
la
toma
de
la
muestra
hasta
la
observacin
- Uso excesivo de luz.

- Centrifugacin inadecuada.

CLULAS EPITELIALES, ESCAMOSAS Y REDONDAS: reportar escasas, moderadas o
abundantes.
GLBULOS ROJOS: Reportar el nmero estimado por campo.
LEUCOCITOS: Reportar el nmero estimado por campo.
CILINDROS: se pueden encontrar en la orina los siguientes cilindros: hialinos, granulosos finos y
gruesos, leucocitarios, hemticos, grasos y creos. Reportar el nmero de cilindros observados por
campo.
FILAMENTOS MUCOIDES: reportar escasos, moderados o abundantes.
CRISTALES: se pueden encontrar en la orina los siguientes cristales: oxalatos de calcio, acido
rico, uratos amorfos, fosfatos amorfos, fosfatos triples, urato de amonio, leucina, cistina y tirosina.
Reportar en la forma siguiente: escasos, moderados o abundantes.
LEVADURAS: Reportar escasos, moderada y abundantes.
PARSITOS: Se pueden encontrar en orina Trichomonas vaginalis, Phitirus pubis, huevos y quistes
de parsitos por contaminacin con heces.
BACTERIAS: Reportar la presencia de bacterias moderadas o abundantes, solamente cuando se
observen ms de 10 leucocitos por campo.
28
Valores de referencia
CLULAS EPITELIALES, ESCAMOSAS: Escasas a moderadas.
CLULAS EPITELIALES REDONDAS: No deben observarse.
GLBULOS ROJOS: No deben observarse.
LEUCOCITOS: .0-5 por campo.
CILINDROS: No deben observarse.
FILAMENTOS MUCOIDES: No deben observarse.
CRISTALES: Podran observarse oxalatos, uratos y fosfatos amorfos de escasa a moderada
cantidad.
LEVADURAS: No deben observarse.
PARSITOS: No deben observarse.
BACTERIAS: Escasas o no presentes.
6.4.8. RESPONSABLE:
29
7. QUMICA CLNICA
30
7.1 TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA EXMENES

DE QUMICA CLNICA
7.1.1. PROPSITO:
Obtener sangre venosa para realizar pruebas de qumica sangunea.

de 5 a 10 mL. de sangre venosa sin anticoagulante.
7.1.3. MATERIALES:
- Jeringa estril para extraer 5 - 10 mL. con aguja 21 X 1 o sistema
vaco.
de extraccin al
- Torundas de algodn.
- Alcohol etlico (70%).
- Torniquete.
- Tubos sin anticoagulante 13 x 100 mm y tapn de hule o tubos del sistema de extraccin
al vaco.
- Lavar y secar las manos y colocarse los guantes.
- Identificar el tubo de acuerdo a la solicitud.
- Explicar al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar.
- Sentar cmodamente al paciente para la extraccin tomando
sangra debe contar con suficiente iluminacin.
en cuenta que el rea de
- Seleccionar la vena apropiada para la puncin.

- Realizar asepsia con torunda de algodn humedecida con alcohol
adentro hacia fuera.
etlico al 70% de
31
- Colocar el torniquete firmemente alrededor del brazo, y pedir al paciente que abra y cierre
la mano varias veces para favorecer la dilatacin de las venas.
- Proceder a puncionar la vena seleccionada.
- Colocar la aguja con el bisel hacia arriba sobre la vena a puncionar.
- Introducir la aguja en el centro de la vena y penetrar a lo largo de la vena de 1 a 1.5 cm.
- Tirar hacia atrs el mbolo de la jeringa muy lentamente para que penetre la sangre en
la jeringa hasta llenar con la cantidad de sangre necesaria. Si utiliza sistema de sangrado
al vaco introducir el tubo en el dispositivo (holder) de manera que al ejercer presin se
atraviese el extremo inferior de la aguja, para que la sangre fluya hacia el tubo por efecto
del vaco.
- Retirar torniquete tirando del extremo doblado y colocar una torunda de algodn sobre la
piel donde se encuentra oculta la punta de la aguja.
- Extraer la aguja con un movimiento rpido por debajo de la pieza de algodn, pedir al
paciente que presione firmemente la torunda durante 3 minutos con el brazo extendido.
- Separar la aguja de la jeringa o del holder cuidadosamente, llenar los tubos deslizando la
sangre por las paredes del mismo.
- Esperar que la muestra se coagule a temperatura ambiente.
- Centrifugar la muestra a 3000 rpm por 10 minutos.
- Separar el suero del paquete globular.
- Verificar nuevamente la identificacin del paciente.

- Prolongada aplicacin del torniquete.
- Extraccin violenta de la sangre, que puede provocar hemlisis.
- Empleo de tubos mal lavados.
- Depositar la sangre en el tubo en forma violenta.
- Dejar los tubos con muestras destapados.
- Que el paciente no cumpla con las indicaciones de acuerdo al anlisis qumico a realizar.
- Separacin inadecuada del cogulo antes de centrifugar (no poner en bao de Mara).
- Centrifugacin inadecuada de la muestra.
32
7.1.6. RESPONSABLE:
33
7.2 GLUCOSA SANGUNEA

MTODO ENZIMTICO COLORIMTRICO SIN DESPROTEINIZACIN
7.2.1. PRINCIPIO:
La glucosa se determina despus de la oxidacin enzimtica en presencia de glucosa oxidasa. El
perxido de hidrgeno formado reacciona bajo catlisis de la peroxidasa con fenol y 4-aminofenazona
produciendo un complejo rojo violeta usando la quinoneimina como indicador.
7.2.2. MUESTRAS REQUERIDA:

Para valor de glucosa en ayunas: Suero Tomado completamente en ayunas de 12 horas.
Para valor de glucosa posprandial: primera muestra completamente en ayunas de 12 horas y
segunda muestra 2 horas despus de haber ingerido un desayuno completo.

- Pipetas automticas.
- Puntas plsticas.
- Tubos.
- Reactivo enzimtico.
- Estndar de glucosa (concentracin 100 mg/dL).
- Sueros controles comerciales.
- Papel toalla.
- Papel para film.
7.2.4. EQUIPO:
- Espectrofotmetro.
- Bao de Mara con termmetro.
- Reloj marcador.
- Centrfuga.
- Refrigeradora.
34
- Llevar los reactivos a temperatura ambiente.
- Los reactivos se preparan de acuerdo a las instrucciones del fabricante en el cual estar
indicado la estabilidad del reactivo.
- Rotular 4 tubos de la siguiente manera: blanco, estndar, muestra y control normal.
BLANCO
ESTANDAR
MUESTRA
CONTROL
AGUA DESTILADA
10 L
----------
----------
----------
ESTANDAR
----------
10 L
----------
----------
MUESTRA
----------
----------
10 L
----------
SUERO CONTROL
----------
----------
----------
10 L
REACTIVO
1000 L
1000 L
1000 L
1000 L
En caso que los Espectrofotmetros no lean la cantidad de 1 mL, duplicar las cantidades.
- Mezclar e incubar de acuerdo a las indicaciones del fabricante.
- Leer a la longitud de onda indicada por el fabricante generalmente de 500 a 546 nm y de
acuerdo al equipo utilizado.

- No llevar los reactivos a temperatura ambiente.
- Pipetas mal calibradas.
- Puntas en mal estado.
- No leer en la longitud de onda recomendada.
- Tubos sucios.
- Agua destilada de mala calidad.
- Reactivos vencidos o en mal estado.
- Pipeteado inadecuado.
- Separar el suero despus de los 30 minutos de la recoleccin.
35
7.2.7. FORMA DE REPORTE

Los valores de glucosa se reportan en mg/dL (Anexo 4).
Clculo:
Lectura de muestra
Concentracin=
Lectura del estndar
x 100 (mg/dL)
Se puede calcular usando factor de calibracin:
Factor de calibracin=
Concentracin del estndar

Lectura del estndar
Glucosa en mg/dL=
Factor de calibracin X Lectura de muestra
La prueba es lineal hasta la concentracin de 1000 mg/dL (Revisar inserto incluido en el Set a
utilizar) .
Si la concentracin de glucosa en la muestra es superior a estos lmites diluir la muestra 1+2 con
agua destilada y repetir la determinacin.
Multiplicar el resultado por 3.
Valor de referencia:
60 -115 mg/dL
7.2.8. RESPONSABLE:
Profesional en Laboratorio Clnico o Laboratorista
36
7.3 COLESTEROL
MTODO ENZIMTICO COLORIMTRICO PARA COLESTEROL CON
FACTOR ACLARANTE DE LPIDOS
7.3.1. PRINCIPIO:
El colesterol se determina despus de la hidrlisis enzimtica y la oxidacin. En presencia de un
indicador el cual desarrolla el color de acuerdo a la concentracin del colesterol presente en la
muestra.

Suero tomado con 12 horas de ayuno.

- Puntas plsticas.
- Tubos.
- Estndar de colesterol (concentracin 200 mg/dL).
- Papel toalla.
- Papel para film.
Guantes descartables.
7.3.4. EQUIPO:
- Espectrofotmetro.
- Bao de Mara. con termmetro.
- Reloj marcador.
- Centrfuga.
- Refrigeradora con termmetro.
37
BLANCO
ESTANDAR
MUESTRA
CONTROL
AGUA DESTILADA
10 L
----------
----------
----------
ESTANDAR
----------
10 L
----------
----------
MUESTRA
----------
----------
10 L
----------
SUERO CONTROL
----------
----------
----------
10 L
REACTIVO
1000 L
1000 L
1000 L
1000 L
- acuerdo al equipo utilizado.

- Tubos sucios.
38

Los valores de colesterol se reportan en mg/dL (Anexo 4).
Clculo
Lectura de muestra
Concentracin=
Lectura del estndar
x 200 (mg/dL)

Lectura del estndar
Colesterol en mg/dL=
Factor de calibracin X Lectura de la muestra
La prueba es lineal hasta la concentracin de 750 mg/dL (Revisar tcnica ya que depende de la
casa comercial).
Si la concentracin del colesterol en la muestra es superior a estos limites diluir la muestra 1+2 con
solucin fisiolgica y repetir la determinacin.
Hasta 200 mg/dL
7.3.8. RESPONSABLE:
39
7.4 TRIGLICRIDOS
MTODO ENZIMTICO COLORIMTRICO PARA
TRIGLICRIDOS ACLARANTES DE LPIDOS
7.4.1. PRINCIPIO:
El triglicrido se determina despus de la hidrlisis enzimtica con lipasa. En presencia de un
indicador que desarrolla color de acuerdo a la concentracin del triglicrido presente en la
muestra.

Suero tomado con 12 horas de ayuno.

- Puntas plsticas.
- Tubos.
- Marcador para vidrio
- Estndar de triglicridos (concentracin 200 mg/dL).
- Papel toalla.
- Papel para film.
7.4.4. EQUIPO:
- Espectrofotmetro.
- Reloj marcador.
- Centrfuga.
40
- Rotular 4 tubos de la siguiente manera: blanco, estndar ,muestra y control normal.
AGUA DESTILADA
ESTANDAR
MUESTRA
SUERO CONTROL
REACTIVO
BLANCO
10 L
---------------------------1000 L
ESTANDAR
---------10 L
------------------1000 L
MUESTRA
------------------10 L
---------1000 L
CONTROL
---------------------------10 L
1000 L
7.4.6. FUENTES DE ERROR

- Tubos sucios.
41

Los valores de triglicridos se reportan en mg/dL (Anexo 4).
Clculo:
Lectura de muestra
Concentracin=
Lectura del estndar
x 200 (mg/dL)

Lectura del estndar
Triglicridos en mg/dL=
La prueba es lineal hasta la concentracin de 1000 mg/dL (Revisar tcnica ya que depende de la
casa comercial).
Si la concentracin de triglicridos en la muestra es superior a estos lmites diluir la muestra 1+4 con
solucin salina fisiolgica y repetir la determinacin.
Sospechosos > 150 mg/dL.
Elevado > 200 mg/dL.
7.4.8. RESPONSABLE:
42
7.5 CIDO RICO

MTODO ENZIMTICO COLORIMTRICO PARA CIDO
RICO ACLARANTES DE LPIDOS
7.5.1. PRINCIPIO:
El cido rico se determina despus de la hidrlisis enzimtica de la uricasa, que en presencia de
un indicador que desarrolla color rojo-violeta que es proporcional a la concentracin de cido rico
presente en la muestra.

Suero (dentro de las 24 horas no ingerir embutidos, mariscos y carnes rojas).

