DETERMINACIN DE CAFENA EN UNA BEBIDA ENERGIZANTE

(MONSTER ENERGY) POR CROMATOGRAFIA HPLC

RESUMEN
El presente laboratorio tiene como objetivo principal determinar la
concentracin de cafena en una bebida energizante (MONSTER
ENERGY) mediante el rea de la seal cromatografca. Para ello se
realiz una curva de calibracin inyectando en el HPLC muestras de
cafena de concentraciones conocidas
PALABRAS
CLAVES:
concentracin.

cromatografa

HPLC,

cafena,

rea,

ABSTRACT:
This lab's main objective is to determine the concentration of caffeine
in an energy drink (MONSTER ENERGY) by chromatographic signal
area. This was achieved by injecting a calibration curve in the HPLC
samples of known concentrations of caffeine

KEYWORDS: HPLC, caffeine, area, concentration

INTRODUCCION
El HPLC (HIGH PERFORMANCE LIQUID CROMATOGRAPHY) o
Cromatografa liquida de alta resolucin, es una tcnica
cromatogrfica usada para separar componentes usando una
variedad de interacciones qumicas entre el analito y la columna
cromatogrfica.
Bsicamente es un sistema compuesto de un reservorio de fase
mvil, bomba, inyector, columna de separacin y detector. El analito
se pasa a travs de una columna de la fase estacionaria bombeando
la fase mvil liquida con alta presin. La muestra se introduce en
pequeos volmenes a la corriente de la fase mvil y all se retarda
por medio de interacciones qumicas con la fase estacionaria mientras
atraviesa la columna. El retardo se conoce como tiempo de retencin,
nico para analito. Depende de la naturaleza del analito, de la fase
estacionaria y de la composicin de la fase mvil. Los solutos ms

comunes usados en la fase mvil son combinaciones de agua

purificada con lquidos orgnicos, los ms comunes son Metanol y
Acetonitrilo, tambin suelen usarse sales y bufferes para contribuir a
la separacin de componentes. Tambin se usa el cido
Trifluoroacetico para actuar como formador de pares inicos. Estas
combinaciones introducen el concepto de gradiente de elucin.
Consiste en la variacin de la composicin de la fase mvil, para
adaptarse a los diferentes analitos y conseguir mejores resultados. El
gradiente separa la matriz del analito en funcin de la afinidad del
analito por la composicin de la fase mvil. Cada analito tiene un
gradiente de elucin ptimo para obtener la mxima separacin de
picos en el detector. [1]
Se consideran dentro del grupo de productos estimulantes o fruitivos
principalmente a aquellos tales como el caf, el t, el cacao, sus
derivados y la yerba mate, incluyndose tambin a otros como el
guaran y la cola, actualmente estn comercializndose las llamadas
bebidas energizantes.
Estos productos con excepcin del cacao y sus derivados no tienen
valor alimenticio y se consumen slo por las propiedades de ser
bebidas estimulantes y en algunos casos refrescantes. Poseen ciertas
caractersticas en comn, son productos naturales (sin considerar las
bebidas energizantes) que han sido tratados por calor para adquirir
aromas caractersticos y contienen alcaloides tales como cafena
(1,3,7-trimetilxantina) y teobromina (3,7-dimetilxantina). El contenido
de cafena es utilizado para evaluar la calidad de productos tales
como caf, t, cacao.

Estructura qumica de la cafena (1,3,7-trimetilxantina)

La cafena estimula el sistema nervioso central y el msculo cardaco
y relaja el msculo liso, especialmente la fibra muscular bronquial, y
acta sobre el rin causando diuresis. La cafena tambin provoca
un ligero aumento de la tasa del metabolismo basal e incrementa la
capacidad para el esfuerzo muscular. Ejerce un efecto fortalecedor y
estimulante sobre diversas funciones como la resistencia fsica, el
trabajo individual o el manejo de equipos cuando estas funciones se

ven disminuidas por efecto de la fatiga. La dosis considerada como

teraputica de cafena para un adulto es de aproximadamente 180
mg. La cafena se ha asociado con la hiperactividad en nios causada
por el consumo de bebidas que la contienen.
Para determinar el contenido de cafena existen procedimientos
clsicos que por lo general se basan en una extraccin seguida de la
determinacin de nitrgeno por Kjeldahl; tambin es posible realizar
la medida espectrofotomtrica UV. Los mtodos modernos se basan
en separaciones cromatogrficas entre los que tiene especial
relevancia la cromatografa lquida de alta performance (HPLC). [2]
.
METODOLOGIA
En la parte experimental se utiliz distintas soluciones a diferentes
concentraciones (0, 10, 20, 30, 40, 50 y 100 ppm) de cafena y luego
se inyectaron en el HPLC para obtener la curva de calibracin
absoluta.
Inicialmente se tomaron 3ml de la muestra, seguidamente se agita
constantemente hasta desgasificar. Luego se completa a volumen de
25ml con una solucin de 80: 20; (Agua HPLC y etanol).
Seguidamente, se lleva al ultrasonido durante 15 minutos.
Posteriormente se inyecta la fase mvil al cromatografa para evitar
interferencias y finalmente se toma una alcuota de 15 L de muestra
y se inyecta al cromatografa HPLC

RESULTADOS Y ANALISIS
En primera instancia, se procede a realizar la curva de calibracin
para lo cual se tienen en cuenta las concentraciones patrn
Tabla N01: Datos curva de calibracin patrn cafena
concentra
cin ppm
0
10
20
30
40
50
100

rea
0
591990
641765
930582
1135890
1405082
2927006

Grafica N01: Curva de calibracin patrn cafena

Una vez realizada la curva de calibracin de la cafena, se reemplaza

el rea obtenida en la muestra (

Clculos:
Teniendo en cuenta la curva de calibracin y la lectura de la dilucion
correspondiente de la muestra, el resultado final se expresa en g de
cafena por 100 g de producto, segn la legislacin vigente.
A=axc+b
Ecuacin de la curva de calibracin
A = rea
c = concentracin de cafena de la solucin inyectada (mg/l)
a = pendiente de la curva de calibracin
b = ordenada al origen de la curva de calibracin

