TEXTO flUSTRlBO DI

Biologa Molecular
e Ingeniera Gentica
Concenos. Tcnicas y Apl icacion(:S
en Cienci.1s de la Salud
TEXTO ILUSTRAD O DE
Biologa Molecular
e Ingeniera Gentica
Conceptos, Tcnicas y Aplicaciones
en Ciencias de la Salud
Jos Luque Cabrera
Catedrti('tl de Universidad
Angel Herrez Snchez
Proflsor TiiUiar dC' UniveNidad
Ocpanamcntv tk Bic.J.qumka y Biologa Molecular
Universidad de Alcal.i
AlcJij de llenares. Miidl'it.l
GLSE.VIER
\ 111\lnd 8fi1\JCIVna Atlb4fnlam l ~ t l l l l Fi la.leiiM
I..Qml:l:" C)rl.lndO ~ Rwm Sydne} T)).:i< Tcorun1n
ELSEVIER
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A nuestros alumnos, Inspiradores de <Hite estucrz.o.
A nuestros compaeros profesores,
Montse, Cristina. Jos Carlos,
Pilar y Ana, por su confianza y apoyo continuos.
A nuestras familias y amigos, por su comprensin
y por el tJempo que han cedido.
Prlogo
En la Preseotaclon de e<ste libro. QUe tengo el honor e prO!oJar, bs c1rman que prelenden reunw
cep!os actuales de ta Blo4ogla Molecular y las modemas metodologias de la lngenleria Gentica con \1Sta& a su apkactn
a la Pa10109la MQiecu\a.r, human<1 y li'W"al, en 514 divettOos ou;peciQI'; eti()IQg:it', fisiopa!Qiogi.-. (l!agn$lti;Q PI'Qt'f;boo,
\Ora?utiea y preVGnO!On do toltl'f'l'IO&k<Je$, y pr()IYIQCi()(l cte: ltl salVO Y pretenaen (fe$(Se una
e dif9a, tuncsatncnlalmerue. a lOS estudiatltes qve cursan las llecnOifi.IUtas de Faunacla,
Modieinl), y Veletlnarla, y 18$ orlen1aoooes blosanll.atfas de Biologa. Bloquimtca '1 Oumca. Se Ita la, sin dv-
(1() , dO IJt1t\ e<npresa l.at\ \' ambkx:l6a, como y dHicit Peto, a la VIsta del resutUI aleanZaao, puede
ofitmt'rGO que: .. ew:ito M Sido tolat
La elaboracin 00 un texto de m9nciol'adas 9$ oportuna '1 nece<saria. En los Uhimos deGenio&, la
Blolog1a ha t.n pt000$0 de progresrva 'moleculanlacn' qoo ha a un nuevo p.mu;ltgma blol-
gioo QVa trato t ontond41'r k.> qvo $0 1\3 <lonomin&oo '1.3 dv (F J.oeob. 1970) <>IN motoMI IOQie 01
<he IIVU'IQ state (A. l. LEM!nger. "Biochemistry", las bases moleculares sul1yacentes a los procesos biolgfoos El
de$ci1ramento c;lel gen<>m3 00 diV91$0$ OIQar.$niQ$, y mvy O$I)OQ;;t!rnon1c da! gonorn.'\ humano_ constituye una
que M <le halar w oonunuldBd en el no n"'e((OSirnportante estudio de aos proteomas. Sigutel'ldO los
pasos de la Slologla. la Medclna y fa Ve1erlnana estn experimentando un proceso de ''tnolecu!arlzacln creciente que
ha ttecho emerger la que se ha flam&do Patologia Molecular. Hoy en dia. el rwvel molewlat no es soto un rwel de in
vesttgadon biomdica. sino t8ITiblOO un nivel de acumcin diagnsuca, pronstlca y teraputiCa. Por ello. es !mptesdn
dlble preparar adecuadamente a bs hJturos proJe&IOflales de la salud, ya que. slo s disponemos de profesiOnaleS
oompetootes podremos ha<:er treme oon l01o a los retos deoJ futuro. 8 ejerCICIO de los anos venideros exglr
oompeleflCm para abordar a niVE!I moCecular los prob'ema& de la salud. Por elo. harn falla protesiona!es que poseen lOs
ooncoptos y los do l(ltlgu;,Je molcc!Aar p."'ra oompronder la& ba$$5 moleculares de la salud y la en
termeclad. Protes1ona1es <le a<lqu,rir con$tantemetttC ta in!Ofm&en necmn<.'l p0ro :;u com
petencla, y de aplleat diCha lr'lf.Orm3Cf(ll'l a lll $01uein de 108 problemas QUIO les <::onoeman_ con
do aviOC'IptCI'ICiiUI!* o.a.r<l StAti1uir IO$<::OI'ICOI)IOS caducO$ >Of 10$ nuevos. hacieodo uso de todas las posi
bilidades Que tas m()defflas toetlQiogfas oc ta il'lfQn'na(in t1 su ale31'1e0 P<ua ktiQrmaQf'l bilseca t tale& pro-
tesiooales l!enel'l gran vatOt tos tex!Oe que: resumetl toa nuevos elemenl<lS de tas flnt3$ de la Slolo-
gia un1o a las oonesporeflleS tfCr.cas y metOOOiogas; ya que t:)efmuen que estudian1e eaquier3 ufl..'l base $(11idn
a pa111r de la cual podr ampliar bs acudtendo, luego. a las monograllas especa!ilada$, a las fevsiQr\0$
o. lf'ICiuso. a 106 a.nicutos orignWes. Por lodo eto. y pot abarcar un campo hasta ahOra insunclentemen.te cub1e11o. con
S.dMIMO$ QVO la JQ:s l.oot.lo y ngel Hlvrilez tespcnOO a una neoet;ldact urgente e wnponante.
NIOta bien. como hemos indicado, ia emptesa no era naoa lli'leil. Y no 10 a po( su catactet de ()brll 1)6&.ea, dirigi
da a e5tudiantes de "'anal> y. por taniO, con fotmacio dtvefsa, y por su oe seguir un
do los ternas integral y los autores Integrar lo conceptual, lo teci'IOk>gloo y lO aPliCado, abor
dando to esoocial y rechazando. en roos de la daridad. Jo complejo y no bfen es.tab\eoeiCio. Es 0$10S obie
INOS reQI..M.Itian, PQI parte de los atllores, lanto un oonocrn!entoprotundo yaciJJa!lzado c;liWtt$(1$ tomM tr;.tados co
mo conocirr.eo amplio y completo de tos contet>os de la e.oq..,1m1ca y B10tog1a Motea.Mr. y un conoci"*"o do
lOS contenidO$ rormaliVO$ de las diversas hcenaatu1as: a la VE"Z que una gran capaclao Oldclica. Sin Ol.l:ftl. la
prolol'lg!WiA e inten$a d&dieaort do lo.$ autQft$ oa tea dioooncia urwer&ltana ha Sido un factor dOOSI'/0 para CUif'tW'Ial con
JCAo la BCOmectda. El oe ttt\bbjo 5e9Jid para 1a elaboracin del teXIo. e<sde la recogida de la inb
macln lno.aJ a la (eviSlOf'l: l'inal de Cllda cap(!ulo, ftl cuonr ll'l; obt;orv<aciof'IK y sugerencias de toe ptOfesore$.
especli&lista.&, dOCiorando& e a"tCiuso estudiantes de llcenclatwa que lo Nlt anRIIUIOO, tl;'l oonlriblf!OO, !amblen s.n
a 11'.1 4'm;:Gfencm ele la labol roo'il:ada, Excelencta acrecen4aa por el&::et1adO vi$ool quo se ha hecho de la in
f0fm3<:in prosonlod<t
El'l re$Url'len. el "Tcucto lfuSirado d& Biologfa Molecular e lngenlerfa de lOs ProtHOrC$ JO$!) y n
gell'ietrleZ C$ una Obr'& ai'I'Qciosa. muy bien reallza.da y Que ha de sef de gran utlrdad pata la fOt'l"naeil'llonto oe ta om-
plia gama eJe et!udian!e$ 3 Quifne$ va como de los prole6Kirulles de la salUd que oesee-n aetu31iZtlf $U$
conoe#n1en1os en li'\Ode los campos mas lrni)Or!MtO$ dt ta biomecicina. Es por- lodo elb. que ha SI paf6 mi IM'I
hOncx y una satlsfacon nx:Sacltll 0$13$ lineas oomo Prologo.
PAOF. JOSE CAAREAA$
U!i!VERSIOAO OE BAf\CELOtl4
OtctEUGAE 2000
Presentacin
OBJETIVO
LOS 3v3JIICC$ y ili)IICo'(:iOI'Ie$ de 13 inves1lgac::Ic'l bloquiiTIICa y genbca ocupan hoy dia una poSicin pnvleglada en
el e:u'l"fX> <:le las CienciaS de fa salud en general y en la Farmaaa y &ome6cina en parbcular. Se vi&tumbra en loo albores
del SJgiO XXI una tendencia hacia el erlfoque molerulat de la enfermedad, oomo referen10 ll1mo en la in!etpre13CI6n d9
lOS pr"OCeSOspat<liOgtOOS y como de nlH.Mls di;t,gn3tJc$$ y lcr\'tpuhc:b$ b\l$lldo:'l$ en dichO$ &v81'100$
Pota d<lr a t:Sta Slluacin se requiere U!\8. adecuada preparaCiOC'I uf\1\'erSitana, k) que ,._.suflca el desano-.
lo de1 presente pro19CIO un libro de etO que f.a(llile .la &dqul!liCitl oe una forrnaciOn oS(Ca en et area de
f.l'l. enfOQUe est1\IC1ural y lndlm.enslonal del matenal gE!(ltico y de los gniros, asi oomo en la In
gen.ierla Ge-n-Uea. et1 un s:emldo amp10 18 mocifiCae)n de dicno material en beneficio dE't la 6atOO o oe la tecnoe:: P01
su glllll slgnl!lcado y su potencial futuro. esw cbclplina.& ya se (tl'l5ef\an, CQtl mavor o menor pra!undidad, en las liovn-
clatutaa con responsabilidad dfrea o en la sanidad {Farmacaa, Med,ON. y BIOiogia,
y Ou1mlca) y en detemunadas d!plomatt.ras (Enfermeria y Con el fin de contribuir a esta
<:i(ln, $e oropone ul'l enfOQue adaptado a la realidad, aseQUible a todo e&t alumnacb. QU8' pueda fecilnar el proc.eso de
e:nseflanza y aprendtzaje de tan y noveclosa.s malefas en un tea de conoctmento en wntinua elQ)aflSIn.
li ENTO
Para oat cumpllmiento a este objell'o'O, el libro se plantea bapo una lnple verJ!ente.
Conceptos
la Vilnrcdad y p&ft!Cularidao&s del al eve v (llrigl(j& la 1,11'1 OSPectal Oti lO$
tundarTMJntos. COmut'lO$ ()(Ira !OCios S. con avnQtJe con 01 ngor CIOI'I(jliC:O eJCigidO hoy di<t. lns bolsos
torlc:as irnproscil'll1b.\O$ para la matOO!I y CIC$MOIIar y Ocn1tllt:l o pro!C$tOf\)ltnOn!e lll too-
nologlt' dcriv.a(ffl eoneeptos. se un llbi'Ovalido para cooOO&f' de IOJma adecuada y SV!u::ien'e la
MoiOOI.I.af e lngonieria $in toncr Q1.0 a l)l'ltl. o-coSi'va, y a veQH
Aspectos tcnicos
La metOCJOtogia deftllada O& ra BIOIOgia MOieetMr. y eo espeCia! ae 1a tngenierla Gen&-11ca (iniCialmente !itM&CJa a
la tecnologfa del ONA teoomblnaote). se ha ex.lendie-Jldo con a !lnes IT'AI)' d.\ersos (als&amienco_
hiDhGtacion, secuenaadon, ele.}. para dar lugar a. una 8iotecn010gls tm'l!no que eo Cierto 1'1"1000 pootia ub
!Izarse como aJiemaliva a lngt/e(fa GeMtielt et1 el lib10. De ah1 Que, bajo un P\.IMO oe '1418 IOdnt\lwo. n00$1.10
segundo objetiVO consista en esWOiar tos principios de Jos m&lodos y ccr11ca:s mas comunes. aqullos de 1'1\a.yor ttnl)a(tO
y U!!l+dad en la -'YeStt9'1-Cin bsca y en ellaboratOOo d(Nco. La de9Crlpd00 y aplicacin concrew ae las tec--
no)glcas. metodolgicas o nstrumenta!es. cada vez m-s dNerc..as y en rnodiicadon constante, debe soer relegada w-a
tos periodos oo doclorado o de especaallzac!n profesional en reas dellaboralorlo dinlco. entte ottas, prloclplOO'Ience M
Aoisis C,inicos o en Bicquimica ctinica y Pa!ologia Motecula!.
Aplicaciones biosnnitari as
La a.ok>g;la Molecula e lngeoieoria Getkl!ciea h8 OOMribuiO a lf':SOivet prOl*!tntt$ de lnv$\IJ<:II (Ohm!naQf\
de x.enobihcos o tesldoos), agricola y ganadero (meJOC'a gentiCa y aimeniO$ lrMsgnico;). tias en Far
maoa. Modiooa y Vetennalia, que se centran en la lucha oonua ta f!fllermeded runaoo y anlmal ((l'liOIQgf:l, 1)3!QgOI'Ii&,
tratamranto y prevenon) y en la &lnte&t& <S& mo6oculas con l!nes terapvlloos. ya han rendlclo sus pNmeros
lMOG. extraordinariO avance ha d!lOO 1uga1 a una ser;e ce lfm.oos QtJe, en Qe!tCJ'81 ncluyon tf proJio tJ(Q. o el ad-
,otivo mofOCVIat. Como 1Presefl4al!vo e 40dos ellos se aoep4a hOy el ttm!no Blomecllclna o MeOcna c;Oc'l>-
siderado de una torma amplia como una 'ViSin molecular' de \Odas tos aspeS relacionadOS eoo la enU.l!medad
CARACTERSTICAS
Trotaml(mto Integral v multidi&eipllnar
Se na. btJ9C8do integrar las tenieas con 10$ (:O(Icq>!Ot. abofdando lo esenoal y salvo
excei)CtCW'IEis, lo cof'I'IJ)Iejo o no bien estabteciOo, relaCionandO cacta nuevA iNormae-n <:Qn lo d$c::vlido en ()(ros temas y
con bs mbitos bioqulm.oo. genelioo. quimtoo. fslologlco. anatrtlco, e1e. Asi 10 sugiere kt insuhciente o de&pfopotaena
xu
da preparacu)n re<:lb!da el'/ ocasiones por el alufl'WIO en matet'laa bralcas preVas, la InClusin de la Blologfa e
lngernetra Genetica dentro de una disciplina de Bioqulnvca Genera!. w lmpart:cln en programas vat1ado6. en cursos dis.-
tinto6, con un numero llmilado do crdhos doc:ren:95. eet: Se ha lnten&ado propoccionar al libro un derto carc!
outnomo. al ri!Jno, nivel y s!tvecill de cada estudio patticolar. Ello no ob6ta. muy al oonuano, para que deba
seguir ffeOmMddndoS4 lo oonstlla di) la bibiografia espttcifk:a y. sobre todo. do lO$ excelentes llbtos de texto
hQy dia, oon un abaNeo y tr:Uai'IW:1o de tos tema; difetente$ n1.1ostro,
Di seo visual
Como aspecto ms elgnlllcawo. y para facl!tat la caracterlstica aotenor, el !lbro &e apoya en un tratamiento lli8ual,
original, oon proluan e esquemas y figura& Pftldoi'IW\al'ldo &Obfe un te.xto lo ms dato y sencillo po&bkt. Como con
las ilustraciones deben considerarse parte lfltegrame del le lOO por ro qU&, en contraste oon lo no son
aladas en ste n tlen$n \oW1 pie o tiUo de$<:rip1ivo, E16eclor debe aCOG1umbrNW a. eJO'amkw la figura cuando llegue a ella,
la PO:sioiOn de $Ct\ etn la Qf oO:Jcl1rnente qvo re OORe$pOf\<le on lo lectura (salvo contada& ex
debid3$ 31 t3mat\O de la figura. Pi)r ocra pane, se hace un oso extensiw> del COIOf, no $010 p::trO! aumontat el
:wacuw dO las i!u!ltraeiones. sino para inrOMCin: por el Ollf!MO <lb.llaCJo y et te,xto a l
companen color. Los <fibufO$ ton Otiglrude$ en su conoepcln y pretenden la lntetpreta('j()n de
que reaul!an a veces complicadas o tedoaas. o de lOs dibujos 'f esquemas de ottoe autofes. Se pef9i9ue un
cataclerln:Uitlvo. que t.clllfe te comprensin y mowe al alumno al estudio detenido oe la matena. al tiempo que enriquece
la exposac:ln. Serta dese&Die as.1e esfuetzo ptdefa servir para vencer la resistencia actual del alumnado a la con
tk.lfta y corwaste de las fuentes tibllograflcas. peta ocwwe.ncerlo de iO anti!KWers!lsrto del uso Indiscriminado e 1os
apunle$, propios o ajenos. oomo I'llca fuenle de Wormacin. Como es;imtAo adicional a esta enfoque. ta Editooal tam
bln ha ttatado de lograr m precio universitario.
Termtnologla
Se hanlirMado la& palabras y .sus oxot$ivatnen!O ilor<'ltS, ompleandO 10$ trmlnos Ga$10113
nos wds.tentes. A. pesar de ello. la dOfOcin d M <1t 13 equrvarenOia 1ng1osa, CUIU'I($I) 6sta O$ de
uso muy extendido en las fuentes bibliogr;Jflcas y, especiBnen!e, ci.IM<b petmite 10$ acrnimO$, A eS4o
respecto, hemos. dooidido utiiz.ar o.x.ttu:swAmOI'IIW lo$ a.crnimos ingle$9$, .VJO $U u$10 en toda labibliOgr.tlia y en
el Sertguaje cientlfioo hablado; nos parooe. I)Or titmP'O. betle escasa utlllda que .. alumno conozca la RCP', cuan
do en todos los. :)'lornos en que te pueoa movef en et tuwro se enconttar ooo la 'PCA'. Como oonse
cuencaa ms llrunatrva o. G$'10 criterio. lo$ 6cldo$ nuelcieo$ 1'10 se llaman ADN y AAN, SinO ONA. y ANA.
E.nfoque a organi smos eucarlotas
Nuestro tratamiento de la ma1eraa uende a reooge:r et mximo de inlormacin posible, aun dispersa y t$CC'!Sil en
ottas !uentee. relatfYa a mamlfel06 y a humanos en particutar. S9 pOc' qetnplo, quo dobo p(:lntt$0
ms. OOfaSIS en el cromosoma l"oumano y sus a!l0t8Ci00et: Que en el de accin de tas ONA de
Esdlerichia <OH. Obvlam(ll'ltO, no $4 rCI'\Uf'lda a 18 QfBn riqueza oe COIM)Cimlentos aleaMada en procariotas '1 Vln..s. sobre
lodo Qlando Nl.al os para comf)(ender ptocesos &eocos o de inters analitlco en eucaotas.
Orlentacl n
El se deSanola pensando en las orientacion&S bi0$31'1il6tia$ que J)OSiblement.e mas reqW!(en del
conOC*'niO'IO de los concepcos y tecnlcas de la BfotogM: Molecular e avnquo, dados au amplitud y
su turufo, en el presente lillt'o 90io pueden ap.ntarse las bases mlnlma$ necC$;arias para $u Por vn l&QO,
el diCtgnstico m01ecul6.r, ya de U90 casi ru!lnano en los modemos laboratorios dinicOf par<&. pof ejemplo, la preven
eir1 prenatal. 1tt idenbllcadr't de Individuos ooo fines lorenses, etc. Oobo. no que no se !tata de un
libro de Pal06ogla Molecular, sino un uooo bsico sobre lO$ OOtiiT'Iitneos neoeosarlos pata abotdar prooeeos palotglcos.
Por otra parte. la ter apla moltec:\IIOir. o tralmionlo cte fulufo de ta en!ermedad basado en los avances. sobre moditicac:in
gene!lca de la'!l clula$ 96ftea}. el ooox:lmlentodelgenoma humano (genmlca) y, tMu 'o1go $u relaCIOI'I
oon la lunctOClalidad do tu P")4tfnas
Desarrollo del libro
EJ mtodo de trabafo :se ha ba$ado una tola! COeSi))f''88bSdad y ooottlnaan ele ambo& autotes a lo largr> ero
511 oonsm..eein (en su ms esuiero en varias etapas ;ati tuWs det su ge$taei00. se ha pet
!Ido< tOCit\ 1a lntonnacln recogida prevlameme. oon fines dootontos. etc innumerableS ruentes (telrtos. libros especial
teviSiooes. artfcuoe origloo\ls, notas por50nal05. o!JC.). Cada tema, t...a vez tedaccada su primera versin. en oca
siof'oeos a f)."lt1!1 \10 en grupo con estuciantes. se tadai)I lnOOtJ)O(ando las figuras originales elaboradas para 13
OC3$in e Incluyendo en ellas ta informacin po$bhJ a eqei'ISA$ del teklO. En una segunda pa. dicho lr.lbt.,io IIG
h{lvls.o pedaggica y caentific<lrnet\'lo. potta lt\tlOt de rev19fn, observactonee nftlciosas y criticas rig\lrO$a$
por andguos alumnos, oclMI!IdO$. y prole510fl.'llo$. Por oJo, OQtl
nuesuo profundo agraoocmlonto fos n()ITI()ros do estas personas aparecen ciUKkJ6 en la otlta
Revisin y asesoramiento
Revisores
Nos es grato hacer mencion oe1 esfuerzo generoso reatlzado pot' las pec"90na9 que han remado temas concre-;os
libro, en algt.nO de tos motnentos de su elaboracin. A pesar de eMa OO!.abcM'aelon.la responsabilidad de los P<>Sbles
etrO.<l$ e$ SOlO nue91ta.
Miguel Aguil01r Urbano
Protesoc Asoaado.
Opto. Sxlquimic.1 v Biologiil
Univtrsid:ad Cle Crctob3
fTflfflM 12 )' r$)
Franc::iseo Javlet lvar ez Pachn
Doe'!Or trt 11\Cbstr'la latr'MCtJiica
AJc:)!
(TemtJ 15)
Eduardo Arma Forreiro
Cate<*'tiCO, I)pto, Bioquimica y BiolOgill Molecular
Universidad de Aical
(Tema 1)
M Oolores de Arri;J.ga G!n4tr
Protewil Tcu\ar, Opto e.o<wimic:<t y BOIOgitl MOIOO!Mt
UnivetSidad de Ltn
2. 3 y 16/
Mflogros e.,nostcrot Gont-'Jet
Pro!e50'a TittAa.r.
Opto. Aflnti1ica o lngcnioria Olllmic.
UniV9ftidlrd d Alea!:\
(Tetn H )
M" Cat men Boyano Adnez.
Profesora TtAat fmerlna,
Op!o. BJoqulmica V 8i01ogia M<l'ac:ulaf
Univer&rdad de A\calli
(Tftm8.5 12 y r6)
Xot6 R. 8utt91o
Ciontifi.;.o (Afuro do del CnOOf
UnivetsidOO do Sflit.nmca - CSIC
(T""" 30)
Cllmcnt RoJTKO
Cated't<O, Op4o, CienciQ:& Fi&dgtca$ 1
Univet$1dad do Baroelona
(iema r3J
u Dolores Delgado Vinar
Profesora TiMar, Oplo. 81ologia MOfecdar
UnfYemdad de Canrabria
(iemas8 y9J
Jos Cark>s Diez Ballesteros
Profesor Titular, Opio. Boqu(mlca yetologia Molecular
Urwer&tdad d& Alcaia
{Tema 7)
Isabel Fabtegat ROn'ICfO
Pro&e$0r>a
Opto. BtoQui mlca y &ologfa MOieO!Aat u
Universtdad Comp!uoonse de Madrid
(T ema.s 20 21 y 26)
Mu g;,ti'll Fornbndez: do C3stro
Prolesor.'l Titc.A:l r,
Opto. y MOitcvltu 11
Unlvtt"Sid310 ComplvlcnM de MoCiritl
(TcMW 20. 21 y 26}
M Oolon:ts FcrnndQ Moreno
PtoiOSOf'<) Titvtru, Opto BiOQumica v 8iologia Moleculal
UniV91$idad <14
rrem 4)
Esther FfHret Cebt lln
Profesora nUJiar. Opto. Ceh.W y Genbett
Universidad de Aleal
(Temas 17 y lB}
At acell F'omlnaya vage
ProfaSOf8 Titular, Opto &otogla Celvlar y Genel.iCa
UnivetSidad de Alc:a!
(Tqn!iJ$ 17 y 18}
Luis Franco Vera
Catedrtico. Dplo. SIOQu!rTIICS y B10logfa Molecular
Univer5tdad de Vale.ncl&
(Tema t9)
X..Wicr Fuentes Ar dc:criv
Strvieio CIQ; e.oq .
Ciudad Sanitaria y OnivCr$1l3rl8 de Bollvi
Hospitalel oe U01.'1Jega1
(Temas 28 y29)
J-uan Pedro Gard a Ballesta
Ptoiesor Cle Jnve61lgacin.
Cen11o de Moleeulat "Se...ero Qoho.aK
Autnoma de Madnd- CS!C
(Tema23J
Ana 1. Garcia Prez
Pfo4esora Tltutat. OpiO. S!oqulmlea y Biologfa Mott:eut.ar
Universldad de Akala
(Tema31
l.&arina Garin Ferrelr a
Investigadora po6doctotal. Opt Haetnatotogy,
tmpqrial Co!!ege Schod of Meoctrcne
Hospital, l.Ondre&
(Tema 221
XIV
Luis A.. GonzJez Guijarro
Pt-oCew Tit!A31, Opto. vS!OI(lga Mofular
Univet$idad de Abl
(T.,., 5)
Jos6 M. de Bultrago
Cateorlluc:o. BloqulmiCa y Blolog!a Molecular
y JefQ de Seccin de Un!vei'SICallo
UolveNcW! de Satarnat)tG
(Tnas28y29)
Pilar lnielta CAno
Profesora TIIular.
Opio, BOQulmica y B1olog!a Molecular 11
Untverstdad de Madnd
(Temas 20. 2t y 26)
Antonio Jlmnez Ru
Profesor Tllular. Opto 8ioquim1Ca y Biologl<\ MOIOQ,jar
Urwer&ldad de Alcala.
(TM?a6)
U" c,rmen Lastra Gonz,le%
ProfNOra Trlular,
Op$0 Oufrrnca Analitica e l ngerrieri;;
lfflersidad de Alca&
(Te!T/8 11)
Javlet Len Serrano
QliOdrUOO. Opto. BiOIOQia MOleCular
Ut'IYersidad dt C&nlabria
(TOI1M$ 8 y 9)
Juan Lpez Bar ea
ca!edruoo. Opto. Boqojmica y Btologfa Molecuta.r
de Crdoba
(1emas5y6)
Jos M'" Uacarulla Greole$
Caledruoo. Opto. &oqutmica y &elogia Mdecula.r
Utlivorsidad def Pal's vasco
(Tem., 121
lt41fcodes M;utln t.t.'lrqufMZ
Prole$0r& nu,llar, OpiO. Blologfa Veoetal
Uni\'Ot&ldad dl:t Alc:aili
( TMm21)
rno:z Blnnco
Profesora TTiutar. OtAo Sioqvlmiea y BloiOgla Molecular
O. ln
2, 3 y t6)
W Begoi'la Martfnez Jatrela
Profesora Trtular. labotatooo do Forense,
Opto. Aflatomla Metlldn3 l.t98l y Forense

U!WYerSK!ad do
(Tema B)
UMtfnez serrano
TII\llat.
Cenlro de 81ologfa MOlecular "SevetO Ocht
AulnOtna de Madnd - CSIC
(Tems51
Miguel Medl na Tortes
Protesor Titular. Opto. MoiOCvlar y &oqulmlea
Univers.:lad de Ml<tQ(l
(Temot 3())
Jess Mendleta Gmez
QOtltrJtat'JO. CfntrO <kl Bio!OQia Molecular
sevctO OChOa: y Opto
CStC y Uf'ri.vorsidad do AIC316
(Temas 6 y J4)
Jul io Mon1oya Villa.roya
Pro1e90f Tllular.
Opto. y Biologa Motecutar y CelWt
Unlvett>lclad de Zaragoza
(Tema t9)
.SOrge Mooknol Sanz
Ldo. en Slologia y Tcnico de Cltomstria.
Opto. Medicina
Univenlad de Abl
(T l1fflil , )
Fel1pe Moreno Herrero
Jefe de la Unidad de Gentica Molerular
Ho$f)ital Aamn y Cajal, M01drid
(Tt;trlt 10)
, . T Clf'Ma: Mui o Blanco
Prole&Ofa TttiAar.
Opto, Bioqu.imiea y Biologi;.1 Molac:utar y c.kllar
do za,il9Qla
rr- tt
Oliva VlrgiU
SotviC:iO <te Gcn61iea
Hospital C11nlco, Saroelona
(Temas 17y tB)
FIMI Or1e0ft Orti!. de Apod&ea
ProfesO( TittAat,
Opto. Ouimlca Anallttca e k'lgenteria OuJmica
Urnversdad de AJca\
(femtl , 1)
ACI.SCIO llblttos
PtoleS(lr
OpiO 81oqu!'1mca y BioiOgfa Molecular y Ceb.Jiar
UniverstOO<J ele
(Tf!ffl41$ 1, JO y t8)
lu1s del Peso Ovale
Investigador det ServiCIO de lnmloll"'ddg::a
Hospital Univer&i\ai'IO de la
(TOfiV 13)
Pedro Pi&clril& Montilt.
Investigador Conltatado de Aein(:IOfJ)Ot<1c>tl.
Opto Bioquimic.. y 8ioiOQiiil MOIOC\Aft.r
Universidad de Crdoba
(Tems.s J2 y 15)
Manuel Pineda Prie90
Proie&Of Titular, Opto. y BiioiOOa Mok!euiAI
llniYef&idad de CfdOb
(TfJfflll.$ 12 y 15}
MontserrtJI Pi nin 84rr11u
Proteson'l Tllular. Opto. B>qu/m1ca y Bdogia Motecular


Atfredo Prieto Martin
ProleSOf Asociado. Opto. Medicina
Umotersldacl de Alcal
(Tema"'
Puebla J1mnez
Ptolesom Tltu\;u tnterlna.
Opto. S!OqU"l mlca y 8101ogfa Moeecutar
Unwetsidad de AlCal
{Tema 16)
Carmen P\IQ:yo d" '"' Cucttlt
OPio. y BiOIOOIB Molecular
de COfC!Oba
(Tema 25)
Juan A.. PulidO MOfa
Doctor en CJeocias Biolgica& y
Supe.rviSOt de lns.talaclones. Aadiacuvas
(T(IIn;l$ 16 y 24)
ngel Regleto Chilln
ProleG Tilultu, BIOQuimtC<I: y Siologite
Uniwmidad do Len
(Tqmas 2. 3 y J6)
Eduardo Reye& Mar1i n
Profew- ASQCiado. Opto Medicln<'l
Univertidad de
{T4mil 11)
Nieve-s Henche
ProleSO(S Tttular lntoona.
Opto. y Bdogia Moiecula.r
Ut'IIV&f'$idad d& Alcaf
(TQm:t 16)
Jos Cario& Rodri.guez Rey
Profesor ntulaf, Op1o. Biokgia Molecular, l.lnidad
ASOCiada al Centro de lnvesllgacte:nts Biolgicas
diJ Cllnt8,bri.1 -
(TQtn;J 15}
l. OOIOfU Romn C:ur10
Profesora Tttular, Opio. Bioquirr.ca y Bologt'a Molecular
Universidad de Alcal
(Tema 3)
Alumnos de licenciatura y de doctorado
Bar1olom Sabater Garcia
Cate<*tUico. Opto. 81ol0g!tl Vegetal
Un1vc-1$idad do Alcl\!j
{T6ma21)
Franc:i.s<:a Snchez Jiminez
XV
Prolescxa Tl&:ular. Opto. &ologia Motecutar y
Universidad de Mlaga
(Tema 30)
Jos s.inc:hezPriet()
Prolesor T1tulaf,
Opio. BloQulmica y 91ologt'a Molecuat rv
Universidad Complutense do Mad1id
(Temas 20. 2J y 26)
Pilar Sanc:ho lpez
ProleSa Tllt.llaf, Opto. Stoqutmica y Siologt'a Motecular
Uf!IWM'Sh:Sad Cle Aleala
( Tema2)
Juan Saus M.s
ltlvesf19adof Jefe del Opto. Pa!oiOgla Mote<:Uat
Fvndai>On vatoneiana Biomdica$.
lnsllhllo de Cifdgrcas. Valenaa
(Tema 13)
Joaquin Soler ,..ed1na
ProfeSO! Tllular, Opco. y BIOloga Moleculal
UM.ersdad de len
2. 3 y 16)
a.t" Cristi n.a Tejedor Gmartfn
Prolesora Trtular, ep.o. y Blologa
Un1Y81'$idad de Alcafa
( Temas 5 y ZZ)
MJguel ngel Trueba Conde
Profe901 T'llular. O,Xo. BIOQUl m.ca y &ologt.a Moleculac
OCf P3is
( T9ma 12)
Varios len'la$ se como !rulo dof tr.Jb<'lio gr14 ton h.1mnos. a l)altn del evrto t99719a AJgonOJ de ellos
han r\risado con especial dediCIICi(ln 1em3s <I'ICretos.
Gema Alonso Poves
LlcenCia<la
Paloma calleja Lampatero
tnrmatuliea
Susana Cantero Blanco
LicenelOOa. residente hOsp!lalana
Diana de Crdoba del Campo
LicenCiada. n1JW1a larmacevbca
1J)
Mon1ea farto Pareoes
Bec:ana ptedoctoral
Raquel Fuentes lrlgoyen
ucenctaca. tesieloote llOSplla!arla
Fuentes Rus
ucenCiada
Raquel O;ivila
bcanci&dt'l' industria tarmaoullc:a
(Tettl8 t4)
Ctolla Garcta UOteno
Lioencit't.<:
C.at los David Gea Mnctez
Licencl3<):)
ffanel seo Javier Gondlez Cappa
LicenCiado
( TemtJ:t 8 y 9)
Gonz.iiln Oi u
Liccn01.8d:l
T tre&.a GoozaJo L<izar o
Eltalumna
Marta Herrtuu 8etr6n
Llcencaada
Maria Jlmnez Hetnhdez
l teendada
Jos AntonJo Jotdn Hernndel
Ooe1or. profesor de enseflan:za !100\M<Iatla
XVI
Cfrl'nt'n Lltano Vaquero
OOCiora; industria
Luis AHredo LOIOt'O r.ta.rtln
cenaado; IOdUSITia farmacutica:
Luisa Panas
IOveEifl9iO'Ml posdoctorBI
Antonio Jos Osorlo
Uccnoado; ll'ldustri& fttrm:u:6u!ic.a
l.tat.eiU NUM:t
Secaria prodoctoral
(Tema "1
Elena Mollino Centeno

Juan CaiiOS Murciano Fcm&nctez
lnvesligador
M l nmacut.a<:ta Navarro PGrot
liCenciada
Gemma Olmos Centenera
Barla l)fe<IOCIOr31
Stlt a Otti.z Gatrudo
l,jcneiada: !l'l(lustria ttumaoeutica
M T erua Pfte.z Mafoto

Francisco Javi.flf RIVeto Vilches
Becaoo predOCioral
(Temu 6. n y 121
Otros agradecimientos
Helena Rodero Torres
UOMCiada: indl,.l$lria l{rmoo::v!ic&
fitima Rodrig!Jel: Barrios
8ccana prOOociiOrat
(TO(rl{ls H y 18)
Al icia Rodrigt.N!"tBobada Jlmnez
Ex-afunma
Joa A.lbOrto Rojo Lpoz
Llc:onclado

Sara <MI AO$al MonecltWo
Uoenciada
Ana Maria Snchez: de Abajo
Ex-alumna
Berta s.'inc-he:r. d$ Juan
EJClhJrM<I
Rosa Snehez Sinchez
Ucen01ada: 1'\duS!ria farmaootlca
Sitvit S3nz Mortltilla
Ooelora; farmacutica eitvlor
Omar Sharal Ordez
Eatumno
tt1" ng.Mes Vlllar
Becarla predoct0011l
(Temas 6. r r y J2)
Rocfr(gucz
Ellti!Umtta
TM;<> al lfllefo como dutante el deSM'ollodM libro, drversas per&Oflas han mostrado su apoyo V I)Olrticipado QQI'I c:o-
tnerl!atios.. M!lcas, sugeu.mclaa af 1emarlo y al planleamlento gkal. p0r b Que talrtli6n Querell\00 eKpre$lrlo$ f'IIA$lf0
gmtitvd:
vU.a de Grado (Maarlcl), Jos A. Cabeus Femindctl del Campo (Sal<ti'NIIlC3), JoM C;arreras
Antonio casas Mote'.M (Madr\d), Jos A. Cebrln PWez (Zaragou), Cristina OIJ!gado MontN (Looctres),
Eduilrdo Grela Peregrin Gtanada), ngel GJmnez Sofves (Madrid), Niocolils Jo1.1v deo lo! (Aie31 <1t
HOI'IatO$), Manuel J . Lpez Prez (Zaragoza J. Jos Manu.l Luque Pinillill {Madl'id), lg.nM:io NUI\u: de Cll.ttto (MAJa
g;o), Manuel Ortega MalA (Madrid). Jacinto Pinilla Barrau {Zaragoza), Pedro Rondlt4S Rabinal (Zaragoza), VIcente
Rublo Zamora (Valenaa) y Enrique Viflar !Adnml (S&tamMC$).
Agradecemos a Espaa, S.A .. en la persona de su droctor.'l edl\oriJI, MariJ JOS
Gme:t. so con!IMU en este y su empeo en que el libro haya salido adolan4e: con Joda; sus
te<:nicas.
'
lndice
I' REI.I<\ 11'1.-\ HES
PrJQgo IX
Pre&enlac:in XI
Revisin y xm
Tem<J 1:
Introduccin y gencrf'OS en euc:ariotat t
Trans"*Sin de ta .mormacln genlica 1
El ONA como genllco: AMecedentee 2
Caractetistical5 g9norotcs del ()etloma S
Teme 2:
Componentes de los cidos
nuc:lckos 9
Componenle Cido Fosta1os 9
Componente neulto; AzUcares \ 1
COmpol'lel'lte bSieo: Bases nluogenadas 2
Tema 3:
Nucle&ldos y nuc:letidos 19
Esttuctura ele ntldesielos 1g
E$truc:turo de nuc:lelidos 2.3

Estructura prima.ria de <1c:idos nuc::leic:O& 31
Asp&elos geoorales 31
primaria 32
Formas de representacin lineal 32
Dos tiPOS de cidos noclelcos segun
SU (X)mPQSICiOn 33
Propeda.dea #!slooqufmicas efe los odo6
nucleicos 34
Tcmll 5:
Estructura secundaria del 8-0NA 37
Proporeln ae bases nitrogenadas:
R<lgl_,$ <le CMrg;.'IN 38
Modelo de Wa1son y Cric;lt' forma B del ONA 39
Tcm;a6:
Variaciones en 101 del ONA 51
en dobfe hebra: formas A y Z 52
Vartantes lOCales de ta esttUctura secund$rla
dol 8-0NA 5&
Motl\'OS o:slruc;tvfale$ resPOnst'b19$ 00 la urnn
001 ONA con proteina.s 60
Tema 7:
EstiVC'tura.s de oren de DNA y ANA 65
del ONA 66
E-struci!Jra de loe RNA.s 69
Los f'l:lOSOmas 79
Tema 8:
ConctensaclOn del OHA y cromosomas 83
Cof'!Ciensacln d$.1 ONA M euca.no4a& &3
Esrudio del cromosoma me-tarasico 88
Do1ac10o genuca en eucanot:as 93
Terna 9:
Ciclo c:etul a:r 97
II'IU(>(IUOCIM 97
t.a CIOO'Ifttitla en 13 interfase 98
OIVISil'l <k OMtJI8S $(W'l'u11!leas pot mUOSI!S 99
D!YiiSin oe ce!Uias germ1na1es primarias
1>01 meiQs;i$ 99
Unin 00 10$ wmnw.
ta 1 06
Resumen inl.eQiado 106
10:
Orgt'ni z<'ciOn del genom<J c:uc.:<triOtico 107
Complejidad del genoma eucaribco 101
ONA do copia Urw:.a. si"'Pie o no repetrlivo 108
ONA repeb1ivo 109
Estudio eliP8fl!Tief'Cal de la complejidad en el gef'IO!fla
de eucanotas 11 S
Tema 11:
Pre-parac&n de mues1ras.. extracciOn y anlisis
de ticidos n ucleicos 117
ObtenOOn y preparacin ptelimnar de
!as muestras 119
Disociacin 00 la muestra tiSUlar 122
Separac10n de clulas 122
Carac1enzacWn ootutar y medidas
de viabilla<:l 129
Lt$i$ de 1M clula& 132
Prep.voa,c:i" do l\Uboefvl<lJO$ 133
atlidOna!as o col'll)lementanos 133
ti,eiOO$ por solubilidad
o" faS<t511'lmi$Qble& 134
Puf'lilcadOn de cidOs nueleioos poc pfeo()l,l\dn
salina dr!ereooal 135
Aecogoa y oonseNadn de
las mues1ras 135
Procedimientos ahema:ivoe: extmcoon o anaJas1s
det ONA 135
Fr;)CCionamienlo da cicbs nucleicos 136
XVIII
11. TRAK.S:'\IISIN DE I.A IN"FORMACIN GEN"tTICA RLAC10NADAS
Tema 12:
RepUcacln del ONA 141
Caracteuslieas generaf,es d& la teQ!ieacln 141
EnllmologM. de la repfie&ein t45
Etapas en el prooe$0 de teplleaein 150
AepUcacJon m!IOOOitd'lal 160
Tema 13:
t-ll bfldacln de cido& fuodamenlo y
mitodo dCI ensayo t63
lntroduoeln: OesnaWr'aliz.acin y renaturaizacln
detONA 163
Anlisis moiEIC\Uf de ta hibridacin de CJdos
nucleiCO$ 16'1
Metodos de ensa)'OS de hlbtldacln 169

y de sonda& pa111
hfbridad o 175
Proparaon de $01'1dt\& genticas 175
Marcaje de las soncia.s 180
Temn 15
Ck>n.aei6n acel ut.ar: Reocci6n en cadena de la.
pOilimet asa ( PCR) 187
tniJO(h,tCX:Il'l 9CI(I<Itl'l1. fa eb'ISOI()rl 187
in wro <Jel ONA: Reaeein trt c:ad&f'la
<M 13 poin'lerasa o PCA 188
Tema t 6:
Cfon<tcin cel ular: Tecnotog:ta del ONA
recornbln.a:nte 197
En:bf'l"'as de teslcci6f\ 197
oel.f#r <tt mot6evlas c1o DNA 203
G9notoca& 215
Tema 17
Gtomlca. Obtoneln de los map.;t.& gentico
y fiai co del ganoma 217
ltUroducdn 217
Mapas genelloos 218
Mt'IP.,"'$ fisiO:O$ 221
Tema 18
Sclcuem.iacin ct.f gcmoma v Proyectos
Genoma 231
lnttOOJoeiOn 231
MiOOO c;uimico <fit seeliOneaOI'l del DNA 23t
Mtodo enzlmlito dCJ secveroacin
del ONA 235
Secuenclaan del RNA 238
Proyocto GCI'IomA Humoano (PGHt <:aractOfl&ticas
l)$tntllll0$ 239
Otros proyectos de &ec:uenooc:in del genoma
humano 240
Geomlca comparauva 241
19:
Ul. (;t,."'ti <.:A
Tema 22:
T ranscd pcln 243
lntrOCIIJC:I>6n: COtl(ltl)40$ genetales 243
Enzimologla de !a lr.lnscPQOn Mec<ln!Smo do l:t
reaccin ANA pollmerasa 246
en euearlotas: d!lerenclas oon
Pf0C41101U 2SO
Etapas en el prOCG$0 CIO 252
transcripdn del genoma mii<XlCWc;tr,looll ?57
de la lranseupclon 258
Tema
Control de l.a e..:pre:sin g6nlea: precranserfpd onaJ
y lt en&eripcklnal 261
tntroduccin general a la ogulacin eJe la 4txpr0$i6n
gnica 261
263
Aegd.aelon gentica de la transcripcin 264
69igenti1Ca 271
Tema 21:
Mad(.ltacln del RHA o
potr an&cr lpdooal 27$
illlrodUCCIn 275
Caracterl!Wcas Clfereocales
de 1a maduraeion 276
Prooesamlento del FI.NA rmmsnj6to 2n
Prooesamtenlo de lo& ANA& tlbo&mlco y
dO ttansletooc:ia. 282
ANA 284
POOtr.ln&erlpQOni"tl y pr(tlrBCII,ICdonai de
la expresin gnlea 284
El cdigo genttico 287
Atuecedentss V propiedacles geootalee del
cdigo 287
Asignacin de a aminoAciCioe
(;(lntrtiQ$ 289
Modele)$ de 293
eSJ)OC:Ificas 294
Tema 23:
Sfntesls de proternaa: Traducdn 299
Caraccerf5$1cas de M troouedn 300
Fase ptO\ila: ae!lvaeiOn de lOs aminoCidos en fOffl'IS
(Se 8/'I'W'liOaCiHRNAs 302
Fa$8 1: 307
Faso 2: olonga.cin o ala1gamiOn!o do ea
peptdca 311
Fase 3: tem'llnacin 3 1 4
Enetg6e8 <tt 1a .$if')!e$is
de proterna& 315
Inhibido/es de la traducaon 316
Rogulaeln de la a/MeS18 ptote:a:
Niveles de ooouot 318
Tema24:
MOdilleaelonH pos.lt &ducdonales 32-1
lnllduotln 322
Tniffco o destino de \a& protenas 322
Madvracin o dol SJO!i9Ptido
naciente 326
Piegamlenlo de protelnas 337
Oegf'&dacin de las pro!ei.NS 340
XIX
IV. t\.SPt"rHS
Tema 25:
Ba.s.e$ moleeul ares de la I' I'UJt&eln y l a repar&ein
343
Conoepo de 344
Clasl!icacon oe las mutaciones 344
npo de clula que sufre a mutacin 344
Mutaciones. a pequea escala o 346
Causas y mecanrsf'l\06 bSICOS ele
las !'Nl1adooes 352
FlepataCiOn del ONA 356
EnfeoneaOOs humana& ;:a
la repatacin 363
Tema 26:
Diver sidad del genoma: pollmotfl$mO& 365
ltttroduccen 3&5
Otversldad genica dentro de
una especre 366
Mecansmos on 41 V\U'I<'II)illdatl
gentJca 366
luncaonalos d&l $)(llimor1i$1'M 368
Tema 27:
An.ll sis M genes. De:tecd n y apl icaciones de lO&
polimorfi smos 379
lntr()(luc>eln 379
An\\li$1$ 00 901'1(!$ 3Wl
Deteccin Gel pollmOffismo de secuenaa
deONA361
Aplicaciones de los pol!morlsmos
de ONA 384
Rolert ncl:t$ hl$trka$ ..:141
Blbliogrefia 4-47
lndice analitico 449
Tem;:a 28:
Enfttmod<tdes
300
Conoopto y claSifiCata<ln 389
Enlormodt'ltiC$ exogenas 390
gonliCM 390
mullitactMales.
mixtas o 399
Tema 29:
Entefmedades cromosmi ca& o cl1og4mticas 401
lntroooelon 401
Clas.Jiicacin y nomenclahn A()2
CrOmQ$0n'IOpa!i3t nvl'l\nC<I.$ 403
esHuclutates .t06
Tema 30:
Bases molecvklres del cncer 41 1
lntrodUOQn 412
El cf'lcer COt'f'IO enf.etmodad gonli<;oll 412
Etapas caractensticaG- en el <l<t&atTOIIO
del cntet 413
MecaniSIOO$ dt tr.lrl$1()01"1<1CI" <lo <:(l:lvll) norM<\1
en lumoral 414
Cootrol de la Ofoliferacin 001 :14ili!IO$
exlfacelolares 420
Flegulaoon del ciclo oeUar 422
ApoptOfiiS. moorte celular
O liUiCOo oclul;1r 43l
drctl c.;'mcor 434
Mat<:aCJOte-9 IIJmot'ilfe.S 434
Tema 1
Introduccin y aspectos generales
en eucariotas
1.1
1.2
1.3
Tran&mi-s.io dct ., genbtiea - -" .. - - ................... ...... _
El ONA como genhtico! p.11sado, pr.sente y futu,o .............................. - ..................................... ..
del ge.netna ..................................................................... ,,,,,,,,,,,, ....................... .
1 3.1
1 3.2
1.3.3
PfocaM&a:s y eucanocss ........................ .
Magnllud del genoma nuclear de eucariotas, ,
Magnii!Jd y catacteristicas del gcnoma
1
2
5
5
6

A inltO<Iuoei6n gener31 a1 presente le)(fQ (y. e-n defln!ttva. a nuesuo enfoque de la a.otogla MOieculaf e
Gel'lellea), es ootwenlente deset1bW suanlamente tos tre<s aspecto& que mejor ponen de mcwfioslo ol papel
de )OS ilcic'Jos en la cUa y en especial del DNA como ponador de la nformaon Qllfl4tica Por un l<ldo. 1;,
<le$Crlpa0n ele l&s rulOs e lt<lf"'$lfli$ic)(l la inr0tm$CI(ln gentiea: en segvnoo lugar, lOS 8fl(ece<lentes
e)(penment.ales que dem061raron el import.N'l:o popcl do lO$ ;kidO!I l:tS earacterlstieas QMf!fales
001 gonoma de como punlo 00 pMid3 pata el eshldio posleOI' M prorundldaa de tos conceptos teorlcos. tas
y lt'l$ de esta Matea en las cienCias de ta salud.
1.1 TRANSMISIN DE LA INFORMACIN GENTICA

liffM & 'Rl"A <k"'""' &1
.,..,.,.....,-n,..m,.,
.,. ri O"-"
TIV.Ol!CC'ION
);i .................... -
- f""'Or. .. ....


,o)6,!'l,:o6) llokN""o
rn,_; ...mrnuomJo4;oo
--
2 lNTRODUCCtN Y ASPECTOS GENERAUS EH EUCARIOTAS
Fr;)nci$ Crick. intn.xkljo "' 1rmino "Dogma oontral de Ja gen!Jea molewla,. pera desak, lnek.19o a"'es de
CQO()(:OflO su rNI en lo& &$$ vivos, el flujo de la Informacin gendca y la utlllza016n oeU.v de diChO'
infQm'IOOn En ooncro10.1a lransmisin de ia informacin conteflida en la secuencia del ONA alas o&Jias y organismos
(lesoetdie"'es tnedi&llto 1...., y s' o_xpre$in en blomolruras fvndoflales medlarue 10s proce909 de
y tradl..eOien. COI'I'IQ(endo, Pl.l"$ ti ()()l"'j..ttto rel3eion05 gene...- exiS1on!M entre el ONA. el RNA y las
prolei'MS
()et)e resaltar.5e Que l.;i tf)C)(e$01\ttlei6tl DNA RNA - no indica la baniiormae>n de una
mOie&U en 0178. oorno te indica on t.$ wtM metablicas. sino que cada elemento en la &ee:uerecia
aporta lnf0rmaei61'1 l'leoe'lll!lrin para 13 t i nleliS siguionto En este &Onlido, a importante el ooncepiO de planll'lta o
molde molecular: aunque cad8 paso est catallzado por una f!f'l21ma. los sustratos. (nuetetido$, no .&on
seleccionados pot ela. smo que ....enen especlbdos por ia lntetvenclon del rnotcle. en concreto pct su $COJetc:, de
nuclel:ldo&.
El progreo en 4lf conocimiesllo de 106 prooe&Os de lr.tn&mlsin de la infotmadn genbea oblig a la afYIJ*aCI6n
diJ n!e esQVema bsieo origf\811 para acomodar otfOS proce506 tcwnbiM oo.::urren. al mell05 en algunO& orgarusmos
l)&t1iOOI.are$, N d c::MO dt3 <'lgutiO$ virus:
SiMn" .Jo uruo de

Jc'A Clllalif.u1i
po.'f" R'\ fl!
11l;um"Jo nnll'. (l'ltK> c-1 ckt
mo:&lli< dtl lallacll _.,/
Visin aclual de la
replicacin repNcacfn de; RNA

tmnsmisin de la
inronn.'ICln gcnCsi<:3
traduccin
("dogm:J d.: la
DNA RNA .. Protena
geotica m:olecu lar"')
----

& U'-\ ; punir
R'-iA <-MahNJII
hi\ITWjl_
!H.' di tn ..
1.2 El DNA COMO MATERIAL GENTICO: PASADO, PRESENTE Y FUTURO
EJ conOCI"'''ieMO de bl estructura de 108 cidos ooclelcos se Qcla en el siglo XIX oon .. aislamlonto on el
oeuat de una nuel.eina foonada por una pane clcla {hoy. ONA) y par(e bsica (Prolofna).. Clllf <Xln'IO 01 e&tvdi:>
parO;N. de las prope<lades da la mclalna y de sv JllltiOiOn <:On 101 celul&r. Sin Ornbrargo,. la oaructura sll'liO se
OOC'IOCi a mediados 001 ligio XX, .-1 m()61rarse Qu!: .a ONA 81'8 el oompooente cromo$6rnloo dei)06flarlo de la
inklfmedn gel'l1k:ac. C..C. deslacar.., t$t0 sentiOO. anlecedentes Clave. lOs expe'nentos de Oswald T. Avery,
Coln Mac:Leod y Maelyn et'l 1944, y de Alfred D. Hetshey y Martha Chase. en 195:2, q.,e un hito en
ol <.:OilOClmi&nlo dol m:.:tenzu genliOO lS escala molecular.
estaS- lrC)OitaOOtlet Iniciales. el verdadero inicio de la BloiOgia MoloC\Mr tl'locter!\11 k> tos:lilvy6 aa
de e&tructvra eo <kltlkt tll108 pa;r el DNA. formvl,da, en 1953, po.- Jamea D. W"tson y FntnciS- cr.ek. A p&rtil' ck!l
momento, casi lodo o1 cs.ivorto $e Ol!fllr& en el es1udlo del ONA genmloo, desde et puntodEt wsta estructtnl
y funr.lon&l, procartotas y e!..leariOias. con una 811encln espedal a mamlf.etos en Qenerat y humanos en particular, Los
avances togrados. U'll'lto let!OOS eomo tcfliiCOS y aplicados. han sido enormes. A ello Na contrilMJiclo ltt {)1)3riein de la
ingeniarla genOC... prino!potl de la bioaogla rnolectAar. Queda pendianto para vn rvturo i)f.ICimo 13
oorw.:luSIOO del PtQyOC;to Humaoo (gen6mlca 1\n::lorml). el an!hws de la. funciones de c9d<ll gn
funcional) y la discoci6n de 13 t$1tvdut'a y f..n:ln de In ptotelnas (p'ocOOmica). Como expresiOn <J6 t$10$
htl su'l)idO ma gran variedad de campos de actrvldad eo las CicnciM de '" $M.I<:I (M!i<'ta, FarmaCia y
Veto\rial). como anbCuerpos monoelonale&. mtodos in'"'JflOQuimiCOs, biOChipS- el dlag.\$UOO, Clonacin
y aMnal, fafmacogenes.. ingerueria de proteina&. procelnos tt<mbinantes de dlagostlco y
teraoullto. 90fldB!I de hbtdaoo. terapia oo:kA<w y te,... g6nic:a, 11'8nllferencla oe genes. vecsoree. Wus. etc. Nuestro
objeUYo no es Oeecriblr lo6 aspeelos conCt'9tos c1o $$10$ $ltlO sOlo poner de manlfies1o las bases moAeculares
que les sirven de soporte. como p.mo de patUda para un estudio detellklo de cada campo 9n $1J jrtA
do COI'I este lttl se presel'ltan en este primer lema las caracteris.ticas gencrale:s del gonoma de
EL ONA COMO MATERIAL GENTtCO: _______________ --". 3
F;xpt-rhnenro de Avery. MacLcod y McCar1y
(1944)


: _"'"""...)--1
Dl>ctenlll -...- ..ukn111




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de (Srrl'Jtfdt_o.r.:'t'li\
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\f'RI<Qlh) A1 {lmdu.:cn n.:I.Hllc..'l! lJ >
.X'aSI(tl!ll!l llll'llu\C 1""" fi61(lt!CS.
dt Pl'' \k 11111
Clt/.111U., 00 l,t "'''f:l
IOOfCMI\ al'. bI(ICruiJ
"R" ca
t\1 o;CJ)\b II'JI"C-<\ .. .t.J.;I.,lr.
fokl.:O;t; li\UO."''CII ) de-Jan. dt '><:f lflfl'
Gntr.1b. 19l!(J
l.llo; CC(lO"' nn l(lfccuo)'<a R" I'Uo(l.icn tntnsftlmlllt""
il11 m 1 l'f\f ' (>lll;loCll
,r;p..s S" o .. '<!n un ('\IJ,.;I(),\,:clul do: .t-.b
be lr.lO.'cWII 1\blil ctK'<tl'l'lr un
wnronmr cm 1o.bd mmd{lnname. el c11ul
11-. OOfYII)(I;Io:il'ln 1;. del
ONA y
.. , llr-J\ (Jihl<.k'n.
cl<x.:'ln'fo.)l ... ). Adtnh. tlo) le lu \IW\ ,.s,w
Jtf ll)('ll'<JI;;, dc f'!OfC'olla$ o)
llpOOS.. '" \< \'i:la lXI' el
1rlf''lll>l ,, IJolliflhiCti:'l)lfl .:lit
nho..nuo:k11.:. (o.fllC RNr\ ), l)l:fl' p..tdm
!,1 a.:u 1111d tr.w)iOrnl!liuf:l tr.u d lr..,tam!Cfllo

fa reodiCMon d arimtDi' IOIOOnmi!!Joc U 01\A
Ci.,toelusin: El J>N:\ es el n.'SJXIflS.<tblc de la sintcsis de ln cnltnU par'allt
f(N'lnacin di." ls c.\1pst.lltl y. por tanto. <'S el portado de la infomtacin ;!CUtlca
4
H 'tt\1!> ,e;
,.,. ftl el 0' A
(\IIU\:;) ll!l)\t-l.'liJI
.:oo fslim}
INTRODUCCIN Y ASPECTOS GENERALES E.N EUCARIOTAS
Expt'rimento de Rersbey )' Chue
(1952)
1
--=-. Vin.s fl. l.tpo IMn !I!.J:I)
<.:s'*':.. cipwlu n cilp;io.b prutcia.
\"mkrt'll ONA1 Stl lntn1.,_.
A
\li.!Nat' tfKluCh\ t' rcua dlfl:r.:l)(-iar l:Sp<."Ci(K*II<(IIt' 1.'wllt\' DNA y prlkina>.
mcdinmc pt(llifcrtw:in de I(IS 1'i M o:n 1111 mcdcon )f. o con -
1
:S
"'fl .-
skl en In .:opdn

rnol&u con a7ufh: l

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)
....... JI!X!..,., .. 'uus inrn.'WI Nc1enas ....... .,,IU:t::l,..,. ...
sOlo MI DNA}
(R. th"ft'iol. 19' 1)
(.
Al lwlmosen<'fflW"" l\'li11JICh l.u \'tN$ )' Po>l
pul{dcJt \le biS-
.. p('OC'11ldistil\'l() tumaflo

n'"'icbb
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(.r.S)

111

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11
+
k-!t.U.: r:HI.IMd 'l'lU (JSP)
U"O<ri" 00 n dlKOiti +

)
a

1 fBI:Ob&cifl 1

'----
la.'>lxl>:tni:IJ han Sido u'I(C"CWdltt 'IC!r ct \tru.) unt ftllC'\'1 emeraciM
Conclusin: El ONt\ intmductdo en la btte(eria contiene la ,,ronuacin tlectS>lri a paro
generar nuevos virus: es decir, el UNA t.'S el pOrtiido..- informacin ge:ntii(a,
CAAACTERISTICAS GENERALES DEL GENOMA 5
1.3 CARACTERISTICAS GENERALES DEL GENOMA
1.3.1 Genoma de procarlotas y oucariotas
Con:ptuattnen:te, el geooma (ce la ralz grieg<1 gen, Oll!;IUn) $Ct oon11idenwo corno et gen6l.IOO'
de un otgal'll8tTIO, es declf, el GOnjunlo de ma1erit1l I'Mffedit*riO en una cluls. tanto nuclear como
e11.1ranuclear. codlficante o no. La mayoria; do orgoni$t'llOS tM.JseM ut1 por ONA: excepcionalmente.
algunos wvs tienen un 90norno de RNA, t.a p:wte <lef genoma. aunque en euc:anotas as m!noritaoa.,
especifica en bma de 98fl.S _, nbm&cin neeesal1a para dar lugar a prod!JGtos gnico&. t06 RNA& y las proteinas
$IO$ $0n r0$pon$3ble$ ae toda t.a acsMdad ceiUtaf. de sus caracterf'stlca& morfolgica$ y 00 muctlas dt i3$ tlel
oomport<'lmiet\40 de un Qtgantsmo, des6e ta embnognesrs a su crecmento. mac:luratin e inteloet1.131. 9$\Mo
adulto. teP(OductiOn, y SU$1u'le::i00eS metabOtlcas y saNidades fisiolgicas.
Con respecco al es-tudio del genoma. aeben tesallarl>6 primertamonte la$ <::.trati$!iCM diletend.IIIIH; de
y eucariotas:

IAinmalcJ.. plunu;. k\'Wuru.lt:nt:ll'S)
DNA nuck'3r
(cromatma/

l'kOt-ARIOT.\!;
1 bi!t'l\'.tlll-!
N.ou. ... 1"" , bthltol. 11 ....., lop d 1.-o dt tu dhllu NO.;mt!U,....,. N)l!lflW '"11)"'
ltltnpK!If'lltrl!'nlt .:1!Cill> proa,.,...,,_ lo Qlllodad 0.0 <lllt l(,n"' b anno'I'Om.b t ... a-) Wf'<tK>I"
1 l>1 tg.oallfll.'n!t. h C11lfll0o<.'ICII!I> 'll>!l MI)'OI'e> 11;' J,r,. rtuni!IM
que los Otganlsmos procat lota.s ('o procarlontes) 501'1 olllas (ecJbacterias y de
IM'\&1'10 pe<)Jetlo (0.2 a 5 diameiTO) c.on membrat\al pla&mbca y generalmen\G oon una odvWr Ogldtl. y
diversas eeuuca:uras s"I.C)Mlciales (1)6. tlagelos. etc.). pero carecen dtl membrana nodGar. d9 y de cua!Quirlf
ovo ll'PO de oompMimuo\acin intern3. B d4l 01. OC>mP&r;,ll'll)tner\\C. ele y
relativamentil sencillo. Se a un nJCO CIOmQ$QI'OO por una c:.'Cult\1 ONA, loea!iUldQ et\
$U$ponsin en el (:ill)$0!. llt'mado\ zona Jk.\Cft:M<> ttUCiltOidtJ. Sin meml)tan& que la delimite. enoon!far.
;,c;lcm.b. una pequet\a cantidad de material gentico extra. no esenCial. en forma de pequMas molOJias dtartares de
DNA, 1:3macas pfl)smidos. Los plsmldos poseen la propiedad dG replicacin autnof'l'lrlll.. ea decr. sin ooohnaclbn
alguna: eon M di'hSIOn celular. JU(!9an un papel lmpottanie, al eod!!'tcal p-or.elnas que confieren res.slet'laa a tos
MllbiOtieos. u otros t6Jucos. y ofrecen l.tn8 imponaMe como herramlenlas en la teCt\Ofogfa del DNA
reeomblt\an:le. conctetamente como vectores para la lllOOtPCit'8clOo de ONA a clulas..
t.as ot!I\Jias de eoeartot.as (o eueartontes}. &anlo mllloetulares (animales y planta&) COO'IO vnloeOJiares y
multitlulares $imptos (Pto1o:oos. hongos y oon mil$ y Son do rn.ayor (1().50 p.m).
POse<.-n pueden po*r PIW'< 0/!M.'tf (platltat}, titOe'Squei!!'lo y mue$tt;)n unttgr8ft
dloplasn'l'ltlea. con dlfefentes IIPO$ de otgnulos SUI>Celulare!l (mJIOCt>tldriat et1 t'lf'lm'lales y pltl1'113!1
cJofoplastos 81'1 plantas. li.SOSOtM$ IN\ e1e.) y ceras esti\JICb.ll'as (ret/ct4o endop(cisnuco. COfTII)I8jC de Golgf.
etc.) El nctoo oone oomo caracterislica esenoal la pf'@WIC13 de una doble mamOrarm nucle<Jr En el QE11'10tna de
eucancxa& debe distingurse entre ef genom<J. y el dt orgnulo& El ge_noma apareoo bajo dos formas
eSfructur'*"eAte durante e1 cicto oeb.!lef te eromatina (en interla$e enttt divi'$1Qne$), como m<ttonal
r.aamen10so disperso p<>t la Mayor patte del nocteo, y los cromosomas (duranle la dlvi!I!On), tacilrnente <lb$ttvttble$
eomo entidades o eotpUscuiOs ltldependlenles Ambas lormas estn COf'ISlitukl.as por &as misml)s
moteoulas lineales muy largas de ONA de dob6e hebra. ewechamente asoclikfas a proeeln&s.. El geooma de orgnulot
(doroptas.tos y mltoooodrias) est etganiz:aao en cromosomas crculares. al ,gual que eJ de pocarlolas
6 lNTRODUCCIN Y ASPECTOS GENERALES EN EUCARJOTAS
caractertstlcas dlfer.nclatH humano
1.3.2 Magnitud del genoma nuclear de eueari otas
El material gentiCO conwnldo en el ncleo supot1e generalmeota ms def 90% del total de ONA celular. Por 1an10,
el ptlmar aspecto a des&acar es &u magnitud con re&peeto al genoma rMocondrial y el de procariotas. A ditereocla de
sto&, el genoma nudear est repaltido en varios cromoeomas. en nmero variable segon la espec:i&, 9(!tlen<lltnet\1C
muy grandes y oon el ONA miJY condensado al estar estrechamente asociado a hlswnas y otras proteinas.
La magn!tutt det gQI'lom<ll v1eno por la <:entidad 101al de ONA en el de cromosomas de una
06Uo E$1.<) $C I)UO(IO e.xprc${tr do vtlml$ tonn:as;
En nmero de po.. n en or-g$ni$1'0$ y 2n en dlploio$, donde hay 2 do
c:acsa c:tOti'IOSOf'M.
En masa de ONA (pg pleogramos).
Como vaJor e consiste en expresar la candcioo de ONA tolal en el genoma de una clula ooo respec10 a la
PfOMtl\$ Qn l.lf\a otlul01 hclploido <kt la mtSma ot;pQo;::tO. ComQ qn ol1,1las ciploldes ol v;a!Qr &Gf de 2C o 4C,
dependiendo tSol estadio del Qc:lo ctlul<tr
l o ms habltwf O$ expre:sarlo en fongitvct pb = PMQ de b<t$(1;; on hcbr.a dotllt, o nt = nuciatio$ en hebra
Pttro molCulas ltttgt'S $0 emplean ki100a$es (kb o kpb = 10
3
pi)) o mcgttbt'ISM (Mb o Mpb =- 1rt pf)),
c mn!Oicionrj.(!Uf reyzai iJ!!! la III!W!!ilyd dt l UiSA gt:kar cut acigtall :
Pn bl IQt:;tl de 0).)A ('Jll.mh :dula 4ipl(lldc C'fllfC' ti)' lOO \'CIX."!!
quoc-In d< un:.. ttlulo, unQ'Jc la diletenci: puede lkpr 100.00(1
por C)C'!UplO de: pbi!U$ )' 111
de amnl)(). el
En fonn:a la toogrlud totaJ dd D'M de: uoo "'"' ll1.1m111 JI\
C1lll<l!iUUla...) sct ok uflo.lS l m-ttrM.
Al rtfcnt <'Mil cifrn uJ de tilul iiS del C\ICI'f" humnDI () billon .. J()!! cilub$). In
lutgitud loltl ''-suhante. -1 bltlottes M ml!frM (4 10u ml, cqlli\'alc u 100,(100 \"clms 11 la
'noerrn de In 40.000 tm;. 7.000 viajes de ida )' vuciUI 3 la Luna
(dJ'ItuKb ) 00.1)(10 km) y 1) \'iljd dt 1J:1 y 111 S\ld ldl'!a.ntQ .crraSol -
150 millollt;'; dC' \m).
l'rt C$Cribtr b St'l.'vtncia oompkta del lOOII de: una cifuln $e ncccsitAom I .J!O
de Ufl:l ubfl'l !cotlSidtrun00 1,(11)() Jljinllli pt'f y 5.01)0 p(lt Jlflinll).
que fonnarn ul'lll "'ptla .. de 2(.0 m de allliJ'll
se h3oen <:as.i JQCOChptttiSibks si !:t qQi(.te COBS!odcnu l(IO-l!JI\Id U>WI dd ONA ""'
h>da l:t lnurumi&d ( b lO" tndividloll$)
Procode, por otro pt'r1e. ta magN!u(i Del genorna de rOna eomparatflla tan!O enue il'ldivKtoos de una
mismtl oomo eo1te e-speCies di,etente.s..:
a) Toe!,;. las clula& de 10$ ht:ividuo!l una tni sma especie poseen la misma CMtldad Cotal de ONA y nUmero
do r;:rom()SOf'RIS De esta geneull:z.aelon deben exoeptlJarse las olotas 09"TT!inales, dedicada& a la repoduocin del
lndivdUO, que poseen la mitad. En lodo& bs cat;O&, e&Ca; cifras M fefieron a o6lul3$ en un miSmo t:1t diviSin
ceU9f (normalmento l;la'ltorfaM). puos, cmo ::;e vr.'l (terna 9). b eancided total de DNA. aunque no el
nUmero de Of<Jm050mit$, varia en unill a latgo del Ciclo oeJUiat.
8
INTRODUCCIN Y ASPECTOS GENERALES EN EUCARIOT AS
se hoy en dil qoo IKI08 100.000. de modo que la Pf'090'CI6!i eodir-.cantc &61o
a1redl!!d0f <Sel3% DNA. lotl)l,
Aunque l8 tunden de los ge* bl6tl una pequoa fraccin e4 total presente en el genonta
lMnano, la de una correlaciOn entre cantidad ao1a1 de ONA el'l el y gr.ldo compfejidad del
organismo superior puso oe ma.rvflesto la necesidad di;! OQtl pccisin 1o11 cwganiZJJcl6n esltuctural. a nivel
molecular. tanto del genoma (tema 10) CQmQ de b$ gene. (tem{' t9) 1..0$ hechos ms caracterislioos eo relactn oon la
complejidad del genoma nudear 900 la presen01a de gandtt regiotlcs qvc: no GOdifican Pf'Odi.IC1o gnfco allguno (DNA
no COC'IIf}c8J)Ie) y fa ex..si.P,tlca de de OA $8 repilen un nUmero ms o menos elevado de veces (DNA
repetJ!IYo). Como se estudiar (0(1 de1enrmie'IO My QI}O unir a ello la de una enorme
drversldacl de secueocras (polimorfismo, tema 26) M diStinll)$ dol ONA, tanto sencilla& como repetitlvas,
oodificantes o no.
1.3.3 Magnitud y caracteri sticas del genoma mitocondrl al
8 gero:na de (mltocondrlas en animales.. mitoconctria&: y cloropla$106 en ptantas) cs., pos.jblamenee, un
vestigio del cromosoma de bac:tenas .cwcaicas que oc.cedief011 al ci!Opla&ma de euc&cM; primitivos. par. dtu tr..s
ta evoluci6n a dichos orgnulos.- So ace Q\10 1<t millocondritt (orgnv.lo qve apott3 ei90'Yo de ltl enorgi<'l que **'
clulas} surgi al acumularse et OJtigono.., 18 alm6$ftlfCI terrstrc lo milCondritt y ll mjQoo df;! c61ul<'
eucariota se crearon a la Vel". ill lncorportarno por 4lfldocilo&is tlulas uorObiea$ <11 interior <fo lct clula
wcaribtiCOJ y aneJa$. Con el 11empa. la mayot(a de tos genes procariO!icos (gene!!
protomitocondri:"'lf!':!l} st1 integtan)(l en el genom11 nuclear, eon 10 et eucanota primiUYo 31\af!tbiOO ya podfa vMr en
Of'l:t {ttm6dera aetbic:a.. rica en oxigeno: slO ooa pequera froocin del genoma procaoni1co primigenio $)8f1Tiilneci en
la mltooOfldrla.
la& c:\.ia:s anlmale; po&eetl un nUfllllttO ""'Y <'t df!pen(liendO el kl;do. Ca(l{t
PQ$00 vanas copias do un (lnioo t;rC)m(ISQma, $11uad:)S en la matriZ y aont:lada$ a cnembtana iti'Orna. En
el nUmero de eopl3s de ONA rMOOOfldrial {mtONA) en una olula oscila entre 200 y 1()0.000. El
miklOOndlial es blcatet\alb y CirCUlar. como el de j)(OC8tlota9, aunque de tamal\o muy Inferior. 16.569 pb en
Q)n ua de 5 y una masa moleQAar de tO e.s1o supone. unas 3.000 veces menos que la
longitud del ooelear ms pequeno. T enlendo en cuenl8 el nmero de OCJPas totale& (2 del genoma nucil:tat y
m1,1lhple$, y muy vari3!11e$, del miiOOOfldnal}, se puede calcular que el ONA mitooorw:lnal total supone. dopendiando dol
lejidO. enlt$ un 0,05 y un 20% del OHA total de la clula. Finalmente. el cromosoma de cloroplas1os O$ igv,almenlc
bc&!enariO y cireulat, pero de m8)'or tamallo (JJ8 el mitooondrial.
A dderencla <JetONA nUClear, de gron cOITC)kl;d.,d. oon rcgiOncn y no codif.e.,nces, miDNA ts f!n su
ca&t ooditcanto y no rqpotllivo En C(lncreio, Ct0c'M$0nl<ll milcX:ondrlal null\&t\0 c:::oouene un 101a1 de 37 genes:
2 par" rRNA, 22 y 13 para pt01elnas que forman parte de los oomplep:S enzimticouespiralorios 1, 111, IV y V.
$t.'s $Up(Wiet'l slo el S% de tas mltocondfiMes, mlenltas el resto Mtn codifiCadas por Ot4A nudltar.
Tema 2
Componentes fundamentales
de los cidos nucleicos
2. 1
2.2
2.3
C.omponen.t.e 6eido: Foslalos ................................... " .................................................................................. .
2.1.1 Monof06fatos ........ ....................... --
2.1.2 Oifosfatos ..... . , .... . .
2 1.3 Ttifoofalo$ .. , , ....
2.1.4 .. ..... - ...
9
9
10
10
11
Componente neutro: AzUc:"*''"' '''' '"""'' ' ''- - .. .. .. 11
Componente b.lsk:o: Ba.'" nitrogen<ldiL$ .............. , ................................................................................. ,.... 12
2 3. 1 niii'OgcnoO;)$ 2 tipos.......... ....... . ...... . 12
2 3 2 Oll t\$ blt$0$ dO itltetS biOIOgir.O y CllniOo . .. .. ........ , , _,,, ... ... .
..... , .. ., _, _,., ....... .......... ... 13
2 3 3 bases pul1r'liea$ y J)ltlmidinh:as , , 14
2.3.3 1 Exls!eneia de dipolOs .... _,_,,, ........................................... _,_,_,. _.,----.. ---........ ... t 4
2.3.3.2 Hidi'OfObieleac:l... ....... . . .......... ..... ....... ............. ..... ........ .. ....... ... . ....... ...... . 14
2.3.3.3 OsposiCIOn coplanar ae kls enlace$ de caaa an1110 (C N y C.C) . ......... ............................. 14
2.3.3.4 Tautomerla o iSOITierla <lnilmica ....................... ... ..... . . . .............. .......................... 1<1
2.3.3.5 CarCier bSIOO ............................. .................. .,, __ , .,, _,.,, .............. ....... .......... 16
2.3.36 Absore.Onoo lt'l lu% "".a \ 7
Los actdo& nucleicos (DNA y e&tan con&til\lldos por la unlon da numerosos nuclelldo&. de .; bpo&. Como
a &u estudio. se oon&ideran algunos de lntets !)Mil cada uno de los componemes estf1Jaurales
de diChas unidades, los nuclebdos
{
Fosfao(s)
Nuclel ido + {
Nuclcsido
2.1 COMPONENTE CIDO: FOSFATOS
2.1.1 Monofosfatos
Azcar
+
B<1se ni 1rogcnada
El fosfato 11'\Qrgnk o (P). mezc:lil de 135 especies qulm&Gas result.81Mes de &a dlsoclacton oe la molct.il3 de Aeld(l
fosJOiico, aparece como anin a pH c.:!o, como dlatliiOO a pH tlsOigico y como ttiani6n vH alCalino En la el
losfa!o &e encuentra en fOIITia libte (P
1
) o fOt'l'Mndo pane de numerosos compuestos gniOO$ (R.P) I)C)r ejemplO. los
nucle!idos.
10
2.1.2
fo;l!<ftiOJ:
lliddo onof06!Jrico)
1-i ,PO(
Oifosfatos
COMPONEKTES fUNDAMENTALES DE LOS CIDOS NUCLEJCOS
'
.w -"" . 9, _ "'-"- ,.\l _
1-K>-P-o uo-P-o
., ,- .\-
f, .. ruw , 1 P 1
e- mt"l.d:. dt Lu J "'-lillleu dc:l 1.: t.-lhnM
m el f'm
El d.ifosfato o plrofosfato (PP.t &e presef'lt8 a pH como trianin (una de las -1 formas inicas del cido
pirofosfrico}. Es n a pH nevlto o ole81ino; 1in ombtlrgo, dOntro dO 13 es 1110$taCIIO por
de la& PI'Oioff;t10ws. 2 P
1
Al*ece oombinaec> fund111ment811'1'1en1e t1t1 nuei&6sicl0s-dib$1a1o (por
AOP).
2.1.3
ictdo pirofosrtiro:
llic-u.lt)
H,P:O.,
ff
110--- >--<>H

u
""'"
u;::::____n
R .OI
o o
lt 11


Trifosfatos
poli
.. u .
-.a: _..
---rml(!.;!ntn f Pf'
,.._ me.-ola lkiiiiS .l fum\lt io)sl ... 'll>tkl k
tn di-'-,....,..... ... IPn d 1'111
r .............. .. ....,. """'ia,:'o)n funt06!t *'
-
.---.-
b' -
-rmrMtatt f'lfl!lnlt' tRf>l')-
1 t vrnpuc lo v1 ,:atlt pttlfr ... l:.hao.kll
El (PPP
1
) e preseda a pH I!Skllgloo oomo t-etraanin. No aparece en forma libre, M10 foonaodo parte.
o&cn(::iefr'nen1e, ese nuclecldos-trifoslato (por ejemplo. ATP).
ki(lo

COMPONENTE N.EUTRO: AZCARES 11
2.1.4 Tipos de enlacas fosfato
Pueden distinguirse canco tipos <k fosfto que van a formar pttrt <10 los nucJ(IOtdO$ 0b$6(vst ta
estructura y nombre de 10d06 ellos. asl oomo la diferen.:::G enlre enlace esw y on tos nuclobdos
y trif061atados.


1-
"

( cr,
f,.(ul<t.monoiOsfatot
un f:flliM
ik 1., mol(culu

R-o-r -o--R'
-

un -stC'J dobk coo


2.2 COMPONENTE NEUTRO: AZCARES
ln[coslilo
El azOcar (ftclalmente llamado OSd) siempre es una pentosa {5 lomos de carbono), biM la 0-ribosa o fa
0-desox.rribosa. La rtbos.a (nombre derivado ae osa de' Rockefelet' ln511Me of 1908) interviene en
ooclesldos y nuclebdos bajo su forma ms estable. PO.ribofuranosa.
(,......, loowal, lotm;a t-<IJO>'.t,

il'....,w(ioo 11t
o-bo.1S:a
G8
UH_ ( 'II: O cm lB
e>

0 11 0 11
f.lfalllllilt!r co<khm
l"nl)to......._,_ IL\ v.ote lff)
ri bo rur.lltvw
lRII:K>SAJ
o ""
1 1
1 1



'"J'f\....C:.ac.cio' .... "'-"''
1-.r-'l'llll<:"'"" .... "!l'".,._")

OH
lt' f6unul11 elcn#Q oxtondcr:so a molo.Aa:s de OtoqulmiOo:
O-glUcosa. 01)aiP.Ctos3. Jodesoxi CN!bou, ete.
12 COMPONENTES FUNDAMENTALES DE LOS CJOOS HUCLEICOS
2.3 COMPONENTE BSICO: BASES NITROGENADAS
Son moleculas OO!erodcllcss, con ms deo Uf'l tomo de nitrgeno.. lormadas por un anillo llnloo (pltlmdine) o por
dos atlllkle condensados (porina),. Obs.tVense en 5os ejemplos de bases qoe lfltervlenen en lOe cldos nuclekos f.a
numtf8Ci0n de lOS tomos del helefocldo y la posi016fl de los wshtuyentes eltlemos.
2.3.1
Bases nitrogenadas ms frecuentes: 2 tipos
)' nomencl:uum BASES PIRIMIDiNICAS
()
N
NH,

o "
11
.;:i tosinu
nclet)
pirimuJin:e
(2
Su1"''""' .N
(UJR) 6c :iMtllltYHJd
IIAIIkl pirimidtnl
lo\m!, .,.._,_.
$<'flllllo lloqrooJ

purina
N
J'
"
11
St:IIII."IIIU
u.illa punlli:l.
(.'tailk> prnmdilu: .mkk

A modo do:
la posu:jn de los

Olida u011 de lal
b:l> es:
A
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,,
,,
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ta:ICifO

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OOt:nmil
( nl)plif'lllfl)
' .,;' 11 .....

'
l
2 )'4
'
6
2)4
bmu
ll.4-.tloxt>$.mc"olrnmJJII>
( S.metdurki.loi
CH,
5
guanina

COMPONENTE BSICO: BASE'S NITR.OGEHADAS
13
2.3.2
Otras bases de inters biolgico y clinico
Ei$t9tt QCt <a$ y piwrudtn.cas., en Q(:t"'ernl poto fr&rue!\le'i , SutQ!m por modficoOn de laS
bases A. G. C y U o de alguno de ws anlog06 (hlpoxantna. HJ. Son de origen natura1 o sntuoo.
en procesos como la melilac6n del ONA en la olJfa y mue&tran dtsbn4as propledaf:)es (anllbiOtleas.
antl\llrlca:s. anlltumorales. ele.}.
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01
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5-Jiwwurbfel"' ...
tkNA 1 lnattlll li 1 )1111<'110:1)1 Mll n'IUfi(IDh
14 COMPONENTES f UNDAMENTALES
2.3.3 Propiedades fisicoqumicas de las bases purnicas y pirimidnicas
2.3.3.1 Existencia de dipol os
Toda bl'ltell PQSeen lomOS: eleclronegativos de O a<lerdna), en poslciOn exoclelica o ell'lranudeer, y
<le N, IMI<> oomo ef'l el anillo, nucleares. Como consecuoocla. son aboodSftleS los enlaces po&ares, lo que
'" l)rmitt inltr.lloeionEu entte si mediante pueNes de hidrgeno, que poseea una ImportanCia capital en la estructura
<te IQS AcidO$ nudeioos. en eSQeclal del ONA.
2.3.3.2 Hidrofobicidad
1.01 de Nlee que las bases u.-. mateado car6ctar apolar, aean hldrolblcas y
pooo $QiubiC$ en agua pH celular, cef'Cano a la neulralidad. A pH cido o alcalino edQulefen carga y se haoen ms
$01ubles en agua. Como ya se esrudiar, tas Interacciones hdrofblc:n d a.pllam1ctnt et. qve tktneon lugar eniJe ba&O$
diSI)ue9t8:S patatelatne<nle (a mooo oe t'nOI'W!dJJs apiladas). son esenciales para e&labiiz&r la estructura tridimensional e
b$ a<:iOos
2.3.3.3 Disposicin coplanar de los enlaces de cada anillo (C-N y C-C)
Se debe al carctsr arom:tioo. y" pu6de Ob$01'\'ar en mOdelOS e$paclales:
(' itosi rm
Adcnn,
2.3.3.4 Tautomera o isomera dinmica
Es una l$01'1'1$tla de f\Jncjoo,aes, Consiste. con carkter geoer.:ll. en lt' rnigfb(ibn del $:1<lm0 de hklrogeno
uniOO;) un &tomo de C, O o N hacia 0110 atomo adyaoenle. El tipo m$ ftcuet\IO" lb Un.Jiometie; oetOenllea.
1ipos. de:

stoncru!e:;.
f l)Uli'IIIC'It:l
41<i ltlo1!t
u-cjl_
OH
<.A..
fon'l\3 .:-nol

umna umma prml'lrt<l
.

Nll
Nll1
1 !!,.C' )l__
,J-..:.
f>l'ma amina
fom1:1 i.mina

SQn muchO$ 10$ eompue$10S orgtrioos que emten como mctc:li\$ de 2 o mJ de estas formas tautomttcas,
y en Entte 106 oompue&tOS he'leroclcliOO$ son do espeeial llmportanc:aa las tautomeria& en la&
basn P'Jnic8$ y pirimid[niCas, en las cuales la migracin del H llene lugar dE!$dle un 10m0 de N nuclear haaa 0110
tttomo exltanuae.at. y vleeY8t'Sa:
.,.
o
T lii.IWIIli'liU
la.:.I:UOO Iaclilll.'l
(ri ta:s
Dos bpos
l 3UI001
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nnrog.t:M

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1
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( (('ut\11 N.'l"- /" rnmu cnut
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cnlu!X' ...-.Jn o;./.rt;ra-. Al el
)l(oulo) .Y J 1 dNk d N nudo:;n al O li:t
ll'VJ'!I t'(kl. K d latU<.\ ml'l
i(w'""'' IU"""IIll.'ti llfua C. Unte.,
punlli;li OW"!!Il)ltbml. f;t!' J tltttutdlu ..
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JI'II'IO "'""" f:t"" IOS!a
'"il"'' mcria lll 11!11 UatQ.
p!rillltdiniiPnunl)>w;shtiltdA. ('. )11
t..ll 1 o\ ) (;
COMPONENTE BSK:O: BASES NI TROGENADAS
En oon&eQJencaa.las de la& bases nitrogenadas 90n las sgu.entes;
tina OOsc (A) rrcsenta sola tsulomcra:
La ltlul (lmC.ria de A es
im1ns-amina pri mari:l.
mrnt nnmbnm
pcmeo.SC \ 111 wbn.- 111 klr.a
llbiii'C"
('U3tro bascs(T, U. G, C)
una dos tautomcras independientes:
T y U mucs1ran tautomcri s
dobl e. lactamn-laelima
N J.:_)

' "
aminn
A
o ........
T
........
JI
laetanut doble
;)
H
loctamu doble
u
G
(j )' (." lll U(!$lr:lll 13UIOnl<:tf<'l$
imina-rumna pnmana y
lac1a malactim.a.
t w; imiru. n;)mbr..Jn
IX'nrcndo un $<litre- b
ktr&dr laNse.