- Puntas plsticas.
- Tubos.
- Estndar de cido rico (concentracin segn lo indica el fabricante).
- Papel toalla.
- Papel para film.
7.5.4. EQUIPO:
- Espectrofotmetro.
- Reloj marcador.
43
- Centrfuga.
- Los reactivos se preparan de acuerdo a las instrucciones del fabri cante en el cual
estar indicado la estabilidad del reactivo.
AGUA DESTILADA
ESTANDAR
MUESTRA
SUERO CONTROL
REACTIVO
BLANCO
20 L
---------------------------1000 L
ESTANDAR
---------20 L
------------------1000 L
MUESTRA
------------------20 L
---------1000 L
CONTROL
---------------------------20 L
1000 L

- Tubos sucios.
44

Los valores de cido rico se reportan en mg/dL (Anexo 4).
Clculo:
Lectura de muestra
X concentracin del estndar (mg/

dL)
Concentracin=
Lectura del estndar

Lectura del estndar
cido rico en mg/dL=
La prueba es lineal hasta la concentracin de 20 mg/dL.

Si la concentracin de cido rico en la muestra es superior a estos lmites, diluir la muestra 1+1
con solucin salina fisiolgica y repetir la determinacin.
Hombre:
3.4 7.0 mg/dL.
Mujer:
2.4 5.7 mg/dL.
7.5.8. RESPONSABLE:
45
8. HEMATOLOGA
46
8.1 TOMA DE MUESTRA DE SANGRE CAPILAR PARA

EXMENES HEMATOLGICOS
8.1.1. PROPSITO:
Obtener sangre capilar para realizar pruebas hematolgicas.

Sangre capilar, Obtener 5 capilares heparinizados.
8.1.3. MATERIALES:
- Torunda de algodn.
- Capilares heparinizados.
- Plastilina para sellar capilares con su respectiva base numerada.
- Lancetas desechables.
- Lminas esmeriladas.
- Lavar, secar las manos y colocar los guantes.
- Explicarle al paciente sobre el procedimiento que se le va a realizar.
- Seleccionar el dedo anular de la mano a puncionar y dar masaje para mejorar la irrigacin
sangunea.
- Realizar asepsia con torunda de algodn humedecida con alcohol etlico al 70%.
- Con lanceta desechable efectuar la puncin limpia y rpida de 2 a 3mm. de profundidad.
- Eliminar la primera gota de sangre con un trozo de algodn seco.
- Colocar el capilar de modo que penetre la sangre libremente.
47
- Cuando se ha obtenido la cantidad de sangre adecuada se presiona el lugar de la

puncin con un trozo de algodn humedecido con alcohol etlico al 70% hasta que cese
el sangramiento.
- Colocar los capilares verticalmente en la plastilina.

- Presin excesiva hace que salga lquido intersticial que puede diluir la muestra y acelerar
la coagulacin.
- Puncin inadecuada.
- Puncionar con el dedo hmedo.
8.1.6. RESPONSABLE:
48
8.2 TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA

EXMENES HEMATOLGICOS
8.2.1. PROPSITO:
Obtener sangre venosa para realizar pruebas hematolgicas.

De 2 a 3 mL de sangre venosa con anticoagulante para hematologa (se emplean de 1 mg de
EDTA por mL de sangre).
8.2.3. MATERIALES:
- Jeringa estril para extraer 3 mL con aguja 21 X 1 o sistema de extraccin al vaco.
- Lminas esmeriladas.
- Torniquete.
- Tubos con anticoagulante 12 x 75 mm y tapn de hule o tubos del sistema de extraccin
al vaco.
- Gradilla.
- Guantes decartables.
- Lavar, secar las manos y colocarse los guantes.
- Identificar el tubo y la lmina adecuadamente.
- Explicar al paciente sobre el procedimiento que se
le va a realizar.
- Sentar cmodamente al paciente para la extraccin tomando en cuenta que el rea de
49

- Realizar asepsia con torunda de algodn humedecida con
alcohol etlico al 70% de adentro hacia fuera.
- Colocar el torniquete firmemente alrededor del brazo, y
pedir al paciente que abra y cierre la mano varias veces para
favorecer la dilatacin de las venas.
- Colocar la aguja con el bisel hacia arriba sobre la vena a
puncionar.
- Introducir la aguja en el centro de la vena y penetrar a lo largo
de la vena de 1 a 1.5 cm.
- Tirar hacia atrs el mbolo de la jeringa muy lentamente
para que penetre la sangre en la jeringa hasta llenar con
la cantidad de sangre necesaria. Si utiliza sistema de sangrado al vaco introducir

el tubo Sen el dispositivo (holder) de manera que al ejercer presin se atraviese el
extremo inferior de la aguja, para que la sangre fluya hacia el tubo por efecto del vaco.
- Mezclar la sangre invirtiendo los tubos suavemente varias veces.
50

- Mezcla inadecuada de la sangre.
- Relacin inadecuada de sangre y anticoagulante.
- Dejar los tubos con muestras destapados (evaporacin del plasma, y contaminacin).
8.2.6. RESPONSABLE:
51
8.3 PREPARACIN Y TINCIN DEL FROTIS SANGUNEOS
8.3.1. PROPSITO:
Obtencin de un frotis sanguneo coloreado para el reconocimiento de los elementos celulares de
la sangre.

Sangre capilar o venosa recin extrada sin anticoagulante o sangre con anticoagulante EDTA.
8.3.3. MATERIAL Y REACTIVOS:

- Portaobjeto de vidrio con extremo esmerilado.
- Alcohol etlico al 70%.
- Torunda de algodn.
- Bandeja o soporte para la coloracin.
- Reloj marcador.
- Perilla de hule.
- Papel toalla.
- Solucin de Wright.
- Buffer pH 6.8.
- Antes de utilizar los portaobjetos de vidrio, limpiarlos con alcohol y aclarar con agua.
- Identificar la lmina adecuadamente en el extremo del portaobjeto (parte esmerilada).
- Colocar en el portaobjeto una pequea gota de sangre de 2 mm de dimetro a una
distancia de 2 a 3 mm del extremo del portaobjeto y hacer rpidamente el extendido.
(Anexo 6)
52
- Para evitar la coagulacin; se puede utilizar sangre con EDTA. (Siempre conviene realizar
cuando menos dos frotis).
- Poner la lmina extensora a un ngulo de 45 del portaobjeto y moverla hacia atrs para
que haga contacto con la gota, que debe extenderse rpidamente.
- El extendido debe tener unos 30 mm. de largo. (Anexo 6).
- Colocar la preparacin de sangre, completamente seca, sobre un soporte. (no necesita
fijacin previa pues el metanol del Wright fija la preparacin).
- Cubrir todo el frotis con coloracin de Wright y dejarlo en reposo 3 minutos (o el tiempo
necesario segn la maduracin del colorante).
- Agregar una cantidad igual de buffer (pH 6.8) evitando derramar el Wright, mezclar con
una perilla de hule con suavidad para asegurar una mezcla uniforme, aparecer una
pelcula verde metlico, dejarlo en reposo por 5 minutos o el tiempo necesario segn la
maduracin del Wright.
- Lavar la lmina con agua de chorro hasta quitar el exceso de la mezcla.
- Limpiar la parte posterior del portaobjeto con una torunda de algodn
alcohol, para eliminar todos los restos de colorante.
impregnada con
- Dejar secar la preparacin al aire colocando la lmina en posicin vertical en una rejilla
para portaobjeto.

- Falta de mezclado de la sangre previo a la elaboracin del frotis
- Irregularidades en la superficie del frotis y espacios en blanco.
- Que el frotis se extienda hasta el borde de la lmina.
- Extendidos gruesos o muy delgados.
- Tiempos de coloracin inadecuados.
- Mal lavado de la lmina.
- Buffer con pH muy cido o alcalino.
- Falta de filtracin del colorante del Wright.
- Uso de portaobjetos con polvo, grasa o huellas dactilares.
53
8.3.6. RESPONSABLE:
54
8.4 EXAMEN MICROSCPICO DEL FROTIS SANGUNEO

PARA FRMULA DIFERENCIAL
8.4.1. PROPSITO:
Establecer y evaluar las caractersticas morfolgicas de cada tipo de clulas y ver la frecuencia de
las diferentes lneas leucocitarias.

Frotis de Sangre coloreado.
8.4.3. MATERIALES:
- Frotis de sangre coloreado.
- Papel limpia lente.
8.4.4. EQUIPO:
- Microscopio con objetivo 40x y 100x.
- Contmetro diferencial manual.
- La observacin inicia con el objetivo 40x para obtener un cuadro general del nmero de
clulas, la distribucin de las mismas y la calidad de la tincin.
- Seleccionar las reas a observar con objetivo de inmersin 100x buscando una distribucin
homognea de las clulas.
- Realizar el recuento diferencial identificando las caractersticas y grado de desarrollo de
las clulas; estos se reportan en porcentajes para lo cual tiene que contarse un mnimo
de 100 leucocitos estos pueden convertirse en nmero de clulas por mm (nmero
absoluto).
- Observar en los eritrocitos: el tamao, la forma, la reaccin de coloracin, las inclusiones
intracitoplasmticas y la presencia del ncleo (eritroblastos).
55

- Observacin de los leucocitos en los extremos de la lmina.
- Realizar el recuento diferencial con un objetivo que no sea el de inmersin.
- Hacer la frmula diferencial en base de menos de 100 clulas blancas.

El recuento diferencial de leucocitos se reporta en trminos porcentuales segn las diferentes lneas
observadas.
LEUCOCITOS
NIOS (1-8 aos)
ADULTOS
NEUTRFILOS SEGMENTADOS
20 45 %
60 70 %
NEUTRFILOS EN BANDA
04%
26%
LINFOCITOS
40 60 %
15 40 %
EOSINFILOS
15%
14%
BASFILOS
01%
01%
MONOCITOS
28%
28%
Las cifras de Leucocitos tambin pueden expresarse en valores absolutos, aplicando la siguiente
formula:
NMERO DE GB X C/U DE LA FORMULA DIFERENCIAL (N, L ,B, M, E)

100 %
GB:
Glbulos Blancos.
N:
Neutrfilos.
L:
Linfocitos.
B:
Basfilos.
M:
Monocitos.
E.
Eosinfilos.
56
Esto nos dar como resultado el valor absoluto de leucocitos por milmetro cbico, donde la suma
es igual al recuento del total de los leucocitos.
8.4.8. RESPONSABLE:
57
8.5. FROTIS DE SANGRE PERIFRICA

8.5.1. PROPSITO:
Observacin detallada de todos los elementos de la sangre, con el fin de evaluar la condicin
hematolgica del paciente.

Frotis de sangre perifrica coloreado con Wright.
8.5.3. MATERIALES:
8.5.4. EQUIPO:
- Microscopio con objetivo 40x y 100x.
Cada tcnico debe aprender a observar todos los elementos del frotis mientras lleva a cabo el
recuento diferencial. Debe formar el hbito de verificar los puntos siguientes.
ERITROCITOS:
- Tamao: microcitosis, macrocitosis y normocitos. El grado de variacin en tamao se
reduce al trmino de anisocitosis.
- Forma: esferocitos, codocitos, eliptocitos, megalocitos, drepanocitos, acantocitos,
equinocitos etc. El grado de variacin en forma se reduce al trmino de poiquilocitosis.
- Concentracin de hemoglobina: Grado importante de hipocroma, e hipercroma
aparente, observar el aumento aparente o evidente de la proporcin de glbulos rojos
policromticos.
- Otros hallazgos anormales: La policromatofilia (basfilia difusa), punteado basfilo, anillo
de Cabot, cuerpos de Howell-Joly, etritroblastos, las clulas parasitadas y la formacin de
Rouleaux.
58
LEUCOCITOS:
- Observar la madurez de los leucocitos, el nmero promedio, anormalidades morfolgicas,
signos de malignidad, la variante de leucocitos que predominan.
- Comparar el recuento de leucocitos por milmetro cbico con lo observado en el frotis.
PLAQUETAS:
- Observar si se encuentran en cantidades aproximadamente normales (de tres a ocho
plaquetas por cien glbulos rojos). La disminucin de las plaquetas en un frotis puede
deberse a la manera de realizarlo, pero su falta o su disminucin considerable, en un frotis
bien hecho pueden hacer sospechar de trombocitopenia. Debe observarse si las plaquetas
que se encuentran parecen normales o existen muchas formas gigantes (macroplaquetas)
o notablemente pequeas.
- Comparar el recuento de plaquetas por milmetro cbico con lo observado en el frotis.

