Mtodos de aislamiento

Mtodos de aislamiento
Tcnicas de Aislamiento de hongos y
Aislamiento de hongos y bacterias

bacterias fitopatgenas.
Aislamiento de flora epiftica, de suelo,

rizosfera.
Fundamentos, aislamientos directos e

Unidad de Fitopatologa
Dto. de Proteccin Vegetal
Facultad de Agronoma.

indirectos.

Dr. Pedro Mondino

Uso de medios selectivos.

Uso de cebos.

24 de abril al 5 de mayo de 2012

Aislamiento a partir de tejido vegetal

A partir del tejido vegetal enfermo es posible

aislar a los patgenos.

Se busca tomar trozos de la zona de avance
para incrementar las chances de aislar al
patgeno.
Los trozos de tejido vegetal se someten a una
desinfeccin superficial.
En el caso de bacterias es posible macerar un
trozo de tejido afectado y luego sembrar

Aislamiento a partir de trozos de tejido

vegetal
Trozos de tejido afectado de la zona de avance son

sembrados en medio de cultivo (ej. Madera)

Mtodos de aislamiento
Sembrando trozos de tejido vegetal de la zona de

avance del patgeno .

Ej: a partir de frutos afectados

Aislamiento a partir de tejido vegetal

Sembrando trozos de tejido vegetal de la zona de

avance del patgeno .

Bistur

Zona de avance

Hipoclorito 1%
Siembra en placa

Pinza
Agua estril

Aislamiento de bacteria a partir del

tejido infectado
Tocando con el ansa en la zona de avance

de la infeccin es posible aislar la bacteria.

Aislamiento directo a partir del signo.

Cuando la muestra vegetal presenta signo es

posible tomar una pequea porcin del

mismo y sembrar en una placa con medio de
cultivo.

Aislamiento de bacterias por macerado

del tejido vegetal
El tejido afectado es macerado en mortero y

luego el macerado es estriado en placa.

Aislamiento directo a partir del signo.

Cuando la muestra vegetal presenta signo es posible
tomar una pequea porcin del mismo y sembrar en
una placa con medio de cultivo.

Aislamiento directo a partir del signo.

Aislamiento directo a partir del signo.

Cuando la muestra vegetal presenta signo es

Cuando la muestra vegetal presenta signo es posible

posible tomar una pequea porcin del mismo y

sembrar en una placa con medio de cultivo.

tomar una pequea porcin del mismo y sembrar en

una placa con medio de cultivo.

Aislamiento directo de zooglea

Aislamiento a partir del exudado

bacteriano
Un trozo de tallo de una planta afectada vascularmente es

colocado en agua en recipiente con agua o saline esteril.

Ansa

Flujo bacteriano
en agua estril

Induccin del signo

La aparicin de signo puede ser inducida mediante

cmara hmeda.

Uso de cebos
Trozos de manzana verde son utilizados para

capturar Phytophthora spp del suelo.

Estriado en placa

Induccin del signo

La aparicin de signo puede ser inducida

mediante cmara hmeda.

Uso de cebos
Cebos utilizados para aislar Pythium:
ptalos de clavel (Dianthus caryophyllus L.)
Caamones (Cannabis sativa L.) hervidos.
Trozos de zanahoria (Daucus carota L.)
Papa (Solanunt tuberosum L.) + agar-agua.
Trozos de tomate verde (Lycopersicon esculentum L)
Acculas de pino (Pinus spp.).

Colonizadores de patgenos

Colonizadores de esclerotos

Se pueden encontrar antagonistas colonizando

naturalmente a los patgenos de plantas.

Se pueden utilizar a los patgenos como cebo

para capturar a sus antagonistas.

Aislamiento a partir de la flora

epiftica del fruto

Aislamiento de microorganismos del

suelo
La muestra de suelo se suspende en agua estril.
Se hacen diluciones 10-1 a 10-10 veces.
De cada dilucin se siembran por extensin dos

placas con 100 L (0.1 ml) en medios de cultivo

(dependiendo del tipo de microorganismos que
queramos aislar) y luego se incuban.
Se aslan colonias separadas de distinta morfologa y

se purifican mediante repiques.

Aislamiento de microorganismos del

suelo

Microorganismos rizofricos.
Microorganismos aislados de la rizosfera de

Esquema de la metodologa utilizada para aislar a partir

plantas de tomate.

de suelo.

Cultivos puros
para obtener un cultivo puro se debe inocular o

introducir, una sola clula o propgulo de un

microorganismo en un medio slido o lquido,
esterilizado previamente.

Mtodos de aislamiento
Para aislar clulas individuales, los

microorganismos han de ser diluidos, debido

al gran numero en que normalmente estn
presentes.
La dilucin se realiza, normalmente, por uno
de los siguientes sistemas:

Mtodo de extensin en placa

Para que se pueda contar el nmero de

siembra por estra en placa

vertido en placa
extensin en placa.

Mtodo de estriado en placa

Esquema prctico del aislamiento de bacterias

colonias en la placa debe estar entre 30 y

300.

Colonias aisladas

Mtodo de extensin en placa

A partir de una suspensin concentrada de

microorganismos se realizan diluciones

seriadas.

Mtodo de extensin en placa

0,1 ml de la solucin se siembra en superficie y

se esparce mediante rastrillo de vidrio.

Aislamiento de bacterias

Mtodo de extensin en placa

Aislamiento por estriado

0,1 ml de la solucin se siembra en superficie

y se esparce mediante rastrillo de vidrio.

Mtodo de vertido en placa

Cultivos monospricos

0,1 ml de la solucin se siembra en superficie

Para asegurarnos la homogeneidad gentica de un

y se esparce mediante rastrillo de vidrio.

cultivo de hongos se recurre a la tcnica de cultivo a

partir de una nica espora.
Los cultivos monospricos se pueden realizar:

Cultivos monospricos

sembrando en superficie una suspensin de esporas

y luego observando bajo lupa o microscopio repicar.
Sembrando diluciones de forma que crezcan colonias
aisladas.mm

Metodologa

Monospricos de Venturia inaequalis.

Metodologa

Cultivo a partir de punta de hifa

Monospricos a partir de colonias aisladas de una

Cuando no es posible disponer de esporas

siembra de una suspensin diluida.

se puede recurrir al cultivo de punta de hifa