A.JlN ........
II:N N JI ....-'=-
lactama y

Nll1
Jt)
0 N
JI
I)Ctamay
ami na
e
A NH

(J_N
"
imina
lnc.1i ma doble
l.tlc1ima dobl e

HNAJ.)
e Jt u
l:telim;.l e
imin:
e* NB
't'J
110 N
lac.-c i ma e
lnllll:l
15
Oe$de el punto Oe Vl9ta qulmlco. en las bases lib(e$ 1a11 form..'1$ lWIOmricas laCllma (enol) e .nina son mei'IOS
eS"I:Ibles. y pOr ello son unas 10.000 veces menos abundarttes que M OQftOSQ()ndiente& lactama (OlMO) y
amna. con lo que eJ equilibriO se ei\Cuenlr.'l de:5PiazMo hacia la rzquletda
16 COMPONENTES FUNDAMENTALES DE LOS CIDOS NUCLEtCOS
2.3.3.5 Carcter bsico
Todas las bases nitrogenada5 &OO J)Ve$ M lrtQITIC)$ do N, tanto eotnO extraMJelerot.."
pueden protonar. oon valore& de Pl<a on110 9 y 10 Como ejemplo reclort:SOI'tl8tiYO, Ob&rve$e la
de la adenina;
Sin embargo, es1e carCier bs*::o. propio de los onillo$ p.ritli't y l)irimidiM, se ve disminuido por la presencia de
su:sliluyentes. En c:oocreto, el grupo -OH de b5 enoiO& ()' \;lc;lima..) e. ligeramente &Ciclo y puede disodarse:
OH
1

/ '
H
Como oorn;ecuetlCia. la& b95e5 nllt008fl.;das QVC I)Q$00n grui)OS. ladama (ceto) pveden actuar como cidos. a
tmtd!s de sus t.au!.meroiS lac:tima (enol), c;:()n b tv31 -M 'tt (eduCido el C8f8cter bsico propio de tos anillo&. en mayor
medida cuooto mayor sea el nUmero dt grupo$ V6anse lOS ejemplos
a) A es la Onlca base que no tieno QI\ICIO cotorenol y. por 1an1o. no ITlUeStra ningUn can\cter icido y e& ta ms bisk;;t de
todas
o) En e y G. el Unloo grupo OH apol1a"" jeida nvJY d&bil, 90f lo que siguen oomportndose basfn;
NH,
(\lido 1ambi.n
para G)
{_]
0 N
NIJ

1<0 N
(\lido 1.ambin
.,. ... U)
"
(forma
(for,n:l Lactima)
tfom1a
laclin).'i doble)
2
tfonn;1lactima
ionilada)
d) Como e,emplo e.xnniQ, jt:ido f'lco (base nitrogenada con ITO$ grupo$ OH) ya muestra vn marcado carilcklr ddo
oo e& un cil: futtte)
((orma l;1c1urna
ttipk ioniil'.a{b)
COMPOHENTE BSICO: BASES NITROGENADAS 17
E&.la di&OGiacin. oomo cido$. de 10$ grupos enol oompensa en parte el det;equi!ibtiO tautomric.o antenonnente
con&tderado, a..mentando la presenCJa de las formas (enof). No e<:Utltit un fllfecr.o &imi<w oon las f.otmas iJmrn;t,
pot 10 que 1a (ltilcUca es oomOn que en las bases nlltogenadas $610 se oesetlba 1a tau!Ometia de
rYU:'Iyct llascendef'ICia biolgica.
2.3.3.6 Absorcin de la luz en el ultravioleta
E& una pn:piodad car(l(;tefiRictl de laS ba$0$ punicas y debida i'l carlleiat aromitiw. En bs
e&pectrO& do absorcin,;) pH=7, se obSoe:Na \11'\& rutw\c al>$orci6n de la Jl.lz en el ullr.IWO(e43 (UV), ton un rrW.imo cerea
de 260 nm para kM:ia& ellas.
14
7
; U>() 1111\ ll!llok
b nu:;eda o.k
u;knion
21ro nm rflltctl'iertt ron
b medida de
Q,:=>"'-r-',
' \ guanma
1
1
'
1
1
'
'
,,
,_
longitud de ond.'l (nm)
El mantcnimiemo .-esta propiedad en noclosidos. nt.ltlebdos y ados nucleico5. de los que las bases forman
Pilr'W. POrmito &u vti!iJQ6n en e&tot; oompve&tos: por ejemplo. la cuantdicacin do cidos nuclelcos
(pOg 36).
Tema 3
Nuclesidos y nucletidos
3.1
3.2
3.1
E&l ruc-tura de nu<:6e&ido& _, _ , _,,_,,_, _,,_,,_, ,_ ,,_,,_ ,,_ ....... - .- ............. .. 19
3.1. 1 Calacterls1lcas genera6es -- ... - - - - ... - - - "' "" - - - -.. - "_..,_,,,_.., _.., _.., ,,,, _,,_,, _,.,. __ , _ 20
3.1.2 TipOS de nudesidos ,, _, _,,_,,,,_,,_,,_ ...... ........... .., _ ... , ....... .., _,,., ... __.., _,,, ..... -- 20
3. 12 .1 Nude&Jdos que f<:ltmaon pana de nucte.oo& 20
3. 1.2..2 Otros nucle6sido& de inters biolgico y clinioo_. .. . .. - .... ... - 21
3. 1.2 3 Anlogo& de inhib1dores de la tran&CtlpiS$CII inversa .. _,,, _,,, _ ... _,,, _,,, _,, _,,, 23
Estruetura de nuek!Udos - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 23
3.2. 1 CaraCieri&tlcas generMes .... - ....... - ... - ...... _ .................... _ .... - .......... ................ - ...... - ....... - ...... . 23
3.2 .2 Nucletidos sencillOs ... -....... -.... -... - .. - .. -- ---... - ... _.., _, ,., _.,.,
3.2.2.1 NOmenclatura . . ,,,_,. __,, .. .,,.,., .. , ........ ,, , .... .. .... ... ... . .
3. 2 2 2 E$1ructura de los que forman pane de los cido& nucleloos
3.2 3 de nudesidos y nudebdos _, ............... ........ .. ..... _ .. ,,. _ ........ .
3.2.3.1 Propiedades iOonieas ,. _,., _,,., _,., _,., _,., _,,. .. ., ....... , .. - , .. ,, .,, __,._ ..... _
3,2 3.2 Forrn<'Cin<lccomplej()$ , .... , ..... ,, .... . . .. ........ - ...... - .... .. - ...
3.2.3.3 Absorcin de la tuz en el ultravtofel a , _, _.., _, .. _, __ .. .,. __.,. _ .. _., ... ... ... ... , .
3.2.3.4 Noeletidos como do onergtiea ... ... ........ _ ..... - ........ ..
3.2 3-5 HC:Irll&i$ _,., . ..,_ '_,., ..... ,., _.,.,
24
25
27
27
27
27
28
28
28
3.2.4
3.2.5
Nucte<ltil:$ cidicos ..... ,,., _, _, .. 29
Nuo!e(idos OO<Piejos. , _.,,
29
ESTRUCTURA DE NUCLESIDOS
Con-esponce at esquen'la gel'lerat: nuclesido = base nitfogenada + azcar
Tatnbtn Pvoe<lefl con&i<ferarse como el producto de la hidrlisis de lOs l'luCietlctos, 001'1 liber<'Cil'l do fost3to
.-.otgntto. Equivale, por tanto. a un nuclelldo carente de 10$10'110$
20
NUCLESfOOS Y NUCUTIOOS
3.1.1 Caracteristicas generales
La \P6o oovalente N-gJico$ldico) onV. ao bMe y ol o oesoxirrbQ$8} toe enlte el
C-1' {carbono ancmrico) del azUcen y el N-1 del anillo pirimidi nico o N-9 purlruc::o, oot1 prdida de
mol6eult'l
3.1.2
oildwdo
llll<t
purlnlo;

Tipos de nuclesldos
,.
Ofl
nu.;koHk'
IUIII biSo;<
pitiGlldiiiKII
Debe disl!ngulrse entro nuelt0$1do$ oonslltuyentes de addos nuclelc:os y otros nuct.sidO$ do biolgiOo y
di nteo. Su descnpdn se hace en f1.11o:;;i6n do la na.turaleza QO!IWC& de la base y del azOcar.
3.1.2.1
Nuclesidos quolorman parte de cidos nuclelcos
Nudcdorii.los pu.rrrucos
pirimidiokos
'
nl>tlllw-k\1-i<Jull (.-..; t"tl d 1" <\ ) )'

,... (.:n RNit.l y
delitlXInlbOMitlo:oddo>

r'floueflll'illl &'11 d U 'lA


(tn R" '
(t n. DNA)
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su liJO -K1111a
.... ...............

guano$uli:l
dtldma
11 1!11!1 ..
tiJidltl!l

1 1' l!--O.tcloo.oflor:onuolli
'J...4 1 '-04!Htlu1n1Mil) 1 <ti' -fl-O.rii>C.fllnont,.il)
,_

..,.

-

("'IIIIUI.
IL'\Qfpo: ... ,,_.
111\lcilo
E
t11tll"'4
-----------
------------
-----------
-----------
-------
"

"
2 di.'SO,iad.,..no!lina l' dcsox
2' -dCSOAiocitidi.Jlll
-
r#IWII>J.Ji
9-1!' "-1-1 -jl.i).
........... ... O- lll' dC'!IIctl!I'-IHl
1-(l' -lbol.l l' ,_.,_ ......
nllu{o;o, ....... lldlmiiM
.........

ni'Ciflllll-1) t unin
- ;'c\,
la Cfi$1Anclon antf9 nbonCJCieSidos y esllit'la, obviamente. en la presencia do rl>o$<t o
en la molwta
ESTRUCTURA DE NUCLESIOOS 21
3.1.2.2 Otros nuclesidos de interCs biolgico y clinico
Adems de los oompotle:l'\1es de 1\uCieObcfOS y ic:ICIO!I nucteleo!l. eiste' en lf'l Mtu1111ez:a 0110$ nu<:le0$1d<)$ en
IOrm& libf'e o oombinM;a Algt.mo$ do ello& $0n $igr'iiri'C<'Ibvos l)(lr o o induoo por sos
apllcactOfles elinicas Deben citafSe louigu!entes
s-j)
11
inosina ( 1)
j)..j .. e..,.u-.......
--
(COOll)(lnetllc n1 inl)dt:tri> dd ll<l-1 A.
en d hr.v.o dd .aniJcudUn. [l:i. H)
fi.I(JI.I
Cr>
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puromi cinil

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NUCLESJOOS Y NUCLETIOOS
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"""ii' R1ll Yfi:rrm.:ii6n -.-c.c,
ESTRUCTURA DE NUCI.Enoos 23
3.1.2.3 Anlogos de nuclesldos, lnhlbldores de la transcrlptasa Inversa
para combatir tos rettovlrus de la lnrnunodellclencra tunana (V1H1 y VIK-2). da! SIDA. En
aeWM como l)f'Of;';rrrtaOO$ ya que ta celu!a an.flVIOtla tos eotwierte en lOs eoespor.tte.ntes desoxitludeOsiCIOS
5' que son los verdadeltos firmaoos. pues eompiti!fl oon los normales. 1mpicliendo
ea ttansetiCltasa lnYBtsa. ptopla del v.f\ls, sintetice el OHA COI"'lPlementanoal RNA vinco
" 1 !IUtUkO\ lk.'\t 1 '\
Uased: la
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Cit'l!\in:.
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1'.3' -<JideSOM 2' .J' dideSOXI
c:nidin.:t )'.til.Jc:ltldma mosina
timidina
timi dina
NQntbfl;:
,\/T d-IT dd( l l ( ddl
oomcrdal 1 idm 11J m;a
1 ,,nudin;l

1 1Mfiu.<1 1) i,J,U\1,.,. ifl;
3.2 ESTRUCTURA DE NUCLETIDOS
Corresponde al esquema genet"al:
nucleti do = nuclesodo fosfato(s) = base nilrogenada azcar+ fosfato(s)
Tamfln se puede cons.toerat cOtnO:
nudetido = azcar-fosfato base nitrogenada
Nuclct ido
3.2. 1 Caractersticas genoralos
de carcter (tosromono&$ter), se e:sl.ablece entre uno o varios grupos fosfato y sel\006 grupos
OH del nllde$i(lo
La ImportanCia de tos f'k.M:Ieotldos es eKoepcional , ptir'IC:ip3!mente porQvO $()fl k)s mon6meros constltvyentes de tos
c\0005 nucleic;.o$ y. POr tanto. los productos normales de &u l'ltdr611sls. Al mismo tiempo, porque apateeen lif>fe
en disbnCas localrz8CIOOes subcelulares, forman<lo parte de molculas Cle gran l(ltetes DiOquimieo (e$C)eeatmentoo
coenzmas)
Para estudrar lOs nucle6tld06 se emplean diSI.irllos crfte-rlos de Clasiticaein, acendiert<JO.,
Carae1erlstlcas esttucl\.l"8tes, ctitetlo U1111z.aoo I'M)frrta!mente:
El n(lmero y poslclbn en et azOCa de tos grupos IOSiaiO. nuctes.icto$ mol'l()fo$i310, -bi$1o$1ttto y .tn.sfot;f.ato
EJ tipo de azea,.. rlbonuctelldos y 2' -dC$01(irribonuelttiOo$
El tipo <le baSe nitrogenacsa. nudeOtidO$ purin1eos y pirifTII(.!iniOO$
line31 o cictioo (dmermnado POt ' fO;Sfato).
24 NUCLEOSIDOS Y HUCLEOTIOOS
Otras atas que slo se alude ocasiOnalmente:
Proeo<Jtneia o en 1<'1 o&kll8
Funcin. etc.
.. ..
3.2.2 Nucletidos sencillos
Se oonslderan nucletidos senc:ilocs lo$ q.e presentan tosf;.rto(s) on 1)1\CJ $da po$iocin def a;ilct'r: os1o
tanto fO$ oue tienen un Unioo I0$.1810 como lOs que Uenen dos o tres fosfatos que estn unidos entra si
{dtfo6fatos y lrifosfatos) Se muestr<10 como ejcmQIOS tos 8 adenlna:
Nuclesidos-Monofost:no: 1 N M P)
Nu<"le$idos-Di fosfato: ( NDP 1
(P n(lrmalmcntt en 3' 1) 5 '. rarantei\Ce en 2') (P CORSUii\'0$. DOrmalmente S')
N
NH,
S(r)

,, J l :):N
,.,.,,
" .. .,._ l 1 }
N ' '
Q"' O NN<J
()- -Q('H,_A.
dAMP dA I)I'
b . ......_
AMP f 6 .1
AOI)
.1
ll H
H
En forma y .;Qmo
de los C"idoo
Slo en fo.'lmla libre: tienen funcin
Nuclesidos-Trifosfuco: 1 NTP 1
Nll1

(P c>n...."'CuLhi)$. en S')
y
p
"
Sl<tcn l(lt'Yl\ll l ibtc.
o o o
Son lo$ 101.S por
N
o-IL-o-l!-o-
"' ..o.
stl funci-6 cncrtica yJo
b t b t
dATP
.,;QCntmd tiCll. Adnu.b. SOtl
......
t\TP
pt\.'<:Ur:)te$ la biOS.iiMcs.iS .1
1k ddo nuclciros
, .,
lO$ nuciOOikiOS que torman pane de los CIOO& nucloico$ sen siempre NMPs oon un fOsfato en posicin s. Su
es-IT\Jctura y nomenetatt.wa se estJJdlan de forma detallada a continu:tein. Lo& nudeeldos con 2 3 fosfa1os
consecutivos en s (dloslt'IOS o NDPs y trlosf.a1os o NTPs-, dllda su imponanta funcin bloquimica.
son objeto de esrudlo en QJI'SO& de Generat otros nudetidos. oon m ra1os on mlliQies
poslcbles del azOcar. se est\dan pc)$t.eri0fmel'lle oomo nucteo!Jdros clclicoso compleps (pg. 29)
ESTRUCTURA DE NUCLETIOOS
25
3.2.2.1 Nomenclatura
lO$ s.c nombran se-gn dOS Criterios:
a) Como steres fosfato del n1.1closido. P(l( adenosina-monofosfato, guanosina-difosfalo.
etc.- (llble'Vi8CIOS.. respeC1ivamen!e, como AMP. GOP. UlP),
b) Como icldos. sustitttyendo la terminaeiOn del nombre de ta base por el sufijo -iNco. Este criterio slo se ul:litll
norrnaiMMte para tos nudet5idosmonQfO$fMo. Por q .: 6Cido adef'tllco, ciOO guan!lroo, cido undilico. etc..
(respectivameole. AMP. GMP y UMP). En el caso de nuclebsidos.-<litosf31o y .tfifOSf310. se emp6ear'lanl0s nombres
diadeni lico. tritu::!eniieo, diguar\lllco. etc.. (para ADP. ATP y GDP). Si se quiere tontr en cuel'lta que IO!l restos tosfato
eslirn ioniUK:IOS a pH rtslolgloo. se ut!llz.a el wfijo adenilato. gol'nit;)to. etc.
.rvandeoci3 <'nu .. l nomh
',s,. \' I'IUd\'iidM:
llbtc-nturllc(lmU:u.
A G u
,.
e
bm:
ndcnin3 guanina
Ul'aCiiO lim.ioo citosn:.
nuclesido: adcno$ina
guanosina uridina timidin.'l
nucktido:
adenilato. gu3nil;no. uridikuo.
timidilato, citidilato.
(tlu\'1(6si<lo
c. adt"nlico de. guanilico 3c. undlico
irc. timidlioo c. citidilio
monofo.sf1110. NMP)
oAMP oMP oUMP
oTMP oCMP
Sajo amboe critenos. pata, indic{lr de forma 11\1\s delallada la es.lruaura. &e espeCifica et nUmero y toa POSicin do
lostotfatos.. Por ej.:
adenosina-5' -monofoJfato
adenosina-3' -monofosfato
01Ciei'IO$il'ltl5 '-<li'IOsla10
aelonosinn5 lri'Osfato
5'-Menillco
cido 3'-a<Senilico
8cldo 5'-dladeni tico
acldo S'ltladennlco
5' -N/IP
y......,p
5'-AOP

Cuando 110 se especifica el nmero. impflc:ilamente se asumct que., rostmo ocupa &a poSiCin!'). En este senttdo.
tos dos UltiiTIO$ cjomi)IOS se IIO<tHan !limptemenlil comoAOP y ATP.
Esm si:stemoas ele se S(liean tanto a desoxlrribonucletielos como a rtxnJctetidos.
para tos prlmetos debe anteponerse el prefo d0$01 o su forma tlbreviada, la letta d . P(l( ejemplO: desoXJtlmldiM
rnotw)t'OS.fato. dTMP. de$Oxltlmldllato. -c!TMP.
Una forma aun ms abre\llada ele reptesentar 106 monotosfato es mediante In inici.,l de su l:>i'l$0.
anteponienOo '" lctr<t p si et los.fato se ul'le el'l5' o posponiendo la -p st la unin es en 3. Pat ej: pA. pG . pU, Ap.
Gp . Vp. Este criterio es de intets para el e,.UCiiO 6e la nicltkls. qulmlca o enzlm3tlca de los. cidO& nuclet<:Os (pgs. 35
y 198).
US l3l;llaS siguielltes resumen todos tos nucletid06 sencillos (NMPs. NOPs y NTP$) emteo:es on la ctlul,
SU$ clh;linll!$ d0:1'10mi'I8CiOI'Ie!l.
26 NUCLESIDOS V NUCLETIDOS
llMf'KLATURA DE NUCLE!niOOS SENCILLOS Pt.RINICOS
2' --adeni lato
adcnosina 2' IOsf:uo
5'-udeniLuo
ndo:nosina-S' fosf<Jlo
Ribonuclc6tidos
dcsoxi-ctc.
desoxi-ctc.
* (la dt:soxirribosa no ienc .OH en C2)
NOMENCLA TlJRA DE NUCL
IDOS SE.'IICIU..OS PIRIMIDINICOS
De:tO:\itribonuclel idos RibonucloEidos
(In dcsoxirribosa no i n ~ .01-1 en C2)
---()
<k:soxi-
"'
ESTRUCT\JR.A DE NUCU 0 TIOOS
3.2.2.2 Estructura de los nuclesidosmonofosfat o que forman parte de los
cidos nucleicos
:omponcnlt's dd RNA ( - ribont.K:Icilcidos)
Putiniooe
1
PimidinJCos


001-fu
rl)


,, 8
"8

oi-u-Ltf:
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000 000 Utl Oll
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lllil.:nltliO,
uridilato. dtidll\140.
,u.l ,.. !'AMI', A. (.\11'. (.. l. ( MI', l .
,J- j' IOO-fMO , ... f't..f...,
'<thl>ll .. .... fr.Sil
del DNA
( = dcso,ilribonuclccidos)
PurCI.OOS
1
Pirimidlnicos

o
"1{(00
Sil
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lf:.."' N
o '
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ooo
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000 000
dcli() ..,.,sen 1 L11n,
l.kll().\ sguansl:uo.
dd(,,,, llttlsdib to. dcS(). \icnidilato.
!.\MI', S'..J,"SI", oJA,
.iMI', dli\IP .,K.;,
c1 " " .n.
OLMI'.'' .!(.\.,, -.
"""'o!lll-j tof.1b>
okoovllm<don .. . ...... -(.,.f.Jh)
3.2.3 Propiedades fisicoqumicas de nuclesidos y nucleti dos
3.2.3.1 Propiedades 16nlcas
27
como oonseewia <le 1a disoeiaciOn en disolUCin ecuosa de tos grupos P, PP y PPP. fOOS 109 nuclewoe
(NMPs. NOP$ y NTPs) muos!nln un m;n(Ndo <;<1r&ctcr o\<:ido. con 2, 3 y 4 valtOS de rcspec!Namemc. En
al sor SU$ valOres e pK
01
irrferiore$ 7. w encuen11an negntivnmonto (O)IJ$!etl como Mioncs) a pM fi$io10gioo
Gracias a este <;areler aniniCO. los nudetidos forman salln <;on metales. son y s011 ms solubles en
ag153 que los l'lutlesidos o sus bases ntCrogel'l&das.
3.2.3.2
Formacin da complej os
Los grui?O$ PP de NOPs y PPP de NTPs muestran gran afinidad (IIITP 10 \'ete& ms que NDP) por callones
citvalentes. como Mg2. Mn2 y Ca2. Al estar slos presentes a alta en la clula. los NOPs y NTPs no
existen como aniones liDI'es. sino lormanclo eompte-jos 1:t. S)t!ncc:>al<ertle eon Mg2*. Sajo estas "formas
activas' (MgAOP' y (\\1ATp2 ) ambos nudeotldos parocipan en reacaones enzlmllcas de 1ransferenda de foe.fa!o.
28
NUCLESI DOS Y NUCLETIOOS
3.2.3.3 Absorcin de la luz en el ultravioleta
Los nuCieSicJo$ y lO$ nvCIOOii<IO$ mvostran el earactcristioo mllimo de absorcin de la luz en el UV a 260 nm.
debido a la OOM nitrogenada oorrespondierrte Por ejemplo. los de absontvldad mOlar (, en M t em' ) de
algunos nucle6sido9 -monolos.latoson los siguientes;
AMr> GMP UMP Th9 CMP
15 400 11.700 9.900 9.200 7.!00
/ Veamos un d(' SJIIiradn prirC.ir propiedad;
R..-nJcsc que c'$1()1; p;lr:'l e:.kul:n lla C(!nccn\Jtlcin. n p;u1iJ de l;a
t;t+ b 1 b) t absonhidad rnolar llurnada
dt molar)
h "" p11W plico
e "" coocen1,.;in molar
Una mcl(la de nucle1idos.. ob1cnida por hidrlisis <k una mucst.ta de DNA. po$1N' una absorlxtJ)('ia
260 nm <k 0.547 (mo."di\1., <n un11 de 1 cm de: pillO ptico). S..poniclldo que 111 <:omposkin de ese
ONA k a cquitlll)l;u 0'1 CWIITC) desxamlxlflutk'Lidi)s. alwlar la C(lfu,:cnrmdn m1hmQI;ar de
nut:lettdtu <n 111 mcn::l:a :mah:tJad:a.
Allfat&r.oc tk un:a rnl"'t.tla o:quin1ol:ar. el de s.:ft
E ( 15.400 t 11.700 + 9.200 + 7.500 ) / 4 10.950 M
1


e .. { 0.547 1 10.950) M = 0.05 mM
3.2.3.4 Nuclelidos como molculas de reserva energtica
Muchos nuOetidos {fundament.M'nente. NOPs y NTPs) actan en todo lipo de clulas y en rrdtitud de procesos
metablicos oomo eompuest<>!l rleos en energla. Entre elos, los nuelesldos Wo&fato in!Mvlenen como pteanores
de la sntesis de ONA y RNA. con libefacln de plrofosfato.
32.3.5
Hidrlisis
l.Ot nueleo!liclo$ y nueleOtidos J)Uedef'l sef llldtoizados en sus en medio ddo o alcalino. Esta
hidu!l!isis quimiea PoS.OO eieoo interS en el esbJdic:tde lOs tcldos nucleloos.
Nuclelido

1"(14.\lta del . . . ----- --......_ rotur:'l del
CflliiCC 111: 1da "ll.IH' hldf'hu'i .. i.':II IIIICc
__.....---\..
, Nuclesido , ----..._
Ba..<\1! Adtcar-P Bal>e-AzU.car P
1 1
A7(tcar
1'
Sasc A.Wcar
ESTRUCTURA DE NUCLETIOOS
29
3.2.4
Nucletidos cclicos
Son nuclesidO&mono'o$f.ttlo en bs que un miStnO lostato &e une a del a:cVcilr (do& OH
diferentes), generalmenle 3' y 5'
Actcln oomo $8900(10$ ttaMI'I'Iillendo sellales desde el enlomo (POr 9J$mplo. hQnnoMs o prime>S
mensajeros) a 1nterior celular .
3.2.5
"""'k
.. ,. ""'""'
f ... r.v ...



3'.5 -fosiUto cidko de adc:n<JS.inor
( e\\IP)
Nucletidos complejos
3 .s .ti)sfall) d clk l) de gu:u)t'cSina
( (o\1J>ddK\), (."(;\11' )
se engloban en este apa!'Wc.lo no componen1es de los nuci&Jcos y con
1\Jnciones dilferstlS. Que etlruC!ura!mMte Cli1leren de tos nucleoudos senoiiOG en uno o varios de los

Va.o$ grupos fos.ftel O estetifieacJOS en poSiciOnes mttlplesde' azucar (bis y tnsfosfatos. CoA. NAOP"J.
Presencia de dos nuclesidos, t.ndo6 entre si por un 'puente" de gi'\JPQS lost.Mo {FAO, NAO. estos
cJentto de ta calegorfa de dlnucleddos..
Presencia de otras b&Ses nitrog&Mdas (FMN, FAD, NAO. NAOP')
Presencia de azUcaro$ 13 ribOfi.Jranos:a {FMN. FAD}.
Grupos funcionales a.c::ionale& (CoA)
IJI'St iiSt .I\ICl\
Adenusma3'.5' .blst'os11llo
:):
.... ,,, .. ,,
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' 2' .)',5'.trhf(Kf' ei(J
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30 NUCLESIOOS Y NUCLEn DOS
' OP'Cll\1 \ (i RII)O>,
Mononudeudo <k tl:mna. Dimtelt,,d() de ll:l\ ul:l '} udttum. FAO:

<ilrnb>oe
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,,,,,mm rt''IDIAU de ,.,. N:\ o ) ,, 1
b
Tema 4
Estructura primaria de cidos nucleicos
4.1
4.2
4.3
4A

4.1
Aspecto& ,,,,,,,,,,,.,, ........................................................................................ _,,, .............. 31
1 1 Niv<ele$ estt\ICt\lrales ---- --- .,.,_ .... , ...... ,_ .. ,.,.,._,_,.,._, _,.,.,. .. _,_,,,.,._,_,_,. ,, .. ,._, _,.,.,._ 32
Estructu r:.. pcirnaria . .. .. .. .. .... . ... .... .. .. .. ..... .. ................ ...... .... ..... ...... . .. .. ......... .. ....... ....... .. ..... .. ...... .. . .. .. .. ...... .. .... . 32
Formas de repces.entacln lineal ....... " .. "'""'""' ''""'""''"'' '' '''' '''' '' ' '' '' '' - .. - .............. 32
4.3.1 Ftrtwlacompleta... ... .............. , ------- ... ,,._, _,_,_,,, ................................. 32
4.3.2 Representaciones G<SQUemticas .,., ......... , ......................... .................... .................. 33
4.3.3 Representaciones abre-nadas .... ,., ..... ,,., ..................................................................... 33
Dos tlpos de tic:idos nud eic:os s.gUn su c:on'lposi-cin .......................... - .................... - ......................... - .. 3J
Propiedad$& fisi c:oquimic:.:..s de los ic:.ldOS ......................................................................... ....... 34
4 S 1 en disoruOIOI'I............ ................ ........ ................... ... 3<11
4.5.2 Reac:llvldad .................................................... ....................... ,_, 34
4.5.3 Hidrlisis qulmlca de ec:idosnucleicos ........................ , , 3S
4.S.3.1 HidrliSIS Cida ,_,_,_,_, ,................. ........... .... . . . 3S
4.S.3.2 H"ldrli$15alcalina .. , .. , .......... , ... ,.................... .............. ............. 35
4.5.4 Abso..-on e-.1'1 el ultrtwiolela ............. ................................. ........... ..
36
ASPECTOS GENERALES
se OOiltide' & que los !Oti'IWl pane Cle lOs el grupo mils
de hell:roproteidos o "pfa.elnas entte lOs que tambin se nc:tJyen gllooptO(eKbs y ltpoproteeoos
y, en ocasiOnes. tan'l>itl losfopt()(eks y cromo- o meta!oproteldos. Efectivamente. bs nudeoptoteedo$ resultan de la
lntetaoclon. mediante enlaces elec:lrostllliC06 fuenes. de los residuos b&ioos (cabni006) de oenas proteinas (histonas.
y b5 QNOOS fosf.ttto {aniniOO$) del t\CJdo nvctcioo El cs.ludio de osttts 3#ocitl(:o()t'Wt$
nU(;leop,oteic:.as se htlr vez OOI'loeida la esttuduta ele los cldos nueteioos a todos sus l'liveles.
POt su eomposJeiOI'I qulml<:a eleme-ntal (C. H, O. N y P), denvada de la pre5en<:.a excluS'va de nucleotidos en su
esuuci\Ka. bs cidos nucleicos se dif8f$11Citm de las protelnas. esenoalmenle. en su m<JYOr conten.do de fsbo (10%)
y en la ausencia \Otal de azufre.
en
(v<W'IO$ crcmosomct:5).
en m;Jtriz mitoconctri<ll y
en estroma da
en
(temporMnente),
en cilo$01.
en motlrit mieocondfil'll y
en estroma de
en 1<'1 zona
del cilo$01
(un <:romooomt\ y
vanos plsmiclos)
c&pslda
(en ottos tipos

..
en
la lnfom\ttCin de50e el ONA
haSta lOS prOOu<;I.O$ gniCO$
ESTRUCTURA PRIMARtA DE CIDOS NUCLEICOS
Exl$1en 00$ 111)0$ O& &eido$ <lenor!WI8dos ribonucleko o RHA y desoxlrrtbonud elco o ONA, que
difieren en 109 nuci&Qiidos COn-()Otlenlet;. Atlte$ de <IKcribir so estrucl\lra. recordemos brevemente que ambos cidos
nucleiC:Os se encuenttl'll en k><JO ti>O oe oeu&s. t31'1tO procariotas como eucariotas: oomo excepcin, los virus
slO ONA o RNA. En lodos los eot$0S, sus <ivor&as funciones en la transmisin y expresin de la hformacl6n
gen6tietl vienon por su localizacin y su estruaura de Otden superiot {oonformacl6n

4.1.1 Niveles estruct urales
Desde t.n punto de vista estnJctural. en los cidos ru::lelcos se pueden considerar vatios ni veles, $imU;aros en
cieno modo a loe descril06 tradicionc*nente para protefnas:
Es-tructur a ptim,;ari,;a, de&erita POf la tri6n de runerosos nuclesid06 mecian.a enlaces fosSodlst. dando lugar a
un polimero lineal. El oroen de bs nuele$1!3o$ (o sus bases) en In cadena define 1(1 dol ic:iclo nudeioo.
Estructuro sec:undaria, oon la Que se il'*.::ia el N!lisis t$Pt'lci31 dt 13 l'l'l()lt(ulal. comu;pondient a la c:onformac:i6n
lOcal. es cJeelr, la disposiCin relalft'a de nuclelldos (lue esW! ()(6Jtlmos en 13 sec:uenc:ia P3ra" ONA este nivel
estruc:l\.lrat viene dellnldo por la asociacin de dos cadel\89 a de laS ba.Se:!l nilfogM&daS que
&Obre&alen del azccw-losfa1o. En el RNA slo se presenta en detennnadas reglones de la f'f"dcula.
Estrvc:turas de orden suP4tflor: Se engloban bajo este trmino gentloo IOdas aquellas estruauras
tridimensionales que surgen a partir de bs niveles primario y sec:undario. En eucarioLas son c:ompleJ&s. variables y
en ocasiones escasamente conocidas. En el caso del DNA pueden aqul las estruCilJras te!IUilantes del
superenronamlento y de 1a asociac:in c:on pt"Oiefnas bsleas para totmar la cromaN. Sin embargo, y a dderenda
de 10 que ocurre en protelnas. eo ganeta! la estruCil.lra adoplada a este nivel no vler\e delermit'lada por las de los
niveles Inferiores. En el caso de algunos RNAs (especialmente lOs lANAs) se un plegamiento trldlmensblal
bien <!efndo. equiparable a la estru<:Wra terciaria de las potelnas. lwn en este caso. no se observa una estrucWra
cuaternaria, ya que dicho pl998f"ienlo slo afecta a una rncMtwla y no a varias asociadas entre si, c:omo en las
proteklas.
4.2 ESTRUCTURA PRIMARIA
la e&tructwa c:omn Pt'lf<'l y RNA$. consi$1c en la J)tencit'l Cio C3<Sor\M, larga$, de
cattlcler 1'1'181CroMOieo.Aar, kitmedas por la tr.iOrl de nuctebsldos mediante enlaces cova .. ntes 3'5'fosfodlster. Por
tatiSO. la uniOM es el nudetldo, o nuele661dc>11'10f'10fosfato (generalmente c:ontemplado como 5'-NMP).
Los nudeioos son. por tanto, pottmeros de nuc:letldos o potlnuc:letldos, con t.Wl esqueleto ll.neal
oor allemas de foslato y pentosa (parte oons&ante de la secuencia), del c:ual sobtesalen lateralmente
las bt'lses (pat1e varia!*!>, que define la secuenc:U), unidas al azcar respectlYO por enlaces n.glc:osktic:os.
Por convenio, ta secuencia siempre se Indica en direccin 5' ... 3', es dec:lr, con el extremos terminal (5'P) a la
Izquierda y el exlremo 3' terminal {3' OH) a la derecha.
j j j
5" .. -P-ok -P-oJa-P-oJ..-P-ola-... 3
Dentro de oste o&truct\.1111 110 esWdior6n a tas 6istintas formas de repteSentaeiOft. fas
on c:omposiei6n quimlea de los dos tipos de ddos nuc:telooe propiedades ms represenlativas.
4.3 FORMAS DE REPRESENTACIN LINEAL
P\ledon emplttaf'&O 6 niveles. de SiMJ)IitleaeiOr'l creciente. En general. se haoe uso de la letra Inicial de las
bases, en JNirtl representat a Sias o a sus nuc:tesldos. El c:ldo nudeioo propuesto oomo ejemplo
RNA rib0$:1 y baSes: A. G. U y C). pero las representaciones son Igualmente valdas para un ONA (azcar:
dosoxirrib0$3 y bases: A. G. T y C).
4. 3.1 Frmula completa
P<lt r<U:one$ do y fundamentalmente dldccas. es aoottSejabie comenzar con una representac:ln vertical
del esqueleto del cido nuelco (notac:ln 1 en la f9,wa). que permite apreciar c:on de1alle tos .-cos fosfodit,.er ftllre
nucteOsldos oonsewclvo6 (uniones azc:ar-lo$fa1o) y 1o'l situllc:IOo perpeodirc::Ww 1111 esqueleto de lOs enlaces
(uniones mM!Mier 13 orlenb'ICIOn S' .... 3' , se slllla el extremo S' P parte superior
y el exnmo 3'.QH en la infeot.
DOS TI POS DE ACI DOS NUCUI COS SEGN SU COMPOSICtON
4.3.2
CO\IIII'n!c
liftefll de

l...L)
:\\
\
\
tsq11cleso
!p.>ll( "'''* '!

...r;;;;;
l...L)
Representaciones esquemticas

1

1
l
h



33


,. ,.
0
A
G u
("
<Q
f
s s
V
f'o'
Q)AGUC
,.NNo
4 pA,CjlUpC
5 oAGUC

t\GU<"
Como peculiaridad ese representaocl6n. el arillO furanbsico del IIC $1mplillelll tnediante un SOlO 1razo
cuyo exttemo superior corresponde al C-t ' y el infiof al e-s (notacin 2 en la figura) .
En una lorma aun mas SlmP'e se omiten lo$ tosfalos intermediC y la de 1os a.We&re$ {notacin 3).
4.3.3
Representaciones abreviadas
La n ovede aumentar il'ldlcando cada nucle6sido mediante la tslra niciall de su base nitrogenodl'l {11)
nioo variable en la El polinudetido reducido a una SuCle$in de letras mayso.ia& fllercaladas
con )elras p minU$Culas (notacion 4). El ext111mo 5' P (a la IZquierda) vieone represcnlado por un3 IC!nl p por lb
del pmor nucte6Si. El U tl'iltnO 3'.01-i . a la derecha. v.ene dado DOt l<l le!ro del Ultimo nucle$ido Los
intermediOs tevan lapa Izquierda y derecha, correspondientes a las poSiciOnes s y 3',
En la oesctipcin ooddiana de 5eeuencia$ de <icidos nucleicos se supritnen las leltils p intetme<Ras, OOI'liO que 1&
reptesentaan se reduoe a una $CQJetlCi3 de letras preoedlda por una letra p para el fosfato en el eJCtretno 5'
tnolacln 5), o so il$umo &tJ pre$enc:ia del tosr-ato en 5' y se omlte incluso esa pf'lrners p {notacin 6).
4.4 DOS TIPOS DE CIDOS NUCLEICOS SEGN SU COMPOSICIN
'.''1"0 u,.:
-'cdo oocloow
ddo rlbonudeico (Rt"'A)
cido dl'SOx:irritfflnud(('O (l)NA)
Monmefl)!;; Ribonuehlidos Otso 1 rrlbonu det idos

enl,nm.:lu los (C'tl!:.cc ftJ:IfoxliO:stcrl
l!
Azcar Hibosa
1
r .l)es,odrrfbos:a
i
Adenina, A (6-aminopurin.1)

l'uri.llll$
!
Guuin:a. G (2amioo(H>xopurina)
f'irhuldl:u
Citosina. C
u
IJradlo. U (1.4dioxopnimidjna) 'l'imina, T (Sm<tl urudlo)
34
ESTRUCTURA PRIMARIA DE CIDOS NUCLEICOS
Segn la fl04aeion de fi'ITI.lla completa. la tepttscnl<tcin dlt ambos cidO& nucleiC06 es la slguieole:
RNA
n
A

u H,, G

"
'
o= 1
11
: l

u
e

o h.
ONA
n A

f e
T
e
b1>'oJ
Pxtn:mo)'
4.5 PROPIEDADES FISICOQUMICAS DE LOS CIDOS NUCLEICOS
los cidO& nue681cos presentan propiedades imi)Of1arrtes en relacin con &uS funciones de atmacenamlento,
transmisin (replicacin) y ellp9SI6n (transcripcin y trOOUccin) de la infonnacl6n gentica. Se comentan aqu
tweYemente algunas de ellas. relacionadas con la estruct\n, y resto se irn estudiando a medida que surja $u
aplicacin al propo e6Wdlo de estas molCUlas (pcw efemplo, la renaturallzacin de un DNA ctesnatura!lzado te
analizar como fundamento de la hibridacin).
4.5.1 Propiedades en disolucin
Las polinucleotkticas de ONA y RNA son hldroflltca&. debido a la PQ6iblida<l de lormaeiOn de enlaces de
hidrgono con el agua por parte de los numero5o& lo$f<Uo y OH libres del azcar a lo largo del esqueleto.
P<:w otro lado, a pH fisiOI6Qieo lOS grupos IOsfato f1>K. ptli'I'IO a 6) e iOrntal"' eesi por completo, haciendo que las
molculas de OHA y RNA se comporten como icldo& y tengan rwmerosa& cargas negativas. Debido a este carctet
polianinieo. tos c::idos nuc::ktiooa: se oncuenlr8n casi siei'I'IJ)f"C floOVtrali;a<So$ por interacci6n i6nica oon las cargas
de OtrM rnotoeutas.. el DNA del genoma so unido 01 histons,
protelnas ricas en Alg y Lys. carg&!la'S posltwamente a pH tislolgleo, dando lugat a nueieoprOt.eidO$; la importancia de
esta asociacin se considerar posteriotmente (pg. S.). En klos espermatozokles, el papel de las hiS1onas es
desempel\ado por pe!JJE!tlas pmtelnas ricas en Arg, llamadas protamlnas y tambin con ruerte carga positiva. En otras
ocasiones. eJ DNA se a poBamil'\aS (pt!neip8Jr'rle!nte y espermlctina, asi llan'4Cias I)Of Nlrler s1cto
detectadas otlglna!mente en el semen). distribuidas ampliamente pero de forma especial en algunos virus y baderlas en
estado de rpida prollferaciOn.. As.1, por en el fa9o T. las poliamlna& neutralizan un 40% de la carga negaUva
total del ONA. estabilizando su conf<:ln'Mcin. Por Ultimo. oomo resultado e)q)8nental de esta propiedad. la
Qn$t<IIJ:tacin de t\cidos nveleioos te facilito si su ca.ga negati'ltl $0 <Mpensa por ltt unin de iones mcltllioos.
Debido <' 1<'1 tetatNa rigidez de la molcula (en doble htioe) y a su lnmetl$& IOngilvd en telaeiOn a1 dlmetfO, las
de ONA son Mtl'f viScos.a:s.. Esta propiedad llene inter-s en relacin oon el estudio del proceso de
desoaturaiiZaeiOn (pag. 165}.
4.5.2 Reactivldad
En general, los cidos nucleicos son quirrjcamente muy estables. especia!ment& en el caso del ONA. Ello se debe
a que la desoxWrllosa careoe de grupo$ reactivos; ol 4'-0H ost c;on'Clf'Of'l'ltido on el ciorre del anillo, y lo& 3'-0H y 5'
OH ft'ln f()fTn;lnOO en1aoes fOSfodiStef". EJ RNA es algo mas reactivo, gracias a 1os grupos 2' OH, 10 que te re-fleja en
$ \15 por e,empiO, su ntdrllsls en medio alCalino, como se ver a c:ontlnuaciOn.
PROPIEDADES FI SICOQUiMICAS DE LOS CI DOS HUCLEICOS
4.5.3 Hidrlisis qumica de cidos nucleicos
4.5.3.1 Hidrlisis cida
35
Los k idos fuertes escinden tanto lo& enla085 fosfodi&ter entre nueseoSidos como tos f!I'Wioes Ni!!loosldlocos de
cada nuetetldo. P tanto. sirven P<ll'et t;:a de cases de un aCldo nueleloo, pero no para determinar
su secuencia.
Enl(tteS
Enlaces
ErUce&
Entaoes
se hdrollzan7
tos!odis.ter N-g!icosldioos fosfodi6stef NgtiCOSidiCoS
(entre nuetesklos)
(en cada nuc6esido) (entre ooc!obsidos) (en c&ea nucteSidO)
Medio cido tuene
.,
$i
si
S
.. HCi lM
Medio dbil
no sJ no
s<
(todO& o purmas) (IOdOS O purii'II)S)
LO& ;'ic.ido& dGb i'-.& rc$Pellltn tos toslodl&stet. pero tienden a tQI'T'IP8' la unin Nglieo6idlt;a. E$tc entaoe es
ms lbil con PJMO$ Que (01'1 pirimldlnas. por lo que se puede conseguir {J)Or ejemplo, <'1 pHzJ) ts.(:il'l(lil seleCtiVamente
I<'IS bNcs purif'llCM, dai'ICIO lugar a kl6 denominadO& ilcidos <Jt:1(Jrini(:os Es-ta hidr(llisis es e <:ietto inlet'l!s psra estudiar
la secuencia del ONA. Con el mismo fm. 1<\ml:lin se Ml'l preparado Oidos spJrim1dlnicos. po1
dil'l'liraacion selectiva de tas pirirr.dJnas bajo OQrldiciooe$ quimiCllt$ diferentes.

e: e: 0:
... P -dRi bP -d Rib-P -dkib-P -(JR 1b--P -d Ri b 1"-dk ib--P dR ib ...
... ...

...

...
4.5.3.2 Hidrlisis alcalina
El medio bsico afecta de distinta manem a te enliiOO$ fos-fodi6ster. lOS del RNA pero t10 lOS del
ONA; tos enlaoes H-gkosktico& son resistente5.
se hidrohzan?
DNA
Enl;tCO$

(enve nt.JCieOSidost
no
EI'IISOCS
N-gtieosldlcos
(en cada nudeS*lo)
no
RNA
.,.....
IOSSOOistet
(entre nucle6slos)
"
Ef'ltac:es

(en cada nuctesldo)
no
El RHA se '*Wellz.a rllpidamente. liberando sus nudetldos. en <tiuldas de NaOH (pH 11), Sin afectar
a los enlaces N1J1ICO&.Jdico5 l <'l tudrli$1$ de tos .-...ces azcar.rosroto se debe oto omplic&cif'l directa de los grupos
2'-0H de hl ribost1 en la Se torm<'n a-si NMPs 2'.3'Cidioos oorno l')l'(lduetos k\!ermediOs. que son
hldrollzados rilpldamente en el medio ak;alino, al azar a uno u oliO lado det cnlalcc parra dar una
mezda de lo&. 2'-NMP& y 3'NMP$
36
....
'
l

""
,.
lf dl,;tlfii.U haola.) dt
nuo:!mnl(>-1' J d d .:o
(l',J'...:NMI")
--
011
011
ESTRUCTURA PRI MARIA DE CI DOS NUCLEICOS
f'Jronplo sleliln ck
ao RNA lnll(lrCriQO por
( llMIO _.rcOu.:ktl
(un to:trwribunudc6ti<k>)
o
\-<'-
'o-
-()11
110
lllonofoSt.f.>
(2' .. '011')
110
+
l.loast ...


(l' . NMI')
El DNA, al conlrario que el RNA. es re-siste-nte a la hi drlisis en medio alCalino. EIO se debe a te. ausencia <10
grupos Z' -OH en las unidades de desoxlrrilosa, k> que Impide ef expuesto anteriormente.
4.5.4 Absorcin en el ultravioleta
la wnlllll.ld en el vsJot maxlmo de absol'banda de las dlstimas bases (pg.. 17) puede utiliZarse no s:6b para
detectar y cuantlftcar aas bases. lOs nueleskl06 y lOs nudelidoe, Sil'\0 e64)E!Cialrnente para determir'lar la coooer\llradn
de lOs acldos nudeioos. De hecho, es et ptocedlmlento eomCinmente tAilluldo, a pe581 de M ser el ms exado. Basla
con medir el valor de A:.o e.n una dlsolocln diluida, &ufldentemenle transparente. de ONA o A.NA para poder calcular
su Sin embargo. es la realizaciOn de algunos leniendo en cuellla la
poSible contamlnaeiOn con protelna&. cuya ptesencia contribuye a ta eb&OI'dn y, por tanto, lnterl'.ete en eeta
determnac:in.
EMctivamente. aunque bs mlOO'Ios de absorci6n son caracteristicos de cad<l uno de e5105 oompuestos (260 nm
partt c\cidos nucleicos y 2ao nm para ambos absoft>en en ciorW modi<l& a las do& longitudos de onda. Por
ejemplo, 13 ab5ofb<lncia de tlt'O'einas a 260 nm e.. par3 igual unas 20 30 vttees inferior 3 lt1 de lOS
cidO$ nucleiOO$. En la l)(tletlea. esta slruacit\, se deben emplear ambOs valores oe abSorbaneia
(A
260
y Aao) podel c:orregir la lnt.enererw::la murua y asl las oor.eenttaclofleS de Cido
nueleloo yoe l)rotetna.
Tema 5
Estructura secundaria del B-DNA
.5. 1 de b.:lsea nitsognadas : de Ch8tgaff ....................................................................... -.... 38
5 1 1 Algu!\M en1re bases son Iguales en todas las especies 38
5.1.1.1 Retaclbn emrebases .......... ,.,_ ..... 38
S. 1 1.2 RelaciOn entre punnas y Pft'l'lidiNJ:S .... . .. .... 38
5 1 . 1. 3 RetaeiOn eoue a!TllnObases y oxobases......... 39
S 1.2 (eladooes SM dtferemes segn la especie ..... . . .... . 39
S..2 Modelo de watson y Cr lek: forma 8 del ONA ................ ,_ ........... - .................................. ........... ........... ,_ 39
5.2 l de l<'l$ b3$(l$ nilt()genadll$ ... .... . .. - . .. ......... ....... 39
5 2 1. 1 COI\Secueoeias de la complementar\edad . . .... .. .. . . .... . . . .. . . . . . a 1
5 2:.1.2 Efeetode.l pH sobte el apareamemo de bases ......... 42
5.2.2 Geometrla ae 10s pares de bases.... ... ........ ... 43
5.2.3 Anbpera!elismo de tas dos hebqas . 44
5.2 4 0 1ferenci<a s. en la 5ecuenci<a de ;mblls hebrol'i .... .... ...... -- ...... "... .u
5.2 5 v dotr6glto .... ... . . .... .......... ..... S
5.2 6 Perftmctros cuant1t:JtivO$ <le la <.IOble Mlioe ....... - .................... -- .......... - .......... _ .. -- .a&
5.2 1 C3nictcr l)miplcl!oo de la doble ht:hce . . . ...... ... ........ ... ........... ...... . ..... .s1
5 2 7, t ele 10$ (0$1StQS y cart\clet hi<.lrotmco........................ ..... .... - .......... _... 47
5 2.7 2 de &as bases y catilcter hdrott!co ..... ....... -...... .... 48
S 2..8 Superfl(ie de 13 molca.lla SIA'lXIS e-1 ONA ................................................... ............ ............... - 48
52 9 SignitlcMo blok'.lgk::O. JCb'leldad para la ........ . .. ....... ........ .... .... .. . . . .... . .... 49
El t)()f 4ll18et;l6n di) X
sobtt el C()(H)Cimien!O de \3 S.ruUf<'l $0CUnd<lri3 del ONA DeSde
sus IniCios se observaron, lncllso en muestras Impuras de ONA
d!auetlo, sel\arJes que oorre:spol'ldlan a un espaciado regular de
0.34 nm a lo targo de las fibras ele ONA. En los aos 50 se
obtvvleron datos mis preci&OS, con muestras de ONA mM P'KQ y
h<tolondo uso do lo:;. mtcx.Jos dO de ruyos X, ytt S(!
habian desam>llitOO para el estudio de prOleinas, A I)Mir
de los p!l:tc.>n<l$ dcJ difr;:tC;Qn. QQncle m3neh;,s
en tQtma aspa indican ur\3 hellr.e y laS;
band:lt en la parte superior e lnfetlor indican la repetian
peridica de eslttrCiuras. &e condu)'O que: la molcUa de ONA
eslaba formada por dos cadena. <:on una disposlCiOn tlelieot<lal y
oon una doble periodiCidad a lo iaf9o del ete de la nllce, Cilda 0.3-C
nm y 3A nm
Por otra parte, la qulmlca de nucle61idos perm1tla conocer la
exrslef\Cia de Interacciones hldtofbiC86 por ap4amlenlo. as$ como
'
-
)

u ....
- -
-
la SSOClaCIn mediante pvenles de nidrgeno Todos estoG daiOS eJrperimenta\es, tOnto con ef ana!iSd
de k1 PlPPfQQ6n de las bMc:s de la moiCCUiil <:uyas c:onclvsiono:s. so elq)Q(Icn 01 conbnUao.n, y la
c:.ooslroccin de moleculares. sirvieron de base para la prop!.IG$ta por Watso'l y Cnc:k de ta efJtructura de doble
MliOO. de$CripQ(Jn t:t objelo jlnnp<ll dt C\UO tl)mtt.
38 ESTRUCTURA SECUNDARIA DEl. 8-0NA
5.1 PROPORCIN DE BASES NITROGENADAS: REGLAS DE CHARGAFF
A pesar de que la COf'lllOSicin de bases puede perecer un aspecto ligado a la eslructura primaria, su estudio se
en este temtt por eMar diroctamonte relacioflada oon la esttucwra secundarla del ONA. En un ptlndplo se
et ONA formado por iguales de 106 cuatro nuclecidos A, G. C y T, y que la unidad f\lndament&l
..a el MS!tt Qvt El\00 CNrg3tl . et'ICre otros, obset'o'6 dirintas propcwciones de los 4 nuclecldos en
<ivorsos Ccncrclametlte. lO$ ONA$ aislados a partis de clulas o tejidos dlferontes de distlntoe indMduos.
dentro de ooa misma espeCie, presentan idntica composicin de bases. que adems no cambia con la edad, estado
001rici011al o variaC*:ltles del et'ICOmo l..cll oompoS:in del ONA e&. pot anto. caracterl&tice de e:ada especie. A partir de
e$0& dorios se formultuon un<t& rogtu o $ObrO 101 de baM$ del ONA,
que rueron 1:1 para deduCir su estrud:ura en dOble
Composicin de bases Relacin entre bases
f% moles1 Purinasl
Rclat:IOn de
Pirwniclr'ltls aslmcrlrla
A T
G e
A .li. .t.!ll. .6:1.
--
nrnna Guanina T e TC
GC

""""'
30
29,4

19.8 1,06 1.01 1,03
U>
"""'
29,3
28.3 21.4
21,0
1 ""
1,02 1ll> 1.36
.... u . 23,<4
2M
20.4 1,01 1,00
M2
1, 30
Galine
23,8 20,2

21,5
o ...
0,96

1,33
>1
T011uga
29, 7
27,9
22,0
21,3 1,06 1,03 1.05

.. _
29, 7 29, 1 2<),8
'""
02
.02
m
1,<43
ErilO ele mar 32,8 32.1 17.7 11.3 1,02 1.02 1,02 1.8.
Sacton..s
E&CI'Iel'ietlia COl
2<4.7
23.6 ... o
, ...
1.0$ 1.02 1,03
0 ...

Staphylc:ICCocus aurei.IS 30.8
29,2 21,0 19,0 1,05 1,11
1.07
porlnn99nc
,.,.
:>0,3
1<4,0 t2,t
.02 ....
1, ..
2.73
"""""'-
21.0 21.1 29.0 2U
1.00 1,00 1,00 0.73
safdne 13.4 12.<1 37,1 37.1 10& 1.00 t.02
0.35
VM
Fago (monol\lllf) 24.3 32.7 24,1 18.$ 014
.30 o .
1,34
Faooo174 lonna
... 3
, ...
22.3 22.> 1,00 1,00
.oo
1,1$
tEI()IIcltllli.l (l)lliar
5.1.1
Algunas relaciones entro bases son iguales en todas las especies
A pesar la COfTClOSicin varia eniJe e$()ft(:ie:s, en todas ell&$ se ciertas relaCiones entre 13$ ba$4'$,
kwmutai:SM oomo las tres l)tWneras rog!M do Cl'\;lrga1f, que $C CJq)c)t'letl a OOI'Itinuadbl\.
5.1.1.1 Relacin entre basas
En pracbcamente toda$ las espocios,., QQI'Iteni!;So ese A se aproxima a1 de T y e1 cntonido de G a1 de e :
A " T
e e
Razn Aff TI A A$
Razn GIC " CIG "
Esta fue Her<;i;'lll oue W&tSOtl y Crlct: postJJiaaert los pares AT y GC. que detlnen la
oomplementariedad de bases en el ONA de doble hebra. Hay que es.la regla no se cumple para las poca&
e$Peeles cvyo maUJJr, esta IOn'roaclo pot RNA o DNA de hebra sencilla (oomprense en la tabla 106 ejemplos
del virus 174, en 51.15 rormas de hebta sendlla y de doble t.ebra).
5.1.1.2
Relacin entre purinas y pirimidlnas
Como consecuencia de lo anc.riot'. el oon!enido Cl'I'MS putinicat {A G) se aproxima al de bases plrlmkl nlcas
(T + C}, es decir, hay un 50% do I)Jrint'l$ y un 50% de piM'Ik1J\&.s:
A+C * T+C
Razn (A+G) 1 (T+C)
"' 1
Razn purlna.s / plrimidlnas 1
MOOEL.O DE WATSON Y CR. CK! FORMA B DEL DNA
39
5.1.1.3 Relacin entre ami nobases y oxobases
N observarse QI.Nt A/T-= CtG-= 1 ltlmbib'l se h.tl (por razones QUe t
(T +G) = ' Por tanto. puede conduir$&. c::omo tttaOIOn ($1rt un signdkado especial). que:
8--aminoplnl(l$ (Al+ .!.;;ffiinopnimitlinas(C) 6-oxopurlnas fG) 4-oxopwmid!nas {T)
5.1.2
Otras relaciones son diferentes segn fa especie
de .:t slmehla.
A- T
Ci +- C'
que. adems de tener oo vator d-'orente paro eaa ospocit, no -10 a la unidad como !.MI mmoes anlerlorea
(..-er labia). Por ejemplo, "" la de: as.melri& !!':S s.etnpte a uoo; lo rr;-smo oourre en planeas
superiore$ y hongos Por contrsto. en baClerlas y virus 10!1 valores son mucho mas variados &Uperiores o nf9:1'\10te$ a l<l
unid<Jd
Ltt p.tode caleufarse directamente a OOt conton.!o 9n p<trbmcl!
en otros t.IIX'$ de! C$1\1<110 como la desnai!Jrallzaan de1 ONA:
Oe acuetdo con ello, los .,,,mates. p1an1as sopenores y nangO$ muestran un exceso de Al (50-65,.) soDTe G+C
(so.3S%}, tmi,WI.Ir;as <l\IC: en bt'ldl)rias y vrus se apreda la gran variablldad en. G-..C (ts-25%)
A+T
o u

"
ZH
,_
G+C
"'

.,
'"
'"
"'

Virus
B11.<:1<:rla.i
Protw:oos
1 loogos
En con e!IIOs estudios se ha obServado que los ONA9 de especes 8\folub.vamente llenen
de as.n'let"'- s,m,lar mien1ft'IS que tas especies l'l1lfY tleoden a tener raz:On d!ff!fente. A pesar de
sw mel'll)$ (:OI'IQCI(Ia <".e laS- Ch:trgaff, el hecho de que dstlngulr entre espeCieS haoe que pueda
como Ctitefl() en las relar.ones evolullvas y las clasificaciones laxonrr.:as de los organiSmos.
5.2 MODELO DE WATSON Y CRICK: FORMA B DEL DNA
B modelo tridiroonsion011, como ostructvra de refet"Cnoo \ls detONA., rue posl.\llado iXlf James
Wau;oo y Ftaoci& Cnck $n 1953 Com:l$ponde a&.., donomWI.ilda form; 8 dof ONA. lit mils tomUn en las
ofiulas v la mas establo de lCII5 que puedo adoptar vn ONA balo !:$te modelo se bas
taPio en tns obseN<'tCi(lnt$ por ;wos X <::omo (lfl las do Chl:lrgt'il! y, I)Of tanto, os!J: de <tc!.*W c:on oJios, O'lsi como
o:::.n Otro!; estudios reabzado!l un gr-an n(lmero y variedad de !Sb ptopuso 1:.
adecuacin del f1'IOCtek) a la fooc10oalldad de la molcUla de ONA para lB conservacton y transmls16o de la inletmaein
genebCa (pttg 49). las s.guentes caraete<lsticas bSIC8s
5.2.1 Complementariedad de las bases nitrogenadas
Ut quimica de tas bases peonlte la formaeiOn de por de l'litlr!)e'no (dQ$ <'J!Qmo::;_
electrooegatlvos, oomo N y o. comparten un 1omo de r.:frgeno). En concreto, dos nuclelldos pueden lnteraeO()f'W
de forma esped rlca rned!ante dichos enlaoes y se habta de "base-s .. paru de .. o
do b;J$1!-.S''
40
ESTRUCTURA SECUNDARIA DEL BDHA
P.,.& un;) mop comprensi6n de 1<t c:omplemontariedad, es conveniente establecer unos Ctlterios prevbs en cuat\10
a 13 ewiMa de lO$ nt.ICietkiOS on <:ada pareja e basM.. Se trata con elo. &impemente. de faa.tar la esct'CX:In de
unas estructura$ relattvamenco oomplejn
A
T/ U
G
e
n'fl La b.)l;
'"lbl t c-1 )1; (l'l(llnona
J tt
la bii'C in.dll I!W'
3-lrnkdor okl enbl:o:
ellll'l el cankk-1
OOnador o IIC('fllor para 1& fonnllt'Jil
<k p,M'I'llcj de ludr6gcoo:
' e
1'
,,
' . '
"'
\ !" ''" ll
' 11
bu base
lejii,J, 111:1 ..e
.:o)Cit;:.rmn.:ill 111ml
f (lnnula.sprnilltt l llO
sobre ...
SIJUC

MODELO DE WATSON Y CRICK: FORMA 8 DEL ONA
(:7\ Al re'lre,cow uo par )C tu'lpk--J la f.1n'lula de upo : parot<l ''nundo ._ y b de IJP<J J
\.2) p.r:l el a la o.kfet:ha (ambas cooronn.-wM)n .rntl)
Ado:n.:ina )" Tmilll (0 IOI'n'IM' 2 cnbo:o,; por pucnk dt bidrgo:n..r.
0 del crupo <"-Ocn ('-t dcT 001.1 H def XllzmC-6dc A
llcnNJdo:T N l ckA
H, _.11
'
(11

TfU
"'' N
b
A
ftmui;J $oCJin
Cnltriu (2)
e
()
Gwain:. y puNto iurmaf 3 por '*""" o):
ll dclppoNUz cnC-'IdtC oon
:-..; de(' CJOD llo:n do: G
O do:l srupo ('..0 C1l Cldt C oon H del s.ruJ10 omina en C 2 ole G
11.._ _.11
tx
N O
d
41
la& interacciones ptimas &e forman errtre G y C (lrC$ ei1MCCS dt y e-Mre A y T. O biM A y U (dos
eriaces de t1idr6geno). El par G C 9$1ableoe asi una inter;ac.ci(ln 11\bs fueoe (tue ef par A T (en et ONA) o el par AU
(M el RNA} OOOrve&e e siempre se fonnil un do hidtgeno el'ltte tos oos atomos de N nucleares. mientras
qve lOS rMtar'ltes se torman entre un grupo amlno exoc:lcAico y un grupo carbonio.
Son taMDin 1)0611lole1i otros apatOOmlenlos entre bases. denominado& de tPO Hoo9st99ft". Que <aparoocon mono&
frecuentemente y no forman parte del 8-0NA. Por eje!T!Qio. B;n el RNA (Wg 73) , en i<'l$ ln(liiJ$ hliCC$ de ONA o RNA
(_pag.. 60) y en la interaccin cod6n-anticodn (pt\g, 296).
5.2.1.1 Consecuencias de la complementariedad
Gradas a 1<'1 descrita. dos cadenas polinudeotldicas &e pueden asocaar siempre y cuando
todas sus bases sean oornplementarlas. Este apareamiento oompleto de las dos cadenas da lugar a un cido nucleioo
de doble he-bra o doble cadena. e'SiflJctura habual dal ONA. Esto quiere decir que siempre que en oo. ONA eJOSta A.
G. CoTen una cadena. se encontrarn T. C. G y A. respec:6tamente, en la otra,
Es l.,..,ortaf\.le destacar QUB; la oomplementariedad entre las dos hebr<ls del ONA. El$ fund<wnental su P3J)I)t
romQ portador de la informacin Por- un ttldo. POI'QuO se reduce posil)iliQtld se rnOdifiQUef'\
qvin.e&mentct Por otro, porQu& 1-aOiila ta eorreeciOn de mutaCiones y de errores prOduciO()g la replicacin del
ONA. Fil'l8k'rlente. porque la lntorrnaCIOn est en cierto modo duplicada, aooQUe las secuencias de ambas hebras san
<iferentes enve si (p;ig, 44),
Adems. la exiSiencla de la complementane<lad elq)llca las de Cl\arQ8ff (pg 38), y jusbflca dos
carac:terls1icas estructurales 1mportantes.la helicidad y el antiparale!ismo. que se ms adelante.
42
ESTRUCTURA SECUNDARlA DEL B.ONA
1
5.2.1.2
lluscrdOO. mediante ut1 ejt1npt.o lup(llil.co 1:1 del ONA humano. de
cc'lrl1o0 1:. dobk hcl:m del DNA pcnni1e c::(plicnr las reglas de Oargaff:

%motes en % tnOies en
"""" 1
hqbra 2 la<klblehet:lr.t
Regla oe Ch8fgel1
......
, ....
"'"
, ...

""'-
COCiel'ltes COCIEII'II&S
A 32
"'
30
T
23 32 30
RelaciOn entre
ba$e$ !ndi'o'ldualt$
G 2S 15
20 A:T,C--G
e
15
25 20
AG =punnas 51
43 50
Retac!On enve pumas
C+ T :pi!Wiidin'"'
.,
57
50
y pitlmlcJirlas
puriNI$ 1 pmmdin&ll 1,33 0,15 1,0
AG/C+T 1
A+C = amintlba&e$ 47
53 50 Relaci6tl enb'c
GT oxocases
"'
47
50
amnobases
yO><OOa&es
amino / OXOC:IIKM 1,08 0,92
1.0

El llpl'n!llmjciJio iqllica que el conacniclo de 001.1 b.,llC en una hcbrn lv de liCr igual al \k su baso:
complerncntan:. en 111 otra btbr.t.. POt" o!'llb. reg.J11s de Cb:lfi11ff 111e cumplen n :mdo tiC ounsidtrn In
composklfl lo4111 dtl ON1\ dobk brbNI. pero no pata ead11 beb.-. pM" separado. ya quo: c.- cMc
Ca$0, .'\ s T y C (i. T:Unp(K'O $e Cumpll'll relll$ en kJtl llUCkiOOtl de cnh.."NI KDCillU
.. RM y ONA v/rico), doode A wt U. A T y C-. G.
Efecto del pH sobre el apareamiento de bases
1
Los cambios de pH, al afectar a la Ionizacin de b9 grupos funcionales de las bases nlttogenadas y al equilit:>tlo de
&autmeros. modifican las posibiliclades de forman de enlaces de hidrgeno y, por tanto, eA apareamiento de bases .
...... n )
"'"'a )'
'""'H"'--u-}' N
T-A
}-.-u-s
.. . s"-
u-A
s-" o"
"'--K"'
N (-}_'1
/o,-i lt"" N'
/i \:.N '
/'ie '-=,. N,
pHoJ 1Ha::7

'\



c-e
_::::K-1,
l' -
t ... H_ )-N
1 -e_,._')-,
'\,
\o
Como oon$0CI.Ieneia .., valOreS de pH o superiores al fiSioiOgiOO el menOI' nmero de enlaces de
hidrgeno posibiC$ I)I'()Yoca la de las hebras componentes del ONA, fenmeno denominado
dO$na1uralizeCI6tl (p&g. 164). No debe conl\lndlrse es1e efe con la hidrlisis cida o alcalina, ba;o condiciones m.ils
extremas. de las 00 <.\<:ido (pAg. 35).
MODELO DE WATSON V CRICK: FORMA 8 DEL ONA 43
5.2.2 Geometr1a de los pares de bases
A pesar de la dlfM:ullad de vi&ualizar !al geometdn <Je un de bases el'l 8ttSer'ICia de un CfiOOeo)() cercano a la
rNOOad (modelO trJdlmenslonal, sea material o informiltico), M OO$crlbe a COtttii'W.JaCiOn de 1a forMa mas l'tel posible.
La fort'r.aclbn de un enlaoe de hidrgeno roqvie:re 10$ lrC$ $tomos implicados (dos electronegallvos y U'l H) se
siten sobre ooa linea recta E&1a condicin $61o So9 evmplir Ol.lal'ldO lOs <lO& el'llac:es Ni;IICOsidicos de lOS
nuclesldos co,.,.emenlarios forman ;ingviO, a oct. oon 13 linea que une los C-1 de ambas
pe.n1osas. E$1a geomelria del par de base$ detetmin3 13 <li$PO$iCi(l(l espacial relallv'a de las dos hebras en el ClNA
(hellcidad) y es la causa a nivel molecular de 13 de SUI'CO$ menor y mayor en su estruci!Jra lfldlmenstJnal .
ambos a&Q:tos so...-.ali:z:tn en detalle ms adelante {pgs. 45 y48).
rcprcscntac:i n bidnnc.'1lsional
del par de
modelos tridimcn!:laQnales del par de nuc:kudos
1 no m11n.1liltll...: 11)

\ &+ o
N - t-1 O N
x.-..pcc.Jicular a
la base ( d O anuJar queda btlcis
atrs y el PS' h3cia dcl.amc
reSJ)C(IO al plano del papel)
n .. .
e \ :t ....

?\G
, , ,.. "1\-
1
... , r" "
l} -
e, ,-_ .,. .--!-'\; ... -. e,
.....
...... ___ ,
Gn conclusin:
dcsoxittibosa Caloi a
la base (el O anular queda haci11
delante y el PS h11cia 111rs..
rcspce1o al pl11no del papcl)
...
Todos los p:Lrcs de bases prescn1an una g.comctria s1mlar,
definida por.
longitud de lo.,c; enlaces de hidrgeno
entre las pcn1osas de mnbs
ngulo entre los cnlnccs glicosdicos )'la li ne.n C t '-CI
Una ostable<:idos lo5 enlaces Oe hidrgeno mttiple:s, &as di,...ncias entre m tomos los kwman son
pr(lcticamenle iguales p."lra los CII$OS ill &iompro ......., PIJrina con una pirimid1rta, la
separacl6.n en11e las pentosas de ambas hebras taf'I'Cifn se manuene constante Solo de Mal\era (dlsta1'1Cia
oonstante entre las hebras. hdependlentemente de su secuencia) es posible ta asociacin tol'lbl'lua de tas dOS cacJenM
para formar una molcula de OHA doble.
44 ESTRUCTURA SECUNDARIA DEL BDHA
5.2.3 Antlparalellsmo de las dos hebras
Ya se ha ncicado que el apareamiento oompleto eotre &es dos hebras exiQe que sus secuonCJN sot\n
compklmentaas. Debe al'ladir&e ah01'8 que estructuralrnen1e e!Uo slo se puede conseguit Si ambas l'lcbms $0
di$900Cn en senticlos ()JNfliO$; a una avanza de 5' a 3', la otra debe t\acerlo de 3 a S'. Se dloe que las hebnls llenen
polarictad opue!Aa, o que son El concep(O de va, pues, esuec::hamente lig3d0 c:se
complementariedad
5.2.4
'o'
e"!
n
j .;o
'!.


Diferencias en la secuencia de ambas hebras



!lo.

<.li:ninUt. ._, IC'!Ido <ll
d ml5nll) ,mi., L'<mlo)

S'!TCCC't'CAC,.J. 1n
IJ')


ko;on.,.,.inlo>
JOellboW un:. dl! 11 )'
> llo.:lltlldC'J'
Co)mn. tkl :.C)Ih'C'M)
d b
WO:UC'J>n.l dC'-
.:lll&:oa)
Debe desta<:arM que lns dos hebras de un DNA. complementarias y antJperalelas.. poseen secuenaas t.o&almente
<:trererrtos. oomo &e J)Ue(le Yf:t en el i.CI:Imo mostrado. Es son hebr as no ldntk-.as. Este nacho.
si""C))e pero que a menudo pasa lraacM!rtldo, es de gran trasoendencla; en concreto. en el proceso de
lr<\nscripein, molcula de RNA que se sintetiza es completamente diferente segn cuAl de las dos hebras del ONA se
transcriba.
En ocaSIOnes &e utaza el ttmino MINaS refirindose a aquellas reglones del ONA en l9S q.se una<
las llebfae contiene 9Jat proporCin <fe purinas y pirimldlnas. Como consecuencia, la hetlra oompiemeoteria es tambin

tle"bra 2
tm.J,.. __.A
r.wt ,-"- hcbr3S "t!quilibrndas-:
o/II(A {j \...t.n.l .. %(T (_')hfbml .. so-;.
=
como otmsecue:nc:i<l:

o/ o('r

.. %(T <'>...:tnl
- C- A-A- G-G- A- T-G-
- G-T- T- C-c- T- A-c-
hctwus ''no cquilibrndas":
%( A > %(1'--C"-'""''
%(A G).,.tul o!%( r C\.,.,,..,z
corno consecuencia:
>
%( 1-.-l').,tnl < %( f (
MODELO OE WATSONYCRtCK: FORMA 8 DEL ONA 45
En prinQpio, la existenCia do hebrt'S equilibradas o no w refiere a rogiOn$5 de una rnOiC\Aal de ONA,
Existe. sn e.margo. un ejemplo singular en el ONA mitooondrial humano: considerado en su conjunto {16,5 kb). sus dos
hebras son ul\ill " m;is nctt en wrina& qua ltl Qllrt\ (56 y 44%, rG;speelivamenle) A 1<' primet<J se
la lama habitualmente 'hebra pesada (o hebra W. rowrde&e el mayot tamao del 3nill0 pUrinico} y
a la otra, 'hebra ligera <o NL dt tigh()..
5.2.5 Hellcidad y caracter dextrgiro
esticas irnC)I.Ioslas POr 13 geome4ria CStl<l$ <le Mses (Que loS en13oes bar:se,
pent0$3 y tosltuo, P$9 43) que et apareamento comp1e1ooe las doS nebtas s6fo se pooo.a. est&l:lle<ier S lOS pares
oo bil$0$ suOHivos wn gir;)nOO unos con respectO a o1ros (OOtlete-tal'flente. 34.SO et\ e1 S.DNA). Como oonsewem:ia <le
13 liCI.In'lu!t\OC)r'l de eSioS giros. tas hebras de DNA adoptar\ una disposicin helieoicJal (es OeOt CBC!a hebra aescriDe utta
helice) y 18 caCie1'13 Cle 0001e hef)f1l es I.Wia "doble hl ice.
Georntricamenle, l.l"'a hliCe (genrica. no de ONA), sea sencilta o doble. puede ser de d06 IJPOS:
h('Jiccs
0.:.\"lt&ifti.

a dcn:cha:..
(1
h4-mrio:
hHic.:
,..,-ncmu
hlice
dublc


:.
0<'11
llntibornRO:


En el caso de ta fOrl"n& B del DNA <tl'l'lf>al hebras se Cl'lrOial'l alre<l(!(lor de oo t,e <:otnUn, longrtudinnt,
uM doble hel ice dextrgifa. La <setva(:IOtl de mCMSeiOS MOleculares tri(fitnension&le$ perMite un mejOr (;Ompron$i(ln
de este car&cteoJ hellcoldal.
,.
dRito-- T
,.
p
5'
c.llht-C
,.
011
Modo tw.l:mu:llunJI do: b
dll!...:kh00.,.((orrrlo;lt'o(11htt() .. T(' )' GA
(dt.l:c prndC'
(.,..r T ' A o;!i el plll'l(l rt'lfo;llo)f,
pr C'fG cl
,.

s
,

.,.., ... "'' ,jt .. t>;'OI
"f!CCO> .. Ql!lttl(lf
,.

46
5.2.6
ESTRUCTURA SECUNDARIA DEL BOHA.
Parmet ros cuantitatjvos de la doble hlice
Ejrn;.do:
""'"
,...,.,.
.. nm
(22 J
liiAmetro de la hliceo
2.)1 tiM (23.7 }
.. ..
Dobl-e: pc:riodicidad
a k> largo del e-je longiludinal:
1
t j C dt b hlice (.-conttc' l.:e pucnlb
de" bpm'sdc
A pan ir dd dllto de $C:'p.1nu.:. 16n enll't c:ub <ls p:ucs de ba..":"s (0.34 run). se puede cakulnt el mlmcro
lotal de p.m.-:s dt: bnso:s de UOil molcula de ADNA dc cualquier longitud (por ejemplo. un otelro):
1 m 0.34 nmlpb -= 10
9
nm i 0.34 nm.pb .. 2,94 10
9
pb ., 3.000 millones de pb (Mb)
Vke\ersa.. 3 panit dd nmero de pres de de un I)NA (p.ej., $.880 Mb),
llal\300 su " longi 1ud de Micdc c:alcul3r la lon;:itud (di n)(:tiSOI'I:'!i) de la
S.880 Mb S.Slill 10" pb l.88 10' pb
5.88 IO" pb O.J4 nmlpb .. l IO" nm 2 = 2 Jo-\ m
l ooa: 10
6
pb .. 1 milln dc pb = 1 Mpb. pero se suele usnt Mb y no Mpb)
MODELO DE WATSON 'f CRIC K: FORMA 8 DEl ONA
Lu Fnmdsco 1 del c.-.sullo d<.
Chanlhm.J (\ aJk del Luua., haJM:m),
tuyo utrl00)'<' 11 LeonurOO da
Vmci. ba sido con!>idcradn como
u.OOdv tk lalubk hlicr dd 1>1\A,
<;tm la d.; g.rv es

Se l l':!.l:t de un.t h.;h('Oid.11 (de
1 'fl'-, Cl)n 111 C:r.J'l)\'tcnS1ic.a
de ,,,,.,..rer dos ram:Al$
mdC'!)l'tldJ<."IllCS. l<ldU UOU S"IJ
..:1\lllli:b (t"tl la fmo, ul y ou-a
Pm \;)nlo, !> p('rsomts
utd i1.:.rla al m1S1ll0 ncrnpl) sin
En c:l C<l50 dciiJOI\A. d NIIICiclo de
d .. !ll .. cnnesromleri:l o
banut<hll;ts de c.Jo;..
5.2.7 antiptico y estabilidad de la doble hlice
5.2.7 .1 Situacin de los fosfatos y car3eter hldroffllco
47
Debido :'1 la lnlaracci6n fas de do$ hcbr;)tO, 10$ a...Ucar-fo$1al0 do ambas d&bon
dlspooerse hacia el eJ(tenor de la doble hlice po1 lo que Ef ONA duple.K tnl)(l:$tt.\ un m;'.lrc;ado hidrofilico La
&Uperllcie de la molo.Aa establece as! 1nlefacc10nes lattOrables oon e1 mediO ar.uose> etlcvnctanle. At tni$MO !iCn!pl> l(t
dl&eribucin relatiVa de ios fosfatos es !al que .mlnlmiu la repulsin entre P.IOs
en CSt(: IMdCI<l
-.( biL"ff
la de
txbc ...
al CJe
\ k 1!
Ullln.ll
(ji);U\1!1.1
Cllll'I-I R;I
48
ESTRUCTURA SECUNDARIA DEL B..ONA
5.2.7.2
Coplanariedad, apilamient o de las bases y carcter hidrofbico


wtllkll me..:"

11 w....,
Resumen de
ftlcrtas que
e>tabilizan la
doble hlice del
!)NA:
Las f)ages y piM'IIdlniC89 de
ambas cadenas se encuentran dirigidas hacia
el interior de la doble hlioe. superpues&as.
bmanOO un apilamiento similar it un ITI()I'ltn
de monedas Como consoooenci;t de !al
proldmidad y paralelismo de los <millO$
aromflcos. se entre euos IVel'lt'IS oe
01tracciI'l , de lipa van WAals, 1131'nad3S
klteracclooea 011 s,olfamfMto (fuerzas
hidrofbicas). De esta el interior de 13
doble h61iee. &ltamente nidtolbloo, quedB
aiSlado del medio acuoso (hldroflllco).
contribuyendo a la establ!lzaciOn de 1a molcula
y a te (liOteCCiOr\ de la lnkw'tnacln genlica
(pues sta la constituye 'a secuencia de
bases).
Estas in!eracclones son mayoritariamente
'lespeclfiC8s (es decir, son r.dependientes del
tipo de base implicada). a dit.fencia de tos
enlaces de hidrgeno entre bases
complementarias. muy especffiOO$, loa
atracci6n ontre @ oe bases
i'ldiWcJualmeole no earNJy tuene. al axhodr t0,4
ba5eS por vveltCII de la
<al;, do,., Muy ekNada.