- Observar los elementos celulares en la parte ms gruesa del frotis.
- Coloracin defectuosa del frotis.
- Observar el extendido con un objetivo diferente al de inmersin.
- Equipo en mal estado.
- Aceite de inmersin de mala calidad o en malas condiciones.
59

LNEA ROJA:
- Anisocitosis: leve, moderada o severa (reportar predominio).
- Poiquilocitosis: leve, moderada o severa (reportar predominio).
- Hipocromia: leve, moderada o severa.
- Otros: reportar cualquier hallazgo anormal.
LNEA BLANCA:
- Madurez de los leucocitos.
- Variante de leucocitos que predomina.
- Alteraciones encontradas en los leucocitos.
LNEA PLAQUETARIA:
- Cantidad.
- Tamao: macro o micro plaquetas.
Eritrocitos normocrmicos.
Leucocitos maduros sin presencia de anormalidades.
Plaquetas distribucin y tamao normal, comparar los observado en recuento con mm .
8.5.8. RESPONSABLE:
60
8.6. HEMATOCRITO
8.6.1. PROPSITO:
El hematocrito es el volumen de eritrocitos expresados en porcentaje del volumen de sangre como
una fraccin del volumen de sangre, para determinar si un paciente presenta o no anemia.

Sangre venosa con EDTA o sangre capilar tomada directamente en tubos capilares heparinizados.
8.6.3. MATERIALES:
- Tubos capilares heparinizados o no heparinizados.
- Plastilina.
- Lector de hematocrito.
8.6.4. EQUIPO:
- Micro centrfuga para hematocrito con una fuerza de 10,000 - 13,000 rpm.
- Llenar el tubo de micro hematocrito mediante accin capilar, ya sea por una puncin que
hace que la sangre fluya libremente o por sangre venosa bien mezclada. Los tubos capilares
deben estar llenos en dos terceras partes.
- El extremo opuesto y exento de sangre se llena con plastilina para sellarlo.
- Colocar el capilar sellado en una centrfuga para el micro hematocrito, con el extremo
abierto hacia el centro de la microcentrfuga.
- Centrifugar a velocidades de 10,000 a 13,000 rpm por 5 minutos.
- Despus de centrifugado leer en la tabla para hematocrito haciendo coincidir el menisco
del plasma con el final de la marca de la tabla y el fondo del empacado de eritrocitos que
coincidan con el inicio de la marca de la tabla.
- Leer siempre en la direccin de la numeracin ascendente cuantos mL de empacados de
eritrocitos tiene la muestra.
61

- Presencia del lquido intersticial si se obtiene de una puncin dactilar.
- stasis prolongado en la toma de la muestra.
- Exceso de anticoagulante.
- Llenado incorrecto del tubo capilar.
- Mezcla inadecuada de la sangre.
- Incluir en la lectura la capa de leucocitos.
- Lectura del hematocrito en posicin paralela.
- Evaporacin del plasma durante la centrifugacin.
- Dejar transcurrir el tiempo sin hacer la lectura.
- Formacin de burbujas en el plasma.
- Instrumento de lectura en malas condiciones o deteriorados.


Se reporta el volumen de eritrocitos empacados en porcentaje del volumen total.
Hombre:
42%-51%
Mujer:
38%-42%
Nios:
33%-38%
Recin nacidos:
Hasta 55%
RESPONSABLE:
62
8.7. HEMOGLOBINA
MTODO DE LA CIANAMETAHEMOGLOBINA
8.7.1. PROPSITO:
Evaluar la presencia y la severidad de la anemia. Este mtodo consiste en efectuar una dilucin
exacta de sangre en una solucin que contiene ferrocianuro de potasio, que convierte la
hemoglobina en cianametahemoglobina y se compara colorimetricamente con una solucin patrn
de cianametahemoglobina de concentracin exacta y estable.

Sangre venosa con EDTA o sangre capilar.
8.7.3. MATERIAL Y REACTIVO:

- Cubetas estandarizadas de lectura.
- Pipeta automtica de 20 L.
- Tubos de 13 x 100 mm.
- Puntas plsticas.
- Papel parafilm.
- Pipeta serolgica.
- Propipeta o bulbo de hule.
- Reactivo de cianametahemoglobina.
- Estndar de hemoglobina.
8.7.4. EQUIPO:
- Espectrofotmetro.
- Mezclador mecnico (opcional).
63
Reloj marcador.
- Hacer una serie de tres tubos con el estndar de hemoglobina para calcular el factor de
calibracin.
- Colocar al primer tubo 5 mL de estndar puro.
- Colocar al segundo tubo 2.5 mL de estndar puro.
- Colocar al tercer tubo 1 mL de estndar puro.
- Llevar al volumen de 5 mL con cianametahemoglobina el segundo y tercer tubo.
- Mezclar y dejar reposar 10 minutos.
- Leerlos en espectrofotmetro a 540 nm y anotar la densidad ptica de los tubos.
- Obtener la concentracin de cada tubo en gramos por decilitros.
- Dividir la concentracin de cada tubo entre la densidad ptica.
- Sumar los 3 factores y sacar un promedio.
- Este ser el factor de calibracin por el cual se multiplicarn las densidades pticas de las
muestras. (Anexo 7)
- La preparacin de la cianametahemoglobina estar sujeto a las indicaciones del fabricante
del reactivo.
- Medir exactamente 5 mL solucin de cianametahemoglobina en un tubo de 13x100 mm.
- Con pipeta automtica colocar 20 microlitos de sangre.
- Mezclar bien y dejar reposar por 10 minutos.
- Transferir a la cubeta de lectura y leer en el espectrofotmetro a 540 nm.

- Toma inadecuada de muestra.
- stasis prolongada que resulta de dejar un torniquete en el brazo.
- Presencia de lquido insterticial que diluye la muestra de sangre.
- Mezclar incorrectamente de la muestra.
- Errores de pipeteado o dilucin.
64
- Coagulacin de la muestra.
- Sangre hiperlipmica (afecta el color)
- Numero alto de glbulos blancos por mm. cbico.
- Calibracin incorrecta.
- Reactivo expuesto a la luz.

La hemoglobina se reporta en gr/dL.
Calculo:
Lectura de muestra x Concentracin de stndar

Lectura del estndar
Hombre:
14.0-17.0 gr/dL
Mujer:
12.5-15.0 gr/dL
Nios:
11.0-13.0 gr/dL
Recin nacidos:
Hasta 18 gr/dL
8.7.8. RESPONSABLE:
65
8.8. RECUENTO DE LEUCOCITOS

8.8.1. PROPSITO:
Evaluar la cantidad de clulas nucleadas que se encuentran en la muestra de sangre (leucocitos y
eritroblastos).

2-3 mL de sangre venosa con EDTA o sangre capilar.

- Tubos de 12x75 mm.
- Cmara de Neubauer.
- Laminilla para cmara de Neubauer.
- Puntas plsticas.
- Acido actico glacial al 3%.
8.8.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Contmetro manual.
- Agitador.
8.8.5. PROCEDIMIENTO (Tcnica en tubo):

- Colocar 0.4 mL de cido actico glacial al 3% en un tubo 12x75mm.
- Mezclar perfectamente la sangre, y tomar exactamente 20 L con pipeta automtica. Y
colocarla en el tubo que contiene el acido actico glacial al 3 % lo que hace una dilucin
de la sangre 1:20.
66
- Mezclar por un mnimo de 2 minutos.

- Dispensar con pipeta automtica o con capilar la dilucin en el borde de la laminilla para
cmara Neubauer. (Anexo 8)
- Esperar 3 - 5 minutos Para que la clula se estabilicen.
- Luego se procede a contar los glbulos blancos en el microscopio con el objetivo 10x y
con poca luz en las dos reas primarias opuestas de la cmara, contar las clulas que
aparecen. Cuando el trabajo no es excesivo se cuentan las cuatro reas primarias para
tener un dato ms exacto.
- En caso de una leucopenia de menos de 1,000 leucocito/mm, la dilucin se hace 1:10.
- En caso de una leucocitosis de mas de 30,000 leucocito/mm, la dilucin se hace 1:200 con
diluyente de leucocitos.

- Desintegracin de los leucocitos cuando se deja la muestra mucho tiempo sin procesar.
- Pipeta mal calibradas.
- Dilucin incorrecta.
- Llenado incorrecto de la cmara.
- Presencia de levaduras o suciedad en el liquido de dilucin.
- Calculo errneo de las clulas contadas.
- Usar cmara y laminilla sucios y hmedos.
- Usar laminillas corrientes.
- Puntas defectuosas.
- Cmaras de mala calidad.

Reportar el nmero de leucocitos contados en las dos reas opuestas de la cmara y reportar por
mm.
67
Clculos:
- Cuando la dilucin es 1:20 el numero de leucocitos contados en las dos reas primarias
opuestas de la cmara se multiplica x 100 = N de leucocitos/mm, y se multiplicar por
50 si se cuentan 4 rea primarias.
- Cuando la dilucin es 1:10 el factor por el cual se multiplican los leucocitos, ser 50 si se
cuentan dos reas primarias opuestas y ser 25 si se cuentan 4 reas primarias.
- Cuando la dilucin es 1:200 y se cuenta toda el rea central, el factor ser 2,000.
Cuando en una frmula diferencial se obtienen ms de 10 eritroblastos por 100 clulas
blancas contadas, se har la siguiente correccin, debido a que el lquido de dilucin de
los leucocitos no destruye el ncleo de los eritroblastos y cuando se efecta el recuento se
cuenta como si fueran leucocitos.
Correccin
N de clulas contadas en cmara x 100

100 + % de eritroblastos encontrados
= N leucocitos verdaderos
Si en una formula diferencial salieron 80% de eritroblastos, en realidad se han contado 180 clulas
nucleadas, luego de 180 clulas Nucleadas 80 son eritroblastos, en el nmero de leucocitos
contados se obtendr una cantidad X de eritroblastos.
Adultos:
5,000-10,000 x mm
Nios:
5,000-12,000 x mm
Recin nacidos:
10,000-30,000 x mm
8.8.8. RESPONSABLE:
68
8.9. RECUENTO DE PLAQUETAS (Mtodo directo en cmara)

8.9.1. PROPSITO:
Evaluar la cantidad de plaquetas existentes en la sangre para lo cual se diluye una muestra de
sangre con una sustancia con un lquido diluyente que hace a las plaquetas ms visibles.

8.9.3. MATERIAL Y REACTIVOS:

- Tubos de vidrios 12x75mm.
- Cmara Neubauer.
- Laminilla para cmara de Neubauer.
- Tubo capilar.
- Papel filtro.
- Caja de Petri.
- Puntas plsticas.
- Solucin de Gower.
8.9.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Contmetro manual.
- Reloj marcador.
69
8.9.5. PROCEDIMIENTO (tcnica en tubo):

- Colocar 2 mL de reactivo de Gower en un tubo de 12 x75 mm.
- Mezclar bien la muestra de sangre varias veces.
- Colocar exactamente 10 L de sangre en el tubo que contiene el diluyente.
- Mezclar por un mnimo de 3 minutos.
- Dispensar con pipeta automtica o con capilar la dilucin en el borde de la laminilla de la
cmara Neubauer. (Anexo 8)
- Colocar la cmara en una caja de petri sobre un disco del papel filtro hmedo, para evitar
la evaporacin, se tapa y se espera de 10 a 20 minutos para que se depositen bien las
plaquetas.
- Proceder al conteo de las plaquetas en el microscopio con el objetivo 40x y poca luz.
- Contar toda el rea central.
- Observar las plaquetas como pequeas partculas de gran refringencia.
- Correlacionar el recuento de plaquetas obtenido en la cmara con las plaquetas que se
observan en el frotis.

- Desintegracin de las plaquetas cuando se deja mucho tiempo la muestra sin procesar, y
adherencia a las paredes del tubo de vidrio.
- Tomar la muestra de sangre en rea con cianosis.
- Dilucin incorrecta.
- Mal almacenamiento del lquido de dilucin el cual debe conservarse en refrigeracin.
- Presencia de bacterias en el lquido de dilucin.
- Falta de filtracin del diluyente antes de su uso.
- Cmara y laminilla sucias o hmedas.
- Uso de laminilla corriente.
- No comparar el recuento directo con el indirecto.
70

Las plaquetas contadas en la cmara se multiplican por el factor correspondiente y se reportan por
mm de sangre.
Clculo:
N de plaquetas contadas X 2,000 = N de plaquetas/mm
150,000-450,000/mm
8.9.8. RESPONSABLE:
71
8.10. ESTIMADO DEL NMERO DE PLAQUETAS (Mtodo indirecto)

8.10.1. PROPSITO:
Evaluar el nmero de plaquetas presentes en la sangre, a travs de la observacin de un frotis
coloreado, con el fin de comparar con el conteo directo.

Frotis de sangre coloreado con Wright.

- Papel limpia lentes.
8.10.4. EQUIPO:
- Contmetro.
- Microscopio.
- Colocar la lmina coloreada en la platina del microscopio.
- Observar con el objetivo 40x.
- Colocar una gota de aceite de inmersin en la lmina coloreada.
- Observar con el objetivo 100x.
- Contar las plaquetas en 10 campos situados entre el cuerpo y la cola del frotis (los campos
deben contener aproximadamente 100 glbulos rojos).

