Tincin de Ziehl Neelsen

La tincin de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una tcnica de tincin diferencial

rpida y econmica, para la identificacin de microorganismos patgenos, por
ejemplo M. tuberculosis.
Fue descrita por primera vez por dos mdicos alemanes, Franz Ziehl (1859 a
1926), un bacterilogo y Friedrich Neelsen (1854 to 1894), un patlogo.
1.- Fundamento
Este mtodo se basa en que las paredes celulares de ciertos parsitos y
bacterias contienen cido graso|cidos grasos (por ejemplo, el cido miclico)
de cadena larga (50 a 90 tomos de carbono) que les confieren la propiedad de
resistir la decoloracin con alcohol-cido, despus de la tincin con colorantes
bsicos. Por esto se denominan cido-alcohol resistencia|bacilos cido-alcohol
resistentes o BAAR. Las Mycobacterium|micobacterias como Mycobacterium
tuberculosis|M. tuberculosis y Mycobacterium marinum|M. marinum y los
parsitos coco (bacteria)|coccdeos como Cryptosporidium se caracterizan por
sus propiedades de cido-alcohol resistencia. La coloracin clsica de ZiehlNeelsen requiere calentamiento para que el colorante atraviese la pared
bacteriana que contiene ceras.
2.- Tcnica
Esta tcnica puede realizarse tanto en muestras histolgicas como citolgicas.
2.1 - Variante histolgica
Para demostrar la presencia de BAAR en cortes de tejido en parafina. Los
reactivos necesarios para su realizacin son los siguientes:
cido peridico 5%
Carbol fucsina de Ziehl (fucsina fenicada). Preparar mezclando en el
orden dado:
a) 0,5 g fucsina bsica
b) 50 cc agua destilada
c) 5 cc etanol absoluto
d) 2,5 g cristales de fenol derretidos
Hematoxilina
Alcohol cido 1%:
a) Alcohol de 70
b) cido clorhdrico
El procedimiento es el siguiente:
Desparafinar e hidratar los cortes
cido peridico 5%, 10 min
Lavar con agua destilada
Fucsina fenicada, 15 min
Decolorar en alcohol cido al 1%
Lavar con agua destilada
Hematoxilina, 10 min
Azulidificar con, por ejemplo, carbonato de litio
Deshidratar, aclarar y montar preparaciones

2.2 - Resultados
BAAR: rojo.
Ncleos: azul.
2.3 - Variante clsica o "en caliente"
sta y la siguiente variantes son para preparaciones citolgicas.
1) Hacer un frotis de la muestra de esputo.
I. La fijacin al calor asegurar de que el frotis quede adherido al
portaobjetos. Un frotis muy delgado puede darle resultados
falsamente negativos y un frotis muy grueso puede desprenderse
del portaobjetos durante la tincin.
II. Utilizando pinzas, coloque los portaobjetos en una gradilla de
tincin con los extendidos hacia arriba. Coloque todos los
portaobjetos orientados uniformemente, con el frotis hacia arriba.
Nunca tia ms de 12 portaobjetos a la vez.
2) Dejar el frotis sobre el puente de tincin.
3) Aplicar fucsina-fenicada.
III. Deje que el colorante permanezca sobre los portaobjetos durante 5
minutos. Mantenga el calor durante este perodo.
4) Calentar con un mechero hasta la emisin de vapores (3-5 minutos).
I. Se requiere el tiempo adecuado para que la fucsina fenicada
penetre y tia la pared celular de la bacteria. No deje que hierva o
se seque el colorante.
II. Lave suavemente el colorante de cada portaobjetos con agua
corriente fra hasta que toda la tincin libre quede lavada. Lave
suavemente de manera que el extendido no se barra del
portaobjetos. Retire el exceso de agua.
5) Decolorar con alcohol-cido.
III. Cubra cada portaobjetos con la solucin decolorante, tal como
alcohol cido y mantngalo sobre el portaobjetos durante 3
minutos. Si no se decolora suficientemente, el contenido del esputo
que no son bacilos TBC puede permanecer teido. Enjuague con
agua una vez ms los portaobjetos y quite el exceso de agua. Si los
portaobjetos an estn rosa, aplique una cantidad adicional de la
solucin decolorante de 1 a 3 minutos.
6) Aplicar azul de metileno (1 minuto).
I. Aplique la solucin de contraste, azul de metileno, durante 1
minuto.
7) Enjuagar con agua
I. Vuelva a enjuagar con un leve chorro de agua e incline cada
portaobjetos hasta drenar el exceso de agua. Finalmente, coloque
cada portaobjetos en una gradilla a que sequen al aire.
II. Ahora coloquele una pequeita gota de aceite de inmersin y haga
la observacin al microscopio con 10 x 100

2.4 - En "fro"
o Hacer un frotis.
o Dejarlo en el puente de tincin.
o Aplicar fucsina-fenicada (solucin con fenol y mayor concentracin de
fucsina).
o Dejar en vasos coplin durante 20 minutos.
o Decolorar con alcohol acido.
o Lavar con agua del grifo.
o Contrastar con azul de metileno
2.5 - Algunos microorganismos cido-alcohol resistentes
Mycobacterium: fuertemente cido-alcohol resistente.
Nocardia y Actinomices: dbilmente cido-alcohol resistente.
Parsitos coccdeos (Cryptosporidium) de muestras [fecales].