'"!"'"'
fl"'"'"tllt<\
iNK'<I


, __

<k arilowrooenw de
"""
5.2.8
Superficie de la molcula: surcos en el DNA
COMO $e M observaoo. la geometrla de lo& )i'lrcs de bases (pg. <$2} y el antlparalelismo de la$ hebras 43).
Mee&atios para la formacin de lOs puentes de hidrgeno, hacen que los C-1' de tos a.roeares de los dOS nudetiOO:s
compementariOs no se di&pengan simtrieetl'lente oon a las bases y, pOr oliO, que lOS esqueletos
de$0lllrribo9a--losfalo de las dO$ no se siten en pu'\10& diametralmenle OWMI*S de la OOble hlice. Como
consecuencia, a todo lo largo de la estructura en doble tllioe se fofman OOS sureot, may (o hendidura profunda) y
otro menor (o hendidur3 pequ&fl&), que van girando de fol'nlOI Nllieoidal, al igual que loe dos esqueleto&. Los svreo6.
especialmente el mayor, dejan espacio suficienle para Que moleculas externas puedan oootactar con las 03$$$; ste es
el rundamet'lk> de la lnteracan del ONA con nuMerosas protefna:s eepace& de r.conOQ&f socueneias de base&
(pito. 60), con fur.clones tan importantes <:omo 13 tegulac:IOn de la e.xpresin gnica (1'(:1' ejemplo, factDteS de
En cierto modo, es como si IM ptOielnas "leyetan la secuencia a traii'Q do lO$ grupos funCionales de laa
bases que "asoman doniJ'O del S\.WCO mayor del ONA.
MODELO DE WATSON Y CRJCK: FORMA B DEL DNA
T
5.2.9
Sll! lphftdlit) JXII".I b
l(MTI\ III;;()n 41.: los SlPt'O'S. Co11l11)
tk de 11,..,.
(lllt<'i M lcl,d!'>S,
e

...
.... ... .
..,.-.... ......
.......... _
..... ,,.._ .......
.... ........ .,...._
............. .., ...
-
Significado biolgico: idoneidad para la replicacin
El mooeJo de doble hliCe de WM$0n y Oick oonnilc olqlic;v
que se mant&PQ& una eslt\lclura a de 1<'1 vi)riaci()n oo
secuef'lda y que se produzea tn&C:Iiante un meeanismo muy $imple
lo duplicacion del matenal gentooo. En resumen la wpllcaciOn
Pl otcdO de una rnmern II)Qica. con dos (a) la separaci6n
de las dQ$ hebm$, y (b) ro a l)arbr do ollas como mOlde. de
ottas dos C8det\a9 complementa."" (tQ$ <:fe e$te PIOGe$0 5C
esaudlarn OOSteilormetlle, lema 12) Tambin l)effl'll!e la repatae&
de mulaciones y daos en una hebra, al disponerse de la otra 'COITM)
reroronoo do ta sec:uencQ c::otT'Eicta
' ,,
'
49
Tema 6
Variaciones en la estructura del DNA
6.1
6.2
6.3
en dob&e hebra: fonnas A y Z ........................................ ,_,,, .. , ... _,,,, ........................... _................. 52
6.1 1 forma A del ONA. en ron la forma 8 .. , .. , , . , . . . , , , . . 52
6. 1.2 F()tma z del ONA. en comparaciOn 001'1 las formas By A. . - . . ...... . . . ... . . . . .... . . . . --- . SS
Variantes toeales de la esti'Uetuta s&eundarta del BONA ............................ - .............................. 56
6.2 1 Cl.IVatl.lra de la doble hlice .................................... , .... _,_,,, .......... ,,_,,,.............. ............. .... . . ...... 57
6.2.2 Palfndrornos .... -,_ ........ - ....... .,_, ........... _,_ ........ _,_ .... _,. ,_ ..... ,_ ...... _,. ,_ ...... _,. ,_ ..... --- ..... _,_ ...... ,,_,_,,... 57
6.2.2.1 Conceptoycartteterlslleas , , , ... , , , . , , , ........ ,_ , ........ 57
6.2.2.2 - ,.,.,_,.,..,,_,_ --- -------- -----.. 58
6 2.2.3 Pttlfndromos ef'l moleu181$ 00 h0br81 sen<:illa, , , , , , , , ........... , . . .. . . . .... . . . . . 59
6 2 2.4 e$1Mlur31e$ de 10$ palfndtOI'IlO$ ... ,.,_, ....... ---- . ,,._,_, ...... -- 59
ti) En iJCidos rM:IeicoS de hebra MfiCilla .. ,. , , ... , . , , .. . . . . . . . . . .. .... . . . .... 59
b} En ONA.de doble h9bra ,_,_,.,.,.,_,_,_,_, . 59
e Z 2 $ ele los l)<'llindrcmo5 .
6.2-3 K.DNA.. trfple hiee ...... ,_,_, ........... ....... ,_,_,_.,,._,_,_,_., .... ,_, __,_,_,, .... .
Motivos e-sttuccu.ra!es responsables de la unJn del DNA con protei nas ............................ ................... ..
59
60

6.3. t Oescnpa6n de los motrvos estruelurales ms frecuentes ... . ...... .. .. .. . ...... . . .. .... .... .... . . .. . . . . . . . . . 61
6.3.1.1 Motivo o hlice-vuefla-hllce .... - ......................................... ,_,_ ---- 61
6.3.1.2 t.totivo hice-bucleMioe .............. .................................................................. 62
6 3 1 3 f.'04ivo . ,_,_,_,. ,., .... _,_,.,._,_ ---- ---- ,,_, _,_,.,.,,_,_,_,. .... 62
6.3.1.4 Moociii'O<IedO<'Ollt!C. ,.,_,_, ...... . . ........ .... . . . . . . . ...... . .... . . 63
6.3 1.5 MociVO cremancrt' de 64
la molcula de ONA no es una estrucl\lra estttce, sino fleJUble y dinamica. Gracia!! a la eapaciclad ese:
;JIIre<Je<:l()r de los de 10$ nvclelidos. el ONA puede m \01vo diversas fonnas, dlsbrolas de la lorma S de
Watson y Click. Se e$ll.ldian en este l$'n:t:
Aqullas que, manteniendo la estructura hei!OOidal de doble flebrtl presentom una oonJormaOOn diferenoo formas A
yZ.
las vanacooes oonformaCIOf\ales de carcter lOCal en lomo a la eSiruetvta B
La oe regione:s e:spocffic.a.s del ONA con estrueluras ceractetlstlcas de algunas proleif\a$.
En e$105 tros tiiX)$ 00 variaOOfles es1ruaurale:s tienen relaCin con funCIOc'les Importantes en et
<MI ONA. interw'liendo, por ejemplo. en el inicio y la regulacin de 10s ptOOeSOS de
teeomblnaein. ttanseripdr'l ele. De ani el intet6$ de $u .,ludio conjunto, como tema rldependlente, para a!l'l(llia{ l8
estructura secundarla y sertt{tr las b3!Ses de dieflas funcio!'IG$, que s.ern ot,elo de estudio en temas postetiores
52 VARiACIONES EH LA ESTRUCTURA DEL ONA
6.1 VARIANTES EN DOBLE HEBRA: FORMAS A Y Z
El ant\li$1$ POt ditraccin de rayos X a reSOiuciOn aiiOmiea revel la emteneia de dos nuevas lormas esttucrurates
o QQrr!ormaciones diferentes a la BONA ttacJicional. en 199 que se mantienen las caracteRsucas bsicas de ste
(compemenlarledad, helic:idad, etc.), JM.If'O ll"'Will<m Qtr<ll$
Comparaci n entre los t res tipos estructurales del ONA en doble hebra:
TIPO OE HWCE
A (deshidratada) B (Watson.C<ICI<) Z (Ric,..Oicke<son)
Sentado o. giro do _, h6tiee
DeX1r6giro DeX1rgiro Levgiro
Fma y La n'I&S ancha y
ll'ltermedia la ms e&tred'la y
coo
larga
OliJme1ro de '" fllioe
2,55 nm (25,5 A)
2.37 nm (23,7 Al 1,84 nm ( 18.4 A)
Otstanc:ict bases (d)
1
0,23 nm (2.3A) 0,34 nm (3.4 A) 0.38 nm (3.8 A)
Pare& de ba&eS )(Ir vventt (n) 11 10.4
12
Ro'l<'lcin pot cada base (360" in)
1
3.2:,7 .. 3-4.6"
- 30'
Longit\ld vvelta de hliCe (Mi)'
2.53 nm (2S,3 A) 3.54 nm (35.4 A) 4.56 nm (45,6 A)
lncliMcin del plano de lOS
19' 1,2 (casi perpend'ICular
9'
pares de bases "
<gran inelinaein)
al eje de la hlice) (ligera inctnacin)
Suroo mayor o gtande Esuecho,
AtlehO. cwo'urdiclad media
Plano. sin profoodidad
Suroo o pequet.o
Amplio, no profvndo Estrecho. profundidad
Estrectlo, proiundo
......
Enl<'lot N-glioosklloo
Ant;
..,.
Sin {C. T) y Anti (G)
Nor.. o'*" beMt. MtCHt ak:l llrgoc:leldl:l h6a.
: Rouc.on por cada pat de beSes. o giro re&P$CIO .111 Jlill' _,1-not ( delllrgro. - II!'Y(Iif'O).
3 L.Onglluoda M vueb IW!Iice, medMia e lo l&f'(IOclel eje. eoloQoJI&Ime'*' )IMO doa rosea* o htlioe'.
" iM pe!J)endioJI81 al ee de la hlee
6.1.1 Forma A dol DNA, en comparacin con la forma B
Lill re<luc:ein de la hUrTied80 relativa por Oeb<lto del 75% (por ejern(llo. eon Clieoludones t1'U)' conoenlrada&. es
deor. deShidratadas) hace que el 8--DNA tienda a translotmatse, QQmo ejemplo de la llexibiittad do la m016ClJia.. a otra
conformacin. denominOO. A.oONA. Aunque esta forma no se ha encontrado bajo COndiCiones 6$iOIOgk:as, su esl\Jdlo es
de tnter& por ser la que adOc>t3 e1 RNA cuando posee regiones de doble hetx"a. MI como lt' <le tos hfbrldos ONARNA.
el A--DNA es similar a la forma 8: es 9v<'lmonte una Clotlle htliee deXttOglra. oon hebra&
oomplctnent<'lrias y untda& por de hi!Wigeno. Sin embargo, dltlere en sus dmen&lones: ltt hiico A
es mtts anchll (mayor dimetro), mi s un triSmo ntJmero de nucletidos {menor diSianc:ia enlrO pares de
cases} y llene mayOf nmer o do bU I!S p01 vuetta. Como QQn&eOJencia. son monorell 1<" rotac:i6n POt cada base y el
paso de hlice. A.demas. la& MSM 110 se disponen casi perpendicularmente a1 eje de la hlloe, sino daramente
h:llnadas. y se Jit(mn mbs separadas del eje de la hlice La suporfi<:ie de la MOlcula es tambin d1feren1e e' suroo
mayor es mas estrechO que ., la forma B y muy mien11'3$ que el su-co menor casi no se aprecia por ser
ancho y poco profunOO Que la forma B puede aCXlfi'IOd)r en sv surco menor IJl8 columna de molcula& de
agua, el 5urco de la IOtm& A no olrece e&paOO wficionte. dlfetenc:ia expliCa, al meno& en par1o, POI' Qu6
li!l desh4<11t'cin laveoe la lorma A.
VARIANTES EN FORMAS A Y Z
Pra tn{hlnr- ln,'> diferenci:t!i .!>C put.'<l!! emplear un modelo de .. ci
donde d I."Squtlcto se por 1ma cinta, de la cu:1l se los
de qN :'llc:unos dt oxigE":no > lll:-t gruiHh fosfal o
que o;obrc."$tlk"11}. Cada nucleOtido c.,o;t:i representado en un CQIM dil' crcme
Lll.!>c."CU!!Ill"iil t'.n ambrn. Cibl"'- .sla 1msmn: 15', GGGTATACGC ( n
{3) CCCATATGCG (S'l
mismo nw<k:lo vi.!>lO desde su plltc :.uperior) 1)cnn1h: tluslrot que f:t hChcc .\ c<> m.1s
:thu:na. <;Qn lll::t)'(lr di;'Lmcuo y un diliJ)I)l!l iCill lk' lits bases ms :l c.:J:uLa dcl l.'jc de la hi'ilce;
2.55 nm
..
nm
...
53
54 VARIACIONES EN LA ESTRUCTURA DEL DMA
Un:l '*j, complcmcnwria !1 la anterior. all.l: \'Cl que ms Cit"n::ana n la r.,'"'lidad,
es la dd modelo espaciaJ compacto.
la-: C'ltn colorc:ldM en roo;a y el C$qudcto de pcni0'\3'> y fosfatos etl \'Cfdc.

put>d4'
...
1S3nnt
11 pb-.
o.:J nrn
los Mll'l!OS
<;QnrtW
ptu u.to,.
en
Las dtferonCia$, roCI6n eomentacJas, en la esttuetura de las dobles Nl'ioe& A y 8 vlen(tf'l on Ulbm<t
ins.tancle por la diferonlo dispoSICiOn dO lOS pares de bases. debida ooncretarnen1e a ooa distinta ((lnform.-c:in do la
En ot el C3 <Sobresale del plano formado por los otro& CIViltro C'oatbOI\0$ de la tllQCuranosa
(oonformaciOn Cl'tfldO), mienlnls que en eiBONA es el cr el que no es c:oplanar (coflfmmacin C2' ettdO).
, ,.,...,..,._

L./ =
,.
p
\
o

11
r
cl)nfonmlC:tn Cl' cffl'h
lADNM
H
p
'o
_..o
r
"
11 1

. '

11
(T,(.T t:
confonnann CZ"('m4l
(BDl'A)
Esta d1s!lnta del anillo de t\boe.a hace que en el A..ONA tos dos gruiJ IO$f310 oonseCU'IIvos esten
ms prXftlos enlrn si. 10 que explica que los pares de bases suoosiVOI so acerqven. aool'lando la cadena..
Smilarmenie, o1 c:nmbiO en geometrla c:onoooe a tos ya comenl.ados.
VARIANTES EN DOBLE HEBRA: FORMAS A Y Z
SS
6.1.2
Forma Z dol ONA, en comparacin con las formas By A
La oxiswn<;ia de 18 Z surge por jlrimera vez cM la ObsetVBCIOn, me<liante dlkaociOn oe rayos X. Cle una doble
hlice del hexanudetido CGCGCG. oon c;u-.c:toristieas di it!ntu a lM f<:wm<t$ B y A. entre ellas, oomo
sQmficativa, so giro .. iZQUien:las o levgir'O P<l$!erlormen,e. $e M esa* e$11\JC!ura en Otros oligonucleU<IO$
sintticos oon S9Cuen3s de pun;t:S y pirimidiM$ 311en'l<1$. hinque in vivO predOMiM el BONA, se ha pooiOQ Ql)Set\tar
1a presel'leia Cle algUnas reglones Z en el genome de clulas eucaritJCes. ompieando anticuetPQ6 oontra esta ltJme
oonformadon. Su f\JnciOn. an pot conflm'ler, parece estar relaaonada et control de la expresin goruca y oon la
reoombineetn
En a $liS af'lora eomparativamel'lte con las ollas oonJormadOnes, se ob!lei'VB que
ltt hofice z es 1& mb estrecr"l.a (1,84 r'tm de dlametro), la m's larsra (mayor <IIStar'tcla entre beses: 0,38 nm) y la que
tier\e mayor nUmero de pares de bases por {t2). 1o cual supone une menor rotacin por base y un mayor
o longitW de un$ vuena de helee (4,56 nm). Es, en resumen, una hlice rooy esbl'ada. En su superfioe forma un
solo SuJCO. profundo (oorrespondienle a la poSICin dol surco menot en A y
Modelos t spaciai('S compactos:
cu ro'a r
1\CIII<o)f.lll\l\C..., 1:11 \Cfde)
1 fl.ONA 1


""'""'
ffl-
4,Unm
., pt..
fl, )l; '""
La oonsiCiett'Cin de estn.ICti,II'O t1 niV(II muoslra Que su& diferencie*& respecto a las klrmas A y 8 se
deben tamOi(ttl a Ul'l(l cfisti nt:l eonfonnac.in, en este C<'l$0 <tlrededor del enlaoce N-gliC06idioo En la& fonnes A y B
t<XIM laS bases se Orief'ltan alejadas del anao de en l<t ll;,m<tdl) confcwm9tin Ofnti , mlentr<l* Q\16
en el Z-ONA s61o lo hacen las plrirmcinas: las purlnas denden a s!Warse sobre la pen60$a (OOfi'On'naciM .sin), Por ello.
en las secuencias de purlnM y plrln*inas a!ten'lal'lt&S (pot CGCGCGCG} tipicas del ZDNA, $C f<rvorece la
&ueesln de ambas eonformaoclones, .s;n (G) y anrl (C), obligando al esqueleto azUcar-fosfato a plegMS<t en
I)O(Ier t$1t'tblecer lOs de IU:;Ifgtno
56
modelo
LridtmcnsionnJ
del par de
nuclc(ilidos CEG
en un Z-ONA
C: tdn t"u
tmti
bas<' llkja.b de b
po:Oh.'ISll
VARiACIONES EN LA ESTRUCTURA DEL DNA
cooformucin
(punru:c en 7-D\lA}
Ouaoos.ina et1
confOI'I'Ilac_,n :
wrha SlOb

lo" f(l(. fAtO!I quedn eo J'I&.'eiotws
rcll.lh\'113 muy la..-, del n. I)NA
e N
e e
e o
p
Ln drspo:ucin en nta"' del esquel-eto de la fom\a Z del ONA aprecia de fom.a en este
rnoddo de varillas. doode @.nlp(IS fos-iitl se hall mido con una linea \'CtdC' hipocttica. Se mucsrra,
a cf':t(ll$ oomparutwO$. cmo el 8-0NA no esta orderl3cin, sino quC' $U describe;
uoo hlice continuu. Obsnesc que el Z.OhA es el oH.: oon Mlict <n senti do levt'iro.
li.l!} ;rupo;.e; Rost'.aoo
"'lfUC"
..:n tllt'-.(fl'
(de hi d numbn:
Z.O'i\)
1.o:1 sru.-
l'IICII<IOIII trW1
pr0.\.m!l(l8, (111h' M
M A y (I.,,J)!.,A, poli"
kl in n'rP&e
... dt\<..J.'I
MnCC!IIIIn.cJn !Ollina
pan l'fduci1 lai

C!l'CirOiol:iliC'M ttl!fi'
el los y a fll)lkr


6.2 VARIANTES LOCALES DE LA ESTRUCTURA SECUNDARIA DEL B-DNA
Los estt41C4 de difttteeiOr\ de rayos X lambln rGYelaton 18 de v<lriclociorw 0t1 la c:Qf'llormO'IeiOO el\
detemWtadas s.cucnc:ia$ del B-ONA. Aunque dentro de es1e apartado lantin podria incluirse ti
del ONA, so M preteridO describir es!il aspecto como una eMructrsa de ese 10$ nucleloos, dada su
Implicacin en la oet c:t()tl'I()SOma.
VARIANTES LOCALES DE LA ESTRUCTURA SECUNDARIA DEL BDNA 57
6.2.1 Curvatura do la doblo hlice
A pesar de ta regularidad del mooeto ele Wa1$on y Cnck. e.1usten P$QI.Ie!'IM diferenOO$ en la de
tos ONAs depe.ncllendo de 106 nuclelido& integrantes. Por ejemplo, on detQrmn(l(!'a$ $OC\IenciM: los p;)rt$ <st bi'I$C:S no
son e)(aCiamente coplanares. to Qve puede OC<IISionar una Oc:sviaciOn Clel eje <te l:t OOblt Mliot En otros Cli$OS.
frecuenle&. '" no se origiM por uM secuenda parteutar ese I'MJCteOtioos. Sino que es forzada por la union de
u!\31 prot&i!\31 a 13 cadent' de ONA (como. por ejernpiO,ta mos.trada en pg. 61)
6.2.2 Pallndromos
6.2.2.1 Concept o y caractersticas
Se denomina &e<:vencia& o $imptcmerttt palinOtOf'I"'IS, a aqueuas regietles de un ONA cuya
seeu&ncit' os 1;) mismt' en ambt"'$ hel:lta$. Son f)3$1ante comunes, y llenen un stgnltlcado especial por varia& razones:
($)ser IIJ93re:t-di&M ele las etUimas de re&trlccl6n (herramientas elq)Eirimentales para escindir cido& nucte.cos en la
tccnolog.ia del DNA rec:otnbir\Mte): (b) actuar oomo centros reguladorer. de la expresin (e} ditr lugar a
estruc:tul'as secundarlas pect.*ales en ONA y RNA, ele.
Orama(!carmente. un pallndromo (del goego = de nuevo. dlomos = urrera) C$ tod<t patarbra o frase QVO $0
dele-trea Igual de Izquierda a derecha y de deorecha a izquierda, Por ejemplo: RAOAR, ANILINA OABALE ARROZ A I.A
ZORRA EL ABAD. En los palindromos hay un centro de $imotri<l (a 1(11 vez e,e y piMO ele sillWHfil}. que es ltl letr<'l
central o la posion las dos leb(ls Ql:ltltrUIC$.
Sin embargo, la eldensin t6rmino a1 de 13 Siologil'l Molecular no es directa. se diCe que u!\8 regln
de ONA O$ p;JIIindrmicn eo3n00 ll' de un3 hebr a, lei08 Ge iZJ::Iulercsa a derec:lla. es igual que la de la otra
hebra, leida de cere(fla a iz-quierda Por tanto, tos pallndromos se observan en lar. dos cadena& conjuntamente. y no en
on., $018. P04' ejemplo, 1a liAGCACCACGAn set'la un pal1ndtomo gramatJCal. peto no es una secuencia
pa!incsr6mica. Tenetldo en cuenta que, segn el convenio de escritura de lOs ONA&. ambas hebras se deben leer de 5' a
3', se concluye que las dos hebtu de un >al fndromo denen la misma secuencia; sl8 puede eon&!derar&$ una
definicin de p;dhlromo.
Hebr.1 1 . le\!b de izquierda a deroclldll (S' ):
lkbra 2. ldda de t1 iUJuicrda (5'-n:
TTAGCACGTGCTAA
TAGCAr.:GTGCTM
1 : 1 1 1 1 1 1 1 ! 1 1 1 ! 1 1
A 1'
T 5'
Como una extensin del conceplo de pallndromo. se llaman pal fndr omos Interrumpidos aqulos en tos cualeS
una pequeha secuencia separa las dos mitades del pallndromo y actOa, por tanto, oomo centto de simetti<'l no puntual
(en lugar del espaoo enlte dos nucletido& de un pallndromo esl1icto). En cualquier caso. lOOO pallf'ltll'o;no est3 IOrmado
por dos de seOJencia idntica. separadas por un centro de s.nelria, puntual o no .
.,.l!(!nm(l intc:rrumrud(l

..... '""\''"",.
1
T
1
T
1 1 1
e
liTa
G
1 1 1
A
1
A
1;:
A A
G e T T
Al CUmplits!) lar\10 la Pf'OQit'l <SOIPl'lindromo QQmO la oomplltmenlariedad de las do& hebras resulta que les
secueneia!l oe ul\8 misma nebra que <\'ledM a ambos l:ldos del centra <:le simetrlt' son oomp!Gomentanas en!Te s!: se
dice por ello que las secuencia& pabndrmicas son aulocomplementat ias.
58
VARIACIONES EN LA ESTRUCTURA OEL ONA
. ...... -
lf JIJG le 1 J c c;: 1 f Id JC 1 t Ji 11 p- hctnl
q x 11 1 t 1 e 1 e 1 f 1 e xe 1 x 1 e 1 a t x 1 t 1 + )f hcbD 2
(
'<J i lll lf i C IG !f IG 1
('I T!TiliCICP.Jel
" x 11 1 t 1 e 1 a 1 t 1 G 1
h 1 , t " l lll"' nmrkm-:ontiiOI
6.2.2.2
Repeticiones de secuencia
En OCIIIIonH H como Sinnimo
de CllifnclrOI'IO ti
leen
opMtol .. do. ftllllade6 Mnen la '*'-
e .mbol lados del c.ervo ca.
..,....... """*"'o no)
()lro temwlo 95 .. dt
dnc:tn, M emplea Cl.lai'IO
.,. "" ONA M)' repeCICibn O. una
(\DCIId t rapet.cln), "ida $itmpre en ti
mismo tonbdo No son I)CIIIindr011'10$ J)Otqut
no cumple el criteriO de igu<'lldad de
ttc:utnCial leidas ttllef'lticlo ni !\ay
ctntto de tlmocrl a. por 10 que no se habla de
EttM l'fll)e.::lones llenen ..,_ ..
potQUt tpereoefl con enonne freoJenoe en
fi> 109). taniO en
con.- o adyacentes (repefiC:IcW* ..,
.....,.., OOJI'O &19 MI;;Js pot un
de '*" e bneS
_ ,
F.,...tllffllf se tlaflla de tepeflaofNN
cuando la seouenc1a ae ft!PIII,
cr. tortn. lnvenlda, dentro de la ,..,.
hiCira De nuevo no son pallndromol pun
no l\ly centro de simetria rotaCIOtlel. tino
pq,no d& tlmottli! .specular.
ltlat do Ultimas poslblldadet,
.urqut apateoen con frecuencia en k>l
ONAI. ocupando W\8 parte dt w
141C:!UeftCia no tienen tn
cuanto a ti M!N(11Jtl seaJI'ICiaria de lol
6ddot por 10 que Plfbt de ..,.
i'ft01rIIOI6to M r""*"
llumtllll j()G lo(' kt'll C1t lotfltiI.
1 m!Ud ( ); tn.1tad
'' nAGCAC 3 ' , 'T1AGtAC l '
AA1CG1C
................
w lea ncianmo-.dbdo
\a....,.. l,.uc( t t:
!>- r..ttOCAO:: 3' 'M'A A.C 1'
MT .. G!G Mfe';TC
11'-t<k "'-lll lllllj[W'IIIoolll
...... k)l'l
1
1
RpttiC'IOn f- t
' TfAQ.;AC 3'
ut .a
5' TT AOCS..C 3'
MTCGTG
"ia.Mua l - l.
Ml'eCTG .!'
T'T >.GCAO
Suloo V .. W'

1' !TAGCAC
M":'CGTG
VARIANTES LOCALES DE LA ESTRUCTURA SECUNDARIA DEL BONA
59
6.2.2.3
Palindromos en molculas do hebra sencilla
p.,,_, el C3$0 de bCdO$ MJCieieos de hebra ser.cma, la deJinieln de no se puede aplle:al esttiCial'l'lef'lte.
Sin embargo, dada ta relacin de oomplementane<lad enb'e la secueno-a de un ANA y ta de una de la$ hebras del ONA
que So codifica, tas secuencaas de RNA de heb101 PQf vn ONA Pttlindrmico $Qn t<smbin
autooomplementanas y se oonsii:Se:tan oocno pa!ihdromos Bajo este crilerio, C&de'l vna de 13!$ oos heM:I$ de un ONA
paltfOmico larnbln es una secuencaa pi!ilinc)'mica de hebra
6.2.2.4 Consecuencias estructurales de los palndromos
a) En cidos nucleicos de hebra sencilla

;,emcnlll j\lll'!lull
/
, . .. ,.
1
de """ llcbn
La e:d9tencia de pallndromos.. por ser
9E!cuenclas au\OCOmplemenUirias, puede
afectar de forma wnponante a la estrocl\Jra
secuOOana. A&l, tas nebtas sene1llas de ONA o
RNA PA!den plegarse SOI:lre si
mitomt1to pw-01 formor estrueb.lr'l!l 4IVt
notquiU8. SI el cen110 de 9imetrla no es punllJal
(paUndromoe su &eevencia
forma un bucle en et extremo de ta hotqi.!a.
La formacin de hOrquillas posee gran
rele'vancaa en la estructura tridunen&ional de
algunos RNAs El ejef'flllo mas significa1ivo to
constitiJyen los btazos de tos tR.NAs, regiones.
con c:litrucl\Q de lfIO y bt.IC1e {pilg. 74),
torm3!00S por secuencias patitldl'6tnic3s Pat
otto lado, este tipo de pleglamie.nto en el RNA
(:()(lttibttye, en algunos casos, a la termlnaein
de la transcnpcl6n: ooncretamen:e, en el
mecarnsmo de termif\Sdn lndependletlte de p
de procariotas y los mecai"'ISmos equwatentes
de eucanocas
o J
En el caso de hebras sencillas de ONA
tambin PJeden enconlr.lrw horqvillas. POt
ejemplo en e ONA Qve CMtot
de Ul\8 estructwa secul'ldatia
se propone su formacin E!f'l sMuaclones
particulares, por ejemplo durante la slntesls en
el labotatono del cONA (ONA oomplementafiO)
a pattlr de un mRNA, donde el extremo 3' del
ONA de hebra $91'1Cilla se &Obn:l si
mi$mo y sirve <l$i ocbOOQf para la
polimerasa (p&g. 2(}f)).
b) En ONA de doble hebra
En el caso de vn ONA doble, las hebras
dol P\IOdon .OP<Wew&e y '"sociarse
de otta IOtf'l"'&, generanoo estructtMas de <fOOie
hOrqua& o CtiJCilormes (en &orma de c:ruz).
Similarmen:e al caso antefiat, tos pelinci'omos
form<111 crucifQrmes oon do&
buefe$.
,.
6.2.2.5 Funcionalidad de los palndromos
o e
e
'
'.
ln11: !ou ,;
n
'
'
. -

budc
tru..:ofonnt
wn
Los pallndromos en ONA dt'Jplex aetUan 00tr10 seflales Ot feoot'I()Cimiento a las qve se unen nvmeroGaS protenas
que poseen estruccuras d!mrlcas que 1es permiten Uf'lil'$0 bm<'i simtrica <t ambas del
pat!ndromo (pi)g. 61).
60 VARIACIONES EN LA ESTRUCTURA DEL DHA
6.2.3 H-ONA: triple hlice
Se trata de IA'WI estructvr3 poco h<lbit\,.1;11, k:nnada por 3 hebras: una triple hlice. tambin llamada trfplex o
trlpb Se de5Cubri0 por "rimera Y8l. <en \lO RNA, aunque O$ en ol ONA donde &e encuentra con m:s frecuencia Se
fQfTMn en fogioncs riCil$ en J)'nnas (secuencio {CT., t en unt' l'lebr;ll y rica5 on p,rini's (M<:vencia (AG)n ) on la
hobr<' eoml)lement3tia, En condiCiones normales. diChas secuencias se a!X'readas $irt
atgvna en 18 dOble hliCe. Sin puede OCUYir que parte oe aa doble hlice se 8bta y la hebra riCa en e y T se
y se con 13 ocra nebra <AG). m&<Jiante urta nueva <:Jase oe hldr(lgeno (COnocidos ()()mO
enlaCQ de Hoogsteen), er'l una Zot\8 cf()(lde Sta aun Jotma doble 1\liee. Apateoe asl triple hlice (CT}n 1 (AG)n 1
(CT)n en dihO segmento del DNA. La ocra hebta sendlta {riCa en A y G), desapareada, fOtma una especie de bUCle.
Org;.lnit:;ICin de las cadenas en el pl.anB:
-
hdo.:c
()rsanizaciOn cllpadal de las tadcnas:
'
'
" .-6 .... } ..... ...,.a.

1
2 l 2
1. 2

111) d(K e 1 y 21 111\l do'blr hhee'
111) Una .;k llll hcbr.u g \'lllvttndo h;l.;..a alr.h 1
y se aperea oon los doe: betlr.s 8Mcriorn,
fomum..to tl.lemcnw de tnplc hhoe.
L11 otra hdm(:!:) qultda basca qw
'iC R\.WIC' de con la bcbrn 1 para ""
SCI\Indc.l tumo de doble h8 ier.
EJ.:::mpk) de #p3re:tmlcn!C) tSc 3 bases que da'
lugar a la lriple hlice en el H-ONA (T AT). El
<Jtro ap.<treamientCt cntrt dtosina, y
citosina protonada: c<;e+.
l5n el caso de 1'A1'
'-.. vcDdriu S\IStit\litb por UAU.
'
/
'
Ol
1
"
'
tunllik nrrux un.adu'
.k heho ...:: '
H
enlKC'S de 1
dioi<o
\
\
1
(de W.won..Crid:.)
E$t4.t tipo de eslt'IJclura ha despertado gran ner& POr en tcrapiM de inhibicin de la expresin
gnlca. meclante la unin de un oligonucleOtido U\t&liOO a 13 cSoble hlice del ONA en la regln promotora de un gen.
IQt'mando una triple nlioe que la expresin Cktl gen.
6.3 MOTIVOS ESTRUCTURALES RESPONSABLES DE LA UNIN DEL ONA CON
PROTEINAS
Son numerosos los procesos biolgicos on 10& que la funcin del DNA depende de su interaocln especifica 000
pn>eeinas: de!Ueca entre ellos el oontrol dCJ la expr.si(ln gnlea, e;etcldo pot protelnas denomi'ladas
/tJctores de t!Mscripcln (cuyo papel $0 mas 8delan!e. pg. 264). El estudio de e&4a& proteina' tiune in!cr6s
dentro del contsm de la5 variclntet estruet\nles del ONA, preclsaments por su capacidad de roconocer e
Interaccionar secuencias concretas del DNA. Este reconocimiento lient lug3r * la posibilidad de
variaciones tocoles en aa ttidlnensional del ONA, asi como a lil intoreoei6n directa de 18 protelna oon las
ba$0S.. nin neoe-sidiKI de qu& se separen hebra& do In doble ""'liee. En la mayor parti! de los CtJSOS, 106 runerosos
contactos eMablecldos (de bllO i6nioo. y enlaces de flidtgeno), aunque Individualmente dbiles, se
oombinan para 0.... un ineetaif'' especlnc:a y muy 1\Jerte enlte ONA y protefna.
MOTIVOS ESTRUCTURALES RESPONSABLES DE LA UNIN DEL DNA CON PROTEINAS
61
El ft<:Ont>Cii'I'Mie(lto se etetce a ltavs de regiones o elementos 9$tt\IChJr<lles, que $01'1 SOlO una parle de t.a
torcuula de la protei na, y QUe se pueden enoontr3f. con vna espacial muy simiar. en
pt()telnas r.lervinlendo en una mistna funcin en !Odas ellas SI se cumplen es1os rOQIJISito$, rocibon
<foec'lominaclon generica de motivos estructurtllet. l)l'l)leiOOS (ett mob/s), en esli! caso moiJ'Yos de unin a
La Interaccin tiene lugar oon el e11.1eri0r de 18 htlce, espeC*almenle sobre el suroo mayor, Como
caraeteristlca Imponente, un nw:smo moiJvO MK!e oon.taeaar simultneamente con lf8rios puntos diferentes del ONA.,
torzat\do asJ en ste una conf<:wYrlaeional que ttaoe que seasenc.as lejanas puedan Oict10
camoio confmacional puede inducir ii'ICiuSO 18 de las hebras tdHnaturaliz:aCJn oon lo Qv& se
verla faii'OteOOo el aceeso de <Wt'$ ptOlefnas. Tal es el caso. por ejemplo. de la RNA-pallrnotr<l$8 et1 el l)rooeso de
trnnKripein
6.3.1
6.3.1.1
Descripcin de los motivos estructurales ms frecuentes
IW C1l foljl)
.... 1 ...
. .,, pi,_

Motivo hlice-giro,hlice o hticevueltahlice
Se abrevia oomo HTH. del ingtt:s Fue el primer molivo ptOieco de unin al ONA bien esludiado.
Se n.- en l)tOieir'laS regt.RaOOtas de \a expreSIOn gntea, tan.a en viru tomo en y eucariolat.
Est tormndo pot oos tegmeniOS pepUdloos en f.thlioe, de e&trvctura rigidl. por una secuel'leia de
aminokidos. nexll)te, que permite QUe las dos hlices se entre si. una. las aheliOH (llamada hlice de
reoonocimtento) se encaja en el surco map del ONA, de f()l'l"na que los residuos aminocidos de un lado de la hlice
lnteratQOflan mediante puenles de hidi'9"f''O con laS Dases tlilrogenadas en ese suroo. El dl&metro de la
uhllce liene la dimensin aderuada (1.2 nm) por<' Mtnlt en el SUlCO. Algunos aminocidos. situados en la cara
opuesla de la miSma hlioe, e;tatl&e08f'l inlettiOCiones 001'1 otros oe la segunda hHoe, fijando la posldn relallva de
ambas en un ngulo Ciltii pcfl)Cfl(liQJtar {ver esquema ir'liCial). La segunda n-hlloe queda asl cruzada &Otwe la de
y er'l el &llterior 001 ONA.
[)o:.; tok-cula.rei dttn..k se la intCf'aC'(in del DNA con un 10011\'0 it(liccgm>hCiicc
<bm(..-,c(J. En c:;l.:: c:t-so, 111 protdnu ootnl)lrtil 2 tnoli\'OS BTII. Se n\UC$11"J[l slo 6tos }' nl,g\tMS
n:an;t:S.. ;,J roouvo; el fe'l!l<t de 1:. noul&ula 1..0 so: tnueslta. pues oo se rdadon:l la uniUI) al DNA.
1.11 urrilln fk " do.l!l mothm HTH
pucc ,_ niOd:!lk' .tCtn
ronfoOffiliiC':I()IIIII en el [))I.A, en <!liJO
una
dt la Nnci6n dt b
(p_q .. &t.:n;:r l.tlrtll&op:lim).
62
VARIACIONES EN LA ESTRUCTURA DEL DHA
Es frocuente que uNt protelna p-eserne dos moUYos HTH o bien $C <JSOC!en do& molculas de protelna
q.atet: (es dOcir. un <llmetQ), oon un moll\10 HTH. en ambos cesoe, las dos h611oes de roc;:anocimienlo (f.l'l<l de
cada moclvo) se ;) vna mutua o unos 3,4 nm, b cpt coincide con el paso de neuce <1:et B-ONA (3,54
nm) y, P lamo, OQI'I dos posiCiones consewliVil$ de &u &Uroo ma)'OI' Es cledr, ambos motivos inlemociOMn
.simultr;ean'lente con el ONA. conttli>UyendO l:l lt' unin <lo tct prolefna.
Los ejernpl06 rnejof conocidos de protelnas oon l'nOiiv<l$ HTH 3C1V<ln rC9Jiando la transa1lci0n en baClerlas y
virus El primero, la protefna receptora de AMP cJcNoo (CRP. t<Jmbin llamada CAP) es un dfmero, por
tanto, coo 2 motNos HTH que cuando une cAMP aumenla su a-nnidad pOr especificas. del ONA.
de&Oncadenando la expres1n de los genes del opetOn lacsosa {esle fue ell)rimor ojetnplo oonocido de control de la
El segundo e,empio {en la figura) es Sa 9f01elna Cfo dei lago l8mbdl'l, CQdifie3da por un gen del Wus y
01($)f8$ada en toa bacteria anfll1!0na, que lnterncclona por su moi1YO HTH 001'\ et gen de lo) PI"QQeln., vinca llarNMSa
tepffJW delltlg<) 4, eotno su expresin (transcripcin del gen y slntesi$ de pro4elna)
6.3.1.2 Motivo hlice-bucle-hlioe
Se abtEMa como HLH. det Ingls heJIXfoop-h6Nx. No aeDe OOf'llundltSe con tll anlorior Cc>n$ta tMnbit'n de dos
on UMiioe. pero en e&;e caso el ppbdo que los une es ms largo,> que 10 dola de mayor y, ..,
c:<wl.socUonoa. Nty m.tl$ pooibliado$ de orleraacin mnua de las dos hlices Gener<*nente. 86 igual qve en HTH, dO$
motivos HlH se asocian, poteinas dimlric::ts, aunquo no lj,iompro en posiciones con&oeCUtwae
del surco mayor. Un ejemplo de molivo HlH bien oonocido es el de la proteina Ahx 41: rt:tln (tn la fgura),
-
MOIWO hfhce--bude-Mbc.: t.lun6K.'H y mlcrn<."CK>-1 1:(10 d ONI\
(fl \le b1 proto:irJII oo $C
motho 2
lllll hficc:t de

doftl;,.,,-do$
lflfl
Cll 111

ckl SurtO IN\'01'
dcf
al

6.3.1.3 Motivo homeodominio
Se puede OO(tSiderar como IN\a ampliacin del molwo hice'9iro-hlioe (HTH), pero adqUlell'e errlldad propa por
aparecer repetidamente, con icMnbca estructura. <tn distkl\tls protGinas Ade""*s de la dispoWcin de d06 hlioe:s
tipicli del HTH, cKIS!e un tu':.:r tramO en uMIIee, del que s.<tle un:t rogi6n sin socundari;, definid:.
tuYQ$ aminOOck:fOs inleraoeiOnoJn Clirect3m&nte ((ln ef ONA. e:t1e motiVo (en InglS, $$ lmPOrt41nte POr'
apn-.cer n las ptot&lnas que reg!Jan el des.aon'OIIO embtlonano, estudiadas especialmente en Drosophlt8.
MOTIVOS ESTRUCTURALES RESPONSABLES DE LA UNIN DEL DNA CON PROTEfNAS
' 11'
. >1\1.; ... 1\1111
. .
M(liWO d11n61CO )' S.U
ooo c:l
r.'JOI<> qu<

tooo:oJd .. .....,-....
ZI\C'II(>J
h(lw." _..,;.,..,,o
(,a, lw!K..,. (,_ , ..
III>IUt ti dtrninlo;l ll1 11
6.3.1.4
Motivo dedo de zinc
63
Se ha onoontra<SO eSle tipO de motii.'O estructural (en .-.gres. zmc fngef) en mol!itvd ele prot.einM cve
se unen ;)1 ONA.. el! as el tae1or oe IJanecripOO'I TFUIA y el reoeolor de Al igut'll Qve ert tas eflructullltS
anteriotes, es ttecuenta que una misma proteintt DO$Cll mM de un motrvo; en este easo. se observan
mt:a11ples dedos de zinc oonseeutiV06 t.sle es un elemento es.tructiM'al 6otmado por unos 30 aminocidos. de loe cuales
2 astefnas y 2 histidinas tt!);)recen (lfl POsiCiOnes conSAantes. coordinando tetraQdncamente un Ion Zn '
2
. Esu. l.nn
obliga a un pleg.amiMio de la carsena de t.orma que el motivo se caraCieriza por una OOfllormaon
tridimen&tOnal alargada. en forma de 'dc"cr, Qllt 1e da f'l()r'r'lbfe. La vaname ms frecuente muestra dos hojas
antiP<J(alelas. C<ldt'l una oon un re$idVO Cys, seguidas ae un 9ifO y oe una estrucl\lra a-heliOOidal. <;en las do,; HtS Este
motivo $C <klnQtnir\8 C
2
H
2
($brevi:Uuras de uM letra pera los aminoCidos qua unen el Zn .. 2) y $U $$CU9nCJ<J oonsen50
...

1(' !CC (),
donde lOs sublncliees reprosentM e1 n(lmetQ de residUO$ (amlno&cldos variable\ X} que separa kliS aminocidos
consenso U>eueneias es;pontl'll!l8f'l'lente graoas al Zn la confonnaclon apropl8da para
cue el segmento Miicoid<'l OOt\ tre$ b3:ses expuestas en el surco mayor del ONA. tos res.tos vanabtes
permiten que se teo::onozean distintas secuenCI'as del DNA.
b 1ruo:tura ok "n okdo l:IIW"
C)'S;Ht$:. ' ') ]' II()JM fl, 1 o.
) ll( ln 7,n:
lnlt ... \!1(01
--

.... ..._,....,
Clhf:lkl:
t'nd 1 6: 1W
l'OAI'.:tlli:J\'m (J.: muennon ll "lgll\'ft t"l -.:o 1111)'(11 dd ONA
lll' .WS heb!b<kl O NI\..: OOITI<Htrlll'
Los moti os m dt o;in.: de !01 OIW't.IC6. c.
nllltllt.J'I l w; el ft'I!J6: b o,;lidcna ''"
;:n.:nJr
En ocros ca909 se ObServa una variante de oedo de zinc llamada c., donde el ion se OO()(dina con cuatto
Cys en la secue.I"'Cia consenso
CysX,.C'f'X
1
,-C'f'X,.C'f'
que no forma hojas sino dos segmentos en hlioe E.s\01 ostJoctora pot ejemplo, en lo$ receptores de
hofmonas 41$\eroides
64 VARIACIONES EN LA ESTRUCTURA DEL OHA
6.3.1.5 Motivo cremallera de leuclna
So trata ele una regn de la ptolelna CIJYS llene un te-9;10uo d& 7 aminobcidotl N
t.., confQrm;Jcin u.-beiiooiCSal &e ooooentran en un lado k>9 aml1'108cido, hldrOIObioos, d& tal tnlln(!rn que leu 110 repne en
la msma cata cada <IQ$ vvettas dt h6'1eo (2 vueltas de 3 4 resdUO$ 7 amlnoac:idos) Dos cade-nas peptld1C8s de este
tipo pueden asoclatSe hidro(aicamenfe, SU$ ros!Os CIO le1.1 oomo $1 se tratara de los de Ul\8
cremallera (en Ingls, leucine En el o1ro extl'emo dol mottvo 10'1$ dos <Ah6iicos encajan en el Sl.ltco mayor
del ONA y presen1.an en fa cata Wsico5 Ql.lo inunaccionan favoral*menle con tos
k>sfalos. De algOOa manera, este modelO a un..1 "Y' en lt'l ot talb <:Orresponderia a la cremallera
ele feuclna y los brazos a 106 tramos de In hliCes que 001\laetan con el ONA. E.stru.:hJms. de e$te opo POr
en las proteinas regjdorasde la transcnpci6n llamadas OZIP.

las lb ll'hilii.:C'II

IIIICJ">otllh"'
...
filfi!III'IW
brlicW<k. :q
d 000 CIICajllll al
el mrco _.)'Uf

'"a.:talldo l la

Tema 7
Estructuras de orden superior
de DNAy RNA
7.1 SupcHtH'Ironamlento del ONA ................ ,.,_, ........ ........................................... _,,,.......................................... 66
7.1 1 Superenrollamiento del ONA en procariol.a$ (y mi'looon<lrit\$ y cloroplasiOS de eucat!Oias) ........... . . 66
7. 1.1.1 Conforrnaan relajada ............ , .... ,,,,,, -- ........................ ........ ....... - 66
71.1..2 Conformaooneswperenrollaclit$,.,.,_,_, . . . .... . . . 67
7.1.1.3 Demostracin e)Cpelimental del - .,,, _, _, _, _,,, .... _, _, _,,, ......... 67
7.1 .2 Aspecto& tencos del supercnrQII(Inwer'IIIO . , . .,_, _, _, _,,,, _, . ...... . . .... .. . . ... . .. ..... . . ..... . . . ....... .. . .... . . 68
7.2 Estruetura de los RNAs ......................................... - ......... -....... -................................................. " " '"""'''"' " 69
7 2 1 CompoS!CiM ae Mses y estrucl1.1'as primaria y secundaria del RNA. , , , , . , 69
7 2 2 E.slnlctura triOitnenslonal ae los RNAs en 9M8fal -- ---. ............ 70
7.2.3 Tipos de RNA: propiectaOes y e&eruct\.W"as ........ ............ 70
1.2.3.1 RNA mensajero (mRNA) .... ............ ....... .. . .... . . . .. . . ...... . . ....... . .... . 11
1.2.3.2 RNA de tran$1ereo<;il' (tRNA) .......................... .................................................................... 1t
a) E.specifici(S;I(I de IO$lRNA$ por lOS 3Mii'IOeidOS ...... .... .. ...... . ........ ............ .......... 11
b) PrHCnei<t de l'luleOsiOos il'llrecuel'ltes ........................... -............................................. 12
e} oe bases il'lttae&-lenarlo .... . ............... .. ........ ............ ........ . . ..... 73
d) E.$1t\1Ciur3 se<;ut'ldaria en ttOol................................................................................. 74
e) Estti.Jctura en ' L ....... ........ . ........ . ........ . . .... . . .... ... .. . ... .... .. 75
7.2.3.3 RNA rlbosmico (rRNAJ........ . ......... . ,.,_,_,_, .,_, 76
7 ..2.4 Rlbozlmas: funan catali1ica de algui""IO$ RNAs 76
7.2.4.1 Accl6n on lt'l de RNA ................ . . . . . . . ..... --- "".... 17
7.2.4.2 Aca6n &n 101 <le inlrol'les. ... - -- .. ,.,....... 11
7.2.4.3 Acc:l6n UIUIIi liect y vloe.talitiw en virOide$ ribOZitn$$ <f.e I>O$ibiC tiPiiC::t'lcin 78
7 2 4 4 Acci6n lffll'lspepticlasa el'l \a sin1eSis de procelnas................. ........... ................. 78
7.3 Los ribosom.'ls.................................................................................................................................................. 79
7 .3.1 Loe:tlizaea6tl telular ................... ..................... .................................................................................... 79
7 3.2 Caraaerlsllc:as dlfe.-eneiales de los ribosomas procaritiCOs y eucaritiC06 .. . . . ........ . .......... . . . 80
7.3.2.1 Origen ..................................................... .,.,_, .. .,.,_.,,_,_,_,_,_,_, _,_.,_,_,_,_,_.,_,_,_,_, .................... 80
1.3.2.2 Cornpo6icln ... ,,, .. ,,,, , , , , .. , , , , , , , , ... . . . . . 80
7.3 2 3 EstrvctiJ,., ................. ....................... ....... . ................. .............. . ,......... ..... . ............... 81
7 3 3 de los ribQ5omas. St.ibutlidades ytol'r(>Otlentes ......... -- --- ---- .............. --- 81
I.Os llcil.'o$ nudeiOOS no en tas el'l las Jonnas e:xtel'ldidas OOtrespor\C!ietl.es a su estruerura
prnar'ia y seeul'ldarta, sino r'nOieculatr'nenle ms oompactadro$, k> que hemos oenominado (p. 32) nivel esttucrural '"de
orden superior". En el caso del ONA. parte O. esta o COtldons-<!c.-n viene representada por el enomnado
o nteorcinwmo de la caden<J sobro si n-.sma micnb'n qvc !)<Ira el RNA M plalsma en eslructuras
tridimen&IOI'lales variadil<&. En ambos casos. la oondenS<tein se completa por Ja asociacin 8$\JGcl'l<l con proteinas (J.Io8
tnducen el plegamiento de la doble hlioe del ONA o de IV tadentt lineal de RNA$ (p,ej . el RNA ribosn.co,
pg 79). La de esta aSOCiacin con prot.ct-inas POSOO un<t re\c'YMcia .spcK;ial on ol CMO del ONA nuc:tear
eucanbtico (lcm;a 8).
66 ESTRUCTURAS DE ORDEN SUPERIOR DE DNA Y RNA
7.1 SUPERENROLLAMIENTO DEL ONA
El como parte de la eondensac:iOr'l ae1 DNA goner'CII, PQ$08 esoecial significado para
enlender ta organlzaclOn del cr01T10601Tla. En concreto. conttb.lye a como un DNA do !.<In grt'n magnitvd puede
el imerior de la olula del ndeo (eucariotas), de muy inferiore$ a,., longitvd
IOiiC8 del ONA en doble ll6ice. PQr ejemplo:
ONA tamano
E. co1i 4.7 pb
! longiWd en k:ln'na de S.ONA

dWnonsione& en la& Que &e oompacc.a
2.rn (Clula)
Gada cromosoma humano 50 - 250 1 O" pb 17 85nvn
Genome humano dplolde 6,6 10
2.2rn
Se entiende pot superenroll smlento {enrollar algo que ya
e&t enrolacb} del ONA el retorcmlenlo o giro sobre al misma de
la doble hlice (Que ya lleva impltcito el. enrol lamiento mullJo de
de fQrma Qvc el j do 'a doble hlice no una
rocta. sino otr.- h6!lce (...,.., sue>Ortl66cen. Su ceuw. oomo
s.t 3 <:ontinut'Cin. t$ <1t una tensin
eltruaur31 en '" moi6<:\A:I Ap..,rooe do algl)o modo en
10<)0$ 10$ DNAs eelu181ret {y3 enrolt'ldO$) y $t
es.1reenamente regulado in vfvo POr la de tM
4-6
J
10p0i$0t/lo&fflS8$ (Pag. 151 ). En MSur'nM, tas dos Metas del ONA surren un enrollatnienlo, rnientrtts que ,., doblo hlico
sufre un superenrolamiento.
Un ejemplo inl\litivo del concepto de superefVOIIamiento es el oordn del telfooo, Que de poc si presenta un
enrollamiento heliOI:lltSal y. oon el uso <:Olidiano, termina por adoptar un enrollamienlo adicional (oordn retorcido). Esta
simil &e utiliz para elllllicar mUChas propiedades del ONA vioo {circular y peQuel\o). Un modelo m& prximo a le
e&tructl.M'<t del ONA es una cuerda por do$ cabo$ OOQIIados entre si. Aunque la cuen:la Dende a mafltener e&e
t\nOI'-mionto. puode w manualmente a un m3"y'Or o mcncw nUmero de vueltas svs C<lbo$ (IQf'sin), c:on lo
que se genera ul'la 1ensi61'1 que se liDera ta tormaciM de
7.1.1 Superenrollamlento del ONA en proc.arlotas (y mltocondrlas y ctoroplastos
de cucariotas)
Aunque a!ecta tanto a procarlotas como a eucarlotas. el superenrollamlento es M5 conocido y de oomprensln
mas sencilla en tos pnmeros, por Jo que asl &e abordar a contnuaCIOn. Estas consideraciones son Igualmente vllcias
para el ONA de pl&mid06 procaritioo& y el de cromosomas milooondriales y doropl&ticos de eucariotas. En todos
esto$ c:OIIO&, a;. mol6c:u1., do DNA mutsln'l una eStructura o oerrada (una doble Mliee 00t1 sus extreiTIO$
entre si). la que es fbeit aptec:iar tos tel'lbmenos de superenrorramlento.
7.1.1.1
Conformacin relajada
1.<' por el DNA M su rotma B (aprox. 10,5 pblvuelta eotre!I)Ot'ldC a l.WI e$1aCSO estable, de
mi !Wna enorgia, QVC 10 oonsicsera no supereonrollado o rehl}tuJo, cuando el eje de la doble hlloe 1e puede dlsooner
500r'o prano.
ES'I AOO RlI.AJAOO o NO SUPERFf\kOI LADO
(eonfom1:1dn de cnfnima cBCrgia., estabili dad)
1'1>1' "'Jo;mp\0, 011 una r.:p'ln dt 6) pb t. dt Wl..:o: ron
10.5 pb .:loCI:\I.:IWll D.f>NA. pur- luCUIIO rn.,ad3
SUPERENROLLAMIENTO DEL DNA
67
7.1.1.2
Conformae1ones superenrolladas
En tas cluiM el ONA generalmenle no se onQ1911tr<a en k! QOI\torm:)OIOn relajada sino en un no relaj ado.
y mas COfT9<1CIO. Este es produado por lopQISOmcrttm (1\le el c.one ttansltono de una o
hebras, introducen un aumeneo o una dtsminuCI6n en el n:Umei'O de vutfl<lS de hlice {P89 151 ). En a:mtx:>S-ca!los.
:se produce IJna tensin estructura'. debid;, a un plcg<'lmien10 IOC(Il la!l IW!tlfas y a una pos,ei6n re!awa de loe
nucle6tJdos de &u goom11.1tria mlt$ la del S..DNA Esta tenSin se contrarres.ta en la
moleculcl mediante la de un supcrcnrQII3miento ta C<ldena O(llera del ONA g.ta SOOte si misma de forma que
lss base& puedan cfl&ponorliC cw. del modo mas proxlmo a 1.a COf'l'otmaot! S..ONA
En "'duce el numero de vuel1.8s de hlice. la tensin se libera formando un<t it ltl
que s.e le un vlk:lt negativo de superemollamionto
1S T AOO NO o TENSQ (&: <n<rgia
superior) origmudu por dc:&enrolllnuk l\w
de 13 dobk (pnJllb de ' 'uclw)
1 , ,, '" \ 1 lo 1cnfhil oJ, 1111
COnformaCJ6n :: mtnhn3 L"fltq;.m.
obcmtdn medi.Aolc un
SUPFRENROLV\MIENTO NEC:J\1'1VO
1 1 cromu ... >ma & 110 hth.-t. con 11. 1 pt..\'OC'lta
1 lftl'lljop "
1 Pll' j 1 ' "'
.. ,,,-.
' "' t 1
':if 'f'l< In !l('rd!ob de una vuclllf( htiiiX kl
U.:urtlllocnlu ' 'S'"'* <k 1--1 flto, /:<.111 dt hbh>
(l(tfl ll,fl pb vud1a: 11),5 ph wciM. nua
W'I'IIIIO..Vi.:ro.'a 1.1
tnok\:uhllk-O"'tA
l"v ' " ' fooiM-n;lll\oll.u-.tftl!l
llf l::tfi
l l\:to>tl\lo<oilol ...,"'o'I'I!OOII .
!l \ ut11:u m loS rb l WII.I
no1
St, por el oonlrario. &e aomen1111 el nUmero V\l!lt3$ de hke,
de senbdo opuesl(). oon un
ESTADO NO RELAJADO .o TENSO (de cnlorgil'
SU'ICf'iot') \)rigmado pot liUpueorollumknto
eh: dtlt)1e l)lt(;e de vuchas)
1 ' , ' "'' 111.. ......... .
Conform:actQn di: mlrunJ:
medJante un
SUPERENROLlAMlENTO POSI'rl\' 0
U .lo: rb lll-lfl.:n..: .OOm ll 11;; lotll. , ._.. 10. rh-\\dla
!4o.Jroill o.lc UD
' ' !1 1 > , 11 n
,_
'i ""C '"'''-1Ckr.l rcu.: t:l lllllr""'' '"" -.o !WI .. .., h.t
.x11rnd;, r.n la rtp6n de nl pt.. nu. 1 'udt...< de bHkc-
,.,,. pll \\fdlll pt\ (1111 hmlo) lcii,S
t,j > l'>!lllfloOIIIII.I llf"':l llflf.ollu11i1 u.'lk'
l l'(_ ... (\'111 '11,_; '*'
t-o)IIflrtlwt.o(nf . ,. I HI\li
7.1.1. 3 Demostracin experimental del superenrollamiento
De e$I8S dos po!l!bl!ldades, ONA se encoonre normalmente en las clula& oo un e&UKto de
negativo. la primera evodeflcia que a.r--6 e Pf'OPOI"IOf ta twptMI5 del
superenrollamiento de la& otadenM se obuvo gracias a la aplicaciOo de lit !tnica do IJ!jraOIN'ftflfugacin i.scpicnica
(basada en el equlli'btbde &4:1dimt'n13Cin en un gr;'Jdlcntc <'&defcSidOO do ;lon.oro dC pbg, 1'37)
Se obsetv que ol DNA dtt potiontJJ, un vinn <ue ( <.'IU'$il cn(ltf rn!One$, se l:if.'P<Jft\bi:'t en 1111$ bandits en
o:1 1.3!1 fmociof'lt!t, sio emb31l)O, tetlian ta misma masa tl\Oieo!Aar. por 10 que la dtlereoea debia estllr en
su forma o es-t1uC1ura. Se pudo que las molctllas menos densas etan lineales, mientras que las dems eran
S6b ttas la h1pleStS del supereorolamiento se pudo explic-ar la difwenaa enlre eses dos fraooones mas
densas
68 ESTRUCTURAS DE ORDEN SUPERIOR DE DNA Y RNA
b&n.U. 111. l-IS
tmeno;w \'ekK:i\l.o\1 oJe dnM:I'*Innr.
ONA de &lbk bcbn linul
\'-''"-'t'llfil. melll)l; C(IIJllpiOC!Ia
bond;r 11. lt.S
1 de rnc.:nnedia)'
DNA. do: dobk b.:bnl (lrrcular, rcobjad!l
banda l. 20S
{ trll)'ilt o):
DNA de doble he,. C'lro.ot.
tiiltuth.lf:i mM CO!tlpltlll
7.1.2 Aspectos tericos del superenrol lamiento
El la Topologia (rama de las Matemticas que e:srudia las propiedades de posicin r&latlva de tas
partes de \.1'\ objeto, propiedades que no cambian al ser somecldo a delormadn} ha permitido aClarar la eS4ructura def
ONA 5\4)Etrenrollado. El signo y rnagnil\ld del &upetenrolfamiento se asignan oon base en dicho estudio topolgico. del
llo &e comenl.<ln i'Qvl iQ$ i1$PQC,:IO$
I'Q>iiblt.i du(lflf1ici.,.,..,. trona. .. & do.lcc htllnll t(l<lt t"jcmpio, do$ (llbQs de cum,l) ron pdo.l dt cnlto.:
(o.blho:ntc 1.ui.IT"no ik 1'JJI.teli\ L - nimwrv do.t n de '<1.'<X'l'tuo: la ho:brlu t< cner-.
(1=1 mookloo do:lll oon L lO, ,Je '!lO _,,erklnno;!llel
e )
e )
Se define el ;ndice o nUmero de enlace topolgico (L o Uc., de linkinp numbef) como el nUmero de veces que las
dos hebras se QUz;an entre &S: mils especiflcamente, ol nUmero de \'OOOS que....,.,. hebra cruza el plano domido pot la
olra (como anillO o corva cerradet). Se 1t valor I)C)$i!ivo Q.IMOO las $0 c:n.a.an dort<:NI
se Jlabta de enlace topoiOgoo potque cuando t.$(1 las dos hebfas estn l lslc&mente ligadas (es deot', no se
pueden separar). a pesar de que no hay enlaces 00\'alentes enb'e ellca&, Slo se POdrfan separar (L=O) rompiendo alg(ln
enlace CO'Ialente {es decir, cortando una hebra). lo mismo es aplicable para cambio del valor L. Por &a misma
razn. la dofofmac::in. llle9amiemo. eec., dt ta1 hebras. sin cortarlas. no el nmero de onlaoe ni el nmero de
superenrollamiento
Parn ot etl!IO del DNA. a. oonfOttr'lac:itl relaj&<la posee, por lanto, un nUrnetO de etllaoe al nUMf:f'O de vuellas
de hliCe, sil!l\"'pre (X)Sitivo puesto que la doble hlice del ONA es deXb'glra. Como ya se ha estudiado. las situaciones
de superentOIIamlefl(o surgen de cambios en el nmero de vueltas de hi<:e, es declr, en el nmero de enlace L
Para discernir y c:uandflear 106 estados superenrolados se refiere su valor de L al del estado relajado, defriendo
un I'IUeYO valor numrioo de superenroNamiMto como la difetencia (U ) entre el nmero de enlace de una confonnacin
concreta del ONA y el nUmero de enlace de w foona relajada, Este valor <le supereooamien1o p.ede. lgicamente, &ef
posi:ivo o negativo
P'.W.1 ue I)NA do: ZIO pbde IOfllitud,la t:SUUO:natll 1 tiene 2lll pb/ l(),j pl)\u(lu " 2() Por lllne(l, b
ro:l;tp4a de C\1: O,NA Oc I,.,.ZO
P'..lr C'1K'ni'Ja y P')r L .. 20ll( hab!n dt un liilll)('f<rlroiW:Jii(MO oostti\'O o
oo oco
... m..
' "

l. 'll
............ ......... . ,
ESTRUCTURA DE LOS RNAS 69
7. 2 ESTRUCTURA DE LOS RNAs
Como $C M iO(Iict'ICio (p&g. 33}. JOS RNAs soo polirtiDOnucleOtldor. {POIInuctetiOOs con rlboe.a, y U en tugat ae
T) fom'laOot; por linet\les de hebra serteila, ae varias decenas o milates de unidades, pero de longltud muy
lnlenot a las de ONA No lKt pre:senl(ln como <:ttdenM <klOies de nebras complemtlf\larias.
7.2.1
Composicin de bases y estructuras primaria y secundarla del RNA
L& estrueh.lta ptlmar&a de ios RNA& ha sido e&tudlilda ant9n0m'lento 4J En ., ltt M(:un(fl!nl! es
<:ar&eleti$1iea la ausencia de esiTUctlJra repetitiva y blen definida, a 6fenmcia del ONA; r$()1mante $010 OIIJS\e
es1ructura secundarla en parte de ta molcula de lRNAs y rRNAs.
Al no extSlY un apareamento dos netwn, la oomPOsic:o6t\ 6e bases en lOS RNAs es mucno ms
que el el ONA y no se cufll)len las reglas de Ct\argatf (pg. 38). Por otro en RNA$ h<Jy
atlundsnCia oe nuc:Je(ido9 dlstJnlo& de lo& cuatro prinooales (A, G, C y U}. aunauc en bajl) <:on respe.clo
ae estos.
de , uric'IS RI"A"

1'1po dt RNA
A G e u
R:J:. t1ude:u 20.2 25.7 29.5 24.6
<hlg:.do)
nlitoooodriaJ 17.8
J 1.8 28.4
20.9
nbosm"-"1>
zo.o 31.6
de
20.1',1 )o.9
28.5 10.4
mcn:.aicro
23.8 17.4 20.5
nOOsmx:o
!4.Q 27.7
19.4
26.?
18.5 29.2
18 4 20,0
mcns:.icro
17.5
20) 27. 1
E colr .. 25
JI
.. 22
21
de 19.) )1.0 3 16.0
24.1 27.7
2:!.5
ObsCncse cmo. a diferencia de lo Ql.:\111'1: ONA.
la composicin de bases \'aria dt:11tro de u11a 1nisma espec-ie (scgiln el RNA cots.idc-mdo
n(lul$!C una entro: bases tA-U, G-.C. purinas.-pitimidinas)
Algunos RNAs aooptan estruefi.Wa secunana en pequeflas de su molcula, graoas al de s.u
nica hebra sobre si misma. s;empre que sta permita el apareamiento intraGatfH!ano de dos zonas a.tyas secuencias
sean complemen\arias, a pesar de e"ar separadas en la estructura se 6orma asi W'!a doble hlice klc.al. de
carcter antlparaleb. De manera similar se forman tambin dobles hlices entre una moloola de RNA y una hebra
senclla de ONA (hbridos RNAClNA)
En estos casos. si el grupo 2'-0H de la ribo&a adopta la 00t1lormaon C2"6ffll'o presenta mpe<Miento& esteriC06
con otros !OmOS de la <:adMa de RNA. Jo ave mpide que se forme la doble hlice (que seria de tipo 9). En concreto. el
2'-0H 9$taJi<t mil)' <:orca de los fltom()$ del grupO k)$f3IO eoMiguo y del C8 1!1 ba$C ady(l(.onte En cambio, en 13
confOrmaClI'I et 91'\4X> 7 .OH se proye<:la nacla ruara, te{os ae ottos tomos Clel eSQueletO y no ll()al'eoe
e$trlco alguno. potiO que es POSible la fotmacln de la dotlie nelloe. en este caso oe tiPO A. En te$umen
la Unlc.a doble nlce en la que puede panacipar un RNA es fa de tipo A (el ONA. al careoet del OH en 2', puede adoptar
lanto la A como la 8 , oomo ya se ha estodlldo en el lema 6).
CQI'Ifonnacin CJ' <'ndo
(10rma A. nica pos.ibk
p:ir:lel RNA)
,,
'o
'


1111
,.
<" e _( ,o......._..
conf(lnn:.on C2'Nidu
(cst:. c.mfomucM'ln es p:1r.1l:a fomu R
endONA. ('11:1'(1 es p:r.l RNAI
70 ESTRUCTURAS DE ORDEN SUPERIOR OE ONA Y RHA
7.2.2 Estructura tridimensional de los RNAs en general
Existe una gran diversidad en la esttuc:rura trtdmenslonal de las t'l'l()j(!oCulas oe RNA. es oompteja. \mica pera
cada tipo de RNA, y resulta de la 00fl"'bit'I&CI6n de eSirueturat se(:l.lt'ldariM estabilizadas por erce& de
hidrO!)enO y por lntetaoclones l*!roleicas oe apil8mlento oe b*Ses. Sv e:sb.ldiO ooncrolO &e har mas adelante. para
cada tipo de RNA.
tallo
A pcs:ar oo && CIC una secvndarii'l propiamente diel\3 PN'<'I IOda ta moi6Cu13, 1<'1 eactona
senCilla oe cualquier RNA IOC:almenle vartadas estructuras: hOrqiAas, Ct\.lclmes.. buCleS, lazos. e4e. Algunas de
.-as se <JeC)er'l a1 8C)att.'lmienlo de b.-ses formando cortos tramos de doCte hlioe de upo A. c:otnO $e
acaD& de Indicar. La proporcin de z.onas nellcoldales varia ampliamente entre di9bni:Os RNAs. pero puede alcaf\Zar
hasta un 50% de la estructl.l'8 total.
7.2.3 Tipos de RNA: propiedades y estructuras particulares
Tamo en proc.anola& oomo en eucariotM existen ll'Gs tipos princiP&IOs do RNA m,.n$<18f0 (mRNA), de
trans.forei'ICia (lANA) y ri)o:$0mic:o (rRNA) , oe eiO$, en evcaotas exl$1en RNA {fwi!RNA}.
I'IIICIOtlt ($nRNA) y ti!Qc)lsmie:o I)&QI.ICI\0 {seRNA), y RNAs de Otg&OOIO$ {MiiOOOI'Id&$ y TodO$
elll>$ tienen en oomun ooa fl.lndn relacionada. dlrecu o Indirectamente, con la eJ:presln grica (madllacln
postranecrlpciOnal y tradvcci6n). AGiclonalmente. en a9Jn06 virus el RNA iV09<1 el papel de de 1t1 inform;Jocln
genelca, qve en el resto de atgani&mO& corresponde al DNA.
La& <frferoncias lO$ CJiStiniOS lipes eJe RNA se te$1Jtnen en la labia.
Cl"'

Canridad
amnM
Car..ctJCristkti paniwtam;
t d ub r
'
n" nudotidos
mRNA (P y li) 5'4 600.3.000
....
lltl'IIA <r y 1:)
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..,. .$0.60di!-, cop.xirlo.tll,....,. Wll..,
rkNA (ito)JIWmn (P y E>

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5.8S 160
SS 120
hnRNA
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100-30.000
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nticloo(t)
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IOO.JOO
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o<RNA C1tOMIMna <El
-
1t1lR.NA mtt(IOOft(lnas
-
1
cuc-.nkon ..

oectoee-ok pis. 1211
p
pro..,n<ll
ESTRUCTURA DE LOS RHAS
71
7.2.3.1
RNA mensajero (mRNA)
La propuesl8 de la eJCi&)ncia de molOI.Il<l QVO transllere: el mensaje gM&tioo des<Se el n.Jcleo al Citoplasma se
debe a Frant;:oi& Jacob y Jaocqves (premios NObel et1 1965).. DiCha tnOiocula es el RNA mensajero que. al ser una
ooora de ta infom'3(:i(ln contenida en la secuencia del ONA. acca po61eriormente en el ribosoma oomo molde o
pnral3 sinleSis proteica.
w cat'tiCiertsucas principales del mA.NA son las siguientes:
Se en e1 ciiOplas.ma de todas las cUas. en baja propo:i6n t$Specto "' RNA totaol y <:.on vido medio
COI'ta dt\08 su rpida slntesls y degradacin. Aparece a$0(.iado transitoriam811te al ribosomtt
Sus son de tamano muy diverso (en relaan (.(In el tai'J'I<IIIO <:le 13$ prOieinns QVO OO<Iifl(:;)n}
Es el tcx> de RNA de estructtKa ms sencilla, con uf\3 cadena lineal, IC)tl"'\$d8 exCJUs!vamenle poc tos
rit>OnuciOOSidos A. U, C y G '-"' <.:omPQ$1Cin de b&Se$ S un reflejO de ta del ONA r'l'oO((Ie oet que proceoen. La
mola.l.a careoe de u!\<1 oootorm;)cin oeflnida: la eadena se mantleo.ne elltentida. sin adop4ar e&lruefuras
secundarias ni terciarias signifi(:ftivM:, graciM a la participaCin oe pro1efnas que se asocian a ella.
7.2.3.2
RNA de transferencia (tRNA)
Fue Frands Crict; QUIE!n sUQR) que lo& aminocidos se unj$n a una mOiO!h inlem'18<18. o "accaptBOO(' aMes de
rnteracaonar con el mRNA los IRNAs actUan como l'l'deulas aaaptadoras en la slntesrs de ptOielnas.
Esta funOOn doQende <:le una dOble interaccin:
Por un eltren'IO de la mole!Cula une.n el amlno&cldo para dar aminoacil-tRNA (P<ig 302). fa forma acbva ne<:esaria
reacdl'l <'e fonnocln del enlace peptidiCO.
Por otro extremo se aparean oon el mR.NA. en presencra del rbxioma, IJansfirienOo el &mino<'erdo (ljl ppbdO
<:.rocient.e etlit manera. los amlnocklos se ordenan correctamente en la prolaina, de acuerdo con la secuencia
letoa por el tRNA 90b'e el mRNA(pg. 311).
EIIR>lA es d mcdt.lldur cntrt el ll\CINJC rkl
mR.NA y la llct'UC:ntia de arnu-oocidos dd
polipptido quc se cstil smtet11.1111do:
..
ur ;o
1111<'. II;Uo>!1 ,-,,.,.,
, tul(\\
A pesar de ser tos RNA.s de menot tama!\o, lOs tRNA& pteiSenlan ooa gran escruct!Xat Se han a1stado
y e:Sl\Kiiado mUChos. de dlstinlos organismos. mostrando una estructura comn a pes.lr de S41S dlslintas secuenclas. que
tettejan 1a r.eeesidad de BC&J)Iaern a su especitlcldad.
a) Especiftcidad de los tRNAs por los aminocidos
Los IRNAs oonstotuyen ooa fraCCiOn imponante del RNA total. y se encuentran dlsuel1os en eJ cl\O&ol. Una olula
puede contener hasta 60 IRNAs dlferentes. es decir, en supetior al de amlno&cldos (20), puesto que cada tRNA
irlleracclona e&peclflcamenle (.(In un solo aminocido, pero algunos amrnoci<:idos son reconoe<os pot ms de un tRNA
(se habla en este caso de tRNAs pg 296).
La especifiCICSad se indica <.:on el nombro del 3minoCido on supe.rindice {001' ej . tRNAAia); los tRNAs sin6nmo&
llevan subinditfl numCrieos (por ej . tRNA Trp
1
y tRNA Trp2), Cu<'tndo oon ot aminocido se dice QW
&Stil o se aenomina y se lnCiica con et amino9CiCJo c::o10 prelijo (por ejemplo,
AJI'l.4RNAAI$, Trp IRNAl rpl. TrpIRNATrp2, etc.).
_c 7!; 2 ________________ -" ESe:Te: R,UC> Cc- T..,- UR.AS DE ORDEN SUPERIOR DE ONA Y RNA
b) Presencia de nuclesidos infrecuentes
Una de tas caracteristtcas de 106 IRNAs es que en su composicin presentan, adems de tos eua!ro princ:ic>i'IIO$,
otros nucle6sidos no comentes o infrecuentes, que pueden suponer hasta un 10% del total. Generatmert!e $t tr313 do
derivttdo$ do 101$ <;uetro A. G. C. U. it$1 oomo de la a meMo con grupos metilO en la base o la
de$0llitrirl0!1a. AOerl'l!l. es PI'Csoncitt <Jo ribotimidin,,,, LJ l)f\l$0nc;ia de todos estos nuctesidos est
relacionada con 18 estructura tetclalfa y tiene por e1o una dara influettela sobre la tuneiOn.
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5.

e) Apareamiento de bases intracatsnario
A pesar de la abundancia de nuctetidos no usuales. los IRN.As muc&tr3n 1..1'1 Ciet\0 9fac:JO <le oomplemontariedad.
es decir, de con es-tructu101 socundri , on doble ht.l ice bas&<la en (Se b3$C$
lnttacatenarios. Con freooencia M observan ;Jp;JH);;,amie:ntos (5:s6ntos CIC !()$ OC W<"Jt$On y Crick. nmMos
genricamente de HoOfSt/ien: PQf ejemplo. G puOCSO ap,ttre3r$e oon V mediaonte un fflCI'IO$ fvet'le Qvt el enlt'tot
G .. C En otros etl$0$.. eo el cnlt"tce de l'lidtgel'lo participa el 20H oe ta l'lllOSa. Tanon pueaen e.otlstir baSes
tl'l!rentaaas pero 1'10 cof1l)leme.ntarias, asl como una o mas bases a lo largo de la e:adena separadas mediante I.WI bucle
laeililal el aooptamlento de ottas bases.
t<lll'lJ'Icnu;nt.ana._
apul'f:"MHtnlil&

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G- C

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74 ESTRUCTURAS DE ORDEN SUPERtOR DE ONA Y RNA
d) Estrvct(Jra secundari8 en trbol
Al coml)3rar l;t estJ\lchJrtt dt distiniO$ tRNAs M obMN.- notable Mmejarlu. El Ple9amiento rns probable e&
1:1 cstruetvt"a M<:unOW denomin&03 f'n ttfbol {POI' su M310gia con tres h0j3S y un ._110, o OITO$ con cuatro hojM).
dOf'lde t1 aparebtnlento ef\tre Dases es mttxmo. En ella se dls.iingt.lel\:
Tres brazos o asas princi pales: una central, 11. y dos perifricas, 1 y t11 (cada una con tallo y bucle)
Un o tl$01 menor (IV), de dimensin variable entre 10$ difefGnte& tRNAs
Un brazo abierto o brazo
Est ru('tur M'tundaria g:trM' ral
( .. hoja d(' dt lo!ltR..'IA.s
-!Jid<:l lu..,ntt l"'rl blot)
Brug n. Plll' o an 111:
Uofllbcbl lllllllll<lo> bulo
di hXJ ru.ridil .. IJO)C'qllllt \}OnllfCIIC
l:o tnftC'I.'UI'fi!C' lliilti.!rour'IIC'IIO
(UII,t f'"rtx''P' M UJ6n 11.-1
al

niNmoo r .. ,c ....
lupr<kl ... ,,.,...,m p(l
O A
O'I'_A
Brazo T. T!V(; 9 asa 1 conlo:rw ell!
oon
l!lf rt<:Ul'!l!l.'' )'
IUIII,YC>MWh'aOOJ.
Ejemplo:
Detalles. !le ls
primaria y sceundarin
del tRNA f>< de kvadu!'ll
1.11$ punliu U.: Occh1 sd lal n
b lll.ll:k$JdOS mrUI:!IkS
O dllll.aoun.hnll
(wnbt&l DII U <1 Ull
1
)
(}"
UM'I'IWII m G
1
o,tA
(tlltll\Wn m AJ
e

'1' ..
T nbo'JtJMoJmll
l:tl
001110 In
.. d UlliC<lda.
ESTRUCTURA DE LOS RNAS
75
e) Estructura tsrciada en L-
Mediante anii!IStS por difraocin de rW)'OS X <le Cle lRNAs se pueoe obse1V8r una estructura teroana
oompecta, en forma <le L E:sla se ongin<t 1)01 '-"" retc)(Cimier'ltO et\ et espacio de ta estruc:t\Ka secundarla en trebol.
Impuesto por las dobles hfiCc& IOC<IIC$ y 1)01 l)uenle$ de hiargef'lo que aoetcan los brazos O y T Es10s puentes son de
tipos infrecuentes, incluyendo en alQUilO$ tr'(lletes de bases (pag. 73). La esttuaura en trbol es. por tanto, slo
una representaan b..-nensionat $imptillcttda oe ta verdadera esb'uctura tridmensronat
d..-1 en b
cstnctura ltl"\: liUU , Se nan.nenc
11 de blls.:".$ de
bruz.:...;
nuclc!i,\!1.:1.



<k
se dcUIIIan ls
o,:n doble h.hc t
""" ..
"
El oonoetmieniO delallado de esta es1nJC1urs comprender una pecutiartctad de lOS tRNAs. u:xsos $0n
dis.tinto6 (pof' tener discinta seruencll e interaocionar oon un codn de mRNA y un amlno&Cido especil'\cos), pero <ti
I.J8mpO son do atg.Un modo simil<trcs (pOr ooa estruauret leroana oomn. unirse a I'IXlSOmas y ser reconOCIOOS
por 10$ qua .,tervienen en &a tr3dvcci6n).
76 ESTRUCTURAS DE ORDEN SUPERtOR DE ONA Y RNA
7.2.3.3 RNA ribosmlco (rRNA)
Es Ef soporte estructural y componente principal de los rfbosomas. Eld:s:ten dislintOS tipOS de rRNA en cada
otula pto:arlota y eucarlota. oon masas moleculares dlvet$8$, constituyendO la mayor patte del RNA 10181 {7$%). Al
Igual que el tAHA. un altO 0001enldo de nuclesldos Infrecuentes ('t'. T y aqullos con bases
furlclafi"'E!!Olllmente).
tos RNAs mosmlcos adop4an ooa oonformacl6n compleja. Estn formados por una SOla hebra con regiones
heUcolda1e& oorta& resultantes del apareamiento incraca:tenario de base&. Son molet.a oon mucflos repliegues sotlfe
$i mi&m;ll5. muy 1'\eJcible& QuO so toi1'C)()r1an oomo espir<lle& al az-ar, especialmente a
baj;a ioic;) o <111<'1 Parece Que w con$1itV)'o un armatn o l'nl)kte SOOro ol Que so
cn$<tmt)WI v<'!ri<'l$ prote{nf$ Pi'!NI <Jar IUI)al 311 tlboSOr'l\a.
Pr.:ditXio)JI de: Mnm;cnt pnrn los rRNh
SS )' lf!S de fi:('()/J. bljo una
cr.mt(lrrnocim ooo el nUmero do.'
... micmos de baSC$:
\to.Jdos tndui'ICII.'li(luakll \Id rRNA SS.
olm:nidQ .,k-1 ooeiJ de 111 nana J:cnqpu,) btU.
>im1htud co. e:\ de t.. ('t)/1
En eoearlotas. l.a mayor parte de6 RNA en ot nUc:leo son lOS rranSCiifot prlmai1os, molculas oblenldas
dir&Ctamenre de la transoipan del ONA y <P.Je s. CIOfW<irn en RNA tras sutrlr el proceso de maduraciOn
postran&OIIpcloMI. Et dtl mayor IT'anscrito prirnano ptltQ.M'Sor cJel rRNA vatia entre 6 y 14 kb. segn la especie
(c:Qn un oe sedimentacin de 3S a 475). Poco despus de $911' sint.eti.tado. eM pr rRNA e$C:Iin(lid0 para
dar tres rRNAs maduros. de 28S, 18$ y 5.8S: stos, junto al IR NA 5S (l)roduC*> de un gen il'ldepencliente y. por ello. de
un pre.-RNA dfeteNe) son los RHM que constituyen 13 m;J')'Of P<'rt.lt de lOS riboSOf'I"'8S (p&g. 80).
En procar lotas. un Unioo pre-rRNA da l8ml>i6n IXW' prooesamlento postranscr\XIonal, a rRNAs maduros de
16S, 28S y 55, que fonnan el riborsoma procantico (Pag 80). El misrn() precur$01' produce adamas algunos tRNAs.
7. 2.4 Ribozimas: funcin cataltica de algunos RNAs
molculas de RNA $0n <:<IP<'OH 00 acruar OOfTIO biocataiZE.tCJOres, <le ani que el concepto clsloo de
enzfma haya sido ampliado ms all de las ptQC9inls A os60s RNAs con actividad catalltlea, es decW. con capacidad de
disminuir la anergia Oe activacin de cJe!ern*ladas reaoclones bkxufmlcas, se les llama ribozimas, para distinguil10s de
tas enzimas proteioa:s. U c;apati!Sad catalitiea esll'lla Igualmente en la gran oomplejiclad y dW.I'$itlad de ostrue1urt\
tridimen5ional QvC l)ueden aCIO)tar lOs ANAs, lo que les pemwte edaplarse a& sustrato. COme) en su
gr.'lcias a los grupO$ tunciOnaleS e bases y esquelelo. De hecho. se han pociOO realizar est\do$ cinticos ten
tlbOzimas. cumplen ta cintica de MichaeisMentoo. tlpictl de enzima$ proteiCas. se piet\S8 que &as
tlboZiM3S los primeros Dkleat811z.adores que apai'EIQEifOI'l on a;. o'IOivciOn. sienCIO <Je:splal:ados po$1eri0tmente por
1a4 mas vetSMiles. l06 RNAs serian asi las molcU3:s de la \lida, antes de que
t'YOitJCionasen 10s ONA.s oorno portadores do inbmacin gentJea y l&sprotefnas como catallzadotes.
Se c:Qnooen nbozimas que actU3n en divet'SOS !!pos de reacciones de inters en Biologla Molecular e lngenierla
Gencica
ESTRUCTURA DE LOS RNAS 77
7.2.4.1 Accin catalitJca en la maduracin de RNA
El pnmet ejemplo conocido de molcula de RNA con acbvl(j(Jd calaH1ica fue la RNasa P (se ha e&Cudrado en
Proeiln04l.t$ pero existir vn(l $imii<"Jr en Est3 .,-1(1 (Ofm;'l(f.) PO' do
y de RNA, J)8I'O s. h3 comptObodo qve la actividad roside on ol OOO'lll(lnen(O R.NA. Reconoce oc:mo
rnociO oe rRNA.s y lRNAs en pri)C:.;l'lrioi.M y cat*lilt' utl:l de 1M s-,1 m_,<:Jvracin
posuanscripciOf\81 (para dar 109 rRNAs y IRNAs h.wtcionaleo9), en ooncre10 .a generecln de lOS e"ltemO!I S' Cle lOS tRNAs
(pag.2&3).
sustrato:
RNA
miMO de rftt\As
y tlt\A!t
enzrma:


..
prOdu<:IO:
plt"-I.RNA:>
p;tn:N.Imcnlc pwcc,..fu,c
(e.;ln:mo S' (ldmni'"'
lllf'll(ldllt\'1)
de
fRNA>
7.2.4.2
Accin autocataltica en la eliminacin de i ntrones
l.3 $iguien! e
4
3'et1vid('t(t fCx)zim&!iea- ei'IOOI'lii&O& 13 <Jet precu rsor de r'RNA en el protozoo Torr<lhymGna
(evcariot.J unic.lvltu) A dlferencii'l det anicrior, este ribolimtl i'lciV<t 3Vk>Ct'llalibea, es decir. el su1Sirato es
sv molel).ll:l un me<;Mi$ti'IO $a'l'lil3t ac:tUM oomo rlbOZWI'I3!$ otros pre-RNA$ prOQirlota:s y eoc;ancx.s.
aqv6110$ Qvc i ntrono$ de tipo 1 y 11 1.0$ in!rones 245} $()(1 del RNA precursor QIJ$ no se
lraduoen 3 ptOtei n:'l o 110 fOrMM parte del RNA rnadutO pve:s $e elimiMn dur:'ltl-1e I:J m{l(lul(lcQn; el prcRNA
pues, el RNA madvro y 1os it\uor.es. LOS bpc)S de intron y lOS f)rOOitSOS de madur<lQif'l <.lel RNA preC\11'$01'
por OOtte y se estudian en el ptooosamleniO postr8fi6CtlpCiOtlal <M' RNA (p&g. zso,.
En este c;a,o no se puede esltiC'Iamente hablar de cal&!lsls. pues uno de les requiSitos es que Cl ealaliudor 1\0 $e
en el proceso. Sin embargo, el produclo final de una sene de r8aCCIOftes de autOhidrliSJS del 1nttn de
T etlah}"f1)6mm es una molcula (derivada del propio Wltrn y denominada l19 IVS que es capaz de ccuatlzar r&ac:dones
<Se l.:;ln)b$i& y do extornos il el!it Por Wn40. &1 bien no lo son el preRNA o el intrn
or'igwlales, l I91VS si es vn V(lfdadero biocat<lllilodor.


..
CpCpCpC"
+
CpCpCpC><
'1" '
.. ut .., , . "

rRNA nudum
mtrn hhcmdO".
kll!C'ft!kl lo:ll\
,J f1h..,.,...)'"'ltm: fi'I;A - !.-..-
78 ESTRUCTURAS DE ORDEN SUPERK>R DE DNA Y RNA
7.2.4.3 Accin catalitlca y autocatalltlca en viroides: ribozimas de posible
aplicacin teraputica
Los vkoides son molculas droulatee de RNA monohebra oon capacidad pera Infectar plantas. en at(p..W'Ios de
ellos &e han encontrac tambin ribozimas capaces de actuar. de f<:lnn3 al caso antenot, &Obre su propia
o sobf"e socvencit'$ de RNA de molculas diferentes. Estas 11boz:ir'l'las oontienetl dos c:ornponentes
CIOf un toldo. 1M S&Cuenei:ls de rl!ltonoeimiento Clet RNA sustrato (por apereanje;)IO <'e b$Ses y. por
otro, w centto catatft!co. que adopta t.na estruccura tridrmensional peculial, denomlnacla cabe%a de martillo
(hammerllead). y produce la del RNA &ustr.lto, inaCCivndolo.
(l')

htbra
tlllllhtka
!a_,....,.,,. _,W"_I .. ..,CIId
IIK\)liO) .jc. (uilo.,.
Modtlo de 111
nb<lt.ltllll UIUdll ''00 d $USitdt(l,
la; ..:gioou de
;aplltClllllil'llUI de hl$t:l, (011
dcoblt belio: o: $u( al. do: la hrlora
Q411hti>COI Cl()!lSi go mi$ma y oun
b hebr.o
fl3 trayC(:IOrill 6tl CtlQUclclo) So:
ha QI'nos
de t oon una barra 11'\'C'SIIl
Se 1\an ensayado anlogos de atguoo de estos ti:!OZimas (obtooldos por gentica) para la
destruccin &elediva de molculas <SeRNA con secuenc&as caractetlsclca&. Este es un planleamlento de terapia gnica.
dentro de ta estrategia de ... dirlg!Ga de la expresin genlca". Se trata de preparar riboZimas artific:iafft eon
secuencias de rooonocimiento que tes perml!&n trrse "anttsentido' a un mANA. de forma que el centro ctrl3!ilieo lo
oscincla, suprimiendo la sltttes!s de la <:Orr9&pondiertte (El concepto do cadona mt.i5ftf!tido se inii'Od'ueira flt'l el
tem;t de transc:ri()(:i6n, pr.g. 2:43.) Otro tipo de plantearrento de larapia, denl:ro delll estr.-tegi<' de eotrec:ciOf\ dirigida de
mutaciones. conSISte en el corte meciante ribozimas de vn prteut'f.Or de: RNA cuya estuViese
mu&ada (poc proceder de oo gen mui.CidO}, de fOI'I"n& que ta esciSin ocurra alrooeoot de la mutaciOn y reS\.IIe un
transcrito corregido.
7.2.4.4
Accin catalit ica transpeptidasa en la sntesis de prote1nas
El cuano e,emplo to oonsliluyo lO\ riboZima que ejerce la accividad tran&f)e9Cidasa o peptldi ttr.ansf orasa,
responsable de lt\ fO<'\CCIeiOn 001 peptldlco en la tlioe.lntesls proteca. entre los 1'9$id00$ amino(:I()Ot &ituadOf M
los sitios A y P del fibOSoma (Pg. 313). En este caso. la *accin en el t RNA 235, uno de los
(lOtl"'ponerues de la subunidad mayor {50S) del ribosoma procari61ioo. y t)OSif>lemense taiYIOin en el tRNA hOmlogo da
eucatiotas (rANA 28S de la wbunld90 60S).
LOS RIBOSOMAS
79
tKNA llS
UlNA ( >!
--...!-.... +
IR"-\ co-. ' 11 !U :!ti., "ill ( 11 aa,. " JI
A nivel fi$10k)g1oo. la RN.asa P y la peptdltransff!fU& nbosomlca son posiblemente 109 que me
1
or r(:flejan P.l
paree-do de las ribolimas con las erqima$ a 5aber: actan sobre un sustrato esl)e()Rc:o.. aceleran ta reaceln
de mttgnitud 00 durtlnto C;t y at PilfiJOOf se comportan de ac:uetdo con la ontiCS

7.3 LOS RIBOSOMAS
los son partietkos u orgnulos. de llflportanoa eruc.al pata ta transmiSin a. 111
ln!M'nati(ln gen&lica, ooosbtulr ol fugar fi$1C0 donde $0 rvahza la .sfnteSI& de protelnas Se pueOetl oomo
qulm.oo-meenocas f!Uo!!S, 1)0( un la<fo. $& $Obcc el mRNA la Interaccin de sus
oodones oon 105 oon-esponcl!entes antlcodones del y, pot olfO., Pf'OP<UOOO(tn 4JI ontorno nCJCC$nrio pai(J que los
anwnoodos formen los entace6 pepbdlcos del pollpeptldo en c:recimiel\10.
EsiTUctura!mente. los ribosomas son conl untos pl urimoleculares de y rRJtAs (35 y 55" crn poso.
resoectivClfl1ante}. oon un 1amano de 20 a 23 nm. Es deot, son nucJeoop(Oledos. E.l e$1udi0 d(l otros
WU$. Y<l $El aborOO en una ma!ena propia, ia VltoiOgla.
7.3.1 Localizacin celular
En cada eMula existen varios miles de nboSOtnaS (por e; .. mtt!l de 15.000 1: coA). que IIC!]<'n ili>llPOner un
cuarto del P8$0 seeo de la etllula Se encuentran en el cltosol 8!11 como en la m.:.tsiz. mtiOOOndnal v en et estroma de
cfQtoplas.los Puoden estar en forma libre, como panlculas discretas, Pfl'I'O a menudo se Ob$<trvan en de lWera.
$Obro vn mRNA; en e$1e caso se les llama poUsomas o potlrtibosonlu $u gmc,lo do 3grvp..cin o
pollmerlzaciOn depencse de la acllvldad flletabllca oelult11
los nt!O&oma& del cltosol de eucanotas son ms complejOs en eompo$iQf1 y mayores en tamal'oO que tos
Los tixlt$omas de mi!Ooondnas y ctotopla!ltos eueariObc$ Son <' tos
(C1tot.lico$), EvohJIIV;)Ifu":n!e Pi'l'il l<ldos. los. bpos se ha consetVado una misma e.stfvetura pero no la
seOJeOOia que la crea.
I'UC
pbuta).. k' adura:>.
o
PltoC"AR(OTA'
-----ll' IJI.:1t:fl .
80 ESTRUCTURAS DE ORDEN SUPERtOR DE DNA Y RNA
7 .3.2 Caractersticas diferenciales de los ribosomas procarltlcos y eucaritlcos
7 .3.2.1 Origen
Los del rRNA muestran una gran 4rver&idad en su secvenci<t, <W9 se rn;tMiosta en la ac:>al'fci6n
(durante el proceso de maduracin postranscripaonal) dt di$1intos til$ <te iRNAs, por su
d.terenle de &edimentac:in . .s.
7.3.2.2
Composici n
LO!I (ibOSOmas lormado:s por dos subvnfd;tdtn dt tam;to diferen1o y forma fte9,113r, cada ur'l8 oonstitu!Oa
J)Of uno o mas rRNAs y varia& proteinas de divoru mIJ$;) mo&ocul'r (entre 6 y 75 kDa). Tanto el ribo6oma compteco
como sus subunldades y los rANA& oompanon1C$ M segUn su ooef.cienle de sedimentacin. Las proteJnas.
por su parte. se por nUmeres consecutlm precedidos por l (Aav'gre) o S (sma.ll), s.egOO penene.zcan a la
subunldad grande o pequea, respectivamonto,
Otfcn'nClll:l t:n ongen, y estructura de los ptocari61kos y cucari6ticos
ribosoma procarilico
JWur'Of ok rRJ\A .;k p-l)l:ariulll
r-onA.NA t1ltl>o AIIJOSJ

rftNA f'kN4 US rRNA 55
'" e=:;
IRSA.
....... 1



.. ,
/
..