- Hacer el conteo en los mrgenes del frotis.
- Aceite de inmersin de mala calidad o contaminado.
72
- No comparar el recuento indirecto con el directo.

Calcular el nmero de plaquetas de la siguiente forma:
Estimado de plaquetas mm =
No. Glbulos Rojos mm =
No. Plaquetas observadas X No. Glbulos Rojos mm

1,000
Hematocrito + 5% del Hematcrito
100,000
8.10.8. RESPONSABLE:
73
8.11. RECUENTO DE RETICULOCITOS

8.11.1. PROPSITO:
Evaluar el funcionamiento de la mdula sea ya que los reticulocitos son glbulos rojos jvenes que
constituyen un ndice de la respuesta eritropoytica.
8.11.2. MUESTRA:

- Tubos de 12 x 75 mm.
- Capilares.
- Lminas portaobjeto en buen estado.
- Azul de cresil brillante.
8.11.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Bao de Mara o estufa a 37 C.
- Contmetro manual.
- Verter un capilar lleno de azul cresil brillante y dos capilares llenos de sangre en un tubo
12x75 mm.
- Mezclar bien e incubar a 37C o a temperatura ambiente durante 15 minutos.
- Preparar frotis de la mezcla de la forma usual, dejar secar.
- Leer al microscopio con objetivo de inmersin.
74
Contar 10 campos en donde se observen 100 eritrocitos por campo, anotar los reticulocitos
observados.

- No incubar los capilares a 37C.
- Colorante con precipitados.
- Observar en campos donde los eritrocitos no estn uniformemente distribuidos.

Se reportan los reticulocitos por cada 100 eritrocitos observados.
Clculo:
% Reticulocitos =
Total de reticulocitos observados en 10 campos
10
Adultos:
0.5% - 1.5%
Recin nacidos:
2.5% - 6.5%
75
8.12. VELOCIDAD DE ERITROSEDIMENTACIN

8.12.1. PROPSITO:
La velocidad de Eritrosedimentacin mide la velocidad de sedimentacin de los glbulos rojos en
el plasma.

3 mL de Sangre venosa con EDTA.
8.12.3. MATERIALES:
- Agujas Wintrobe.
- Tubos Wintrobe.
- Soporte para tubos de sedimentacin.
8.12.4. EQUIPO:
- Reloj marcador.
- Mezclar la muestra de sangre.
- Llenar un tubo de Wintrobe hasta la seal cero, introduciendo cuidadosamente la aguja de
Wintrobe adaptada a una jeringa, conteniendo la sangre hasta el fondo del tubo, cuidar de
que no formen burbujas.
- Colocar en el soporte, en posicin perfectamente vertical durante 1 hora.
- A la hora exacta leer de arriba hacia abajo el valor numrico en mm, midiendo la distancia
que hay entre el punto ms bajo del menisco de la superficie y el lmite superior del
sedimento de glbulos rojos; los mm, ledos corresponden a la velocidad de sedimentacin
por hora.
76
Toda eritrosedimentacin con hematocrito menor de 40%, se corregir usando la tabla de correccin
de la manera siguiente:
- Llevar valores de hematocrito y sedimentacin a la tabla de correccin.
- Tome el punto dnde se interceptan ambos, este punto caer sobre una de las lneas
curvas de dicha tabla, la que deber seguir hacia la derecha y abajo, hasta el punto de
intercepcin con la lnea negra mas gruesa, que corresponde al valor de hematocrito de
40%.
- Lea a la derecha de la tabla el valor de eritrosedimentacin corregida, este valor es el que
se deber reportar.

- Dejar transcurrir ms de 2 horas entre la toma de la muestra y el montaje de la prueba.
- Efectuar la prueba en temperaturas muy altas o muy bajas.
- No leer a la hora exacta.
- Presencia de cogulo en la sangre.
- No realizar la debida correccin cuando es necesaria.
- No hacer una buena mezcla de la muestra.
- Que el tubo no este en posicin completamente vertical.
- La presencia de burbujas al llenar el tubo.

Velocidad de eritrosedimentacin se expresa en milmetros por hora
(mm/h).
Mujeres:
Hombres:
0-15 mm/h
0-7 mm/h
Nios:
0-20 mm/h
Recin nacidos:
0-2 mm/h
77
8.13. TIEMPO DE SANGRAMIENTO

8.13.1. PROPSITO:
Evaluar el funcionamiento y nmero de plaquetas as como la contractilidad capilar.
8.13.2. MUESTRA:
Sangre capilar del dedo o del lbulo de la oreja.
8.13.3. MATERIALES:
- Lanceta descartable estril.
- Papel filtro.
- Torundas de algodn humedecidas con alcohol.
8.13.4. EQUIPO:
- Cronmetro.
- Desinfectar cuidadosamente el rea de puncin.
- Puncionar el dedo ndice a modo que corte transversalmente la direccin de las huellas
digitales, o el lbulo de la oreja.
- Secar con el papel filtro cada medio minuto hasta que cese el sangramiento.
- Realizar el secado en forma descendente o circular sin tocar la piel.
- Anotar el tiempo desde que se punciona hasta que cesa el sangramiento y reportar.
78

- Presionar el dedo para que fluya la sangre.
- Rozar el papel filtro al dedo.
- Puncin inadecuada.
- No marcar el tiempo en el momento de la puncin.
- Puncionar el rea seleccionada cuando an est hmeda.

Reportar el tiempo de sangrado en minutos y segundos.
1 - 4 minutos.
79
8.14. TIEMPO DE COAGULACIN.

MTODO DE LEE Y WHITE
8.14.1. PROPSITO:
Evaluar en forma global el mecanismo intrnseco de la coagulacin.
8.14.2. MUESTRA:
Sangre venosa.
8.14.3. MATERIALES:
- Jeringas descartables.
- Tubos 12x75mm.
- Alcohol etlico al 70%.
- Torniquete.
8.14.4. EQUIPO:
- Bao de Mara a 37C.
- Reloj marcador.
- Termmetro.
8.14.5. PROCEDIMIENTOS:
80
- Obtener sangre venosa con una jeringa descartable y estril.

- Poner en marcha el cronmetro en el momento en que la sangre penetre en la jeringa.
- Verter cuidadosamente 1 CC de sangre en 3 tubos, mantenerlos en bao Mara a 37C.
- Invertir cada medio minuto (sin agitar) los 3 tubos hasta que cada uno pueda invertirse sin
que se vierta su contenido.
- Tomar el tiempo de coagulacin de cada uno de los tubos y luego sacar un promedio de
los tres.

- Uso de material mal lavado.
- No tomar el tiempo en el momento de la extraccin.
- Temperatura del Bao de Mara inadecuada.
- No cumplir con los intervalos de tiempo indicados en el procedimiento.
- Invertir bruscamente el tubo.

El tiempo de coagulacin se reporta en minutos.
5-10 minutos.
81
8.15. CONCENTRADO DE STROUT

8.15.1. PROPSITO:
Concentrar los parsitos por medio de la centrifugacin repetida de tal modo que permita observarlos
microscpicamente.

5 10 mL de sangre venosa sin anticoagulante o sangre en tubos con anticoagulante.
La sangre se obtendr posterior a los 6 das de la picadura de la chinche.

- Jeringas descartables.
- Tubos de 13x100 mL.
- Pipeta Pasteur.
- Portaobjetos.
- Cubreobjetos.
- Torundas de algodn humedecidas con alcohol.
- Torniquete.
- Colorante Giemsa o Wright.
- Buffers pH 6.8.
8.15.4. EQUIPO:
- Centrfuga.
- Microscopio.
- Reloj marcador.
82
- Extraer 5 10 mL de sangre venosa. Dejar que la sangre se coagule y que el cogulo
se retraiga espontneamente (si se toma sin anticoagulante); o centrifugar la sangre con
anticoagulante.
- Decantar el suero o plasma as obtenido a un tubo de centrfuga.
- Centrifugar a 1000 rpm por 3 minutos, para separa los glbulos rojos.
- Centrifugar sobrenadante a 3000 rpm por 1 minuto.
- Observar el sedimento entre porta y cubreobjeto con objetivo 10x y 40x, buscando formas
mviles.
- Siempre que una prueba resulte positiva hacer lmina (gota gruesa o frotis) coloreada por
Giemsa o Wright para enviar a control de calidad al Laboratorio Central.
- Es aconsejable examinar de 3 a 4 preparaciones para mayor sensibilidad del examen.
- Si en la preparacin se obtiene un resultado negativo, repetir el examen por segunda vez,
si esta resultara negativa nuevamente se realizar una tercera prueba, este muestreo
se realizar con intervalos de 5 das.

- Extraccin inadecuada del sobrenadante.
- Realizar la prueba en la fase crnica despus de los 30 das o antes de los 6 das posteriores
a la picadura.

Se observa Trypanosoma cruzi cuando se observa presencia del parsito en la preparacin.
No se observa Trypanosoma cruzi en la presente preparacin. Cuando en la preparacin no se
observa ningn parsito.
83
8.16. GOTA GRUESA

Este procedimiento no se desarrolla en este manual, por existir a nivel nacional el Manual de
Procedimientos Tcnicos para el Diagnstico Microscpico de la Malaria, Primera Edicin ao
2007, para realizar el procedimiento de gota gruesa se deber consultar lo contemplado en el
mencionado manual.
84
9. INMUNOLOGA
85
9.1. TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA PARA

EXMENES DE INMUNOLOGA
9.1.1. PROPSITO:
Obtener sangre venosa para realizar pruebas de inmunologa.

5 mL de sangre venosa sin anticoagulante.
9.1.3. MATERIALES:
- Jeringa estril para extraer 5 mL con aguja 21 X 1 o sistema de extraccin al vaco.
- Torniquete.
- Tubos sin anticoagulante 13 x 100 mm y tapn de hule o tubos del sistema de extraccin
al vaco.
- Sentar cmodamente al paciente para la extraccin tomando en cuenta que el rea de
- Realizar asepsia con torunda de algodn humedecida con alcohol
adentro hacia fuera.
86
etlico al 70% de
- Colocar el torniquete firmemente alrededor del brazo, y pedir al paciente que abra y cierre
la mano varias veces para favorecer la dilatacin de las venas.
- Colocar la aguja con el bisel hacia arriba sobre la vena a puncionar.
- Introducir la aguja en el centro de la vena y penetrar a lo largo de la vena de 1 a 1.5 cm.
- Tirar hacia atrs el mbolo de la jeringa muy lentamente para que penetre la sangre en
la jeringa hasta llenar con la cantidad de sangre necesaria. Si utiliza sistema de sangrado
al vaco introducir el tubo en el dispositivo (holder) de manera que al ejercer presin se
atraviese el extremo inferior de la aguja, para que la sangre fluya hacia el tubo por efecto
del vaco.
- Esperar que la muestra se coagule a temperatura ambiente.
- Centrifugar la muestra a 3000 rpm po 10 minutos.
- Separar el suero del paquete globular.

- Depositar la sangre en el tubo en forma violenta.
- Dejar los tubos con muestras destapados.
87
- Que el paciente no cumpla con las indicaciones de acuerdo al

realizar.
anlisis qumico a
- Separacin inadecuada del coagulo antes de centrifugar (no poner en bao de Mara).
- Centrifugacin inadecuada de la muestra.
9.1.6. RESPONSABLE:
88
9.2. PRUEBA RPIDA DE REAGINA (Mtodo RPR)

9.2.1. PROPSITO:
Detectar y cuantificar anticuerpos reagnicos en suero, que corresponde a un diagnostico presuntivo
de Sfilis, La prueba de RPR, es una modificacin del antgeno VDRL (pruebas no treponmicas).
El RPR es una prueba que contiene micropartculas
de carbn para visualizar
la
reaccin
antgeno anticuerpo.

5mL de sangre sin anticoagulante de preferencia tomada en ayunas (para obtener de 2 a 3 mL de
suero).