Despejando tenemos que:

Por lo tanto:

25, 84 ppm

=3,10 ppm cafena

Por ende:

V = volumen final de la solucin

f = factor correccin de volumen de acuerdo a las diluciones
realizadas
m = masa o volumen inicial del producto analizado (segn Tabla

Este estudio describe la cuantificacin de cafena presente en la

bebida energizante MONSTER ENERGY de 473 ml de contenido;
analizado por HPLC. La longitud de UV-Vis se fij a 254 nm para
cafena. Bajo las condiciones de HPLC utilizadas obtuvo un tiempo de
retencin para la cafena de 0,5341 min. La identificacin de los picos
de cafena se logr por comparacin de tiempos de retencin con
patrones cafena.

El anlisis por HPLC es muy usado y ampliamente respaldado, de

modo que entrega valores slidos y confiables, por lo cual los errores
estn directamente relacionados con la manipulacin, preparacin e
inyeccin de las muestras, debido a esto es que para entregar un
anlisis optimo es que se deben realizar varias inyecciones de las
muestras y obtener valores de un mismo rango para asegurar un
resultado reproducible.
La concentracin de cafena
en la bebida energizante
fue
determinada con base a las diluciones realizadas para preparar
patrones y utilizando la curva de calibracin estndar de cafena
(r2= 0.9972, grafica 1).

CONCLUSIONES:
Las bebida energizante tambin contienen otras sustancias estimulantes como
guaran. Los efectos del guaran son similares a los de la cafena, pero su
duracin es mayor debido a su contenido de taninos y saponinas. Adems,
estas bebidas contienen carnitina, la cual se afirma que ayuda a quemar grasa
y a levantar el nimo. Sin embargo, no hay suficiente evidencia para
respaldarlo. [3]
La cantidad de cafena que contiene el envase de la bebida energizante no es
excesiva; el problema es que hay otros ingredientes que potencializan su
accin, ya sea aumentando su cantidad o prolongando sus efectos. El consumo
de este tipo de bebidas debe ser moderado y nicamente en los casos
necesarios. No se deben tomar como refresco debido a los efectos nocivos que
pudieran tener en tu salud. Segn un estudio publicado en la revista Clinical
Pediatric Emergency Medicine en marzo del 2008, se ha reportado un caso de
infarto al corazn debido al consumo excesivo de cafena. En casos ms
leves, los efectos secundarios de estas bebidas son: [3]

Nusea

Irritabilidad

Palpitaciones

Insomnio

Sueo interrumpido

Irritacin del esfago y/o estmago

Cambios en la presin arterial

Hipertermia (mucho calor)

Taquicardia (palpitaciones rpidas del corazn)

El consumo exagerado de bebidas energticas es daino para la salud.

Teniendo en cuenta que la cafena produce efectos txicos a partir de los 240
miligramos, deber evaluarse la ingesta de sta considerando el contenido en
el resto de los alimentos. Por ejemplo una persona que consume en el da: 1
taza de caf (150 mg.) + una lata de bebida cola (35 mg.) + una tableta de
chocolate (30 mg.) + una taza de t (30 mg.). El resultado de esta suma es 245
mg., por tanto se pasara el lmite de consumo y no se podran consumir
bebidas energizantes. [4]
El contenido de alguno de estos productos puede producir absorcin ineficiente
de los fluidos y nutrientes desde el intestino, con la posibilidad de producir
distress gastrointestinal. . [4]
Con respecto a la composicin nutricional no vara demasiado entre las
distintas bebidas energizantes existentes en el mercado. [4]
Comparando con segn los requisitos fisicoqumicos de las bebidas
energizantes para consumo humano segn la resolucin 4150 de 2009 se
obtiene que el contenido permitido es de 32 mg [5]

La cuantificacin de cafena en la bebida energizante fue posible determinarla

en las condiciones probadas, en tiempos cortos, con una buena resolucin,
precisin y exactitud. El HPLC es uno de los mtodos analticos ms usados en
la industria farmacutica por lo que el uso y manejo de los estudiantes les abre

BIBLIOGRAFIA
[1] GMEZ-ULLATE; SERRANO LVAREZ. Cromatografa principios y
aplicaciones
[En
lnea]:

http://es.scribd.com/doc/11642417/Cromatografia-Fundamentos-yAplicaciones

[2] Departamento de Qumica Orgnica-Area Bromatologa Facultad

de Ciencias Exactas y Naturales
Universidad de BuenosAaires
Trabajos
prcticos-laboratorio
[En
linea]:
http://www.qo.fcen.uba.ar/Cursos/TecnoIII/guia.pdf

[3] Lo que debes saber de las bebidas energizantes [En linea]:

http://www.midieta.com/es/las-dietas/lo-que-debes-saber-de-lasbebidas-energizantes

[4]
Bebidas
energizantes:
beneficio
o
perjuicio
[En
linea]:
http://www.alimentacion.org.ar/index.php?
option=com_content&view=article&id=1247:bebidas-energizantes-beneficio-operjucio&catid=41:salud-nutricional&Itemid=60
[5] RESOLUCIN 4150 DE 2009 [En lnea]:
http://www.invima.gov.co/Invima/normatividad/docs_alimentos/RESOLUCION
%204150%20DE%202009.pdf