20
' '- 1 600000

..., ""'""'

/
70S
t
ribosoma eucaritico
1'\fl\'tin\:S \IC

1 1
-
1 1'\':tl 1
1
1

"'
\ ' '

\
lithAiliS
rill\" .S..IIS
rRNA 1SS r!t-'II A }S
.3, S,

=
" "'
'"'
...
-.:lrolich.
,_,. ....
.........
"'"
-
_,
prul<i. aru
\
6
M, 1.-100.000
80S
M, ., l .SOO.OOO
.....
M, .. 4.100.000
n."i:urdC5C que la
de li:Js Y'3lores
S de
subunidades oo es
ivuaJ al valor S del
ribos<wna nnph.'1o
lOS 1\IBOSOMAS 81
7.3.2.3
Estructura
L:t de 10$ iibo!ll)l'l\3$, igual en KldM las 06fllla$, es muy earaae,istlea se 1'1& <fllJeiCS&(Sc)
dlfraceibn de rayo!l X, dttracan de neutronet. miCroscopia electfnlca en oombnac!on con mtodoslnmmolg009 el<:
Debido a su enorme lamal'!o (MOa) y oomplajid<ld 00 6U inl(lma. al es1udio da la estructura dinmica y
funcin oe los nbosomas COflS"Iltll)'o un lmponanle te1o
las dQs n po1 no C:OVt'leniO$, ele QmO s l<1 su!.>unK:fild
pequoa el t'lvoco do 13 gr<"1n6e. <f.eWn<IO Vf\il htntlidura o 1\lnel .wre .amba$ PQI' l;t QOO Cl mRNA 41 motdldJ
qve et rlb0$()(M se desplaza el proceso de traducc.on y ti!! la que emerge la (:lldena
7.3.3
1:11 1>\lbullidJ\ks k)s )'
' "" l.'efl'""'
(0'1111) 111 ..
"""" ---
, .............. .....


m.tlllll (1
lplnNJII

Ot:{lrflh-, If!; .:1 t!IIO<tclll'lll del m k N \ y
4k lu o.:11!.1o:n.1 ..
Separacin de los ribosomas, subuni dades y componentes
tanto tos tbosomas .OOI'Iktales oomo sus subunidades y sus COfll'X'll"'enle$ ( RNAs y direrl!lni.C$ protoinas) so
pueden separar med!ame en gmdiemes de sacatOSa o de doruro de en Pfe$Cncitt do
ooncenlraciotleS defndas: de Mg '
1
las subunldsdes aiSladas no sao activas. Por ouo 1800, a. se mezclan lOS
componentes {rRNI\5 y protenas) a pH y tuena trica correaos. se Mooan espontrMJatnen1e en undade9
funcionales
Se\;l rllllll
d.: I\IIS
f.I)\J'I)IlCilh.-..
rlx,somas
procnnlkos
1
, ............... r
n.:o:lt.-.-
e


1 :.k.'" ..,. ... PI' E]
.... ,
'"'
g
.. _ ...
.. :-:: _...,
'
_, .....
"
fi'"''=l
J


Tema 8
Condensacin del DNA y cromosomas
8.1 Condensacin del DNA en eu<:aflotas -.......................................................................... 83
8. 1 1 Proteinas de la aomatlna... . .. . .......... ......... . . ....... . . . . . .. .... . . ......... . . .. .. . 84
81. 1. 1 .... ,_,_,_,. ----.................................... ..................................... ................. 84
8 1 1 2 ...... , ...... . ... .... . . .. . . . . . .. . . . . . 84
81 2 NivelO$ de del ONA nuc:l8ar eucaritioo .. --- ------........................................... 85
8 1 2 t Oi190$'Cin en y fibras de 10 nm, , . . . . , , . . . ...... . . . ...... . . . ... .. . . . . 85
8 1.2 2 Formaon do !al fitlt<l de 30 nm,_,_,._,_,_ ,._,_,_,_ ,_ ----- _,_,_,_,.,._,_,_, ..... ,.,_,,,., ... _,_,_,.,.,,_,.,,,,_, 87
8 1.2 Crom.,t:.'l.t' o Q'OI'I"W;l$0m<t if"1crf(I SICO . . .. .. . . . .. . . . . . 87
8.1.2.4 Cromosoma metat&Sioo ........................ , .. ,_,,, ............. ----- 68
8.2 Estud.lo del cromosoma m.etal .steo ...................... -................................................................... -..... 88
8.2. 1 Aspecl06 Cllogenticos ........ ............ -............... ............ ........ ................. . . .... . . . . .... . . ... 88
8.2.1 1 Morfologia de lo$ cromosomas ,_.,,. _,_,,.,,._,_.,,_,.,,_,_,_,.,.,_,.,_.,,._,_,.,, ... _,_.,,_,,,._,_,_,,. ---- 88
8.2. 1.2 Cariotipo y &u anttisis ...... ............... ......... ........... ................ ......... ........ ....... ........ 89
8.2. 1 Bandeado ,.,_, ., ., _,_,_.,.,,._,_,_,_, --------- .... _,.,._,_,,,,_,_,_,_,.,.,_,_,.,,. .. 90
8 2 2 Rcgl()nf:$ oon . . . . . . . .. . . . . . .. .. . . . ...... . ... .. . .. . . . . 92
& 2.2 . 1 Ccnlrmer-o. _,_, _, . ... . , _, _ - - - - - - - - - - - - - - - - - - - 92
&222 TeiOmCrO$ ,,,,,, . ......... .... .... .. ...... ...... ......... .................. ........ 92
8.3 D<1t11eJ6n gen6tiea en eucatiota'$ .......................................... ........................................................ ..... ....... 93
8.3 1 NW'tlero de eroi'I'IOS()tl'laS (n) h3J)IOido y diploidtt .... . . ... . 93
8.3.2 Con!enldo de ONA. V'illor C ........ ........................ ............. --- ., 94
8.3 3 LOQJs y alelo -- _,_,_,_,_,,, .. ,_,_,,,. .. _,_,.,,._,,.,._,_,_,,..,_,_,,., .. ,_,_,_,_,, _, ------ -- 94
8.3 4 GenoliPO, rcnobCX>ydOtflinancia ...... ........................... ............ - .......... ...... . . . .... . . . . . .
8.1 CONDENSACIN DEL DNA EN EUCARIOTAS
Para eotn:lle181 13 descripeQ-1 do l<t osll'\llct\lltl dol ONA oomo mater&al genuco y como requt.siiO f)fCVIC) al cs.tu<::lio
del ciClo eeii.Mt (tema 9), es analizar el complejo problema de la condensaCIn del DNA nucte3t. que ocune
a 10 &a .-.tetfase <se <iChO cielo este &&PeCio. al prooeso de la repllcaclon cse1 DNA 12)
durante M fase S. es oe la mayor ifl')c)r\$nti<' dewe el pyntodlt VtSta basico y de sus apticaoones.
Como ya se ha Indicado. la co,tdensaci6n del DNA oornpref'()e dos .-speaos lencamente noepEtnd1entes pero
funcaonalmente relaaonados y &ubotdlnaoos entre sJ:
dicho de l a molcul a de [1.. 0'\!A ldobk
hChCI.' ,k;,.trgm).
b anlogo 21 nt#.ll\0 dcscnto l)ilta
(p:'g.. 66); SI.' poot en cu.:ari olti pot w m3)'0r
<,;Qmpkjidlld, co panca la g.rntllll\\gnitud dl.'l g-cno) lllo.ll.
(-!Tln<\QIII.'t.amt.:nt<. rle$:unu:nto o <:ompa(Utcin de l 11 mokcul a de ONA
debi do u l:a a)oC.)Cwc-in wn pi'O(c-inu.s. parn dar l ugar 11
Se ctudw en <:stt terna.
apc:n:ts t)l:is1e en pro,-atious y org;inulos do: cuc:mt.:L"
do;mdc 1)0 h:.y hiS*CRill> y la oondcnsacn'!t) se ltSII ;.4'1IU en d
de la doble
84
CONDENSACIN DEL ONA Y CROMOSOMAS
La condensacin del DNA desde cromatina a cromosoma owrre de forma durante la tase G. del ciclo
cerular (le(na 9). mienttas que el proceso Inverso. la descondensac:ln del ONA, oomienz:a despus de la divisin
oetular ( !ase M) y contina duran!& la fase G1 hasta alcanzar de nuevo la oondiciOn 6fusa, que pemwte la fel)licacin
(lase S). No se conocen con prec1&1n 106 aspectos moleculttre5 00 <lfl1bc se (1$1,1'110 una gmn
anaiOgla y se oonsidera. pot tanto. que .,.,bo$ tr(ln$().11Tcn PQI' mismos en sentido irwerso ..
8.1.1 Protel nas componentes de la cromatina
8.1.1.1 Histonas
Son las poeipale$ PI'Oielna$ CQI"l''pooenteS del ma!eriaf gentioo de eucariota& en masa al ONA). Su
1\lneiOn eslabi!Uar la estructura del ONA. contrbJyenOO a oompactarta. fatilit<w su
emCW)quetatniento. EstrucbJralmente, las ooa familia de prolei!\31$ wnojanros. de I<'IMai'IO
retallvamente pequetlo y con elevado oontenido (casi 113 del ""al) do WsiCOs (PI de 9 a 10). Gracias a
euo, 1Y11Jes1ran naturaleza policaiJ6nica a pH li5iol6gioo {nuiTief(l$3$ e3rgas I)O$itivt'S en cada molCJJia) y se asocian
1\lertemente. met\ante lnteraociones oon lOs 9'WO$ kl$fa.o del esQueleto I)OIIaniOnkO del DNA.
% L1sinn % Argimna
N" de l\laSil molecular
111
24.829.5 1.32.6
27,430.8
215-244
21.1-23.0k0a
H2A 10.9 9,3 20.2
129 14.0 kDa
1128 16.0 6,4 22.4
125 13,8 kDa
113
9.6
13.3 22,9 I3S
15.3 kDa
11< 10.8 13.7
24,5
102 11.2 kDa
E.lci&ten c:inc:o tipos l)tineipales de J'listonas bien caractenzadas, que $9 <frfer.x:ian en su y. como se
veto\ des!lVh, en su papel e-9ttucb.ltal e.n ta organizacin del ntldeo&Om<l y c:rom0$01'1'\a. La Mlona H1 se pteSenta oon
tn3)'0r vMiabiliOae de secuencia y u.mat\o en distinta$ especies o lojiS, que las otros cuatro estn al\amente
OOI'SCMidO'IS. En algunos casos, H 1 es &ufitituida por un<' V<trittnte. denominada HS, con especial afinidad por le
cron'lalina, lo que refuerza el errc>aQuetamienlo y 1a inaditAclad ttanscrlpclonal.
El grado de condenS<'IeiOo <f.el ONA se regula en parte mediante 1a acetilacin y fo:sfotilaCI6n de hislon<'IS
(pg. 326). afectarw:to Mi a la $Coe$ibllclad del ONA para la de es&e modo li$tonas intei'Vietoen en et
control de 13 el({ltt$iOn genlca
8.1.1.2
Protenas no histonas
En Sil c:romatinn se pueden encontrar ottas protei na&. rnenQ$ abundantes, mAs variables enlte tejidos y especies y
eo general peor caractetlzacJas:
8) Con functn esuu.ctural
F'w'Q4eln<t$ bS.:::l!IS
Prc>t:aml nas: Oesempefian la funci6n a las hislonas en tipos celUlares PttrticVItmnente el
e-spermatozoide. Son pequcr'las ( 50 anww:lcldos, en alg(in caso} oon propOtCi6n Arg, AJa y
Sel. y eslruellJra pedoi1Wiantemenle (lhellcoidal. Su menor tamaiio pennlle la del ONA en el
espaao minimo di&ponbloe en et espennatOzdde.
Protemc.& ilc:IO<tlv
HMG; HMk:l ur'l S% de las prolelna& nucleare:s Ql)rrC$()Qt\den al grupo lamado HMG (high mobiNfy group),
protei nas oet grupo de alta moWidad ete<;tn)l(wetiea. I)Or su catcler cido, relativamenle pequcflas Algvnl11$ se
asocian al nudeosoma {al menos in Vllro).. que ottas interaccionan oon el ONA espaciador (pbg, 86). E.ste
grupo lnduye algunos faelores de 1n1nseripc:i61'1
Protelnas del esqueleto o matriz nuc:ter. ESla estructl.n. que sirve de &OPOrt o gvit' en el empaquetamlen!O
de la crom;'Wiin(l (pg. 87), esta formada por diversas proteif!i1$, inci.lyei'IOO algunas HMG y otra& proteinas de

b) Con otras funciorles
Asociadas ata aomatlna, en minima se pueden encontrar numerows rnuy difetentes.
que inleMenen en la fl:!Oiic:<tc;:i(ln y ltMtcrll)c:iOn (lema& 12 y 19} y en la propi<'J del gtado de
oonclensacin cromatina: ONA y RNA-polimetaMii, sus avldlares, factores de replicacin, factores
do trAnscripcin, receptotes hOrmonale&, t<lPOisomemos.
COHOENSACIN DEL ONA EN EUCARIOTAS
85
8.1.2 Niveles de condensacin del ONA nuclear eucaritico
Se puecle resallar el graoo <Je oonaen&8cl0n alC&ru:ado recor<Jai'IOO (lue 18 IOJ'I9ilud del ONA e$ variOs tdeMs de
magnitud supenor a las dimenSiones de las estrucllJrM celulares que 10 a\bet9M (pg. 66). Se denonW\8 gtsdo eh
condensacin o de empaquetamiento al cociente entre 1a lOngitud del SDNA en doble hebta y el 1amano del mismo
una vez oondeo.nsado: este parmelro se ucl!lzara para comparar lOS dlsllniOS nlvetes de oompaet3Ci0n
La condenseciOn del ONA puede estUOiar&e en cuatro t\iY&IeS, aunque esta divisiOI\ es tel81ivt'l , ya que IOdavia l'lo
se ;emotende ;en detalle oOmo aoon1ece este fenmeno a n1ve1 moleci.Aaf. Es ncficar que la condensaciOn y
de$CQrldcns,ci()o a trtrffls de CSO$ ,.,.ele$ cstb, cslrec:hilmerrte 50(;1Jd<l a la pcogre&l6n por las distinlas fases del aclo
ee1u1:u {Pllgs. 100.101)
8.1.2.1
=

e
c.

o
c.
o
-
=
2

-
"
=
,.

c.
2
"
+
..
-
=

E
<
z
Q
"
..,
=
o
v
Helcroctomatin41 /)
Bucles de eromacma \ U U 1
/
Cromosoma , /
.u' <nbrn .lO nm1-+
.. r-t

Fibf:l de JO nm
(soknotdc),"'
Fi bra de 10 nm
(nudcosomns)
"
\
/
/
/
\
\
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"'"
.........
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,.._.,.,.,. nn.l*c!
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IJr""..S.Jl.'( ''"'l:'l"''"'n

)
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c.
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-

-
'X0U\5)_ I , ..
Cadena de ONA ldoble fllice)
Disposicin en nucleosomas y fibras do 10 nm
EJ es la unidad bilsica o elemental de la eromaUI\& y 10$ cn)m()$Omas, Conl;CibJye un pa1r0n tegular de
il'ltet3eeifl tntt ONA e hi&'Ona.s, responsable de la organlz&eiOI'I del material gentico en tooos los
organiStn(:IS euCilrlotas (en cv<*luier tipo celular y etapa del ciclo). TMIO fll ni'CIOOIOmil como sus componentes y las
fb'as en las que se blegra. 1'13n SidO Ob1oni0os y analizados por dlgest!Otl COI'I t6a'!re3S de entrecruzamlen10
(CtOSsNtl*.ng). hl>tldadn, dift&eer'l de cyyos X, microscop(a electrnica. dlflaecitl de noe\ltrOrJO$, dieroi&mo clf'tulat,
anaHbca. eic.. la PfopueS1a de ta del nueleosoma surg1 del estudiO oe 1a aoeiOn de
0Na&a5: &Obte un ONA naU'YO, el tamau\o de lOs frorgn-.ntos producrd06 es siempre mU!titliO de 200 pb, l'fll<:ntra que sr
86
CONOENSACIN DEL ONA Y CROMOSOMAS
ac:KIM sobre Ul'l ONA pre-viamente lberado de historias, los fragment06 son de cualquier tamao. Esto sugiri que la
t.n0n de lar. histonas protege regiol"'8$ de ONA de unos 200 pb.
Cada nueJeosoma klnnado POt 9 molculas de histonas y un cr...-no de ONA, Bajo CllfUI& <:Onclic;ionet
experimentale<s ouede libet4ll'$e lit hi&ton<t H1, k>ealizada vtem<'m(lfl't, 10 QUO 1\fCe 18 ON8S3 una parte
<MJicionl del ONA. El nucleOSOI'I'Ia 4Ueda 8$1 r&ducldo a la llamada partieuta ncleo {col'&), formada pot un octmero de
h1$t<lnaS fO(Ieado por ONA. El arronamleniO le'f'6glro del ONA sobre las hls10nar. StJpone un wperenrollamiento negativo
de la cadena de ONA (en procariola& el superenrotlatniento se consigue por simple relorQmiento del ()NA dn::vi<N'. sin
iml)!ieaciOn de protelnas., y no existen nueleosomas).
o
o
ON,\ de l.klbk htli.:.:
("<200 pbj
Nuckl\\Wnlil 200 pb ONA
comrtc;o:

111
l
ONA na1ivo p.
CCI\lln31m.a)
L11 ort'*"""


'lAmen) .le
hi)tom lo
-
"'ihb: plllll
..,.._uon.w""lll
pt\llCIIIas
111U
- m - - u4
Finalmente, <>lri\$ protein.M no hls!ona& tambin pou1icipan oen la estruetu<a. HMG14 'f HM(;.17 se a.soclan, ill
fTI8f\06 in !litro. con e&da nudeosoma. mtetas we HMG-1 y HMG-2 h !eraoclonan con el ONA
UM misma motecuta de ONA envvetvt tuceSivamente a distirrtos nucleosomas y los entte si. La porcin
preHf'!to entre do9 nudeosomas suonivos se denOITW\8 espaciador, ligador o ONA (Ntl{Wi); &u
longil\ld P'*'t variar entre 20 y ms de 100 pb, <tependiendo del cwg.anlsmo o incluso del tejido dentro de un mismo
org<1nismo. Esaa estrucwra de nucSeo$()tnas espaCia<I08 a lo largo de la molcula <10 ONA se denO<ina fibta b'slca de
eromadna o fibra de 10 nm, pues su grosor corresponde al dit\nwwo dCI I'IucleOSOma. El grado de empaquetarniEIO\O
aleat\Zado es unas 6 \'ecef supe!tof al de la doble hlioe ONA ex!endlda. la fibra de 10 nm tambin se lam3
eetructura en de rosano. por su aspecto al miCtOScopio electrnico. generalmcole SOlo
cuMdO se prepera In vifJO a baja fucna i6tliea (Pot ejemplo. 1 mM), mientr<t<& d&ntro la clula la
cromatina se mayor1tariamente en formas ms condensadas. y &u disposicin en t$te est:8do
se limita. en todo c;a$0, a pequellas zonas.
CONOENSACtON DEL ONA EN EUCARJOT AS 87
8.1.2.2 Formaci n do la fibra de 30 nm
En &as preparaciones de cromatina obtenidas in wrro a may fuerza inca (por ejemplo, Msta 100 mM), la fibra
de tO nm se arrolla en sentido levgiro para dar lugar a una iorma ms oondens.ada. denoi'IWiada &cNenolde o flbla de
30 nm. que supone un grado de empaquet<tmiento 40 veces $UDCiriot al de ltt doble hiice original E$1<1 fllt<'l oontiene
algo ms de 6 rucleo&omas por vuelta de solenode. se de&(l()I'I(IC$ &u e&(rvc:tUtil ex01cca n vNo. &e cree
que 13 hi$eotl3 H1 queda situacta en el .,_teriOr del solerw:lkle. aoetcanoo los nuc1eoSOt'l\aS entre si heCfiO.
expet'lme-l'ltalmente la formacin de la fibra oe 30 nm. a dlfeten(G de la de tO nm, requiere ra de H1. E-sta es
probablemente ra forma fl&iOI:glca ms descondensada de la cromatina, adopt.acia por la mayorla del ONA durante la
lnteriase.
8.1.2.3 Cromatina o cromosoma interfsi co
Este niVel de condensaciOn supone 1a presencia oe 1azos y supetenronanventos oe 18 estructura anU;lrlor t.os
bucles o as.as radiales. formados por tn:lS 50 100 kb de fibra de 30 nm. emer9f!'l\ de un armazM oe pt(l(einas no
h!Sk>nas denominado ncleo o andamiaje central, matriz nudear o pro en, o esqueleto nuclear. E Solo& buCleS sufren
superenronamlento. regulado pot topOisomerasa& asociadas al esquete4o. Parece que, adems de contribuir al
empaqueta!TIM!flto del ONA.Ios budes oonstitt.ryen unidades tran&eripcionales, al haben;e observado la presencia dentro
de un $0lo buctt de un 9'" oomplcto o b<qn do grupo do genes rogul<'dos do Es Ita ob&ervou;in
do i'll$<1$ mdi3Tos on 13 interftl$0 <Je I)OiteniCO$ gigMtet <S& de y en CTQm0$0fl'\(ll$ I*Jt'n0$0$
meit.cos dt <Je anncios.
A P<Ntir do e$(;) se t<wman cnroll;tmiontos $U{ltriorcs, <;ve h<leon QUO 1<'1 crom<'Jtil\3 en la nterfas.e
presente en el nUcteo un grado <le condensaCin variable: se calcula que se mtmlpiiCa el gracJO de coMeMaein del
ONA por 1.000 O 2.000. Este diversidad local en la denSKiad de oondensaclon se obsetVa en forma de ta presencia
slml.llnea de &ucromatlna y heteroeromatlna en una clula en
Aspeao al miCroscopio bajo
tincin (c:feliniein Qrigin<'l)
Otado de condensacin del ONA
Conltlbuein at 104811 de &a
cromatina
Aeoeslbilidad oo la de
ONA para su inleraeciOn OQt\
pt'O(elnas (DNA polimerasas,
RNA pokne(asas. tact01es de
transor,.x:ln ... : pg. 250)
Se bl'le .mensamen:e oon el oolorante

M&xlma condensaciOn de la erornatil\8 (prOxima
<runque menos, a la del cromosoma me-tafsiCO)
Mli"'Itilaria, SlO algunas porciones del m(ltCODI
gentiCO se encuentran en eSia aorma.
HetorOomatina con&titutiva: reg.ones del
genoma qua se encuentran permanentemente en
formta de (durante toda ta l'llerl&&el
y en !oda& las clulas
Se d8$c.ondensa el mnimo neoesario para
replicar-se durante la ras-e S det <:ic:to cetul<n
inCluye et DNA (lema 10), concentrado
e6.pE!Cialmente en 1e10rnt:rieas y
centromrlca de los cromosomas (p&g, 92)
Heter ocromatl na facuttaUva: se corno
hetCf'OC)"'matina t;lo en alguna& clulas de un
mi$mo o on ndivd.los de una
especie; puede P3$l'' a euerom;)tin.,, en reSilUEI&Ia a
determn&Cias sel\ales
Uno de tos ejemplOs es la ii\8Ciiv&ci6n de IIAQ eSe lo$
2 cromosomas X en la puesto que se puede
in;tetivnr \anlo el X ITI<Ileri"'I como el paterno. Uno
condens<ado oomo heteroc:romatma,
mientras el otro est en forma oe euetOm&tina
Al final <S& 1<) lt'$<: G2. previa a l;t diVISin pot ITdOSI&
o meiosis, toda la aQII"'&IiM de 1<11 OOiu!a adW 1&
forma de hetef'OC:toma!ina (ante:s de condon&ilt&e
an ms para dar ef cromosoma)
No es 9oce&ible. debido a su elevada condensacin.
Se h&b!a de cromatina lranscnpclonalmente
mxtiv;J SG rplica allinal de la fase S. Los genes
<1ue <:Ontiene no st expnl&an
EoCJ'Om3tifl3
(cromabna verdaOerra)
Se ur.e debl!mente y con
aspecto cifu&O
F()n'l'\3 met'IO$
condensada
Mttyont;;nia durante la
interfase
Es cromatina

8Clivfl Se t))ica ttl
principio de 13 fMO S
Sus genes se CKJ)rC$CH'I
88
CONDENSACIN DEL ONA Y CROMOSOMAS
8.1.2.4 Cromosoma metafsico
Avnove "' fiMI de la protase ead8 (tOI'n()$(!11\8 ya esta OOr'ldel'lsado corno heterOCI'Ot'Mt!na, dur&f'lte 1a I'IW!'Iatase se
COndon$0 an mA$, el aspecto tipieo Cle lOS cromosOMas metaflisieos, corpseul09 observaflleS al
miCtOSCOplo (lptlco que muesiTan. en general. aspecto de baslonclllos oon dos cromtidas ms o men06 separadas
entre si.
la$ f1bras de heterocromatlna se arrollan en una primera espWaiz.acin para formar una espiral menOf de paso
muy pequeno. que se arrola a su vez &Obre si rrama (en unas 1().30 'Neltas} la espirill somiltk 01 Con GQ
doble espralizacin se acorta la c:romtida a \A'\il P<tr1G, sin <M.ImOI'YI&r $1..1 dimetro E$10 f3 Mo. m6l5 vi$ibl0 31
mlcro&copio Ot:>tico te(,)iones de la crom'lida &e arrollan slo en .spir.-1 menot, como. POr ojemplo. las
eenb'meto
8.2 ESTUDIO DEL CROMOSOMA METAFSICO
8.2.1 Aspectos citogenticos
8.2.1.1 Morfologla de los cromosomas
Se llama centrmero, primilriil o a la regiOn ml$ estrecha del etOf'I"'Isom&. por la que
permanecen tnefas las d06 El oentrmoro 10$ brazos eromosm.leos (cuatro antes de
la mitosis, dos tras ella). Los btazos cortos &e de&ignan oon la letra p {de petif) y k>$ latgos 00t1 q (de QUE'Ue). Cada
btllzo se nombta.. poes, por el nUmero del cromosoma al que perteneot. S&Qt.1i00 ele 18 letra p o Q. Por ejemplo, 6p es el
Otazo COf10 del cromosoma 6, 8q el brazo larvt> del 8, ele; , l O$ CtQtnOSOmas se elasltlcan atendiendo a la
posicin del eenttmero y. POf lan. $09Un el tam3flo relatwo de lOS bralOS:
a i!JC) la
(Cr QIII(I!>{)IIIII dnblc,
O.S;\ ,lu,,, -..:, .'(:
! .:romibda...."
ua, ta
.....
())>,, \ c.:
1
CroI'IUiiOna,
lllt'l:actrkOJ:
br.:(o>s de 1nmni\o
,un:ilar
e roo\05011'4S
100
h n!WII de llliJA.fil)
dl f etei'IIC:

11Cfl)('ffl lric9S"
un br.la'l muy

en 10$ ttazos 00t1os de los crom060ma& acroc6nlri00$ el Y) existen, adems, otros estrecnarr.emos do
la eromtitJa, denominados eonstrtecioon :OI"'M en las que la espiral 901T1lica presenta un <iiwnG1ro
ms ...clu(;i(:k) Oelimlan ooa seccin temwt.al en ., cromo$011\&, a modo de una pequella esfera, a la que &e llama
cromosmi co.
ESTUDIO DEL CROMOSOMA METAfAStCO
clo.: kxo; hunmnQJ..
lrpoll\lo:'i "n
III!TilU;..,I(.;r.of)lk, \kdiWI(o, ruq\IICilv)
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8.2.1. 2 Cariotipo y su anlisis
C1riotipu
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dt \1(1 111olniiiiCI
Uo\ oMJI .,k
o;C'(lCIO: dt UIU
( ""'"'Uf Coo;DtU d o,:II'II(JIpo. Sm
C'lllb.lqtu-. <:JP'-'<11:' tnll)' Nll'lil:nn .<den
u.'i'lef' ......,.,.,.,,....,.. ftlloy d1ltn-mts
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89
Son valioe tos motodos dessrrolaaos para et sn.tolisis <Sel eafiotipo. esto es-tudio 5e rc<lliz-<t 11obro
cromosomas en el estado de prometafase o Las preparaciones de cromosomas tnelatMieos $0 omi)I(!M
aaemas para anatizat anoMali;as er010$0I'I'Iie&s. 13 pro&encial o ausencia de cromo50n'las extra.
A este fin, e-J MiOOO y mas seneilo de obler'ICi(ln ae CtomoSOI'I"oo)$ de ICtuoocitos, como OOkias
nuele>adas del organismo mas aseqt.Dies.
90
f'repuucin de pam
csruditsr el c.-vi<Jiipo
l. St Ji,;od(' lllllllhaboolx
de"" '-'.-.:00 ...
,_._ ....


k& kucow.:
111 Urpt ' ltll"'-
.._Se t;,. la, .:O:lulll!> ((!f>
.,.,dio U'MJn
h!I'(!IOII;<t
1'40 ... .... hffl
.c.:,uead.uo,
y .. t.&! fijadtw
(por o:j\'!!Tlt>.

$. l..a. .-.;lulw.,
pnt!LIIIIo."O (tlt(f'ti '/ N0t
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CC'IIII'I(u;_.iOn
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CONDEHSAC.oH DEl. ONA Y CROMOSOMAS
Anlisis del ca.rio1ipo
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Aetualml!:l'lte. se parte ya no slo de cuttivos de leuoocito6. con la 00$'1801aja de su oorta. de 3 a 4 $ino
dt t uliNO$ a largo plazo de ot!Uas de dfversos tipos de tejidos (fibroblastos. m60ul3 $0.31, amniOiico, biOPsias,
etc:.). Las ms usadas 901\ las de ma)'Ot pot.enclal de divisin o mav folc::ifid.OO de cultivo A$imismo. exisAe una variOd*Ct
de lratar'l"'lenlos de desnaturalizacan yto degradacin enzimMiCCI de &a cromalina. y <le lineiones con COlorantes
espec1ftcos para el ONA. Por ltimo. " hM sistemas de carlobCJiflcaciOn que pueden ser Informatizados de
forma que seteocionen las clulas a analizar, el tillO de trleln y el anlisis de los cromolS(lf1lCIIS,
8.2.1.3 Bandeado
Aplicando distintas tcnicas de tinOOn. de l<lt'm3 ru!lnarla en labor31orlos de c!togenelca, se puede
observar en 106 cromosomas l)bllictas y oscuras atlemativtlmet'lte. que defll*'t gtandes reglones crofTI066mlcas
llamadas i&--ros bandeo o bandeado de et0n"10901Tlas no es consecuencia de agrupamientos foftuilo&. sino
qve et;t;i con ta Qtganlz.acl6n eslruCIIJral del genoma, reflejando variaciones mtos como _, CQti'IC)OSiCI(In de
basct. condensacin cromosm1ca, conformacin de la cromatil'l;ll, y no trt'lnsaltas, etc.
lOS pattones de bandas de cada cromosoma &On prc;ticamenie idl'ltieOS en clulas dltetet'IU!S.. y en casi tOCios lOs
tejidos, pero pueden diferir entre individuos; I)Of' ejemplo, al menos 12 cromosomas muestran variaciones en la longil\ld
de cienos segmen!OIS en discintas pet$0l'llill$. Se llegar a apreciar 11asta 500 bandas en un cromosoma; en
tuncl6n de 18 resducln microscpica alcanzada, las bandn :::.Meipales se subdi'ofden sucesivamente en subbandas y
subsubbartdas. A todas ellas se tes asigna un noml)ro, incluye el cromosoma, el brazo y t.W\ nCimero OO!'felatlvo
desde el oentrmero hacia los extremos
ESTUDIO DEl CROMOSOMA METAfAStCO
RESOLUCION CRECIENTE
ra ===
tfllOII)(I:oll!l\1 t'Jd:l n lltflil!lda; 'an:" b.,..a,
2 rollili\la)l dtn b.- I.Onfl)l
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n-.;.,n.. ... C'ft ""' )>J
1,a111Mlo,o )' b !!(lOo.'<! d(l So w
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91
PNa el bandea<lo de c:tomosomas se emplean diversos metodos de tlncln oet ONA con colOrantes especflioos;
a) Bandeo G
Es la l&cnitt'l mils. se th una deStlabJ1'3tit.&CiOn OOtltfOiaCJ8 <1t las proteinas ct0n10$0mieas
(generntmente tJOt Oige!Shr'l con tr;psil\8). segLCSa de lltleiO!I con Qiemsa (Cie donde et nombre Cle bandeo G) y
obsef"acin al miCrOs.eopio (el rettc:tlvo <le Giemsa es uM mezeta oornpte,a de (:()lortu'ltes;). Cada p{tt de Ct(lr'l'IOSOMM
rTKJeSifil ast c:aracterisucos de tlnclon. con bandas oscuras {0-posahras o bandas O) y bandas aras
(Gnegt'IIN<'$).
Bandeo O
LOS etOm0$0f'l'I3S se Utlen con t.r1 oompuesiO tltiOl'eseente. como mostaza de g uinacrlna {N<IrOCIOt\lro de
quinaet'la). 4',6-dia"**ino-2fenll-lndol (OAPI) o Hoechr.t 33258, que se lntetcalan en el ONA. doble Se r equiere. por
tanto, un examen mediante mlcrosoopfa de nuore&eencla. Aparece un patrn especilico de bandas bnllanter. (bandas O
o 0-poGibvas), que &e corrcsoonclen CCII$i ex,ctamerrte con la$ G (G-posibvas,
Las bandas G y O cont!Mefl ONA que, en gener<tl. es algo ms rico en pares Al pues la se
in&ef1a preferentemente enlte e:stos P<WEI$. Corrosi)Onden a (7Qf'I'\(W(ina altamente condensada, oon ONA de replicacin
tiVdiil dentro do f<'&e S del CiClo telt'ltlvt'mente in;)CIJYO trilntencx:iol\illmcnte
e) 8andooR
Se bas8 en oo tratamier'lto de kloS crom0$0ma$ 00t1 ea1or (para ti ONA rico en Al). antes de la
tii'M:In con Glemsa. Re-sutl8n ssl o.anda& oscuras (bandas A) que ooW::Iden 00t1 m t:landa!l G o O clor;)S (el nombre
deriva de patron rever!IO). Tambi&n se oonsigue el mismo paltn de Daildas emp!eaf'ICJO Olivomic:ina, un COlOrante con
atndad pos lOs Plf'8$ GC.
L.3$ b;lnd".:l$ R contienen ONA rloo et1 GC (50-60%), Cle b<JP condcnst'on cromatinica, que se replica en etapas
tempranas ce la rase S y es retat?Yamente activo transetlpciO'Ia!Mente.
d) Bandeo T
ldcnlifctt un de band\1$ R C$C10CialmCntc conoentrOO<at; en los telmeros. las de tnclon ms .nlensa. y
se eml)leando un ln'niCO 1)3rbeularmonte severo antes de teir los cromosomas oon Giemsa o
una oomoinacin de !in()()r'les y
e} Mtodos especiales
Otros m4odos de oullivo cromosmlco y de unclon se utilizan para Slluaeiones paniculares: bandeo e p;ara
MtJei"'Cromalieas. l i ncin NOR, Pt'lr;) lt' dfN ni)Cieo(o, que oonUene los genes de rRNA 18S
y 28S: de ptofase y o de alta resolucin sobrel)"()fn0$0I1\il$ detenidO$ en una tempral\8
de la mitosis. oon un estado relativamente descondensado ( Su mayor tong\tucJ permite apreciar ms
a ObseNar 850 bandas en un solO cromosoma). ete.
F".-..lmeme. 18 ci togen6tic01 molecular emplea &ondas de DNA ciOnaoo (preparaaas por U;Cnicas oe ONA
rc.eombinttnbl:t. p\g. t76) wa de forma similar a los en&ayos de hibridaCin moleCular pero
sobre <le CI'Qm0$0mas completos. sta es la tcnica denomnada h[bt1dacln In sltu CM
(FISH, /fUMtscence Jn slru llyMt:Nzauon, pag. 172), se dispone oe $0n<Ul$ e$()oe(!ifieN para cromosomas ndividua6es y
para reglones cromosmieas, que petmilen OQr' ejomi)IO, rocwc:ktn<amiento$ cromosfTtloos particulares u
ob(enet un diagnstico r&pjck) ese la nUmero anormal de cromQ$0mtts
92
CONOENSACION DEL ONA Y CROMOSOMAS
8.2.2 Regiones con significado funcional
Los CIQfi'IO&omas eucarilioos muestran tres elemoniO$ f:t$G;ntialos para uM funcin OOfi'9Cia del ciclo celular y la
divisin. imllt9$cindibles l;a 9XP'e$in, y sogrog<'Cin 00 Q QOmO&Of'I'CI&' el (lugar de
uniOI'l del Cf01"1'10$0Ma a les flbrBs del fluso acrom.tlco). los (reglones SII!Jadas en lOS oe los
cromosomas) y k:lS o"9el'les de replleaeln {puntos numetosos en cada cromoec::wna donde se Inicia la oopt.a de la!i dos
neoras de ONA). Se tratan a Cl0t'dlnuacl6n lOs aspeciOS mool6gicos reladooados con los dos primeros; el anlisis de
los ogenes de !PPicacin M po$00ne haS1a que se ntudie el proceso 00 {pig 150).
8.2.2.1 Centrmero
Se puede conslderar el centro emtico del aomosoma. poes sobfe l se Sitan las estrud uras llamadas
ei netoeoros. a las cuales se uoo.n las fibras que constituyen el acromatloo o huso mlttlco. Es18s fb'as, filamentos
oonttcclles o mlcrotbulos, de nawrsleza proteica. eferoen la traccin neOKariel para &eparar las do& cromWtida&
durante la dimin ceUiN' Ce e$t<ll f(lfmJ M prcxkJce; 10' sogroga.cin do los tn)(n()$()mi'IS y C3d<" t6!ul3 hijn
recibo unil (:t()tnOSI)ma, es decir, ldntiea dotaclon gentk8. La ausenCia de oenttrnero (cromosoma
ac::tntrico) in"C)ide el orotnosoma se una al huso mlttlco y. por tant.o, que se lnt:*lya neleo de las clulas
nias.
La:S secuencias esenciales para la Nnci6n de los oentrmeros son muy ricas en pares A T. tienen unos 170 pb en
humanos y se repiten entre 2.000 y 30.000 veces en cada centrmero. Fonnan, p.es. parte dellilm..OO ONA repelilivo
(pg. 113) y ademils suponen una parte mportante de la fr.-ceiOn de netetocromatin3 <'lqu&113 quo sOlO lleg3
a desconden&af'&e un tiempo minimo en el cido celular, el Ploei$0 1)3r* so roplieaciOn.
8.2.2.2
Telmeros
Tolmo O$ una pal8bta de etiMOioga gtlega: l&los, extremo, y meros. parte o regln, que Mee referenc:sa e
t99iono$ $itultd.'lS en los e)(lrei'!10S de k:lo9 cromoecrnas eucatlolioos, oonstkuid8s por secuencia& especlaizada& de ONA
asociado a ptOielnas y con caracteristicas estruct\lrales y fvncion31'" PtWins <auc 1<'1$ dif..-etlcian <te ouas reglones
cromo&mlcas.
Los tclmeros de la de eucariOtas estn fonnadoe por doe tipos de secuencias de ONA. Una de alas,
denomini!d<'l secuenci a telom6riea. l'ei)etleln te60m6t1e8 o repeticin tennl nal. constibJye el extremo de la cadena
de DNA del cromosoma. mediante la repclk:iOn en de un Oligonudetkb oorto (vat'iatlle especies. en
huMatiOS es nAGGG).. Generalmente esta Meuencia telom6tica .s m(lsl"iC3 en Gen uno de las neoras., la que forma
el extremo 3', que sobresale 000$ 1216 nucletks S<ll:lte tal 1lebt1l que aporta el exsremo 5'. Ese extremo salente es
reconocido por del tctlmero (TBP. leiOmef'e birldir1g prot&IM). que acblan a modo de "caperuza
protectota de <icho ONA terminal E.xisten taml:li6n unM secuencias mas compleJas adyacentes a las an1eriores (er.
dec*. mr. lntema& en el que se denomll'\8n as.ocl adas a o secuencias eubteiOmrtcn.
cn)tno!>Oma
tlb llllCII('Jt('taJ. y \' tfnsJ a hiiC'IlA111. '4)
te"-ncr(l tdomtf\1
- -
;.n'tll!'fll:ti.ll> tcklo.n'ICf'i;a_,
fll :' i;b (1'1 l"ll'l'IIJ (1-12 l.b tutah
.$.,
t \'1 ,, . ., .t;G("..,\TTGGChTT-
fq1<1Kl!!11.:11 CI51).2-(J00)
- --- <.!hcntc \' i 11-lt tiC)
(
- TTAGGG1'TAGGG'I
\ f.ATCC(I\A TCCC Wl
rica eo G
Se han asooado .., los tciOmeros distintas 1\Jnc::iof\es:
' " .
Participar en la y tnantenlrrVento de la Wttegridad estructural del crom()S()m: en ausencia de
teli'JMII'Q$, .- extremo del aomosoma tiende a a otros y aumtnan 1<'1$ PQSibilidacs de que sufra
reeomt:linaeiOn y degradan. Pot otra paM. 10$ te!Otneto$ permiten a las et1Zlmas encargedas de la repatacln
0e1 ONA <ttereooar emre el natu'81 del cromosoma y uno que resulte de la fntgmen1acn d ltt
cadena do OHA: en eS'Ie <l!lmo caso se detiene el ciclo oeUar. evitando la replicacin 1\Mta que se haya reparado
lales.n.
La funcin mt'l$ importante oooslste en asegurar la replicacin tos eXIrtrnos 0e1 cromosoma. Es!e
a&QCCIO $0 estudiara una vez considerado oon detalle el ptoceso dlt 1<'1 del DNA (J)g. 15 7).
se espe.c:ula tambin con ta implicacin del toliTI(JnJ en In arqui(&etutS lri<limenslonal del neleo yJo del
apareamiemo
DOTAC+H GENTICA EH EUCARIOT AS 93
8.3 DOTACIN GENTICA EN EUCARIOTAS
Es conveneente oompletar el oonOOO'Iiento de la del material gen&tieo 01 oorneniOO \0131
<se este material pre!lef'lte en las clulas eucarl6tlcas y &u relacin oon el bpo de: otlu!<t y 01 en el Qt.te se
encventm Para etlo, es pteclso describir el s.gnifiCtldo de a.gunos !Orminos y ;;nooptos gcn61icos bc\&iCO$, noce$tuios
lamcin para te comprensin del cielo celulaor y Oe 106 do& hPO$ de divisiQn, mi!OSi$ y rnewoshl flt:l'l\ll 9).
8.3.1 Nmero de cromosomas (n): earacter haploide y diploide
El n6mero de cromo50mtt$ O$ de eacla esc>ecie, y varia muctto de unas a o11as. Se haCia
de clulas haploide& (y de 01gani5mo5 &i ._1<\n tonn.,do!l slo 1)0( ellas} cuando cada c:tomosoma se
presen1a en forma individual. de modo que ena& OiUia contiene un juego de cromosomas. lodos dlslln>s entre s. El
nnero de cromosoma$ se identifica con ol nUmero n,
.
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1
;
3
.
1
i

1
Clula haploide huma na:
u vulo (clulas sexuales o gametos).
TiC"nc 23 cromo..c;nmas (n=23); cada uno cUos ron:nado pOr unJ molcula
lineal de ONA de doble h<..-bru.
lltl() de do)


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hnplo'OC

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y
22 OIUICXWI'I\IIs (l'Tl las O.:lub.$ e indivldoo\)
1 cr<wnO!il)m21
......
Por ej conltario, <ktnomin.a clulas diploid.s (y organi$tn0$ (liploide$) ct(IV(illt'l$ en 1<':1 110 ob$C1V<ln
pareja5 o par9$ de cromosomils morfolgicamente gu81es entJo si, tos esos miembro$ <H: 13 porej<l se oenominan
cromosomas homlogos. Por lant(). c:8dCI 061ul<'l Clil)loiCie f.iiene CIO$ ici090'S <te cromo&()(nM, y es.to e3r.'tcW so
el nlimoro 2n (n l).llrojas de En C8dl par, un O'()(I'IO!IOma se na 1\efedaciOcJel padre y otto ae
mDdre
Clula dipl oide human :
clulas somtica.<> (hcpatocito. neurona ... }. <..-lula.s ge:rmmaks pnxursorus )' cigoto.
Tiene 46 cromosomas (ln): 46 moi Cculas lineales de ONA de doble hebra.
1-'omum 2 conjuntos de 23 cromosomas distmtos. u 23 pan:s de erumosomas
(a \COCS denominados 23 "cromosonms diploidcs'").
De ellos. 22 p.1res. que son homlogos)' adems similares en ambos sexo,., se Jlaman aotosomas:
los 2 <:romOSOJnl.l; reslan!..:S dilicn.n del sexo y slo son honllogos en la muj er .
22 pares de: autosomas {en todas las cCiutas e: individuos)
"
01

!!


,,
.-.. .w +X .. Y
e< \ 'llrt'n.
lXY
"

i
1 '
:
XV
un par de


94 OONOEHSACtN DEL DNA Y CROMOSOMAS
cromosomas
SCXU<t iCS
muj er:
var6n:
--

X X. """"""""

X Y. muy dut1nW111

t.l pUl n"' 23 l"!!li formado ptM'

m _!Ww r(l2) esU formado 110'
JI d% cromosomAS bornlogos.
J;
dOS CIOC'IIO!OOOI'li M
.. .

ig-ua.l qu,:. los 11ut0s6mic<lil
=i
S61o una po:qlk'iia n!gi6n

l.res nllll n 1:)
V y el X on hOI'OIOgl$
pscuikJ.,riiOSITli.:'lJ)
Gtum.'t""'
Se d1ce 13. mujtt u lwmt)g.MJt:tk:
$e dlCC qiK t J \111iJn
lodos ws 0\ulos un mismo tipo de
18 mnnd de sus
:t(IIIIOJ(tll lll, X
jl(lrtlldortJ de X. loa otrn miuul tk Y
Pr(JOC'(ktw;ia lk un X lk la mlu,lre. d X de la
l 115 cromosomn11: el ocro X tlc'l el Y Acmpre del rxdn:
T ran5mmn de cromoroma X alas hijas y a los hijos.. el X Sl6kt a tuj11S. 1."1 Y l\OJo 11 tuji)S
loo crflm(owlf'lla.'l:
mdU.in1umenec (por fenili:taein con-... tal fendjonr \11\o.
CliJ)I:nl'IIIIO.coiOO X o )'. mpt-t:liVIII'llltuc J que ser X)
Eo oi@'IJUIS esJ!CCM:t. o dfmncin de los ooexisle cromo.soma V, .sino qut los 1111
-olo \'f(lmQSQt'll: X .un pnte"jn, las tienm dos \"fomo!<lmos X
En 8'1 <:;<\$0 de ctlu!M (1.1 orgWliSITIO$) <::On ms de 2n cromo50fi'\CI& (4n. 8n. ele.) se habla de carcter poliploide.
Hay OUM que son polipiOI(fleS oe torma nahM'8t. Mtn Jottnacto dt sv jvOQO Ot cromosomas
itlicieJ mediante tMlo8 repleaclon sin dMsiOII eelvlar (endomltosls). Por ejemplo, las olvlas del hlgado et1
son tetteploldes (4tt). y lOS gigantes de mdula sea contienen usualmente an. 11),) o 32n. ttey tat'l"titt
sltuamne& patolgicas caractOOzaclas po1 poiploldle: la& ms frecuentes son la ttlploldla (Jtt) y ta teltapiOIOia (4rt).
Estas anomallas cromoemlcas se estudian en el lema 29.
8.3.2
Contenido de ONA: valor C
Durante el ck:IO la formacin de gat001os y la fertlllulciOn lier'len ligar variaciones en el n(jmero oe
cromoS()t'n&S de la clula, Indicadas mediante los l'l'l{jljlpiOs de n. En hurnanoe y animales, es&as variaciones lransOIM'I'en
entre 1) (flapiOide) y 2tt (dlpiOide). No debe confundirse esa variacin con la del contenido en ONA de ceda clula,
aunque s1e lambln varia durante bs l)f'OOe<SO& cltaOOs. Para Indicar e&le oon4eni00 &e emplea una nolaci6n basada en
Ca la cantidad de ONA (de dob&e hebra) corre&pendierrte a un jlJ890 hapiOi!Je de cromosomas (85 decW. tt)
antes de su replicacin. Se pueden enconttcw clula&, tanto haploide& como diploicle6, cuyo contendo C 85 diterente:
n,C
gameto maduro (6\<uiO y espermatozoide)
n,2C
Clula diploide
2n.2C Ol'!lula somtica cuando no esd en <ivisin, antes de sufrir la repr1C8dn de su ONA
Clula somiltiCa l ra!l sufrir la repllcaciOfl, a poo&o de dlvtdlrse por mitosis
2n,4C
gametoc:ito I)JYnario. ames de dividirse por meio6i& dando 2 gametoc:itos &eeundarios
8.3.3 Locus y alelo
locus tM:
delindlL.
oc upadu por un
b>t'n 1 o \1011
de
ONA 1 en
cromose>m.as
hornlof!OS
Jt-11.1
de:
I>'J.'\ '"uJ(Iu, en
un IOC\I'>
loc k varias
poiciotliti pata

en un milimo pat
de eromO$lti.U
cada par de aleloo; (K:tlf)ll el
(un alelo del padre y d ocro de la
OOT ACIH EN EUCARJOl A$
95
En eu31Qulf!r clula de \RI mcsma espeae, gen ocupe s1empre el mismo lugar en un detlWI'IiM(fc),
'1 la posiCIOO equivatnte en su h(m(:IIOg<> (P.ot 3h<lt:il. basta eon que se enuenria por gen una secuenc1a de ONA que
OO!Jrflco un p.(lduttO tunonal. bien protelna o bien RNA.) Pata referirse de (Qnna gell6nc<t a $C1 utillll:l
tbnnn'IO loeus. Por tamo, genes distintos ocuparan diferenles ftXi (pyr<ll ele loW$), on &1 miStno .ac de cmmosomas o
en "O!ro. E"os trminos tamben se 111ilizan P<J(a \3 posicicirn de rtl!)iOne$ dlt: ONA quo no f;ean genes..,
A cooa &eOOenea de ONA .l!!lic:a o no) s.,uiK\8 en un toeus se la llama a.ielo. Piles1o que cada
cromosoma se prosenl{l OOti"'O 1,11'1 ()<V, en cada ltld!VIdtJO hay dos alelos en el mismo tocus que sendnbcos o
diferonles
En los oos alelos que .ptesenta un lndl..-lduo en 1,1n locus delemunado $01"1 de los d' otro
de la m:sma especie (d...ersldad geneoca o pol(morfismo, p:Jg. 365) ComQ en el CX>n;un1o de 1:1
pobl{leiQn mAS de dO!I alelO$ dllerentes un locus. El e&tudio de IWstornos dlf!ICOIS ht.l ponnitido lclcnt.1il;$r
numerosos alelo& mnno,; fracur:ntes. en la pobl&ciOn, que SII'Yen tlO)' como mate&Ootes para
pa!Ologias
8.3.4 Genotipo. fenotipo y domi nancia
E.'>lodk) : un
soJo lot:U!>. CU<Jtl\l
ith.li.,.idoos de la mi:vn:

Aldos en la
poblacin: A
1
. A,
(prCSI.'t!ICS en
diiCrente:s)
,,
S1 1ldo' dtl pnr
el u1Jo"d"ll
bnnloiC'i)!,liw
A
'' :o
'

S dt'I IW ....
diftwlllo:J,
twlcrolrilt'itico
Se lkline {ttn!Uipo cumo 111 g-eu(:ut".a de w1 Ols;wl.-..mo" (CS dtl.:ir. de! un iMnkloo de
UIIU dada).
t i thmlou pi!Cdr 9et conSJ!krado ca sctllido 1.'01110 cl COOJUnr.o de tos nklm pmo.'tlt ,:n
I.W.IOI'IIcJcJ (k }1)!1 Crumf.lmll\ dcl cnd.n Jdub.
San c:rntlllrgo, 11 K sudc: el cno1tf'll qta uo llll:llll par1.cu1at. ttJII 11) que el
;tOOCI <k 1.111 iudiidt10 dcfmido J10f II)S do!; en ew en rmll'l()!l,)mJ'
de .eultt lol 'tlli.hJpks aldot.Jt1M7Jksl"',. el locu,. en l11 de eSA
oo, m,,Jd.-
lllll'l>luc;(ll
1'1111\'llld-
U nsocidr ( Oil " '
.-.po-*c. ""
llllt IJu>II II(!!IIOC:itl:/11. ot('&
fil'""''"''
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l.tlllltlpo M! ""'fii\:!.lo) p:ll d
4otllfll1t(( .... CIWC lclt,.
96
1
CONOEHSACIOH DEL DNA Y CROMOSOMAS
Rtllleiil nure d ni dt t la pobtacW. par
llitlll.I IOCIIS diflltlllllltt 1 le$ 1("1'-(ltltdt11 dtr lg.tt
'
1
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b .:'*'mn;, .h Como .!). la troNI:qlld:id de cxi!o1m:..a de ad;, 1100 de 1M gcn"'il"l"
.,.!1 l.! p.>bii'C'tlm t."S lloblt (111$" ll \k ctd.ip;lo(ipO
En la& en las que 8XI&ten dos o mh alabs en Ja poblacin se dice que hay poUmorllsmo. otwlamente
refcncJo al loeu& oonsidert1do los polimorfismos del 98floma huiT!ano son objeto de alenao especial en el teros 26.
Tema 9
Ciclo celular
9. 1 ................... , , ........ .. , ............ ., - ... . .. .. .. .. ..................................................... 91
9.2 La en interflls.t ..................................... -..................................................... .......... ,................... 98
9 2 1 et1 tonde-Maei:)n y contenido en ONA de la aomatll'lill , , , , - . ...... 98
9.3 clulas somatleas por mitosis ............. -.............................................................. .,.,.,,.............. 99
9.4 Divisin dt cilul.-s genninales pl'imarfas por m.elosls ...................... 99
9.4.1 GametogneS4 . .. ...,.,_,_,_,,,............................................. .. ........... ,., _,., _.,, _ -- 99
9.4 1 1 Espennatognesi9 ..................... . . ....... ........... . . . .. t02
9.4 1.2 Oognesls ........... ,.,_, _, _,,,..................... ....... - - - -... .... t03
9.4.2 Reparto del ma1ena1 gentiooen la meio&i$ ........... _, _, _, _, _,,.,, _, _, _, , _.,.,., ..................... , _.,.,,_,_, _., t04
9.4.2.-1 Car<icwr reduelor de l3100i0$i& .......... , -- -- . . . . .. ...................... -... . 104
9.4 2 2 CQnlp;:aracin entte meioSiS y mdoSis ......................................................... - - - - - - - 104
9.4.2.3 de y 6YetSidad geneliCa ............................................... 105
94 2.4 Reeon'ICinaeionmeiOtlca ......................................... _, _, _, _, ............ _,.,_, _, _,.,_ ... 106
9.5 Unin los h&plolde's durante la feeundacln ...................................................................... 106
9.6 ResuMenlntegr aoo ....................................................................................................................................... 106
9.1 INTRODUCCIN
E.s importante resaltar que lOs aspectos estructurales hasta ahora oonsiderado6 p;.ra la moloola de ONA dobon
estudiarse bato la s!bJacln fisiolgica en la que se encU91\'Ira el material gen8tioo en el nUcleo e\IIC&ritico. e$
decit. durante tas etapa'S de teposo y drvi&ln que se altnan en la Y10a de 1<' Con frocuoncia. 0$1<'1$ dQs
cuestiones se relacionan pooo entre si . o se analizan bajo planteamientos &in unn sur!Cieme
1:. divi$itl getlen'ln 1an10 tos getroetos {diviSin meiO!ica) como, a psttlr del cigoto. todas laS
oUa<s para QUC Ot!)&fli$mo y $e de$8ti'Oile <Jutante los petlodos embrionario, fetal y de
crecil1lMitl\O ht1111t<t el adulto, y la teflOV&eiOn oontlnua de tas OOA!Ias que IYI.lefen <1\Jfante dlCIIOS perlooos
(divisin miltiea).
u. ()ivi$il'l por !WIIoSis llene lugar notmalmente <U'aflte toda la existencia del organismo. desde la divisin IniCial
del cigoto ha$1tl ta muerte ae1 rnaMduo. Se calcula que duran:e la vida tunen& se producen unas 10" diviSIOftes. la
uansidOn entre oos diVISiones &uoeslvas oo.nstttuye. junto a la di'J'5in. el c:ld o de divi sin o
smplemen1e elc:lo c:eh.ll4!r, Su <lvtl'ftin v.vl01 de COI'I ol bpo od.ll:ar en fui'ICin ele
determinados AlgunO'$ ctlv!M POf una $uoesi6n continu3 de (:i(:IO$ (le div.si6n (pot CJel'ri)IO,
oetutas epiteliales oe1 ilrltesbno y procursores hematopOyllcos en la mdula 66ea), otras poseen cielos ms espaciados
(una vez al mes en clulas hepucas. una vez cada 3 al'los en ol!lulas endotetca\es de vasos saf'9Jineos. etc.) y. como
caso exb'emo. algunas detienen $V progf'OIIin en ol c:ielo, rc.;JnudndOIO !ttl$ un pcrio<to pr<*ltlgado
(quie&Genaa) o inclu100 no divd.indO&e m.fl$ (nouronM)
AJg\.lna$ clulas se espeeializan en ta produccin de oametos o Qitutas l)9l'tl'litir<in la formaCIn de
un nuevo individoo Tales celulas (ti del so dividen mediante un
mecanismo dlferen\$. denominado moiosi s. Qut lt1rnt:>i6o V<\ precedidO de un cic;Jo 11imil8f lll de !;)$: Mh
$0mlicn11
una viSin glObal del ciClo oeiiAat permlte ObServar oomo la clula ltanscurre de maneta Of<ler'lada y $ar'l
dlsconlftlliaad por dos grande$ etaPes bl$n diferenciadas: la divi$i n c:olul;u propiamen\G dictla lpot mrtosl9 paro
oluta& somllticas y pot meio6i& para clula& germinales) v la i nterfase (oomUn a ani:J.as). Durante e&tl1 la c9fula
s.e !)repara para ta siguienle diviSin duplicando su msterial { ONA) y tociO $u contenidO (OfQt.ein;:t$ RNA.
Of'gnulos. membranas). oe modO Que se duplietJi $U 1arnarno 3tlte$ oe dMCiirw en 0<>$ clulas tllpiS Cl$1C3t11onto. el
98
CICLO CELULAR
ciclo &e plantea en torno el proceso de replicacin, o 4UC!Iie$Cin del ONA nvelei'll. oon lo que se definen dentro de ia
interfase tres elapes: ta fase S (durante la cual la la fase G. (previa) y la fase G, (pos1erior),
Mientras algunas clulas entran en divisin tras COtJ1)Ie4ar caaa lntettase, otrM a estadio mcxilicado de
f.;:uc Go o QUIH(:$nt. en -que pennaneeen das o inc:Liso &"ca hasta cmpronder \lr1 nvevo clcio. o del que
nunco Sillon {C61utas se dividen. como es el caso de las neuronas).
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o i111.'lu110 Jm ll:$1\'IKI M
Siigtliendo el pt8flteamiento genetal de este texto. interesa relacionar iOs aspectOS 9f:lll!tieo$ Cl$$101>$ 001 Cielo oon
aquellos cxros de 11\doie ms bloqulnw:a y molecular. Para ello, se aborcsatlln en Totma oe1a11Bd3 13 interf.-se y lOS dos
tlpos de dlvi&iOO celular. con objetivo.
Poner de manifiesto la enorme variacin estruaural que supone, durante !a lnteffase, la condensac:aOn de: la
molcula de ONA desde cromatina a cromosoma y su desoonclensacin en senlido irrverso.
Re:salltlr ell)n)08$0 de la tambin liene ll.lgar durante la Interfase, pero en !Al momento diferente
del 8r'lte(IOr. Su l"r''IOeCCA8t y enzim:iltieo se estudiar6 oot1 Cletane en el toma. 12.
EstableCer &as ar'lalogias y aireter'IOias er'ltre la disin por mitosis de las Qlulas y la divisin tXJt meiOfi$
de las oii.Aas gei'ITII'lales primaria& pata dar lugar a clulas getmif'l8le:s ITI8dl.nls o game4o&.
9.2 LA CROMATINA EN LA INTERFASE
la l r'ltetfase, o lapso Que transcurre entre dos tivisiones celulares, es nonnalmente el periodo mas prolongado del
ciclo celular, con sus tres fases S y <3?. Esta etapa ternWI.a cuando una oUa somtica entra en dt'Yisin por mitosis
(par.- formar &omilticas tijas), y QRifldo una ;lu!<t germiMI l)tWn31ia $C <iviOe IXlf' moiosi$ formar lcJ$
germinoiC$ modurtt$). Se .a a estucli&t emo ltt irltt:tfase el de Ol)n()etls,acin dol m11tcrinl
gef'l&tioo y taml:llen oomo varia el OOfllenldo de DNA (2C en 4C en (h) sin modtlc&rse el t'M.lmero de croiTlOEIOfl'las (la
clula se mantiene diPIOide. 2n).
9.2.1 Variaciones on condensacin y contenido on DNA de la cromat ina
Ot.wante 18 ma)'Ol parte de la v\da celular {bien Interfase o bien qulescencla. segUn lo& casos), la molcula de ONA
no presente en la torma extendida de doble hMico ni tampoco en 13 fOfma <Jtt Q'OI110$0mas. $IAO en el
e;t<ldo oondcn$l)(So COI'Iooicb eomo crom.:..tin:. (Pilgs. 85 y 87).
Al pr0QI0$3r on el Qeie> oetu&ar. la cromatna se desc:ondensa gradualmente durante ra tase G, hasta adoptar una
confOtmacin localto!atmetue eldleilaida (correspondiente a le doble 1\otlce), necesaria para le separacin de las dos
hObr3$ <1\.11'11rl'O la roplieaeiOf\ (fase S). Para eiG, ta euetoma1!na ha de pasar pteviarmente por los esUidos de fibra de 30
y 10r'lm(p&g. 101).
OU'oote la tase o,. las clula&. tanto &OmticaG oomo germinales. son diploldes (2n) y &u contenido en ONA e&
2C. En 1a fa:H S o de &intetl$ se pt'(lduc;le CIOI OHA de I()S :ltt cromosomas IMMC1ua1es. cacta nebra ae
este ONA sifve de ITICllc)e sinttl'$i$ CIO otra nueova, quo permanece asoc:iacl8 por apa.reamiento de baSfl:S. Las dos
motecuas de ONA resu!tar'ltes permanecen u"''Os IXlf' el centtmero, dando asllugar a crom060f'l'la& oon hebras de
ONA: ceda doble hebra constituye una c.romatJCia. O. este modo. el nmero de cromo&Omas permaneoe oon&tanle
2tt). I*O Mt Cluplic<t., oontenir;to de ONA. dotde 2C <t 4C. Un3 ve: 18 la ctula entra en
OfVISIH DE CLULAS SOMTICAS POR MITOSI S
99
ta tase G
2
dQncfe se ir'liela ta condensaclon gradual de la cromabnl <Pag 100. M 11\\'(!IS& a i8
descondenseci6n ocurnd'.a du;r3nlO l<t G,, pg. 101). que se completa en las primerss. oi&P9&- ele IQ mllo&i$ dandO
lugar a Cl'Ofl'lO$Omas viSibleS al mierosOOJ*). con su aspecto t!pico do 2 cromiltda$ y 4 La clula siendo
2n. 4C
se puede conSiderar q.e cada molcula d1t OHA C$ cromoSQma en cualqUiet momento del octo. et
termino ctomosom.a oottespoi'ICJe e$trlctamenli! e esta forma i!ll mllximo. A \>eoes se usM lOS trminos
CJOm0$0tl)ft y c.romosom<t intfHf.sioo l<tS f()fmas condensada y desoondeonsada (cromatl'ta).
resoeclivamente.
9.3 DIVISIN DE CLULAS SOMTICAS POR MITOSIS
La mitosis o fue M, es el periodo ms corto 001 CiClO celular. d1.1rante et que lugar ta civisin de la ck.'a,
que ya ha duplicado su material gentico y en dOS clulas hijas ldenticas.. Clasicamente se eonsidera
divicfid.a en Cinco etapas: (1) Profas. lcl cromatina nas.1a formar tos etomosomas, dejan de ob54.1N<W'Se b$
nucaeoAOS y apatece el huso m!bco. (2) Prorml:lfue comienza a romperse la nuclear. se \>en por primern
vez las 2 cromiltldas de cada cromosoma y lOS 2n erOtnOSomas migran haaa el plano ecua10rial de la clula.
(3) Metafase: tos 2n CtOmOSomas, oorw)eosados al)3tCQet'l atine&dOs en e p&ano ecual0r181, independtentes
unos ele OliO$. (4) Analau: los cromosomas se rviden POf <:enttmet<>$, separndose en dos cromtldas, que son
desplaZadas haw polos opuestOG de la ollla cn:>m3'1ida es ya un cromosoma hilO Independiente. (5} Teklfan
comienzan a desoonden&ar5G tos crom0'$0(1'13$ y se t(ltr'n80 membranas nucleares para delimrtar dos nUc:leo$
Patalelam9MG. ta membf"lln;:t celul.-.r et eiiOf)laStl'la en oos partes, cada une con un n(l(;loo y mitad clq tos
cwg.;'lnutos, formando las dOS clulas hija9, en el proceso lamado citoclne$i S (O citoQvine5i$)
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Como consecuenCia de la mitosis. cada clula hijt' rocibo lllf\81 cromittida <le eada Ct()t'l'IOSOI'n3 de ta Clula madte,
es decu. la mitad de DHA. pero constilvyerdo un conjun!O Ct()l'nOSOI'I'kO completo (23 pares de cromoeomas} con toda
la infOtmaein gon61ica dota oi!Aa Po eno, se dice que la mitosis es un proceso de dMsiOn no reductora
(pg. 104). La Unic<l es Que fa clula an1es ese dMdlrse tiene 2n cromosomas de 4 hebfas y 2 cromtldas
cada uno (4C) y Iros aa diVY$i(lon Cada hija tiene 2n Cf'Of'I'IOSOI'I\89 de 2 hebras y ooa croml.lda cada uno (2C)
(pgs 100, 101)
9.4 DIVISIN DE CLULAS GERMINALES PRIMARIAS POR MEIOSIS
L& divi$r6tl moitico forma Clet ptOOe$O de lormaclon de gam-etos o cetulas se)(U8les hapiOides, a
partir de clult'ls prit'l"()((liales (que son ClipiOICies, atogual que tas clulas somUcas), en ef proceso conocido
OOMO gametogfnHIS.
9.4.1
Gametognesis
La oogenesls y .la espennatognesls se Wclan a partir de clulas germinales ptlmordlales, olulas
especializadas del 6\lulo o testiwlo, una serie de divisione$ mittic<l5 que, con et consguiente proceso de
crecimJIWI4o y dif9rcnci.On celul.\r, POduOCn sucesas get'letaCiOnes de clulas llaMadas oogonios '/
espe.rmatogoniO$ (Wmbien oogonia y 102, 103). A oontinuaciOn stas. tan'()in por m!I0$1S, dan
t'l oocitos y espermatocitos prin'latlos. TOOI\'!I estas clulas son dlplolcles. F.,almenle, a partir de cada oocl!o o
esperma!OCIIO pr1mano y medlan1e dos dlmlones suce&Nas Cliferentes (melosls 1 y metOSis 11) se produce ta reduocin
del esta<tO dii)IOie)e at llaploide. Por euo, el oe esa& dos CIM&iones recibe e4 norntw'e de Meiosi s o dlv1sln
celular reductora.
100
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CICLO CELULAR
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DIVlSIN DE CELULAS GERMINALES PRIMARIAS POR MEIOSIS
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(.(lulas )<)Juiltlcb (':!) cua!qu.._,. ctllpa dd d.:5armlli>
{o,!lul;c, lodud
- pulx'ft.IJ 1
101
102 CICLO CELULAR
9.4.1.1 Espennatognesis
En et caso del vaon. el proceso, que tiene lugar tel)t!Jdamentc t1 10 '"'90 de toda w Y1da. oon la
prOOUIX:iCor\ de es;pennatol.Oides o gametos maseullnos
mtoi!I(IIIH
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Pv1 tJ., k>!> dt
ho.'mbre <k .40._ qw- a.k.trnrO b
pobcn.-d u IS V' 1 S) pi'OC'fdtJI dt
JO o-1:0 r41)
Wo:CShti.
uno de klS espermaaoci!O& primarios ha dado lugar <' un reparlo ""'6\liOO del cltol)lasma en cuatro
Iguales. El nmero total de divisionN .,lores $01'1)'endentes, vari8tlles 9eg(ln ta edad, ya que
dependen de los afio& traon&c:urridO$ <le$do to j)ubettad. El nUMet"o total de eepenna1oZOkles reatnente prodocidos es
obVIamente varillble': bM:te indieer QW un varn sano puede formar unos 200 millones dao& durante toda W::l<l fftil
y que un (;(In unos 2 mt, eontiet'le \.W'I09 60 millOnes de espermatozoides.
DIVISIN DE CLULAS GERMINALES PRIMARIAS POR MEIOSIS 103
9.4.1.2 Oognesis
Pot o:"l oorrlfafio. en 18 mutet la oogn$&1s ocurre en su mayor 1)9Me dtK<WUe la Vldil ''""" il l)<'r1ir dt la "lul
gemw'!al pnrncwdial originada en el enckxfermo del saoo vitOiinQ del cmbriOn. El m.-yor nmem de oodlos primariOs se
alcanza haoo el Ql.llf'lo me$ Cle vitlt'l lel31 (oomprese con la puberlad para el vatn} y es muy Inferior al de
espennatocilos primarios A J)a(lir tiO C$C I'I'W)tnColo, el oe OO<:itos se te<luoe hasta la t)uClertaa,
se mantiene durante l3 vide frtil oe 1 rl1l..l}tt y o.saparece C<l$i IOI31menle -"' llega( 1;) mel'lopauSia
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fllli.HIW <i ,,..,,,
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11 tnt'ftllf n' d<' 1!1'-n<'
q\1( 111 (k
.. ul' -..:;t m")
Ol>lo:tou< .o b de,,., "'l""'""'""'...tt-.
0118 peculiaridad que diferencia espermatognea.ts y oognesls es que en las dos Mei61ieas de esta
ltima el reparto del citoplasma es asimtnco: en la meiosis 1 se &orma una oft.lla pequel\a llam:ldo CJ.Jetf pofl)t y
oc.x:ito Mtunc.iano grande diVt&in do &4G en la 11 ongna un segt.tndo CUINPQ potar y un vv!o maduro.
Ambos c:uetPOS polar-e& degeneran go&teriormoote Pc:w U.Mo. un oocilo primario slo QGMra un vulo. rTIIE!t'ltras que un
.sPOrmatocito produco CUtltfO
1 04 CICLO CELULAR
9.4.2 Reparto del malerial gentico en la meiosis
9.4.2.1 Carcter reductor de la meiosis
En la 1neioSiS 1, e' gamtl'!Oc:rt<) (oocilo o petmaiOcilo) pnmatio SU$ l3 P<lJ<tS dq homlogO$
(2n . .ce, ooo dos crQMI\ttdlt!l c:ad3 uno), de totTI'\I.l que pHan 23 crom0$0Mft$ (Uf'IO d., n 2C. con 2
crotl"'bd.1s) a cada gameotodto secundao (t Ley de Mendel). Se dcoe .te 1:) &togtcgarcin de los
cromosoma"- o que ceda Pftf ha suf.OOO di'sytmein; se teduce asl a la m!lad el nUmero de c:romosoU)$. Por ello, so
dioe que &8 me.os.s os una dMsin tedl.lctGv8. debido a la meiOs:is 1. La meiOsls 11 es no y et1 al reparto
de ge.n&11co se asemeja a !a eomo se dscute a oon.tlnuadn.
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9.4.2.2
(1:1111 .llplooolc,
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f<'lltlku thopllt!ll
p.llll b d" jjj/ln tci..W
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loo<C>&nll""
jlnll:t ....
t'-:ct
(.('J "'..-.1

;ft J't'l'"'""''f''""ll>fu!

S
Comparacin entre melosls y mitosis
t h"'l'kl + ......
... cr l.CI
C.:hol .... 111' jfinl:c
t!"""Wlo llll.
u, eseoclal entre la mitosis y las dos etapas de lit .-. 1<'1 distribuCOn del material gen11co
entrolo'ls. hijas (!IQI'llBiicas dlploldes en mnom; 9"fllOlO$ haploido$ on mei0$1$) El de la meiO!IiS 11 es
al ese la mitosis, pueslo que "' s.eparan In dos eromb.1ida$ y se reduce la cantidad e ONA (2C-.-C) Slf'l
el eatact (nt. De este moro. cada c61ul<t copias id-6-ntlea.s de ONA (doble!! hebras
M la repllcaciOn). En oontraste. en la mebsu; 1 uparn lo miernb10.t de c:.&da pa.re}a de cromosomas.
oon lo que so reduoen a la vez la canbdad de ONA (4C...2C) y el nl.lrne;o de cromosomas (2n-.n). y las clulas hijas
*bon d ifO(nte material Qfl'tlco (pues cada CtOmo6QITia de un pa1 cootetler alelo!! diferentes en C9CS& looos
.... 94)
DIVISIN OE CELULAS GERMINALES PRIMARIAS POR M.E10SIS 105
9.4.2.3 Segregacin de cromosomas y diversidad gontlca
En ambas melosls. el teparto ele lo& cromosomas hofn6loOos de cada par 1} y de las aomlida& de cada
etomosom.a (meiosb 11) se hace el azar, de forma lOCalmente indepenciente para cada cromo:sorna (2 tev de Mendel)
En delinltlva.. se a&egura ron creoes Que cOOi! g.-meto .-.c:ibc m;.Jteri<'!l genlitieo; ost<'l varittbil k:litd tt Of
fundamewuo del pollmotfismo gentioo, CIJYO& detalles y con&eeuencia& se estvdian m<& adeli'lnte 26)
1
1
Se&rt88Cin indC'(lerwlicnte dt!' los c:romO!>Omas en la mciosis
J porwdf\'JO- 1. 1J
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106 CtCLO CELULAR
9.4.2.4 Recombinacin meitica
Durante la profase e la melosis 1 (Profase 1) llene ligar un prooeeo de gran ITascenoeocla en cuanto a aa. ttereneio
y a la generacin de la diversaclad gentka de cada lndllftduo: se trata de la reeombltutcl6n mel6tiea, o simotem&nle
reeombinaeln. Los detalles de este prooeso no se tratan aqul , pero bscamente consiste en 61 o
ir.tetearnbio de regiones de OHA entre cromtidas de los dos cromosomas homlogos (es decir, nunca 1\ay
recombinacin entre cromA1idas de distinto par). De ahl que se llame tambin reeombl naciOn homOloga.
... -
-
9.5 UNIN DE LOS GAMETOS HAPLOIDES DURANTE LA FECUNDACIN
Cuando los Oot; 9<"met0$ {n, C) w en la focundttc:in, el pronUeteo del te oon
efpronUdeO hembra del vulO, mbinatiCJO sus doS gef"'l'nas hapiOides pata dar un geootns 2n, 2C en ta clula hueYO
o lttta, Mi 13 prim+en'l e611A3 l)fOI)IarTifH'te diCha. Como 1.81, ootra en la fase G1 y poS1erlores de la
intOrfMe A )l)rbf <Jet Cig()IO se letman en dellr.tlve IOda9 las cUas somticas. Et mecanismo que rige la
tranSiormac:::tOn de una simple CUa. el cigoto, en un h:Vvlduo coostitll)'e un tema de groo Inters biolgico. casi
totalmente desoonocldo desde el punco de vista molecular. Tras mltiples divisiones oelulates, se amasijo
gtlbular de d!lutas 1M cuales se auiOOfglanlzan y especializan hasta tormar un fant&tioo oonjun1o de
clulas (220.000 subdivididas en ca<si 250 familias dif9ren1es. una oon untt h.lneiQn y di:;po$icin
concnKa&. en las di&bnt; QlructvrM (081l)JO, ops, 1'\arit, razn, ele.) del orga.Mmo oompleto. la Biologf.a del
Oo$011't011o os un QlmpO dO invesligac:O'I y en tos llllimos alios s.e Nn aiSlado genes <Jte oontrolan, por ejemplo.
la diSQO&ieln o defed'laflzqulerda de algunos f'9CW'I06: sin etl'lbcw'go. an estarl\06 lejos de oonocer loe
mecanismos moleculare3 que gooornan la Qtganognesls.
9.6 RESUMEN INTEGRADO
Para tenninar, el esquoma re&v"'- fO$ di$1inl0$ poeosos roeogionelo de una forma unilie:KI3
los cambios en la camidad de m{ltOti811 q.e sutte le clula durante m procesos de tecundadn. divisin
meitice y mhbca y ciclo celular.
f - . - . - . - . - diUc\n m:i;)ltCJ d.: d lulll.'l - - - - "
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1 ln. X e::::::::;::::: Z..1C 2n. <toC -
G
0
rG, G, S
o,
INTFRFASI
MitOSIS
Tema 10
Organizacin del genoma eucaritico
10.1 Complej idad del genoma euc.-riOtic:o ........................................... ............................................................. 107
10.2 ONA de copia nica, &imple o no repetitivo ................................. - ............................................................. 108
10.3 Ot.IA repetitivo ..................... . - .................................... .. ,.,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,.,, .. ,,,,,,,, ...... 109
10.3 .1 OtilA repetivo CO(I!fic.an1c ,_,., ..... ,.,_,.,.,_,., ....... , ., .,.,.,_,_,_,_,., --, ... .,_,_,_,_,_,_,_, 110
10.3.1.1 ONAtepetltivocodificanleagrupado ..................................................... .... 110
a) Familia& 9fuc.as clsicas ............... - ----- - -... ,_,_,_ .,,_ ..... ,,._,_,_, _, _,_,_,_,_,_,.,.,._,_, _, _,_, 110
b) Familias molbgnic;as de agrupados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . 1 1 1
10. 1 1.2 ONA <:Odirleat'l(e diS()et'SO: famT131$ molligrw:a;$ gene <ii$PCr$0$ , 112
10.1.2 OHA repebliVO no eoc:lincante - - - -.. -- - - --- ........ , .. ,_,_,_, ... - -- - -.. -......... ------------------ 113
10.1 2.1 ONAaltamente epetl!lvoyagrupacJO. ONAsatlitt!. .......................... ------ 113
10. 1 1.2 ONA mooeractameMe epelltlvo y <Rsper'o ,.,_,_,_,_. ----- ... -----------.. ---- 114
a) Bloques dispersos oe repetiCIOnes et1 lndem. ONA 11*\Sa!dlite y DNA 114
b} dispersas: SINEs y UNEs ,._,_,_, ,.,.,_,_,_,, ........................ ,.,_,.,.,. _,.,_,_,_,_,_, 114
10.4 Estudio ex.pel'llental de la complej idad en el genoma de ... ,,, __ ...................................... 115
En pr oeal"iotas. prc:Uc&IYIE!f'lte tooo el OHA eJCiSte en torma <le copla tlnica y codifica ptO(Iuetos gentCO$ (protena$
y RNAs). Sin en'Cargo. esto no se cumple en et nuclear de eu<:at iotas. pot ejemplo, se Cillcolet 01.-e slo 100
Mb del 1ota1 de 3.300 Mb del genoma humano haploide son codificantes. Adems. el genoma eucarll.lco se caracteriza
por la repetian 00 secuencias. El objetivo de e&te lema es. por lento, plantear esla distincin entre DNA <1e oopta Utl.iCa
y ONA repetitivo y est\ldiar con detalle es.le UltJmo en e1 genom.a humano. El carcter codifiCSnte. aunque se InCluye
Wmbin aqul, se mop en temas po:s\etior-es. al esl\ldiar la expresin g6r.ca madl.wacln y
LOS aspe.ctO$ CKpem'IOnlalos que Mn permii:IOO la demostracin de la de OHA repe1itivo et1 el
genom<'l euearit<o st OOscrixtn al fin;al del capitulo, Ba$ndose en esta a1JormaC16n. &e pocfnl abordar mas
eelan.te so apllcaciOn. a ptO()Iem&$l:liOW!<inol()giOOs e.\ general y Clinieos en pMictA<w
10.1 COMPLEJIDAD DEL GENOMA EUCARITICO
la de ONA repebtivo da lugar al concepto de del genoma. E-ste se delil'le c:orno
1& S\M'I"l& <le tMWIOS (Pb) de tOdas sus secv&nei'$ <!iierorttes (e$ decir, l<ts socuenaas repe:bdas se 001'\Jabilzan s6b una
vez). Ett consecue.ncla, para un tamar.o <le ge_noma dedO, a mayor gr&CIO <le ropcticin, menor oomplejidOO".
l::!9.Jj: L8 Interpretacin de eele trmno se puede prestar a COI'IfusiOI'I, pues frocuentemc;nte so U$<1 con la
acepCIn oomn de la palabra complejidad, que puede parecer <:OI'Ittarla a; la defiOI'I Mteri(n A$i, un 900oma
<:On gran nUmero de seooencias repetidas es eparentemen1e ms complejO, por oeftl'lic::.)fl su
P...,-a e<viler confvsione:s, se usar entreoomiltado cuando se rellera ata OO!lnldn especiftca dac:la.
Para et estUGIIo oe ta del numano, 6ste PJIIKIC diOOirse en <tis004as categorias de ONA en
funCiOn de su rel)f!(IIW!dao y su <:arder ooei'licante.
108
I)NA do
copia nica
DNA
n:pl!lit \'t)
ORGANiZACIN DEl GENOMA EUCARITICO
Rcguladot (c:oturola la c-:<pttsin del gen)
No
Hlmcin ckS<:onoctdll)
lntroocs. o 0:-..IA inlrsgtnico Hmcn:slado dentro de los gcnl':S)
I>NA imcrgCmto los geDt:lll
'"
l;l)di(KllnlO:
A u dol Gt:ncs en uindcm
gr pll
Otspc.'f.so: Familius
Agrupado (en regiones. C'U lAndcm
)' AJtamcmc rcp<"tilh'{) toN/\
Oispcr.so (pof todo d tcoom=l)
y \tod.-.dllmentc n:-pctiti\O
Rll'lqiK'!I dispi:t'l!M d'l!
K f"':llttOnocll o."fl li nckm

LJNI!: KptJ y
Ocnoma hutnano
JJOO.OOO kb t'f'l 2J moJCcul.as hnealcs.
2 C\lpta." por clula diploidc.
11Jlf1)'1. 100.000 gdiC'.S
G"'oont;a rmll'l.:tlndr"' fmmaoo
165 kb \.'tlunu molinla c;trCnlar.
milt): do: oopiJ;S pOr <.:.Mu..
J7 g-.omlt
,.,.,... lriK rco" m"t...
y dir..,-.,. '"" """"'")
A dlterencaa del nuclear. et genoma de lCl milooonda, de tatnar.o muy pequel\o ( 16.569 pb en huma,no&. 200,000
'VE!Oe!llftleru al genoma nuclear tlaploic:lt), esti pot DMA oodJ'tcanle casi en su totalidad.
10.2 DNA DE COPIA NICA, SIMPLE O NO REPETITIVO
COttsiJcuye la mayot pene oel genoma. en un., prOpc>rei(ln depet'ldiendo del tlpo de Otganls.mo
(100% en procanotas, 80% en eue&nOia$ inl'&iores, 50-70%. en animales Parte de esle DMA (-6%)
COOS!Jtvye tas secuentla$ de gonoa. O()dilicaalos A:NAs '1 protefnas celulares: otra parte (--5%) es dot
OOfltrol de la oxprMiOn de es:!S secuenaas, mentras que eJ reslo. mayoritario (-60%), .S DNA no (;Odfleante. cuya
funcin, si se c:oooce.
El OHA de OOilM sencilla fue <:On$iderado 4ut'Btl"' mucho uempo oomo responsable nlco del conceptO cl5100 de
90n; hoy" $ilbct que tlllmbi6n una pequena pana del ONA tepetJI!vo fOtTI\8 algunos genes. eucanck:o6, <:Omo
ONA REPElrTNO 109
a Q)n!Jnuacin EJ ootlc.GPIO dO gen avnQvt M $Ufri(S() unn OVOiuciQn en ()3la M08f'5e ms corl'lQicado
y con mUI!Jt)los COI'l'lponetltos. s. definiet\do bajO un cM&rio es1ridamente funaonal . sJempre en relacin con la
transmis-n de l<l tnJormtaoin dosdo ONA a RNA y ck.rsdo mRNA a un rogi6n
00 ONA <)1)8 oompron<'e. POr un &ld<l . '- que se eltCIU$1-V;)mente RNA (rogi6n
estructvraf do genes de IRNA y rRNA) o ()(en se ttM$Crlben en mRNA QIJC 3 $u vn a 1,1n<t Potoino. y I)Or el
otro 1<'1$ te(:t*J)(f;')f que actUM en aMbOS casos controlando la transetlpeiOt'l de aas regiOnes ett:r\Jetumle$
El estucio detallado de las caractetisbe89 de tos genes eucar10Ucos se <feia pera temas postertOfes, cuanoo se analiCe
su expresaOn.
Genes pnm RNA:
li'UJtSnibt:tt ;a RNA
ro.g.tn regin
- - -"".e_"' -'-'-"-"' -'- -
Genes p..1rn protcina.
lnlnSoeben 11 mRNA y
ro.-gin rc!!in
n!guladortl

10.3 DNA REPETITIVO
rRN,\ lt"-'
...........
Las secuencias de ONA. que aparecen en copias mOftiples, o ONA repetitrvo, cons.tlwyen entre un 20 y un 50% d&l
10ta1 del genoma humano, segn a1.110res. Esta abundancla es la e<ncterisbC8 de4eJmlnante oe la enorme oomple)lci8d"'
del ONA eucanblico. Las secuencia& repebdas, llamadas unidades de repetldn o repeUeloneos, tler.en
lamai'lo$ diYIJfSos y cada una se encuentra 00 torma idntica o casi dntiC8 muchas veces en el genoma. Esta
puodo Mt on form;a d:isporn POr todo .t genoma. entremezcladas Q)n las secuencias de copra Uruca, o
l)if!,n en form11 3grupad:a,b:(l!i:cadtl en rOQIIOne$ del eromosomt'l En ambo$ ca&O$, el nmero de de la
unicJad de repetJCIOn varia desde unos c.entos o miles (ONA moderadamente h:lsto e-tif'I'O$ (le rnilc:l$ (ONA
:altamente repetitivo). ooineiOe en ""'-'ChO$ C<'l$0$ con dislrib1.1ei6n en rormo. di:;POI1S<t y agrupada.
respecclvamente.
"umd;t.j !k >n
de <1 .. ll\ "'
l:I!Nf'l<,... pc:-j {j rt'
"blv;.x .. dt
'\"''' landtlf' n'l'l :w..,);
tllmaflo<kl :' f!b
l
una parte d(ll ONA repetitivO tiene eodifi-C<1ntt. e:s decir. contiene la ink>nnacin para e)Q)tesar un
I)(OduC1o funcional (RNA o prote-ina). Para el resto <st DNA reQetiliYO no $C tonoce una funcin clara: alguno
posiblemente ooncrlbuya a estructura de los cromoSOtnas mienlfas Que st t\3 llegado ., propontf que una
parte sea DNA ctlatana o DNA basuf8, 1.1'1 ves1Jglo fWQIIJI!vo .sin tuncion iletual. Finalment . debe que
algvnas de las secuenCia& repetidas no eodlficentes (COt'lcretamente, 1M denonW\.adas ITWli$8161ltes y
aun con f\.I'ICI6n desconocida, tienen gran relevancia aplicada en pruebas ot klentffit<"lan y esl\ldios f.amilitarM. debido
a su variabilidad entre
La repe!itividad del DNA tiene probnblemenle: un ongen 9\'olubvo Por vn lado. las repetiCiones agrupadas
surgw por errores en ta tepllcaclon o en la recon'laCIOn genEtuca. Po otro, ta s.e()o3r<lCin enlt9 repebcione5 dit;persas
puede proceder de van&Joeaeiones o CIO<ISOmieas.
110 ORGANIZACtN DEL GENOMA EUCARITICO
10.3.1 DNA repetitivo codificante
Se le llama tambif'l OHA repetitivo funcklnaJ, pues klrma genes que .se elq)f'eSan (aunque no todos, como se
Su 1amano se esllma entre el 10 y el15% del genoma.Apweoe en forma de "familiBS de genes. CU)'OS miembros
se caractenzan pcw su homologla, al haber&e origlln.ldo medfante dup(icac:ione& 367) y vari<tclones de un gen
ance51ral
Tipos de DNA reptti livo codilic:mlc y ejemplos camclcriSiicos:
l. Aj;lupodo:
a) F ias gCnicus dsic<.as o oonsc" 'lldas.
con n:pc:ddo!i en t:indon
\4UI."'IPIII \111 $lio) lk di: $t'i!10dlfU, 4 dti. 'W. O:llfldll
J!lllt1,.,'11m(nk ki que ..,..a, 1111 rdk'M't11 IIYillllll\ ll ,.
$t oJo .. 1\'f'l'UC'!Illll'l
b) Fwrubas mulugC:niCDs
loaJil!XIOIIr\U' SJIf1Cl!Sdd [i.'IIIIIIUip:nl Wl nb:II ron l;tt
lotiomtncao)
Sus s:ro.-s.....man ll:)('ll(r -"oi!K>IO!IJI' \
)' dt JC'fttll
SMc. v UfllftMI !le a. rep:uelunu
2. Fom11ias muJti.!..CnkaHoo g01cs dJspt.'rtm
'111111 l. e:il f<:lnlllkla fll,ll" 11" 11111111m1 peucllo de
rf'JWiida por-l(lllo el lc:'OOIIUI (indwtl) e11
lJIIC (11M 111111 t(ld.li liai<.ullle.
10.3.1.1 ONA repetitivo codificant o agrupado
a) Fam#tas gtmicas clsicas
de
1 h
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ll!lldao.t 6:: 1 - ),lllh), '01'11\W.. tltlf
5 lllllobdts&
ai. WRdml
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Ej. 1
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IILA-1
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1\<:lina
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Al tiC .w)Cd(t(IO.::H l Mb)te k

f.xm.- pnc dd predUilA.
J1C1m IW dc:'ll KNA CIUillltlti_L
u.n. rOS.\ i p!lf .. .,,.. !\ rboJWcnwn
no 1m1toeri111.
(..,_,r._..,c,.
DNA ., <difiAIIIf) ri)' <A "

.
l(pctiO;Jtonoo e11 1W:m ... a o.ornwe..,
4fllWl cos!"iw: "'-'"'''' .:ou lw'
\""-'*'"' .. .. ll}.l-&,.l f)l,l2'1
n s.'C'II oktR.,.A trlll-.rlll 1, uunlllcn
n'ltetldo (Q lalodt. ( IIM\..l(ilo JI '-''1'".,, q 111 llil'l'"-"' 1
ONA REPETITIVO
111
Contienen $rt!COOilCit:l$ repclid-V$ que codirgn un mismo RNA o proloin<'. que puede asl Sllltetu:arse con rapdez y
en gran candad. Son efetnPIOs caJactlisticos los gonot> do histonas y los de RNA OOosmioo. productos ambos que la
t':lula necesita en gran cantidad {feoulese cue tas hi!ltooas debtin r*ptdMtente en &a S (!el Clc:lo
celular, para asooiane at nuevo ONA prooe<letlte de la replicaciOn, rANA ei 75% del lolnl de RNA
b) Famtlfas mulltgl)/cas de genes agrupados
A dct \3$ Mtcnofo$, los m1cmbto$ C41<.1<1 f.lm11ia son genc:s con e $$
pueden loclulf en esle grupo tipos de familias:
Aqullas 00/'1 flOmOIOgla slo en parte de la setue(ICI:l <!e ONA, que dt\ lugar a prote-il'ia!l OOf\ gntn(lc:s rogionos 6o
secuencia y estructura comunes {dominios).
Familias OOfl homologia escasa en &as secuenOI.'lS del ONA, lo que genera prote'lnas con peqt.Je"<>S rnot1vo.s
comunes. cada uno de pooo9 amtoo.1el00s
Gttll'ld(!s "superfamitlas"", COt'l muy (Sflil homQiogl.;t tn la de' ONA y pQt" t.'mlo, crn li! de las a
pesar oe lo cual OSias mantlenoo una esuuct>JNII (en parte de su molCula, doltln'IU)S y utli)
relac.On- funcional. los genes que fomlan cada parecen estar relaciOnados e\/Oiut!Varne-:Me W<> mfl$
diSiantes entte si que los membros 0001pof"entes de las famaas anteriores
@ Familia.; de gcnC$ humanO$ dc la.o; csdena!l: a y fl de td\lbirw :

------ - f11miliu lu
- en i:l 1 (i
1 i.Jt , .. !l ...... ,.
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,..,....., .. ,,. llln>lol<! h"
-1 1 1 J 1 1 M :::::>'
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112
ORGANIZACIN DEL GENOMA EUCARITtCO
Corno consecuencia de lOs ptocesos eVOIIJ,ivos que dan lugar a familias multlgnlcas, aparooen oon frecuencia en
enas miembros coo caraaerlstlcas d1feronclale6:
Coplas de gene-s ( Yarlantes) con diferencias de secuencia. que codifican prodt.JCtos Qrioos funcionales
pero de caracteristicasligoramente distintas (pOr ojollll)lo, difefenciM en on.vmMie&. p,ttl"tllntlros cin6tieOS
por por su ligandq, Es comUn que se &eliYe de forma alterna1iva la expresin
<J. un;a u otr<' en funo&'l <te1 estadio de desanollo, de dlfefetlclacln celular. t(!Ode tejido ...
Puudogenes. se aplica es.te ttmlno como 'fl) a coplas lnacdvas de un gen, es decir, que nunca se
e.,Jcpresan, o que aun expresndose no son 1\lncionales. Generalmente, la lnaaivacl6n &e ha producido por
aeurnulaeiOf\ de mutaCiones durante la evolucin en b QUe
iniCialmente era un duplicado del oen Existen tipos diversos (t
pse!J098ne&. en fmociQn de s. so si
procesamiento PO$lrancripeion81, 3$1 0011"10 do su origen
e'YOh.JIM>,
Gonos ttunclldtJS: se ltata de oopla9 inoompielas del gen, por
l)eficJa de una regln sii!Jada en LriO de tos ex.1remos (5' o 3'}.
M en este caso se conserva slo
porc:iOn del interiot de la secuencia del gen (&e 1\an perci:lo
ambos edremos).
Obviamente, slo las oopias idnticas (famJi&s dil$ieas) y la$ varlantb$ Or)tlduC*' a ptOOuCIOS gnioos
flJneiOf\aleos, mlenttes que 106 pseudogenes. genes truncado& y fr<9"'I'IIO$ (le; gonn paroo.n 110r vestigiOs 9\'0iutivos
sin l'unan ectuaL
l06 genes de la constillJyon \1110 de lOS cjel"r(llos Ms representallvos de familias ndlgnlcas con geoos
agrupados, implicada en uno fundn lttn imi)OI'Iante corno es el transpone de oxigeno en la corriente sangulnea. Su
estvdiQ oonsiclentciol'les e'YOiu!ivas, de Cle98ti'OIIo y dltereneiacln. de la exprein gnice ....
[ n t111pa del d\: ('(WIIfl)l del
k>cu ..... ami:\J
c.cta <UJU dtl dC':ioarroll..,
Olra>kri;o:a. po.lf t n_,, Pl'f la p l\'lio. "no.:l'l
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Genes que se c:n la
<nQ que se ..:xpresan en la

y 6fw.!nl
famclia gC'tt.icoc de 0 $1t)bim
f.amili3 de la 3-g.lobtna
.IUltcUTMio sintccimdll(s)
las t lob.lnas
(en el cromosooaa 16)
(en el Cf'OIOOSOO'I3 11)
_JI "" '"" v - O
"
Ji {J, 1 & fl



n ..