- Tarjeta o lmina en crculos de 18 mm.
- Dispensadores de 50 uL.
- Tapadera plstica para formar cmara hmeda.
- Frasco plstico con aguja calibrada para depositar 16uL.
- Antgeno: Cardiolipina, Lecitina, Colesterol y partculas de carbn.
- Agua destilada.
- Papel toalla.
- Puntas plsticas.
- Tubos 12x75 mm.
89
9.2.4. EQUIPO:
- Reloj marcador.
- Rotador serolgico de 100 rpm.
- Macrocentrfuga.
- Micropipeta automtica regulable.
Prueba cualitativa:
- Centrifugar la sangre a 2,500 rpm durante 5 minutos.
- Separar los sueros del paquete globular.
- Identificar los sueros y crculos de la tarjeta o lmina de reaccin.
- Depositar en cada crculo de la tarjeta lmina, 50 uL. de los sueros en estudio y
controles positivo y negativo, manteniendo el dispensador verticalmente para que el
volumen sea exacto.
- Extender el suero sobre la superficie del crculo con el extremo opuesto del dispensador.
- Homogenizar el antgeno y depositar una gota (equivalente a 16 uL) sobre el suero.
- Colocar la tarjeta en el rotador serolgico y cubrirla con la cmara hmeda.
- Rotar durante 8 minutos a 100 rpm.
- Inclinando la lmina de adelante hacia atrs observar a simple vista con buena iluminacin
agregados bien diferenciados en el centro y en la periferia del crculo.
Toda prueba cualitativa que presente aglutinacin se debe hacer prueba semicuantitativa.
Prueba semicuantitativa:
- En cinco crculos poner con el dispensador una gota (50 L) de solucin salina 0.85 %, no
extender.
- Depositar con el dispensador en el primer crculo 50 L de suero, mezclar aspirando
y expeliendo 3 a 6 veces, evitando la formacin de burbujas.
90
- A partir de esta mezcla que constituye la dilucin 1:2 proseguir las diluciones seriadas, en
base 2 mezclando y pasando sucesivamente de un crculo a otro 50 L; descartar los 50
L de la ltima dilucin. (Anexo 5)
De esta manera se obtienen las diluciones siguientes:

Crculos
Diluciones
1:2
1:4
1:8
1:16
1:32
- Extender las gotas por la superficie del crculo, utilizando un mezclador e iniciando por la
dilucin ms alta.
- Colocar en cada crculo una gota (16 L) de antgeno bien homogenizado, no agitar
violentamente.
- Colocar las placas en un rotador y cubrirlas con la tapadera
- Rotar durante 8 minutos a 100 rpm.
- Inclinando la lmina de adelante hacia atrs observar a simple vista con buena iluminacin
agregados bien diferenciados en el centro y en la periferia del crculo.
Toda prueba que de una reaccin de 1:32 se debe hacer la prueba cuantitativa.
Prueba cuantitativa:
- En un tubo colocar 1.5 mL de solucin salina a 0.85 % y 0.1 mL de suero. (Esta constituye
una dilucin 1:16)
- A partir de la dilucin 1:16 hacer diluciones seriadas en base 2 mezclando y pasando
sucesivamente de un crculo a otro 50 L. (Anexo 5)
91
Descartar los 50 L de la ltima dilucin y se obtendrn las siguientes diluciones:

Crculos
10
Diluciones
1:32
1:64
1:128
1:256
1:512

- No mezclar el antgeno.
- No leer inmediatamente la reaccin.
- Rotador con velocidad inadecuada.
- Aguja dispensadora de reactivo sucia o deteriorada.
- No dispensar las gotas en forma vertical.
- No utilizar cmara hmeda.
- No utilizar los reactivos a temperatura ambiente.
- Mala iluminacin para la lectura.
- Diluciones inexactas.
- Uso de reactivos vencidos o en malas condiciones.
- Muestras hiperlipmicas.
- Presencia de infeccin. (Anexo 9)

- Resultado No Reactivo: aspecto liso de la suspensin, la cual aparece sin agregados.
- Resultado Reactivo dbil: Se observa reaccin en la prueba cualitativa y no aparecen
agregados visibles en todas las diluciones semi cuantitativas.
- Resultado Reactivo: agregados bien diferenciados en el centro y en
crculo.
la periferia del
- En las pruebas semicuantitativa y cuantitativa, si el resultado es Reactivo debe reportarse

la ltima dilucin en la que se observa reaccin.
9.2.8. RESPONSABLE:
92
9.3. DETECCIN DE ANTICUERPOS DEL VIRUS DE LA

INMUNODEFICIENCIA HUMANA (Prueba rpida)
9.3.1. PROPSITO:
Detectar in vitro los anticuerpos formados en el torrente sanguneo por el virus de la Inmunodeficiencia
Humana (VIH 1 y VIH 2).

Suero, plasma y sangre completa.

- Tubos de ensayo 12 x 75 mm .
- Tubos de ensayo 13 x 100 mm .
- Puntas plsticas.
- Pipeta Pasteur con bulbo o pipeta transfer.
- Papel toalla.
- Protocolo de trabajo. (Anexo 10)
- Tiras reactivas sensibilizadas con antgeno VIH 1 y VIH 2.
9.3.4. EQUIPO:
- Macrocentrfuga.
- Pipeta automtica de volumen variable.
- Reloj marcador.
93
- Llevar a temperatura ambiente las tiras reactivas a utilizar.
- Preparar el protocolo de trabajo.
- Cortar la lnea de puntos de la bolsa para retirar las tiras reactivas.
- Retirar el plstico de proteccin de cada tira.
- Identificar las tiras reactivas a utilizar.
- Dispensar 50 L de suero con una pipeta automtica sobre la superficie absorbente.
(sealada con una flecha)
- Esperar un mnimo de 15 minutos y un mximo de 60 minutos.
- Leer el resultado.
- Observar el rea de reaccin.
9.3.6. FUENTE DE ERROR

- Reactivos vencidos y en mal estado.
- Tiras reactivas que no estn a temperatura ambiente.
- Concentraciones bajas de anticuerpos.
- Pacientes con transfusiones masivas.
- Manipular las tiras reactivas con guantes empolvados.
- Infeccin con una variante del virus que no reacciona con los antgenos especficos
utilizados en la configuracin del ensayo.

REACTIVO:
- Presenta barra roja en las dos ventanas del rea de reaccin, tanto la del paciente con la
ventana del control.
94
INDETERMINADO:
Presenta barra tenue en la ventana del rea de reaccin del paciente y barra roja en la
ventana del control.
NO REACTIVO A LA FECHA:
Presenta barra roja solamente en la ventana de control y no presenta barra roja en la ventana
del resultado del paciente.
REACCIN NO VLIDA:
No aparece ninguna barra roja ni en la ventana de control ni en la ventana del paciente, esta
prueba debe repetirse.
No aparece ninguna barra roja en la ventana de control pero s en la ventana del paciente,
esta prueba debe repetirse.
9.3.8. RESPONSABLE:
95
9.4. ANTGENOS FEBRILES

9.4.1. PROPSITO:
Investigar en el suero del paciente anticuerpos producidos por infecciones causadas por Salmonellas,
Brucellas, Rickettsias u otras infecciones bacterianas, por las cuales el organismo del paciente
reacciona con la produccin de anticuerpos especficos.

Suero.

- Tubos de ensayo 12 x 75 mm.
- Puntas plsticas.
- Lmina de reaccin.
- Papel toalla.
- Antgeno somtico O.
- Antgeno flagelar H.
- Antgeno paratyphico A.
- Antgeno paratyphico B.
- Antgeno somtico O X 19.
- Antgeno somtico Brucella abortus.
- Control negativo y control positivo.
96
9.4.4. EQUIPO:
- Macrocentrfuga.
- Reloj marcador.
- Rotador serolgico.
- Llevar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente.
Prueba cualitativa:
- Mezclar las suspensiones cuidadosamente antes de su uso.
- Colocar una gota de muestra en los 6 crculos y una gota de cada control positivo y
negativo en su respectivo crculo.
- Colocar sobre cada muestra o control una gota de reactivo.
- Mezclar con palillos descartables por separado y esparcir el lquido sobre el rea completa
de cada crculo.
- Colocar la lmina en un rotador a 100 rpm durante 1 minuto.
- Leer los resultados bajo luz artificial inmediatamente.
- Examine macroscpicamente la presencia o ausencia de aglutinacin.
Prueba semicuantitativa:
- En caso de obtener resultados positivos hacer determinacin semicuantitativa en lmina:
- Colocar en seis tubos 100 L. de solucin salina 0.85% y adicionar en el primer tubo 100
L de muestra.
- Hacer diluciones seriadas en base a 2 en los siguientes tubos, de modo de obtener las
siguientes diluciones: 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32 y 1:64.
- Continuar el procedimiento como se describe en la prueba cualitativa, empleando cada
dilucin como muestra.
97
- Leer los resultados bajo luz artificial inmediatamente.

- Examine macroscpicamente la presencia o ausencia de aglutinacin.
- Reportar la ltima dilucin en la que se observe aglutinacin.

- Fase precoz de la enfermedad.
- Niveles bajo de anticuerpos.
- Leer la reaccin despus del tiempo estipulado.
- Rotacin inadecuada.
- Reactivos vencidos o deteriorados.
- No homogenizar los antgenos antes de usarlos.
- No llevar a temperatura ambiente los reactivos.

POSITIVO: Cuando se observa aglutinacin macroscpica y reportar ltima dilucin en la que se
observa aglutinacin.
NEGATIVO: Cuando no se observa aglutinacin.
9.4.8. RESPONSABLE:
98
9.5. TIPEO SANGUNEO

PRUEBA DIRECTA EN TUBO
9.5.1. PROPSITO:
Investigar en la sangre la presencia o ausencia de los antgenos A, B y Rh que se localizan en la
superficie de los glbulos rojos, utilizando anticuerpos especficos para cada uno de ellos.

1 mL de Sangre completa con o sin anticoagulante.

- Puntas plsticas.
- Frasco lavador.
- Papel toalla.
- Antisuero A.
- AntisueroB.
- Antisuero RH (anti-D).
9.5.4. EQUIPO:
- Macrocentrfuga.
- Reloj marcador.
99
- Lmpara para lectura de aglutinacin.
- Identificar previamente los tubos.
- Depositar 2-3 gotas de sangre en un tubo.
- Realizar 3 veces el lavado de clulas de la siguiente manera:
a) Agregar 1 mL de solucin salina 0.85%.
b) Mezclar y llenar con solucin salina 0.85% el tubo hasta 3/4 partes.
c) Centrifugar por 2 minutos a 3400 rpm .
d) Descartar toda la solucin salina quedando en el fondo un paquete de glbulos
rojos.
- Preparar una suspensin al 5%, colocando una gota de los glbulos rojos lavados y 19
gotas de solucin salina y mezclar.
- Rotular 3 tubos con las letras A, B, Rh por cada muestra a analizar, a cada uno agregar
una gota de glbulos rojos al 5%.
- Depositar los antisueros respectivos:
a) Tubo A antisuero A.
b) Tubo B antisuero B.
c) Tubo Rh antisuero D.
- Centrifugar 15 segundos a 3400 rpm .
- Leer la presencia o ausencia de aglutinacin agitando suavemente los tubos.

- Hemlisis de los glbulos rojos por mezcla inadecuada.
- Presencia de enfermedades autoinmunes.
100
- Iluminacin inadecuada en el momento de la lectura.

- Dilucin inadecuada de los glbulos rojos.

Se reporta:
Grupo A:
si aglutina el tubo marcado A.
Grupo B:
si aglutina el tubo marcado B.
Grupo O:
si no aglutinan los tubos marcados A y B.
Grupo AB:
si aglutinan los tubos marcados A y B.
9.5.8. RESPONSABLE:
101
9.6. DETERMINACIN DE VARIANTE Du

9.6.1. PROPSITO:
Comprobar si una persona es verdadero positivo o negativo con respecto al factor Rh (D). La
variante Du se determina cuando el factor Rh es negativo.

Suspensin de eritrocitos al 5%.

- Papel toalla.
- Albmina bovina.
- Suero antihumano (coombs).
9.6.4. EQUIPO:
- Bao de Mara.
- Centrfuga.
- Lmpara para lectura de aglutinacin.
- Identificar dos tubos
- En el tubo 1: colocar una gota de suero anti D y agregar una gota de suspensin de
eritrocitos al 5% a estudiar.
102
- Mezclar suavemente.
- En el tubo 2 (control): colocar una gota de albmina bovina y agregar
suspensin de eritrocitos al 5% a estudiar.
una gota de
- Mezclar suavemente.
- Centrifugar ambos tubos a 3400 rpm por 15 segundos.
- Desprender suavemente el botn de clulas del fondo del tubo.
- Observar presencia o ausencia de aglutinacin frente a la luz de una lmpara.
- Si no se observa aglutinacin se incuban los tubos a 37C por 15 minutos.
- Lavar los glbulos rojos de ambos tubos cuatro veces llenndolos con solucin salina al
0.85%.
- Centrifugar por 2 minutos a 3400 rpm cada vez y descartar la solucin despus de cada
lavada.
- Agregar a cada tubo 2 gotas de suero Coombs.
- Centrifugar 15 segundos a 3400 rpm.
- Leer frente a la luz de una lmpara y buscar aglutinacin tratando de desprender suavemente
el botn de clulas.
- Observar aglutinacin.

- Hemlisis de los glbulos rojos por mezcla inadecuada.
- Presencia de enfermedades autoinmunes.
- Iluminacin inadecuada en el momento de la lectura.
- Dilucin inadecuada de los glbulos rojos.
- Bao de Mara con temperatura inadecuada.
103

Du POSITIVO: (presencia de aglutinacin o botn) = Rh POSITIVO
Du NEGATIVO: (ausencia de aglutinacin) = Rh NEGATIVO
9.6.8. RESPONSABLE:
104
9.7. PRUEBA DE EMBARAZO

9.7.1. PROPSITO:
Investigar en orina la presencia de la hormona gonadotropina corinica (HCG); el mtodo se basa en
la reaccin de aglutinacin de una suspensin de Ltex recubiertas con anticuerpos monoclonales
Anti-hormona gonadotropina corinica.

Orina, se recomienda utilizar la orina de la primera hora de la maana, ya que generalmente contiene
mayor concentracin de hormona.
Muestras de orina: estable 48 horas a 2-8C o 3 meses a -20C.

-Tarjetas o lminas de reaccin.
- Papel toalla.
- Dispensadores plsticos.
- Tubos cnicos.
- Suspensin de partculas de ltex con anticuerpo monoclonal
- Anti-hormona gonadotropina corinica humana.
- Control positivo: orina humana con una concentracin conocida de hormona gonadotropina
corinica.
- Control negativo: suero animal sin presencia de hormona gonadotropina corinica.
9.7.4. EQUIPO:
- Macrocentrfuga.
- Rotador serolgico.
105
- Lmpara de luz.
- Reloj marcador.
- La muestras de orina que presente turbidez debe centrifugarse antes de iniciar la prueba.
- Llevar a temperatura ambiente los reactivos y las muestras.
- Identificar correctamente lmina o tarjeta.
- Sobre cada crculo de lmina o tarjeta depositar 100 L de muestras a analizar e incluir
un control Positivo y un negativo por cada
tiraje.
- Homogenizar suavemente el reactivo de Ltex antes de usar.
- Depositar una gota de reactivo de Ltex sobre cada una de las muestras y los controles.
- Mezclar con el extremo opuesto del dispensador, procurando extender la suspensin por
toda la superficie interior del crculo
- Emplear un dispensador distinto para cada muestra.
- Colocar la tarjeta o lmina sobre un agitador rotatorio de 80 - 100 rpm durante 2 minutos.
- Examinar macroscpicamente bajo una fuente de luz la presencia o ausencia de aglutinacin
inmediatamente despus de retirar del agitador.
9.7.6. FUENTE DE ERROR

- Las concentraciones altas de hormonas folculo estimulante y luteinizante, presentan
reaccin cruzada con la hormona gonadotropina corinica.
- Muestras con bajo niveles de hormona gonadotropina corinica (antes de las seis semanas,
se recomienda repetir la prueba unos das ms tarde).
- La orina de pacientes con enfermedades trofoblsticas tales como carcinoma o quiste
hidatidiforme podran causar resultado falsamente positivos.
- Realizar la prueba con reactivos que no han sido llevados a temperatura ambiente.
106

REACCIN DIRECTA:
POSITIVA: Formacin aglutinacin.
NEGATIVA A LA FECHA: No se observa aglutinacin.
REACCIN INDIRECTA:
POSITIVA: No se observa aglutinacin.
NEGATIVA A LA FECHA: Formacin de aglutinacin.
Consultar siempre el inserto provisto por la casa comercial.
9.7.8. RESPONSABLE:
107
10. MICROBIOLOGA
BSICA
108
10.1. PREPARACIN DE UN EXTENDIDO DE MUESTRA

10.1.1. PROPSITO:
Estudiar mediante un frotis teido la presencia de bacterias, lo cual aporta una informacin til para
el diagnstico de la enfermedad del paciente y contribuye a establecer un tratamiento inmediato.

Pus, esputo, orina y secreciones.

- Asa bacteriolgica o aplicador de madera.
- Papel toalla.
- Gasa.
- Fsforos.
10.1.4. EQUIPO:
Mechero.
- Identificar la lmina porta objeto.
- Extender en el centro de una lmina portaobjeto una porcin de la muestra con asa o
aplicador de madera en forma de capa fina, trazando una espiral del centro a la periferia.
- Dejar secar completamente al aire libre.
- Fijar al calor.
- Fijar al calor pasndolo rpidamente sobre la llama de un mechero, tres veces en forma
horizontal con la muestra hacia arriba.
109
- Dejar enfriar.
- Aplicar coloracin que corresponda, segn agente a investigar.

- Sobre calentar el frotis o no fijarlo.
- Frotis gruesos o muy delgados.
- No dejar enfriar el frotis.
110
10.2. EXAMEN MICROSCPICO (Coloracin de Gram)

10.2.1. PROPSITO:
Colorear las bacterias presentes en un frotis mediante la tincin de Gram, la cual permite diferenciar
en dos grandes grupos, bacterias grampositivas que toman el color violeta y bacterias gramnegativas
que toman el color rosado.

Frotis de la muestra a analizar correctamente identificado.

- Papel filtro.
- Embudo.
- Bandeja o soporte de coloracin.
- Papel toalla.
- Cristal violeta modificado por Hucker.
- Lugol o solucin de Yodo para Gram.
- Alcohol Acetona.
- Safranina.
10.2.4. EQUIPO:
- Reloj marcador.
- Microscopio.
111
- Filtrar los colorantes antes de utilizar.
- Colocar los frotis a colorear en la bandeja o soporte de coloracin.
- Cubrir el frotis completamente con Cristal Violeta, durante un
minuto.
- Enjuagar con agua corriente y escurrir.

- Cubrir el frotis completamente con Lugol o solucin de Yodo para Gram durante un
minuto.
- Aplicar alcohol acetona gota a gota hasta que no salga Cristal
- Cubrir el frotis con Safranina.
- Dejar reposar por 30 segundos.
- Enjuagar suavemente con agua corriente.
- Dejar secar al aire libre.
- Observar al microscopio con lente de inmersin 100x.

Grampositiva falsa
- Colorante de Cristal Violeta que presenta sedimentos.
- Remocin incompleta del Lugol.
- Decoloracin insuficiente del frotis.
- Tiempo prolongado con Safranina.
Gramnegativa falsa
- Tiempo insuficiente con Lugol.
- Tiempo prolongado con alcohol Acetona o lavado incompleto.
112
Violeta.

- Reportar morfologa bacteriana observada (iniciar con las ms frecuente) indicando
la agrupacin y la cantidad.
- Reportar, si lo hubiere, la presencia de polimorfonucleares y/o linfocitos.
Indicar la presencia y cantidad de levaduras o micelios y clulas epiteliales.
113
10.3. DIRECTO AL FRESCO DE SECRECIN VAGINAL

10.3.1. PROPSITO:
Investigar en una muestra de secrecin vaginal, la presencia de Trichomonas vaginalis, levaduras
y/o pseudohifas.

Secrecin vaginal, tomada con un hisopo estril y colocada en un tubo con 2 mL de solucin salina
estril 0.85%.

- Tubos de vidrio 16 x 150 mm.
- Laminilla cubreobjeto.
- Hisopos estriles.
- Papel toalla.
- Gasa.
- Solucin salina estril 0.85%.
10.3.4. EQUIPO:
- Microscopio.
- Identificar la lmina portaobjeto.
- Colocar una gota en el portaobjeto y cubrir con laminilla cubre objeto, con el cuidado de
no formar burbujas de aire.
- Examinar toda la preparacin al fresco en el microscopio con objetivo 10x.
114
- Buscar presencia de Trichomonas vaginalis, levaduras o pseudohifas. (Anexo 11)

- Contaminacin de la muestra.
- Solucin salina contaminada.
- Dejar secar la preparacin.
- Formacin de burbujas de aire en la preparacin.

- Se observan Trichomonas vaginalis: cuando estn presentes en la preparacin.
- Se observan levaduras y pseudohifas: cuando estn presentes en la preparacin.
- No se observan Trichomonas vaginalis ni levaduras y pseudohifas: cuando no estn
presentes en la preparacin ninguna de ellas.
115
10.4. DIRECTO DE SECRECIN VAGINAL COLOREADO CON GRAM

10.4.1. PROPSITO:
Investigar en una muestra de secrecin vaginal coloreada, la presencia de Lactobacilos, mobiluncos,
o gardnerella.

Secrecin vaginal, tomada con un hisopo estril y colocada en un tubo con 2 mL de solucin salina
estril 0.85%.

- Tubos de vidrio 16 x 150 mm.
- Hisopos estriles.
- Papel toalla.
- Gasa.
10.4.4. EQUIPO:
- Microscopio.
116
- Proceder a la elaboracin de frotis y coloracin de Gram como est descrito en los
procedimientos de: Preparacin de un extendido de muestra y Coloracin de Gram de
este manual, pginas 109 112.
- Observar en el microscopio con objetivo de inmersin 100x, la presencia de Lactobacilos,
mobiluncos, o gardnerella.
- Reportar lo observado.

- Contaminacin de la muestra.
- Solucin salina contaminada.
- Coloracin o frotis inadecuado.

Reportar de la forma siguiente:
FLORA NORMAL:
- Cuando se observan slo bacilos grampositivos (Lactobacilos).
FLORA VAGINAL ALTERADA:
- Cuando se observa predominio de bacilos grampositivos y escasos bacilos
gramnegativos.
VAGINOSIS BACTERIANA POSIBLEMENTE POR GARDNERELLA VAGINALIS:
- Cuando se observan escasos o ningn bacilo grampositivo y predominio de bacilos
gramnegativos rectos, extra e intracelulares.
VAGINOSIS BACTERIANA POSIBLEMENTE POR MOBILUNCUS:
- Cuando se observan escasos o ningn bacilo grampositivo y predominio de bacilos
gramnegativos curvos.
117
10.5. DIRECTO DE SECRECIN URETRAL COLOREADO CON GRAM

10.5.1. PROPSITO:
Investigar en una muestra de secrecin uretral coloreada, la presencia de Diplococos gramnegativos
intracelulares (leucocitos) y extracelulares.

Secrecin uretral, tomada si es posible en las primeras horas de la maana antes de que el paciente
haya orinado.

- Aplicador de madera o asa bacteriolgica.
- Papel toalla.
- Gasa.
- Cristal violeta modificado por Hucker.
- Lugol o solucin de Yodo para Gram.
- Alcohol Acetona.
- Safranina.
10.5.4. EQUIPO:
- Microscopio.
118
- Tomar la muestra aplicando una ligera presin en el pene de atrs hacia delante de
manera que salga una gota de pus por el meato, la cual ser recibida en una lmina
portaobjeto.
- Cuando la muestra es demasiada espesa, agregar una gota de solucin salina estril
0.85%.
- Proceder a la elaboracin de frotis y coloracin de Gram como est descrito en los
procedimientos de: Preparacin de un extendido de muestra y Coloracin de Gram de
este manual, pginas 109 112.
- Observar en el microscopio con objetivo de inmersin 100x, la presencia de
Diplococos gramnegativos de forma arrionadas, tanto intracelulares (leucocitos) como
extracelulares.
- Prestar especial atencin a las orillas del frotis donde los elementos se extienden en una
capa ms delgada, son ms fciles de reconocer y la tincin es menos concentrada.
- Reportar lo observado.

- Coloracin o frotis inadecuado.

Reportar de la forma siguiente:
SE OBSERVAN DIPLOCOCOS GRAMNEGATIVOS INTRA Y/O EXTRACELULARES Y LA
PRESENCIA DE POLIMORFONUCLEARES.
- Cuando se observan cocos arrionados en pareja de color rosado.
NO SE OBSERVAN
PREPARACION.
DIPLOCOCOS
GRAMNEGATIVOS
EN
LA
PRESENTE
- Cuando no se observan cocos en pareja de color rosado ni intra ni extracelulares.
119
10.6. DIRECTO PARA CIDO ALCOHOL RESISTENTE (Tuberculosis)

Este procedimiento no se desarrolla en este manual, por existir a nivel nacional la Gua Tcnica
para el Diagnstico de Tuberculosis por Microscopa Directa, Ao 2005, para realizar estos
procedimientos, remitirse a lo contemplado en la mencionada Gua.
120
11. REVISIN Y ACTUALIZACIN
ste manual ser revisado y actualizado al menos cada 5 aos, o antes cuando sea
necesario un cambio en las metodologas. La revisin estar a cargo de un equipo
tcnico multidisciplinario, el cual enriquecer con nuevos aportes e integrar los conocimientos y
experiencias en el rea.
121
12. GLOSARIO DE TRMINOS
Acantocito: Glbulo rojo que posee prominencias puntiagudas.