(saco \'itdioo)
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Mill(lnlaria: ( 2'>) M onQriutu.. u J
10.3.1.2 ONA repetitivo codificante disperso: famil ias multlgnlcas de genos
dispersos
Mienlr.l$ qvet en las familias Mltlgenlcas ameriore las 110 disponen agrupadas. prxlmas en te
secuencia del genorna. en otras 106 genes <PJ6 forman la ((:(l()iaS iOnbCas, variantes. pseudogenes ... ) se
locafll:an <fiO fQtma dispersa por el genoma. a mrtnudO incluso en cromosomas dlsllntos.. Entre e518s familia$ w
el'louerl(t8n genes que proteinas de i'IJI'Ic::iOf'oeS divetaa&: enzi'nticas. reguladortt$. <Jc Mml."loenarnieMo.
estructurales .-e PQf l)jef'nC)Io. ta lamlia de alekllasa comprend 3 gono$ fur.:ioni!MS y 2 pseooogenes. repartidO& en 5
cromo$0m;a$; los genes de ectlna fonnan otra femili<'l con 4 genes y l."ll menos 16 pseudogeneS.
ONA REPETITIVO
113
10.3.2 ONA repetitivo no codificante
Esca es la fracctn del genoma a la que el trmino DNA ropetJtivo se teflere ele lonna mas MbiMtl Su lam31\0 se
esW'I'Ia entre Uf'l 20 y un 40% del DNA gMOmico total. Como ya se ha indicado, se subdavlde en dos cacegorlas: e1
rnodcrOO;:trnon!c repetitivo, que en fQmlt' disper&a, y el alumente repeiJitYO, que adamas es agrupaoo Su
<'islfobuCi6n gener31 en 01 genoma I)Vt(kt ropresent.<ne gr.ificamente oomo w muestra en la figura, para dos
cromosomas reptesenl.atlvos.
-
ONA
rcp."11tno y l)(lr uldocl i C:II(IIl'lll ,
.;1llfC'JIX'X'bdc<m i'l L>NA de copu Utua)
1 pnr- w.:ll d
)
2
<
i5
Rc110:Uttl"nc.<
o.lb{lf.'"'b
10.3.2.1 DNA altamente y agrupado: DNA satlite
Supone entre un 10 y un ge:nom<"!, y se le llama tambin ONA repeti tivo en 18ndem. confuf'lC.htSe
con el ONA y (ambOs COfr(l$W'lden al ONA moderadamente repeotitiYo y disperso, 114) ni
con lOs sar.Nlfes CtOmo.smiOO$, l&s mti$M do croma:bna que forman el extremo oe lOS OMO$ de
CtOMOSoma acrocntrleo (Pg. 88).
Este bpo de ONA est tonnaoo por u'*"BC!es oe pequel\o 13m<'lo (250 pb} repelidas en tndem entre miles y utl
milln de \'eteS. con lo qoe el bloque de repedcin abarca cientos <Je k:b o induso \'ar\3s Mb. Tambin es caracterisllca
su toealiz.aein agruptd" en espocffiOO& de \'arios cromosoma!!, (1 regi ones
heteroeromauea-s. et1 torno al oet"ltr6mcro y en los Se oonooe el papel de es1e ONA S<Jill!4
on 135 regiomn telomricas (pgs. 92 y 157), peto an no su eaclo en el 01Mtr6mero.
El de DNA tiene oo origen metodolgico: debido a su ana tasa de repebci6n, las reglones de este
tipo <fe ONA una 00MP0$1Ci0n de ba:se& diferente ata del res1o del genoma. que es rn611 promediada. Cuando el
ONA total se fragmenta (por ejcmolo. por fuerzas de ciz.ala) y se analiZa en gradiente$ ese c!Ot'lsi!Sad de CsCI (pg. 137),
los fragmentos prooeet\le:$ de ..., tegiones de ONA satlite. que poseen menor debido a &u menor contenido
en GC. se separan oe la b811'1d3 l)rinQCN'II de ONA li:lrmando 'bandas satlites. Ca!ta Uf'l-3 elas c:on'tls.ponde a una
de DNA $Mlitt (l<tles como 1, 2. 3. y P). con disllnta secuencia <le re!*iCin y/o nmero de repeticiones.
114
ORGANIZACIN DEL GENOMA EUCARtn CO
10.3. 2.2 ONA moderadamente repetitivo y disperso
Allitilt 1

u " lfu,k
fS

(hUIDIIIO.
2S-4X pb
,,.
171 pt.
"'"'
,,.
Cotno su nombre indica. e54e tipo de ONA M <lisb'f)uye a lo targo de KldOS lOs cromosomas. con oo nCI'nero de
repet!done$ no muy elevi'OO (ontrc tat y 1<f). se S\Jix!Mde en doe ca1egorlas. en funcin de la forma corno &e
dlstrbvyen las repeticiorm en ptfmet lugar, algunas secuencias se repiten en tndem fofmando bloQues, los cuaN$
aparecen de fofma dispe:sa por el genoma. El segundo tipo consiste en repeticiones igualmente disponlliiS por IOdo ct
genomo, pero que t10 se agrupan en blci<Jes.
a) Bloques dispersos de repeticiones en tndem: ONA minisatlte y ONA microsatlte
Se distinguen estos dos IWbgrvpos on funcin del tamafto de la ur.clad de repeticin. Constituyen conjuntamente
entte el S y el 15% det genoma a pesar de la slnilllud de nombre, no deben confuncJir&e con el DNA
satlite (pilg.. 113). del <PJe &e difercnci.-n POt estat lOCalizados de lorma <ispersa por et genoma. aunQUCJ se asemcj&n a
l en la clo fOPCtkiones et\ lndem.
t.a impoi'UW'\Cia ptetlca del ONA minisatlite y micro&al.ta8 G'ldiea en su gtan varlabildad entre h:lrviduoa. que
permitO utiliZarlo como nwcador molecdaf en medicine forense. pruebas de pa1errldad y dlagostico de enferrnedade&
motularet. estas ftl*9clones se describen,. il<lclontJO t'l nablar de polir'nolflsmo gentico (pg. 3M).
a/J DNA mri:mtt!/il(:
E.stil formado por repeliciontl$ de 10 a 65 po, tices en G+<C, agrupadas en tnOem formMdO t)loques relativamente
grandes. do cioniO$ o miles de repetiCiOfles: esos bloques &e encucnlr..'ln re(*tiOos por lodo el genoma.
Algunas do 0$1tts repetiCiones, denominadas "ONA se CIWa<:littlz.an por su elevado
po!imoffismo (diferencias en secuenaa y nmero de; no slo enl!e lndrviduos de una especie. sino inclu&O
entre !os dO$ en:m<:J$0(1\81$ hOmiogo& de un indiW:Iuo Sus repe:lieiol"et, de 10 a 24 pb, preserrtan la &eeuen('.ia;
cnSenso GGGCAGCANG {donde N nuelecldo). Este ONA es impottante por !as
derivadas de su polimorfismo. principalmente la Ob!endn de nuellas de ONA, donc:le untl sonda para te secuencie
oonsen&O puede hibridar P'nulli'lneamenlit oon toci ministttCiitos difetenlbs distrb\jck)$ por IOdos ros
c:romo$0t'mtll, d:mdo lugar a un esquema o patrn de: hibrid;M;in diferente para <:&ea il'ldllvlduo.
a ] J DNA ml('r()Smi-lite:
Se aplica nlc "'rmino OUIII\do la unidad de repelic:in es in'-ior 7 pb. Se presentan en tndem en
bloques de 50 tambin dist:rbJidos de fofma Oi$petS3 por el genoma. Su polimorsmo &e apliect
lgUalmenle paro la obtenciQt\ de huellas genticas. para pruebas de idcntictad y esrudiOs larnlates.
Aunque 18$ seclJC'nelas telomrleas se han .-meriOrmente oomo ONA repetitiVO ag"4>00o (ONA
satli(e), por su ul)iC:.Ci(ln et1 puntos concretos del cro11'10601'na, algvnos aotores las eonslderan ONA microsatite p<Jr er
heeho de rompattir con este eataeterlsticas de tsmalk>, nUmero y disPOsiCin en tOOem de &as repetJCiones.
b) Repeticiones diS(J&rsas: SINEs y UNEs
De nuevo. la klngitt.ld de la 11nidad repeotiein sirve de orilerlo para subdtvidirtas;
h/) &rm!Jid .as SIN/l':
Las siglas proceden e Sllort lnJerspersOO NI.ICIHr elementos nucie.ares di spersos oortos. St Mbl3
oomt:.nmente de unid900-s de 100 a 500 1)1). repelidas ha!lla 20 veces. Sin embargo. el ejemplO ms caraeserl stloo, el
oremenco A/u, de 300 pb, aparece en el oenoma humano 500.000 y un milln de \'I)C(I$. Su nol'flbre se debe a que
un sitio clan<'! 13 &Mima de restricdn Afu.l Se tr<tiOI et1 reaidacl oe una familia de secuenc:icl$, con oo
85% de hOmologla. que supone I)Or si sola alrededor de un 5% del genoma, de modo que, en promedio, existe una
secuencia AlU cada 4 o S kl)
Se cree qUI8 bs elementos AJu pueden haberse originaOO por la en el oenoma de
mJI!Jples eopias IOmwi8:9 pof transcripci6n inVSa 001 gen de RNA 7SL. un RNA citoplsmico pequel\o
oomponon1o de la pMic.ul8 de recot,OC.tnll'9nto d#l soll$1 324). A pesar de la homolog:la de
Heuencta. las secuencias AIIJ no '- tuncl6n de este seRNA.
ESTUDIO EXPERIMENTAl DE LA COMPLEJIDAD EN EL GENOMA DE EUCARJOT AS
115
hl) UNE:
En es.le se trata de elementO$ nuclear& dispersO$ la.rgos (Long NucJe8l Elet&&WS}. <:on
Ckt m3yor l<{lma/10, 9Cf'let<Jimcnte v300$ miles de pb. QVI(t se repiten ha&(a 50.000 veoes en forma dispersa. La
princip."tl LINEen fu'nanos ta constill.lytm 13$ sec:ucncitl$ Kpn, t.ambin llamtldas. L 1 o UNE-1 Se encuentran en
el genoma de 50.000 a 100.000 repeticiones dispersas, oe tatnal\os oomprendi<Sos 1.4 y 6,1 ttb COOa dcb.fQ
$U divers.iclad.
10.4 ESTUDIO EXPERIMENTAL DE LA COMPLEJIDAD EN EL GENOMA
DE EUCARIOTAS
El descubrimienlo y anliSis del ONA tel)t'tibYO Que. como se 1\011 indicado. determina la del genoma
eueafltiCO, se ha basado et1 13!S tk-nicas de reetS<Iciacin del ONA desnaluralizado.
Esquematican'leMe. este estuOiO im(llica IJS siguientes c1np3s
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l'apottU'"''
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Para obtef\et conduSIOI\6:$ 81 oompa:,ar la de dis.tinlo$ tJPo$ de ONA es convernente que ras.
molwlas que se reasocian seM de klilgitucJ tegutar Esto se oonSiguo 2) el ONA genm1oo
mediante sonlcaCIOn de la diSOlUcin de a!t.a inteosldac:l) o Jta<:it!>nctola a pre$1rl tr;crV\)5 o.
ofloo pequMo. lo <PJe ejeroe fuenas de cizalla fragmentan las largas molc.-as de DNA. convienct
pcvlir de la misma con08fl(racin de ONA, o en caso conlrario debe oompensarse su vaiOt h::luynCioiQ en v<Ui&b4tt
Cot, lhrmirw:> dcfini()o 0.1 contiruac;i6n. Lit fiNI$0Ci3cin w analiza (etapa 5) midiendo la f1aco6n numrica de tragmei'IIOs
we se Mn rM$0Ci31):), en funcin del de templado. La proPQtein de DNA de doble hebra se
espectrolotoo'lttlcamente. o pot otrt'l$ tec:nic<ts <aue <Jircrencien el OHA de hebra sencilla y doble.
Como fliemplO de este tipo de esllJdio, se muestnl la escisin de !fes hiPOtticos. MOCillos (A. By C). de
lamal'lodlferente (1, 2 y 4 kb), en fragmen!OS de Igual b'lgltiiCI (1 kb).
t:,:cupodcfd !Aio, p.r.l ti senllflll H;\ ":
El <k un pa1 <k pwmf<lil dt' toi O, p!lf kl que
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I.'IIIIC'C'nfll);;w;I!l & llmM
"
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116
ORGANIZACIN DEL GENOMA EUCARITICO
Pata oompensar e1 electo que ltndr14 1;) d:i$11M3 eonoenttacibn 1t11eiM de ONI\ en las llluoe$1f8!1, se IJ98 el proctuciO
x t en lugar del oompo de r. E$t l)fOdveto se (()niO ..,_.lltfttble Col. la
1epresemadn gr.fica de la clntica do reosoc:;i;Jitin $CJ por t$nlo, con ftaoclOn o pot()Onl:.jo te.II$0Ci""do en
on:lenada.& y loQaritmo d& Coten ilbsci&M. y te cotoq(Ji3tmente de las -curvas Cot"
Ut ob$oNl)CJIf'l do un:. coneladn inversa entte la pos.cln de la curva de reesoclacin '/la mago.tud del genom<t
de partida permllc et empiOO de &o:s curvas. COt para obteflef ttformaan sobre ellamal'lo de un genoma:
ck

6; lrn.-.lml"""' <:'II'(':' C)

All&h'.l.Jro"" ttld!\ 111....-..rC'
tnNc:(......._ la
'llllllll!J.:IOQ llllllll ilc
I)NA, (_' "'kl
de p(litnl.a
'"*""'
pNC> flllllccu._ _.dlit
de: uli 11111)
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---- ----
Adems, las cuM$ C4t tiOOen espec:ial lnl!!fea porque eponan tnformac:n del c::onlefll()o en DNA
de un genoma. Esto ts deQ!do a que, para una misma conoemracin de ONA wcal (o. en $1,1 de:feeto. corregida usando
la vanable Col), 10$ fr(l!)l'l"leliOS de secuenc.as repetida& em:ten en mayor conoontrOOn OQf 10 que se teasoclan m:s
rpidamente. Se .,slr.J primeto e!lta dependencia con un ejemplo simplil'irc<ao, QtMJ parle 00 los
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mc:ulnn lil$]
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a;.
que: M rnidt
O. torma cuando se analizan gcnoml:l$ (e.eles las curvas COl reflejan la do oon
distJmO nme> de tepetlciOOE!S. Por ejemplO. dO$ genomas l1p1C0$ de un procariota {E COi) y un
{humano) M oh$el'va, de acuecdo coo los cn;erte)S de intetJ)reL&cOO expfiCados, que en el primero tOCio et
ONA O$ de copla (Mfca. mlenlras que tmomO'I ttumano posee un marcado componont0 rcpe1illvo, que se agrupa baJO
10s t&rm.nos 'ONA altamenle y nodetedamenle repeblivo ..
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11\.\ n,.ckrllo.l.t ni
f.:p:llll\ '
)t.;A 1
Tema 11
Preparacin de muestras, extraccin
y anlisis de cidos nucleicos
11.1 Obtenc:in y p rep.ar<K.in de l;a& mu9$.l101& ............................. ............................................ 119
11.1.1 Muestrasdete,dosslidos .................................................. ............... .................. ...... 119
t 1.1.2 Muestras de suspensiones celulares...................................... . . ........ . ..... ................ . . ... . . .... . . 119
11.1..2. 1 Clulas embrionanas (diagnstico pre-implantaan),_,,,..... . . ................ .. . . .. .. . . . . 119
11.1.2.2 Liquldoo lluldoamni6UOO ................ ....................... .......... .................................. 120
11. 1.2.3 Clulas de te,dos o sangre felales .......................... ................................ . ............ 120
11.1.2 .4 Clulas de sangre o mdula sea adultas...... ..... . . . ... . .. ... ...... . ... ... . . . . ........ . . . . 120
11. 1 2 5 Muer.1ras bucales ....................... . ................................................ . ................... 120
11. 1 2.6 Semen ................ ............................. .............. ............ .......... .......... 120
11.1 'l.7 Clulas en Ol.llivo , ...................... ............ . . ............ ................... ... ........... 121
t 1.1.3 Muestra& celulares de llquidor. biol6glcor. . . . ... ...... ... ...... ... . . . . . ... ....... . . . . 121
11.1 3,1 Liquido ccfalorr,qvideo , , , , , , , , , , ...... , . , , ........ ................. ... .......... 121
11. 1 3 2 Licuidor. o dorr<Jmes 1S4:It'O$O$ .. , , , , ... .. .. .. .. ... ... 121
11. 1 3.3 Liquido Mieulttr o sinovial .......................... - ------ ...... , 121
11.1 3.4 Mues1f8S bJOIOga:as menos 1\81lituale!l ........... .... - - - ........ .. . .. .. , - - - - - .. 122
11.2 Di:tociacin de la mue:tlfa ti sular .......................................................................... HH"""' """""""'""" ' """' 122
11 .3 Separacin de clul as ...... -........................................................................................................... .... H ..... . .. 122
11 .3. 1 So!*aci6n de por m610dO$ do y ... ,., _, _, _, . . . . - - - . . 122
11.3.1.1 Centrilugacl6n diletetlcied .............................. ,........... .. . .. ...,.,_,.,_,_ ... ,_ ,_ . . ---- t 2'2
11.3.1.2 Centnrugaclon en gradiente de den!liclad . .......... . - - .... , , . 124
a) Mtodos de barrera. tef'lt(llugaciOn a de vo medkl de densidad oonslante , _, _,. 124
b) Centrilugacin zor\811 o de velocidad de sedimef'lta<:iOn 124
e) Centrifugacin isoplcttiC& o de equllbtlo <le $#XIlmentaci6n ... -------........... --- 124
11.3.1.3 Elt.rlrlacin cenlrifuga ............................ - - - - -" --- - - - - - -. 12.$
11 .3.2 CaracterlzaOOn y seP9facl6n de e&lula!l pot citolluc,imeltit\ de . - . ,_, . . 126
11 3.3 Separaciones dwecta& de bpoS 127
n.3.3.1 por afinidad oon partlculas magnlieas... . . ... 128
11. 4 Caraetertueln eefu.lar y medidas de villbi.tldad ............................................ H ............................. ... . . . ... ..... 129
11 4 1 Ensam de exelu96n,_,_, ,_,_, ....................................................................... ,.,_,_,_,_,_,_. . .. . . 129
11 4.2 de c61ulas viaelle$ por R:;orporacin de un marcador .................... .................................. 130
11.4.3 Et'lsayos por modida de ful'ltin ------ ........................ 131
11 . 5 Li si:S de las c.41ul ar. ........................................................................................................................................ 13'2
11.8 Prcpa101cfn de fracciones subcetl ul<lrH ..................................................................................................... 133
11.7 Tnttamientos o complementarios .................. .. 133
11.8 Extraeetn de $leidos nuelcicos por sofubilidi!d en f;:a59r. i nmi seibles ..................................................... 13-4
11.8.1 EJCIJ'30Ci0n <!el ONA ........ ,, ........... , ...... , , .... , , , ... ......................................................... .,, _, _, . . 134
11 8 2 Exlti!otin del RNA , , ........ ,,,,,,,, ....... .................. .................................... - - ---- 134
11.9 PurlflcaeJn de eldos nucteleos f)Ot precipitacin salina difercnci01l ..................................................... 135
11.10 Recogida y con:&eNaeln de 141& muet&trs .................................................................................................. 13$
11.11 Procedimientos alter natlv&S: ex:trac:c:IOn o a nA lisis di rtc:-tos de-l ONA ...................................................... 135
11.12 Fraccionamiento d& cidos nuc&eleos ...................................................................... <nH ........... .... .. . ............ 136
11.12.1 Ullraoentrl!ugaein ......... . - ---, ................... . ........... .. ............................. _, _, _, _, _, _, _, _, _, - -- 136
11. 12.1. 1 CentrlfugaeiOt'l zonal .................... .. , .. , _, _, _,.,_,.,... . ........ , _, _, _, _, _, _, _,.,.,. ............ 136
11 12.1.2 CemrifugaOOn l&oplcnlca..................... . . . . ........ . -------.................... 137
11. 122 Eloctrofores.s , ... ..................................................... ......... _,_, -----.............. -- 137
11 t2 2. 1 Soporte para la electrofore&e&....... ........... . ............ -- _,_,_,_,_,., 138
11.12.2.2 Detcoci6n dol ONA tras su separacin ('revetado1 ............ - , --- , -- -- 138
11. 12 2. 3 Cclltrac:in de la e&ecb'oloresi& para el clculO CleltaMat'IO de 10$ fr<tQmeniO$ de ONA ..... 138
11. 12 2.4 etoctroforesis de campo l)l.ftante ......... .......................... ,_,_,_,_,_,_ 138
11.12.3 CrOm(ltogrilfiCOS ............................................................. , _, _, _,. --- 139
118 PREPARACIN DE MUESTRAS, EXTRACCIN Y AHUSIS DE CIDOS NUCLEICOS
Las teenlet'ls <flerivac)8$ <'e la BiOiogia Molecular e GentiCa se u!lllzan de IOrma tanto oon
fines b!lieos como lundemeM&Imente el dlagnslklo Cllnloo, penlendo de muestra& biolgica& muy dlvei'M8.
Elo requiere &a y analisis de RNA y ONA y,.., su easo. u otras m&eromol&evlas. TO<IO$ es10$
oomo en tOdo pnx;:e$0 iltltllitico, M desarrollan en tres fases:
Prc.anotiti ca. deSde la obtenciOO y prepat8CIM preliminar de la muestra inlciall\asta su transporte &llabotatorio.
Anlitic;a o c1e aplieae'l ese prooec:!imietlaos para la extraccin de lOs cidos nudeicos.. sobte los que se realiza
IVOOO Cl aMiiSiS t*'>qui mlc:o-geoeiiOO prO(liat'l"'ef\le dicho: 1oma y tratamienlO de datos, y recogida de resultados en
un infonne.
Postana11tica o de valld&dn tcnica del lnfotme anarrdco. Al conjunlo de esta fase y la preanal ftica se le llama
"fase
Estas fases. hoy dla ooncicionadas por los continuo& avance& in$1rumontaltts. dtt <Mom<ltizaein e
lnlormtlcos. han lle9000 a tal estado de dHarrolo que puoden a veon enmNCarnr ti ear6etor CieotiflC:O que SWyaoe a
lodo el prooeoso ana!ltico. Dentro del planteamiento dlt e;te libro, corre;ponOit considor&r $01<1monlc y de fOrma l:>feve
bs aspeCios esenciales de las fa&es y (ll'ltlli lie.. Lo$ detallO$ descritos en librOS especaall:aos,
P*>CCIOS de laboratorio. etc .. SOf1 objeto 00 estvdio duranlc lOs pooclos de formac:in y de etjereic:io
prolesional o c;ientlfiCO en tweas de labotatorlo. Aw'lque de dificil delimitacin y COI'Menldo (por e;etnplo. a Yeees
50 IMna proceSIJ<IO de 18 M116$tf8 a la pteperadn preliminar, pero otras &e inc:toye en e51e tmWio a la faM anatrtica),
tases se nan Integrado aqul , para su descripcin, bajo un GSQIJ8fl'la unificado donde w imcnl<'l revnir todM ltts
0 M ues1ras tk:
ttlulan.'S
I'('R
CCIIO'tfu;-.:in ronaJ

clc.-:ll'llftlw.iJ..
Jino$t!
OBTENCIN Y PREPARAC.C.N PRELIMINAR DE LAS MUESTRAS 119
posibliclades, a\.I"'QUe stas puedan no darse on la realidad Se cs.lttbleec $0tic de m&s
o menos consecutivas, coneaedas entre si, en las o.aales &e aplican tcnicas nYJY diversas. en ocasiones sencillas y
oomunes. a veoos muy complejas y especificas.
11.1 OBTENCIN Y PREPARACIN PRELIMINAR DE LAS MUESTRAS
La I'I'JJie$lnl celular &e obtiene y a partir de e'ganos. w,de o fluido& blolgiCXl$. en toocin del obecivo
(clflWCO o de de .,dividvo$), tipo cCiu!t\ (somtioc<l o 9(1tnwli!l }. tw 00 gcnoma (r-..clo,r o
mitooondrial), lipo do a re.alizar (secuenCia <!el gMOI'l\8.. genes gr'liOO$), En caso.
clet>en condiCiOnes que g818flt)Cen ra C<JN<tad de la mue&tra trente a la& <liversas variables q.e a la
fase pre.ooaltica (recogida, arrtiooagulante empleado -en su rnanipulaaone& para la oonservacin, ttanspof\6,
94(:..) , En t<t ptept1rttcin prdWnir.. se hbce rlll:lid.,menlc tms 1, obteocoOn (dentro de 1 hOfOI (:OITlO
24 h). o ,., moostrtl se mnnlienc oonQiel:ldn llog<t al
11.1.1 Muestras de tejidos slidos
se obtienen meocsiante biops.ia (metooo inva.srvo <te teOOgk:Sa. wo condieiOf'les ele
Clu!M o porCiones de tejiOO de vn vivo. oon fine$ diagnOstiCO$). se libeffln oe restos oe 9r3$3 o
aoomp<ti\;ao1C$ ClQf lovOOQs con disotvcin r1$ioJe9C3 fri;J y te envi<en <'11 l<'!borttlorio. segUn los ct'IIOS.
rofrigcf"'tldos o oonc:Jelodt't$. pr()(ogi(t(l$ con hielo, niev-t o nitrgeno liQviOO clectin del tejido y de
extraocion de muelles tadores. entte otros, oonteniao en ONA. tinalidac:t del esbJdio, o neoe-sid&CI de
amplillcacl6n por PCR de pequM&s muestras. En ocaSiones se palie de tejidos fijados o de ONA ant.guo
C-aracteristicas generales de 13S principales muestras de tejidos y r!)anoS de 3diJitOS
Tejktos tumorales
Tctjido hopiltico
Tejkjo muscuJar
Tej ido i ntosti n.al
Extensione-s de
R.3i:r: d e pelO
Huesos
Tejidos tij:ldos
Tejidos Incl uidos en
pa.raflna
DNA antiguo (rt$tO$
humanos y onimnlcs)
ONA atrap.ado
Para analizar marcadores de membrana (glicoprotenas, receptores, etc.), de
citosol (receptores hormonales. etc.) y de ncleo (oncogenes)
Rico en ONA (15 ,..grrng); cnfermedodCII mct.abliCll&
Pobre en DNA (3 f.lgtmg); pata enzlmopatlas
Pobre en ONA (3 1.19 /mg). Se obtietle de zonas no W!losas
CsntiOad mi nma de ONA (0,5 Jl (>l'r<'ti Z); <:on fin$$ foren$CS. dificil do
Pulpa de los dionl$$ o mdula de ocros hue&OS. El tejido seo &e tntura por
mtcxSo$ fisicos
Se debe ellmirw la para,_,a e-mplear.oc> d!solll$'ltes, por ejeml)lo deno o
tOiueno
lntore& <wquoo16gico y antropolgioo. Debe eV1tarse la contamnaclon por DNA
e!Wgeno e inllitliQOf(ls de Tacwo!imerMa (que altGran el anllsls por PCR)
Oesoe h&ee miiiOI'Ie$ <ft ai\Os, L3 rC$IJ'IO vegeWI m.anti9ne el ONA en
pertec1o 0$10do
11.1.2 Muestras de suspensiones celulsres
11.1.2.1 Clulas embrionar ias (diagnstico pre-lmplantacln)
El 'I\IIO fertilizado Of%lll'ltt en el Utero l)()r $Vcesfvas mto&is estruauras de 2. y 8 clulas tollpotl!f'ltes (6
OfaSIOmetOS. que forman la mrula) y luego de 16. 32 y 64 olulas plutiPOtente&: esta (l!ima esttucwra se Jama
0/aS"locisto o blastodermo, y a partir de ella se IniCia el desarrollo. Para ObWVt'r Si el embrin es poaOOt de un
ttastomo gentico se puede obteoer DHA ex!tayendo 1 6 2 DlaSt6meros (10 Que no af:ta al desarrollo de las ottas
clulas ele la mrula).
El bli!$1odermo P<l$iJ formar una capa extema de c&tulas (lfO/oOfaSlO) y utla mMa oel.llar nterntJ (Of01.stocefe o
vl'Nro J)t'Nntiw)), A \lJ\0$ 5 dias de la fewndaetOn se produce la Wnplal'lladn, cuando e trorOOI:I$10 invade 1iJ
pared del endometno re-viste interMmente el Ulero), d<anOO I1.9C1' a la ma<fullllcln de OOrinkas.
que penetran en la placenla para permitir la c:a<culatiOn Las de un POlo del blaMocele Gngll'lan bs sacos
embrionario y vitelino, rrventras que el res.lO del bla:stocete fortn<'t el embrin, Do 1(1 maS<l oelular que oonst:Jiuye este
Ultimo se pueden obtener oUas madre plurlpotentM, de elevadO POtencial pewa trasplantes. pues pueden dar
lugat en cunJvo a Cf!>llaS especialiZadas O& bpos,
120
PREPARACIH DE MUESTRAS. EXTRACCIN Y ANUSJS DE CIDOS NUCLEI COS
11.1.2.2 Liquido o fluido amni1ico
A partir de la 1
1
semana de gestacin, el embrin queda protegido al inmerso en el liqu)do amnitico,
contenido deniTO de \lna membrana llamada $C11C0 amnitioo o amnio.s. la compoSICin del liquido amn161lco, cuyo
llega hasta 1.100 mi a trmrlO, deponde de un equilibrio dinmico de intercambios oon el ie1o y la madre, y
oontlene clulas epdeliale<s que apot1an unO& 65 rg ONAIM. la obtencin de una muestra. medlan'e punciOn abdominal
a travs de la pared del tero. &e denomina cvnnioceflfe.sis se usa a partir de las 14 semanas de ges&acin pata el
diagnstico (ln)flatat de anomaliM cromosmicas.. enfemte<l8dc& meUilicas congnilas. defeelos de' desarrollo
l)u!ITIOtlar oet fetO), estuclk) Clel sexo, ele. LaS muestras del Jt! lfimes1re sirven vt'IIOrttr 1& 00 ltt
eril:f'OC)I&$10$$ felal y C)fededr etslndrome oe dlllc.Aad resphtofla del neonato.
11.1.2.3 Clulas de tejidos o sangre fetales
Como alternativa at lf<pdo amnitico &e vtilizan f1'IIJ8:Siras de ''Ctll0$idadon tojiOO fetal procedente del
conon (membrana mM o.x\er!\(11 del embrin. Quo corrlal;t<t con la J)l.t'.;;e.n1<t). ;_slils constituyon a, mojor f\Jeolo de ONA
felat Se obtienen por biopsia a las S..12 sttl'l\!'lnas do gestacin y tlan <'t w
se pueden obtener <ambin muestras de sangre letal, dentto del seno materno, do9 prooedimlenlos.:
Ltt 1$to$copi8 (m&IOdo similar a la endoseopla, vlido &aMO pera expiOraeiOn como pata lOma de muestras) se utjfza
entte las 16 y 21 seManas de gestaclon, pata detetmlnar coagulopatlas. anbsl9 de ceriotipo. etc.
Una tcnica alternativa mk sencAa, la o permite oblcncr $i'lngrc fetal del
OQfdr'l umbilical a13 ltimestte de sus {ntJcleados) y llnfoci!OS se uUizan para dlagns.lico prenMal
Sin interterencias con el lelO.
11.1.2.4 Cl ulas de sangre o mdula sea adultas
las muestras da ungre perifri-ca 60fl las ms empleadas, oomUnmente do $;)ngre (unos 40 J9 ONAJml)
recogida sobfe antlcoa!)!Aenle. Se utiliza la fraccin celUlar total o W5 dis(in1os tiPO$, untt ""l &epttr3(k)$ pOr alguno de
los mtodos disponibles. en especial la oentrifugacin segUn W5 di'oreneiots <'t t.&m81\o o dcnsi(Uid
Se utilizan tanOn manchas de sangre, QUO se obOenen de $31\gffl fiSiOlgica (l<liM. dedO ... ) secada sobre un
papel o canon. o bien <le origen aoc:ien1al (prei'ICiM, 'IOhicPo$. utensilios... ) , La mancha M! raspa y extrae por twvado
oon diSOlucin salla Se utilizan .. idcntir1C3cin., r.nes JoreMes. etc. Se pueden destacat las Utl}etag
P301 diagnbstiOO l'leonatal. y las l8rjelas ele papel FTA. malerial especialmente tratado en el Que se seca la
$e lisan .las clulas y se extraen sus componentes. quedando fijado e.xdvsivai'Tl(lnl$ el ONA, Etlllt tllrjetM
poseen la ventaja de &u fcil tran;porte y con$tf\';)Ci(ln,
u.& mun1r de mdula 6s.ea rOja (&CIIva en hematopOyesls) se obtienen. bajo ane<5les.ia local. po1 aspiracin
mec:i;ln4e 1>4.rndtt generalmente M el estemr'l o en la cadera, v&llndose para ob&ef'Vaciones citolgica& al
micros.eopiO y estudiOs get'lbc:Os e hlslolglcos.
11.1.2.5 Muestras bucales
Los raspados y enj uagU4$ bucales., Obtenidos por m&odo!l no lnvas.Nos. con oepllo suave o algodn y
disolucin salina, contionon c::61ui8S epiteliales de descamaCin oon suflc:lern(e ONA genmico pata &u dMeccln. previa
ampliflc:.&oeiOn por PCR
La saliva es de uso creciente POI su hu::iidi!d de obWicin (lOMa directa o pre!W!f\Cia sobre la piel. sellos. colilla de
clgarrilo. etc.). La& <:lula& eoiteiclles que incorpora. prooedences de descemaciOn. pueden apot1ar cantidad su6clente
de ONA (89 vn<'l de muescra oon hisopo) peta su anli&is oon mes kwenses o estlldo de la patemiOOd
11.1.2.6 Semen
Contiene millones de eSQerme1ozoides (S..7% del \'Obnen rotal. oon 1.3 pg DMA. POI cltJial) forrn.;u:IO$ on 10&
te&ticviO&, n suS()enSiOn en t.W\8 rraoc:l6n liquida de secreciones de la& veskulas (50"4 en wtumen), la
pslllta (20% en vOlumen). las gtilndvlas bulborrectales y el epididi'no. Se recoge <'t v3M maneras, PQf ejemplo.
{il) en prcsetValivo, para estudios de f\lnclonamiento del tracto genital de tcrtilidad, etc., (b) por
..spiraein directa de la vagina, para investigadn c:ninal por agresin soxu;'llt. o {e) POr lavado salino de manchas
scc&:S en ropa. pelO. etc. Las muesttss fte5C85 &e deOOn ana!iarr CIIICCS de 1 h de su recogida. mantenindOlas a
te"'*"atura corporal dvranto $U tr3nSI)Ort.e Los espermatoZOiOes se pueden separar del reAO de olvl<rs {QV!tJ incatyon
1a5 <le la vielim;t. en c&sOS de asarlO sexual) me<11ante ISi& d#erencial de sta& oon SOS (doCiocilsull'ato sOdico) y
K
OBTENCIN Y PREPARACIN PREUMINAR OE LAS MUESTRAS 121
11.1.2.7 Clulas en cultivo
las al&ladas o pro08<1enlttS de u rganos M I)UOden en medios El
QJttivo lular ver un de o'*OOio Ol:'lrt requerimientos espeda!il:aoos en cuanto a
equiPO, procedim.etl$0$ sutttatos. niJitlenleS y tactotes <fe eteclrnlenlo, etc. Pueden CLtarse como ejemplos llneas
ceUares CiOtloeas (gentica y met.aDlicamente uniformes con la clt.N Inicial) y euliWOs oe clulas de tejidos, oon un
pote;lal <fe ap!lcac:iOrl como a!tematwa al de rganos y tejidos o para la reparacin de lesiones 6$1Aiwes; por
ejer'l'lpl'o. llbroblastos y quetatlnodl06 para pteperar ele p.el ttrtificittl (<f(ll'nlf$ y epdenni&.. I'G$POCI.Nttmente).
hepatoclto6 para patoklg1as neptlticas termnales. de miocardio OiltO IO$ionos cardiaca$
11,1.3 Muestras t elulares de llquldos biolgicos extravasculares
se en eS2e apartado algunas muestras con lntefes dlagOOsiJCO por si mismas o complemenleriO de t.as
t'lnteriotes.
11.1.3.1 Liquido cefalorraqudeo
E$ un fluil: resu!tatlte de lt' ul!raf4tracl6n del plasma (de ahl su analogla en OOITipoS!CIOn) y que reooge bs
!)I'Oduetos Cle de'SeCIIo del mel&t:>Oiismo oetebtal . Se encuentra en dos que recubren el oentbro y la
mt!!OIAa espr\81, tonU\ICado9 entre si: el sistema vemnctlfar (30 mi) y el &S.Qacio sutlaraCYloio'eo. delimitado por las
membranas piamadre y aracnoides (120m)_ Se produce y reabSOfbe conbnJ<Imen1C {oon un recambio de -500 mlfdia)
en lOs venrriculos de los dos netnislenos 08febr.lles. Sirve oomo 50()0rte protector del sisMma nervioso para Que
"ffote el oerebi'O evitando su apoyo direao sOOfe la superfic.t sea. Se puede oblenet una muestra por puncin lulnb<v.
Aunque su aspectO normal es transparente. en condiaones aumenla su turbidln por la ele cUars
(esencialmente leucoa\Os, eri!J'Ocrtos, microorganismos. etc.). en funan del tipo y gravedad de la enfermedad. Se
utiliza paro d&leaar enfetmedades del sistema nef\1'10150 asl como pera deteclar marcadores tuf'I'IOt'Sie&.
11.1.3.2 Uquidos o derramos serosos
Se en ...., QJw:;l<idOs del cue1po <PJe rodean toos lg8tlOS, delimitadas por dos lt'l p{)rlt'IIJf
{t:xterna) y 1a visce18J (interna. supel1leie deltgano). Estas membranas estn fotmooas pot y una rica
te<1 de capilare-s sangulneos y llnlilbcos. a tra'lls de Cll)'8 pated se Ntra el plasma cuando se anere el batanee
twdr061ill:aco u osmtico: de ah! la analog' a de oomposlcin entre pla&ma y llq.Jdo& sero&06. En la prctica d lNca, se
tis6nguon do5 tipos de ultr3filtrado tr.Jns!Jd.b<to$. de ongcn no dlamatorio, S)OCaS elulas (menos de 300/ml), y
fJJCI)d<K/o$. a demmcs .,namatorios y con m1.1ch<Js <:etutas {mAs de 1 ()())'mi) . Lar:5 normalmente
transparentes. slo IIC en sitvocioncl$ entonoe:s !XI grttCJo de turbidez: vanable en f1.1ncrn
de su contenido en leveo<:s y eritrocitos. fl.lndarnentalmenle.
Liquido peritoneal

Liquido pl eural
liquido
volumen
no<mel
100 m!
1030 m e<Mded pleural {M acunula toraCOCMtesis o (punCIOn
en la bil&e do IQs ele la pared o del espa pleural)
Conhene cUas de muchos bpos y e& ele intets ollnlco en enfermedades innatnatoria$
inlecclosas. maf'C&dotes I\.WI'IOreleS, ele.
2050 rn1 espaciO petidrdico
Se usa con y3 QI.IO preseM3 mM que 10$ antenore&
11, 1.3.3 Lquido articular o sinovial
Es uo uttrafllltado del plasma, vi!ICOSO. 00t1 un alto contenido etl pro!eb\35 y hi<t!urOnico, locaizado en la
C8\tldad articular para conJe.nr un carc&er futlncanre trente a la tfietin Qt'OI)i<' etc 13$ artJC\.Ocionos di.Jrante el
movlnvento. Con un volumen normal oe t a 4 mt, su contenidO cetulat llene tonto on PfOC0$0$ mecn1100s oomo
en P'008SO& inflamat()OO$ pa101gi006 arucutetes. Se obciene por 81'tfOCMte-sJS, es decw. O'ISflitaCiOon lt'aS puf'l(:in en ol
eswcio articular.
122
PREPARACIH OE MUESTRAS, EXTRACCtN Y ANUSiS DE CIDOS NUCLEICOS
11.1.3.4 Muestras biolgicas menos habituales
Pueden contener clulas y. por tan40, ONA, tRI. serie de muestras de lntets en casos OO!'W!ret.c>S: nuMOt acuoso
(cmara anterior del ojo). tunor vftreo (detrs del iris), lgrimas. endolinfa (1\Jbo espiral dej oldo interno) y perlllnfa
(caoiiiEI$ del ecP!ibrio), mooo OOO'ical. liquidO$ l'oliQAcw, oviductal y vaginal. het:;e&, Meteciones nasales, utlas. etc..
Y ori na, no oon!ieno $4t uliliu ptnt' metabolitos on enfermedades
hereditarias relacionadas con el 00 los aminoc:idOf *"plonuria, Qtt<n.ria de amnokidos
ft'mifi(;;Cidos. cistiruicl. cte.). CIClas b&Ses purinie3s (gota) y pirimi(llnieas (aO(ftJta orOt;ea), del gtl.l!XI r,omo
etc.
11.2 DISOCIACIN DE LA MUESTRA TISULAR
En lo& las ol\llas M oncuentriln en tritlmensional, CQn in!Cf11ociom:u; o
<'dhNiono$ (l(ltre como ton la oxltaeelullll' (1)1!11 flicltatado por 1\btas proleleas,
y completaS). El mejor tetldlmiefl&o en c:uant.o a dlsoci9Cin de clulas se alcanza a partir de
tojidot o neonatales. Pueden SOI'I31latse: w s estrategi as:
Frag,mentaeiOn mecini ca: Mediante corte. troceado o triturado de 13 mooS1ra en disolucin
<'O pM, c61ul3$ il'dlvidu31eS o llS\JI&IeS pequei'los que tacllllef\ su OblendtL
quimie.a: La rotura de 13 m&.1tiZ. ettocelull.lt y de l&s uniOnes se suele te4'11i2at pof
i:tOiniC:. O por &Onieac:iOtl (elq)OSicln a lArasonldos.. ondas sonoras o acsticas no percibidas por el
oldo humano por po&eer una frecuenCia superiOr a 20kHZ). generalmente et1 l)(esenc:ta de detetgentes (inlcos. O(W'I'IO
el doecilsulfalo &dioo o SOS. o no iOonicos. ((liTIO Tween.20 y Ttilon X-tOO). La elimirlaeiOf\ de catiOneS divalentes, en
el C;t
2
' (CQt'l qudo1ntes como EDTA).. taMbin deseslabllll.a la adhesin de clulas entte si y ooo la

Dlg.sti6n enzlmt tlea: Las protelnas de ta matriz se digieren CQt'l protNSa$ oorno colagonasa. protalnasa K.
pepsina o trlpstla. Dependiendo del dpo de esta digesti6n Jl'lllll(le requerir largos tiempos de inOLA;:tao::in (por
ejemplo, cllJias en cultivo o ralees de pelo).
11.3 SEPARACIN DE CLULAS
La obtencin de muestras cel u:laru adeOJadas la a.so procedimientoS de
seperaci6n. fTaoclonafTef'IIO y caracterizacin. basados en I;)S de cadtt tipo ceiiAaf exiMente
en la muestra. Su elecc:in en 6$tint<l$ do 1M foues. preanalitiea y analltJC& depende de mUChos laciOfes:
mue5tta de grOOC. de: separadtl oeseBOO, conservacin de la viabilidad, operaciones y lcnicas a ap1icar
post-el'iOtmente, a.c. Aclems <le b& mtod06 m$ comunos. quo so uponen a conlinuaci6n. existen otros
procedlnW!n4os especlficos, pero que no han ablnl<l<lo un uso general {POI ejemplo, en sistemas blfsloos
aCUO$OS, electroforem de llujo ibte, etc.).
11.3.1 Separacin de clulas por mtodos de sedimentacin y centrifugacin
la celular puede hacer&G por sedimentacin 1 gntvedl)d bajo la f\lena de la gravedad
ten"es:tre, pero 10 es acek!rar el Pf008$0 aumenlando muchaS veces esta tuerza mediante la centrlfugac:l6n. Al
rearll.:arse sta en el seno de un medio l iquiOO. 18 separt'ldn no sb depende de la fuerza centrifuga, &no de otro&
taciOffiS que modifican la y que d!penden de las eatactetls.t!cas de la clula (o partkula en generlll) y del
medio. El conjunto define. de s.edimentacln de le clula (pg. 123)
11.3.1.1 Centrifugacin diferenci al
Nonl'I<Jimonlo, el planteamief'lto ms senlto es la por ccntrifugt'cin, comenz.anoo con valotes bajos
de g En la pdldica. slo se pueden $0Pf311' oUM que rwestren grandes diferenaas de
tamallo, al menos de tO veces {por ejempo, plaqtlttt'l$.. muchO ms pequei\as que 189 restantes olias wnguinN:s).
P')f ejemplo. en el caso de sangre oon a 2009 bs eriltocltos sedimentan en la zona inferior. los
IGuoocitOS IIC)8teoen en la Werfase y queda como sobren<tdanle un plasma riCO en plaquEMas lf>RP'J. Se puede preparar
potlfe en plaqueras (PPP'j empleando m3yor (alredecklt de 3.000g).
SEPARACIN DE CLULAS

la. -....'J'I:II'llo.'ICl ' ''C'IJlflfl.lVA ''"\ fk l1 fl\,bl d'lll lat f l. tkf !'tJMI do; Jlf\1 dd twbu. t rad1 -'.:1
w d..ft.'l..- a. rn;co.IQ Ir 1 > ik 11 \ ('i,. J"-ofll U'OU1har;a 1<'9 o\')
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r rllllrlndc wn. Mt6JolC'Mf\" ,_..,_. ..... *"*"', d q.;.S.:nca ... CJIIII
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1
.lflrC..kt M.lllif't'kJa m d IIID'\tiiiiC'Mol\ ck ftMaoo.llt 1,..... IJCIO IQIAf a r t;; to <: r 1
.. ' ,c.,JCidllll..,.t.r ,
' \dooo.-..bd* W.....,...., r-. pcrf!WIOIIO f;C'II.I !a\' t
1 ... fu&orn U"'ltnlll!fl -. -.:k .,.. .,,... *" ....... ,._.,., .. tun-o .,..,.,w.
,... .,,l'ilc rf'bri'a Cf CN) dcnL1111tR1111111RC'f0 de- gn-) st .W..--a
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123
124 PREPARACIH OE MUESTRAS, EXTRACCtN Y ANLISIS DE CIDOS HUClEICOS
11.3.1.2 Centrifugacin en gradiente de densidad
e) Mtodos de baf'1'9ra: cemrlfugacn a 1rovs de un m&dio de dens1dad c<.msta,te
conlegur sepat&Cione.s ms ertcaces (pof e;efll)b, la de tos tewocito6 respecto al re$10 de las
sa oenltlfl98 la muesln'l sotw un lecllo de densidad llllermedta entte la de 10s celulares que se
quieren separar. se emplean pat'8 ello medl05 comercl*s como F1COIIPaque, lympi'Jop(ep y otros mueflos, tctmados
gcnernlmente- por me.:et.,s de FiCOII {un pob!\Saitldo slntciea) y mMrlzamida (un oom;>ue:sto Sinttico )<ndo).
S. dispone de v31ios me<!los con densidades adeciJadas pata la separacin de llpos oeUate$ concre!O!I: poc eJ..
1.0n P.,"W'''' e:IIJIM Hyc:cprep-1.068 p.am mooocdos., PotymorhOp(ep r.ara elultts
polimotfonucleares. o Nycoprep-1.063 para plaquela&..
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tnlc:nncthn a IM de:
lqs C:lll u tk
Le tnueslr:l
b) Centrifugacin zonal o de velocidad de sedimentacin
$0fimai tipo$ celulares euyo coe&lente de sedlmen1adn Olflere poco (p.e , llnloatos y monoo&os} es
proQ$Q 111 uso die Medios forman oo gratliente de lo que ti'Yorece la concentracin de cada tipo
oeuat en Uf'la banda o :zona estrecha por ello. a esla tawca so 1a: denomiM UIOI)t El g1'8dicnt.e <lo
denSidad se genera. antes de all.adlr la muestra (gradionlo prqfonmtdo),. ditoluCIIOfl(!S de dlstlnla
OI)I'ICenrtacaon de un compues10 adecuado (ficoll. sacaro$8;, SYefO lelttl boW\0 .. ). p-epanKiOfl pue(le
de tonna !l'laflU8I (dando lugar a un g;radierne disoonlinuo) o crn()leando t.m ;))&f&IO (()rJMdot de g,..Cfiemes
(gradiente conllnuo}.

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1) deth.tdltd J
Uo pequeno d9 $e deposita soOce ee gradiente y se oenlnfuga a alttt vekx;idt'd dumnl(l un Clt!mpo
corto. se un gradiente cuya den&lditd miKirna os lnforior '- de la$ Ululas. oon 10 que stas
.-lcan:tar el kJI)(b de{ tubo si se c::eftrtfugase duranl9 1iempo se empe:&n dempos menores,
por lo que el e$ del iiempo de centritOQacin: dicho de otro mooo. no 84 el equilibrio de
sedmeMacln. Con esta tcnica se consiguo. por ejemplO, separar todos 10s tipos celulares sangulneos.
ospermllozoi(lt!$ vi.<rbles., sepatiW clulas viableS y no viat.l6n do tejidOS y muestras con oU8s en
etc.
e) Cor>t.rifugacin isopicnica o de eq1.1ilibrio d& s(Kfitnetttacln
se pueden '!leparat celulas en funci6n de Sll den'll1ad empJeando otra variante de
llamaaa origen que significa de Igual Se realiza tamblf)n sobre do
denSidad. pero en este caSQ el liompo de cenlrifgael6n e'!l lo largo como parn Clte w alcnc d
equilibrio d9 &edimerrlaon {-"tr4 la rueall oentrlfuga, el empuJe hidrosttico de la oUa y su difusin),
SEPARACtN DE CEJ.ULAS
125
se u$81'1 gradientes CUbren toOO etlntef\'alo de densidades ele las oilult'l$. en eJ t(ltl(lo oel
tubo la del medio na de ser mayor que la de tas Olulas ms densas. De esta forma. Wldependientemente oet
t;;e;npo de oentrlfugaclbn, las clulas oonC3 sediMef'olaran en el fondo. s-'\0 que po$ieiOn estable
int.en6dia en el gradlenle.
con una variante peculiar 08 0$1l."' lheniea se OCW\Sigue purifur linfocitos 00 $U can monocltos,
aprovechando la capacidad de lllmos para fagocitar micro8$f<:r.'ls de oro eoiOiclar 00tt 10 que su den&tdad se haoo
artificiatmenrc muy $U!)etior y sedi11"'1eNan milos abajo dellubo.
CcrnrifugaciOO




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....
...




&!l!.!i ...... , vc-:IA-.11<'
1'-:in prino;ip-'mnto:
"'' u ... llil. dd
( UO.:Iin:l!ll: de joo:oliMI:o!IMO.'otl.o,
dtp.:n<Jc. <k la m- {llomailo
& .. ,,,ICI.ul 1 dt b l'or!N.. (n1.:didu \'&
''ocll>rfv.t. 1uIJ
Apli!Ctlto: K fl.-.c ..... -':
fl oo....Unlknll) lolllxtluhf

ck miKtum<."'"';;IIf'C;!o,

C.:nrrifugae-in J:IOO:tl <J de
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Ar!I{'..CI{oll Wl'\'t..:..""' .,,,)1,;.._.,.,.
ck I'U"f..;-.0011\k
.kulo.
11.3.1.3 El utriacln centrifuga
La erutri aein coMiste en la separacin de (o pa.rtieui3S en gMetal) de acuerdo eon su velocidad de
S!XIimentaciOn. El proceso orignal . coo&istente en la realizacin de ddos sucesiV06 de secfmentacibn y decantaei6n.
tue tadl1tado por la incorporaCIn al aslem<J de U'! nuo cJel propio mettlo de wspensin. en senlido contrario a la
sedimentacin (c.onlro 1& grtwYed&O). ESte lue tlnatnente combinado oon el efecto de la fuetU cenlrifugl."'. dMCIO IU!)l)l' a
la modalidad de de mt"tyor uso actual. la elutrtae&ft eenttlfuga. las olvtas se vttn 5ometid" dos
fuerzas ql08SiaS: PO 1a tuerza oetttrlfuga y. por otra, la tuerza de arrastre ClOf el !lujo OOfltinuo del me<fiO en
soniJdo conlt'ariO.
>< ni! o.1h( l

{ 'nda 111111 propiNIII!It:t ck' "f'drncwlaoim 1;.,.
d 'lulb r.l)t(b. pcqudlll' tiMan mil"
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... . ..
+:-,
. ..

. .
'": ... :
. . . . . .
...
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. .
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El resultado es un mtodo versAd!. rpido. eficaz y rel&livamenle suave para sepafllr subpoblacioner. oellfares
segUn su tamao a paftir de una mexcla en suspensin Admile nUmoroo 9fi'lndO$ de eh,.1l<tt; e. in<;lu$0. pennilo Qblonor
126
PREPARACIN DE MUESTRAS. EXTRACCtH Y ANLISIS DE CIDOS NUCLEICOS
una mayor ptOJIOfCI6n de clula!! vlaCies a la mUMtra origfl.al (al separarse las clulas d8118das, <fe 4ism1a
densidad). Se aplico para oblonor gran diversidad de subpoblaclones efVtquedcfas, a do PQblacione$ celulares
hepticas, clulas en en la fa&es M, G,, S clulas sarqu:ineas y otros lipos celulares.
11.3.2 Caracterizacin y separacin de clulas por citofluorimetra da fl ujo
Es hOy dla un mtodo de import.ai'Q en biomdica y en el labon.t!Orio d inico,
espec:il*nenta por su capacidad para ed au!omlico de suspensiones oelulares. El WIS!tl.lmet\tO emple80Q N
basa en el tran&p01'1e de una suspensin celular (<:61ult'l$ t(lnguifl(las. aspirado medular. 4ejl00s disociados, ele.).
impul&<l<la por oo ,._., de disolucin ISOtnica, al pun10 de o tilmarn de rqc,, En su aplicacin habitual, la
<:itQmotria de flujo analiza y separa clulas prfMamettle t'l'\8teac:las eon un fluorocromo,
molculas la propiedad dt ser !luclr'eJttnltll, t!l decir, cupncilbd de absorber
CflttgI de Ul'l! radiadll dcronag..tl:a (ha o que las hace pasar a un cslado.l
dccttiliCO desde d Juego aJ MaiJo fundamcnUJ. )iba'andO CtU:tgI tanw.n l.'fl
forma lur. Como lu cnergia de In radiacia dcctromagnC1ica emitida 1.. 'll si...,nn inf1..nor a b
In lolljilud dC' onda & la luz entitida es suxri(lc' al& 111 de lalut- :lbwrbida:
El .:uploo de y ma.n:,dof'a5 dC' unn grn 1.11ilidad.
la d..: l.ktec:IUI dislinla molCc::ulas )' c,Ciulas muy pequdla c.antidtd )' sin lo.ls
riQ);U$ IISQCilldo, ll) m.1n:IIJC oon il>IOJX>ll radinclivos. En QOOCre40, en a;ologia Molular 9C utiJiza)
priO(ipo.lmemc dos lipos d\ agcn1cs in.1crcalantcs que se uIC':Il al cido mclctt:o y
s.il'\'tll asl pun detcct:uitl en gek!l de cltrul1lfl."::d o gr.ubcnt...'lllk dc1U1.J:kl (ules como bromuro de
ctltli(l, de ll!Cndm:t y col(lf'.a.ntes llocdtst), y Roonxmmos unidoiS de fum\11 cxwulcntc a SoOCidas
do.: hibridacin y a Ndom;; de PCR (rluoresccina. rojo Tc.xas. rodaminas. etc.).
L:1 dd1..'C'Cin liC Jne(linnte:
C!lpecltOiluorimeltO y lcctm' de miCTOpiX.:lS: mic!...'fl 1:! de b mult';Slrn
de fluore,ounda: gotk'll de (1 c:rtlfn.'dogr:.fQ.; en pi:Ja
de RuortSCcncil: pcnnitc obsoer'''ar secciones de lcjido o cflullls indhiduak:s. dc-
fonM scm icuanti1ativa
de ll' IJO: rtmt.ite medir dlu!Jr:" individuales, de liJrrrnl C\llllllitltiva
El PfQCodimionto de citome'lritl t1o nujo de dos otopas caracl.eritacin y separacin. De hedlo. alguno&
inslrumentos slo 18 mientras que oltOS (dn:sirlcaole$) $IOf\ OOem:& 00 llcvilr a
cabO la $0gul'ld3.
a) Caracterizacin de t9 I)Ob69Cin celular:- analizador, cltmtto d fluJo o cltonuorh tto
El conSigue Que la suspensin celular Uegue en (:(W'Idlc:iones de ftuiO IIWI'IIn&r. formtlf'ldO un ChOtr'O muy fino
que. wmo oonseeueneia de la dluoiM. las M suceSin. IX'ISM as! de una en uM a
travs de un haz k.w'nlnoso lS, cuya IOngilud de onda permite la exd!adn de los martadOfE!S fluorescentes
hxlrporados prevlamet"Me a la clula. En la luz emergente de cada clula se analiza la disper&ln y la kltensldad de la
fluorescencia (emisin).
Oisper&in frontal de lu
(reftaccitll o ;se
Dispersin pefpGfldiQlar
de la luz (reflcxjn} o SSC
lntMSiclaCI de ftUorescenc::ia
(a ooa o varia$ /.,)
Arquitocttn (gmdo de cstrvcturoci()n subcelular,
<:Ontonido dO orp!nuiOs, pularidad, ... )
Cantidad de nuorocromoos marcadores prevtamenta hcorporados
a ta oUa. ComOnmente se usM anticuerpos, marcadOS oon
fluorOCtOITI06. <:Ontre antlgenoe da la superficie celular o bien
colorardes o sondas que &e lijan al ONA
SEPARACIN DE CfLUI..AS
.,,_,_,I.
,......w-.

11n &.lf'"(_. ..
-
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.......
"'-!

Alt.o n ..... c..cm! \....._
hll-""
b} de Clulas Claslilcador de cehJias actwado por fluore&c.enelit (FACS)
127
D
-
La c:omense de flquldo, tras p,ascw por el do de1oc.cin, $0 t!1m$f()fl1'1(l on \.mn $UCe$16n de muy
pequenaa oomo oonoec;ooPCitl de vibr<JQ6n IXl' \MrMOni<io$ <'1 1;'1 d., ""o). 13$
cuales conDenen como rOOximo ... la AJ m.smo en 1\Jnoon de los resultad()g 6el anll!ils anteflor de la
clula, el $sibdor aplica a (';;!Id:. gola un de vollaje (erllfe .t150 v que le
yn."' efi!Cir1C."
Elu$Utlo(() dellne el ptAso que se ha de aplicar a cada QOI8 (y, por &anto, el Signo y cuanua de la carga
que adquirira), en tunciOn de criterios &Obre 106 parmetros del antos,IS en el Citmetro. El sistema infOI"l'nitioo que
controla analiZador y daslficador permite ta$ decisin en el breve lnteNalo transa.mdo emre el paso de cada clUla por
8 detector y la ormaCIOn de la gota que &a O)(ltl!!fle. Al mismo bempo, todos los datos de cada clula se almaoen.an
pata su estUdiO IXI$Wfior.
A !)01:.'1$ pasan porWl campo elCtrico. donde se desl/lan de acuefdo oon su carga para
caer en <hSiintoS tubos dP. recolecclbn de ITJ.lesua; de esta maneta se conSigue la separac1on da .subpo0lac10oes
oelulareli di> acuerdo con O'ltetiOs definidos (combonacin de 1amano, esttucbJrac:KIA y tluoresoencla)
Como meros e,emplos de las lll'lf\Umetabl1$ aplicaciot!es de esta tcnica !Se pueden Wr: a J El estudio de la
superficie celular oon antiCOOt'J)Of> monoclonales. siendo posible una c"'a con un an(lgeno especifico do
superficie. de elllre 1.000 que r.o b tengan y cl<t$ifi<;.;,\1 mile& do J)Of $()9'JtldO b) li11 wlomdn del tonteniOO en
DNA. y RNA de 1.1no (p ej .. en (l$11)1';1iQS del cieto celular). e) Ltt de!fl(l"I*'I3Ctbn de su fMna: y lilrmai\0, po1 ej(m'lplo,

11 .3.3 Soparacionos diroctas de tipos celulares
$1!ln0""' caso oortltl.llar. es de uso 1\ab(uat y oo puede df!18t de menoonas. ta de ai$fo)t f.llltt10S
tipo& g"<'QN _. &u WJndencaa a oonerirw floiQflomento a te $1)pernQi8 de un &OPOft& de vldno o plsdco
(adhe$in cel.ul<lr ). propia plaCt Oc cultivo
Con \a llegada de los antlcuetpos monoctonales este se pudO ampliar a cualquier tipo de
celula. La posibilidad oe disponer de esl<lS anueuerpos M cootr'buido OO'Iablemenle a la .separaciOl de clulas. en el
tabotstono ctlnlco y de nvesbgaan. Su exquisita selectl'ndad en la un.n e eptopos M(lgnicos de la wperf.cle tia
pe(milido m1odos diven;os para atslar y caracteriz.at de fOOTia directa 106 tiPOS oetulares. swesenter. oo una
mezcla heterognea. ES1os pueden aplicarse, por ejemplo, para definir la& olutas a trasplantar en caso <le
enfermedades graw& {celulas preOJrSOtas de mcU.a sei'l clula& T madurar. inmunocompetentes), para
128 PREPARACIN DE MUESTRAS, EXTRACCJN Y ANLl$.1$ DE CIDOS NUCLEtCOS
detecmlnar el fenotipo de tejidos pwa trasplantes, lOS IIPQ$ rt$p()n$t'lbkl5 do procesos en la
respue61a wnurte. oetutafes, eie..
8 uso ele ant!c:tJetpOS ha dado lugar a una gran dt>.-ersldad oe mtodo$ inmunO<Inilllilit;O$ y do separacin. QUe
&oe pueden considerar parte de lOs mtodos de afinklad. Por ejemplO, las clUlas de un b:J() puOden ul'lirs.. 3 trtrV5 de
aua anligef'IOS, a moooclonales prevametue fijados en supetfleies d! plSlio:> {tubos. plae\\s <.Se
varillt'ls. micloe$fcms . ) o malnees de; cdgeno, polisacando. ecc., io que pennte w de ese dpo eeluiBr,
CM'IO Slngul:u, de (lntr ,, multitud dfJ <sanolladsr:s, se comentan e continuaCin 108
basados en el uso de mlcroesfems magntiCas
11.3.3.1 Separaciones por afinidad con particulas magnticas
1. Marcaje:
ftuo.1ih)'
.... .-
fo.YIIll llP'lliC111.t ,,
.,._ ... t, lf-t
J!!hCIIt;I'J"' '"l'(('lfll,)<'l

, OIIIWntnmlc
lol()ooc\o. loMiall
..._.liN) rJ,:ulu, pliH lbk> ttq&Ut1t
IOIIII""nliml" uq le .,!lula 'J""' ........ VJII'I" ""
101. ... m.l.'loiliOO ("f':irw.,,
2. SelecciOn:

-

Vmtld mort t\-o. ,.,., .-nmunn (*:a kloJ,. ' '"' ..,.,.!ti'
lntolflW'III- !la:eWflio v.pu cu1-
uni.da;a
____ . __
tnspmlluwl.,
!l:ho,-.,.. d """' " ,,\..,. <k a.-ih l
1"1' .... ..,..,jllo4
.. , .... ......
-
b
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" " ...... .,, ;,,., d tu,
CARACTERIZACIN CELULAR Y MEOIOAS DE VIABILIDAD
129
Esto$ proetdiiTIIIef'lto$, oe gran sencile-z y por ello en tlet1.1811men!e uso de microesferas
disponilles oomercialmento en variOS tamanos (entre 0.5 y 10 pm. es decw. rt'190015 que las o6ful3$) y con <li$lint3$
<.le tl)litaCiM. Esliln formadas por un ma1erial (WcidO drtt l'lieno) reeubiel1o oe una
capa fina de 1m t><)limero pl&stlco que permite la edsoran o la 1.1ni6n oovalente de <'if!int.M molculas. Frec:uentetnente
se les une un anllooeq>o, P<-'3 IOMlar &'lll'cuetpOS magnrkos o tTNCrotl$(&r.rs inm(.II'IOmt1QI'Itlt.iC<;I$. o bien avldina o
esllept8Vldina, protelnas ilrnbaS oon gran por la blobf'la (mlcroes/6J<l$ magnlic,,s do <linld<td)
Ms <'li;lel31\le se aplicacaones Similares de estas microe:S'eras M$9netieas pata la dlreCla de

11 .4 CARACTERIZACIN CELULAR Y MEDIDAS DE VIABILIDAD
Es ..,PQttM!e en esta fase preanalibca a ta < lt$ dl1.11as po1 alguno Cle los
procodimiento$ diS()Otlibles en la blologla moderna: ptica, come> putttO Cle ms obvio;
microscopia de cootraste de fase, en paralelo al anterior. para QOSetvar con ms detalle ia supe-rlloe cetular.
microscopia electrnica de batrtdo (SEM. de scanninu nM:;tosoopy). pata <leflnir ia superfiCie celular y la
naturaleza de las lnteracoones ellA<K:61ul3. o microscopia eleettnlca de transmisin (TEM, de tmnsmis.$101?
elewon rmcroscopy). P<lrtl otnervtu 0011es celulares y orgnu1o& o nc:k.a5iOI'I$$ Tambi6n sc:t C(raeterizan
las clulas par c:itomctria de fl ujo o el uso de mJcro&$fetas mag.Wdc:011s. lc;niCM Y<' oomenl:.di"'S.
E$ igualmente impot1ante confirmar el estado de lit$ ceii.IIIHes duraflte ui'IS u otta e1apa de la fase
preMatitiC.a. El COI'IOf!P40 oe vtabllldad ai...OO a la c:apac:iOOd do vna GthAa para realZar sus procesos fisiolgicos y
biOQulmiCOs. especialmente en lo que respecta a su mol8boli$m0 y su capacidad de dhl'lslon. Sin embargo, en la
prctlca et tarmino es relativo. pue:s 5e vtiil<'l COf'l diversos crilerios. por ejemplo, e CClf'OOn que se l'lable de "labilidad
$implcm(ln\C <J 1<1 oe l8 061uta, o Dlen a su acuvleao melablic:a o. tlnt*nenle. a Sl.l taPi:JCidi1d de
diwsin (prolifGraCI6n) Ptr<'IIOCIOS elos eJUSten runerosos ensayos de vlabilk:lad: los ms empleados 50fl
11.4.1 Ensayos de exclusin
Corresponde al recuettto de eJL.Us Que no incorporan un oolor..mo.
El n:s
cooocido es el azul do:
trip:ml'l, Ul\ colorante
!oOiubk en
grupos ammo
>' wlfal ) le impidcrl
atravesar las
nw:ml>r:tttti.'O celulares
IIII.U(;I.ll$; 131ll ), tie
slo las cdulas mUI.'fWS
o dal\3dls .
c.:lll l.ll$ 'hu.s no se
titn. pero
tt'S3hnrsc que el ensayo
s(ll(l ul(lra l.a
intclt{rid:d de su
.n .. '1nbr:tn:l, 1)1) ls
' 'o:rd;,do:r.a 'iab1hdad

cCiula 1nt:teta
clula no tci\ida
cl31uls dMn.da

,..... Slplicnble 11

lndi,iduaks

130 PREPARACIN DE MUESTRAS, EXTRACCIN Y ANLISIS OE CIDOS NUCLEK:OS
11.4.2 Recuento de clulas viables por i ncorporacin de un marcador
ONA.
MtoOo a!tema\A<o, bM&OO en fa entrada COITII)YC$10 a Ir.!* de la membrana de clulas ln18ctas.
colonont< (ej.: , . ncuuo)
aplic11bk a t:lul:u:
indh:ldualol

(mu:ro!IOOpa.) y a
-
l)(lblk:()r)N ;:c"lan"ll
-
plac11
8
muttiponiLo)
cluls

clulilleida
t



\._ )
\._)
-
\._)
clula dnada
clulll oo lttlid3
\"

En algunos casos. el eolorantil un nuorocrorro) se une a tos ileiOOS nuCieiCOS., en ol
c-lula dsi\ada
Eilliflnulja d.: aeridina entr.l librttncnte en t()<):ls
El yoduro de propid10 c.'$ excluido de las clulas intactas.
erutando slo en las dal\:t<b$. Ambos se unen al ONA.

r: '
' )
-
-
.!
.g.2

oon
cluiii"OOo
11uoresc:cnci;, roja

115 m11)
corno las
' "
'"'' "
(ll'l'Seflli:lll

lnii.'RS.1 en
n(Jcko
la intensa nuorl':S(:ecnci.a roja del )'(tdli.n,, de pc-opidio
umdo al ONA t.'1lltl.1SCilltl la nrde del narnnja de acridina
;\mbo!r; Ylll Sil \'l>lfi.IIM:UOI
nromoitk11 plallll In! entre ICB bllse!!
opi13(b; dd ON.A. PQSo..""Cn propiabdQ; al ,;u
1u:t UV C"mit(fl k11.
El __,Ja dC' C"n-tite uoa dC'
di.scimo color qn IC uUdo 11 k idos
llll(lcio(l5dC" bebrll dob1C" o sencilla:
'v:rdc C4)n I)NA de dobk
ifUC';fl'DCdioos(dC" amarillo n Ullojn) coo
ONA pon:iai A)tiliC' deS1'18turt.1ilado
ro>jll coo ONA di: bttlra (desoawrnliudo
compkta!na'lll.'} o tUl RNA
CARACTERIZACIN CELULAR Y MEDIDAS DE VIABILIDAD
131
11.4. 3 Ensayos por medida de la funcin metablica
Aetivld.adn enzlmtk.a-s la llf9Mntio en los ch.ll{lls <)e actividades ei\Zimtieas gen&rlces.. 1&6es como
es.1erasas. y petmite ptartte:u oe vlablidad basados Eln la generacin de produelos oon
grupos vomlorO$ o lluotloros. procedentes de la ruptura enzimiltic<l de &uttr;alos $in1beos l.Jtt.a anemaliva.
per8 llf)O$ celulares concrecos. es la de ooa aclivitlad tfltim;tliea en cuyo caso es
especialmente eW!ar que las oondcionn e:q)(lf'imcrltttles afeeter"' 1t diCha ertZirna.
cCi ul-n dai\udtl
r..nT
El di aoc.1ato de carboxiOooresocina. poco i()niladO. <ttm,test. l :.
membrana por difusin: las ci10plsmica.s lo hidmlizan
<t cortx>xiOuOc'CSeI.a que, :'11 tener mayor csrga dCccrica. ya no
puede 31f3\' CS3f la membrana y qu'--da aliUp0da dentro de l.,
cCiula,
/"": '
'- )
-
-

cl ula coo
i '8 \ct'd
.. /"":'
- J
cCtui'ii'Con
fluort.'SCCf\CIIl roj01
lart>lt) la:-

C<lfll<:l
H)UCfl..t!o
fii'O:'<fll:l/)


1 El yoduro d..: pn:tpidi() SC emplea C()Jn() Cl)ntr.tl>IC,
(2i r'l<: la.s cl ul as dal\ndas. A<>i 1odas tienen IIUOI'('S'nda.
11 olii(C(.lll.' (k
.., \
..
: \
' 111).( ..

"
(una sal <k lt.'Crazoho).
<k colo'

!)U(;Cin:IIO
dtshldroeyna$n
mitocondrial y
otras 1\:dut.lls.\S
cclul:trcs
un form:vMo.
de color azul -

'"""
( ti

(ltt
?"
NAJ)II
132
PREPARACION DE MUESTRAS, EXTRACCIN Y ANLISIS DE CIDOS NUCLEICOS
Sintesls proteica: Wloorpotadn de radlactMdad a las aormadas dUrant ot evllivo de oll,jas en
pre&eneia de aminocidos marcados (generMnente. oon
3
H o ).
Si ntesis de ONA: ineotpOracln de ooclesldos marcados. Reftea la IA&OIIldao en lerminos <M cal>lCidad de
ereeilrieniO o, m6s O$lrict;)monle, profrforadn celular.
S1lile al'lalk'
Jc:'lobxtutudwa
m3tC*Iu OOfl 't 1
(limkrma trilitrda)
al m<io dc
cuhnn,

dunmtc 111

S< tkh."'.':t::l:i
d<:
lai ttlulas.lkbtd:l
a su ONA
Jl ... ,,
'l:rJ
o '
'"N

2' dcwllilimidinn

.S-broo\1).2' -lksQxjuridina
(bromodcsoxi...;dina. BrdU)
que lia trminn a S-rndilumcilo)
11.5 LISIS DE LAS CLULAS
BrdU anil\11;(>
('$lfUCiutlll de dl' . pu..-:; d
ilomo de Or 1.cne m
simila:r allk-1 grupc.
melilo. Por ello K
i...-otp0111 al 0NA nut:\'0
dura.-e 111 replicacin. en
lu;at de Jf. Se dttta
medi:nle amic-..c:I'Jl(l;
C$1)C'CI.Iicos.. g<"ncralrncnlt
CXJfl un
11\JOrol.'romo, mtodos
dt intnutlll l.li)ttiCOCa o
de citomeuU de
Esta svpone el de enlace entre la preparacin do la muestra cekjw y la de m\le&tras dt genoma o
i c:id o nucleico; oomionla. pOr tontQ, la faso ant!lli1i(;a. Qut (11 frt!leonami!Jnto la extJacci6n
dlrecaa o el fraoclonamlento de !leidos nueielioos y la fragmentacin del ONA.
En general, la isis oeiUlaf se realiza con un me<fiO hlpotnloo; en algunos casos esta etapa es sln'IIAinea con ..
preparacin de la muestra (p.ef .. homogeneizacin). La lisis se puEide aplicar tanto a clulas en suspensAn oorno a las
'ladas por achlosin a placa& da oAivo. En la preparacin de cillula& sangulneas e& fteouente &a aplicacin de react)w)s
de lisis diferencial (&Oto de detemWISdos tipos OGUares). Asl, pera el recuento y estudio de Mucocitos se lsan los
erib'ocilos con un medio cido (por ejemllb. lbliOO de una disolucin de doruro amnico.
PREPARACIN DE FRACCIONES _________________ .:_ 13::;3
0
11.6 PREPARACIN DE FRACCIONES SUBCELULARES
El prooeocfir'niento general, empleado clsicamente, parte el que te$ulla de 1& <I1$0Ciao6tl mee&niCa
de un tf!llldO por homogeneizacin en un merfu 15otnioo y postorlOr liSi$ celular Mediante tef'ltrrlugac;n dlfetenclat se
SU08$1VCinl$nto n.,Jc;loQ$, y Olras estructuras celtAateS.
Disoci.aci6n
del tejido
01'1

0.25 t-h o
ron ullnlwotJ\10'.>

cl rq ido>.
kJ,_
\ l tuonl:l>,
c<lu.b-1
Fraocionamiento
subcelular por
centrifugacin
diferencial
--
...... f'C'I"""'
,_,.....,

nutllo:undnal <k o;n JJI

l)l>o A. 1 fl de (C CP'fiiU
odenulicu md.-odu.;u. oktnmllllll ,nn mal .
tk 111 n t:....:Wn
mRNt\ cllvp4S.m{IIJ<: 11Uiv ,1
1- J ;Id JC!oO.'trO:'IiJI(\Ild!C!l\to: 11 11011
do.'to:nn.,nadll proto:-. S< oJct.c- de OJCIV)
lfli "' dc R"\.
11fin idad f101 b cob P"hiMfp.<-.J .. d
JNf1lf'lrcnqut !'t CO.llld1a alkbtnt).
11.7 TRATAMIENTOS ADICIONALES O COMPLEMENTARIOS
Es esenaal combinar tas operaciOnes preoeoentes y postertO<$ oon sane de tratamienl06 adicionales o
Ellisado M pvecS!t troU.mion\o$ Qvo &u dOSlTUocin o 'l:liminen molcula&
ttOn prown1es. etc:; Pt\rt' montener de tas muestr<'S, espeoalmente de blguno$ (POr ojcmplo,
p6ncreM y se 1\& ese evitar ta aoeil'l ae .-.eleasas. el'ldOget'las (ONasas y RNtt$M), oe ahi la OOII'Yel'lienci:l de
u$ar nvestta$ frescas. mantenidas congeladas o afiadlr lnhOC!Otes de Para su st*blttacin se acuOe a 13
rotura celular pot homogenelz.aciOn o resuspenSIOn en pteser.cla oe detetgentes, ya menoonados.. y/o al empleo oe
disoluoones de Ma luena 61'1iea. Estos ltatatniei'IIOS son .. tes pata e.dtaet el RNA. lo <ue
18mbin requiere de fonna especifica ta presencia de agen:es disoaan:es (como ellloclanato de gu.anldlna, lnhlbldor oe
RN.-.sas) o rcduC1oes 2mercaploetoool}.
Para la pteparecln de RNA todas las diSOluCiones empJeaoes oeoen ttatarse ptevia<ente oon dielllpirocarbon:.to
(OEPC). que lnacdva oovalentemenie las RNasas; igualmente, se ndll)'en durante la proparaclon de ca muestra y
Pl.lnfic-.aein del RNA (:llrQ$ inhi)ldore$ <Se RN<l$<1$. Debe ponerse 0$1)0C!al atei'ICion a la ehmnaciOn de cuakpef
resto de ONA. gener<*n0n1e <N'Iadiendo una ONasa.
IMIO en la Ob!enein oe RNA oomo de DNA, Cl m.t'lterial de vidrio y dobe 9$1ar ;;mpleu.mente
lb-e de aciaos y nueteasas. y debe evic:lenten'lef'lte e<vittwse la conu.minaci6n par el at\lllisltl ol uw
de guantes y precauaones como el maneto separado de l&S muesttas de dsllnto Otigef'l
134 PREPARACIN DE MUESTRAS, EXTRACCt,. Y ANUSIS DE CIDOS NUCLEICOS
11.8 EXTRACCIN DE CIDOS NUCLEICOS POR SOLUBILIDAD EN FASES
INMISCIBLES
En dttda &u complejidad lOs cidos nuctetcos son dlftCIIe$ de &epatar de sos
oomPOnonlcs de membrana. proteina tNidual o afladida ( l81es oomo la& enzi'nas de restrlcclOn) y ollas molcUlas
(por ejemQio. 1.0$ drstioos alteran sus estrucwras y sus caraaerlsticas. De ahl que
sean muCh06 lOs mtodos suaves ecacoracl06 para eliminar la imp.reza de tas preparaciones. !Odot ciiQs tNI$<1100$ on
la& propedades fisiccK!ulmicas deil cido nuelelco. Para la ellminac:::lc:ltl de prose!nas asoeilldM se uliliu.n cntift'IM
proteolf1icas, como la prole*\asa K
11 .8.1 Extraccin del ONA
El protoooiO !>Mico oonsi&t& en el lra'tamiento del homoQenOOo oon <isol\lentas orgnicos (fenal, Clofo6ormo o
ambos),
Proeodimi&ntos alternativos
l:lllll'3lnl (atuoeo;J)

1.\k/ffm-mo>

aiOOilot iS.IOmilp;Q
t!l('".l.da por agc.a.;Kin
'

meb po1
tl' nlnfupeiOn
IIIS
dr:ooniOIUtllll/.lldM
'""'
d.....,rl)l'tl'a(l r,.,
SolaN)
M la
(2)
Plrilcad6n por
precipitacin
atiNe
ti .. lbo:>l
el
DNA.quCHI

funna <k
.::ue se crnoll1m
\'n la >'liriO.

11.8.2 Extraccin del RNA

(SIIj')\'fklr. lftl.'tl(IS


DNA y tu.A
a. la f.ue
o>r@llruca (inft'J'I(If.
nW &o,;:,.
\os llpldof
dt mcmlnmo



"""'
doror<ormo.

inb.'IIIe
1 \'01, de dllnol o de lS(Iprop:u)C)I
(con as,itacin sua\'C)
en la IIClUMII

....... ,_..

D}I.A y R..'A

(orllAnic. ( mlb'1or.
miu dtn)ll)
quc411n IJpido.'Of
dt< mcmhana
m'""'""'""

C'll illllltlubl('
La eXIracci6n del RNA \ambin se realiza a partir del hQmogcnaoo, en prn enci& do iOoeianaiQ de guanldlniO. por
adicin de fenol . clorofOITOO y acetato sdico de pHaS, seguiOo de agitacin vigoto&a y eenlritugacln: el#tNA aparece
en la rase acuO&a superiOr. A partir de ella &e otJCiene RNA POt proe"Piacan oon etanol. Existon 01ras 16cnicas mM
simpleS que O() dicha e.xlf80cin. como 4 empleo de solucionot. 00 y cloruro de litio. <JJO h.'lmC>i6n
int'ctivan RNasas y solublizan el RNA.
guanidil\8;
e
N=C-S
liOd31l310
d..: ttuanidinio:
PURIFtCACIN DE CIDOS NUCUICOS POR PRECIPITACIN SAUNA DIFERENCIAL
135
11.9 PURIFICACIN DE CIDOS NUCLEICOS POR PRECIPITACIN SALINA
DIFERENCIAL
Se 1ril!<t de al!erl'l81iv0 al al'lteriOr, baSaOO en las diferencias de SOlUbilidad de ONA y RNA en
funCIn do la c::cncen!r3Ci0t\ (le $MeS: TaniO ONA como RHA !101'1 solubles en disolucin saliBa conoentrada. mientras
que a baja roncentr..ci6n de $<'tle$ $010 0$ $(llOie ti RNA,
111111t$llll ck
.,,..,
ouelticru


n lil)ll
oonctmn.da
"'""'OSA
"- R:>.A-
..
_.,
-
.,., ...
,.,. .. ...
.. u--.
,...--,
l!l tvjar 11
1'\ttrli).-....
ct I:IN>\ ""
.....

..,,-...,.,,
-..lubili,.,.
...
IIU.:k-i..Ol
t""'-' 1
...
Pata es18 preopcacin &aitinit &e SUG!c PCtO puede 1nmbin e,..,.enrse aee1ato Sdio::> sarurado. en
oombinacin ron ilfooholc$ org.Anics, OOtlducieldo a resu!lados ind.Jso MejOres que COtl fenol y Clorofotmo. sobre lodo
para cantidades pe.cueilas de ONA.
11.10 RECOGIDA Y CONSERVACIN DE LAS MUESTRAS
Uno '19l 5Cp;)r000S y eJtll81d09.. k:$ &ciClos nuctetcos deben ser conaetY8009 adecuacamenle. El preopitado seco
de tu;idO$ nvc:leico$ o el "&vilO de fibras de ONA obtenido oon la varilla pueden disolverse en disolUCin amortiguadora
en e1 caso oet ONA} y conservarse a 4 OC. o diSOlverse en agua y mantenerse oongelad06 para posteriores
El ONA geoOmlco en diSOlucin no se debe congelet, para ev!lar la rol\Jra de las molctJas
pot 1as IUetZas de cizalla provocadas al solidificarse el l'llet) y al descongelarse. Por el oontrano. el RNA si puede
conservarse OOflgelado a -70 OC en di&Oiucin acuosa, cuidando de atladir un ii\ID:Ior de Rl'fa<sa&
11. 11 PROCEDIMIENTOS ALTERNATIVOS: EXTRACCIN O ANLISIS DIRECTOS
DEL ONA
A voQ8':S. no M pO$lble vmiur 1os procedimiet'lk>s deserllos. Ol()) el bajO ONA oe atguno$ I'I'IVe$1111$.
pem, $il'l emW.tgo, pt.l&de el ONA de la mueslta Sin l'leCeSiCiaCI de mMipui$CiOn alguna, salvo lt'l liSis de las
Clulas. Este es el caso de la amplificacin y detecCtiOn del ONA mediante la lcnlca de PCR (vet tema Por
ocro lado, cada vez es ms frecuef'(e y etlcaz: la exrraocln dilecta del ONA con mtoctos mas espec1rw:lOS. lclles.
rpid06 de realizar y fl8bles. No se requiere la manipAa.cin previa de la muestra. oon lo que el ONA y RNA se pueden
exlraer de fonna directa a panir de mt.teSITas l'letetognea& y de volumen Exh;ten varios procedimlel'l!os.
Para muestra& forenses se na descrito. con resoltaclo6 prometedores. el empleo de un intercamblador inico
{Chelex) y una suspens<n de de slliott como m;Jteri;lle& de dsorcln adecuados para la extraoc16n <111ecta
de ONA, en especial mitooondnal Tambin se utiende el IJ&O para pruebas de idel'llidad de la& t81jefas FT A. papel
e:spec;ia!I'I"'IJe; tratado que PQfmite uno (gota d8 $ilogJG). i&ar sus clulas y diJenr sus JlfO(elna&.
quedando., ONA int.,eto fijado en et p&()el y asi se conservar indellnidamCf'IW: '" 111UHir3
Tambin se cada vez m&s mioesferas magl'ltieas. analogas a las de separacin eetu!81, SOI:lfe cuyo
superficie se adsorben dlreCiamente lOs cidos nuclelcoe o se unen de forma oova1en1e otras mol&culas oon allrtldad pc)r
f!Bos, So consiguen :tsi m6kX!os de f!.Klfbedn que se pueden ttplic<w a untt ampi.;t de mve&tras
(1ejldos at*n&'e!l o vegetaleS, clulas culbVaas. suspensiones ooUIWes, etc.).
136 PREPARACtN DE MUESTRAS, EXTRACCIN Y ANUSIS DE CIDOS HUCLEJCOS
;; ICJ!IPI'' 11
EMr:.tc.:-in
du-.:.c;Lu
dcONA
:qfll la lk b
umn llll; mkn:o.:J",..,.
11.12 FRACCIONAMIENTO DE CIDOS NUCLEICOS
11.12.1 Ultracentrlfugacin

dcmRI\A
cuca61ioo
E.s1e mtodo se basa en ef aumento do Ji voloc:id;td de COt campos centrifugos lo
s.uflcaentemenl& anos (5UI*l0' a 100 ()()()g) supetar las ruenas de ditusiOn. Se emplea en espeaal para el
ONA, tAAtc> con fine$ (gran CMidad de material) como analftloos (peque!\& canddad de material)
11.12.1.1 Centrifugacin zonal
Oe forma sm1l<1r il b c5tuclado para la .separaein de tipos celulares se p(lede emr:le8r e6&8 de
contrirug.&O!On sobre grad.antes de densideo 9<lfS separar molcula$ de cido nuclciw, en fi.IN:in do su velOcidad de
sedlmentaao (definida por w coeficiente de sedimonlilc:iOn. en uni<*Se$ SVOdbetg. s._ Se que las mc::tculas
de atldo nuc:tetoo sedmenlen e velocidad coo lo que M .-ut'n en Wttdit$.. eu)'tl PO$idtl depeMe dell.amaf'IO
y forma de le molo.lta slil' M fO<l09et separadas en !r&eelones {pot ejemplo, por ponocif'l del fondo del tubo)
y cucm11brs midienOO su absorcl6n a 260 nm.
FRACCfONAMJENTO DE CIDOS NUCLEJCOS 137
11.12.1.2 Centrifugacin isopicnica
El mfOdo isopeenioo o equillf\o de sediol'l'lenlaCJOO es qull& el mas ulitl:ado 1)81'8 la sepernOIOn de disbntoS
aodo nueleleo, en espee181 ONA. Rec:uef'dese que en este caso. las m9Cf()(l'olG\.Gas se .separa!\ en funcJM de
su densidad gE!'(IE!ftllmente usando un gradiente qua se va formando dutanoe la ultracenlnfugaci6n a la 'VQl que se
sepsrnn lOs eomponentes de la muestra (gradiente autol'otm.OOO). El mediO habitual para preparar el grad1en1e es una
di!IOfucibn de doruro de ceSIO que. gracicts a su alta &OIUbilidad y baja vi$0051dad. permit formar gradientes de un
amptio margen de densidad. la mt.Mt51ra w men:la con d1cl-a d"t$Oiuc;in do C$CI V se prCIQICio <1 la ultrKOntrilvga.cin
durante largo 11empo (tloms o diast. hasta alcanzarse el equilibrio de sodimel'!taciOn (ipo do cido 111JCI81co se
SJ!a. formando una banda. en aquela posicin del gradiente donde la de!IGidad del fl"<1o a la de la mofc:ula
Eidnplo M dt la lsop;mo;;,,
dd es4iln (ormSIXlf l.oa <k !fuencu'" c(lf"'n .. n .. hlltl, n
ciJo. s:u de b."i<;c,; es !k lu c::l del tc:cnoma, <t\1<' c.: mi1s
promc.:b:l(b .. C'cMI11) cuanJlt....: lragmenlil d UNA l<lt al y .w ..:11 . J.:
di!'IISwbd !k t:.CI. l.!ll piOCt-drittc:. <kll4' ONA .ahanlctlh.: t<:j)CtitiHt se ""P:tl'*n de la
batida pnncipL fomlondo sar.Wrt., : de uhi \ ino el nombre /).\' 1 wtll /tr, (di.':!CfiiO en
1c-m11 <k dd ;cnon\11 > DNA rqo.-snhtll
dlSVludn COIK'cnl.md3
de . 6 MI
+
I)'M i('n(lmko

ultra..-:coui

..
;nldlr.:ll!C (OIK'CI'IIt<ICIil de C!>\1
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1 1.k 0 .\ col\ ttnn.:oitl+ 1 tic ( , C ( hlc hclK.'C
m.h :llf\'I.Jd.. l p..l'lo:c!l ffi.I)UI .lt!'t!,.>tbd . ...., c..u1htuan .:n
mll!l'hl o....., 0:1 d tul'"- k nlUm:.utU!IIh!, .,.,.J,u clkul'llnJu cn1.1 n:l.lC .. lfl
ll ( I.M Q)..
11.12.2 Electroforesis
Como es bien sabido. esta tcnica .se basa en la capacidad de las macromoleculas catgadas paca desplazarse en
un campo elctrico. con V91ocltf.ad proporciona1 a su e inVGI'$iiiiTiente proporcionat a su tamal'lo Las moieulai de
ONA p()$con, 011 pH hilbil\JIII (;;:tfg<l neg;)lwa uniformct por UNCIOO de m<JSa, ro que hace que su movlliciad
... _ .... , . .__
l(o ..

lum fC4.i>ldlo:IOII
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lill!tl"' llv o ... \ llh
.Q:- "-.W
..:nlo;;;l.!.o ..o .........
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138 PREPARACtN DE MUESTRAS, EXTRACCfN Y ANLISIS DE CIDOS NUCLEICOS
Mci3 e1 nodo () slo verva Ck!lerminada por e1 taMafiO e kl f'I"'IO&&Jia (I"Uneto de pares ele baSeS, Si es lil"'f!ffl). o.!lle
destac819e que 109 CtOmOsomas eucarlo&as son demasiado grandes pera ser idet6lcados por este de anlisis. por b
que cocn'lnmenre se aplica sobre ONA hgmentado oon ru::teasas.
11.12.2.1 Soporte para la electroforesis
La s.eparaoin 00 los fr<lgmeflk>J de ONA doblo M realizo ClOf elecl70b't$is on geles de aQalr0$8 (gonora!menee en
horizontal) o poliacriclmitt<l (oomUnmentct en vertical). En al'!'lbo$ Ca$0$. el 9e1 te prep3t'O c:on distintas concentr.cioncs
en funcin del tam"o de tos fragmertiOS de ONA que se QUieren tepatat. Los fragmentos tnlls pequeos
hM!a 1.000 (lb) se pueden separar adecuadamente en gMes de pollacrilan*la. para lamal\os algo
"'*YOres (li8Sh.l 20 I<.SlO) se usan geles de agarosa. Modil'btldo la de acrilamlda o 898'098 se oonslgue
vatiaf el intervalO de tamanos que es posible separar (rNOIIJcin),
11.12.2.2 Deteccin del ONA tras su separacin ('(revelado" )
Ul\3 voz. IM mol6culas de ONA se visualizan normalmente por aa fluoresoenda de distintos oompues105
que se unen a ella'-. Aunque el mas t.dllado e6 el br'OO'U'O de elidlo, va &lencto suslituido por otros flOOt'OCI"'mm& oon mayor
I)OOef de deteociOn otnenOr toddad.
Bron111ro d(' f<tldJo:
AgCfltc k mtroc:l...ot
.sbrt un
poco la doble provoca un

Su ftUOC\_'SI.'dleia aumcnla mucho cuaado
se une al ONA ( ookw ""rnqja bl ilumin.illr
oon UV): mtOOo de o r\"\'dadct
dcii)NA. usado ct1
c:ltroforc:sis y en
- -----
u <k idio
mollii:JVI< Pll."ffll(1(lft IJO.I'QlO.'

11.12.2.3 Calibracin de la electroforesis para el clculo del tamao
de los fragmentos de ONA
Las molctjag liooales de ONA doble migr&n on 13 eJoctrorOfeSis a una velOcidad lnversamenle proporcional a su
tamar.o (dentro del inaervalo de resoluci!ln del gol tmP*'<IO). ESIO petmlle estimar la klng!tud de los fragmentos
estudiados.
Se: Af!loN ..-o llc 105 pocilkK del Id una
ltlo.'u:lackt A \k:
..
00
ili)IJtCCo,
'""
.. rnoll:'ildon'l; ok pco.o mulctul;ar" u "eltllkta
l!!l DNA" (L)SA kMMr) .
-
se )'le
...
-_,,
j)QU. Uld.ts lo hilld.u rl
H .lt&
dd bmll1o Ounl!"llo! tn pb)
= le al d.: ..,vil idad
ltl!
= -... !
(diSQno:lil. i!VllbC'tJ, tC'tUI
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w ifdtii'OIM!Ias .is1ancias de
-
=
.X la$ mueoltlls p-obltma.
u
lui u at )'lb.
-
fe "'," (IC:mplo. 105 JUCmfiCI
l(Ofl CClllt)(oJoo!l..
1 wtlr del ON A do:l '\' irus ). pur
la accia dt tao <neklnudo:a:\ de
reolrio:d.S. I:.co.>RI '1 HulldUI.
11 .12.2.4 Eleetroforesis de campo pulsante
. ..
:o-l 10'
"
iz
ji ...

.. 20 $0 O SO fO ?O 80 100
Movihtad (mrn)
(etealaiOQIIWII.II'-ce)
Las rnolc4Aas o Cl6 ONA de longlt\KI superior a 20-40 lq)b no se PVO<Icn reSOlver (sepatat) etnpleaOOO
19 91ectrolorosis c;onW!nc:iot\al et1 gel de agarosa. EfiO se debe:. en ligar, a la dHIOJIIad de manejo de los geles
preparados con las bajas ooncenb'aciones de <J,Je requeririan (Inferior al 0,4%). Adems, &as molootM de
ONA. que adoptan una conform3Cin mb o menos giOtlulat, poGeen un lamatlo exoesivamon1c gf<'lnde p:,ra
los PQfO$ del gel y no sa sepatan en funcin de su tamallo, Para $01YOnltlr este l)fOblema se NI Ideado una modificacin
de 1a teeniea. eonoaa oomo e6&cttoforesis de campo pulsante (o Plft&CIO, puiSedJiefd ger ereCU'Ophol9sJ$, PFGE.).
FRACCIONAMIENTO DE CIDOS NUCLEICOS
139
Se emplean gele& de agal'()l;a al 1%. P8fO se a!teta 1(1 orionlon del o!ctrioo aplicado.
activando allernativamente dos pares de electroOOs. El frecuente cambiO de direcei6n del campo elctnco con5igue Que
la5 molcula& &e de&pJieguen y avancen a travft de lo& poros en CKtentida A mayor tamallo, &e
rconP.fllan con rnils difiCultad lXlf lO avaruan ms despaciO. ASi se conSigue !W!9&rar fragn'W!fltoS de DNA de hast:t
varias nw!gabases, lo que S41pone 1M'! sQntlcatlvo pero an no sirve pera e&tudlar tos cromosomas humsnos
enteros (de 50 a 250 ,..Cb cada W'\0}
'lllllJ.I'-'

.... ., ..

..

,\ \' DC'W 1.'11 ColliCl>.
1.'11 fUDCIU dtll.lll'UifiCI
C) C) C) C)
00
=
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-
-
"
i
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-
-

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,, .

=

lllk\'ll
=
=
l.<l$ muestras nan de cont(lr'ler et DNA sin tr&gmeMM, por 10 que 1'10 sirven las de ONA purif!C&CIO. que
geoeqlmerrlc ya se NI ftagtnenlado debajo de 100 k:b como consecuenci;) de 1M fueq:as de oalla durrmt e lO$
m610dos Mbiluales de aislamiento. Para oate.w preparaoeioMs con lOS cromo$()m3$ itltac!OS se mezeiat\ las c61utl'ls
con agarosa c:aMinte (37
11
C) y se vierte en pequetlo& mOldes de tn:lS m&lmetros, <le forma ai SOIId!l'icarse la
(.4 -t) forma blOQue& ('iniettO$) QI.Je incluyen la$ olula& int<aoctas, En s:t06 se rea!ila la i&i& celular y diOG<Sbn
de 1M proleinM (p,e. oon EDTA. SOS y K, que difunden tt do lO$ ()Oros <Jel ..rtornr las
gratlcles mol6<;ulns OC DNA. Tras una <'iMisi$ para elimir\af' lO$ re$tos <Je 1<'1 <'igo$tin, sct un f:liOQve <5c f!gl'lrosa
con el DNA intacto fl su inlerior, que se cfeS)O$ita et1 un pocillo del gel de
11.12.3 Mtodos cromatogrficos
AunQue ampf.amerrte utili:z:iiOOs en \oda$ lo& campo&. est06 mtodo& slo son apropiados para separar cidos
I)IJCieiC06 en algoo.as aplie<teione& Por e,emplo. en ooKwnna& relena:s de hidroXNJP<JIJlO se te(lene por ad&oran el ONA
d9 doble hebra. y con menor trllnidad el de net:wa senc:ila
La crom.'Nogr(I/"IJ.J d6 irlfooreambio inif;Q, clt\&icamente pat<t sep<trar protelna&. se ha convet't*:to en un
m610do a!terntii1Yo preparar DNA de alta J)urcu. torrnl\ rns r.\pida que la GKtr<I(.CJn o la
cenlnfugacin en gradiente de CsCI. Las columnas con resinas de w ercan'tiQ aniOt'lioo (C8f'93$ po$it1v3$) tt!ienon el
DNA (cargado negativamente) de{ando olfa& molcas (ftNA. prO!einas. ele.).
Tambin M omc*itala <*1 .,rmkJ,,d pt'ra fraccionat o separar RNAs de distinto& amai'los. estrucrura
y TunoOtl . Por ejefi'C)b, P3tal)l.rillear mRNA a partir del RNAcelular 60181, $e utiliz;)n t;OIUITirlil$ de oligo<rf -celulo&Ol o de
poiiU-Septlarosa. que rellenen el mR:NA a ltavs de la cota de poi(A} de este ;)(:ido nuc:lelco, de lorma &imiar a lo vi&to
en el ejemplo oe exlfacC!n directa con rrkroesleras msgr.Mlcas.
Tema 12
Replicacin del DNA
12.1 CaraetfHfsUeas generale-s de la repUcacin ................... - ............................................................ - ....... - ...... 141
12.1.1 semlconservador .................................................... , .... _,_,_,, , _,,,._ .. ., .... _, _, _,_.,,, .............. , _, _, _,,,. 142
12.1.1 _1 Oemo61radn expe:nmental de la replicaCIn semconservadora..... . . . .......... . ....... . ... 142
12.1 2 ... .,,,_,_,_,_, .,.,_,_, ,_, ---- ---- ........ _,_, -- l44
12.1.3 Inicio monofocal o ,._.!tifocal ,,, .. , , , ........ .......... . ......... ........ . .......................... .,_,_, .. 145
12. 2 Enzlmo1011Jia de la repllcaciOn .................................................................................. _ ......... _.,, . ........ .... .. 145
12.2.1 Requennientos de la reaocin de slntesis de ONA .......................... ................................... ,.,._, ... 145
1222 146
12. 1.3 Olreocc:iOtl oe la slntesls .......................................................... ----.. --. ---- 146
12. 1.4 Tipos de ONA ................... ............ ...... . ........ ......... ............. ... . l.t7
12.1.4.1 ONA procarl6tlcas: acttvldede-9 pollmetasa y exonudeasas ......................... 147
12 1.1.2 ONA eucarl6ticas: actividades pollmetasa y ...... . . . . .. .. 148
12.1.5 Vetoacla<l de replicacin _,..,_,_,_,_, ...................................................................................................... 149
12.3 Etapoa5 d9 .............................................................. ....................... 150
12 3 1 lnicit'QI'I , , ,_, . --- - -- .. 150
12 3.1 t Q.-tgor-.s de replicacio ................... ......................... ............... 150
12 3.1 2 oe inieiaCi()(l .......................... .. ........ - ..... . ...,_,_,_ ........................... 151
12 3.1.3 COnexi6n entrt la inioaeibn y lA nete$<tn(t$ .............. 151
a) Helieasas.. .... . .......... ...... . .. . . . .... . .............. . .. -- 151
b) Protelnas de unin a hebra sencilla ............................................ ----. _,_,_,_,_,_, .. , ... , 151
e) , , , , .................................. .............. 151
d) Prirnasa,.,_,_,_,.,_,_,. --- ,_,_,_,_,_,_,_,,,_,_,_,.,, .......... ,.,_,_,_,_,., ..................... ........... -- 152
12. 1.2 Elong&eiOn., .......... ,.,_ ,., ................. ,................... .................................................... 152
12 1.1. 1 A$imctri3 de IV rOCJiiect(iOn en MnbM hebras ................ ............... ............... .. .................... 152
12. 1.1.2 Meocanis(n()oe 1a elong&eion. ...... ... . ,_, .. . . . ................. 153
12. 1.1.3 MdJNiciOn oe los rragn'le(ltOS de C*tunki .. ....... . --- --- 156
12.1.2 Tenninaci6n ............ ,._,, _,,., ............................................. ,., ..... -- . , .. , .. 157
12. 1 2.1 FNI de la elongacin ............................. .......... ...... . . . . . .... . . . 157
12.1 2.2 Repicacln de los te10tne-Jos ............................................ - ------. 157
12. 1.2.3 Telomerasa: componentes y ............. -- ..... -- . , . 158
12. 1.2.4 Mecanismo de acciOn de la lelomerasa ................... ,.,_,_, ...... --- 159
12 1 2.5 F I.R';ionaidad de la ae1iVId<td lelomerasa en las celulas . .... .. .... ... . . ... .. .. ... . . .. .. .. ..... . 160
12..2 Repl icacin mitocondri.aJ ................................................................................................. ............................. 160
12.1 CARACTERISTICAS GENERALES DE LA REPLICACIN
La repliCaCin es el proceso. sencillO I)Cro molocularmente oomple}o. mediante el cual a pattir de
una molcula de ONA progettltOttt o P8fe(lt8i s;e sinlotiz<'l un originndose asl dos moleculas de ONA O&
secuencia Idntica a la deJ DNA original E$$0 permite ot 1)3!$0 de la n formaCI6n a la deSOOf'ldenc:ia (131'110 <M
una clula oomo del incivlduo).
la oonsbtuye el aspecto oe1 dol DNA, w deben con&detar
oomo patre del mismo (!(ros prOQ!I$0$ directa o indirectamente re-.lacionado9. la re-eombinaciOn o de la
la mutacin o llllert'Cin de y la reparac-In de las altetaciOnes o daf'tog et\ et DNA.
142
C(!HJUnlodc
"'""""

ddDNA
REPUCACfOH DEL ONA
La repllcac:i6n &e produoe de fonna con la diwsl6n oelular 9), ooncrolclmentc en la f<"SO S.
dlsante las inteases preVICI$ t<tnlo 13 milolli:s oomo 4 1<' mciosis 1, do Jorma Qut, en et caso de la mi&osls, las dOs
clulas hijas reo"bc:ln la mi$11\;t d0t3Ci6n gentiet' que WW'loia la 06Ua madre. En cuanto a la meiosiS. puesto que da lugar
a cuatro <:lulas hijas. Ja previtt permite que tostas tec:iban ta mitad de dicha dotaclon gentica. y no una
<:ui!'r\<1 (pAg 104). La fel&eiOn eftlfe el est.BOO de repllcaciOo y ta progresin por el ck:IO oeuat se puede resumir en
k)S: siguientes principios genet"aleS:
EJ lni()O e la teplicaclon del DNA oblga a la clula a emprender t.rta divisin.
una vez .-.ciBda &a replicacin. no puede tener lugar la oonsiguierrte divisin hasta se 1\;ry<' dicha
replc&cln. En teelldad, el final de la replicacin oonstituye PO$iblomonte t.II'WI dMsiOn.
EJ proceso de replicaci6n se lleva a cabo sin ne<:esidt'd ese ur\8. sepatael6n oompleta de ta C8den8 pt0gtet1itora: ta
doble hlioet sc desenrolla gnduarmente y sus oos hebras se van separando a la pat que &e prodUce su
replicacin
Antts de esrudlar bs detalles moleculares de la sintesis de un nuevo DNA.. procodo ()nt'!iZ;ttf
l)rinclpales del I)I'OOOSO, atendiendo a un criterio eminelll.emente didt\c:tiCO $1&$ $0n: eariiCier umlconsorvador,
ro;tlil:<'lc:in simultnea en ambas hetlfas, de forma secuencial y oon carcter bidireccional, y ogen moooiOC81
(proeariolas) o mutl.lfocat (euc:erlotas). Otra de&&acada. el a-r;ictel' scmidiscontinuo. se e:xpliec'lril una ve!
que se conozca el mec:aN:Smo de la reaocln.
12.1.1 Carcter semiconservador
Aunque tericamente SQn I)Oslbles tres mecanismos para la rep!icaci6n. oos oe 410$ $0n hiPOitieOs y pronto se
domostro que iOio el tetoero tief'le iJgar en las clulas
Un complep enzim1ico
reoorrerla .. ONA. 1'9C0nociondo
lA en ambaS nel'.lras
para oollilf1as simultneamente.
de forma que el ONA pr.nilor
de doble hebra &e conservarl a
intaelo mientras que el ONA hijo
CCIO'Iendria dos hebras
totalmente nt.oevas.
EJ ONA l)rogenllor se tOfi'C)ef1a
varias veces antes de que &e
*'leltz.aran lo& nuwvo&
fn'lgmeti40S de DHA. !:.9:105 se
uniri.(ltl al DNA progenitor para
43r lugar a 10& dos ONAs hlf06,
31TCX>S 001\ tragrnen1os tanto
nuevos como de las dos
hebras del ONA progenitor.

1lt UNA
pmtll'flll(lfi>
semiconservadont
Es el mecanismo real. Las d06 hebra& del
ONA progenifol" &i,....n de triQik:Je pt\r;J 10
&n osis ese sus resp&etivas hebras
oomplementanas. Cada ONA hijo est
lormado por una hebra proge.nilof'a' y olla hi,j;J
{recin Wl4elizada}. El mecanismo se ropite en
sucesivas generaciones de clula& Et nombre
alude, precl&amente, a que siempre &e
conserva ti mil3d de 1;\ rnoleda or!gl!\81.
1.11 ttpli.:aci(m
li&'lll*
dd DNA
.:.-d
fl'l(llklo de <k>bl.:
..
......
...
, .
.....
-
.....
lujll
CARACTERISTICAS GENERALES DE LA REPLICACIN 143
12.1.1.1 Demostracin experimental de la replicacin semiconservadora
El real de la repllcaclon liJe pot primera ve2 txW M&!l'leN y Frar,khn W St:Jhl en
1958. mediante experimemos m.ay &ll'tCillos y representa1ivos de muchos otTOS reafiz9dos en dWersas ateas
ln BiQiogt .Au'rqu" IQ!I molo0Jiar8$ de la n:tpllcacin rueron G&tabteciOos con e:1
f:SbJdro ONA el e,:l)eM'lenlo Mesolson y SWN lione de oor w diseo. por
habor sido 13 prifOOr<J vol. qvo $0 tanlo la tcnica de sedimet\1aon et1 gradiente de densidad oomo 18
IntrodUCCin de 1$0101)0$ en 1;)& mo16tul{!$ 01: ONA

y
1
'N, Istopo habl,ual)
Para comprender lll novedad y troscendel'll;:i& t:$10$ en $1.1 momeniQ y cont(lldO, lS4t v.-n a;
considerar loa y el plat\leamlento antes de descublr el reSNfladO, So vproY$Ch3 <tSI este para
lll.lst.rar el mtt!odo <:lenl jf\oo, en es,pecaat oomo un dlsel'\o adecuado del ex>Mrnento, que sirnplc, permite Obtener
una informacion notable
a) Antecedemes
El pnmer lugar $e eJiamlr'la la po6lbAidad de aptcar la l&ctllca de equlldlrno de sedrmentaoCIM en de
densodiKS, o 0$1\'!tlfvgacjOn JSoplcniC<t 124 al anll&ls de de ONA cuya densidad es dlle!ef\te por eslar
rn.-rc..tlo o no oon el is61opo
UNA.,.,rm,.J
r-hl!nv" ""'
"''""''*" .... itf)ncl.
_,-._.., ... .. u.
<kO"<Att-o.'l:llltall
loo....A. ......... .
... ......,. ...... ...

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1
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--
lA oktal.!addd CJ"'A p<!$111loct. IHilh g .:m
IW)"' h lll la dd bgau; por
.:llo. 'M:"I\Ua uu f.'\lt" l'li."' ahaJHn d j;llldimlc
b) Planteamiento y diseo del expedmenlo
.. dll<k
UNA "I"C')do.o''} O\, A ''IQ,'('f\1-
be puo.ol>k "1'"' *" lliloi'O;,o
lltll'o' l1c 0'\i,\ (Umllli !nnl
m!lt' lll$ hu u!u,j
AQ!Icando eiUI l6et11<:tl de del ONA oon
1 5
N y su al\ltli$1s- pot cenlnfugaC'IOn tsoplcnka, se dr:$efl0 el
ellperimento de torm...'i QUot lo$ ft;Sv!l.o."'CCO$ permitieran difenciar oul de las era la .correas
(!) dd experimento:
S.: cuJII"\'oMI de F
1111 rntoJift 'f!l
, .. '11 J( 1 COOI'I'IO) mi.: .. flu,:1110: de
:Wt'U..-'ill l>l"A
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Rl:PUCAC.ON DEL DNA
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fW"C'\ scrun. compantt\ -arn.!TIC'"
,.,.... __
\\ll'loflk nu 'loe 'ln."l>"--ntJin. loi lill REPLICAC.oN babri.a (lfl'lb: .. de 0' o\
+;:01'1 ltteidaafcjIIOfia de l"h'!"flllllfU) IWUo. ... S. tsdlx"it, ftl IOJ 1 UN 'lt\1.1 Nnda m
el #l*fimtc ((lcnsKI:Jd ll'll(fme,b.t ('n(f\' "'"Jdu )' lttt<'fO) )' en ht Ultr.a Nndt llklbldad
11\lenn..,:hn \"fltR' l;a )' l.a lkl hVCI\1)
e) Rosullodos obtenidos y conclusi6n
El rtkiii.IW ob64111'Vi!l6o lA ,.tllllt"r illll)lriml!lf'IIO tue de una banda de DNA 00 Wltetmedla en la primera
gtntfliiCI(.)n de Cllula& y dtls on ._ stgunclt OI'*8CIOn Oe deo:5idadet: baljt, 1 IMtrmedll /IJ oolncidir los da&o&
c:on lOS re.aaOM dt l*1f otl'1(;hal de ltllgura, se eondU)IIO QUt t1 hiptn ls
Ll es deCir en a ONA tilda una oe tas l'l'lOtec:aAas t\ttll conMrvl DNA
Pf'OOl"'*W ., '*" en hetn de Sif'lleiM:
12.1.2 Sntesis s imultnea, seeuencll y bidireccional
O. ate la "**"'omo 0t a. u carac:tesocas
OONtviOal por primera en E 1#11*0 igueli'Ntlet ... pera eucariotall (,..,..1 11 MCIOn 111 medto de cultiYo
CS. lin'tdnO lribldrit el ONA dlt til'le.it 'f lllegO pot IMIOdOa
U tln41fif no c:orn.enza al azar, alno tl'l punlot conc:rft)S de ta molcula. denOmll\ldot di
En uno de ellos se produce la apenuro loet,l dO 1 doble hlice y COf'Ntf'IZI 11 'Nfltl/f .J'flM't61W de las dos
hbras oonlwdrse oon el t#ltCier cotttlnuo cte la sn1e14 dt Utl{l to'll: dG hebras,
QIA M .. W<,IJ.IIfil ms adelaNe).
Como aas dos hebr-.1 f!IWw'M .. van alargando progreslvanwMe, por teeuendar de
--
U de las nebra& progei'IIICWM. QUe en 'Cada tn dlf'tiC:dones.. por lo
QUI M d11 QI.Mila A lot p!,ll"'tcc& de dOtlle hebra 'f l'llltns
tcllllllmt IOQuiiN . ., ....... "ldoM
,.-.....,..._no debe pa M por Ncno de..,. dedo.., In 001 ,..,_del OHA ton ._. .,,su
.,........o, con I'IOI"quult para_.,_.. c1t l '*-5 y para la on
en ....W05 ___.. 3' f 11 on h0nluel1
E.NZIMOLOGA DE LA REPUCACIN
FORMACIN Y AVANCE OE LAS HORQUILLAS OE REPLICACI
en procariotas (ONA ci rcular}

II!Jt:"' ok onkov 11

..
12.1.3 Inicio monofocal o multifocal
en eucariotas (ONA lineal)
'
K1 Jto K,
Vfl)lt'l'l d! lutJf 1-o inll;wo ,t.; un q:t\ln J;J 0' \
unidad <k l'tf'l ic'<Koi>n t> n'f'h,-
>MilC">" '(I.;IIC!IC>.il.
..... 11!'> btillrt\.-.;M!I!

1 (
145
En e1 titlic:o e '" re(llicacin comienza en oo det.etmlt\a(fo.
dei'IQr't'linaoo origen (y mareaoo corno o e); se <liot Qve la es monofocaL En consecuencia. PfOQffl$8
fOtmando dOS hOtQuiii:'IS de repic;aci6n. PQf ol oontmrio, on la replicaCIOn es multlfoeal. ptJes en cada uno ese
lOS cromosomas e.xiSien mU111ple$ Otigenes de (centenares o mieos), QUe dan lugar a oo nmero oe
h()rqullas. GraCias a euo se 1\&Ce l$ible en un OOmpo razonable la reprk.acin de los cromosomas. muehO
mas largos que en procatlotas.
12.2 ENZIMOLOGiA DE LA REPLICACIN
12.2.1 Requerimientos de la reaccin de sntesis de ONA
Cebador: La s.JntesiS <'e una hebril de ONA no puede oomenzarw a partW de dos nucleOildos.. sino que
requiere un fragmento de hebra iniCiador, <fterl()l'nit'ladO JbtJdor. Que aPOtt un gf\ClO 3'-0H ltbre. Se trata de ul'l
ofgonuc:lecido. pot lo comn RNA. que <1e0e estar apareaoo a la hebrJ progcnrtora de ONA. de forma
oomplementana y anttparalela. Por 1anto. se p\IE!de decir Que rcplicaciOn no e:s aotoiniciadora (a difefencia de la
pg. 248), Sino que slo f!Jonga o 818rga mol&w!tl $ prooxis1entes.
54 ut601 <.emo &uWatO& el oon,luMo de loe cuauo dN'TPs. <IATP. dGTP. dCTP y dTTP O. C<W.la uno
de ellos quecsa tncori)Ot8dO en et ONA nvevo la NMP de la moJcula. A estos eJectos lOS oNMPs y dNOPs
6011 Inactivos..
Cofct or9&: accMdad pliT\8 se requiere un klt'l mel.Mieo div31Mtc como cofilctor, i.JSOCI9o a 'OS <INTPs.
AunQue in vitJo oste pCJPOf pueden de$emper'latlo tanto como Mg2. es eSie Ultwno et <I'U in VIVO
Molde o plantilla ;;Sta es. QUiU, lo principal caractetl$tca de la reaccl6n. El correcto <f.O -'CQrpOr<c'Cin de
tos dNMPs viene detetmlnado pot su comprementeriedad de baMtS ron la sewenoa de cada hebra ae ONA, Qve
aaa asl como molde o
146 REPLICACIN DEL DNA
12.2.2 Mecanismo de la reaccin
Se iric;ialtl Q:)l'l ol apare8H'I'Iientode un dNTP oomplemenuwto alnueletldo de fa hebra molde (DNA) en la
po$icin <'!1 exltemO 3' de la nebra ett ttee*nlento {Wclalmente. el RNA cebador: h.1990. la hebra que se est
$intotiUni:JO), La propiamente dlcN oonslsle en la unin del dNTP seleccionado. bajo la 6orma de dNMP, con
llber9Cin de PP r Ello implica la tormacin de un puen1e fo5fodi6sttf ttre el f0$1<'110 a C:SCI <SNTP se lrw:orpora y el
3'-0H libre de ta cadena en c:recimlento dol La I'LJC)Iura JosfOI'Inhldrldo del dNTP
proporciona la enesgia necesaria impuls.'lr 13 ayudttda por la wbsigulente hidrlisis del PP
1
a 2 P
1
catahzada porta pirofosfv\:;11$0\. Tms muChas reaoeiones similares sucesivas. eJ producto es la nueva hebra de ONA:

n
1
dA'rP - n
1
d(iTP +- n, dCTP + diTP
RNA ccldo>t,
Ml*. DNA
\t f(' -'l><ISMO OE I.A lli:AtL'1"'l:
cntk .. dc

lhoebh d ..
I>NA ua.:iOilCl
12.2.3 Direccin de la sl ntesis


,.
...

o,:;:">
hebr.J <k ONA t:o l...::.J
t'"'mu:r-of < l'

C'.alkl3 de DNA con
""' oucloot;dos
lllllC!aUI H O
-o
(}
0 ""'
Puesto que la adicin de nucletldos se realiza &lempre a partir de S*trif.:)Sft\11:)$ y SOOte un eJitremo 3'.QH lble.
la hebra crece per $U exlren'IO 3'. y se dice que la slntesi& lran$CI.Iri'O en di.reeci6n 5' ... 3. Esto es vlido pera toda&
ONA polimerasas. tardO <le procariotas como de eucarioeas (y RNA pollmerasas).
ENZIMOLOGIA DE LA A..EPliCACtON
147
12.2.4 Tipos de DNA polimerasas
Aunque la reaet61'1 de Sintes.s ese ONA es vrwversal. es deeir. bene lugar de tnlita fonna en lodos lOs
organiSmos y ublcaelol\eS subCelulares $u CM<\Ii$t$ .s efe.;;luada tt1 cada taso por dis1inla& enZIITias. bajo la
ei"'mlnaeit'l (()f'nOO de DNA pol!'rner.t$$ (&brevi<M:SM: romo ONApol). ES1rie4amente su nombre es ms oompleto
politnefflUt$ de DNA dl;fgi(Jit$ w DNA (o dcl>(tndiontO$ d9 DNA) , para tanto la molca que sintetizan oomo la
que emplean oomo molde. Mas adelante se C$1udi;)rn otrt\s PQiimera:s<a$ do ONA o de RNA que ublr.tan d1stii\I06
moldes.: pera ofreoet una vlsiOn unlllcooa se resumen a
molcula molcula
nombre oomplelo
ejem)IOS (nombre oomUn)
sintecizada
molde
DNA DNA f)OiimetaS& de DNA dir;2da PO! DNA ONA po!i,....-asas
RNA ONA po!imerasa de RNA dingtda por ONA RNA pollmetilsas o transcriplasas
......
ONA RNA )OI!metasa de DNA <Jil'igld3 i)Ot RNA
uansCtiptasas

teiOlerasas
RNA RNA polimerasa de RNA <!1Q1da por RNA
RNA repllcasas
12.2.4.1 ONA polimerasas procariticas: actividades pollmerasa y exonucleasas
La p(IIYieta DNA pollmerasa (Mhvr K:omberg, 1958) y la mept es1udiada hasta la fectla es ra
ONApoH de schencrua cotl' . la oomprol:laclon Cle que su actividaCI no es $1JfiQ(ttlt$ JU$1ilicar la veloadad de
<(lhcacin del cromosoma bacteriano JI) v.'vo condujo al de9eubrimiento de entimtts 16$ OHApoi JJ y ONA.po!-111.
l as tres. en E. coN. con funciones especializadas: pollll realZa la mayor de la t3fe3 diJ ntPiiCCIICin,
mienlr(ls <IUCI pol1 y polll se encargan de funciones aux:Wares (sus earaaeri$1Jcas se mvestran en la tabla
de 148. p.nto oon l&s de 1a:s potimerasas eucari!icas).
L3$ tres ONA I)OitnerM<'l$ adems de su accividad enZlmtlca como pollmerasa una o oos
:.cti vid3dn actividad 3' xonveleasa (taml:lin llamada eonueteasa 3'-t5' ) )ermrte hidrolitnr el
nucleOlido Sl(vMO en el eJttremo 3' oe 13 de ONA, $IQ un nucfleciOO cada vez. Ea.a ehmlnaclon uene lugar
cuanOo el t"RJCietido noorporado por la activiOad pollmerasa a la caaena en erOOmien1o os errneo. e:5 decir. no aparea
corroct<wnonle oon el en la netlra molde de ONA.la pollmerasa es a$i capaz eJe r;ofl()I';Cr el error. detener la
<tdicin de ms. nlJCiebdos y liberar ese Ultimo dN\IIP mal ln00t'J)01'8do. Los te(ltiOS acti'IQ$ pohmera$<'1 y exonudeasa
$0n En resumen, las. ONA conigen sus propjos MOtes, en sentidO (3' _.S') contrano al de la
polirnerizt'Cin (5'_.3'); por eiO. 3 esta actividild 3' -e)(()t'IIJ(:Ieasa se la llama tambin aeti vidad d9 prveba&
(o de galetaaas. por Malogia a1 prooe$0 en .mprcnt8), o correctora de errores proptOS. De este 1'1'10<10 mejora la ldelidad
de la replicacin, en un factor de entre 10t y 10l sotlte h'l que <'POrta la inoorporacl6n de nucleotiCios oomplemel'ltafl<>$
por &a pobmerasa (que \lene una lasa de error de un nucleollCJo por ead<l 10' o
CARACTERISTICAS DE LA DNA POLIMERASA 1 DE E coli
ONApoll (unida al DNA)
uN. 103

\' o>nud
'\locl\'(llo<Jo nx .... ''fflll'lldoV'I.
p.nl" 1k unii'O( la h:bllJ en
...
Cl'll.!ftu.\, dDUOO ... po><l:>
J ..: .. ..._.
ll ltnnnul.
f<'ftQmei!U:
...., o:timo,....ol< la
:o.;o .. ...tod
f ntgrnc:nlo .. gmndc''
o de Klerow
u:.-..
Pfe'etllil .., , IIQI \
.. .a)
,; ...-\on....:k.c>l
Muy l.lcl> X
nnpko;J "'* frocno:"' 111
..nle<i< in ufm;k DNA
.. pl-quc:o ..
k i)J,
lllliCI1\id.d

xoro
._. ONAQQII <le procanas es nica entte tes por poseer adems una segunoa actrvidad
on esto caso 5' -exonvcleasa (O exonueleasa 5' - 3'). qve le porr'""e hidrolczar secuencialf'Y'le(lte DNA o
A.NA a partir (fel 5' o la hqbra De nuevo, el centro aalvo es .-nteriores en este caso esta
srtuado en el fragmento pequeno Esta activi!Sad juega un papel fundamental et'l la rel)litaCiOn del ONA. procanbtioo al
elimnar el A.NA cebador y sustitulr\0 por DNA, dur<Wt4e la stntesis disoonllnua de la hel:lra (p."'g 156 J T amblen
143
REPUCACION DEl ONA
oompleiTl@nta la actwrdM Ol)n'igiendo ei'I'OI'O$ de <Jt$bnt() llpo, y se la lama en ocastOneS aetMdad ele
ropou <K:in; pc>r eompk), inlervene en la escisibn de 109 dlmeros de ptrlmi!W\8 que se forman por expo61Cin del ONA a
i.lz W se aprcwha la aCIMdad S' -exonudeasa, por ejemplo. para. la de &anda5
(1)60 t82,
Al gunas caracteri sticas de lu ONA polimerasas desde el punto do vi st3 bloqu1mico '1
PROCARIOTAS
Pollmeraoa: 1 n m a 8

6

Ublc.<JCIO" !Wbcolwtt
nuc:leo nucleo
mito-

nudoo
ooodria
enzim8Uces :
Pnmass .-.:io
no no


no no no no
PoWnerMa s 3'
,, ,,
si
,,
si lti al Si
(o 3' S'}
lcorrecctbD de orueba!l- 1
.,
..
,,
no no
,,
..
,,
5 (ot()nocleat.oil (O 5' 3"
"
no no
e;.mnacon de cebadores
no no no
..
no
Funcin an la dluta:
ReplicaciOn (&inle$!$ conlinui)(Sa
slo 1nl
de t'!ebras 11Cit\'AS. (OO(IUCIOta
no no
,,
catrnente
no
si
"
si
y re1atdadf)
Empalme 6e kagmentos &
..
"
"
Okaur;l

no no no
oon nutleiJSM
VolocJd.ad <k lteadn:
1
Velocidad de polmeriucin
, .. 20
2-7
2S(). J000
(nucleddosl
P1ot(I$1VIrllld
baJa
media
..,.
""'
elevada
elevada
*vada
(nui'JetJ()S allachdos antes
mvy ;)lit\
con PCNA oon/$n
de SU d1SOCIBC10n 1
3-200
10000
'
,.
"" 200

PCNA
12.2.4.2 ONA polimerasas euearttlcas: actividades polimerasa y exonucleasa
En eueariOtas, las ONA $0n 4ilcremt:s las de ptocarlot.as.. auf)QO& cierta 6imililW de
seeu&ndSI y 8$-lrUc:tura. Se hao descrito mAs de ent:l mas. t.a ONApo4 a se encarga, graCiaS a su aetivtdad
prlmasa, e IniCiar la sintests mediante la fofmacin40 un RNA oeb.'kiOf '/. poi' su acllYidad polimerasa. de la olongon
lni(l(ll de ese oooadOf'. Es.m tarea se cede Mgo a las OHApol tespoosables de la mayor parte de la &
hebras, aiiT!bas ttenen sin'lii:!IM. pero aUn no est dato si desempel\an incS&tin4tlm(lnl& la
mtSma runon o estn HpeocialiMdM. L.a DNApof p no lnlervtene en la sino q.-t e:sltl .mplieada en ta
reparaon de crro,.cs en el DNA (procesos en lo. que wmt:-tn pnrtJc';ipan otras polhoontsas, lnWyendo a '/10).
Mientras C\l<ltrO en%1mti:S son tesponsables de la ceplicacibn, y teoomblnaciOn del DNA nuclear el DNA
mill)()()l'dnai es sintetiZrto por una diferente. la ONApol y P UltimO, se han descUbierto
0\!89 poimef'8S8S nUCINt$5, poca OMOoeidM ( 'J:tetal. 'l leta l. l ). QUe estn 1mpbd<J$ $0bl'fJ todo en
rvparact6n y etombii\{ICiOn
En cuMt.O la aclNidad exonudeasa de las ONA eucaOCicas, sto las 3 que se encargan do
{\$,y y r., ...er tablal poseen actlvid<td 3' .. 11onuc:leasa, aqu&lla tesponsable de la capaclaad de (lOffCI(lQ6n Oo
Motes eome41dos al lnoorporar los nueletdes .a la hebra Que se est &fNetlz.ando Ninguna de. 13$ polin1tWaS;IIS
eueanOtJcas patece tener S' .. la b\cibn de elimirtaoibn de oebadOJes 13: desempel\an do9
nucleasas independientos, aunque t.as pollmerasas. $ y e si s.e enccwg.an do rellenar ol huooo eon ONA; los dela!!es se
8UUCiian ms adelt1nlo U*.l 156).
la fl.lnCIOn espoeifiea de eada pollmetasa &to se puede el de los mecaniSmos de
!nlaacl6n y elongaQn 6ft ll'l$ cadenas de DNA. que so utudi<tn con donltQ del mecanismo de la elongacin
(pg 154)
B.;JtO el alcance de este libro no I)IIII'Oet!t describir In do 1(:1$ dis!Jntas
En la 1ab18 o resumen \os dal06 ref:elf\1'05 a t<JmafiO y Ol)mpo$1c::ic':ln on pero debe
teoorse en cuentn l()davla es muy 8\'ada la citl'8$, en especial pan; las enzimas eucariticas. o
!tlcluso la *"ter'PI'01t'ldn dt los mrsmos en los distnlos orQ;)fli$1Y!os e!l.tudlados. oomo para w generariUIOOn a IOdos los
e\lctllfit)l(t$
ENZIMOLOGIA DE LA REPLICACION
Carae-toristic;as ostrueturates do 101s DNA polimernu
PROCARIOTAS
EUCARIOTAS ''
1
Polimerasa: 1 11 111 o. B y 5 6
M, total (kDa)
171
103
90
c900
356 39
160 173 313
N
11

1 ;,:4
22
4 1
2 263 2
M, subunld&9s
"
'"
125 125
258
35
48
55
\.0$ d3tc couesPOnoen a numanos.
Pt Mt\$.1 molecular <N: la o tlt"'ZiM:J ful'leic)(ISI oon todas sus St.b.d\idades.
;,. la ONApol-111 de E. r;()Ne$16 torm;"ldl' t>0r 22 $Uti!Jnid<'CICS de 10 tliX>$, con <:Ornoosicin glob<'ll
((J.,c,(l),trty,,Q,-y.lbl\4. De enas. 1a &gt\4)8ci0n se conoce oorno <te 1a La
suDunidad { 130 kDa) llene el centro acuvo pol!metasa, la : el 3 -exorucleasa o correC$0ra de pruebas .
149
... La ONApol u humana H1a 'ormada por 4 subunldades diferentes: 180 kOa. oon el centro actiVO pohmerasa
48 kOa oon el oen4:ro activo 58 kOa, ele la 70 de
12.2.5 Velocidad de replicacin
0..00 ol gran tamaflo de ..,na c61v!a, wa <1ue sv ' cplieaor'l COMPiela te lleve il C<'lbo en vn tt&mPO
rnzon3ble ell)root$0 de $inte$i$ det>e ser tnvy r&I)I<IO. El'l proeariotas. 13 vetocidao llega 111.000 oor minuto
En el m;tyOr l<'tmoti\o dolgenoMa 1\bee pettSt'l la ne-ceSidad <te vM gtan veiOQ<Iad t1e sin
no POCista se tt\n etevooa grtleias 11 1a exi$teneia de oigel'le$ de reQiiet'cin on cada que
rodiJCe 18 IOI'Igilud de ONA Qve debe Sinlelizar cada mo1ecu1.a <te polimeras.a
t..a consecucin oe una alta velocidad de slntesl& s06o es posible gracias a vn mecanismo peculiar segun el cva1
la molcula de ONA polimerasa se man1iene unida a la cadena de ONA molde, a la vez que asociada POr su oo.ntro
activo al extremo 3'-0H de ta flebnl creC181\1e. Oe esta forma puede incorporar numerosos nucleOtidos suceStvamente,
oon vntt rOOvoein dol bempo necesario para la de cada vno: por ejemplo_ la 1Xllimerasa puede tardar vn mn-..to
en darse y votven;e a urw al ONI\ (por mera difusin de las molculas}. mientras que para aadr vn nucletJdo sin
SOII3rse lo OOslan ullO$ milisegundO$ E$11!! capacidttd de I<'IS polimctrt'IW$. ente e!!tts. se rec;:oge bajo el trmino
que se (Selil'le como el numero de ru:leo!idos que son ineoPOrOOO$ .1 3n1es do ave ta (lnz-n;) so
separe del molde (coloqviatmente se dirfa alladiclos 'de vn Un valor elevado de prooesMdad en una Cl()lirnerasa
es mucno mil$ imPOf1ante para la repbcaetn una velociclad alta de calhsir..
las P01Wnera11as de mayor procesivi&ld son fas que intervienen en la elongaCIn de las hebras de ONA (I.Snla en
pg. 148), mtetltras Que las de baja procesivicJad se encargan de lareas Qve podrian llamarse auxiliares, la!es OOMO la
sintG$i& y eliminltein do ceMdocs. su sv$tituc;i6n oor ONA o la reparacin. Generalmente, la alta proceswldao se
QOn$igve gt3Ci3!$ a uno f'n016cvlal que o rodCt\ lt\ cadena de ONA, evitando asl Que la enuna se separe: este
mecanismo se aenomin.a de 13inza deSlizante. pves l)ermite el doSiizttmiento de la polimeras.a a to largo de
la cadena de ONA, sin separarse de eb.
111])
2 mot.C,:ulas de la 13 d.: !:1
0NApo-lllll1 1. c11l1
r()<lo::m(lo al UNA, y :asi q\.11! c.l
de la (coo ll41
liUbuntdad t<lllal itl'(a a) se separe del
molde. uumcnta.ndo su proecsividad.
V1SL:I l ;al c:rnl
J mole.;;ulas de ul\ll pro1eioa indcpendknlc. d
"llnligeno nudcar de Cfl prolirci'SCin'"
!PeNAl lle llS(K'ian IOnnsndo un anillo que Rltlk::. ::.J
ONA y se une a la.i ONApo\ 5 y r. de
aurnC'Iuand<) su prQCC$i' id:lol.l
(en <:a$(1, :;.: la post-ctn del 0\JA).
150
REPLICACIN DEL OHA
12.3 ETAPAS EN EL PROCESO DE REPLICACIN
12.3.1 Iniciacin
Mienlras que et1 procaOOtas es proball6e que la re(lleaocl6n tenga lugar en conexin con ta membtana celular, pues
el cromoSOO'Ia esta Mclaoo a ena en ta ZOt'la nucleolde. en eucarlotas el proceso en ta matriz
nu(:fet!r El DNA se tf!l)llca una vez por cldo oelutar. durante la fase S.
Inicio de la repllcadn:
apertura de la dOOie hlioe en et Ofigen de replicacin,
creacin cte dos horquillas de replicacin y sintesis de cebadores
L:a um&n <k prtlh.tIIJI) tk i 11k i &li la k"tllenCia \Id
urigm lk rcpficf!d6n f31:. 1hla lu !lt"KirJc.6n do: las
A panir de abom (co <:SU! figun. y Las .Wio k rt:pn.'llc.mad una horquilla: en la ou:a
ocurre lo 1r1i:.too. aunque oon p.1pele5 c.k hd:lfa cqfli.IICir:. y retardada
,.
,.
,.
s
12.3.1.1 Origenes de replicacin
La reoicacin sie"'l)fe oomienza en I)Ullos de la molcula de ONA con &eeuenclas caracteri&tica& En et caso de
procariotas. el CJOm()$()1!n('t tiene un (rigen de tepllcacln Clnico, Jamado oric: por e;empo, en E. coN et:l<\ constituido
po1 \1'\il secuenci<t do 24S pb. En eocariotas, como ya se ha comentado. la enorme longaud de lo5 c:romosomas
rei91"9 101 de numerosos origenes de repllcac:in; aunque peor <:Onoc::id06, sto$ tambi6n secuenCias
cttr&eaerl sliee.s.
El proceso de replicacin :se rea!i.ta en la fiJndonal del genoma denominada replk:n. e'finidtt oomo
regln de ONA <IVO I)O(KIC ser teplieada a par$' de un mismo origen (pg. 145), Cada replicn oontiono, pues., un
orven do y se replica medlan!e d06 horquillas. MientrM en prcx;Miolas el croiTlOS(lma eotnpleto eons.IIWye un
$010 repic(ln, en euear\0&89 son runerosos v &IJfren la rtple.(in <$0 IOn'na easi Sinwl'll\ea, k> que supone la existencia
oe un complejo mecaNSmo de control QIJ!8 c::oot'dii'le el inidO, elongaclbn y tetminadn en todos los AIC)Iioones do cada
CtOI'I'IOSOm&. Estos aspectos estn pendientes <te resoluCin, al Igual que muchos ottoe relacionados, por ejompk). con
111 replicacin de 109 cen1rmeros v otra& rogione$ hetorocrotl"'tiee.s alilamente OOf\densadas.
Centtndonos en el Wlicio y progreso de la tepllcael6n en cada replloOn, surgen igualmente grandes coe&tionos
relativas a o6mo son las interaociolle$ osoeeifieas entre ONA y proteln&s que desencadenan la inic:iaocin, a la
consiguiente aetuocln do e&t<l$ y :11 contf<ll del ptOOeSO. Por delante de la de Nil()lic;M;in, OIP91'1i1S se
oonoce omo tienen la Meesarla deseondensadn de lo& cromosomas. la disi$cin de lOS rucleosornas y la
separacin do lit$ pr01e1nas hl540nas y no histonas (lemas 8 y 9). Por de:tr<\s de fa hOrQuaa, debe lambln aclararse
omo $0 reuliltan las tw.110nas y no his.tonas P8r8 a. de lO& nudeosomas. o6mo tiene IUI)CW la lenta
orgttnizaeiOn COfi'4*1C8 de la cromatina no hasta que fa horquilla do replicacin se on(:U(Itltra
mucha& kb <1delanto), etc..
ETAPAS EN EL PROCESO DE REPUCACIN 151
12.3.1.2 Protenas de iniciacin
Tanto en procariola$ oomo en 91 orlgon < n r9oonoodo 9Qt
que provocan el piqgue do 1. do ONA y c;rf,Wn vntt ton$1n II.IPerhelicoidl 11eg<'!!Wa que racilil<'! sepoW(I(i6n <fe
ncbr<l $. por la aOundanoa de ATen esa regiOn. Po' ejemplo, en ta secutmela esl3
accin se deoe a la unin especfica oe un Ollgmero oe la proteina denominada OnaA. que atrae a otras protetnas,
ptlncipMnente Onae (una heobcasa} y OnaC Tamblen e)dsten proteinas de nlcladn que se unen es.pedflcame.Me a las
secuendas de .-.clo eucaribllcas. formando un de reconocimiento del Otlgen.
12.3.1.3 Conexin entre la iniciacin y la elongacin: protenas necesarias
el oc;wnplejo de iniCiacin. replicaon precisa el de 18 OObJe Mliee, 8 M <!e
ha<;er 3C08$ible$ 1<'1$ oomo tnOIOe Jormar las nuevas hebtaS. El desenrollamlef'lto irlieal en et tramo
couespondiente al ori!)e'.n de repllcaciOn. por e.leC$0 de las prote!nas oe lnlclaCIOn. debe oonclnuar avanzaooo por delante
de 1& pollmetasa, encabezando la hOrquilla de replicacin. Adems.. a medida que &e van sintetllando las hebras t'KII9Va&
se debe r reo,perando el enrollarniento en la& nuevas dotlles h6ices En eS1as opera.eioncs de dcsonrollamiento o
relaamlef\4o y ervolamiento o compCtCta.ein in4orvicnen diYorsiS C$00C(IIiUidC'Is, El <::orn()l'-.o mJQiprotoico
formado por stas y por IG$ ONA I)Oimor;lr$9$. que viaj& 0\$0Ci&do ;l C<ldi'l hOtQvill<'l y rcllie3cirl se COf'loot
como repli$omit
a) Heficasas
E$t;ts protein(IS m1.1llim6ric:M se unen al ONA en el ongen y acWan separando dos
en un proceso que ruiere la hiOrOisiS $itn1.1Mne3 de A TP S. crean asl dos de repticaetn,
comienzan a awnz.ar en sentidos opuestos, cada una liderada por uM nelieasa. M CIOf la segu.da
inmediatamente por el resto de oocnponentes del replisoma o oompe;o de etol'lg&ein aSO<::iado <'! l.. 'l horqvilct
b) Pt01.elnas de unkin a hebra sencilla
Una vez separadas las hebras por la hellcasa. lnteMenen las de ul'liOc'l al ONA de 1-.etlf"a scncina. que
eviiM el ftaOOrelm.en&o de las hebr..s. Oe e51a forma. las bases nitrogenadas pueden acoger a los nucleotidos que se
inoorPOt.,_ en l;l Se oocnVnmont.e protei n<ls SSB (singfe J>trand bJnding en especial
et1 E.n oucariotas desempe;la esta func:iOn la proteina de repl icacin A (RPA).
e) Topoisomerasas
La: separacin de hebras oca&lOnada por la progresin de la helicasa a 10 largo de la cadeM de ONA eonlleva I.J
apariCin de pos!livog (X)( oelame ere la hc)fqull!a. Si se tr313$0 d$ un ONA lineal y corto. e1
superenrollamM!f\lO se podrfa ellmlr'lar pot Sir'np6e rotacin de la Mtioe en sentido con(r.)rio Sin embargo. s.ta no es
posi)le en los ONAs 01cutares (ptocatlotas) ni en lOS lineales de grM lal'nSW\o (eue&nota&). que res.tltan k>rzado&
tocxgicamente, detledo a su nal\l'aleza circular y a su unin a ptotelnas. P;)r;it olivittr e;a tensin de
totsiOn te requiere <tlgVn 1iPO de moct1nismo giratorio; e lo conlrario, el superetWotlamlento acumtJ\800 por de!Mt.e cto 10
horquilla llegaria a iml)edir el avance de lo replic;aciOn. Este problema se resuelve gracias a la 8Cdn <re 1M
topeisomerasas. afleran e1 est...-.to de supecnrolltlmiento del ONA &In en ovos aspectos su
escructura. E& inlel'(:()tlvierten lODOiSmetO$ modificaOOo el nmero de Mlace del ONA (ni de vuettas que de"
hebra respecto a la otra, p8g. 68). Las top<)isomer&sas UWI'Ibi6n on b$ procesos de recomblnaeiOn y.
troanspo&iciOn. constltuyenoo un meeaAi9mo baioo de modifica<:in de ltt motoola de
DNA.
152 REPLICACIN DEL DNA
Alerdendo a su modo de aOCIOn. se distinguen dos gr\C)O$ de topol&omercu;as:
l as topoisornera&a& de tl'po 1 9$Cinden 'ransitoamen1e una hOOfa del DNA (un enlace fo6fodi&Wr), dejan pasar
la olr.l por 1<11 brect\it abierta y vuelven a soldar o ig;ar la primera hobrct Comt) C(l(lsecoencia, el nUrnoro de enlaoe
o <isminuY$ en una unidild la rooccin lran$Curr a lrtt"" de 1,.1n intetmedi<trio <:ovalentt: entre uno <:kt lo&
ex.trcmo5 el ootte y tJtl de <Se 13 Al Qtrmaneoet 13 unk:ta asi al ONA Clur8nte 1.1
aociOn eeta!ltiea. se en tcXt> et grado oe tet'ISiM llberaoa.
AccUm de lns
dl upo 1: de tipo 11:
las de tipo IL cuyo ej:etr'lf*) dilsleo es ta g.rrua procsr161!ca. oonan transltoriamerrte la& Clo&
hebras del ONA, ti de otra doble hebra, por la brecha abierta y finalizan resellando los cortes.
Por er nmero de enlace aumenta o dlsi'IW"'U)'8 en dos ur.dade5. La misin de estas enzima&
inducir superenronamlenlos negatfllo& que facilitan el posterior desaparoamiento 10c81 El c:onsumo
enetgiiCO cJCI prooe90 eslmportaMe: se hldroliza una de A TP POr wn 1<'
d) Pdmasa
Como ya se ha Indicado. las ONA polimera$&& no $C)(I de iniciar la sfnlesis de una molcula de ONA. es
deCir unir 10$ dos primerof> niJCietldos. sino slo de alongar untt 1\ebr.t p-eexiStente: ello, e.4 lnloo de las hebras
nuevas requiere un cebador. Este es sirrtetizado por polimeta$a de RNA dirigida DNA (pg. 14 '1). denorrineda
pr lmasa (oe pn'mef. cebador en que cortas de RNA, complementattas de ceda una de las
hebras des-emparejadas en el ()rigen de replcadOn. En procarblas. la pRnasa es protelna irdependienw que forma
parte de un COMplejO proteico oenomlnado prlrno$om;) , ., 1<! horquilla. Ero eucariotas, ta aetiviad
reside una de las sub\ndades de la ONA polimeras& o:, distinla oe la $Ubunld80 CXlf\ el cenb'O acdvo pollmerasa
(taOia en p&g. t419}; por ello, se habla de DNApol <a/prim,
12.3.2 Elongacin
la teplic:acin depene no 5610 do 1<' ONA ptllmerasa. sino de numerosas y Pf0'81cos (ms Oe
20 e.n E. cotr). Esle conjunto de Pf(lleiM& que, como $e ha ii"'CJieacto. recibe el nombre de reptisoma o comprejo de
reptiC<ICJ6n, se asoci<'t tri torno a 18 hOtQI&l de tepllcaciOn, pal8 pettlper de fonna directa o eo 1<'1 slntctis
<toe ambas nebras.
12.3.2.1 Asimetra de la repl icacin en ambas hebras
Conceptualmonlc, el principal problema de la
replicacin surgo 31 ton$1<'ttatSe que ambas hebras son
$1thulliu'leamente, a medida <P.19 wvanza ta
norquina, mediante enzimas (ONA polirner.'I$C11$) que
SoOto &On capace5 en direccin S' N
abrirse la de la$ IWtf.lras progenitoras se
va exponendo en el sentido correcto para actuar de
molde. 3' -.,5'. pOf 10 Qut 13 s.tntests de su hebra
complementaria puede cranscurrir por simple av<anec 4e
la poliMetasa a lo tcwgo 091 molde ltt p3r ouo a:vanu.
la A o5t3 hebra nueva se la llama conductor. lfder o pul sl.nHtd); ero ocasiones, su '*bta molde
rcciloe el mismo nomt>te, pero pera evar confuSIOnes la lai'I'ICitemo5 "molde det l<t hCJbra conductora"'. P(l( el conttaliO,
la ob'a hebra progeni_,ra se expone en sentiOO 5'_,3', por 10 Que no como mOlde a medida QUe avanza 18
ETAPAS EN El PROCESO DE REPUCACIH 153
norqullla. COrno se -..eta en segukla, ra sJnte$$ de su compSetnentaria oo P<lt'lioolar que, entre otra&.
OOS3S, SU(Xll'le un desfase con la slntesis de la hebra conductora, por se la llama hebra retardada o retrasada
(lagglng sttand}.
La solucin al problema de sintesis de la hebra mardada se re'v"tiO 1111 Of>Sei\' Qve <JurMte ea l'tl)licttoeiOI'I ero
pos1bje aislar molculas de pequeo tamao de ONA recin (menor' ert t\.le&tiOtas en procariotas),
conocidar. como fngmerutn dfl Okazaki (por Reiji y Tuneko Ok<Jz:aki. que 10$ S. l)fopuso <WOI"'Ces utl
mecani&mO que la sinte&i$ de la llOOf<l retan:l8da en J>artllelo 1111 des;pl&lamiento de 18 liOtQu!lla oe tE!C)Iieocln,
consistente en la sintesis disoontinua da la hOOra retardada <:ada rragmento de 0k3ntki (OuoSQOI'I<Ie ur\3 l)(lteiOn <M
dlct\a hebra, wya sinlasis slO comieru<J (de <Jhi el nombro) cuan():) el 3\'SI'IOe de la I'IOtquiDa ha llletado sufiCiente
tongitud 00 &enc:iltl eomo la ta utilice oomo molde, en senlido a- .s. Se propone paca ello
la hebra sencill<l f()(m3 un buCle, arrolla sobre &a propia enzima. paca permlbr la sJntem en ef sentido
pr(l()io oe la poiWnerasa. La slntesls oonjunta de arreas hebras (la conduclora, de f<lrma continua. y la e
forl'l\3 diSOOf\lnua), por dos molculas de ONA polimerasa. se dice que es semidiscontinu;,
I.Qgleamet'l(e, la s.lntesas de cada fragmento de Okazaki requiere un RNA cebador. W\4ezado por una actiVIdad
pftnasa (parte del pnmosoma en procanotas. ONApol (l)'prim en Qvt vraja eon 1& horquilla y que
slnte1lz en el origen de replicacin el iDeo <:.e:bador POI' 13 hebrt'l OOl\(fuctora.
12.3.2.2 Mecanismo de la elongacin
Avanoe de un.a de las horquillas de reptic:acin;
la sfntesis continua de la hebra conductora es simultnea a la
sintosis disoontinua de la hebra retardada. n fragmfltos d Okazaki
B == ?:


l ' na \1:1 tcnnitlllr.l..-, d M'lii'IC'I f111gmcn1o
de y fu.:n de la
h(lrQ\nJia.. <""'
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cl ecr.:cr fumcMQ r,k Ol:ll1:1ki
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Vl:'1: )C ' ':ur Mntc'lu.andu
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L& hcbrJ.
clonp ndc de
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J' n
crccimictul))
Gr .. a qo.K" la hcb111
tl:Uiftliu;lll (Qill\l nn
buck. b s.lulS..S )C
bat'cr .S ;J a ID
v.:1 DVlltl1_1 la
bor\lll ll la
154 A.EPLICACtON DEL ONA
Para que la slntes.ls de cada fragmento de Obz.aki se realice en el enlOMO de 18 norquilla, el l>uC:Ie do hebra
molde en tomo al rep(soma debe sufrir algn tipo de eVOiudOn en cuaMo a su tatnal'iO y diSC!O$iC16n, deSde Que $0
comienza la sinle&IS del fragmento hasta que, una vez terminado. se libeta el bude. ya de doble hebra. Este mecanismo
refuoru el ooncopiOdt dis<:ontinlidad on la sinlosis de la hebra retardada:
1 Progreso de la slntesis de un fragmento de Okazakl 1
(slnte&is del n 2. durante el periodo
de la figura anterior. &e incluyen en es&e ceso las
ta dtferenle dls)OSicitl y variaCin do
e
y
Una llc DNApol & o c. 3.!10Ciad:! a la
donga b h.:bra
,.
-t
Crecimiano del
ftagii'ICIIW> de Okao:llld
,.
-t
,.
1) - un
2) - un
1:1 iDNAun.cloa b molde c:s reconocido JIOt' In ij
J)fOictnn I'*CIOf" de C (RJ-'C). que hace que
pOI o. k" iepare dtii)NA y $C ut1a el tis:tM n ( lnr d'
prolif tnein ccl ul r (I'CNA), <lita ptOt.eiiP 1 u
w.e pol6 os. qm COf11in6an 111 eloopcitl.
A co:uliMJaCin se
coiDC'lzani la dt:l
ETA.PAS EN EL PROCESO DE REPLICACIOH
lkpn:.')(l.'nl<lCti.n glob<l de -.>rgani:wdn de l<ls llrl''llCIOas d('
replicacin dcl l\.--plisom:l.) en nrno a bt horquilla de replicacin.
1 a 1110Sir.td3 oom:spondc- o un llll'llK'nto mtcnncdJO de la <:kmg.m:JOn, t.:oJfl un JhgnX'IltC do.'-
Ok:uaki sinlcb:tado a nll:dllls t p.C:J.. el n" 2 colas U).
I'Q c:bridad, M s.e n'IUC'Stt.ll\ orros liK'tii'CS procdCIO.". oomo l'l PCNA que \'3 hS- ONApc>l
de lll.tdcas.."'S FEI\' 1 H 1 que ltlaiflml l05 (r.\g.mcntOS <k Ok;.;ald. J: l. )'I;S
tomisonlcti'S:IS n:gul:m cl.upcrcnn.JIIonnicnlt.> en li.l.; t.luhlcs lu.::bw"' l>fQstfll<\ta e hi1:
hdfi!
t.,l(l,jUdl 1101
molde de
1:1 hcbrn
cut'ldu<:tora
(A hd.r, C01\l.f11Cilli':J
un ecOOOOr lilo
.;imcti<!<kk> por la w;undud
prim.1sa de In ONApol"
Lll>'-1 \pi! l) hila (;l \;tll Uil b
.. m,_ ti< 11la.-t.r.e nmdu./(1'/J d.:
155
l.:. ON:\(IUI o micia la
cltl,g:tci(,n.l.'(lfllll ONA.
d-.:1 R t-. A cch;s.:k> do: l:i
hdw.t. ;,)nthu::lot:l
molde de
101 hcbm
s .:onductom
Ml't\ , proi.C'il)l de
UI'IIOn a ho. .... l ll
1 ,..-n111f 5' ndkaOO
('r llt.cl\ .., -
h
1
1.1
IL'rl Ir u:ntl'-. de o:...s/.11..11 .1/ '-:;:;:;::-;:-::;:-::--.
doble hebn:
hija
di:
IJ hdlr.l
rctrn!;.'lda
Ln hcbm n1an.tada ncsltlt un
1.-ad:e fmgnt.:lliO do:
Ok:v.ttkt, 'lolf' In
fs.::li\ id.1d J'f'lrll.f,;.:j d..: la
156 REPLICACIN DEL DHA
12.3.2.3 Maduracin de los fragment os de Okauki
Para oompletar la sl ntesis de la hebra retardada. deben U"'lrse 10!1 ffagrnet'llos de Ot<a.zakl. Esae proee$0,
denominaQo maduracin, requiere lit eliminacin de loe cebadote6, la elongacJOn del fragmento adyacente
para con DNA 01 hueco dej<'do pOr RHA cebador y la unin o empalme de lo& eldrem06 pera
dar una hebra conurua. Tooo tAO llene 1ug1u en de 13 pt(IC)itt hOIQuilla, o bien
posteonne.nte. tejos oe etta.
1 Maduracin dO uno de los fragmentos de Okazaki J
(se $010 tal hebra r etardada y su I'I'IOICit)
La Ultima on 0$1a de 1<' hebra re1ard&oa, la unin <te los es eatatiUda por DNA
ftgasas (o sin'()lerneote tlgat.n). El m&eanlsmo qulmlco <te la reaccin es el siguiente:

(OI)IIM,) I CK"Mede
NAO""
dt h. ,w,
y do' uunsl:ul1t'mll)
A1' P:Mil'"
de! 1'4
ydt-euttn0118)
d<l'l hcboto<
.. ec.mpktimnw:
pero C'!ll llllll de- o'lbo ra!Q

.. C .. G
1 11 111
-'1'-'1'-A-A G-C-
...
- A .. A- T-T-c-G-
1 1 1 1 1 1
T- T A AG-G
Reaccin total ; D'IIA''I' ,._ H03'-l.l"A + NAUIAlP -o 0:0.''I>.1'.UNA + A \tP + '')1:0. PI'
a I>N" s -AOf' C'll t r- IIC'Ii \11&! dtl ll'l'ntU , p dd DNA V
t l .u.tllt' nudroli llt(l del J'..QII (llnl-.n-.:rw o:lo'Rille
do OS! papel nsdgloo. las llgasas &on en.n-nas de gran utilidad en 01 &ilbora'Orio, jonio las
nocl8asas especialmente para la preparacin <kt molQ.IIas de ONA reoombinantc (1Cri\8J 16).
ETAPAS EN EL PROCESO DE R.EPLICACIN
157
12.3.3 Terminacin
Ul'la vez descrlt06 lO& detalles p<trtiC!kf del nocio y etongabl'l oe ta fe9licaci0n (l()(t'e<sponoe e&.tudlar 10&
de la terminacin. Debe Ql.'t e$1e I>>CCSC> no se conoce tan bfen como lo&. antenore&, entre otra&
razones pot ta propia amplrtvd y oomplcjid:ild del de Se trotat aquJ de exponer lo&. problemas que
piJn4ea la tormin3ciQn Cle$de oo. puMO de y su
12.3.3.1 Final de la elongacin
Se puede oonsiOtrar, OOtl<iePM!Itmenle que lB tem*'laciOn comprende varios aspoc!O$ E1 primero ellO$ es 13
finalizacin dieh3 de ta f!!Mgadn por te ONA polmerasa, que so vcrrfic.tt en 13$ dos horquillaS c:se
replicaCI6n de r(l(:6c;On. prcviSitllelente cuando en w avance alcanoen a IO'Is horQui!l" r0$1>e(ti'V3$ de repliOOt'les
adyaoontos ste t$ un proceso prctlcarnente desconoado. pero cuya resotvciOn no Clilicunaa conceptual. pues
al reler'IO oe nueoos y la unlon de tos dos tram06 da nueva h8tlr<l pve<Je re$0111'etSe de 18 misma fOtlTia que la
1'1\tldur<'CIOI\ y uniOn de los fragmentos de Okazaki en lit rcWrdl'ldl"
Pot otra parte. como segundo problema. lalt'l POI' bCI;)rar cul es el nt:.nero de replicones implicados
s-'l"'u11Meamente en ta replicacin de cada Mi como tos me<:anismos de oontrot que coordinan E\1 proceso
en todos elos. A diferencia del caso anterior no existe t'Un una hiptesis previsible
1 Repfesentacin esquemtica de la replicacin de un cromosoma eucaritico 1
r..:rl1n>n 1
1 .. -
h"l'h.,m.!


J
'
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( ai .. .,.,,. "' z .,... ... )_
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'



8 +--,,
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T('do; lo.c po1 nudo:uaJ {fi<.NI ) RN:a.."'ll 1111 y
In del (fllmento de
dr lo-s f)jll(-11\(IS .k hebrns >oel re m ""
'
SU)Ilh"',Jo,., tllo.. lns tiiiC\oiiS ms en 5 ( f\lle ""''ldc:
j i
11
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.....
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V
J
)
12.3.3. 2 Replicacin de los telmeros
La replleaciOn de tos exttemos del cromoSOil'la eucarl6tloo supone el tetcer problema de la tem'linaciOn. pues.
como &e vera en seguida. no pUede llevarse a cabo mediante la elongaon IXl" la ONA polirnersw. Este proce&O e&. por
ahora, ef mejor conocido da la terminacin. posiblemente por su ma)'Of traS<::endencia fisiolgica y pa1ol6gica.
158
REPUCACt0N DEL DNA
Como ya &e ha estudtado,. bs tel6meros son reglones s.tuadas en 10$ dt m oom06011'1a& lineales de la
de evc::uiola& (pag. 92,, a las que se unen ciertas protelnas. Estn constituidos ele 1ar:s faiTilias de ONA
repetitivO no eodHiCOU\1e 113 formando b5oqiJes de 1 a 12 k.b de long!lud, con unidados de 6 8 pb en
tanoem O!'!t'ltenMM o mit"s die V9Ce$ Para entender la impllcacl6n de los teiOmerO!I en ta roplla.ciOn debon rooord;<ii$G
sus dos princi(X'IIcs 101 l'bund.imcia de repetiCJOfle& en tndem y e1 car&cter COiteSvo de 10$ el(trOIT\0$
{Q\le rea.Jef'da aunque $In 1\Jnc:iOnal alguna, a los elltremo& resthames de la acdn de delttl$ enzimM de
reslrlocin sobre un DNA,. pag. 2011
El carcter oot\oe5iYI),. en fOI'l"'''::l de 3' en uno de lo& exflemOS de los cromosomas, lat'I!O palflll'IOf. como
filiaM&, &e expllca por el mecan.smo de te-plie&ein diSOQn!inutt do loa hebt<J relatdada (figura anterior) Como
OOo$0CIJCnci3 tldiCIOflal do dichos saliente& 3'. se I)I'Oduc:e un aoonar't'U!f'lt.O ptogrtSivQ do la$ hellrol$ 00 ONA en
sueestvas f'Ondo1s de
z
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f 11 .:.111 rond11 de lul lidltnS fllle\"1111 "-'11 tn.ie\ CIIIM:lti Cl'l 5' q.;,e MI (ll(ll;,ie, (.l)ln.)
coaSueocJa, b klll!:itod del tron'IOSOOla w: ,n a.:onando progmi\1llfiCI\1C. M !>115dos o
Este acortamiento de las regiones telomricas (calculado entre 50 y 200 pb por cada di'l!sibn celular) 5UP008 la
disminucKln ptQgfesiva de 1<'1 6et ( rOnl0$0m{' <'1 IQ 1W:gO <.5t $UOHN':l$ divisiones oolularos. oon eonsiguien$e
probl(lmo 'l la del met'$aje gentiCO. Este pr>r.ema se j:XJ(I(Ie rQ!v(!r on ,., cith.Mt I)I..Ci<'I'S 'l
lt'lmblft dtlrantla S del ciclo de di'IIISin celular (tema 9), de un nuevo lipO enzima, ta telometa.s.a.
que a&atg:a 10!1 tetomeros. c:ompen!l<lndo asl aa prdida
12.3.3.3 Telomerasa: componentes y caractersticas
So M pmpue!ltO qoe la !elomerasa tn un re!lto tWOiuii'IO de una nbozima (p&g. 76) que pudo servir antiifme!\te
pam anauuu la slme!lls de ONA; que pudo suponer un if'llarmeo.ario en la tran:slo6n eVOIUwa desde las RNA
repllcasas a las transcriplasas inveJ;Sas proteica&. Se trota d4t una cnvrna d& 1ipo ONA polimafa:sa. ooncret.amente un,
pollmerasa de DNA cflri9ida por RNA (p,g 147) y, pc)f taniO, 196 y 206), pero oon
caracterlsticas especiale5. Efecllvamem,, $0 trota do uM $lo et (<'l)ttt de sinlotiwr una
69CUencra DHA. y qJe nlil pc)f dos
1. Componente ribonucteotldieo o "RNA de la W!fOmefasa {TR o RNA.}, de tainaflo vori;)blc
6e(P(Jil (desde 146 nudeb<los hasta 1.544), que forma pane integral de ta enzima. tnc:tuye ooa secuencia.
ETAPAS EN EL PROCESO DE REPLICACION
159
caracterlsbca para cada especie, de 9 a 28 m y tomt'!ementari3 a 1a secuenca telomtlca respeal.a Por ejempio, el
RNA ooml)(lnenl e de la leloiTIE!fasa humana ( hl'R) tiene 450 nt f)tltre 10$ Que My una se()l,l(!!t'l(:la f"'C3 en C.
oomplemenu.ria y a la hebra nca en G de 13 repetlctOn retomrlc:a (S')TT AGGG(3). Graaas
a ona, oomo $t h.Jt90. el hTR s1tve de molde para la sintesis de nuovns. etomMCM.
2 Componente proteico, que contJene la actividad nzimtica, o tr-attSCrlptasa inrersa oe la ( TRT o
TERT. de telomera.se lflve.t'S6 trooscnpt,se} SI<'I es 13 te.lotnera-sa diCha A dlfetencla de la
IT.(InSCriptasa inversa vlnca y 0e1 te610 de ONA pollmerasa&.. ot ONA te1Qm6nco de (N)VO. sin ne<:e$idttd de
c:ebadOI' alguno.. Generalmente suele Ir acompel'lado de otri.l& no cnlalilicas. pt01eieas.
12.3.3.4 Mecanismo de ac.cln de la telomerasa
Primera fase (A): La telomerasa alarga el saliente 3'
tdmcro hunUtno
\(
- AATOCCAATCCC -1'TAQGG'M'A.Q(;C'M'
de
tciOOtrico y RNA de l:a tt<h!lllell!l'l
ni.X'''""' nudrot""""
por b

,.,.
-MTCCCAATCCC
pnth m.1

humana
( A 1) """"""';;,., <lo O> 1C10mo,._O )
( A2J """""' .1o ..... - )

Fl (ltO!dcndc la
au.lix:t la J'
<'fnpii:Jll\lo) onl(l 1!\\lklc t!l bd)l:to de k NA
i.k 1 Pfl)JII!o tdc)mer..-
( A3J .. ns1ocacln )
lil 1\'IOmC!'til ,.; (i
}' f"I'C\'Iilmtnl.(' .. IIJ.,,
(>.'otiS..,...undl) 111 ;.'m!lkt'!lCMan.:\lild
p-..,;Q.:< 3 l, de>
-TTI'.OOG1TAGGQTTAGGG'rt' l't.fi,QI;Tt' AQ;(;t'TAQOO'l'TA<;GC"M' AC<;QM' ACC;C;TT A(;
160 REPUCACtON DEL DNA
Segunda tase (8): la DNA polimerasa rellena la ooa hebra
12.3.3.5 Funcionalidad de la actividad telomerasa en las clulas
En 1(11$ o61ula$ tomfrtiet'IS de 1<'1 de tejidC)$ adultOS no est.e aetMdao mientn'ls qvc si 0$1;!1
en c61u!M de la linea germinal, en tejidO$ fetales y en ciertas ClulaS maore
todas eliiiS clulas (lOO() y en r;\pi(lal so oe,. a la de la ell'tlfesin g6nica, al
igval qve ()l3t3 CU&Iquier (tema 20), petO aqul no se neoetlta erwar en toiS meeani$(1"1()$ IXlf lOS que $e evila
1<'1 expresin de 1<t Sino que deStacar sus oonsecuenaas.
En ausencia de telometau. a medida que las c&lulas se van dMdlendo -y envefeclendo- sufren un proceso
constante- de aoortaiTII8fllO de sus telmero6 (pg. 158). OaOO el repetitivo y oo codificante de $106,
esa p6r(j(Ja, de lOs extre!TX)S de cac:.la trOI'T'I()$()rtTI3J no tiene consecuencias. pero noga un
todas l<ts rcpolic:iono$ IOIOm6rit:a$, en que afecm a regiOnes eoctilleante$.. y entOnces 13 se ve pcrjudic.dn
y IJ ol\.fa; tetmil'\;l par morir, S. M 0Qn$i(Sct&<JO oorno p:.rte ese un 1e/()j OiQrgicO o cciufN Que mide el
procesc> de contando' el nmero de dhrislooes hasta <JJe la clt.'a debe morir, para oootrolar asl su
proli!eraein corretea en los tejidos.
Puesto que en la may pane de las clulas de un organismo no 1\ay actividad telom8f"ii$CI, este a00f1amiento es
fisloK>glco y se produce oontinuamente la ... de oo individuo En M ha dem0$1r..OO Que la prdida
de repetiaones telomncas aumenta proporcionalmente al nUmero de divisione$ mit4:ie8s o a la odad
del individuo al que pertenecen las cUM. En consonancia con e&le hocl'lo. se ha ob&ef"o'atlo QI.Mt la inlroduocin
af'bllclal de telomerasa en clulas somticas normales repono .., pn:lida de telmero&. Se ooncluye. par tanto, que el
acortlwnicnlo tclom6rieo e-sltl telacionado invet'Samcnle con Cl gr&OO de i!"'mort.etid&O O&lular y. en defi!"'itiva, que Cl
cnvejotclmleruo es un.a consecuencia de la prdida de telmer os con la edad. Ello e64 tantin de acuerdo con la
prdicl<t acelerada de teliTIQfQ$ oblservad<'l en pacientt:s de vttrios <Jo envejocJI'IiieniiO
La tcJomer-;au est i prc.s.ente. por el eon1rario, en easi todas las oeuas en prOileraeiOn, en espeCial en las
clula$ tuMOmles, corrttlbuyendo junto a otros &actofes a la proliferacin lnOOflnlda de tos n.mores. A&l. el aumenlo de
accividad telomera&a obMr'iado en fa&e$ tardi<t4 del progreso pUOO. $Or noc....-.r> el crecimieo!O del
1\lmor. 011 impedir Ja, muerte
Por con$9Jionte. se NI propt.teStQ 13 i'll'lil:lieiOt\ de la accMdad telomerasa eotr'IO un prinCipio de terapia
antitumoral y la telot'l'l&tMtl se conSidel't'l una <tana Se buscen actualmente lnhlbldores especltlcos del
COr'nl)<)t\ef'lte tat8illtieo eJe la telometasa runana. ttwmacos y que ac:Wen modulando la telomerasa o cualquier
olro companertle asocit'do <' lO$ Estos tienen lM\ gran itllef's aplicado en reladn oon los
problem*S <Jo envt;eeimiento y Ct'ICer.
12.4 REPLICACIN MITOCONORIAL
la repllcaclon del cromosoma mitooondrial humano se realiza POt oo mecanismo peculiar. di:ferente al $$b./diado
para los c;a$0$ de procariotas y genol'l'llll nUClear oe eucano&as.. PreW&mente, se deben ntroduclr alglM\09 conceptOS
relativos a esta molCula Cle ONA.
En el cromoeoma circular, una de las hebras PG6M un ma)'Of' contenido en b<J$$6 purinicas. par lo
que se conoce oomo hebra pe.uda o H (de MJvy. en inga6$). miontms que ea 04ra es l<t hebra o L (lighl), Por
otra patte, ooa zona particular de la molcula recibe el nombre do na de ct..&doblamionto o ckt dotplaumicnto, o
bucle O (O-loop): se trata de la riC<tregin oo del ONA <11.* desempci\;t el papel de rcgiOn do
control. oves OOfltiene el Ongen <le 1& hebra H y lO$ <Se ltt'lntcrii)Cin <Jo ambM hebrM
REPLICAC10N MJTOCOHDRIAL
ONA
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161
La !)limeta singl)l(lr de l3 replitacibf\ del ONA mdocondrlal es que no tiene llgar especlhcamente en
la fa5e S, sn:> a fo largO de 1000 el cielo celular. E1lo e!U de acuerdo oon la dviSin de las mitooondrras durante la
en oon la oM&liOn de ocros orgftI06 y e la c.lul<'l Adem.ias, no tOO;t$ la$ molCl.lltiS de DNA se
replie&l\ una ...e.z por clcio, sino que lo hacen al azat,
La segunda peculiaridad que diferenCia esta replicacin de la del genoma r-.,deaf es $V avnnoe:
meoiante doS hOrquillas que parten <le origenes distin1015 y avanz-an en sen6do OI):J0$1o sint.ti:ando 1.1n<' SOI<t het>ro
caaa una. Cano consecuencia de este mecanismo, la replicacin lamllin s. diferencia de la do! ONA PO $el'
no simultnea, bHocal y conti'nua (no M klrmaln l'ragmen4os de Olt<'Jtaki, !Ois dos llOOr<ls s.
conductotas).
Rep!icaCIOn del genoma Rep -caon cel ge,oma Replicacin del
Carcter nucM-.-r de eucaliolas mitoconclrial 00 flCOOma ptOC&ritiCO
semiconservadora
si si si
Simultnea en ambas hebras si
no

seeuef'ICiaf si si si
Bidireccional si no si
Origen mlllples

1.1no para hebra
NOO

brfocat
monofocan
SemldiscontnJa

no ( C()fltl!\,l'l etl
"
hcbl<tSJ
Tema 13
Hibridacin de cidos nucleicos:
fundamento y mtodos de ensayo
13.1 Introduccin: De-snatural izacin y renatvraliz:.ac:in del ONA. .............. ..................................................... 163
13.1.1 Aglen4e& detsnalur;;a,lizOJntG$ .... , ., ........ ,........... ., ......... -- .. ................ . . ...... . . ..... .. . ....... . 164
13.1 1.1 DesMturali2&ein y renawra!lzacln por electo de la temperaiUra ......................... ---- 1&4
13. 1.1 .2 por cu:tos y bases. .. .. . . .. .. .. . . . . 164
13. 1.1.3 por agentes c:p.Jimioos ------"""'' , ... . ............. ,.
13.1.2 tnlluencia de fa desnaiUratizaciOn &Obre tas del ONA 165
13. 1.2. 1 Influencia 60bte lot vi$C0$1dad ... .. .... , .. ......... ..... ------ . . .. ........ . ........ . . .... 165
13. 1 2 2 lnflvenci<'l $()()re 3bSOre.)tl u11ravi01eta '"' ' ' "''''H-<H<><>H < HH-< <><><< < HHH < < < HHO<-<-HHHH 16S
13.1.2.3 Signmcaco l)f'CiiOO de las OJt'tas de <Se:snawrallzaciOt\ .................................................. 166
13.2 Anallsis de la hibridi!lcin do .c:idos nucleicos - ............... -............................. -............. 167
13.2. 1 Principio bsico del <le hit>ridaCIOn ....... _,_,., ... ,._,_,..,, ............................................................ 168
13.2.2 lnfluenci<'l <le f<"Jc:tore$ sobre la Nt:ld::te.!)(l ............. _. ,_ ............. -............ -..................... -......... 16B
13.2.2. 1 R4got de la h!brldacion..... . ................................ ........ ........ ..... . . ....... . ...... . . ... 166
13.3 Mtodos de ene.ayos de hi brid.-cin ............................................................................. -............................... 169
13.3. 1 H:ibndaci6n en f(l$e liquid3. ,._,_,_., .. , .. ,_,_., .,,._,_,_ .. .,,. .. _,_,_,,,. .. _,_.,,.,,_,_,_, .. ,,,_,. .... _,_,_,,,._,_,_,_,,_,_,,,. .... _,_,.,_,_. 169
13.3 2 en $OS)C)t!e slidO ...................... -....................................................................................... 170
13 3 2.1 Hil;riclaCIOr'l y '"StolbiOf ........................................ -................... _,_,_.,,.,,_,_,. ............ 170
13 3 2.2 HibfldaCIOn oe Soulhern ......................................................................... ....... -............... 171
13 3.2.3 Hibt'ldaeiOt'l NoMern ........................................................ _,., __.,.,,.,._,_, ............. -..... 171
13.3.3 Hlbrioaci6nlns1tu ............................................................................................... 172
13.3.3.1 Hibridacin in S/.tutisolar _,.,.,._,_,_.,,.,._,_ ...... ,._,_,_.,,_ .. --- .. ----.... -----.... _,_., --- 172
13.3.3.2 HibriclacininSIJucromoSO'IICa ....... ................. ....... . ................... ..................... 172
13.3.4 Tcnicas relacionadas ........................ ,.,_, .... ,.,_,_,., .... ,_,_,. .. ,..,_,_, .... ,_,_,_,_,_, ... ,.,_,_ ,._,_,_, .. ----- ... 173
13.3.4.1 Transferencia Western ......... ...... .. ......... ...... . . . .... . . ............................. 173
l a hibttdacin es oo fenmeno de import.Mte aplicc.cin prctiCCt on IOdas l<tS ilf@iiS do 13 8iologla MoleOJiar e
lngenierf.a Gentica. y en especial en la Patologia Molecular Ptatill c.omlltender esta& es pteCI&O estudiar
prevt8me:nte 18 ITI()IeOO.W we 1vn(S31menla este Pf'O(le$(l y los meiOdos oe ensayo etaDOrados Ntfl su ttOiieaeln
(M este ten\8.). asi como la91&enieM de pteparaCin oe sondas (tema 14).
La hlbrldaclon est basada en el pt008$0 de renaturaizacin de dOs cadenas sencillas de un ONA.. que se
observa. por ejemplo. al enfriar lenl8mente una &Oiucin del ONA dplex previamente desnaturaizado por calOr. La
del aparearr*!luo por puentes de hidrgeno entre bases complemental'lils (A T. A .U o C-G}. presentes en
cadenas sencillas contiguas, da luoat a estructvras de dOble hebra. de gran establiclad Estas QUeden ser l'l.ibtidos
ONA..ONA, hibdO$ RNA-RNA (ambos o hibridO$ ONARNA
13.1 INTRODUCCIN: DESNATURALIZACIN Y RENATURALIZACIN DEL DNA
Pl.le$1o Que la surge de la observaciOn del proceso de <Jt un ONA prcviamerne
desnan.ratzaoo. se estudian oomo ll'lttoduocln tos procesos de desnatura!lz.aclon y renatvrallzaCiOo..
Al .gua! que lcJ.s proteinas. los nueleloos s dtsnaturallun por e'ecto de ag.enteS qui mloos o ti8iC08.
$u OOtl'c>rmaCiOt'l tri(Jimensional. et1 t$1)e(:i<'ll la f0tm3 <let ONA, La <lt$naturalizacin se debe
ltln.a 8 la rotura. de los puente:$ de l'idrgeno ontrc p;are$ do 00$0$ como de intoraociones hidrofbicas entre baS%
164
HIBRfDACIOH DE CIDOS NUCLEI COS: FUNDAM.EHTO Y MTODOS DE ENSAYO
apiladas AJ <Msnalum!i.uww, I<'IS dos del ONA s. y a \1'18 oon6ormacln al auw {o de o-.-o
aleatono}. sin que se la esttucnn ptlmat1a. pues oo nay rupttn de c<walenlos En el de los RNAs,
oon muy distinta con#ormadn tricllmenslonat a pesa' de su analogla en eswcbJ1'3 primaria, 13 Clesnaturaizacin afecta
fl.ndamemalmente a los tANAs y rANAs, ya que son lOs que pteSMtan regic:ltles en CIOtllt h61ioe. Al no dar lugar a
experimentales. la de:$nah .r{tlitaC:i()rl dl RNA no se considera de fOfi'Tla particular en este tema.
13.1.1 Agentes desnaturalizantes
Aunque pueden considerarse desnaturallz:anteS bs miSMOS l&ctotes que aetU&I'I tobre las proloin.M, $IO :;o
ci"'rn aquf, brevemente. los cidos y bases y cierto6 agentes qul micos, para oeotrar la atet'lcl6n en el e1& <Je 13
temPatura, oomo faoctot representativo AUJ"qJe cada uno de ellos llene un mecanismo paruculaf de actuaciOn. tocJOS
debifllan las intetaociones por poontos 00 t.drgeno ykJ de apila,...,!() de bases. conduciendo a un mismo PfooeSO de
y dO $ep3:r.Ci(ln de la$ Fleblt\$.
13.1.1.1 Desnat uralizacin y renaturalizacin por efecto de la temperatura
La letnperal\lfa, e1 de$n81llfl'llizanle mM tec)(esenta!ivo. acla <St lt\ torma
El r .. knllll1lJC'IIIU :;;nu, u:d del
O."rolA okhtlilll "'"
O: b doblt.:
le (Qrma que las
1 molcula de
DNA de dobk hebra
Si <:1 \n(n,mi('Dit! l't ltlltll-1(' y a
N.jalr (lwm 21).)1) <('). hay pG\tiblli,L"Id
do: .... M:
"\'flC!UI'Nh.''fl !f fOtmen d: kas I IUI:III.:l oJr:
U htbfi!J .sc- o,k,;:.:nrnr:tm


desnatu ra lb.acln

hidtg.tno cntn: l;u
("ltmplaotl'q. 1..11->W pul<:
l>('pk"flll'lllll
Cllntl'I1U11
M' CUflllllll& )'
""""""'
calcmamicmo
2 mol(ulull de
ONA de: hebra M':nellla
de lao :ttQCill
el miSil)(! ONA
okoblc aripn.al:
s..: pt'l)IJJJ.:e la