Aglutinacin:
Agrupamiento de un antgeno en suspensin u otra partcula bacterial con su
anticuerpo especfico que se hace visible mediante el ltex o partculas de carbn o eritrocitos.
Anticoagulante: Sustancia que demora o suprime la coagulacin de la sangre.
Antgeno: Cualquier sustancia inmunizante que habiendo sido inoculado en un organismo de
persona o animal, ocasiona la produccin y liberacin de anticuerpos especficos.
Asepsia: Mtodo de prevenir las infecciones mediante la destruccin de los agentes infectivos.
Basofilia: Consiste en un incremento del valor normal de los basfilos.
Bioseguridad: Es el conjunto de lineamientos y regulaciones para prevenir, eliminar o reducir
cualquier riesgo potencial en las personas, la comunidad y el medio ambiente.
Calibracin: Establecer con exactitud la correspondencia entre las indicaciones de un instrumento
de medida y los valores de la magnitud que se mide con l.
Cardiolipina: Extracto alcohlico de corazn de buey.
Clulas epiteliales: Clulas superficiales que protegen las cavidades internas y la superficie externa
del cuerpo.
Cbalos: Pequea bolas de heces resecas.
Cilindros urinarios: Aglomerados de protenas de estructura tubular que se forman durante las
enfermedades de los tbulos renales, pueden contener en su matriz eritrocitos, otras clulas y
depsitos de sustancias qumicas.
Coagulacin: Proceso de formacin de la sangre en una masa gelatinosa.
Cogulo: La conversin del fibringeno en una red de molculas de fibrina polimerizada, que
transforma la sangre en una masa gelatinosa.
Codocito: Glbulo rojo que presenta condensacin en el centro.
Concentracin: Es la relacin entre la cantidad de soluto y la cantidad de solvente o solucin.
Cristales urinarios: Formas geomtricas de diferentes sustancias qumicas que se cristalizan en la
orina dependiendo del pH de esta.
Densidad ptica: Cantidad de luz absorbida por una sustancia que puede ser medida por un
espectrofotmetro.
122
Densidad: Es la relacin entre la masa y el volumen.

Drepanocito: Glbulo rojo que adopta forma semilunar (falciformes).
EDTA: sales de sodio o potasio del cido etilendiaminotetractico, son poderosos anticoagulantes y
suelen elegirse para el trabajo hematolgico normal.
Eliptocito: Glbulo rojo que tiene forma elptica, es un defecto de membrana.
Ensayo: Experimento.
Enzimas: Catalizadores que modifican la velocidad de una reaccin.
Equinocito: Glbulo rojo fragmentado.
Eritroblasto: Eritrocito joven que an conserva su ncleo.
Eritrocito: Clulas sanguneas de forma discoide, bicncava y elstica que carecen de ncleo y cuya
principal funcin es el transporte de hemoglobina.
Eritropoyesis: Proceso de formacin de los eritrocitos.
Esferocito: Glbulo rojo que tiene forma de esfera, sin palidez en el centro, es un defecto de
membrana.
Esputo: Material eyectado desde los pulmones a la boca.
Estndar: Una solucin patrn que se utiliza para comparar o para la elaboracin de otras
diluciones.
Gramnegativa: Caracterstica de los tejidos o bacterias que pierden la coloracin por el mtodo de
Gram (toman color rosado).
Grampositiva: Caracterstica de los tejido o bacteria que conservan la coloracin por el mtodo de
Gram (toman color azul).
Heces: Mezcla de productos de excrecin y secrecin que se eliminan por el intestino.
Hematocrito: Volumen de glbulos rojos por volumen de sangre, se obtiene mediante la centrifugacin
de sangre venosa o capilar.
Hematologa: Rama de la medicina que estudia la sangre.
Hemoglobina: Componente principal de los glbulos rojos, protena conjugada que sirve de vehculo
para el transporte de oxgeno y bixido de carbono.
Hemlisis: Destruccin de Glbulos Rojos
Hipercroma: Glbulo rojo que se tie ms intensamente, ausencia de palidez central.
123
Hidrlisis: Adicin de agua a una sustancia, con descomposicin de esta en otras ms sencillas.
Hifa: Hongo de estructura larga filamentosa en forma de tubo.
Hiperlipmica: Aumento de la concentracin de lpidos en sangre.
Imprecisin: Mediciones que siendo realizadas en las mismas condiciones dan diferentes
resultados.
Inoculacin: Introduccin de microorganismos, material infecciosos, etc. en un ser vivo o en
cultivos.
Linfocitos: Clulas mononucleadas; con ncleo nico que sirven de defensa, se dividen en Linfocitos
B y Linfocitos T.
Litro: Volumen ocupado por la masa de un kilogramo de agua pura a 4 C.
Longitud de onda: Distancia entre una cresta a otra en el espectro de luz.
Megalocito: Glbulo rojo con tamao mayor de lo normal (15 a 22 micras).
Micelio: Masa de hifas.
Monocito: clula del sistema retculo-endotelial presente en la sangre normal con carcter
fagoctico.
Mononucleares: Leucocito que posee un solo ncleo simple, como el linfocito y el monocito.
Morfologa bacteriana: Forma de los microorganismos.
Neutrfilo: Tipo de leucocito caracterizado por citoplasma granuloso que se tie fcilmente con los
colorantes cidos o bsicos.
Neutropenia: Disminucin del nmero absoluto de neutrfilos por debajo de los valores normales.
Oncosfera: Parte interna del huevo de Taenia la cual contiene el embrin.
Ooquiste: Quiste que contiene el huevo o cigote.
Plaquetas: elementos formes mas pequeos de la sangre, actan en la hemostasia y el mantenimiento
de la integridad vascular, participan en el proceso de coagulacin.
Plaquetopenia: disminucin del nmero de plaquetas por debajo del valor normal.
Plasma: Componente lquido de la sangre que se obtiene al separar una sangre con anticoagulante
del paquete globular, contiene fibringeno y componentes de la coagulacin neutralizados.
Polimorfonucleares: Son leucocitos granulocitos segmentados y se dividen en neutrfilos, eosinfilos
y basfilos.
124
Procedimiento: Serie de pasos en forma cronolgica, por los cuales se logra un resultado
deseado.
Pseudohifas: Hongo de tipo de levadura que presenta una extensin tubular de protoplasma que
difiere de las hifas porque continan con la clula madre.
Quiste: Forma resistente de los protozoos los cuales se rodean de una membrana dura e
impermeable.
Reaccin colorimtrica: Reaccin qumica que tiene como producto final un compuesto de color.
Reaccin enzimtica: Reaccin qumica que tiene por catalizador una enzima.
Reticulocitos: Glbulos rojos juveniles con restos de acido ribonucleico y ribosomas.
Riesgo: Posibilidad o probabilidad de que ocurra un dao a la salud, puede ser causado por
accidente, enfermedades u otros.
Rouleaux: Glbulo rojo que se aglomeran como pilas de monedas.
Secrecin: Sustancia que se vierten al exterior de una clula.
Suero: Componente lquido de la sangre que se obtiene al separar una sangre sin anticoagulante
del paquete globular.
Tipocroma: Glbulo rojo con un halo mayor en el centro que lo normal (baja de hemoglobina).
Trofozoto: Forma vegetativa, libre y en movimiento de los protozoos.
Trombocitopenia: disminucin del nmero de plaquetas circulantes.
Valores de referencia: Valores considerados normales.
125
13. ABREVIATURAS
L: microlitro, millonsima parte de un litro.

dL: decilitro, dcima parte de un litro.
Du: Expresin dbil del Rh negativo.
EDTA: cido etilendiaminotetractico.
gr: gramo, unidad de masa.
mg: miligramo, milsima parte de un gramo.
mL: mililitro, milsima parte de un litro.
mm: milmetro, milsima parte de un metro.
mm: milmetro cbico, millonsima parte de un litro.
nm: nanmetro, unidad de medida lineal = 10-9 metros.
PAM: Prueba de Azul de Metileno.
pH: Es el logaritmo inverso de la concentracin de hidrogeniones, expresada en trminos de
molaridad, determina la acidez o alcalinidad de una sustancia.
rpm: revoluciones por minuto.
RPR: Prueba Rpida de Reaginas.
VDRL: Laboratorio de Referencia de Enfermedades Venreas.
VES: Velocidad de eritrosedimentacin.
126
14. Anexos
127
Anexo 1 Preparacin de Lugol para examen microscpico de heces.
Preparacin:
- Pesar 10 gr de yodo en cristales.
- Pesar 20 gr de yoduro de potasio.
- Mezclar y disolver poco a poco con agua destilada.
- Completar a 1 litro con agua destilada.
- Guardar en garrafa color mbar con nombre y fecha de
preparacin.
Este colorante hace resaltar algunas estructuras, como los ncleos de
los protozoarios y da una coloracin caf a los huevos y larvas de los
metazoarios.
128
Anexo 2 - Parsitos: quistes, formas activas y huevos.
Quiste maduro de E. histolytica con cuatro

ncleos y corpsculos cromatoides; tincin
tricrmica.
Trofozoito de E. histolytica con hemates

ingeridos teidos de rojo; ncleo visible en el
borde inferior; tincin tricrmica.
Trofozoito de E. hartmanni.
Izquierda: tincin tricrmica.
Derecha: hematoxilina-hierro.
Quiste maduro de E. hystolytica en el que

pueden verse tres de los cuatro ncleos y
corpsculos cromatoides, desenfocados
hematoxilina-hierro
Trofozoito de E. histolytica; hematoxilinahierro.
Trofozoito de E. hartmanni (derecha) y de

Iodamoeba butschlii. (izquierda); tincin
tricrmica. Obsrvese la diferencia de
tamao.
Huevos de Ascaris Lumbricoide (arriba),

Trichuris trichiura (centro) y Ancylostoma
(abajo) en el mismo campo microscpico.
Obsrvense las diferencias de tamao.
Los huevos tpicos de Trichuris trichiura

miden 50-55 por 22-24 um, tienen una
cubierta parda y lisa con prominencias
(tapones) bipolares y contienen un ovum
monocelular
En una preparacin de kato-kats, los

huevos de Trichuris
pueden aparecer
hinchados y de mayor tamao, con un
contenido degenerado. Las prominencias
bipolares y las capas de la cubierta no estn
claramente definidas
129
130
Oocisto de C. Parvum; tincin

cido
resistente. Con diversas modificaciones
del mtodo de tincin acidorresistente, los
oocistos pueden pasar de rojo a rosa (como
en este caso)
Tambin se observan grnulos negros.
Oocisto de C. Calletanencys; tincin

acidorresistente. El microorganismo de
la izquierda no se tie mientras que a la
derecha puede verse un tpico oocisto
teido de rojo.
Espora de Encephalitozoon hellem; tincin

de gram.
Estas
esporas
microspordicas
se
encuentran en el sedimento urinario; llama
la atencin un pequeo tamao.
Oocisto de C. Parvum; tincin tricrmica.

Los oosistos no siempre toman la tincin
tricrmica, pero cuando se tien pueden
ser visibles los cuatro esporozoitos, como
sucede en este caso.
Oocistos esporulados y esporosistos de

Sarcocystis Spp. Preparacin en fresco
con Formol. El oocisto de finas paredes
contiene dos esporosistos pero puede
romperse fcilmente por lo que a menudo
se encuentra en las heces esporocistos
libres como sucede en este caso.
Los oocisto de todas las especies de
Sarcocystis son aproximadamente del
mismo tamao
Esporas de un microsporidio intestinal

(Enterocytozoon bieneusi o Septada
intestinalis) en una preparacin de calcoflor
blanco KOH con iluminacin ultravioleta.
El pequeo tamao de ambas especies
impide hacer una identificacin precisa de
esta preparacin.
Los huevos de Ancylostoma presentes en las heces presentan una tpica forma de tonel con
una fina cubierta hialina; miden 60-75 um por 36-40 um. Por lo general, se encuentran en la fase
cuatro o de ocho clulas en las heces frescas o en una fase ms avanzada de divisin en las que
han permanecido a la temperatura ambiente durante algn tiempo, incluso durante horas.
En las preparaciones de katokats, los

huevos de Ancylostoma aparecen a menudo
casi redondos, y es difcil ver el ovum en
divisin. En los climas clido la glicerina
puede acentuar la transparencia de los
huevos y hacerlos invisibles a los 30-60
minutos de la preparacin.
Los huevos de Tricostrngilos son parecidos

a los de Ancylostoma pero mucho mayores
(70-95 um por 40-50 um) y ms alargados.
El ovum se encuentra en una fase avanzada
de divisin cuando se expulsan en las
heces.
La infeccin por Strongyloides Estercoralis

se diagnostican de ordinario por la presencia
en la heces de larvas rabditoides en primera
fase de 180-380 um por 14-20 um. Las
larvas tienen una corta cpsula bucal, una
cola tnue y un prominente primordio genital
(flecha)
Los huevos de Clonorchis sinensis miden