:a tu ra Hl-JI ci n
del ONA. eli.'l'it.la

e>$ rt'\'cn ibli'.
cnf1iamicmo
lento
En general . se el proceso de de$nallJra!iz:aci6n para el estudio de la e&ttuclur8 del ONA. micntrn Q1.10 &3
renaturaHz.acln 86 til oomo bas& de la& t6cnic8s d hibridacin, de enorme en BiOiogla MoleeuiiU e
lngeneria Gentica. La e$ ctltiea en la tCnica de PCR (tema 15).
13.1.1.2 Oesnaturall:tacln por acldos y bases
Como ya se ha (pg. 42). el apareamiento de las bases disminuye o se debiliu. po1 valore& do pH
alejados de la netStralidad. con la oon61guiente del ONA Sin ..,bclroo. oo mediO ;)Qdo QOnducir
<' 1;) rvpturn de 1:- e$truelllra primaria de 109 eidoe nuelelcoe (recuerdese que el medio eido luerte rompe 106
enlaces rostOdiS4er y N-gliCOsktloos. mlenb'as que en oondiciono5 ms &uaY86 -f)Or ejemplo, a pH alrededof de $8
sepet8f\ las purir\as: pg. 35}. Por ello. para la desnaturalizacin del ONA es ms habitual emplear rondiciones alcalinas
(a las cuales el ONA. a diferencia del RNA. 86 estarl*t}. l a dol mOdio puoctc permitir la rocuporllci()n ele la
estructura de partida, 85 decir. ltt ronatur:lliucin 001 OHA (oon similares a las de la deSnallJrallzacln
pOr<;<tiOr) ,
INTROOUCCIH: OESHA TURALIZACIN Y REHA TURALlZACIN DEL OHA
165
13.1.1. 3 Desnaturalizacin por agentes qumicos
Algunos de tos tot'l'lpUHIO$ tt"'l:lletldos con ftetuel'leia para d&Snarurauz.ar el ONA S(W'I motecutas &enellas
atlamente polares. con grupos amino y stO$ le$ '*milel'l competr en la fotmaOIOn de enlaces de hidrgeno
con Sos grupoo amino y carbonio prOP<I$ <le las bases, raciti!ando asl la ruptl.l'a de sus apweamKm1os y la consqnente
separacin de las hebra$.
Agentes qumicos
dcsnntumli..:ntcs.
<k uso ms
o
11
e
II! N...- '"l"l-l 2

o
11
e
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II.,..C,NIIl
(onnamtda fonnaldchdo
del tipo de &cei6fl del agente desnatwallz.ante y de la fOf'l'l\i oomo 9$13 &e cli,..,, se puede
oonsoguir la tet'latl.lt'alkzBCin del ONA. de modo anlo)o a lO$ Cii$0S an1oriOrC$
13.1.2 Influencia de la desnaturalizacin sobre las propiedade-s del DNA
En l<l {)filcUca. ta desnatutaiJZaci6n del ONA. se puede seguir fcilmente miditttm propl&OadeS llsicas que
permite' dlletenclar eJ ONA de doble hebra y ol de hebra scncil!n de exJ)eM'IeMan profundos cambios
(lurttl'lte e1 aumento de la ab&eroi6n ptica. cambio en ta rot:aciOn ptJca, avmemo de 1a oeMic:Sao de flotaclon y
descenso de la visoosidad. Las ms utilizadas $01"1 la tlb$01'Ci6n en ttl U 260 r'lm) y 18 viSCOSidad. A pa.u Cle
estos cambios tambin se puede oblerMW .,formacin de tiPO .structvrat del prOPQ CidO t'IIJCieico este
aspecto no se oonsidera aqvi)
13.1. 2.1 Influencia sobre la viscosidad
La rel81iva11gtdez de la doble hlloe y &u inmen$<1 aoogitud en (11 Meen que las diSoh.JCiOI'Ies de
ONA de doble hebra sean muy VtSOOI$a5. Por el conlf<)rio, en forma do htt>t<l $enona et al azar de la C$(Jf!tl8
hace que la 'IISOO$idad Mli'l menor. Dt COI'I a1 aumentar la .ernperawra. el pH o la concentraCin del agente
QUimtOO y produtirw df!sf\Munlllit3ci01'1, se obSeMilM\8 Oisminueln en la viscosidad de ta diSOluCIn de ONA.
Cambio& en tn vi$00$id00 y 8b$0rtl0tl optiea del ONA por electo de la temperatura
(resvllada$ similares se obl.lef'lel'l con otro &gente desnaru!llllzante)-
A mayor temperatura, ma r arado de desnaturalizaciln
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TemP$t<llliriJI ('C) r empclfllltLr.l
(rMn13tmeN;0, pH Oo:IIIOt'f'llllliQOI\
tsmota""""''" l)ti o
de aQbl!le IJe
Descenso de 13 VISCOSidad
AI.IM(!I't\0 de la abSorCin
<a
13.1 .2.2 Influencia sobre la absorcin ultravioleta
Recurdese que ltt& base& n.trogenadiils, los nv<:lo$idos y los nocletlos poseen valores milxmor. de ab&Otci6n
de la luz cercanos a la longitud de onda e 260 nm. dobidio a ta P1'9$$ncia en &u molo.Aa de sistemas conJugados de
dobles enlace&. E!M propiedad se mantiene en los cidos oocleiC06, pero la tna9fW!IJd de la absoran no er.la ITIISma.
pU$6 el apilamtento y los puentes de t.:kgeno la reducen (a eSio se Wt llama efecto hlpocrmlco). Pot ello, el ONA. de
hebra atorbe en simtvr a los R:>r.s. mientras ooe el ONA de dotll8 nebra absorbe
mel'los. CO<I eonseeuer'M':ia, la <lesnatulaliZaCil'l del ONA va a001pal\acla de ul'l aumento en la A.-x,o (al que se Lvna
efecto hipercrmico).
166 HIBRIDACIN DE CIDOS NUCI..EICOS: FUNDAMENTO V DE EHSAYO
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Jomt; mll'lltf, l'or .K Xtdnl 111 d<
lOO mok11.do.: ba;c. de de
1 mol de cnlh.-rw dt ..Jt h:bm. de IOOpbdc kntgttud
1 mul .. '11kcadcna!idc .RN'A o D:->A de hdlflt:>enctlb..ll..- 100 nt ll..-
1 ruol de de RN,\ fl I>NA de bd!ntloO.'neill:. de 200 na de kmilud
Ob$f\oese Ol)(llPara1V1!t'rlMie la relaclon exiStente entre dtSmlnudn de la Vt:SCO$da(l y aumen10 de A26Q ntn con
el Pfooe90 de desnabJrahzaaon del ONA.
El RNA, al presentar en 51.1 un graoo vanable de doble netJra. Pfesen1ara tM'Ia absoran Intermedia entre
la de un ONA dple.x de t.amal\o equrvalente v uno de hebrn simple (de&naturaizado), la magnitud depeOOe de la:
c:omp&e;dad de &u eslructura &eOUnana y por tanto. lambin del tiPO de RNA (mensajero, ribostnlc:o a de
tmnsforencial
13.1.2.3 Significado prctico de las curvas de desnaturalizacin
La 'eposen1acM de la vatiBCIOn de viscosidad o e lrente a la tempera!IJra (o concenttacion de
desnarutal!zante) pemlle obtener las cutv.n de desnatutallucln. que &oon caracterlstlcas. para cada ONA en
d!soluan. El cerctet slgnodal de es.las curvas Indica qu. la de&noaturMaon se produce brustamtWIO. on un mafVCO
muy esttectlo de lemperalura. de pH o de concentr..cln de agente $$n<1Malil.arl\1e Esto oontra&t<J 'n NI
ms gradual observada en la dMnatwallzacin IBrmlc8 d$ proteina$. que las inl.erl)(;ciOI'IC$ QU& tn$ntlenon 13
doble hlioe {aptamlemo y puentes de hdrgeno) &On OOCJI)erativa&, e& docir, de l;t$ on Ul'\
fa'iCM'eCe que se &gan separando en el resto de la molcula.
Al ser la trarnslon bru&Cil. I<J t6,mc;a dol ONA es tn cieno mOdo "' la fliSiOn de un
$iido, por 10 que s. Mbla de eutvu de fusi6n, y a la tempen'ltura cenlral del de uanslcibn (50% de
deSnallJral!zac:ln) se le lama tempefatura de fusin (T o T..,, del: Ingls meffing) Bajo condiciones definida&-. cad3
ONA muestra \nl CUNa de fu oon valore& Cilael eristicot do T..,. y de m<lgnituc:f dcri hiper'CfiniCO
emte A:;oao !:luma y mlfim;a, o <:0\mbio dO viSQO$idad) $0n una medida de U. esaructuNII de la
moiOOJia d& Cido nvtlok;o. Sv v;tlol adems. del pH y ta tuenalnic.a del medo, y de f3 composicin en bases
dol 6cldo nucleieo
Es imporiNI!e resa!r.tw la relacin entre T.., y el GOnleniclo en pares de be$$$ C:oG o A= T del ONA: Cuan\o
al)und(ttltes son CxG. ms desplazada hecla la derecha apareoo la curva es decir. se neceW mayo1 temi)Oratvra para
l(ll deSnaDJta!lz.aclon, T,.. e9 mayor. V 'lkevtw'&a. cuamo r$ pares A= T, mryor despit.zamktnto a ta izqvierdt' y mcno1
T
111
E$10 .$8 debe a al ms fiJene la lntetaocin el'lllll pares C..G (3 puenCes de hidlgeno). necvl5itan ma.yo1
enetgia para dtsodarse
ANLISIS MOLECUlAR DE LA HIBRIDACIN DE CIDOS NUCLEICOS
167
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TeMI)ef!MUf8 ('C)
% (GC)
En decco. al <lete.rmlnar la tetJl)ef'atura de fus-.n para varios DNA$ d4J origenes se N Moontrado ur'l8
00fl'ei3Ci0n lineal oon su contenidO de G-+-C (que, de acuerdo oon un<t de I<Js regi<\S oe Chargart, ya esrudladas (p&g. 39),
v8tia en1re especies y puede oomo indiot en cstvelio$ evolut:rYOS}. EIO permite ullaar la T.., de una muestra
de DNA para es1lmat su oomposiCI6n en bases Por e,empiQ, MI utiizat J)."'ffl determinar la presencia de reglones
r1cas en G+C o de 'islotes CpG', asociados en el gE!f'loma eucanOtico a regiones promotoras.
regulador M de la ttiW'I$cripein y metiladas.
Finalmente. la grllfiC;ll de 1as cutvas de desnal\.l'allz.aclon y re.naturalizatin de un ONA permite
oomo se indiCO a1 prindpio, que la Smllllud entte ambos proceS06 <kJc)ende de la$ condiQIOf'let en 13$ que se
intente la Obviamente. ambas OJrvas di:$wrren en $O:nlidos OPYHIOS. peto slo si el oolrlamrento es
ler'lto uene lugar una ren.a!Ufahzaetn, mentret$ cuc vn enfn<tmieMo rliCii<IO tt'l'lpiCJe 13 teasociadn corree1a de las
hebras:
Enfriamiento rpido:
No hay renalurallL.adn
( ;\ :.e pc-r manf' casi ("on)t il nH:)
Enfriamiento hmto:
Rcnalur ali1..ci6n
(dhrni nudn dr
.Job le
hcbrn
.. ..
13.2 ANLISIS MOLECULAR DE LA HIBRIDACIN DE CIDOS NUCLEICOS
Cebe tcncr11o en went3 que 1:1 aepenoe Sk) de ta completnet'ltatiedad de seeUMCia de 1as
hei.Q$. P()f eno. aunque to mtls ptOtlable es que estas se reasocien fonnancJO tas mismas pareja'S o dplex originales.
pueden darse otras reasoclaclones. En partiCular. si se parte de una mezCla desnaturalizada de ITI06culas dlstln18s oe
ONA, pero con secuencias parecidas en p&rto {OOf e,emplo. de OHA que ocxlifica la misma proteina en espeetes
dl6tntas). ronttl\lra!iuw 110 Pvedc la asociacin p{treiat de dOS hebras de mo61!oeula11 dU(lleK
dilltn1a11 Se f()fman asi DNAs hibridos de doble hellta, eon regiones de apareamiento y de no Esta
formacin de molOJias dplex. de ONA cuyas hebras tienen distinto origen (distinta especie o. en general, <i&ttnto ilcldo
nucleico) reobe el nombre de hibr idolcin Es el carjctcr de 11v C.On$qQ)Cin, i!tM QUe tcwnbin
se CX)(I$i00te hibridO()(I 1<'1 fonna.ci6n <:Jt: hitndOS DNA y RNA, o entte un t\CidO y un Oligonuctetl(.tO
nctturat o sinttico. si(w'lpro en !uncin de 13 oe s.ecvenei<'tS o oomplcmentanas .
1.0 <MI l'librtOO fiS meyor OJanto mas elevada sea 18 de b$Ses y
mfj}'(lt ese las Sec:uetlCi&S &p.ateadas. EJ heChO de que cacsenas ae aeido nucteico hibriden et\lre $i
iMIC:a que tos organiSmos oe donoe proceden comparten un cierto grado de netencla eVOlutiVa comUn. y que 541$ RNAs
y proteinas llenen esb'lJcturas y fvnclones similares. Se dioe que los cidos nucleicos que codifican estas protefnas y
RNA$ benen s..c.vencias si,.tS. homlogas. A mwyor grado de hibridaocin. m<ryor oone.xin evolutiva entre
.,pecies, y por t i ONA hvmnno hibtid3 en mayor l)r()C)()f(:iOI'I oon ..- ONA de ((}tn qve: con et d8
168
HIBRIOACION DE CIDOS HUCLEICOS: FUNDAMENTO Y METODOS DE ENSAYO
levadura. Sin emb3rgo. no e:t 6$1f 11 (;ni<:<\ de I<J hibridacin, WIO que da lugar a runerosas
mucha$ ellas en e diagnOs.tiOr>Ciin.:;o,
13.2.1 Principio bsico del ensayo de hibridacin
Todo$ los ens&yos de se basan en la gran especlflcictad de la iruerac::CIOt'l b3$e$
CCitfltllemen!(lri<'Js Que 1;11 hibrid..cin permita kfentfficar en un genoma. u otra muestra cualquiera ae &ciClo oocleleo.
una seeuerM:Ia partiCular s.e rec:ui&ren CIOS elementos bilsicos:
La presenaa de .la secuenda d.lana en uno de lOs fragmeniOS, genera!Mentte Obtenido$ con de
tSbiocin. de la de cido nudeeco.
Un fragmento corto de cick> nucleioo. llamacb sonda, de secuencia oonoclda y oomplemenl.at1a a la s&euel'leia
diana, maleado de bma que t;u deteca6n (radiactivo. oob'eado. 1\Jotescente ... : lema t 4).
rne:'.dll de
o.kUNA
(de dllblc hchru)
I'IIC:t(b de:
1k ONA !k hcbn1
,.,Oo. , ILII
(ONA

,.
'
,._,_..;;;;r r
betcrodliplex, de
la. :IUQd, """' 1,1111) de
1'1'28110'1101 de 13 tlll.>blr.l
lit< DN1\

'
llOfW de I)NA COI'I I$
(di11na) q,.e .e bu;o;-,
('fl b muw ra
!J' M.J. .o:nW ia tllpo.>nt<
.. 1tt111t'0Da ..,. .. ,

.1.
T
homodl,lfll de: b
s..m.S.(ONA

13.2.2 Influencia de algunos factores sobre la hibridacin
Adems de la rompo9ein de beses de las cadena$. eKi$1c una $Crie de ttfectoln a la po$ibilidad
de renaturalizac:in de dos hebras scntiua, y. por tan10. <:Onc:ieio!'l<lln la realil8Cin de un ensayo de
hibridacin. Esto6 faacfM, cvya OOsc:Qx;in <:Orre:$poni:Se a. trM.-do e$f)ec:lfico de mo1odologl<t en 8iol0gi<t
MOIO<:VI<w. relaCiOnadOS OOf\ 13 OOtloer'ltt&CIOn Cle ONA O RNA diana {00 SOlO la ooneentraciOn Cle
CXIO t-..cleieo en la muestra. sioo el nmero de oopla!l de la secuencia diana que conuene esa muestra). la
OOI'ICenttaCIOn y 18matlo de la sonda. la temperatura y tiempo de hibridacin, y las carae1errs:6c:a& del medio de reacd6n.
tales oomo toona inic:a. pH. ooncenlrac:in de agente$ de$nt'Wfi!liZ<W"!tt$. <tdic:in de tiOrto$ pOiimcros, etc:. A
ooncin\.la!Cin $0 $IO un il$pc<;IQ, de inters en eualquier ensayo ese hibricl&eiOn, determinado por
algunos de dichos factore&
13.2.2.1 Rigor de la hibridacin
Se define el rigor (en ingiO$, &tringoncy) oomo ol grado de espocir.eid3d on 3parea.mieMo conseguiOO el'l b$
hlbtidos: es decir. supone !A'la medida de la capacidad de reconocimieneo mutuo de dO$ owen* N 111
hibridacin. normalmente " bl4c:a CQI'MC)Ieto t!te sonda y dial\&, pero en ocaSiOneS tolerar
un cierto de csesapateamient.:l . 001\ ellln <M dei6Ct&r reglones del ONA cuya secuencia no es exac:tame.Me igull a
la diana. pero pre&enta elevada homologia. Por otro lado. ol del gor on l)licac::in y C$0 conc::re1o et
esencial: ni debe Mr tan allo Ql.'8 il'l'lpid3 ltt unin 11t$1;ti)IC e la $()1'1(18 a su diana, lli tan bajO que petmfla la hibridacin
de 1<'1 sondo oon $f)(Ueneias poco relac::iol'ladas, dBno lugar a una senal de tondo elevada o a falsos
po$itivos
El rigOr de diversos faclores experlmenlalea: temperaiUta y liempo de renaturalizacin (o templado),
longii!Jd y oonc:entrac.n de la& cactena:s, oompos,iQItl de baH& y Quinico (Pflt$CilCia do c::.lioncs,
urea. pH. tC)O de disoluc:in. et.c.). Cuttnto mi11 os 1.1 temi)On"!bJrtl dumnte 1. 1 de m."''s e$00Cib
MTODOS DE ENSAYOS DE HIBI\IDACIOH 169
debe ser te lntetacdn entre las hebfas para Q1.Mt M m;Jil4C:"'!);ln vnidas los cationes rnonovatentes { Na) estat:>ilizan el
duplex. pues aparua!lan la rept.Asin electrosttica entre los grupo$ I0$1310, facilitando la a.ptoxlrnaOIOn de ambaS het.H'l$,
Por la formamid<l y la vfoct;t.n a 10$ en1aoes de hidrOQeo!IO {pilg. 165) y son por ello agentes que
desesttlbillzan la doble hlice.
En consecuencia. 10$ pm<;ipaie$ faC1ores que se suelen manejar en la prcoca para malOITIIzar el ngor de la
hibridacin, y permitir siQ lO$ flibtidO$ que estn apareados oomplelamente. son la eievaan de la temperatura de
tnpi..OO, de ta ooncentraCIOc'l de Na y et aumeMo de le de fmamlda. Vl08'Yersa. para reducr et ngor
de la hit)rid:.eibn, es decir, para perrn!llr la formacin de hlbrido6 paraalmente desapantados. se emplean ten'IP8fcrt\m.ls
de templado relativamente bajas.. oonoontraciones altas de Na y bajas dt
l:ffilll;lfllluU 111 O:J , J 2 ( 1
roa( <k furm.;:unoda. (Uilf. do: NJCI

:Milo wa lO<- bibc ,.,.,.. ..
tmopltl'l'l1'11111fia11ol & p.:t('ta
-.il&ONA
... -""""

(.)NA de hd:wll
l<no.:illa Dlat(&d
"'
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ltlbtliJo):H:(IliCIXIII'!cDk:lllilricd.-d
& l'UC'flo..""iu rmp.:tf\'\'11
13.3 MTODOS DE ENSAYOS DE HIBRIDACIN
TodO$ los en$<JYOS de hibrldt'lcin se WIS$n en 13 Me:CIIl de hebrM set'leillllS de 6cidO nucteoc:o olutiS.Irtl o <liMa,
no m;uC<'do, <;on 1.1n& sono. de seeueneia (::()(lOCiCJa.. Mai'C&Cia. bajo condiciones e.perimertales que l)e(MiUW\
enve baSes eornplementanas. SI ta sonda o el ONA dlana sen oe OOble neora. 1\an de w prteviamente
por caiOf o por tratamiento alcellno. Una vez mezclacas, se petmlte la renaturaliz.aein
e-.n ta ct.lllf. 001"1'10 ya se ha comentado. se pueden tormar hlbrldos sonda:dlana. Se 1\a de diSpor'W!f, Me-mas. de Ul\
MiOdo pata deteclar tos hlbrictos toonados. que viene determinado por elllpo oe marcaje empteaoo en la sonda.
los ensayos de r.i:lndaci6n se oueden clttsifictlr en tres gruPOS:
Hibridacin en filS lquida
Hibridacin en soporte slido de Sou!Mm o .. Soothcrn bt.o1 ..
{
''Oot+blot'' \' "'SI\ltblol"
11 ibridadn 1\' orthcm o blot ''
Htbridacin ia sim
13.3.1 Hibridacin en fase lquida
tv& el mlM<IO empleado. Vliliza,ntto un& muestra de ONA o RNA. en disolucin, se realiza w
hlbrldaOIOn con 1a sones: a1 estar ambaS diSUeltas. 1a cintiCa es ms rapiea. Adems, t<X18$ tas rnot6Q.IIa$ CliMa son
guatmente accesibles, por 'lo que la tecnlca es ms cuanMaliva que la hlbrldaein en sq:l()tte SOiiclo. ernt>argo e. (JI
m61odo menO$ se utiliza acl\la1mente. t\atlienclo sido desplazado por otros ms 0011\'enlentes. Se aplica. por
ejem'llo, tf'l el estudio de los mRNAs emPI&.3ndo lli.'Cioaso S 1
170
HIBRIOACI ON DE CIDOS NUCLEI COS: FUNDAMENTO Y DE ENSAYO
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13.3.2 Hibridacin en soporte slido
se ttata de un tipo oe ensayo mas Si'nple, que permite procesar varias muestras slmt*aneamente y tacll!ta el
OQMrOI de la hibriOaein. Aunque 1& de la hlbl1dadn es ms ien&a y el proceso menos ellclente. se utiliza mUCho
MM que .la hlbrlcsacln en <bolucl6n, por ser ms de realizar y ms verstil.
E.s!OS metodoe han adquirido hoy dla un inters parbculat como herramientas muy vrldas para el an.Msis de
ddos nucleicos y el6agnstioo de enlermadade& moleculares con base 98fl6ca. C<lmo antecodenles. PJIO(Ien citarse
la lnmc:wlllzaciOn del ONA en nittooeluiOGa, &u det9CQn por primera vez por lllldacin y el OO&OI.Itlrmienlo de un
mModo para &a lisis in situ de colonias bacterianas en filtros <'e
El esquema de este b1J0 de M puocte ilustrar oon et mModO oomUnmente empleado
de entr9 voriM QO!Ionia$ b;ac;lcrianas on ptaeas eJe cullivo oon agar, aqullas que contienen un get1 o
de ONA de lntetos bajo 1a fonne de plsmido recombinante (tema 16),
__ .......
----
...,._.. .... _...
, .......... 1"""-e-
$t llltljo()lli .. d@ flt..,.. ... le
l)&llal 01' diJ '".,.,.._ele
<tlda ('.0101\ia M PlQIWI I)Cipel.
S. ., dhoo da PtiP'I con 1.t
101*'- 1)e "' cx*n ... Ot
.........
........... b:i< .......
,_......,_
--
--





.

_.... bOQI'M'Ica

'fMIO.-.Ia-.111








..... ....................
- -l)f<C .... - ..

(Oillc ..... fl
,. ...... .....
13.3.2.1 Hibridacin " dot-blot" y stot..fllot"
Es ef mlodo m:5 ;imple y eomUn. a su J)OI$ibificlad oe empleo con muestras de cldo nucleico sin purificat
(por ejemplo, sengH) , hoots o la se aplica. bien gota a gota o en manchas alargadas
(.SSOrbfOf). sobre un "11!110. de n)ton o M rocelulo&a, Oll)'a& prQPO<Iados do 00$01'c;in fijan las molCulas oe eillo
nuctelco y prote!na.
ME"TOOOS DE EIISAYOS DE HIBRIOACI:! N-------------------'1"7-'- 1

-
13.3.2.2 Hibridacin de Southem
0c$(WIQIItdl! pOI t;,M SOU!hem, al que SU 1'10\bi'O (Southein &1'13 tCnica Simple yfol de reallz.at
9 DNA, sepatados por tamatlo mediante electro!oreSis en gel (pg 137) Combina la
etoecttOforllca del ONA oon su trans.lerencla a sopotte slido o 'filtro (rrylon o nrtrooetulosa) para su
Ta1110 s1a como ta posll:lriOf detecclbn se realizan de lorma mas: eficaz 8fl el !'VIro de Jo quo 58 han.a en el
gel ES'Ia tcnica ha eonMbuido de forma notab1e a aumentaf la poleru:::aallclad de fa hiboaci6n oomo
enalitica. coostltll)'endo hoy dia en bloQulrnica d imca ct mloOO dt.' (ln<\li$is del DNA exlri;I.OO tJe mueSfmS <M
sangre, reji(SO y Clulas (llnfOOIIOS, 3fMiOCI!O$ . J
lmpliea cnco ecapas bien d!rerenc.adas: separacon elecuofortaca, desnatur-alizac:fon,
tr;)n$1ert'hei3, h01daci6n y deteoclon
:
-
-
-
-
-
=
=
-

-
:
"
:
Q

=
a ....... ..._..
fll'\ .\ ......... .
--

- - ,....,...._
= 1 : ! '-,./
: - ; :.
,,
13.3.2.3 Hibridacin Northem
"'
.., ......
Jn01Ur;-11 lo -lo

=
A diferencia del caso an.tenor, su (notthem .t:tot) t10 COf(espont ning(ln IIW(I;ligMor, un
unple Juego de palabras (southem = del sur, tWJttttem = del none). El procedlmento es.ICIMtJCO, p6fO el CidO nucleier>
n5 RNA Por 5U tn9I'IOC tamilo, nQ 95 w ft<loJil'l$nlaca6n IXln pero debe 1enerse
es.pee.al CullladO para eW:atla 4t<iei0n RN3Stt'&. l<'lniO en<:lgni!l$ C(lmO OXSJCn<'l$ (contaminacin muy comOO.InCiuso
por las manos del anali!lta, y muy dlrkiles de IMetivat . ES uso co agentes dtt$t\o'I!UI';:Ifa;.\ntos $9J'O $tl..'ndo necesano
para evitar apareamfefltos .ntmcatanatlos. que a!lemrlan et patrn de !leparaein pot tamaM
la tcnca 6e hibridaclon Nortnem se emp1e.a pnnclpalmente para obten&f' lnfOI'maeiOn SObfe el tamano do!! RN.Ali y
liObte el modelo do e"presin de 991"" especrfioos. Es10$. une. 'V9l c:lonadot>, pueden & UllltZados. como sondas pam
hibrid3r m!Mir<l$ O. RNA de vna de lojidos dilerenle&. y oll&i oonooet los tpos. celulares en los que se
expresa e! gen. la .abutl<!Jn03 te131lva y tamal\0 de lOS ln:11'1$CNIO$. y dl'lf$0$ de'lalle& de &U procesarmenlo poslerlor.
172 KIBRIDACIN DE CIDOS NUCLEICOS: FUNDAMENTO Y DE ENSAYO
f.jcmplo de m1crpre1sctn
de un experimento de
Southcm.
Las srnaks <Jblc:rudas cD la
:.Uion-...Jiogr .. fRI d.:pmdcn del
mupa de del ONA
(dutribo(in de kll5 puMOS de
t.'.Jonc J l i.k lb rondas n nplndas.
-
IIII!Wi'k> jlb)
.-.. .
_, ...
-.

-
-
13.3.3 Hibridacin in situ

-
...........
A 0
N$Ullado de b t(to Southern
la aUion.dl()gtal'ia
-

.... ..
_ ....
. ..........
df P>i-' :
-
E& un tipo dt hibrid<'Cin en sopol'le Slido, et1 la que la SCl'lda se aplica 90bfe muesttas en su
t.bcacin genoraln'lente aQuellas preparadaS para mlcrosOO!l'a. Supone, por taolo. e6 empleo de la hibrlljacin
Np un al)c)((laje eilolgico e hiStolgico. y metodolgicamente e& anloga a la& tc:nlcas innuwx:itoqufmicas e
iiM'IunotustoquimiCM. Oe forma muy global, cabe distingt.W entre su& aplicaciones tiQAcw y cromo&Omic...
13.3.3.1 Hibridacin in stu tisular
Se realiZa sobre oones de tejido. clulas ,.j,cleos aisla<io$. , En muc;ho$ s. il:rv;) a C<\bO
dlltectamenle sobfe tejidos fijados oon incbd06 en pam&\a. eec. es unITIQ<J:IIidad d& hibMaein
pattladarmente Importante para detectar virus par<' C61uiM tanoetOSas 0010 consecuencia de
cambios genelcos o para estl.dar canbios en la exnsiOn Q6niea. secuencias en el RNA oelulat. En es.1e
caso. ttas \.W\1'1 suave de la preparacin. se afladen sondas de ONA <:Omplement<lrio {CONA), de hcbr3
La delecx:IOn se realiza por y ex.;wne;n de &.1. peltcull'l fologrMlca bajo el mierosoopio, o por l"'''ierosoopia
de lloofe&cenciil . s;i se emple ce m;)rC<'Iie PN"ala sonda (lema 14).
13.3.3.2 Hibridacin in situ cromo.smica
Se reaiza &Obra preparaocione$ 4Ml ()Ort.& de meta1slcos o prometafsk:os (pg. 90), tratadas con
fijadores para l<'s tan'Cicri$tic:as m0r101glces <Jet ctomosoma. Para haoer accesible la secuenQCI de ONA. se
lr.lta 13 mucstr;:a enlimas prOieolltlc:as y se desnat!Jrallza el ONA por ealor, lcal o Jonnan.da pera permitir su
hibrltt.-.ci6n con 13 l nieialme.Me se emp6earon sondas raciaoctfvas. pero ll'QOiemas tcnco& (1(1 la det:ec<:in de la
set'lal lil'l'litan su utilicS&<J. Se aumentar y <;On ol empleO de sondas tnareadas eot1
nuorescencla. En es1a tcnica. llamada hibridacin in situ POt" fluorosuneia o FISH In situ
hybrlCNza!ton), la deteocln se haoe bajo lricrosoopio de tluoresc::encia, bien de tormt' directa o IJCI un l'l'ltoOO
(pg. 1M>
En cuanto a svs a()(I(;;)Cioncs dada la gtan deteetabllldad de los ftuotoc:romos aecuales se puede empl&ar la FISH
con fines mvy diver$0$ y se ha OClfWertldo en una lcniea con elevado potencial diagnstico en (;J"OI'I'l()$()OP31it'$
(tem3 29), tumOtalet.. vlroiOg&a, trasplantes, etc.
Vno oe 10$ me-1000$ surgidos de la hllridaciOn in &itu cromo&mica es el denominado pintado de cromosoi1'1M
p.t,imir'l!)). donde se usa como sonda una mezcla d4t fragmentos de ONA PfOCO(fenlcs e un MiSmo
CtQmOsoma. con to cual se observa fluoresoencia en el crotn0$0m<l se * ilita ul la ldenuflcadOn visual de
eacta CI'Ot'I'IOSOma (o vanos si M emplct\n $(lf'l()as con distintos nuorocromos). en lo que se ha llamado
un eanocpo moleaiar" E&kl es (ltil estOOi<lr reotganizac::lones de lOs eromosomas. que denen h.9lf por
ejemplo en proce&O& canceroSO$.
DE ENSAYOS OE HIBRIDACIN 173
13.3.4 Tcnicas relacionadas
Se eomenta una llt(:ftca clt! anMshl que, aun no baSbC.tn en !Qlf. prlnetplo$ de hlbrt;t<Jctn, POSee
una swnilltud en tos planteamientos que hace Interesante 'Su eA'posieio este lugar Hil' l<lmbin Oti'O$
numerosos miOdos de anliSIS de acidos nudetoos, vanantes de tos 8iQU 1 expuestos, que oombh\:tn fl!l .cOI"'f)Cil11ief'lto
de ros addos noclelcos por sondas con la tnteracciOn espectflca entre aqullos y prnceinas, Ulle$ con'IO tos ensttvos da
nHardo en gel o tos mf:lodos SoulhweSJem y FtJfWesrem Su t!escri)Cin excede el l\lieancc eS!o libro
13.3.4. 1 Transferencia Western
A pesar de que en esl8 caso no h!brldacion entre aodot nuCiiiC:OS, se CleSCtibe aqui por su
slmiltucl tcNCa y macanisbca con las hblda0100es Southern '/ Northern. El ensayo We$tern (we$rcm del C)Kie} so
emplea Pll'fCt aetectar prQtefna& en una mues.tre. Para &110, son a en gel
proia<:rilamida (separndo$G en funct:)n de tamao y carga. salvo en el CB!IO frewente de electroforess en presencia de
SOS, que S6b en funcin dO y tfltl$f<tridas a una membraNJ (wesrem brot). La delecan de las-bandas
I)J()tiQ1$ en ta memb!'al\8 o muo se reah:a gr;t<:ias a la uni6n O$f.IOCificl.l de un c;onlra fa; o regl6o
proteiCa que se qwete estudiar. Oe similar tMrcaje y dC:teIOn de <k <'tOICk> nuCfoeioo, so puede marCCN'
et \lllbeuetJX> o Qetecurto do una proleina liganle marcada a su vez, lanto empleando
JS6!opM oomo no t.'ldiacsivat El (y t.os diklnJnc;ias) entre los 3 mitodos $1) roS\lme en 1.a figura
Southem Northem
WeSi t'tm
tru'U
clcctroforcsi!i
$(1ftd :sc.m<b

h ibncbcin ..J
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L:. de>
r.udnw!i !le llllek hueer rn
tk apow. )'en horit.untlll; b de
proleinu., en dr
rnfiuenllunida y t(l \CI'I:ICIII
1 ll l((nica de llo.-ptndt dcl b:_po do:
nl:J('(II)C w bubl<::ul ltiOOrpmltOO en 111 liUI.dll
Olllllkbc.l p CJC!Uplp::
tO; t(n
iWiJ)I.! IMI...tti'o
d.:llo.:'Wr de naoJiucin
dr:sCC:IOf de lluOrtiCCib:ll
tnOI!nll

eorin
11\'idlllll O C"'tti'IIUI\IICbtllt
dn!l diJ'C)Jtir:niiU
QIUDii) lile d,l
!WtcadQ,
ct
De forrna 81\8\o9a, ensa)'os "dolblol" y "siO(bbl' pcwa prolelnas, con un 31miar
al para cidos nuclelcos, salvo poc etlipo ele y vn de unio y deteocin completamef't!e
anlo90 al del W&stem (en esw caso, otwtameme al no rewar no es p-edsa la 1ransferenc1a).
Tema 14
Preparacin y marcaje de sondas
para hibridacin
14,1 Preparacin <te sondas genUcas .................................................................................................................. 17$
14.1.1 Clasificacin de las sonda&. en funCin del mtooode preparaciOn - ---- ---- 176
14: 1.2 Sondasconvencronales ................................................... ----.... -. , .. ... --- 176
14.1.2.1 Sondas de ONA obtenidas 1)0( dOt'laeiOt\ ct!u!ar (\&Cnologin del ONA re<:ombin<ente) 176
14.1 .2.2 Sondas de ONA obtendas por donaCIOn acelular (amplifiC&eiOn oor PCR}.. 176
14.1 .2.3 Sondas convencionales oe RNA (tibosondas) ---. .. . 177
14.1.3 Sondassintbeas ... ........................................................ . ............................ .. ----" .. 177
14, 1 3 1 quimica de oligonuclei.KI06 ................................................................ ,.,._,_,_,_ .. - 173
14 1 3.2 Oi$eflo de on3 $()fl(l(l sinttica . ...... ....... ................................... ................... ....... 179
14.2 de l.:ts sonda'S ...... - ... - ..................................................................... ............................................ 180
14.2.1 MarcajedlreciOe.nlamolctAa de$0t'lda ............... ,_,_ ,_, .. . ... ..... ....................... 181
14.2. 1.1 Marc:.afe con ONA pollrnef'asa ....... ,_,_,_,.. ....... . . ............ _,_,_,_,, ........... _,_,_,_,_,, ......... 182
<t) ITS&Ia<loe ................................................................ ,,,,,_,_,_,,,._,_, 1$2
b) iniciacin o oebado al azar ............................... ................. ...... ,_,_,, 183
14.2.1.2 Mareaje lermin;tl ... , ,,._,_,. ,.,_,_,_, ...................................................... 183
a) Marcaje oon potinucleolido quinas-.3 - ,_ ...... . ........ .......... ................. 184
b) Marcaje terminal por relleno ........... ........ . ........ _,_,_,_,,,.,._,_,_,,, .... _,_,.,,. .. _,_, t84
142.2 Marcaje externo a la sonda................................. .... ,_,, . ......................................... 166
142.3 Marcaje .-.c!1redo ....................... ......... _,_,_,,,_,_,_, .... ,.. . ... , _,_,_,_ ................................. 18S
14.2 4 Tipos de grupog marcadotes e y sudeleoeion ....... -- .......... . .................... 185
1 Marcadoresradiaaivo& ................................. .......... ,_, _,_,_ ........ . 185
14 2.4 2 Marcador N no radiacti\IQ6 .................................................... ---. , . 186
14.2.4 3 , , , .. . . ......... .......... .......... ....... ........ ..... 186
Como y: se h;t indicado. la deteccin de cidos nucle.lcos mediante de hibridaocin depende de la
presencia <le la seCO(!lcia ;) en la! y de la disponibilidad de ul\8 son& o oligonuclelldo de
secuencia oomplementt\lt.t'l a la <.iana P()r tanto. la utilidad de la hibridacin. el puMo Clave. ((ldica en la sonda: de su
nawralez.a depende que el ens8yO $C81ructifen> El de fa &OI'Ida al del anllouet'PO en un inmunoensayo y.
al eS-lar marcada, es posible localizar y QIM!lflcar cualouiet seruenc!a diana con la cual se pue<Ja hibrittar Gracias al
empleo de sonctas. la sensibjj(Ja<l oe 1'8 hlltl<lac:tOn muy elevada. ha&ea un n-.on de veces superior a 13 <JetoociOn
diroct.;ll per OITO$ mlodos.. POt ejemplo oe tinciOn Iras elecuoloreSoS. L3 sonc:li $G ;onvietle as.l en un elemenlO esencial
para cualquier' estudio moiOcv!ar. en especial para analizar la variabilicl&d o pOii:'norfismo del genom.a. De ahl la
converwnela oe eS1udiar lOS y marcaje de sondas. COI'I'o() asloeelos flOilCialqs su empleo
en de hibricSacin.
14.1 PREPARACIN DE SONDAS GENTICAS
Se vtili:a una gran vanedad de mtoOOS para occener $01'1d3S. ltlnto de ONA (en hebta doble y hel)ra sene:ilfa)
oomo de RNA para su empleo en e1 ensayo oe hi0rid;'ICI6n la &OOda ha de enconvarse forma
de hebl1t sencilla. para b cual se acude a la simple dl8 las sondas de dob6e hebta.
176 PREPARACIN Y MARCAJE DE SONDAS PARA HIBRIDACIN
14.1.1 Clasificacin de las sondas, en funcin del mtodo de preparacin
La& $Onda$ se pi.IC<ten clasificar segOO varios Ctltenos: loogltud o rama/lo de la secuencia diana. mtodo de
y <)c(CK:Ci6n, tarna!k> de la sonda, mtodo de preparacin, ele. Este iltimo criterio e& el mis
di$tinguindose enlte sondas preparadas por mtodo& oonYeOCionale$ (POf clon<locin coh..ll&r O t'oelular, lemas 15 y 16)
y por mtodos de sfntesls quln-.ca.
obtendn:
sonda formada:
celular
ctkic:a
acelular
(PCR)
trat\$Cril)t3S3'
ill'wer!.a {RT PCR)
(of'!IJIO(kJ$Q.KinibOnucle6tldo)
14.1. 2 Sondas convencionales
Tambin llam'd3!$ soncsu genOmlcas. Clonadas o fueron la$1ri'nOras utiiz&CSas y nan OOt'ltribtMo
especialmente al progrt$0 de la Blologla Molecular.
14.1.2.1 Sondas de DNA obtenidas por clonacin celular (tecnologla del DNA
recomblnanto)
Son e tamai'lo (tongiluG) varl8flle. entre t OO bases y cienl06 de kb A4a'lque lOS delt'llles eK4)ef1me-ntales de la
clonaci6n celular se estudian m:s adelante (tema 16). se adelantan brevemente las etapas principales del prooeso.
1
CrlB!fl .... " ck
de interec
t*'illUI'WI" )
El_"'._., pi._..,
.....:-... -- c.. ""'""'*
hloi*MI ........ M ..... D.'.A
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F..,...,..; f:su "" -""" ...
...,..,.w.. ti ,1)1\l,\
!---
OII ........... d ............
N


lllk'M ..........
G
plid1n.odo>
oonadu
, ... .....

.,;_.,
--
l<:plltlldn
o
VCCIQt de
d onaci6ft
1romo ejemplo,
un pa,crnidu)
o.k-1 (p<>r eon



= ..
-

UiO COC'tiO)
"""''
(()N,o.
14.1.2.2 Sondas de ONA obtenidas por clonacin acelular (amplificacin por PCR)
Eslas sonda:s $Otl de menor tama"o quo 'M Obtenidas por clonacin llular, entre 0.1 y 20 k:b. El mtodo de
preparacin (PCR. lema 15) tambin conMa de un monor numero de fases. por to que la& 5()(1(13!$ se obtienen de forma
ms rapid.t y senCilla. En general. paftiendo de OHA de dob6e hebra se preparan &OOtlas de la misma 1\81uraleza. salvo
en la PCR que conduce a ONA de het:lr<l sendlla. y en la RT .PCR. que pormite Ol*ner sondas de ONA de
lltlrliendo de un RNA (pago. 196)
PREPARAC.ON DE SONDAS GENTICAS
f>NA & f'lll'!o.:b
'""''I'Ca...,n

nowrarv
1
1111 ----
tm.:rb
,,....,li('t< ""!"""")
14.1.2.3 Sondas convencionales de RNA (rlbosondas)
U '(> lil,lt1'\<.
"""'' iDNA
177
la clonecln celular se puede emplear tambin para S()(ld<l$ de RNI\ de 1.11'10$ milo$ <Se nudetidos El
proceso. relativamente complep). se basa en la de un DNA pre...lamente dOOttCIO $e v$3 un pliJsmido
espeQCII (generalmente el pSP64). que &e caracteriza por lnelur et promotot de una RNA pollrnetasa de tago (PtomOior
SP6). El tONA resultante, vna \<eZ purificado y linea!izaao. se utiliza oomo molde para ta transafpclon pot RNA
polimentSil SP6. QUI8 transc;ri)e el insetto especlficamente a panir de la seooenaa promotora S/'6. slntetiZaf'ICSO
numerosas COI)ias (de heOr'a de RNA. Si alguno de los NTPs. 5u&tralos de la RNA polimeras.a. esl& marcado
181}. el RNA $e puooe vtwlat diteCh'lrnoetltt como sonda: si no. deber man;arse el RNA pootariormenle a su
obtenCIOt'l.
1
o.k

iON A <k<Uk ld>ta)
plh11Udo) eQI'!Illo)
PNA""""' I"*'I
............... ,

U)N \ ld><l

fC'llllbinaMC
Ventajas de las r lbosondas
Al no I)O<Icrw rormar el homod(lple..K $00da:soOOa. se
tavoree& la efie)ci3 <Je la inleraocin de la sonda con la
secuenCia diana.
Las SOOCJas no unidas espe.cifiearnc:mto pveotSen ser
elinmadas por (jges1in oon RNasa. que degrada
MOCi!tas, pero r@Spela los hlbndos RNA sonda: ONA diana.
puede emplear comQ control negativo la !IOtlda
(socuenciil en dirOCOI6n antl9enddo.
pg. 24&, oonsegukla al ii\COC'porar ., jurrto al
promot<lt' en orientacin contraria t.
14. 1.3 Sondas sintticas
Desventajas de las r lbosondas
Es necesario usar un dlt donaCIOo
panicular, con un OfOtllO'Or de transcripcin.
Se aanenla ta oomplejid&CI 31 preCISarse l.1
etapa de reacciOn RNA
P\les-to que el RNA es mUCho mas lbil <Jue
el ONA. y la RNasa es una oontamlnaciM muy
trecu&I'IIC, M rec)Jiere un manejo cuidadoso de
las soncsas de RNA P<'r<t su degradadn
y el uso de tecnica9 y rna1erl;\ll y
ospocificamente bes de RNasa.
L8 do &Jntescs qulmca es esencial en lnget'lieria no slo para preparar 6011das. sii'IO tamf)in
para mottlllcat parCial O un producto gnloo o para sintetizar getlt$ En general , se oblieflen
sondas de ONA mas o::wtas Que vor Cloni!lcin El mtodo mas popular esta de $Ond<'S COf't.ls de ONA (de tS a
45 nuclttidos). monocatsnarlas. llamadas otigonucletido' o simplemente otlgos. l!stos pte<len $ertttmbin de RNA,
M Sll'l;ebz.an oon mayor dlflctlltad.
178 PREPARACIN Y MARCAJE DE SONDAS PARA HIBRIDACION
14.1.3.1 Sntesis qumica de ollgonucletldos
El aspecto bskx> de 1a sfn!e&ls e& la tonnacin repe'litiva de un enlaCe on!re el grupo 3'fotfato oe oo
tWCieOtido y el grupo <le otro, para dar un enlaoe Es do(:ir, se parle de 3'NMPs y se a ... anza en
sentldo a diferencia de la sintesis do l'ludeioos en las clulas (lanto repllcadtl como b'8fiSCripci6n
emplean 5'-NTPs y avanzan <l4t s <' 3'). l.O$ NMPs se aftaden ui'IO a uno partiendo del primer nuclesido, que est Indo
por su posian 3' a Wl soporto slido y OQt'ISiitui'a el elCiremo 3' del cido nuclelco vez shezado.
base
' 1
zuca
.
...

base
' 1
f\ZUC3
base
la: ' 1
zuca
bas
1
e
zca
3" 2'
t
nirdc 3'-dNMPs. q ,.
..
" >


1<>fii>IIC
El J)rincil)tll proble<a es la gran reecclvidad de 106 dNMPs. <:On grvPO$ ..()H primario y secundario, un NH:: , un
grvPO f0$13"10 y gt\.11)08 amino ylo carboiWo en la base nitrogen.ct3. I)Or 10 QUe se feqJreten mtodos de bloqueo y
(fe$biOQueo que oo afec!en Wreversiblemente a ninguno de 10$ componentes de la molcula de nucletido. Por otro lado.
e1 gn.ri)O toslato (en 3') ha de actrvarse p.3r.1 q,e con el -OH (en 5' del nudetido anterior).
\1Ciodo , !1)!. ;tilo!. 70 por H. Gobind Kbonanu 1 <,rirntea de t)ligmuliCkcKio!>.
he hllll loJ quimiro' pu111
(nfJIIill!r ... dtl
'
1(IS'Ii)rl.; olldo
(p1111k11l.u !k Phct)
'
PREPARACION DE SONDAS
'"'
j ' 0 1:
1\udOO..odo>
s-.crnllllll

.. "$!1bulinlf.Wt!illn
... 1'.
179
Estos procesos estn ya noy dla automatiZ:adO$.. son cflciontes y de baJO C06t0. Debido a la que la IOI'Igilud <Jo
OSlO$ oligos so v. imitada por el rendimiento de las reacciOneS de 1;) $etl$ibilidad alcanzacta con euos es, e.n
Qvo oon las sondas otxentdas por clonaclon. Sin la eonlil'lu3 f'TlOioql en los mtod06 de slnteSI$
permke la (()lcf'ICin <.te ol9n cacta vezl'l'la)'Ofes.
Respeocto a ta quim.ca de sint.eosis de oligonuclelid06 de RNA, es.& mS attas303 dcbicto il la dificultad de
Pfote98'r elgruoo OH 2' $11'1 al 3'
14.1.3.2 Diseo de una sonda sinttica
Las sondas sintclcas se dlsen&l'l oe lon'Y'la que COtlte1'9<'n lit M<;uencia CICM'J1llementarla a Ul\8 ZOI'I& del DNA
diana, por ejem:lk>. de Pttr1e del gen que intetesa analizar. El oejeeiVo es P"ePt'l31 un Oligonuc:lecido que pueda
nlbridarse con dicho ONA. se localizar el gen que OOCilf.ca ltl de ._,., Pf'Q(eina
detecminada. Para dlsenar a SOI'Ida, t$1'1Coesario:
1 Conocer la secuencia oomple!.a ae la o ll menos de un fr<19""en10 de ella, M que la
secuencia diana de ONA.
2 A P<lrtw de esa secuencia anWioacldlca, se es1ableoe {61'1 Nsc al cdigo gentico) la secuenaa tUCieol.,iC:a que
habr de tenef' el ONA. Sin embargo, debiOO 3 13 degeneraan del cdigo genelloo (diSlil'ltos lrinuCiotiOOs
ooc1iftean un mismo aminoCido, pg. 295), hay l.-l i'IUmcro cle'v.-cto de secuencia<s de ONA que pueM el
"1.:: 8.:: 0 _____________ _:. P::; R.;: EP :.;AAA :::;:;:: C::;I ::;N::..!. Y.:: M::: A::; R.:: CA :::J ::; E;.! OE SONDAS PARA HIBRIDACIN
11'1lsmo polppcldo y. obYiamente. no &e puec.le C00009f' <1 priori 1;'1 qve lo l'l;)<;e en ol gcnom;t rot\1 00 ltt
clula. por lo que es preciso sintetizar sondas que cubran toOOs las posibilidades.
3. Para su nmero. se &e)ecciona el de Q110 poseo a;. menor dogonerac:iOn J)C)$ible.
4. Una vez todas a..s sondas. &e en&<ayl.l sv (;(In el ONA de pnrtida; IJI\3 de ellas sern la
"""""'
OCCue!ltlll
'; :-:. -""''' C..y.'J ;1,;'.'-:,1 ,e-e
1/Jpk:lct'
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el nrnc:r1> de li\\ellC11U que
k 2" - 16
t}\;,t, D A'!' :)o. 1' 1'
--Ca!la -.k ONA dC'
pata la (llfJ bcbna. X
puecL.n, pues. dbcilat d06 gt\lpQJ
lk 16 sondu fJc: O!"A.
l A':' 1'
. --
'
En este lipo de experimentos, los de &i nlo&is y secueneiadtl de proteil'la!l y de ONA convergen y &e
conl&)lemeM&n. Como se acabe de ver, la $4JICVOnti<' ese una pro1erna aaslada puede usarse pera el 98"
cotrespondiente; de uno:t forma Similar. aunque if'IYerSa, oo gen ctonado (y, sxx &oc:venc:iado} pu&de usatSe para
aiSlar la protointt prQducto. la secuencia del gen pennile <beflac" y $into6zotr quil'l'oie3imente un pptldo oono que
ropre:s&nla una parte del prodocto proteico del gon En.onees.. una de W posibilidades es. pclf' e;etnplo, utilizar
3nliOUI'!ti)OS contra este pptiOO &lnttioo l)all'<t idenlir.e&r y l)uri!'ieaw lal)f'Oielnal)era su estudio potHetior.
14.2 MARCAJE DE LAS SONDAS
El empleo Clt $()(1d3$ de DNA o RNA como herrarrentas 1*'3 k>e3!i:ar secuenCias diana por ensayos
de hibrid$CiOn requiere llgamriatnente un proo8$0 O. m<trcaje de la que permita su deteccin. la molcula o
grupo puede tener diY9t'&a nattxaiUt. siempre y tu8t'ldo se pueda detectar su presencia de focm;t diroc:U
o Indirecta: los marcadOfeS mM uliliUdOS son istopos radiactivo&. flvorocromos y enzimas, En gerw!tal. dan lugar
&encill06 do r1Zt11. que deteCtan conoenlracione& muy do lit soi'I(SI. El mareaje debe ser e&$8ble bejo
diVSas rondiciOtle$ oe tempeta.lura. detergentes. disoi..,.,\M, etc . y no afectar a la reacci6n de hibridacin. Lo&
mhtoCios son 106 emplead06 micn!ras que lOS ottoe mareadores surgen prlnQPaln-.nle parn
eYIIar klos riesgos denvados de la radittc:i6t\. pata aptovechar la mayor VIda media de &uS de msrca;e y. et1
algunos ta$0$. p<u<a et liMite de O&teocln.
De jltleden plantearse de prooe$0 de marcaje:
In viVO (mt\s OONectarnente, en cultivo): S. hace SVITWii$1rando nuclelldos radlactNos a clulas en cultivo, QI.M:t lo$
tnoorpor.an en sus eiclos nuc:Jeloos de nue'Ya slnte:&i& Su uso os muy limitacto, por ejemplo, pars preoarar ONA
mareado en cUas Infectadas por virus.
MARCAJE DE LAS SONDAS
181
In vitrtT Es mas Puede haGef'$e i&61opos radiactivos o por 01ros mtodor. a!lematNos Se
"oootinu..ci6n illgunta5 l<a5 divOf5i'l> mel0dol6gic<a$
En muchas ocasiones, en espedal con tlbosoodss y SMdas sinlliCas. la se marcn al mismo que
s.e prepara ncluyendo, oon bs NTPs que My que sui'IWits:ITar a la reacciOn de slntesls. 8'gur'W) oe ellO$ rnare&<Jo ceon
un Istopo redlactivo, un f'loOI'OCI'OfTIO o cualquier tipo de grupo kldieadot) mietluas que ()Ir;)$ 01 se re*a
tru haber completado la slntesls de la sonda. Puesto que la preparaciOn de $OM8$ ya se M tlO$
<:entTar$0'10$ en eS"te ltimo <:a$0, aunque las consideraciOnes a la deleocln Slt'Ye.n para
sondas marcadas durante su obtencin.
El pnncipio bsico del marcaje es la umn qutmica o conugaCIOO del marcador a la son<la (en e1 caso radi&c:tiVO.
en reaidad el t90IOPO forma parte oe la de so.noa, no se a ella). Como se acaba ele indicar. esk> pu!Se
hacerse uniendo el marcador a la sonda y.- preparada o a un nudetldo que se Incorporar durante la J)te$llataei0n <:se
allt'l Por Olr.t Pill"l<t, puedo lev<tr unido el marcador detectable (m$todos <JJ.recros de a
conlinuaeiOnt o bien otra mcecula no detedable o orupo i ndicado.- (en ingles. reportllti). con ta cap...-.ci(IOO <.f4:t $Cl
reconocido PO$leriormente por una-protei na detectora. que esta que va marcada (tnelodos lllnileCtos, l)bg. 185}
n-ccto: d marcu.du. que se pucdedl.1cctar , vn unido a la SQnda.
Dos ulrcmativas, des us de la slr1tesi.s <k 1;, sonda o durante dlla:
N""uckc1Cios ___ .,_
pn:pan1tii1U de 111
lf<lC1da (p!lf
o>
unt.ln
lllalt" .. Jf
WliO.
tJIIII>;ilft

Nucle!ido M -d.,, ok"
,.;mda .,._,.
(J
Q ..
1\'farcaje u1d.1recto: cl"man:ador unido a la sonda no es dccoclabl :se le llama indicador.
Para lu de1eccin, el il\dkOOor se une uno' proe.:n.1 dt."toctora. que lleva el rnurcajc.
Dos alternativas. despus de la sntesis de la sonda o duramc ella:
N\(;lcfiilos
o.lc 1.,
lo(lll<b sh101.,,,
(1 mo..bf telo.: il\nl
r.,diC3dor
JiruelctiOOS _ ..
Nuclctido-lndic:l(".>r
14.2.1 Marcaje directo en la molcula da sonda
..
"
El gruPO m<are<ldor &e puede unir C0\1'8!ent.eMe.nte a grupos C$Pecllloo& o fonnar enlaces de
forma I.O$ cidos nudeieo& muestran menos fui'ICionale$ OOecvOOos para este fin que las pt<l(einas,
b&tCamente. algunos tomos de las ba$-C$ ntJ'09Cflada$ (especialmente, aqullos no en el
oon la ba&e compjementarla) y los grupos lermin<'!IO$ Y.QH y 5'-P,
182
PREPARACIN Y MARCAJE DE SONDAS PARA HISRIOACION


t larcaje cov lent de la
'""' .
"'"'
NTPU)ol)uda -t lluo)t(J('t(liDO
N1'f' o klltiiJ"
Q GeleWOn POI'
(fl\llf\')CCnk:>)
nuornnettia

teleciOn "' OOI)Ugecten
fC';O<XO\IIW-
C:OWII$rlal)

Ejemplo de' nudtillidu

( ofltrPJ
un deri\'lldcl do. ' dUTP y
cll!bcolljflU(IR':ICdna.
:k 101 "1
lll

lll!p(IRif!IC J"'r.:l 111
"

'ft el .'i11l-.:lri:l'>
'"' -
hllcrl-laron la f.- n

& !a Jo)blc hlkl
En esta categorfa de m'todos puodcn <nsiderarse tanto la lncluSiOn de nucletidos marcOOos drxante la slnte&is
de la sonda como el marcaj e de la y3 De estos m4odos, se ocwnerrtan a oontinuacinlos ms

14.2.1.1 Marcaje con ONA polimerasa
Se Ira'* de meiOdos de sl ntesls enzlm;itk:.a. los ms comunes. LOs cuatro tipos Cle nueletido (al menos uno de
&os m:trcado) se il'leotperan <b"ante le de t;fntttsis do una de DNA. Exl!lt&l'l dos variantes: lra&lado de
la mela (ruck 1/an.sfatiot'l) e ir.ei<'eil'l o cetlado al azar (AMO'om pnming).
a) Mtodo de traslado de la mella
Es un mtodo facll y rpido, coosictot11dO ft ejemplO c:taslco de Incorporacin enzlmtica de oo sin
neceslaad de desnaturalizacin dt ltt $0ni3A de DNA doble. Aeqtjefe dos enzimas distil'llao
(ONasa 1 pancretica) y I.JI\3 ONA )(llimet"asa ([)t(Apc.l de E. colf). El resultado del marca+o es l8l SUSbludn de una
gran pane (30-60%) 10$ nucletieloe Oflglnale& de cada hebra de ONA por otrO$ mare&OOS tfldiactlvamenta en su
posicin u.S' .P
s "' ;.p p. , ..... p. l.p. .p . . p.l r. ro" J:
J' HO l 'f. J 1' f 1" 1' .._ 1' .._ .p. I' "'!HH 5
OJ'liiQT ... _.,_,


,,.. .... . ... .... .,. 4' ., r "'
.... ... .,. f_,_ ,_,_,_,_ t.,. .... r.,. "
5

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(ofl'oi\IP')
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_,..
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M '
l...oH , .
s
La OS II 1 ranerritk prudll('c
nlltT..z C'!lllml:c hdlreu dtl DNA. ROC'IIpt: cnillc:on
fosfOOaC:ster. 1bnllo har u (tlid..v) en laj
.-uo! KNJIO.' J' ..011 y S' rl>
La DN,\ polinull 1 do t: rol!. l'lo de
DNA ptlomcr.u:u., p(ISII:'t ll'tll
(pis. 141): pohmcnts:t. y
5' de b$ cw.lt"'!ll' f!Q,Ui dO!>.
a) La actividad S'-4)' el
g:rupo Y .Jt de Cllila mella m d iroinac:i6n
de
b) Simullinl.'ament(':, la 1iJad pOimKft.Sa
Si111 U'l('orpot:t,.ll) sobr< el
81>11)(1 .l' .011 do.' 1:. mella. a IJQJ11t d._, dN'I'IOo;
1.'!1 la din:eclim l1abnual de la Siflttl>is DNA
(5'-..J'), El pmo.'eW el id&JbCO en IO!Ia.'l las y,
otniamen.e. OClltT\' tD lCfll.do 11pues.10 ""' cf!iJ:l
lat. nldlaue despl111.11n a lo
6c Sipc habiendo DNA dobk.
ptrOIIpar'C'C\'t'l eo amt111s htl:n; rej.onc:c marclldll"
(que k'l"\ 1(:\o ((111'10 SM\bs), Su 1nmuilo puedo.'
3 lt:n de la J'lroporcin ele t!Wmas
en la mndll U11a ' 'l'T.I)lltlii.U 1:a
rucci6n C(lll )' EDTA. )(' s<tndllj
6e ICIS rmdocitidos 1!1) illCOtpo)T'oldo!\. por (11.'1111'1(1,
pM etoll!rol.'UStafiu de fiJtr-:od6n @('l.
P\JeSIO que el ooeie61iclo rn.arc.OOo se inOOfPC)I'tt a ta sor'ltia, en lugar del marcaj e radiaciYo (en rtg1.1ra) pueden
emplearse nuctetlclos (On fluorocromos o oon grupos indicadore6 (pg&, 181, 185).
MARCAJE DE LAS SONDAS 183
b} Mtodo de inc,acin o cebado al azar
<lftorniiltiv.-, 011 dif4:n11c101 de 101 ltt inittl dc:l ONA doble, parl' que hbnOO un
oligonoclo61ido qve aCIV<'t como Qtl:)<'ldOr de 1a POI ONAPOII de E cotl A,_,., bion. en este caso slo se
t'C:Civid3d l)()limer*sa. !)(Ir 10 que se prescif'l()e del l>t<JU(h'lO y $C svele ulkar et fragmento de
KJonow (pt,g 147), Eslt'l 16cnicoa Qlroce $Cric de ventt'ljt'$ t6<;:n.co lli$P8'CIO a la antenor. cuya
conSideracin escal)3 obf8.1ivos Clc C<'ri\Ctet esenCialmente conccpt.ual
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rum en hibridiiCio."lfl
Al Igual que e4 m40do anterior, aotnlle nucleolidOS- marcadO$ oon nuorocron"IO$ o con grupos indicadores.
14.2.1.2 Marcaje terminal
E" osto se aplica, en IU9'1' de IA\a sfntesls, una modlfie&eln en.zimtic3 de las hcbtM do t!CIOO rNC!eu:o
modiante la ncorporaocin de uno o unos poros nuclelidos marcados a uno o ex:tromos de la 50flda
ae DNA o RNA. se utilixan rnetiQ$ que 10$ onteriores. son mlodos .:rUles en Ciertos casos, ejemplo
matear ollgos de hetlta sencilla. Se IJilllztll'l dos S)latltC.&micniO$: el mafCC11!8 oon polinuclebdo qu!nasa y e-1 marcaje
t.minal por (fi-in endfabebng}.
184 PREPARACIN Y MARCAJE DE SOHDAS PARA HIBRIDACIN
a) Marcaje con poli nucJOOlldo quinasa
Este mttOdo Moepetlde de la eltbtet'leia de una IM!Cta molde y. pot tanto, puede emplearse para cualqUief tipo de
ONA senCillO o dOble, o de RNA. Consiste, en esencia, en un intercambio del S'P terminal de cualqulet hebra
rxw et k>5tato (marcado) en posicin y de un dNTP. con la uel\>endn de pciA'wclelldo q!Mnasa y. opcionalmente.
rosratasa atc:ain3
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ma!Wo\k.s en (In ,olo eun::mo (5' ): COlTII> $Cono:lu
Se <tlimin.1 el 5'P con fodalflll )' fueso 111
pllliltdl'iltldu qinn dtl r .. .o T4 h.clroli7A el ATP.
mto>rpolnftOO su 3n1p y-lo>t>f'11to al .QU fll.lf\' t ll dtl
ONA
, . t tll)a
S'P.()o'iA

?' <:tlfXI. r-( UP...\11' .. j ' 110 llp DN<\ A1lf'
La polllltl'ill.:So P"k u.mbit n d
11Ua'1:&1111blo dift!Cio o.kl fosflltO del I>NA
(M)r t i (t)ll(o '( dd ATP ,,,_ de t:Mfllr.l>Oa):
Yr:I').AIP +- f.'f'P',:A-.I,I'P
\' .t:p.())o/,o\
Wflda' un Jl(!IO f.),ll'\:11'10. k-
1111111 ti rro<J!A"t(l C(IU4UJII (k
(pc\11,. 199)
En este caso SOlO pueden utilizarse matea}es ra6activos. PUM lo Unioo que se i\cOrPQI"& <' la S(W'o(la es el foS!ato y
def ATP
b} Marcsje terminal por relleno
E&te mtOOO &e por ser el Onlco que utiliza una enzima de re&triccln especifica para <Jo$
e11trernos eohe!liYos.. (ltJeluego son reuenaoos POI' t;t ONA;Jol.t
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L-. S' Ktiutn c-omo molde paraquo; ti
tlf KlviHI"' tll b ON"
l' o:r lfltoll)do de ccblldo 21 anrlafllld11 I!Udcliodllll
JNn:lldll!l .l'.
E&M mtoOO de nue-Yo permite el uso canto de nudetido$ radiactiVO$ (en la figurtl} como de aqullos marcadoe
con fiUOtocromos o con grupo& Incitadores,
MARCAJE DE LAS SONDAS 185
14.2.2 Marcaje externo a la sonda
En lklgar ae matear sus ptoplos nucleOildos. la sonda se puede unv 1n otra mOiC\Aa que a su vez lleva el
mcwcadof. Una posibllldaa e& la unin de Pf'O(elnas mediante reactivos oniTOc::rvuan10S (CtO.sstinll:6f.s:
glutaraldehldo. etc.). Tambin puede uNrse el marcador por inter..ccin ton el ONA o agentes
cuo se in$Cr1<'!n entre lO$ l>(lfflS do wscs dO doble l'l!ioe (hibriao 9C)(Ida : DNA) de forma no oovalente
Unin de una enlima a la &ondil oon
tfhlctivos
::; (P())
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t eei<<n <le
(8f'lla0t

D

po
'l!ftT'Mt -,
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-.1r:'ll(> pt(oeltoo:l>
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14.2.3 Marcaje indirecto
\lt'lin 1(1 $0fldlll de un
'lOiic;ntin oonugado oon etlllr'I\SI
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phcn:wqu!CIIIfla
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(etl\lele COY etlltJ

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(polillr.Otl)


(llOWVIIIente)

Ckl!llo(;O()I'l pe
r.:.-.. tn ..... Z1.., b-')
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......
-
.........
"""'01\)

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Marca,e ese 10s hibridos
oon llgen!e$ 11'11en:d, ,nt6
ltlbnOOWpk'\
.tondat--I)'IA diana

IMC!tlll:afUC


llidf'Off.(h(;;e
llbridu nolii'C':ldo
D
"
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!fl
Como se ha (.Pg 180), PI*Je Qve n 18 $Onda so 1M\ gn.sw no detectable o ino'ic.1dot. ol cual
en una segunda etapa es reoonoado por otra rnoliJ.cula, generalmente una proteina. que ln(;OrPOfa el marcador
dot:table Para la unin del indic<'ICSOr son laS oonsil:5erclciono:s ytt rC$PCCIO a 13 dol
marct'dor en aos <lil'eciO$. se lkl$lftl l,lf\ ejemplo oorre:spondiente a 13 rnodif!C3Cin <le 10$ NTPs:
'udecuJ() (d.'(fl'J
ti &tapa
un1n covalente
de nudecldo y
gf\100

rncori)Ot<lcin a la sonda per :oppN
oualq..-era de rn1odos
enzimiltMXI& de mella,
miii'Cl!IJii W!rfi'Witl )
gt\lpcl h'l!htlllktr
1 l hgandol

l-etaP&
rec:onoca1'iento del
indicador pot su proteina
detecao<' .,.._C<lda
(
:
1
;
)'
!ol)nda lll/IIC,Ja
14.2.4 Tipos de grupos marcadores e indicadores y su deteccin
14. 2.4.1 Marcadores radiactivos
M
El marcaje r&IJiacl.i-..o o iSotpico es el que se !\a el'f!Clle..do con froooenCJa. auncue va &18000 de$pazado
ptogresM'Imente por lOs mtodos no rac:rraCilvos, Aur.que no e.JCi$tt 00"101'1$0 ..cerc:a <lef marcaje ideal, en 18 mayoria de
b& casos se hace oon 32p. Pueslo que ltl ootta vida media de eS1e iStopO (14.2 dias) crea dificultades en la
pntparaci6n, oomeraallzacln y uso Mlnarlo de tos ensayos.. se ullllzan tambietl: Olros (35S, lt.t. t251 o 14C).
Ls <tetocciOn y reg.slto de 18 hibriclacin se haoe por autorradiogra/la; el sopotte oon el ma1erial nibridaao se pc)nll;t
oonl<'tcto con una pelici.Aia folOgr.ifica (del tipo empleacb radlograflas). 1e ouat queda if'I'C)(eslor\3o::ta oon"""'
mageo_n que muestra ptO$CI'ICia de In {ver, por e,empJo, el mtodo de Soulhem, pg. 171). la lntef'lsidaod
de depende de l<t de fa erMicia por el i&iOPO y del. tiempo de eX'posiCin.
186 PREPARACIN Y MARCAJE DE SONDAS PARA HIBRIDACION
14.2.4.2 Marcadores no radiactivos
En funcin del marcador empleado. la deteccin &e haoe por lluorimetrla o atladiendo oo sustra.1o especifico cuya
transformacin enzlonllCe por la enzima marcadora pueda detectarse por alguno de bs siguiente& principios:
Espectrololometria medida de la absorcin de la luz por lo& productos de la reacci6rl. bien &olubiN o in501uble&,
et1 et u!tta'fi:>leta o el ISible (*>rimettfa).
FluoM'Ielria: mediOs de la luZ emitida por pro<ludo& e la teaociOn que po&ean un ttuorok>ro (pg. 126).
OuimiolunWII&eenaa medida de kiZ emltlcia como con&ecuencla de reaccione& con esta caracterl$tace (por
ejemplo. la transklnnacin de fas luciferina&, cata!iz:ada porlucifwasa. o la oxidacin dellumno&l
OobG Qve f$10$ y OCIO$ no 501'1 C:lt.l$i'l()$ Oet de $01'1(13!$,. $i1'10 qve M al)lie<tn
igva!menw en do1occi0n do antigenos, POQt.te/I0$ 1ig;:tnciO$ ole.
Re$1111. , , de rnsreadorc:s, ,)('l icsdOC'cs y n\codl)s para su dcLeccin 1

n
.0.

Ol:t.t>:o:i&!
de la ..
Prolcb..-. ft'fflii';J
Man:.!or
del mlin:.dur
(bgtan.Jo)
o
Boan
Jhidin11,
lli&topo rodillo.'ll\0
" lllo)fi'IIJiosnJb

f nuoriO)eUill
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RewcibQ F'luorostni.:a:
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Oro co1oidl-l Micrmt!lpia
(fii.( ..,:<.lu'-'-1-..
14.2.4.3 Grupos i ndicadores
lO& grupOS mM OOI'T'IUnmente usados 900 la bk>tlna (vitamina natural) y la digoxlgen if\lt do && pl;tf'll<'l
Dig.ifatls). Ambos son oonjugable& a lo& nuclelido& y se unen con afinic:Ja!!, respedi11'81'1'1enle. a te9
proteinas avldlna o e&treptavldlna y a antJcuerpo$ Al que l)tlra t>$ detivtldOS lluorescentes. se
dl81)006 comercli*nerrta de dNTP& ya unldOf lanto oomo a digo)dgenlna.
La detoocln de las llevan o <Jigr)xigenna se realZa mediante ensayos de unin. similares a bs
emplead06 para el inmunoensayo. A fin. 13 l)rotelna oetectora. oon allnlded por el grupo Wldicador. se marca
prelf'l;lfi'IOnlo Q)n un ISOIOPO tadiaetivo. un grupo nuoresoente o una enna.
SOt'lda biouni lad3
sonda
('On dgoxig.o:ni""
Tema 15
Clonacin acelular: Reaccin en
cadena de la polimerasa (PCR)
15.1 Introd uccin general a la clon,acin .. .. .. .. .. ...... " .......... .. .. .. .... .... - . ...... .. .. .. .. ... .... .. ...... .. .. .. . .. .. .. .. .. .. .. .. .. ........... . 187
15.2 Amplificacin /rt vJYO del OHA: Re-acdn en cadena de la poUmerasa o PCR ,_.. ............................... 188
15.2.1 Pnnc!plodeltnlodo ............................................................................. _ .. ,, .................................. 188
15.2.2 Etapas del proceso ..................................................................................................... ,_,_,_,,, ............... 189
15.2.3 Algunas caracterfstJCaS del proceso ......................................................... , ... ,.,_,... 192
15.2.4 AU'Iomatizaan de lit PCR 19J
15 2.5 V(lll"f3ttte;$ m61(l<k).,_ .. ,_ ...... -------.. ------ ...... -------------...... ---------- 193
15.2.5.1 PCR 'larga....................................................................... . ................. ... ......... 193
15.2.5.2 PCR anlclada ...................................... -...................... -.......... , _,.,. ............. ,_ .................... 193
15.2.5.3 PCR lnV'E!rsa ........................................................................ -........................................... 194
15.2.5.4 PCR con adaptadOtes ................................................. -............................. , _, .................... 195
15.2.5.5 PCR asimtrica ........................................................... ......... ............................................ 195
15.2.5 6 RT-PCR <:fif RNA 195
15.1 INTRODUCCIN GENERAL A LA CLONACIN
Conceptualmente. el proceso de Clonac-In (cton.edo o con!ll9te f!f'l la obtM<:iOn de un don,
oomo un conjunto de 'elemenlos gentiCamente Idnticos entre si y a su precursor. Estos pueden ser
molculas. clulas. te,.:le&, rgano& u orgarusfT\06 pluncelulares oompl&los. Cada componene lndMdual de un don
oontiene misma informaCI6n 98f10:1iocl, ol mi5mo 91J001ipo. que el elemenlo de partida: por ele. &e puede con&klerar
mol&ula de ONA prccun;cw.t.

ch,dt1
precursora

188
CLONACIH ACELULAA:: REACCIN EN CAOENA DE LA POUMERASA (PCR)
qve ,., Clon<'iOn SIA)OnC un3 amplificacin Ah0t3 bien, t'>e$lU do la dofinici6n Mteriof". cmtre 10$
CQmpOI'IC)flte;$ de un ambi6n se dioe que C60a uno es un dOr'l de tos ceros (pof oj . einoo
iCSMtiCM lormM un don, y 31a vez <:ada O<vejal es un C*>tl e cualquiera ele 13$ dems. o toda$ son tnl:re si).
Debe ,ndlcatSe que la Clonacin es un proceso flsiol6gloo normaL son Clonlcas las OJUI.8.s embriorwla.s
tolipotetlte.s IOM\9Ca'9 por mitosis a panlr del Cigoto: cada una de estas clulas da lugar (medlanle procesos
de diferenciacin y desarrollo) a individuo& adultos fotmad06 IXIf clulas &Ofl'lticas Clnicas. genticamente
errtre si y ala clula embrionaria de partida (ex.cepto en lo que aktct, a su cliwH$idad o polimotfismo gentk:o. resultante
ele mutacin. recombinacin, transposicin. etc.). En el do <Xg<anismo& compielo&, son clnicos los gemebs
monocig(ic;O$ o univitelinos. procedentes <lo un mi$mo vulO recunc:!OOo.
El intor$ de la r<'Ciiw C$0t1Ci811monto en su biot.ec:noiOgie:O tc)mO proceso de mulliPiic:tei6n de
m016cdas de ONA o RNA. Clulas. tejicbS u Otg81'11Sti'I09 oomp1E!It>6, mecaniSmos de manipulac:i6t'l 9f!Wl'lic:a.
La Blologla en general. y lB lrwes.ligBcln biomdica oo particular, estn avanzando enonnemente y lo harn an ms
en el futuro. oon la val'iada de (;()pia& de Mnl$l'llf)$ ya e>era mudi,r y tftOivcr problemas
tanto de carctel bsico como
Globalmente. intesa de&eribir la clonacin dosdt el su os de<:ir:
Cton.a.;in dt Ofgnismos Plt'nlas o cmple-IO$.
Cfon.aci n de clulas, aisladaa o klrmanoo t.eidos u rgaoos.
Cfon.ac.i6n de molk ul.as. sean Sias genes o fragmentos de ONA o Ore acuerdo con et proceso
esla Clonacin puede <Widlrse a su vez en dos tipos:
Clonacin &cel ular, es decir, clonacin de molculas sin tntervencin de clula alguna. Es sintWno de
In vi1to de molculas de ONA o RNA mediante la reaccin en cadena de la OHA pollmerasa
(PCR. potymerase ch8in reaction). Se de&cribe en este tema.
Clonacin cetul ar (con oUM, no Es l<a ampli!lcacin do moiOOJias de nveloioo modionte
su !nb'Oduccl6n. a&i&bct<t par en omfifriorltl$ en culliYo. la tecnologia del DNA
Se esi!Jdia et1 etl teMa 16.
15.2 AMPLIFICACIN IN VITRO DEL DNA: REACCIN EN CADENA DE LA
POLIMERASA O PCR
conSidefaela f10V ola como una herranventa en el labor.IIOrio de Biofogla Mokx:ular ., lngeniorla
Gen6!iQIII, et ()tljelivO de- esta tecrica es la amplkaciOo dtecta de un gen o un fragmemo de DHA. o irdrocta de un RNA (en
es1e caso. a travs de su ONA complemereario, o cONA), Pf9&Gnle& en mezd;;l& do nJJV divo!1<'5 f\.lentes, sin de
por'llcaciOn previa de la muestra Integra original. Se puede de hOn"'ooenaoot, Ctu<IOS ele lejir;lc>. sarqe
eornple4a. mezclas de fragmeniO& de ONA con onimt':s resttioci(ln. mues11as resultantes oe- la extntc:c:i6r'l y
at51amento de OHA. etJ; Sin omb<WgO. debe resbltar.W:! que. por raz:ones (Jle se oomptendetn msadelanfe, es un requisito
imprMCindibleQU$ se conoz.ea b s.ecueneia de una parte de la regln de ONAo RNAcue &e CJ,iere ampiicar (&atvo en el
caso do algvnns v8rianles del meoclo dsloo. eomo la PCR l'lven;e, pag. 194).
Por estas caracteristl::as, en ewecial la e 19 PCR es un m!Odo muy adecuado
ptep.arar clc.to$ una C8r'lliclad muy superior a la de la origrlal, Ctlt*) como mtModo de c:tonacl6n aoelolar

{
AMPUFICACIN ptop&ameonte dicha
. . . . 'CR Para disponer de cantidad suficiente oomo para utili.:wlo. eoo fines diversos
ObJCll \'0 biiSJOO de la 1 :
amplific11r ONA DETECCIN
Para podcflo dcu:ctar en mucslras oun dd DNA di11n:1
us aplicaciones de la PCR eon rmy 111.1'1'11Jt'0&a& y Como ejetnpiO&, pueden CifatSe: dOnaCiOrl aoelulal' oe
tragmenlos oe- ONA. deteccin de secuencias &in pVribc;in previa, s.ecueneiad6n de cidos ru:::telcos. eatableclmienlo de
de mtJoo de; mul3ciones. fPaCb oe- ONA P8ffl tf8S4llan1es. diagnOstico de enfermedcldes
genticas. prenatllc$ o no. dclen"'''inadn de secuencies especfficas de ONA relacionadas con situaclone$
cklflnida;.. p(()()lemas totenses o atqueolgioos. esn.iOS eYOivtivo&, dcloccin ele microorgt'nisrnot ir'lfeOCic:leOS,
dclocc:i6n de c:61ui&S ampllflcaci6n de DNA para $U <;:Cl.ll<tr, eh;.
15. 2.1 Principio del mtodo
y PCR nQ es una lt)cr'lica analltlca per se. Mno ms bien una metodologia. '9$\.lltan .. do lit tll)lica.ci6n P'kliea de
trC$ conceptOS. ya oescrli.OS (pgs. 163, 16? y 11. re&peetjvCim9l'flo):
1. O.Snaturatlucln del ONA hebr;)S sendlas.
2. Hi bridltc-iOn e$p0Cifie& de la nebra sencilla con un oligonvelebdo. Tambin se denomina etapa de
(enlcndldo oomo diStnii'IUCin de temperai!Jra que pern'Mte la reasodacin de hebras senolas tras lo
AMPLIFICACIN IN VITRO DEL OHA: REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA O PCR
189
do$Miur.'l!i.taeion termica; en i'lgls. annealing). !:sta es la elap;) e:xpliea pot qu se debe c::x>nocer parle ae ta
seooencia.
3. Replicaci6n de la heOta senCilla por una ONA poknetasa a p,&(lil del at\teriOt OOti"'O oeba<IOf.
lt'mbil'l. elongaeit\ o extensin del cebaclot, o
ta apllcaciOtl en forma cfclica de es1os tres llfOCC&O$ $& OQI'ISiguetl mUIUI)IeS copias 001 lragmei'IIO de
Cido oocleiCO et1 un OOtlo espacio de tiempo. como ;e 3
A pesar de esta aparente c.omplejidad. en teori (l e. un f'l'l)( sencillo. !ien!llbte y relativamente rpido para
t'lmplitlcar secuencias. En la praica. se raquicre un conlr()l preciso de 1M variables que condiciOnan este triple prooeso
(secuer.ela dlal\8, cebador. enanas y resto de oompol'llt\1es). iMI.nJMI'!f'l(()9 Bdecuados (tefi'POrCJCiadores de
DNA) pata estable<:er las condilciont$ cte cada e-tapa y repetlrta9 cldic:amente (tiempo, temperatura. nmero de ciclos.
etc.) Se oon$igve tt&i arr()li!lau ele Lamai'IOs diversos. oomprendldoe entre 50 pb y 2.5 kb.
pr&ctiea se preel$;81'1 en la mezCla de reaccin 106 59Jioentt1:6
a} Los cualtO d NTPs, en exceso. oomo &u$lr.lto$ la si.nlc&i$ de li\$ i!V'IUI'n!'!t1ltlles COI)ias de ONA. Pata ser
reconoad06 por la I)CIImerasa, delxln ir de Mgt<.
b} Oos do ce4entt sencilla (COIOQuiatmel'lte. ougos'}. generalmenle sinttiCO$. de 18 a 30 nt Sus
secuenc::ia,s 1\an complementarlas. te'Spe.ttfvamel'lte, a loe dos ex11emos 3' de I;J regin vno en
hebra. de modo que &o$ ()ligos Pued3n eieroet de cebadores para la replicacin da las dos hebr.ls ef'l la regin
diana. POf esta f8zo no te oueoe M'C)ilicar vi\SI regln de DNA si no se conoce la secuencia de sus do$ oK'Ircmos.
De hacflo. tt &3 poe<i()n dOildO hlbf'idan tos cebadores la que defne la lo"91'ud del fragmento quo so
(secuencitl di:lna)
REGtON OE ONA OE LONGITUD VARIABLE
,)' .. .....,. .. 1
,.
---
r
,.
e;) Un<t ONA polimerosa tefl>est.Bbfe, es decir, enzlmdcamerue actwa a tempetMura& relativwnente altas (al!
menos 75 c. y estable oon ltecuencta 1\a'SUI 95 e). Esta caracterlstlca permite su actuaCIn en suoe&iY06 CIClos
sin adems. 1& tef.llicaciOn a tempetaturas eleVadas Impide la formoon de hi bndos pan::ialmente
y contr'l!Uye a la especificidad y rendimienlo d8il proceso. La enzuna ms en'C)Ieada $(1 llama
Taq, pot proceder de la bactena fhemw.s CJq!Jatiws. QI.Mt Yl\e on c:aietltc E&t<t
oozlma tiene el inoonvenienta ele carec.er de de prvcblls (eonude<ts.<t 3')., por 10 que 13
frecuencaa de errcwes e& supeor a &3 do la (atrecteoor ese un pot eada 5.000 l'lueteotiCios
n::orporadOIS); de ahi que en ocasiones se wsbtuya por otras ONA polimera&as wmoestables.
15.2.2 Etapas del proceso
Como ya se 1\a fldicado. se Sv<:e$i0t'l de ciclos (gel'leratmente etltre 20 y 40, oe 1 5 a 5 minutos oe
de dcsnttl\lrllliVteibn. hil:lrldaei61'1 y replieaelc'lfl. para conseguir \M\8 ampilicacion del numero
de molculas que conlienen ict secveoc:ia de inters o diana. La duraciOfl total es de l!lltededor oe 2 hOras. dependiendo
oe tas condic:iooes elq)E!rimeontates concretas.
Cada Cdo de una PCA. 001'1618 . pue&, dt '*
1. Oe&naturaliuc;in: Catont<Nnicnto parn la oe las dos hebrlt$ del ONA. mCCiionte unt'l intutk"'CI6n
(:J0.-120 &) a vl'l<l tempeft1\\lrQ ontrQ; 68 y 97 e , que debe ser 5UPCriOr 3 13 <le tusiOn (T.,, p<\g. 166) do la regin de
ONAQI.Itt &OQI.I._. 3mplll\c31,
2. lemp&<l do (O enfnttmiemo tlll)i<IO )Or deWP de T..,, Cle form3 que SC permite 13 hibridt'lon (pg 167)
de 13S senCillas oet ONA oe OOt\ 1os Oli!gOS cebadores. Gef'leratmente se usan tempetaturas c:te 37 a
S e Qve &a mantienen entt910 y 120 &
3 Elongacin (o El<tP3 do ;,wnplifle3Ci0n propi3mente ditn<'l {72 75 'C, t-3 mtn}. en la que la ONA
poliMet&Sa lermoestabte e1onga tos ceb&OOtes, empleando como motc:te ambas heOtas originales. La replicacin
traMwtre (p&g. 14-6) en dlrecciOn 5' .-,3' a partir del exttemo 3' -OH de cada cebadot. empleando oomo sustrato tos
cuatro dNTPs, haSta tetmlnar la lectura del molde o hasta que se comience una nueva ecapa oe desnalurallzaciOn
ciclo).
190 CLOHACIN ACELULAR: REACCIN EN CADENA DE lA POUMERASA (PCR.)
Esquema temporaJ de una reaoc16n cte PCR
fta& lefi'98180Jrat v. eapeciellnellle aon. on&ni::IIIYos.
pera 11ecuaf'!e ceda 11"1111!6n
pn' l 1 a. ddo zo ciClo JCII
1
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1 .
1
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E

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": r

1 T
10 150 160
tiempo (mint
Ade!Tis de &as 3 Olapas de Cilda cidr:J, comUnllMiflte M'l ai\OO!e una etapa previa y una final al conjunto de IOdO& los
La provia ., ICITIJ.l(lr.Jt\.lr.l (illth..l$0 $Upcrior <' IP do ict$ do de$na1Uralizaan), b&icamente
!*'* INI<;hv3f S)(OIO!l$<1$ y nuele;)&aS ot tt1 mliHiro asl eomo 0$0QW.W c:<>mplcrta dol ONA de
pMida, es;peclalmente si este es de gran wnano o posee regloneg nwy compactadas (c:O dt un DNA gon6mioo
coi'Of'l(e!O). La etaps final. por su pana .conSdle en una prOioc'lgaCIOfl de la Ulbtna para pefmihr quiO so
completen todos los fragnl!Wos.
Esquem!lcamene, el OOOJU'Ikl de reacciones y los resuhados correspondientes a los PM'\6109 daos son los
siguientes:
1*' ciclo
la dUIIII {IIIC llft h,1'1dC Mlrl ll'lclr l;
c lle rickl:
r tllft
1'11111 &1 f11 mcn10 <li11111
D
lcii)J.,I dulkll
una pa!Wdt 111111 1110lhuk 0)\A


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111no'l'lellli'l M ""' h:i

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.,a11r1:Wll u r.':kilt dtt


1'11\'"h:otln! 1 ..... ,l,d !'