27-35 um por 12-19 um, tienen un oprculo
asentado y, por lo general una pequea
protuberancia en el extremo opuesto. La
cubierta puede llevar adeheridos residuos
de pequeo tamao. Los huevos presentes
en las heces contienen un miracidio. Los
huevos de opisthorchis son anlogos
Otro estrngilo que infecta a las personas,

sobre todo en Africa Meridional, Ternidens
deminutus. Los huevos son parecidos a
los de Ancylostoma y miden unos 85x50
um. Suelen estar en una fase avanzada de
divisin cuando aparecen en las heces.
Los huevos de Metogonimus yokogawa

miden 20-30 um, tienen un oprculo poco
visible, y carecen de protuberancia en
el extremo obopercular. En general, no
presentan restos adheridos en la cubierta.
Los huevos presentes en las heces
contienen miracidio.
Los huevos de Fasciola heptica suelen

medir 130-150 um por 63-90 um y tiene un
oprculo poco visible, no estn embrionados
y a menudo presentan una cubierta irregular
en el extremo obopercular (esto ltimo, no
se observa en los huevos de fasciolopsis
bushi, cuyas caractersticas mofolgicas
son anlogas)
131
Los huevos de Taenia spp son todos

idnticos, presentando un dimetro de 35
um, y una cubierta espesa con paredes de
aspecto prismtico. Cada huevo contiene
un embrin provisto de 6 ganchos: la
oncosfera. A veces puede quedar retenida
entre estos huevos una fina membrana
embrinica primaria de aspecto hialino.
132
Los huevos de Hymenolepis diminuta miden

70-85 um por 60-80 um, son esfricos y
de color pardo amarillento. Cada huevo
contiene un embrin provisto de seis
ganchos. No se observan filamentos, como
en el caso de H. nana.
Los huevos de Hymenolepis nana suelen

ser esfricos, tienen un dimetro de 30-47
um y una fina cubierta hialina y contienen
una oncosfera con seis ganchos. La
membrana que rodea a la oncosfera
presenta dos engrosamientos polares de los
que salen 4-8 filamentos que se prolongan
en el espacio situado entre la oncosfera y la
cubierta exterior.
Anexo 3 Elementos que se pueden encontrar en un sedimento urinario
Oxalato de Calcio
Cristales de cido rico
Cristales de uratos amorfos
Cilindro
133
Anexo 4 Mediciones.
Sistema mtrico decimal: El sistema mtrico decimal, con el cual usted puede estar familiarizado, es
un sistema decimal que tiene relaciones numricas simples entre sus unidades.
Unidades del sistema mtrico: El sistema mtrico incluye medidas de longitud, capacidad y masa. La
unidad bsica de la longitud es el metro (m), de la capacidad es el litro (L) y de la masa el kilogramo
(Kg). Prefijos latinos son usados para identificar valores mltiples descendentes, ejemplo: deci
(0.1), centi (0.01), etc. Prefijos griegos son usados para identificar valores mltiples ascendentes,
ejemplo: deca (10), hecto (100), etc.
Prefijos comunes:

PREFIJO SMBOLO
Tera
T
Giga
G
Mega
M
Kilo
K
Hecto
H
Deca
da
Deci
D
centi
C
Mili
M
micro
nano
N
Pico
P
femto
F
Atto
A
134
FACTOR
10 12
10 9
10 6
10 3
10 2
10 1
10 -1
10 -2
10 -3
10 -6
10 -9
10 -12
10 -15
10 -18
Equivalentes mtricas decimales:

Longitud:
10 milmetros (mm)
100 centmetros
1000 metros
1 centmetro (cm.)
1 metro (m)
1 kilmetro (Km.)
Capacidad:
1000 mililitros
1000 litros
1 litro
1 kilolitro (Kl.)
Masa:
1000 miligramos
1000 gramos
1 gramo (gr.)
1 kilogramo (Kg)
135
Anexo 5 - Diluciones
l acto de diluir es hacer una solucin menos concentrada de una ms

concentrada. Esto generalmente se lleva a cabo agregando un diluyente
como agua, la cual no contiene nada de soluto, a una solucin. Las diluciones
generalmente se expresan como una unidad de la solucin original en un nmero total
de unidades de solucin final. As, una dilucin 1:10, se hace tomando una unidad de la
solucin concentrada que ser diluida a un volumen total de 10 unidades. Esto produce
una solucin que tiene una concentracin igual a 1/10 de la concentracin original.
Aunque las diluciones generalmente se escriben 1:10, 1:50, etc. quiz sera mas fcil
entender si las diluciones se expresaran como fracciones, tal como 1/10, 1/25, etc.
Para calcular la concentracin de solucin diluida, se multiplica la dilucin por la
concentracin de la solucin original.
Ejemplo: Una solucin al 10% se diluye 1: 5, la concentracin de la solucin resultante es
igual a 10% x 1/5 = 2% .
Cualquier expresin de dilucin se puede tratar como una simple fraccin, y el numerador
y el denominador pueden ser multiplicados por un nmero. Ejemplo: si 500 mL de una
dilucin 1:5 de una solucin cualquiera se tiene que preparar, el razonamiento matemtico
es como sigue: 1/1 x 1/5 = 1/5
Grandes diluciones que pueden ser muy difciles de llevar a cabo en una sola operacin
se pueden realizar haciendo ms de una dilucin.
Por ejemplo: no se puede utilizar ms de 10 litros de diluyente para hacer una dilucin de
1:10,000, as como ocupar un frasco volumtrico de 10 litros, o el reducir la cantidad de
solucin concentrada en una fraccin de mL, puede introducir un gran error en la dilucin.
La mejor alternativa es la de usar una serie de dos o mas diluciones. Cualquier nmero de
diluciones diferentes puede usarse, el nico requisito es que cuando estas se multiplican
136
entre si, de una solucin igual a 1:10,000.

La redilucin sistemtica de un lquido un nmero de veces, es llamada dilucin en serie.
Esta se hace cuando una reaccin semicuantitativa se tiene que observar en varias
concentraciones diferentes. Esta metodologa se emplea principalmente en pruebas
serolgicas, y muy raramente en qumica clnica.
137
Anexo 6 Diagrama de elaboracin de un frotis.
Extensor
138
ANEXO 7 - Calibracin de hemoglobina

Ejemplo de calibracin de hemoglobina.
OBSERVACIONES:
La concentracin de la ampolla Standard es 20.8 mg/dL (este dato lo trae anotado cada ampolla
en su etiqueta)
Frmula para sacar el factor
FACTOR =
Standard
Lectura
La dilucin de la sangre es 1/251 por que se toman 0.02 ml de sangre en 5 mL de solucin diluyente
o sea que hay 0.02 ml de sangre en 5.02 de solucin.
0.02 mL de sangre ---------------- 5.02 sangre en solucin diluyente

1mL ---------------- X
X=
1 mL X 5.02 mL
0.02
= 251 factor de dilucin.
Concentracin de la ampolla Standard 20.8 mg/dL (esto viene anotado en la etiqueta)

Factor de dilucin: 251.
Colocar 4 tubos y proceder de la siguiente manera
tubo
estndares
Sol/Hb
lectura
1
5 mL
0 mL
73
2
2.5 mL
2.5 mL
33
3
1.0mL
4.0 mL
14
4*
--------
5.0 mL
0
* Este tubo sirve como blanco.
g%
5.2208
2.6106
1.0441
----
Factor
0.071
0.079
0.074
-------
139
Para encontrar concentracin en g% correspondiente se aplic las siguientes frmulas

1)
20.8 X 251 = 5.2208 g%

1000
2)
5.2208 = 2.6104 g%
2
(porque hay una dilucin 1:2)
3)
5.2208 = 1.044 g%
5
(porque hay una dilucin 1:5)
Estndares
1.
2.
3.
puro
2.5 ml
1.0 ml
Lectura
73
33
14
Concentracin g%
5.2208
2.6104
1.0441
0.071+0.079+0.074 = 0.0746 por aproximacin 0.075 el factor de calibracin.

3
140
Factor
0.071
0.079
0.074
Anexo 8 Cmara Neubauer
Conteo por cuadrantes
Adicionar 0,1 mL
de solucin diluyente
141
Anexo 9 Enfermedades que pueden dar resultados falsos

positivos con pruebas serolgicas para sfilis

INFECCIOSAS
- Mononucleosis infecciosa.
- Hepatitis infecciosa.
- Sarampin.
- Varicela.
- Ricketsia.
- Tifus.
- Micoplasma.
- Neumona primaria atpica.
- Bacterias.
- Lepra.
- Fiebre escarlatina.
- Tuberculosis (avanzada).
- Neumona neumoccica.
- Protozoos.
- Tripanosomiasis.
NO INFECCIOSAS
- Lupus eritematoso.
- Artritis reumatoidea.
- Embarazo.
- Narcoadiccin.
142
Anexo 10 Protocolo de trabajo para pruebas de VIH
REACTIVO
RESPONSABLE:___________________
FECHA DE VENC.:____________
TCNICA:_________________________
LOTE:_______________________
FECHA DE REALIZACIN:___________
MARCA:_____________________
143
Anexo 11 Trichomonas vaginalis.
144
15. BIBLIOGRAFA
Angel G. y Angel M. Interpretacin clnica de laboratorios, quinta edicin, Colombia, 1996.
Botero, D. y Restrepo, M. Parasitosis humanas, Tercera Edicin, Medelln Colombia, 1998.
Instituto Nacional de Salud. Manual de Procedimientos de Laboratorio para el Diagnstico de los
parsitos intestinales del hombre. Tcnica No. 37, Lima, Per 2003.
Kahleen Morrison Treseler. Laboratorio Clnico y pruebas de diagnstico, manual modernos, primera
edicin, Mxico, 1998.
Lynch, M. J. Mtodos de Laboratorio, Segunda Edicin, Ao 1988.
Ministerio de Salud Pblica y Asistencia Social. Coproparasitologa, primera edicin, El Salvador,
ao 1995.
Ministerio de Salud Pblica y Asistencia Social. Gua Tcnica para el Diagnstico de la Tuberculosis
por Microscopa Directa, Segunda Edicin, El Salvador, 2005.
Ministerio de Salud Pblica y Asistencia Social. Manual de Bioseguridad de los Laboratorios Clnicos,
segunda edicin, El Salvador, 2005.
Ministerio de Salud Pblica y Asistencia Social. Manual de Serologa e Inmunologa, El Salvador,
2000.
Ministerio de Salud Pblica y Asistencia Social. Manual para control de calidad en los laboratorios
VIH, Primera Edicin, El Salvador, 2005.
Organizacin Panamericana de la Salud. Manual de Tcnicas bsicas para un laboratorio de salud,
segunda edicin, ao 1983.
Ruiz Torres. Diccionario de Trminos Mdicos, Sptima Edicin, Ao 1992.
Tood Sanford & Savid Sohn. El Laboratorio en el diagnostico clnico, primera edicin, 2006.
145

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AUTORIDADES DEL MINISTERIO DE SALUD

DR. JOS GUILLERMO MAZA BRIZUELA

Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin

Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin

Jefe Laboratorio Central Dr. Max Bloch

Lic. Patricia Lissette Mira Gmez

Sub-Jefe, Laboratorio Central Dr. Max Bloch

Lic. Ana Vilma Guevara de Aguilar

Jefe rea Clnica, Laboratorio Central Dr. Max

Lic. Blanca Sonia Velsquez de Prez

Coordinadora de Gestin de la Calidad,

Lic. Ana Telma Mndez de Pineda

Coordinadora rea Inmunohematologa,

Lic. Ana Vilma de Vsquez

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Jefe Seccin de Bacteriologa, Laboratorio

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Jefe Seccin de Qumica Cnica, Laboratorio

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Jefe Seccin Malaria y Serologa e

Lic. Jssica Carolina de Rivera

Profesional de Laboratorio Clnico, Laboratorio

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Supervisora de Laboratorios de la Regin

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Supervisora de Laboratorios de la Regin

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Supervisor de Laboratorios de la Regin

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Supervisora de Laboratorios de la Regin

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Supervisora de Laboratorios de la Regin

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Jefe de Laboratorio de la Unidad de Salud

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Jefe de Laboratorio de la Unidad de Salud El

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Jefe de Laboratorio de la Unidad de Salud

Profesionales de Laboratorio Clnico y

Unidades de Salud del primer nivel de

Coordinadora de Gestin de la Calidad,

Colaborador Tcnico, Direccin de Regulacin

Coordinador Centro de Cmputo, Laboratorio

Manual de Procedimientos Tcnicos de Laboratorio Clnico del Primer Nivel de Atencin

Red de Laboratorios Clnicos de Regin Occidental:

U/S Candelaria Frontera

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U/S Casa del Nio

Lic. Ena Elizabeth Alfaro de Ochoa

Tc.Luis Alberto Hernndez

Tc .Luisa Beatriz Castro Santamara

Tc. Oscar Oswaldo Aviles

U/S Santa Brbara

Lic. Alma Carpio de Rivas

U./S. San Rafael

Lic .Emma Victoria Campos