2 copbl, .uc:
..-e
de doble tleb"* r-

[
1H l !IU('\'tt-( KlJlh l Wlt ) 11
ms .:l)m qllt tl l)l\ \ dt pJirtiob
J
AMPUFICACtN IN VITRO DE.L DNA: REACCIN EH CADENA DE lA POLIMERASA O PCR
191
2" cic-lo
(o:omicnxa dl!lldc' termIS:a ptiiDC'tUI


'

"
=
,'M
'

---....::: JI.>C
=
2 c:opi8'S, de doble hebr
3lt c-ielo
J

=


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.-
e:
m
;q:

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---

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- '

-
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4 copias. de doble nebfe
'M

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l.,

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J
3
J
'
dJI.'TI'S
lk .... A ..,,.,,.., .,,,.,.. en 2 cl.s 1.-s ruj 1
d ..... .-.... ot4'ntft'- b .,. .. it-Sn ltl ..:1\ltW_
r;'Oml...,. ..
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-
-
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M
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II"TI'l<

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'
8 c:opiN. de s.ncltl 8 toplu, <j,e dobkl M-t>ra
P'f' ,.,._,. \1/J
"'!Jc. ltltl!ll., dbn ..
l.n .m.'""'oo. :llllo vvdll(on:n copo.. 1 mslb(a.
Debe hacerse notar que si la muestra de particla.. romo OQJrl'9 en el ejemplo dncrito, est bmada por1 mol<.:ulas
de ONA de mayor lamao que la regin diana &lo a paftir del tetcer CIClo apa1ocen eactas de la dian&. Si la
mvcstr<t de p;)rtidtt twbicse el ptOpio ditm;,, lodl!s l;, s OOI)QS llparecid;,$ desde el primer ciclo
t'l#:l
192
CLONACtl'f ACELULAR! REACCIN EN CADENA DE LA POLIMERASA {PCR1
4R ciclo
1
-


-
-
- ' .
-
.
'
8 eopia.s, de dOI* hebra 16 coplas, de Mbi1
16 eopiu, de hebr.
[
Ademils de fa amplificaQ()n globQI, por del nUmero de mol6culaa de ONA, debe not<ne cmo el numero
de c:<lP3$ do la aumenta ms ttp00;nen1e quo el de (){rM ()()J:li3S mM largas. Todo ello Mee Que en la
nJ$zCII.'I el teoninM 1& PCR, Jos lragmanlos diana $14)efen abrumaooromente en a cualquier otro tipO de
ffflgmnnto, obviameMe molc:utas de DNA otigu\l'lles de la m1.1e111111 (q..e no tlan sido ampfllicadas).
Observese en 18 labia siguiente el eoorme gredo de ampllflcaceon conseguido, de un milln de veces en 20 eld06 y un
billn en 40 clcloe. Esto es lo que permite aplicar la PCR a muestras poco purificadas y analizar los rewltados
directcwnenle on los que $61o M podr dolec::lar el fr.lgm&neo
de celos total n'i de coplas n
2
0e cqias
dlanasllotal
realiZados
de coplas '18!]8S

1 2 2 o o
2
4 4
o o
3 8

2 25%

16
8 8 50%
5 32
10
:22 69%
10 \ .024
20
1 004
-
20
.. 1(Ji
40
. ,Cj'
99,996%
40
.,
10
11
80
10'
1
100%
X
2x
2
15.2.3 Algunas caracteristicas del proceso
Rendimiento: Pues1o que los prcx!Uctlo6 de cad& cido sirven do moldo par3 ef siQvi<lnte. ltl ao.m.l<lein de copios
como dianas) a& axponencial en vez do &noal- Sin Qmb8tgO, en 13 prielic::3 flt rtndirnic!1to no os
complelo, por lo que las cil'ms MI ven algo reducidas. A pe$<11' do olio, $k;ucn lSiorldO El nUmero de.'! Wl)i3$ el
!iNf de m <:ido$ $& puede ealcl.llar como:
AMPLIFICACIN IN VrrRO DEL DHA: REACCIN EN CADENA DE LA POLLMERASA 0 PCR
Siendo N = nUmero oe <:OP'8$ <lClflenidas
= nUmero de molclAas ink:i81e$
R de c..-.d:. de 70a
85%). Cl(ptM8do en tanto por uno (0,70.0.&5)
X n(xnero de ciclos
193
se hatl aesarr<*ldo modlflcacionft del mtodo dec;ritt>. cncanw'laCias a aumen\ar la eftclenc1a. sobre IOdo en lo
relaiNO a la conoen1racin de Mg
1
' (normalmerl1C ele 1 a 4 mM) y al tiempo y temperSiura de lemplado
Dur acin: La dur..ci6n <.!e Clld3 ul\8. ele las 1res etapas de cada ciclo y el nmero de e:octos Qebcn optimiZarse.
dependiendo ese la secuencaa oonc:reta ave se q.liera 3r'l'()lillcar. En C890S. la eleoci6n de e&tas oondicionos def.>e
hacerse de forma
EtipeclfiddOKJ E$ mvy elevada ESI& oetetmlneda especiameMe pot la &eCOOnci<t de 10$ >s ceb:ldores util:zados y
por las oondicione6 de templ3d0 $e pueo& determinar la especificidad anaiz:.ando pot OIOctfOfOrC$i$ lO$
generados: la aparion do uno bi'lnoo Uniea ll'ldiea que la l<:niea es especlllca. P e,amplo. $11il de tert1lladO
se reduce excesiv.,en!c se falsos pos!wos debidos fundamentalmenle a impettectos del
cebador c;on sec:oetlcias disbtlta!l oe i8 diana. aunque similares. resuiWn amplificadas.
C111paeldad de delecdn (oomUn. aunque c:tenominl!da sensibilidad): Es muy alta (bajo llmM de
e*'Ci6n). tanto que la PCR puede permitw de1ectar una (il'li(:;) f'I"'IOeula oe OHA en ces cualqUier tipo de muestra clinica,
lorense o arqueolgiCa eet. ). Sin en'()atQO. esta C818C*fsllca supone ....,bln un IIC$90 de
por mole\A<Is de (!rigen a la muestra.
Fidelidad' E$ doeir. 18 eapaciclad de ooplar secuencias con precisin. $11'1 W!ti'OI).IOJ mulaeior.es (carOOios en la
secuencia de nucletldos). Esta caraaerhl!ca depende sobre IOdo do qve 1<' enocima tooga o no acuWded
correcsora de pruebes (3"-exonuc:leesa. pg. 1117), Asi, 1<' de en osola en!re 2 10_. de una polimerasa Taq
coNYer.clotlal y 10 de la poimerasa Pfu, que $i tiene En 1000 ceso. la eleccin de la enzima
depenclef del objetivo de '<t PCR NO es muy impMance 1a ftclel(led s solO se prelerde ob1ener u03 sond<!l, oero .s
fundamenlal si el objotivo tn la ictentir.:tldn de mutaciones pooo frecueM&S.
15.2.4 Automatizacin de la PCR
La au10matlzacl6n es sencill;l y 00 bajo eos4e. dadO e1 car&c:ter eieleo <1e1 prooeso. el empMo de componente$
eSiable& a1 c;aao, y el delK!rrollo de lermocielaootes pata ptogramar los camtos de temperarura. Al mismo tiempo "
lmptesclndible, pues slO lf <'lu!Om31i.taei0n se hace faC11ble la realizacin de un rnero elevado dlt ciclos y se
aumenta la del proceso Ello lacilll.a un empleo cada vez ms e<spec.ffico y senSible en ellabonctlorio climoo.
15.2.5 Variantes del mtodo
Han surgido numerosas modiflCCIICioAC:$ dcrivttdtt$ <lel miO<IO IniCial,. con el prop:'l$110 de mefotar el
rendlnW!nw o la espeCificidad, adaopUtrse il muestrO$ Ntticu!tm:)$, ampi!lcar molculas de RNA en lugar de DHA.
pro(!uc- c.-dona!! de set'ICila ... 1>ot ejemplO. una !TIOdlflcacln muy comUn en la aocrua!lda<:l (denoiTIIflada
en caliente. hOt stan PCR) cons.s:le en privar & la mezclo de de algt.:> de ws COn'CX)c'lentes
(frecuentemente la polimera&a} haJt.ll w Mv<t aleMJ:&dO un.a letnpe!&tura supetlor a la de templado. De e&le modo.
&e la elongoOOn de asoc1aoos inlcil*nente con poco rigor (a secuenaas de homoiOgla parcaal con la
diana) y, como re5Uitado. se aumenta muChO la eS(leelllcldad de la amplificacin.
A oontinvalcin. 110 (Ometll;)n bre-Yemente alguMS de 18!1 variantes ms
15. 2. 5.1 PCR "larga"
l.PCR (long PCRJ o LAPCR (LOI'IgC'I' -'ncl' ACCu!Mt PCR. 'PCR m:\slargtl y su Ollj!livo es
superar lOs 11mltes de la PCR convencional para amQiifiCal con fidelidad region&ll <fi<'IM do gr.'ln t&mao (entre 5 y 40
kb). EJ principal fat*)r limitante es lil OMJ$Cn<:ia de aelrviOM de pruews en la potimerasa TaQ {pl\g. 189), por lo
que se aade una cantii:Sad menor O. otrt1 cnzirn3 con etlpaeidlld de OOtr'eOCiOn <le pruebaS (por la Pfu) pata
con!rarre!l'ar la carencia ae esta aC1MCiad y. mismo !lempo. seguir apovechando la efiCSeta de e10ngac10n de lj,
polimetasa C)tlnciPQI (T80 o
15.2.5.2 PCR "anidada"
La OUOCSt aun-.enwse re..'Vi.lanOO IM\8 rescc.on de PCR. con dos cebaoores nuevos que hltw\dan
<.len!ro del diana Ml)liritado el primer pat. dando BSI lugat a prodllc:IOS de PCA mas 00tt06. mas
esleO!Icos. Las coplas oonect.as de la prWneta diana contendrn arrtlas seruencias complementarias a lo6 l'l.levos
diferenCia 00 10$ ()r(ldue10$ t10 especilleos generaoos en la primera PCR (que se obsel'\fan en la electrotore!lls
0010 varias bandas o uM bai'ICJ3 fusa}. que pot eiO no resunarn amplllk:ados en i8 segtM'Ida. Este miOdo tarmlen StW
!XIt8 at#lef'ltar el !actor de amplificaciOrl <Xlr\Seguldo. al suponer dos rondas de af1l)llflcacln.
194
;
,.
CLOHACtN ACELULAR: REACCIN EN CADENA DE LA POI.IMERASA (PCR)
, . ,dHo.lilll! 3' y
________ __..
J' .. 1 S'
15.2.5.3 PCR Inversa
Esta varitlfUe &e empl9a para Clonal desconocklas de oo ONA, Situadas en P<>$iC:in vccin<tl a
oonoc:idM E$ decir. en lugar de la regin interna, ltanqueada pot 109 dos c::ebadole$ (PCR
<XInvencionat). " ampliflctt la reg.On axterna. que flanquea a los cebadores. Para etlo es neces.arkl eottat el DNA a
811'1"1bOS lados ele la regin diar\3 con tna:iiTlil do r9$lriocin (pg, 197). de tal forma que los extremos eoheatvos
tesultantes entre si, tOI'l"'\\WWo Ut\8 mol6o.Aal c:irt1.1lar. EJt;t Oli oorrnda DOf una ligasa y &e realiza la PCR
;
,.
S' AGCTT
, ..
ONA \,K'Uiar de
&>hk hclxtl

hibricbdus y
OesnaiUralzacin 1
+ T empllldo 1
Al q;_l.ll:ll quo: en 111 PCR nurrn11l. 111
d 0Jigad6n .,..001! progr('.Uir lfl,! u
1rl(fi()L pero l6kl jo,' an plif!C'IIdl el
l"lJIIII.'MO Si
IM'k&l o.k la otta
,.
. ftCGA S'
AMPLIFICACIN IN VITRO DEL DNA: REACCI ON E:N CAOE.NA DE LA
,.
,.
twa unphrt<'"""' ;nnlxb

!o('(UC!!d:o
,.
,.
oon Qve htitlri<IM oon 106 extre-mos 5' de la secuencia oon(l(;iO;II. po1 k> que la eiOo\gaeiOn se exlef'lder
a!redfx:lo' del ci ret.AO. Se generan copias de un ONA. Iif'IOOI delimitOOQ, como en la DNA normal, por la po9lel0n de ambos
oebadoros.
15 . 2 . 5. 4 PCR con adaptadores
Tomt)i4fl puede amplfficarse una regn de OHA de <le:SOOI'lOCida ligando a ws fragmentos de
rq$1riocin I,M1()S tJdaptadof'fJS, ollgonucle6lido& sinttico& (.Qn extremo$ (.QhC;$iYO$ oompatlble9 ooo k>9 generados en la
mve:slta. A connnuaCin. ooa vez desM!uralizadO$. se <'!&oe:n especlfloos para las secuencias 3' de los
Se amplifica asl el eonjunto de adaptadores y pero deOe senalarse que se amplifiCan pot
igual tOCIO$ lOS lragmentos de resltJCCin presentes. no :slo
que se do!
'\' AGCTT
l" A ,.--
adaptaOOr 1
S' GT'CCACTCC
J" C>GG"!GACG::'TT0:::C'5:
1 Ei y l'e$to do QciQ, de PCR 1
adq'ludiJf =
TTCTTACTCAC l'
'l'CAGTG 5'
AAGCTTCTTAGTCAC )'
IX'.t!ildut 2 [TTG] S.
TTCGAAGAATCAGTQ
S' G'l'CCACTGCAAGCTT , , AAGCTTCT'l'AGTCAC ) '
3' CAGGTGACGTTCGAA .. , . TTCGAAGAATCAGTG
15.2.5.5 PCR asi mtrica
Er'l f;$!e coso, !rata oe geht!ftlr copla-s de hebra sencilla de un ONA. En la vanante ms se al'laden
c:ar'ltiOiaoe-s muy de ambos cebadores, de modo que tras los pimetO$ cic:fo& de PCR uno de 911os se aQOia y,
disponibles ya sufiCientes cooi11s 081 ONA ditma, $(AQ vn.11 de sus hqbrns sigoo ampifidil'ldose grncias 011 ocb:ldOI' rnts
abundan1e.
15.2. 5 . 6 RT-PCR: amplific.acln de RNA
El nombte. MPCR oon inven;.( (inicitlle$ do /V'I'Cilo tr<Jn$Crlj)r.;;$<t). mdieo so lr<tla de un<'!
de RNA (cspecicllmonte mRNA) <'1 ae 1a sln.leSis pre-v1a ese su cONA (DNA complefl'lentario al
RNA), que despuh se amplillea por PCR. Es de<::it, no se OfJCienen Clelt)ias del ANA de pattlda, sino de ONA. aunque se
OOI'lsei'Va ocvlamente la secuencia de aqut.
Es el m&iodo con mayor capacidad de detoecin de los disponibles lb medida de la eJCpresin in vit10.
Se utiliza greierenlement. para an'Cllific<u mRNA$ do ekA&S asequiflle$, PQ1' t'je<pb COI'I utl:'l e;,cpresiOI'l
196
CLON:ACIN ACELULAR: REACCIN EH CADENA DE LA POLIUE.RASA (PCR)
eltrvada de caeno& gel'i&$ (pot ejemplo. globlna). Tambin se ha "' de lran&eritos da genes expresados
tn gr..OO minimo
La mezcla inicial conltene IOdos lo8 neoe:s3rios muostr<11 de RNA, tran5Criptasa lm.eraa. ONA
J)OiimetM3. <:eb<ldores y dNTPs.. El proceso comienza (por ejemplo, 45 mln a 48 e} eon la si ntesi$ do una hebra de
cONA pot la aoein de la trotn.SCriPtM<' irrvor$a. una polimerasa de ONA dirigida por RHA 14 7}, et
cONA unido al moldO <mo RNA: cONA. En una segunda etapa (por ejemplO, 2 mln a 94 "C) se CIOSMturaliu el
dllplex y la $09Un el mec:ani$ITIO de una PCR nonnal: la nee de cONA liberada acwa eomo
molde para una segunda hetlta eso cONA y 11.11g0 el dUple.x se en woeslvos ciclos..
R""A. de' hc'br11
u . . .. . .. . .. ... .
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1 E2 y ddos suoesiYos T+ED 1
.;1)' .o. oh: oJOOie h..:br" ..:n { c:...JM.dc 1'\'ft)
j. GCGOCAD'l"CCGAAJ'GGC .
J' !'rCAGC'TU('CCGQtATAGQCT'I' .o rtS'
+
j' . . .. . . . . .. . ..
. .... .... ..
. ..... . . . . . . l'
.. ... ,._ S'
,.
. . . . J'
T Mst3 con \IN! do ANA Ql}e este i'1tact3 entre do$ &itios de unin al cebadof pera
conseguir 1& amp!ir-caciOn. BajO et mismo se pueoe RNA usanoo 18 potimctau Tth (1811'1bi6fl
ller'mOes&able. aisiada de 1a bader'ia leM'IOfll& Thennus que 111 mismo tienl>o ONA
y IJ'ansctiPiasa ii'YVef'SS.
Tema 16
Clonacin celular: Tecnologa
del DNA recombinante
16. 1 Et\Zimas de r estrfec.in,_,_,_,_,_,_,,_ .. _ .. _,_,_,_,_,_,,,_,,_,_,_,_,_,,_ ... _.,,_ ............ _.,, ... _,,, ... _,,,_ 19 7
16.1 1 lnlt0duccl6n a las nudeasas .,., _ ... _,,_,,, _,,, ... , _,,, _,,,,,,, _,., _,,_,,, .. ,,. _,.,. _,, ,........ . .... 198
16 1 2 Entim.<l$ de re.lroeOIOf'l .. ,,_..,_ ... _,,, __,,_ ... _,,, _.., _,, __..,_,,,_,,,_,,, ------........ .. ...... _, 199
16 1 2 1 C<n;)Cteri5lic:.a$ gcner31e!S ..... - .... .......................................... .......... ......... ... ..... 199
16 1 2 2 P<IC)OI bdgico del sisl.em" rne4ill.'ICJI6o.4'esl.ncc01. 200
t61 23 Aeci6ndol&$9n.vm&500to$1riccindebell. ........... ................. . ............ 201
16.2 Clonacin cel ular de motkulil& de OHA , _ , _, _ , _ , _, _ , _, _ __ ,_,_,_,_,,_,_, ______ , __ ,,.,,._,,,.,,._,,,_ .... 203
16.2.1 .. , , , , 205
16 2. 1. t Insertos de ONA.- ... - ....... - ... - ....... - ....... _,,_ ... _,,_ .... , .. _ ... _ ....... - ... - ... - ... - ....... -........ ... _. 205
16,2. 1 2 l n$Cr1QS de ONA de un mRNA .. ,_,,_, ...... _, ,, _.,, _.,, _.,., ,.,_, 205
16.2.2 Preparacin del vec4or de clonacin ,,_.,. ,,_.,, .,, ,, .. , 206
16.2.3 Fof'l'n8Cion de la moic::ula de ONA reoatnbinante .... - ............ - ... - ... - .,._., ,_.,_....... _.,.,_, 207
16 2.4 TiPO$ de ve<:!Otes ._ .. , ... - ... - ........... - ...... - ... - ....... - ... - ... - ... -... - ... - ...... - .... - ... - ..... - ... - ... -........ ... _. 208
16.2.4 1 PliiSmiOos ,., _.,, _,, _,,_, _,,_... ...-... - ........ ,,_,.,, _,,_ ... ,.,_.,,_,.,_,,_.,., ... _. 209
16.2.4.2 .... 210
16.2.4.3 Csmdos .... """" .,, , 210
16.2.4.4 Cromosomas ... .... .... .. ... ........... .. 211
16 2.5 Incorporacin del ONA ala cUa anfltrlona .. _,, _,, ... _,.,, _,,_... .,,_,.,_,., ...... 21 1
16.2.$1 Tipos de cth.JI<' <1nfiri0na .. , .. , .. , .. ,, 211
16.2.S.2 Mtoo& de introdoocin del tONA ,_,, ,, .. , ,,.,, .. ., __.,, _,, __.,_, __., __ ,,__ _,,, __,,,_.,,_.,, __.,, __.,,_., 211
16.2.6 Propagac::l6n en coltrvo .. _ ., __,.,_,.,_,.,_ ,,_,,,_,., __,., _, , _,,_, _,,_,., _,.,, _,., _,., __.,_, _, , _ .. , ... -....... _ .. .,_,., __.,, _ . 213
16.2.7 DetecciOn y selecan de tos c:Sones reeotnbinanJes ... - ... - ....... - ................... ,.,_, .......... - ....... - ............... 213
16.2.8 E11ptesl0n genlca ,_.,, _,, _,,_.,, _,.,_.,, _, _ ....... -... -... -... -... -... -....... -... - ........ ,_.,.,_,.,_ ,.,_.,., .. ,_.,,.,, .. ., . ., _., 215
16..3 Gcnotccas .... _,,_,,,_,.,_,.,_,,_,,.,_ , _,,,_.,_,.,_, _,, _,.,_,,_,,,_ .. ,_ .. _ .. _,,_,.,_.,_ .. ,_ ... _,,,_, _.,_,,_.,,_,_,,_.,,.,.,_,,_.,._, 21 S
16.3.-1 Genotecas9@nmicas ,,_.,, __,, __,, __, ___, __,., __,_ ,, __,., __, __.,, __ , __, __ , ,_.,,_.,,_,, . 216
16.3.2 Genotecas de ONA OCHTlplen'lentano , _ ............ -... -....... -... -....... -.............. ., ... _.,, ... -...... -....... -... -......... 216
E1 mtodo clkioo de donacin de Ac:idos os el Que la c::apaCJdOid do l<at; clulas par01 replic.at
ef ONA. Sorge gracias a la aparicin de una: &ene de tcncas que oenniten elal&lamento del OHA y al descubrimiento
en los al\os 70 de las enzimas de teslnCCin. qoe hace postie en el labofatorlo cortar el ONA e ineotpe)tar tos
lragmenlos a que a su vez se inlroduce.n en oMullls anf,'ff10ttas, dOI"'de tiene lugat su replicacin. Aunque. etl
e111a teenologi a SOlo se planteaba pata c:toi\$Cin oe1 DNA. vri3ntes. Que ol'lllltion su
eliaenc::ia y exbenden su aplicaci.n al RNA.
16.1 ENZIMAS DE RESTRICCIN
Arttes de Clesc:tit>ir el proc:eso de ClonaCin del ONA, es I'W!oees.ario Moer inCJ$0 et;tutiill con CJet10
detenimiento laa propiedades y earaetetis.ticas de las restriccin cst<l<$ enZimas
un.a funeiOn propia C61u!as en q1.10 w doscvbr..,ron, $0n P<'rt<vl;ument ImPOnentes
POr er11)100 O!';J)Orimentaf en de la Biologia MolecWII. de intets tanto bsiCO como aplicado al
d inioo En espeCial. se utilizan en el proceso de la cionacln mo6ecular del ONA. de ah la oportuf"'icSad de su
esludiO en e$te AOems., bei'Wsn aplica<.:in en otra& t6cniet$. oomo la seeuenciacin del genome y el estudio de
198 CLONACIN CELULAR: TECNOLOGi.A DEL ONA RECOMBINANTE
tos po.limorllsmos (temas 18 y 27}. Se IniCia eJ estJJdlo oe estas er'IZimas OOf'l un re.cordat.orio do&&:$ ooclea$01$ en
gel\er&l.
16.1.1 Introduccin a las nucleasas
Se denomina de fonna genrica nudeesa a cualquier enzima con eapadctad de escindir los tosfOdlifJ:$tor
de le cadena polinuCieotidiCa de los nuleico$: $0n, POt tal'llo, fo5fodiestera&a&. Su espec:jicid-00 puede
""*ar$0 CC)tl tros cmerios:
1. hci$in on posk;iOOC".s intomi'ls o en la estructura primaria (endonuc:IN&as y exonudea&as.
respectivamente):
vbc"
..
1) "u;:n
.. .. NpNpNp_.
<; bocn
..pNp}\pNpNp N
L:i.l f)oouch::!'S;:s hulmlatlln
cnla('(';i fo"l$to en lU8
qt.te pwbcip& d nuo:lcUolidu
(bi<-.n 5' o bicl'l i . de la
nonudeao). (knan, por Utlll
C11okn11 pohnuct.wtfdK:aliCOrtadll y
un nucic+&ido(N)..
ut tPN o 1\' p)
o un n1.aCiefidobi;(osfnto (p.-.:p).
Las tndoouch'llw k'llo
internen M cadena. decir.
a lO!> nudHido;
Qcncr.m do1 ftamcntu8
polinuckochl:ici.
2 ActunciOn $Obre uno de 10!1 dOS ti pos M enl ace IOstoE!stet:
... pNpNpNpNpNpNp ...
Alunu lliOICieliSDlium::a:) nct'-'n
apcciticammtc: los '-'fllll\4 fosf.aao
(Cimllldoo tUII d 011 3', mi<"l1!nu: que UCtaJ
OuM j!] oon OH S'.
)'
'
'oj'
' o"
<T '
lk IJW
lftllllll" t 1. \-.011 ) ' PI
..... P
l'o
o-
J;C'
ooxle;u.;. dt IJilO
trompe j ' .f'. tntk $ OU ) 1
,p}.'pNpNp _._ NpNpNp. ..
Oc CStt mudo, lu de: liJ:Q.::L d11n l up 1
C.XIr\:II'IO!l J' OH y$' P. lllknll'llS QUC l:!S 0..
LiJiu..:ll:: produo:cn J',p y S' .OI I.
fjnttshtiJCC3itl 1 (k rrn!.1'11\ tk srmimtU b una 3' cM"udcasa de tipo a ... por nmo libc:rn el ,}".
t..-noio.;a! <n forma de: Su amOO ( hk!rlii-1io t(!hal) pf'\Jduce lll ln(>.lCII d-. ni.ICIC\.\stdos,.j ' .p
pNI)Np. ... ... ... P' "") pl\).."p..'lp.'lp.. .... "") - "") pt. } L pN
P' p.-..: IN O 'NMP$ J
fM(!!shN!roJU JI (de bg(! b.l\ joo), f..s UIIO $' de lipl) '11", J)C)f' lO qlk l ibeJll Cl OU.C:Iciijo 5
c:0010 ,S' .JM.:J(I,fato. S1 la eSC'Isln C$1\"J''(:lili\a. 114'1111\'CCU kw PJeesi,os .p y('!
4ef11'1inal
p'pNpNpNp.. 1\'Plto' pNpN )o..;pNpNp ...... NpNpNpN }
t t t
P'' Np Np c-.,nP ,. N., >- l' NMh)
3 Reeonodr'!"'ienlo de nucle6sld06, bien por la pento&a o bien por la b&M nitrogonad<' ($(:110 en nueleasas):
desox.i rribonuclus.as o ONasas. que actan slo sobre ONA; ribonucloaus o RN<'I$M,. Que hielr01i%an RNA;
r..,alrnente, algunas nucleasas distinguen encre nuclesidos purlniCO$ ypnnidlnk:os
ENZIMAS DE RESTRICCION
199
R)1n1 1 (.k nirn;a hmmp). <k ltP..' "b" .u.: s<oto iQI!te en que el
rtbottu.:lcMidl) dd lado S' r$ puimidinieo !C.L:t Se IUmt;m, po;-.r 141110. <un !i'..QII }
.:\ltc'lll(t 3'P pirimidlnico en $1.1 caso, d pmt!ll'llttuco> Ytenuintll) d
l'l<munall: fiA.I'{;fll. p<'ipl p( !l<ip( p.>\ .... pt\pGp-tp ' ( 1 Gp< P Aplp ,\
nNaso 11 1d,; bll?Q: imo GIS 1, de tipu .. .,_ .. que h.ll<li:o:a t-1 t-Illa' o:nll\"
purft'li.:O y pirirnidlnico; con ll1C'ftlll entre plnm!dinoro ) punn.w u cotn: pun11oro ) purintOO.
Se 10..-s. oon (' .fil! y )'.p:
pltp(;pl plopl pCpC.o( p.\pl pi\ pAp(.p l p(op t l r('p{..p ( " '" -t l l'\11.
16.1.2 Enzimas de restriccin
16.1.2.1 Caracteristicas generales
las enzimas de rc$1Tlitl se llamM tambil'l nuc:teaus de restl'lc:cln, endonucleasas de rHtrlcdn y. en
oe&SQ'Ie$. enzimu r0$trictivn o rcsb'ic:luas. Pettenecen a este grupo una gran di'Yer&IClad de
<:amo enzJrnas !Se diStinJas tlactetlas y caracterizadas en lOs anos 70.
Se dispone hoy comercia! mente de un gran r.Cmero de oll&& ton e$pecifiOdad y pureza.
Se nombran con tres Jetras del 96nero y es!)eeae de le l)acaeria de la que se aislaron orlglnatmen!e,
!eguldas a \teces por una lelta ms, que dentifica el scrotipo de llltlaeteria}. y fin...,el'lte P<W un
nVmero romar.o las idenb'llea en et caso de que en una misma vaname se hayan encontr<KJo varia& enzimas oon
di&tint<l

de rig.:tL
/lad ll
---
twg1ptl115
Hum 11 1
8(l(i/lm 1
Cl.--p3 fl
la lf'f'lportancia datas do re&trioci6n r:.clie3 en su granespecifieidadde reconoc:lmien1o de una seeuenela
00f1a de ONA dl:cllex y 1 Q()n$iguiente hicltOii:$iS de un enlace los.loellester en ca<la heb'a, jusUimoo.le en secuenelas
concretas del OHA llamadas sitloti de reconocimionto o de rastricc:i 6n , Los de DNA originadO$ $01'1 Ulles
!)ara iniCiar la ctonac:ln celular o aoelular, para el aniisis de ONA. ONa elaborar mapas fi.sioos de re:stricOOn (pg 22tH.
!)ara 18 eteoein de pownortrsmos (pg 381), etc.
enzimas de restriccin se agrupan I'IOrma!menle en !res tamilias. oe acuerdo oon s.us propledaoes.
Endonuc:-leasas
Tipo 1 Ti po 11 Ti.po 111
de restriccin
ActiviCI&C!
Endonucleasa y medtasa Endonucieasa Endonudeasa y meblasa
emimie\Jclt
en una mi&ms ptQ4einil (mctUMtt Cf'l \11'14'1 OfO'&inO'I n 1.10<\ t'nl$ma, protoi M
distintas subundades)
independienle) (en distintas subumdade&)
Coel'lzimas o ATP, SAM (") Mg?" ATP. SAM{)
00$U!If(MO$
Estruccura pro!elca
3 Sutlul'lklade:S. 1 subunidaa. 2 Sutluntd8Cies.
S recono(:imienl o, aunque actua oorno MS rooonocimiento y
R re$.1ricc.n. h0!1'\0drnero
M motilaciOn R re&1riecin
SitJOde No pellndtmlco. dos partes Pallndrmlco (48 pb) No pa!lndrmtoo
rec::onocim.eniO
sepatadas (ej.: TGA(N)$TGCT) (pOg. 57)
Pvnlo <le eorte Corl8 les 2 hebras et1 las 21\ebrM en puntos C01'11;1 tas dos en
cerceonos entre si. poco oouwalenle&. muye&pec.-ft<::os. punl06 diM&nlesentre sl2
espocirt(;Qs. 8 unO$ 1 000 pb denlto de la SEIQJenCi& de
3 nL srtuados a 2426 Pb
dol Sitio de rOCQnQ<;imiento re<:onocimienlo del sflio de roCQnQ<;imt(ltl\0
PunJo de metilacin Dentro de la secUMCi& de Aden1na ocitosina rooy Aden1na det'tlro de ta
reconoamien1o. especificas den!Jode la secuencaa de
En ambas flebras e1e re<;onota'l'lie:nlo
En hel:lrss en una $013 hebra
Inters en
No S No
trg.erueria i!nlica
!mplos EooK.EooB ..
Numerosos (pg. 202) Eco PI, Eco P15, Hin/111 ..
(") SAM = S-adenosilmetionina (pg. 201)
200 CLONACIN CELULAR: TECNOLOGIA DEL OHA RECOMBINANTE
Nos oonoentraremos en el estucliO de las ei\ZiMaS oe tiX> 11, pue$. 1/A on soc:vencica:s muy definida&, son las
utmadas como herramientas en lngenlerla gentiCa.
16.1.2.2 Papel biolgico del sistema metilacln-restrlccin
la f\lltural do '-1$ de rost.ricdn en mucba$ beelerias ofrece a &tas un mecanismo Cle
Cletensa COt'ltra la entrada cM M(ttf!l"ial do 0110 orgt'nismc>, ooncrelamente de virus beelerifagoe (cuya
reproducan depende de la gentica de la baeleria): se trata de lOS sistemas Clo ras.tric;c;:in.modfficacin o
metllK.In-restriccln. Para cada enz:Wna de restriocln, una metllasa reconoce la miSm8 seeuenei<'t que con$1il\lye ol
sitio de 1$1tiocln y une COYalentemente grupos metilo a determinadas bases del ONA en dicha Seouet\Cia. En el C3$0
de de lipo 11, la metaa&a es una proteina ndependiente. mientras que las de tipo 1 y 111 poseen las acliv!CadeS
y mcti3$a en su oliQOmrica. oomo subunidades qt.Je actan coordinadamente (ver tabla anteriot).
El rnoeeanismo de defensa es el $iguiente 01 ONA propio de bacteria es metilado de una lonna especl11ca.
earacterl$1lea <le <:ad3 esl)eeie (on 1M secvoncits reooncx;idas tamo por la restrictasa como por la metilasa
oe esa La l'rle'lllaeitl oe las bases la uniOn Clo la enzima do rostricc:in, oon el ONA propio no es
loti:ZBdo. Pot ef conttarlo. al enttar et1 la clula ONA de otro organiSmo, no metlll'OO o oon un de melilacibn
diferente. este ONA puede set oegtadado por la enzima de ya que eareco de los grvl$ metilo en la
secuencia diana (por razones I)IM'amente alee1orias, en cualquier genoma CiertO nUmero <le secuencias de 4, 6
u 8 pb iguales a &it roconoada por l<l enzima, "-'ego 1\abr secuencias diana disponibles). A partir de este mecanismo <le
oocin combinada S!A11i pteCisamente el nOI'fll:n de enzimas de restriccin: la accin Cle la nuclea!18 te8trltrge ta
J)C)Sibili<2ad de inft<;On POf virus.
D.\ .\ no
con sir"> di!" pan EooRI
AA T T.('.)'
3'C T T AAG-5'
EiluMatk
n.-101ncdn
&.?RI
0\A l!lf'libdv en v.v adenma del s1tiu
de rtStriin pan lia.JJU ((1'1 arni!Gs hbras)
S'-GAA-..'1 TC.3'
J'.('.T. T A A-G-5'
....


,,,,
"
(\
v tii):\A q tdlt!W'If>
En resumen:
11) restrictas.-' sobre s11ios no mecilados. y
la mctilasa 31.1\ia sobre sitios no oonados..
ambas la misnL'l
& est metilada una sola h9bra del ONA.. el sitio no es reconocido 001 la enzima de restricoin. pero si OOf' la
metilasa. <PJe allade el grupo melilo a la otra hebf<t Esto es 10 oue OQ..ne, POI ejemplO.,. de ta reQiicacin, donde
ol cst;\ k:wm3do por u!\11 hebn!l molde. pree.xi!denle y. en eonseeuetW:ia, metii&Oa, y olnl red61'1 sftletizac:Ja,
Qve aon carece <le grupos met*>. E.'lta aocln de las metllasas asegura que todo el DHA de tas dos clulas hijas quede
n-.e(ii&OO lo antes poslbte.
la metlacin del ONA afec:Ca a y adeninas de la sec:uenciit reconodda En a.. reaccibn. las
oomo don&OOr del grupo memo el (:01'11)ueS.IO S.adenoSilmeotloniM (pg. 22).
ENZIMAS OE RESTRICCIN
\1h


nkA

1

1 k JI )
201
'"'

'"
?--... ,)
1 1 .... .. ,...,.,...11 1
DNA
Oebe adelant3r&c que m.etiltlc.!ltl (lol ONA in.tetvieM en eucariotas oomo un mecan1smo de regulaCIn de la
e)(presln gnica. aunque este proOHO no cienc nOO;a QVO ver eon. ol rne.canismo ese proteociOn que Clesempel'ian 106
sistemas en procartOtas. Esencialmente. en eucariotas 106 oenM tiot1den <' est'*r on
tos cejldos donde &e elq)I'9S(In y metilados donde no se en las regiones ese ONA llamadas
'iSIOl&$ cpG-. pot tener es.ta secuencia dinucteotldica en la que C &ufre la meliaGin.
16.1.2.3 Accin de las enzimas de restriccin de tipo ii
SOfl estas las restnct.asas estructuralmente y IN me;o.- por su utilidad et\ tngenieria
Get'ltlca, a mOdo de t,eras para el corte del ONA. El s.itio de restriccin es a la vez toga de roconocimionto y do
r'lidrlisit.. S hidroriz.an oe IOtma muy especifica etMce& f06foster del ONA. uno en cada hebta, getMWtlnd06e d06
fragJmMtos. de nntriccKm El enl tloe hlc7tOiiZado es siempre el 3 'P (es decir, son E!f'ldonuc6easas del tipo a.
pg 198). POr lo Que el fOSfato queda uniOo as. en ambos fragmen1os exttemos 3'0H y La reaccin no
necesrta A TP. k:> qvo la diftreneia de te cataliz.ada J)Oitas enzimas de Upo 1 y 111.
. l

CMiitl
ombos llrhms

c.:nm.Hk
.;kl
PJ.Iindromo):
01ru
ttiM clllla
ll.;btl} (11
puntO!I
di>I1111Cii.
Soii'I'In<O,.,;
l 111> .;k ftlllnCC'tiln .)1."1'1 Q;:B,[u
)' pul mdr(m!!''> geucr.JI.tl!i.'tlll' dt ol :l 1'1 pb


1 f 1 1 t l
A-AI';.
X

1 1 1
, ... e-':' T
+
,.
1 1
:\ .. AG
Remhnn do>:' iJc. nN,\ -!.,.,
l'llln"lt'Nill llSI coniM!!Icn dc!iap;"adM5:
di.'IIOfl1111:u'l notriCb ( hl.,m ..,rdr)
--o- -A-A-1'-T-r--
1 ' ' '
+ ' ' ' '
-
dl."l:: fr.1pncntn." ok ONA
l'llll'\'molll llenen b;ec ob:ifl'U\'a.b;
... ot

de los disaintos tipos de extremos rcs-lltantcs de la accin de enzimas de rcsuiccin:

l
l
...
"'"""

'
l
X X X
l
...,uimii B
l

IS'
ONA dpkx
>
,.,
cnbesi\Oi
OOn )ihC'nti' }'
X X X

(
'

l
'''
utrc:IT'K!Ii
colbc)l\'0)
b
0011 11,'11({' J.
l
l
l
202 CLONACIN CELULAR: TECNOLOGiA DEL DNA RECOMBINAHTE
Algunas enzill\CII& de restriccin de tipo n empleadas en ingeniea gentica
_ .. _
Afl.ll
Bgfll
EtoRI
('(.)N RY13
Hae 111
Hindtll
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enzima es una
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en la k

E:.-trtmut
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-c-e-o
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-{;.
:-- e 7-G
-NCA-1-<:-N-
ms



$1-C-r-
""""'

*
*
*
- e


- A
-o


* < p<:
**
*
p<;<. c-e
pG
ObsfVe&e que en lodos tos casos tos extremos de tos dos fragmentos gonor<tOo$ &Of'l idntiCos. tienen '- mismt'
secuenei3 (se puede ver girando tao uno de ellos). E.sto es oon&ecuenda de la simetria del palindromo y de la posicin
srmtrica de los de COfto en c&cltt llet>fj. TOOO ello se deoe aqueta enzima actUa en !onna de dlmero, por tanto
reconociendo una misma &eeuenCiill y cortando oo mismo tiPO do ontnoe e11tas dOS hebras: por e_emplo, Eco Rl eot\8 el
entace (5') G-AA 1TC (3') en ambas hebtas.
y fOrmacin de e .. OOfleSivos es de gran Inters aplicado en ingenierla gentica (pg. 207), pun
fr.-gmonto$ oon una MiSma restttctasa a partir ele dos ONAs ddtos pueden interaccionar rne<fJ.a(lto ol
apareamienlo de 1M oe sut e1t1re.oos COhesivos {tal intetaccn no es posible entre eldremQS romos). Igualmente
se pueden asociar los fragmentos producido PQf enz:im<J$ que prOCiuoetl exltemos compatibles.
Oebe resa!tarse que ef produao I"O?I$0Ci<'lci6n de lOs dos ttagmentos en ninguno de lOs casos es Idntico al
ONA de partida, pues 11' dos molkulas.. La falta de enlace oovalente entre los extremos de los
reasoclados se indica con el nombre de o t*k. pg. 156) . stas se pu&&n <*lt&t o
sellar" w 1<'1 t'CX::in <Se aas erulmas (o DNA lig.a.sas). dando una molcda .:mica de doble he:tlra. Como e M
visto (l)llg 156), 1M catallzan la lormacl6n en ceda hebra del erce fo&b&tef que tallaba. oon consumo de
energj a, Pueden, Incluso. unir o '1ig.ar" do& fragmontos 00 ONA<:on tOn'IOS. aunque oon nu::ha metlOf eficacia,
pues no hay entre elos. la acci6n de l<as pues, contr3ria a la de las nocleasas (IOrmacln de
enlace fosfostor fref'lte a su hidrOiisiS). pero et mecaniSmo de la reaccin no es exactamente opuesto. por ef
CLONACIN CELULAR DE MOL.fCULAS DE ONA
203
requerirnien1o ei'M!'rgllcode la primera. Debe teSaltatse c;ve la liga$<' $iO:ml)tc un grupo S' .P para S.u ndui)Qf\,
propiedad que posee utilidad e)(pe(IIT'Iental (pg. 208).
e 1),, ,

1111 1 111 111 111 11111 1
TCO AG< -'11-A-A- CC'fCA'fCG-C
e U\\!
TTACACC'fACCCCG AAT-T-C-GC'f
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 11 1 1 1 1 1
AATGTCCATCGCCwC t A A

e
ACCTC
CCACTACCG
' 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1


r-<:-G-G-t
1 1 1 1
c-e-c-A
1 1 1 1 1 1
'l'CCAG
' .- ' '
'f-1'-A-A
l))'o.A l t>.'!!blnliiiC' 1: 1
-:::n
' .' 1' ' 1- . '
' ...
ON\ f(>;(.-..e-.. 1:!
e
,. .. ........... -e---T ...
.. 1 1 1 ' f 1 1 1 1 1 1 1
t...-0- _ .. ..;..; .... ..; --.
twl\ tC'.'Ofltorl .... 1 :Z
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
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-... ........ -
16.2 CLONACIN CELULAR DE MOLCULAS DE DNA
El objetivo cenlnll de etla ctonaon es la ptoeluocln de un gran de cop&as de una regln de ONA
(fragmentos o genes) o de cONA (f()fm<'ldo e: P<Jrtir de \10 mRNA), $4) lr318, POI de un l)tQ(eiiO 00 don<oci{)n de liPO
cel u.lar {pues se consigue gracaa5 atmpleo ele 188) QI.Mt. pOr <:ontr800$ici6r'l <'1 la clonacin POI
PCA:. m vkro. se puede conSiderar qve se realiza in vivo (e:stclamente I\OO&ilndo, en cultivo) Se Da.sa esla donacin. al
qve ''-' PCR. ra realizacin de ,_,pres rondas de replicacin, peto en este caso catanzadas pot ta ONA
peolimerasa propia de 18 eerura en raque se lleva a cabo el proceso. clula <mtttrtona. Para eJIO. el 1ragmen10 de ONA o
cONA a clona1 (llamitdo in serlo. POf razone$ <u se o:>mprenderan dCSf>JS) &t vno et otro ONA ( vector dt cloMcin).
y la ITIOievla de ONA recombinante formada se incorpOra a la clula anfitriona donde tiene lugar la amplifiCacin por
repllcaciOn. Una vez detea&da la presenoo del ONA de inters y &eletcioMcto& tos clones que lo han amplificado. se
alsca el gen o fragmento de ONA o cONA. que se emplea oon disdntos fln&S, esencialmente el e$ludi0 de caraaerlstlcas
Obje-t i\ ,-s
la doni11n
. . . F.:audio de l:l CSLrucrura d::: cidos: nucle-ict-.;.
{
S'--eucndadn
Amphh<:oc10n _ . .
EstudiO de homolog1a entre csp."eii!'S
d.c multldoncs; (1M ejemplo, :lSoX:ia<bs :l enlt:tml."(bd
&.tudio del proc.::so de y tmduC4;ifl
de regulacin: de conLml ((\(!( cjo:mpl(l,
Prdoccin de la
ptotcina o RNA
(formas nom1alcs
< :o
1ura su Kknti licactn
Para su estudio (pruptl'<ladcs. iUnctOn ... )
f,M uplicarn, (producdn diagn-M1oo.
tcrupu11ca. nu1r1<:1fl. mdustna ...
lng<:nicria de pr01cinas coo altcl':)('i(J(l di." sus.
(par:l o :lph'-O'Icin)
204 CLONACIN CELULAR: TE,CNOLOGiA DEL OHA RECOMBl NAHTE
fiSICo<t$, 0$11\ldurtt, prQS)iod.adO$ tP(pre:sin gnica a proleinas. eK.. (muchos de 96106 objetiYOS
pueoen set apliCables tamtlit'l a la PCR o Clooac:i)tl
Pot razones peclagoglcas. a la vez que de enfoq.se experimental. pveoe <le$Cribil'$e lll clonacin en siete etapas:
do& de preparacin de muestras. cuatro sucesivas de Clonacin dicha y. segUn los casos, una de
e11pre&i0n. En oca&tOfle&, &e aliada la amplificecin por PCR del ONA donado (en esle caso. et p100e90
dos donaaon8$ sucesivas, oeUar la primera y acelular la seguncta). Hoy die, todas las etapas se realizan de forma
rutinaria. a veces induso automatizada, al disponer&e de fama oomercial de las enzimas. suslta.tos, vectotes, etc., e
instMneniOs adecuados para &u reaizadn.
Esquema del proc('().imienlu d(' clunncin:

0000
o
*<<r de
ckl!l:.cll'trl:

('omo
.:k clonacio6n 9C'
pu..odc utili.tier
un
un "''
\ ' i ru& . ..
So propiedad
es que

n."Piichlivos
el
DNA y d V<lQior con un.
rnl1>110 de
ft'illncc!Cin,
unino: rncias
!IDa bgasa, Al C011JiliKI.
\ 't:CI(Ir t iSfnO, il' k
D ... A
l"f'lnrbhra lt
FJ ONA
rcootnl!iflamc se
intmducecn
boc:ri.s.
('ll'tpol'lll)d(l

El rephora 111 doVlduu la bm:w:n a y
tatnbM de ronna III.IIIIO: lln/1. C<tll tUI>,IIIllntnta d
nmero de copill$.
C.-da bllctcria. bryB no UD \'t'ft(lr y
un I>Ni\ ,_. mull1phca lbf lup
a un ". de bacenas coo idmico
IIU:I\'tlll] (ll'll:hudo el
6 ta'l:lS (silnulr:\tlcas):
etMar y
(de las clulas que: han
incorporado el ONA eJe in.:r!l)
No lq. baclcrin& h311
UICOr110r*J0 d 0NA !k
int.t:t$ rCinn/ltiiJO del
\'lar 1'\'CUmb:matll.('. Se
&ciQI).fllln l t$ que a{ lo
han
1:11 Ull nr,'\'1;(1
con antibi6tao. :r;:i \'JI d
\' lor indu}'C:I #Cn ck
m!l.'ltCI'Ida a cst
atlllbitir.
7'napa (opdooal):
expresiOO del DNA clonado
CLONACtON CElULAR OE MOlCULAS DE ONA
205
16.2.1 Preparacin del ONA para su clonacin
Esu. el<'IP<l de lal cton<Jcin, &;1 inicral del iiCido nvcleico que $9 quere ctonat, es una parte
esencial del proceso
16.2.1.1 Insertos de DNA
Se p3rle Ot olul:l$ nueleadas JiSadas pot SC)(Iicao:;in o f>Ot llu$0en&i6o en un medio
nipotf*::o. una vez elln-.nadas las molculas ecompanantes, tanto RNA (con RNas,a$ o llidrOii$i$ <'IIC311i!'WII) oomo
ptOteina$ (OOtl proteasas) y enzimas o fragmentos ptOteolili009 (en SiSieM3$ M.&tieos $e pretip.ta y
ooncontrd el ONA {con etftOOI y sales). posteriormente se fragmenltt <;on onzim<l$ ciG restnoc.:in, P<JI'<I dar lugar a
una mezct& cuyo en y tamafiO de rtagl'nel'lto$, depende nU"*o dt $itiQ$ (lo; rostriccin y de $U
aocesl;libdad para las enzimas. El fragmento que se va a Clonar del:>t Mlat$e, o sep$rat'$e Clel l't$10. mediMte <'llguno
aaecuaaa, por f!tertl)tO etectroloreSls en gel de SQ&rosa, ceniiWugaeton en grB!fiM!e <!e ae.nsidad, CJ'O(nalogralia
de alta presin (HPlC), etc. Cuando$$ desee expresar el fragmento clonado (etapa 7). es neces:ano preparara
adems un int;erto ao11liar que: oon40ilQ<l elementO$ de la epre&IOn gNca,
OC' talles del procedimiento de t lonllcin: prtpar acln del (erupa 1)
3 posibilidades de gcDtrac.n dd fragmC'nlo de ONA que se clonar
""'"'" Ls
lip.l.k
muesllll
dt; f"''
putitiuda..
dt
pn:pnmcin de un inserto IIWtili.1r pn01
c:l caso de: donacin con t
1 ---c.a.UOOCAAUCC--- U uuuAIJ"
1
' tdJNAo ;,.,...,,_ ...
....c::J-
C'Iapa 3
16.2.1. 2 Insertos de DNA complementario procedente de un mRNA
En muChOS casos interesa ctoflar la Codific.n'O dt un gon para lo cual se parte de mues.tras
f'I'IANA que debe ser convertiOO en et cONA (pti9, 195) par.;t M!f donado.
En es:te caso no es Indiferente la eteocin oe laa oell.fM de partida, pues c:o<!:. tipo cetulo C)(ptCSt1 tMt oon1unto de
prOIGin<IS diferente y, por no <;onbene los mismO& mRNAs. Una vez lsadas las oiul&$ del Otgano, lcji<:So.
206 CL.ONACtH CELULAR; TECNOL.OG(A DEL ONA RECOMBI NANTE
tipo celular, estadio oe oesarrono. etc .. elegidos. se purifica ef mRNA, generalmente aptOYeehando te presenola en su
mol&eula de la OOl8 <Je poM(A) (pg. 280). Se emplea para ello crornetografla de afinidad en eolumr.e o 11'kroe6feras
magnlbs de afinidad (pg. 136); en ambos casos. la matriz cromatogrfica o microesfera magotlca llevan unido un
olgo(dT), Cuando el mRNA ca donar no e5 se puede amplific:cM' mediante PCR. filCilitanOO a&l su clonado
postenot en clulas.
Pata ptepatat el cONA se em:Ma la transcrlpta&a inver&a. de forma anloQ& a lo estudiado en la PCR (pg. 196):
El cONA w:lusii'Vo:" <k JOOI.:k JQI'I la slnle11S do: unn hcbn. mcdianu- In
ucc6n .k 111 ONAp:,ll !k E.. roiL El salict11.: poll(dC) sirve: de molde a un c:c:blldor
Oolil)('ldG): en uJOS. una ((1'1,..'0C'UI nol>;u'allkl )' n formar uN
bbtqtuJI11 que hace el de eebeOOr sin M$i&d de inlrodtK"ir In c:oln .1' p)lj(d(),
16.2.2 Preparacin del vector de clonacin
En general , un vector es un;a motecutt\ do ONA de tamaliO pequer.o, lc:t de aislar y C81'acterlzar, oon secuenca y
mapa de restrlocln (pg. 226) conocidos. de fcil inlroducdn en la c$h,.1la anfitriona y un.- voz cali oon dll
Atp.licaocM autnoma. es decir, independiente de la replicacin del oenoma de la o6IIA;II arrlltriona. E$ QOI'I\OOnienlo que el
vector po$68 el mayor n6mero posible de s!bOs de restriccon. P.,.llll"'<5$rtM el ONA q.,.e so q.iore clonar. y
qutt incluy3 al monos un ge11 marc.&dol (pof eempb, un gen de reSIStencia a un antibitico) que permita identificar yfo
seloocion<ar que lle\1111'1 el DNA recombinante {pag. 213). Lo com6n es qoe 106 veetore& naturales no posean
todas carac;teristic:a4, p0r 10 Que se etl'lplean vectotes modltlcedos (a su vez. obtenidos pot tcnicas
oe DNA recombinante. pero ya oomorcialn-.n1 COfl todas an prestaeiol'les deseadas).
La rntsin del veelor es unirse con el fragmento de ONA Que se Quiere clonar (llamado entooces Inserto) para
facilitar su entrada en la clula anfitriona y su replicacifl Par.t unir con fa<:Jir;18(1 ambOS, se debe cortat el vector
con 1<1$ mi$mas onzimas de restrlocln que se utJtzaron pata escindW ej DHA de la muestra o con que
proporcionen xltefnOS CQmpatictes: de ese modo, sus secuencias complementarias pueden asociarse y ser unidO$ !Xlf
la ligasa. dando tu9ar a una sola do ONAdebte hebra, llamada DNA ncomblnante (rClNA).
En funcin de tos oo,etivos de la clonacifl (ampiflcacin y xposin). so suese Mbtar <te dos graneles grupos de
veciOte'S. Por un lado, los vectores de donacin, que &e P''" ;lml)lifiebt ef DNA de inters;
lr.mbi6n los llal'l\8 a vecesvectOtes de Insercin o vectOte:& de Tericamente. $lo inooparsi &n el
do inc1S (p&g. 205). Por otto lado, lOs vectores de expresin. que poseen adem$
la e.prosiOn por lt'l eetuta anfitriona del ONA de lntefs. En este caso deber incorporarse. adems de 51e, et ya
mencionado in&ef1o con una tegOA oe ootltrol de la exptesln {pg.. 205). En ia prctica, bs vectores de
comerCiales suelen lnck.w Yil un<a regin <:s. <:QntrQI, comUnmentc promotot potente que se indulea
fcllmente bajo condclone& experimentale& oontrolables. viiliclo PVt'l inser10 <Se in.ter6s que se SitUe
tras l en el rONA.
Aunque exi&ten dlvet$os IJil06 d vec::tore:s 208), pc)f la descripcin se har con un plsmdo, una
molcula pequet\Cl de ONA c:wcutar
CLONACIN CEl ULAR DE MOLECULAS DE DNA
Oetalle:; del procedimiento de clonacin: preparacin del \'tor (etapa 2)
(<.-ortc del vroor para <:xtrcmu5 a 5os dd 0"11/\ l
.. _
yf'owlf
W\'I<Jr pco:polalJo b .. 0\':l,.:.n
lkl O"" A
-e::,...
CUlpG J
16.2.3 Formacin de la molcula de ONA recombinante
H " .,,, .lf

t-ctrntc: cmplelt
.k ;:k
s itof>l> .k
CGI'IC d !in
Pfll ' ""' -=
ri
t;,.o Rl (2) p,.
207
Coosls.te et1 la unin eovatet'lte, kt vtto. del inSerto DNA a1 vector mC(Ji3nlo "'"' lig;.a, La
especificidad de la unin depende del tipo de e11trem0$ q11e hayan resultado al prepatat el nserto y el vector:- SI son
cohesivo6. w es 1& especlfiC8 de la enzima de rutriocln etnpleada y slo se asoCian los eJttret'riO$
compatibles (pg 202): una vez asociados POf de bases. la ltgasa estabJece la uniOn covalef\te s.euartOO
las dos mellas. Si se ttata de e)(lte<IS romos, no pueden asoeiarse ta lig;)UI lo$ pvccJo unir, illunQve con rnenot
el'icaeia y ('M) suporte nmguna diferencia 18 6f'IJ:ima dt teStfie:ti(ln cn 1<'1 que te tlfCPtUC'ron (se ClOeda decir que todos bs
c,xtromos romot $On QOtl'lpaijble$),
Detalles del prf)(.e<Hmi('nto de clonacin: pre-paracin del rON A (Na pa 3)
{untn <kl Ol"oA que: so: quKTC c.:lonat al \'t."Ctor)
lhip:!'lC!flfO dt r.>NA p (1 ''*'':. quc 'lil lfl'C <:lllfl:)f
fins.cnodt in1crb1
+
dt' l)}b\ (oJn .,.. ok
ht lmstnO;v.nobafl
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ll '

208 CLONACIN CELULAR: TECNOLOGIA DEL OHA RECOMBINANTE
lt\ prtlcticao, pu&den OCUtrif dNersos t4)0S de asociacin ftagmentos oe restriec:iOn eot1 exttemos
eo.,.,....iblos. IO<Ias etla4 ettt311ilodas IX>' la ligasa. En primer U)at. sien"())'e puede darse la asociacin i ntramolecular.
es decir, enb'e los do& extremos de una misma molkula (vuctor o inMrlo); lli se de un vector c:Wcular, da lugou a &U
reclrcu181tzacln. Esta Interaccin e!M favoreetda wando la ooncentr..cin de ONA (pue$ la probal)iidad de que
dos mOlcula& se enOJentren es menor). En segundo puec:M t9rter lugar una i1$0CSOCin lntermotecular . tanto la
oonduce al tONA (vector+inser1o) como otras q.ae oonc).Jcen a produaos no deseados \'9Qor+vectof,
irtSeno+inumo. unin de ms de 009 mOlculas. etc.: !Odas eb9 pueden ser clrcdates o lineales. E!Uas Interacciones
son m#l5 probnblos p,ttrtt ooneenltaelones elevadas de DHA.
Jtl Jll'li'f KI IKI<'t:lCWflt' j :J)IM.'1&i.'i( oll\ 'll' \ffii)J'
o- o o-en
o)U11S \' CCI Of'
ri)NA

Para evtear la formacin de e5to& $0CVndnrios. que disminuye el de la elonadt'l. se acude a
eostra!egias expennenlales. previ.,s n 13 mezCla oe veet!lf e inserto. taleS como la esdsiOrn oon dos enzimas de
re:tttieeiOn Cllferen!es (pg. 207), que ta recWcularizacin del o. oomo t;e di8$Cri00 ;) l;t
oet!Qslol&cin del vedor oon fosfala&a alcalina.
vcctOf al:licno

cn7.irn;u(.IJ de

16.2.4 Tipos de vectores
.l pum(K de !N.I'>blc ufUOn,
... : p\ledcn unme eon 1

La lilt& de grui)06
impode l.a
rccucu1Util3Ct6n par ligua
Pm llmk>. a1
dt uain _.. bora quoda
hp ..t. y I!U'" \'<.11) n
mcl l;,. y ton

.:erlln mi unk
por 11111 mC'C\lllrlii\IK dr
dt dt 1
"tlut:r llllfiU'll(lna
Los empleados para la donacin de inseftos de 0NA$0n mvy variado$, Pue<fien segUn varios
cnterios. t&lt$ oomo
Su procedencia o
Ell4)0 de ITIOikula a partir de'- Qvt $0 preparan:
Plllsmldos: bacterianos. de Mdur<'l o oe pcan1as..
Virus: que Infectan bacterias (bacunlfagO$ o $implementefegos). planl.as, ii'WerteC!tados o venebrados.
Cromosomas artificiales: denvados de elemento$ eromosmiOO$ de lagos (PACs). de bacterias (8A.Cs) o de
ICYI!M).Was (YACs).
Quimeras. $$ deot, MOlculas fQtmadas combinando partes de otras cuyo origen es difofente
Normalmente, Quimeras OC pi&SMI y lago: esmls. fagmiOos. fllsmld06,
El pO de oUa anfitona en la que el DNA rec;omDinante resultante se puede luego lnoorpctar (etapa > .
El gen de teslslencla (Jie conbene er1 V9Ctor para $U poslerior detee(j()f\o seleedn (e!apa 6).
El tamano Ge' OHA que admiten como ln:sCf1o,
CLONACIN CELULAR DE DE DNA
Tipo d9 v9ctor
Pfasmidos normales
Bac:tenbfagor.. pot insercin (fagoi.)
por sustl!ucl6n (fago A)
C6smidos
Bactenolago P1
PACs {cromosomas artifiCiales de PI )
BACs {croi'I\OI$omas ertifieialesoe bacteria)
YACs (cromosomas artifiCiales ae levaoura)
Tamao del
inserto atdmitc
0-IOkb
923 )(b
30-44 kb
70-100 kb
130150 kr>
H.Mt8300kb
0,21 Mb
209
MC1odo de prop3gaci0n
Replicacin prora del fago
Replicacin ptopla det fago
Replicacin a modo de plsmido
Debe, adems. setlalarse que continuamente surgen f'K.Ie\'0& bpos de vectores oomo consecuencia el avance en
las tctlCas de lngenlerla gentiCa y las necesadades por el de68rrolo acelerado de bs Proyec:IOS Cenoma.
16.2.4.1 Plsmidos
Son molculas de ONA de doble hebra, de peQuefio lamao (25 t:b) y forma cvcular. presentes en terma libre en
el eilo$(:11 de mucnas baeaerias (de 1 a 3.000 p&ttsmkiO&foellAB) y de algunos eucariotas UW\Ieelulares {1)01' ejemplo. el
pljsmicto J de o de 1Jtn1 son ladtes de puritlC81 a partir ae1 cultivo cacteriano Pen1'111en
incorpot;)C*)n clo inl;cr\0$ ONA do un tamt'o de 10 Los f)ltlsmidos nnturtlle$ 1)0(:104
genes propios, ninguno esencial para la viabilidad de la olula. po1 10 que pueden ser modificados sin afectarla Para su
repllcaciOn autnoma (inOependlen!e de la Clel cromosoma bectenano. aunque UllliZanclo las mismas enzimas), se
requiere una s.ecuencia origen de replicacin. En cada divisin tlular. el cromosoma ong.'\<1 una sola oopa por otuta
hija. n.e:nlras que el jll!I'I'IICfO (en su caso. el tONA I Of'mado a partir de l, etapa 3) sufre replieaoooes mUitiples y
origina varias oopias por <:elula {oe 20 a 50). Los plasmldos son asJ tepliCOnes (unidades de repliCaeiOn, p&g. 150) que
se trnnsmi!en y ma.n.lienen de l'l\8f"oee'8 e,stallle cornoeiteulos
El empleo d9 un pt$mido oomo -..ector de cton.ocin se favoreoe cuanOo ncluye genes marcadotecs. euya
presencia pueda ser delectada o OJya expresin confiera a la olula anfitriona portadora del rONA una sene oe
propiedades especiales (pg. 21<1). Por ello, se U!lllzan plsm.ldos artiflei ales o sint(ioos, obtenidos a $U
voz por tcniCM do ONA re<:ombinante ydi$poniblos comerei;'t!mtniO. Saosle tomo ejemplo el ll&:smdo pUC19

.\r,q l Al l .\N .. tl nu..,l ll ,,.,,
1


l'r l -"tlrl ffmdlll
l:lll\lhOOt'11l'f t'<btuo!' th!nas
un teas J'll,. 1} ;;nzirtb d;;
Su pos.i(in dt>Mro
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do: ro:1ricc'ioo NrnticM .:onar
plt pu11111'1
s,."'illlb M'-dadn de
lse mua.lt\lll s04u lb \le <'JMUltb
que- en un uru .. -o pune()
210 CLONACIN CELULAR; TECNOLOGIA DEL OHA RECOMBlNANTE
16. 2.4.2 Bacterifagos
Los virus en general se replican modiante l<a QrOOJ<:cln de su genoma en clulas procarlotas o eucariotas
{ll'llecc:i6n). propiedad re&UIIa til pera oon&egl!M una alta efiCiencia de clonacin, empleendo como vectores virus
modificado&. Cada tipo de virus infecta a oUas espeeffica.s y, dependiendo del tamal\o del genorna vfrico, dnlle
ll"lserto6 m9 o meno& grandes. pero en general mayores que 106 que se pueden in&er\ar en plsmldos. Asl, para clonar
en baoctenas w vson b3(;.t ctrif;tg0$, baculovirus Pf!r<'l de inseclO. y vY\.1$ SV40 o retroviru& para oUas de
mamiforo L;a de lO$ virus recombir\hntes $e oonsigue en un cu!liYO do AJ$pectiva5. en
tas <ue el virus se reprOduce. El uso de virus es especialmente adecuado para la en Q&lui<'IS do mttmiforo, I)Of
su elevada elieacia de oet rDNA. pero dada su compleleiad y pot razones de eldef\o!liOn no se tratar et1
este tema.
Los vWs mas empleados oomo \'&ClOI'ee son lOs parslt06 bacterianos fagos M13 y A (l.ambda) . El
tamai\o def vector recombinante se ve rmilado pot la necG$idad de su dentro de la cpsida. El Wlserto
M puede introducir do 1<'1 mi$111<1 form<t por<'! lO$ dO<:ir. corWndo inJOrlo y ONA dol folgo con
las !Mm.as enz-onas de r8$lriocln y ligando para ObWottr un rONA. ei!Ao M denomina d4.t in$on;i6n, y estoo
voc&oiO$ osPOcifloos p&ra eno. CUando et tamallo <tet DNA de interes que se donar es may, se puede
II"IOOrporcw etlminMdo previameo1e la Nt'e del oenom3 viricO Que no se reQuiere l)at8 13 infeQCin y repUeci6n: se lltll)le
entonce$ de tknic:l de JusfittJCIOn o
V'-xtor<.'$ de donacin basados en el fago lambda
16.2.4.3 C6smldos
ONA de intl'tS
(..o)Oo \ 'NU)(q d t
i-d.S. lOdltUicn

i 110
.o se
e.tl'!l\i(!UCIAf C.
;jplid ...
1\ l d iminarw 1, no
- ,.;olll , l(l. ,.K!..,.,., tk
"''dtwilio de
Ut!Nikl si d
JW'II que pu.:dM tmpauo:lllnt
Sl>lcnut do;
del
\ 'U'IlJo..
lnun:utnc:i-s
Son vec-tores s.lntllcot.. quirnerM que COI'I'IM earacwisaieas de plstnldo!l y legos para eomblnar las ventajas
ele ambos dpos de V9Ciores El fragmo.nto plasmidic:o propOrciOna las caractetistlcas de tamallo pequei'IO (5-7 kb}.
oo origen de repticaCI6n. un nUmero oe siliOs de reslriOcin <lOMe se va a Insertar el DNA. uno o ms
marcaOOfes &eleecienable$ y 13 en t:laC'erias oomo SI f\Jesen plsmldos. Del fago >. se toman las
secuencias oos (del inglk Sres). que propordonan al COSmldo &a capacidad, propia del ONA del fa9o. de &er
en dps!Oas vi ricas In VltfO.
l.06 csmldos son ties para donar 11"1$01'10$ de gr311 (!'lasta 45 kb), especialmente en &a preparacl6n de
librarlas genrri:as de organi$11l0$ supori()res, ya Que dlsmlruyen en gran medda el nmero ele clones necesariO$ para
que todo el genom<'l 0516 rcpro&ontlldo en la genoteca (p&g.. 216). Los ml!odo!l de k\troooecin del f{)NA C06mkico
4) dependen det tamallo del SI sle es pequeflo. se puede introd\lcir por tran3bmacin (ltts se
nnocn compotefl1tts p:wa inoorpotMO en forma de pl!lmdo pjg, 21 1) Si el tolmailo " r.WMmeote
grande. la transfotmacln se complica y debe acudirs.e al CJteviO en torma de tagos, Bprovechando las
secuencias oos.
CLONACIN CELULAR DE MOLCUlAS DE ONA 211
16.2.4.4 Cromosomas artificiales
Este bpO 4e veelOte-s se h&l'l disellado f!f\ especial para adapt81'8e al gmn tamano de insertos requericJOs f!f\ el
casooelgenoma humano y de otros mamfferos. y para la clonaan en <;lulas eucariotas.
a) Cromosomas artificiales bacteriatlOS
$1} lOS 11.3tn<'l oomUnmettte BACs att.fiCiat cltromosomes). Se ttata de vectores Sil'lt&ti(X)S derh<aoos del
ptsmldo F o o1 ftlgo Pl. Se en primet lugar, por aoepl.at nsettos Cle DNA, 100 y 300 k:b. En
comparacin con otros tipos de vectores. los BACs oontienen genes que reducen $U capac:dckJ de copia. es decir. de
teQIC&Cl)n oo la clula anfitriona del rONA fonnado (elapa }. Como rewl\ado. se con&tgue mayor estatl6d.ad de lOs
ii\SOrtos <)t ONA <fe origen eucariOtloo. qoo en cosmldos wfren con frecuencia reordenamlentos Internos. Gracias a
estas dos c.aracteristica$. tos BAC$ $01'1 voctorO$ a4ecuados '" elabor<tein do gonotecas (p&g 215)
b) Cromosomas artmciafes de fevedora
Los YAC& (yeasr 6ftiftCJaJ $0n vectores &intboos que oont!enon tas1ros regiones rolt'ClOfladas con
aa lunciOI\&IIdad de U1\ cromosoma (pg. 92): secuencras constituyentes de un oentrmero, de dor. telmeros y de un
oQen de A<JemAs. inCorporan ef'l general genes rnatcadores sete<:Cion.ables (etapa 6) y un s.tlo oe ctooaoo
mU!tlPIO (t(apa 2) en el q\Je admi!en ul'l inseoo de gt&n tamallo. que puede alcanzar t Mb, to que constitUye una
fundan\IGI'It&l . En OC:biones. e-ste llpo < se del'lomir\81\ pot lOs 3 tipos oe
secuencias que conbooen. La &ec:UMCia oentromnca permite la $egregacin oorr.ct& de QOS:llit$ del
cromosoma durante la divlein de la oluta (pg. 92). rr.entras que los telrnetOO elitabililan. como se ha estlldiitdo.
1()$ (;r'()<0$018S a to tatgo de sucesivas dMsooos (p&g. t S7). Et origen de repiM:acln o secuencia de rel)tiC8CIOn
autnoma (ARS, ropflc<.tbng permiW l<1 de oopiil$ del croll10$0mll Mifici311 dt
Jndependtente a la del genorn.a propo de la ci!Aa anfitrioM. los YAC$ se utilizan en part!Wit'r p-ep,JtCJt genoteCM
de genomas MIJY grande$. o para manterter un gen oompleto en un Unioo dOfl
16.2.5 lncorX>racln del ONA recomblnante a la clula anfitriona
La repllcaclon de las molculas de rONA (donacin) requiere que stas se en una dlula anfitriona
(receptora u hospedadofa. inocwrectamente llamada CliMa husped). Para que esta noetp0r8c1n. que en general tiene
IIJ08r por mecanismos POOO conOQC.IO$. setl 95 preciso empl$lar telul;n espeetaiiZ<ldil& (oon un genoW
seteoclonado} . adecuadas al vectol de donacin ubiiZado y con c::apaetdad de diVisin.
16.2.5.1 Tipos de clula anfitriona
COI'I ttecuenct8. laS clulas anfttrlonas son procarttlcas. pnnclpalmente cepas de E. ccN. O<l' w f&Cilt$ <fe
obtener. maniP',IIar. JOOI!iplicar. y tonooerso geo(ttic& Al proceso de .,troduoci6n del rONA plasmid1<:0 se m denomna
vansl ol'mselrl (pg. 212)-. L&(s) molaAao(s) de rONA plasmidlco lnOOfPOfadSs se replican luego V81'13$ veoes del'lltO
oe la clula. de acue((lo COI'I las propedades de 10!1 ptasm!OOS. El inSerto de ONA p!JeOe un.O<> t'll
(10 m$ frecven4e) o con el ONA del c::rol1l(l$oma Si se integra en el vector ms de un 1Jp0 de ONA, pot
eemplo, dos genes o un gen y un regulador de la transcnpcln, eJ proceso de lncorporacklon a la clula anfllf\ona <lel
rONA se llamacormnsf0rml8ciotl.
Las cl ulas anfitrionas eucartUcas son ms dtllclle& 00 obtener y m&tltenet, pot roque Slo se utili%M oon rWteS
especil'ieos, rur.oamen111ftnen!e pata el anill:iSis oe la regulaeifl gflle&, la ex!)(e$i0n de unt't prote-ina eucaonbtica. etc De
enlre el&s, lt'IS m$ c::ul!ivo $01\ 13S ievaduras quoe, a,mqve manbeOen .-nas caracterlsucas Similares a
llf(lC;)riotas indiY'Id\lales. c::recimien40 rpido y ec::on6mioo. manipulables, etc.). tienen una organizacin oetulat
Plll"<t de eucanot&s y $0n de- intet's bio!oc::nolgico por su caopacidad de y madurilciOn de protelnas.
Enlre la$ cl ula& animales que pueden eslablecerse en ct.mlvo, se puede>n cltat las c:lu&as Het..a oe careir-.oma
Aumano. Jos fibroblastos N!H de ratn y BHK de rll'ln de hmstet. los OYOCitos de tatOI'I , ele.
pueden divdrse multrtud de veces conservando los mtSmos caracwes. pot lo que su de Clonacin e.
elevado.
16.2.5.2 Mtodos de introduccin del rDNA
Pt.le-sto que I'IOrrnalmenle la !1'4mbr;)n;) P'Mmtlllic:a pen'I'IOilbiliciad selectrva y no admite
rragmMtos tONA, se act.H.St tt diV9rsos mtoOO$ para facilitar su captacl6n por alterac::lon uansllorla de ta
celular (m!Odos paSNO&) o lnttO<Iuclr et rONA directamente (mtodOs activos). En muchos e-.tl$011. 10$
mecanismos son pcx:o oonocldos y bs mtodos resultan ms o menos eficaces del)el'l<liel'ldo del lipo do voaor y de
cluta. EJ proceso suele denominatSe ti!Wt.sforl'n.9c.ln o tllh'ls/eocc.Qt, aunque ., prifTI8;r trmino
OOtte-!pol'lde a 13 intrOOUCQt'l on <mfitnonas y et segundo al empleo de Vlf'US como "eaores. tos trlbtodos
utDiZados Pueden dividir11e lai'Yll:llln en fi>sioos y qulmiOO$,
Eltralamienlo m$ freo.Jente 9$ de tipo y se dtce que la clula se hace eompetMte. Se
con una incubacin en presencia de CaCh a o c. seguida de un C'3mbl0 t)(u$CO a 37-43 c. que induce a las
212
CLONACIN CELULAR: TECNOLOGIA DEL DNA RECOMBINAHTE
3 <'OOf)lar mol6culas do ONA.. Se dispone de eop3$ eoslnblocidns espqc:i81mctn1o $1.15C(1ptllle$ es-le
proceso
La lncorporadn pasws de OHA se favorece cuando sus rnolciAa9 se 1\811\ agregado o oopreelpitaCio por
lnteraoc:ln con cationes. tpicamente clcioo o un pollmero
poiicab:)nic:o)
Otros agentes ouimoos. en O$P8Cilll41 porictileng!iCOI (PEG). 13 permeabilidad de ta membrana oolular.
a.n 10 que se incorpora mM teoeirmente e1 rDNA, lamllitl de tona p$SiV8.
EJ ONA se OUOCIO i!'Corpor3r en liposomas, Que luego COf'l raciliciad se tuslonan oon la celular y lii)Orttn
su contenido al inttrior (inCluyendO 01 ONA we. en "'"superficie txtorior del
JipOsom:a).
Un tnt!Odo oon gran efiCaCia es el empleo de vectotes de tipo vi rko, por su Vla natutal de lnfeocln ln(rodueen
e.n &a o&ltAa anfJtrlona su ONA. en es\e caso reoombinanle. Para este tipo de ncorporacln se ha ecutlado el
1efl'l*to rtansleccin.
del proct.dimienlu de clonado: intOrJU')racin del (elapn 4)
e )\
+ J rONA (l'l'le!OC* .,Y&ftOf)
e ada t clllil.

......... jl},.

'"'o:tl(
frn:ucnl<'mcnl<'l
o-.olk.,.
de ON!\
1\''ll!'-"k.
'$Uab (1 d,.;,olltMI;
-
dcONA
..
t: fl'l(llce..l a4
disllrnas de rDNA
cttWifl ,.,_ .,.tluJ)
t>r.ccria 1111ntf0ro11111Ja
o .:th..S. tr:ut,;(cclllda
)
Aplicando etic.tric;il$ on Jon'ntt de pulsos breves ele atto vonaje se consp la apeftora de poro$
ttansiiOflos en la meombranca. POf IQ$ que puede el tONA. Este metodo de N 00$\ante
habirual para c;lulas eucari61i<:M, ttui'II)Je de resultados muy variables.
Un mtodo wrio&O y de creciente. la consiste en el bombardeo de lt's c6lulta5
oon microeS'eras (Cie turgsteno u oro) recubiertas con el rONA. So Clisx>$1tivos &Ciecuados ("ppstolas de
gel'le!l1 que impulsan NOS meditmte un g3!1 a presin. pt.dieil<lo Bf*&rse sobre auspenslones
CLOHACIN CELULAR DE MOLCULAS DE ONA 213
celulares. clulas en cultl-.o o lnduso kl VIVO (sobre la piel, hOjas ... ). A9lnos de 10$ ptoyt'es impa<:tat'l y
l)efV!(ran f!n cuya mef1'1btl9n8 se rlllliclamer\te, quedatldo et DNA illCOrporltdQ qn su mt9riot
En casos doMe ta etlclenaa de Stlmlnlstro del rONA debe ser maxlma se acucie a ra i n yeccin <lirccu ONA
en la clula o en su nUcleo, empleando rrucrornanipuladotes y agujas de ondrlo o micropipei3S. de
eKtnwnitalmenle bajo Ob&$rv..cin ill microtK:Opio. el iloonvenlente es el escaso nUmeto
dlt dlult\$ quo so pi.'Odon tr<tl3r I)Or C$tO mlO<Io por lo QI.Mt 98f!er.tlmente se utiliza slo sobre oocltos y
cigoros. Dado su directo, se incluSO del YeCIOf y sumini$tr;;n el rragmemo de ONA
deseado &11'1 modlbr.
Agente promotor dec la incor por :.c.io Nombre cspocffico dol mitodo Caricter
Quim.eo
OEAE -de)(lrano
qul"""' ......
PEG (polielllengticol)
Ql,lim(;O
......
lii)Osomas
leo
......
fi$iOO activo
descargas elctricas electropotacl6n ns.oo activo
li$ioo activo
inyecon dil"ecta c.on ITIICropipetas ITIICro!nyeocl6n
ti.sioo activo
16.2.6 Propagacin en cultivo
La divi.$io de 1M (Jnfitriol'l;ti$ en cultNo pnxluc:d. junto con la rel)kac:tn de su propiO genoma, la
torm<lCIOn de dol rONA podi(Jo inOOfP(l(ar y, po1 tanto. la clot'N'Win propiamente dic:na. En la ptctlca,
se $Uel(l; uf\3 primer<' $111mbr(J colultlr sobro una placa de agar para que c:tezcan la& colonias (cada cOlonia
proviene de una clula, $01'1 crones) y una I)OSierior de t.s colonitt$ on medio liquido, que fotma poblaciOneS
con mnlples c::op;as de cada oluta Originar (clone$ oelol:trcs) Dcpe;n(fiendo de &as propiedades del YeaOf'. ef rONA
puede replicarse de forma rpkta e lndepetdetlte del genoma de la ce-rula anrttriOM
Detalles del proedimicnlo di.' clonado: tel ular (et:tpa 5)
n
ICUJU bl
0
Slm.JII.neament.e con esta <le M)f)09<'cin wele tener luJat ta selec:c:i6n ae CIOfles reeoml;llt!Mtos y l(l
eKpreSIn opcional del gen donado.
16.2.7 Deteccin y seleccin da los clonas recombi nantes
Oado el gran nUI'I'Ief"o de 06Uo'ls eml)leMO\s en la y la dlversld9d de prOOUCIOS que pueden origii\(M'$e en
el proceso de eteacl6n del ONA reoombWiilfe, es POder oetulas (o colonias a 1M que hM OOOQ
'-'90r en w!trYo) 1\owl incx.wporado el ONA recoml:>inante Esttt se POO<Ie oomblf\81 oon una
.setecc:u)n, es dec:lt, c:on&eQt* que $OJO las &ebrovtYan en el ooltNo. Esto laeilita muehO 11' Ulrt3 <10
celular. reduciendo el nmero de done$ que $C deben $Q\1uir cu!6vando. Dependiendo del mel!l<lo
utilitlldC, ..s posible distingWr clulas que 1\an hcorporaclo Cl vettOf {nxx>tnl)inttnto o no), que 1\an ncorporack> tONA o
il'lCiuSO que han inCQtPOr-8do el rONA con el ftserto dispuesto
Se oonsicSerar 11ft tiPOS de mtodos de detec:cln.
Mtodos de hibfid;u;JOn: deteccin de una sec:uenaa del ONA clonadO. o cre1 mRNA transcnro a partir de l. por
nlbriC!aCit'l c.on $Qn(l<\
Mtodos inmunoquim.iCO$' <lete<:cin de la protelna c:o<ldicada pot el gen CIOn<\Cio, mediante un anticuerpo
especilloo.
214 CLONACIt4 CELULAR: l'ECNOLOGlA DEL OHA RECOMBINANTE
Mi todos genticos o de fenotlplea: en cienos casos. la expresiOon del ptopilo Inserto ptOduoe CIWI'Iblos
apreciables en 1& 04!1ula ar'!fitr'iOt'la. que tif\oen pata rellejat su c:tonacin con xito. Sin embargO. la eslltltegla ms
conUl es la detein y s.ti&CeiOn baS&d.s presencia oe genes mareadores en el
Gens qu una dotoct<lblo, cornnmonlc uM enz:i!TOOI 1(1 quo so dispono diJ un
ensayo. Por ejempJo, laP-ialacto&Qasa (gen lacZ de E. coll) transfoonil el 54Jstr.lto sinttioo X-gal {5-tlfomo.
4cl0ro-3-lnd0111-J\-O-gatactopiran6sido) en un producto de color azul.
GoOC!'.s de resi stencia a un anti.bl.lleo, que codifican una protelna que permite el crecimiento de &e clula
anfllrione en pr0$0nCi' de un <tetermn&cb atltibiOtloo. Por ejelfiC)IO. el gen amp' COdifiCa una 1}-lactamasa
capaz de degradar la ampiCIT111oa. una peniQlil El gen do rosistencia a tolrot;il;iil\3 fotA)
ooalrtea una protelna de membfana que act6a como una bomba. Glltrayendoeste antibitico de la \lula.
GeM.s que defectos nutrlelonales. En e-ste caso. se emplean cepas mutantes de la clula
anfilriooa. QUt nc> crecer en 6e un nutriente. Por ejemplo, clonandO en con un
metaCOtico en la ruta de bbsfnteStS de se emplea un que oontiene el gen TRPt
oorree1o. con lo que slo las clulas trensforrn.ada& crecen M Trp en et medio
Los planleamientos e.xperlmenlale& son ITK.IY diversos y gener<*nerrte combinan varios de; o$10$ Por
razones <Ji::l.kticO$. $C ui'IO$ ejemplOs que ilustran &1 uso de varios genes mareadores. aunque no se ajusten a
la prilebca del llbor.ltorio. Un il'f'IC)(M1ante a este respectO es el de lnecti'llseln lnurclonaJ. la lnetu&ln de un
polloonector o &iOO de {p41g$ 207, 209} fft et interiOr de un gen nwcador hace que la accin de ste se
ejerza slo en las clula& que han incorporado sin W1$9rtO
Octallts del procedimiento de clonacin: deteccin y selecc:1n
de clonei recombinantes (etap 6)
EJemplo de un \(('l()r JX.\I'll dO'I:cin:
oontenc; d insc:no de I)NA (gen de:
inters). uoo n-gin de conlrol )' un
nu ili31' (tJtn m3rc3dor o gen de
3 31\libilioos)
)
.......


Dctt'l:d<in de- d''"Cl:
el gen A seria un &ocn
narcador. codifica una
pt(l(C'Ina que se
\

-
-


__ h ...

-
-
-
........... .......
4c ll/Ut dCIIIW 1110.'
"- ""'"P' ........
w-
Seleccin de dones:
romu
4:lgcn A scris un gen de
1\.'Si'\l.Ct"'ia a antibitico
)'"'
-
-
-
-
-
-
.-"'
............. ,
_..
....
-

-
,-
--- 1'--
- -
'--
1
.-"'
,...,.,
)'
lktoccin de cloocs oor
in.'lcti\acin insert'iooal: A
scrfs un gen JMn:ador, coditia. tma
1)1\)Cdtla qul.' se puede detectar.
t..(L m(mlmrock>.

-
-
-
-
-
(in.: .... "-"" 1,'011 ti
.,,.,,_ X.pl l
-
-
-
-
-
-
-
GENO TECAS 215
16.2.8 Expresin gnica
Eh casoe se :we-tende no 60io 1& aml)l.tlcaclon del ONA clOnado. sino &u e:.pre&iOn. l:llef'l para esl\l<lf.CII este
ptoceso o para investigar el produC10 (RNA o ptOielna).lg!camente. el ONA clonado ser en eMos casos un gen. y pot
etto COfl r,.cveneia $C trtttara de un cONA. Para esta elq)fe-sl61'1 se \lfetores dtJ
especializado$. dislirrlO$ de tos vocaoros de cl011aci6n por present;u Wr.'lciOri$tic&$ fnvorecen la trM&eripeir'l del
gen una vez inoetpOtado ala olula anfitriona. n picamente, un veclOf de expresin incluye (o se debe nsertar en l a la
ve:t que e1 get'l , pa,g. 205) ul'l promotor. l'egiOI'I reguladora de la ttansa'()eln (pag. 264). Es lfeeuente emplear
promotores induciblos. ajenos organi$mo dt' que et gel'l CiOf\800 wo que &el:tvan DajO
e,.;penment;(lles control;sblcs, como la lldicin de nuti'R!flte u otro tipo de compuellto, disparan etllOneell la
transcripcin d9.l gen clonado.
16.3 GENOTECAS
Se llttma genric:ornente gcnote.e.a o &it>!ioteea de Ot.IA a ooa OOie<:OIOn de Clones IOrmados a pal'tM" de todos tos
fr,.gmomos <.le ONA obtenidOS por esCiSIOn del genoma de una espece o de un tejido. En el caso de ta
CIOMcifl celula1, cada uno ce e$tos l ragtnentos se presenta integra<fo. bajo la forma de rO NA. en un vecaor lncorporaCio
en uno de bs dones oelutares que componen la genoteca. En la i:teeh,lln se Pt9Sentan oomo fr(9'"entos
Individuales independientes.
Dependiendo de si tas muestras de parbda para la donacin son fragmentos d9.l ONA gef'lmlco o molculas de
mRKA 205), se destingve el'llle genmleas y genotecas de eDNA. Es imoottame indicar que 18
lnklrmaci6n proporc::eonac:ta por ambas genotecas no $$ idntica. pues slo las primeras incluyen tanto las teg!Oni&$
oodlflcantes oomo tas no oodificantes. ademM:. las genocecas de cONA son dferentes segOO el tejido pattlcular del que
$0 han pteptlflldO, Slo contienen &as regiones. cdiroea.ntes que $0 en ese tepdo, tic celut;:.r. elbpa del
o ditefef'ICiaeiOO, ei'IIO\\ bioquimiCO ... De aouetdO con utiliZan dis.tintas gei\Oiecas
oomo pul'ltOde partida para la ctonaeion, seweneiaeiOn. ete. Clel ONA.

ONA .:rom0o16mi.:o
tompl<ru. un.o lln<ll>
f;n l3 l O" pi)
-------
..:o.'Pkin de
1(,5,()0( tll I(IIJol ,
20 tpb u ll(l pot trmioo m<.Pt
senltc.:a de doncll gc'llmi('(JS
( unos 76(1,000 dones e" tOllll)
mRNA l11
1 !i:ll\'fli;t.l> qu<', ll'ldU)t'll l od.v>
loto fell\'S QIIC
(
8
!<ib>
-----
.:uk.:dn dt t nutoknlll)' de ONA
o.'Onpki'IICIIIiil'lo> !CONA)
o
Una Yltl plep.-rada una genoM<:a. sta se convierte en el punto de partida para 18 f)Usqueo;a de Cu<t!QuWll regi6n
de.l ONA o de genes y so estudio mediante clOnacin adlc:IOI'Iat (que recibe et t'!Ombf de secuencaadn.
expreStbn, etc. Con respecto atuso de las Qei\Oteeas oomo pa.ra 0110$ e$1udiO$, el poblema genrico que se
es ta tocaiiZaCIOn en la genoteoca del don quo ot ONA Para ello se acude a lo& dlsl!ntos
mtodos de detecciOn yseteoclOn. pteviamente OQmentados ''describir la <:lonaetn de un solo fragmento (p&g. 213).
216 CLONACIN CELULAR: TECNOLOGlA DEL ONA RECOMBINANTE
16.3.1 Gonotecas gonmicas
El conoeplo Cf.slco de genoteca oorresponde en realdad estrlaamente al de genoteca genmca, representativa
oel genoma oompleto. El nmero de Clones componentes debe !lef, en la prActica, suficiente para abareat .000 el
9tnoma. inch.lyen<IO el ONA CO<Iifieante tomo el no todil'ie<\ntt. U. prcf)MI(;i(>n del ONA de pt\1 pOr
9Kisin del geooma oon ef'IZimil<$ de re$1riocin bajo colldiciones de rotura pan;:ial. es que no permilan la
actuacin exhaustiva de la en.nma &Otn \odos 106 sitios de restriccin presentes en el ONA. la rotura se produce en
cada molcula alealOrlamente sobre el conjunto de &Jtloe <le reS1J'lccin, de fonna que aparecen un nCimero menor de
y ttos soo de mayot tamet.o. teSP&ctO a lo t&ricamente posible, y diSerentes de una a otra mOlCula.
Mot.:c11bos d.:
ill.,nlic-.

.,nriJfv;...Jo.

.,_.,d ...... ,

X
'
"
X
Gcnmn: oompk1o
mu.:h <J- <,lt
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4lci!c<!lol" lliUialtM
unA de n:uricriOO
X

l e(f11d(>nl
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1

'
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cloooi. <k r.odll frapnt:niO P<'f
<n nr.ln(oau
cwcno D"" m.:I.IO'Ibo.,...,;
1


X
A]UJtMKIO \.1$ wndoc-i'*" 1C
o:un""'f:"'IJU!I. d11 111!>
'suicci dosp.niNt:s en d Dt-A.
tll(ipda IIUll
.....
deb.
...
C(lonc'l de IQ
-- .:n kls .,._.1'-"
w
jene,_ ftfiMJIWI$il(lt.

q.,c, ""
11.l0Jb la; rtsiillws del
"
tcn(lfnll
'

,

A partir d$1 tamalio delg4tnom<!l completo y e11amai'IO Medio de los Insertos &e puede calCular el mlnimo nmero
de Clones necesano para que la genoteca al genoma tomP'eto. Sin embargo. el carcter aleatorio de la
pteparacl6n de fragmentos y del prooeso de donaCIn QI.IO, l)&ra l.etler certeza de que ooa genoteca cootlene
cualquier regln del genoma. se requiera en la prctica un nUmctro <le <:lonM muy superiOr al terico. Este nUMero de
clones nea1es dividido por el nunero de Clones lerioos define el parmetro conocido como cquivalcmte gcn6mieo
Qut C$ de 3 a 1 O ()3r;t COnSeguir un 99% de probabilidad de clonacin.
Retacln entre tamaos de e i ns.crto y n.tm-HO de d ones ter icos y prcticos
Tamano del de N" de Clone!!. W de Clotles Equhtalente
Organcsmo
genoma (Mb) in$CrtO (kb) independlertl&S (lel!lrlcos) en la prcdca genmtCO (EG)
eeccenar. - 4 20 4.000/20 210 -900 900/210 4
Le'VBOOOIS -14 20 14000120=700 - 3.500 3.5001700 5
tl.m311'10!1 20 3.300.000120 = 165.000 ... 7<1Q,OOO 760.000 1 165.000 4.6
16.3.2 Genotecas de DNA complementario
A di'lerenc:ia del caso anterior. las geooteus de (:()NA representan elCCiusivamente a la parte oocliflcante del
genoma. Son e$peocitllmen1e Uliles en eucarlotas. donde una celula &Ok> expreu pequefl fr.Cci6n de su genoma
(menos del3% en humanos), lo que reduCe el t:amar.o del material gentioo disponille para oonstruir la genoto<:3 y. pOr
e1 nmero de dones. El de paftda. el mRNA de la olula, contiene mencxs de 20.000 mol<:ulas
diferente$.. con un tamano mediO de 2 a 3 k.b. Por oiJO lado. puesto que ti rU'Yiero de OO(lias de lOs dlsb\los tipo& de
mRNA es rooy Vl'laf>le en eucarlotas. su representacin eo la gonotec<'l no $en'! unif()tme, PueSio que los eCHAs
carecen de seAiiiG$ de cu:;presiOn. cuando se pretenda la expresi6n del gen ciol\ildo G$ imprcscilldiblt inctuW en el \'8Ct0r
oe expresin un potente promotor parata oUa anfitriona. de modo que sta ex:prG$& kl Pf010IN OOOir-caCia
por el cONA.
Tema 17
Genmica. Obtencin de los mapas
gentico y fsico del genoma
t7.1 lntrod uccibn ................... - ..... -.................. -........ , _ ...................................................................... .................. 217
17.2 Map.as genticos ................................................. ,_,, __ .................... ...................................... 218
17.2.1 Fraccin de recombnaan romo medida de d1stancra en un mapa gencico 218
17.2.2 Obtenci6ndelrnapa98fltiCO... ...... ...... .... .. 220
17.3 M01pas; fis;kos .................. .......... . .. ................ ........... .. .... . .. .. .. 221
17,3 1 Obl.eflciQn tiSioos a baja reSOiudOr'l .......... , .... _,_,_.,,, ..... ,_,_.,.,_.,,.,_, _,_,,, ................................. 221
17 3 1 1 MC'IOdos b3SMOS de line:tt ce1U1ates SOMticas ntbticlas ........... ............... 221
17 3.1.2 OOtet\CiOn de mapas tne<Ji8tlte ensayos de hbttlaciOn oon sondas fluorescentes ............ 224
a) Mapas por hibtidaeiI'I iln Situ (FISH) cromos<iCa ............................................ 224
Ol Mtlll)a$ oorcilometria oe nuo .... . ............ , -----... ,_,_, --- 225
17.3 2 M.-PM fisiCOS dt <'llltl resQIUCiOn ........................................................................... 225
17 3 2 1 Mapa f!stoo por hibridacin in s-Jiu (FISH) de afta teSOJoCIOn .... ,_,_,_,_,.,._, _,_.,, ....... ,_,_,,_,_,_,., 225
173.2.2 Mapaf!&looconenzmasoerestncon ....................... , ,_ 226
17.3.2.3 Mapaos, fiSICO& de STS y EST,_,_,_,_,._,_,_.,,._,_,_, --- ,._,_,_,_ -- -----... 228
17 3.2.4 Mapasdeentigos ., .. . 229
17.1 INTRODUCCIN
Se conooe hoy dia como genmiC<J al de es:lrategaas y t.cnologias empleadas para la caraclerizacion
mole<:ula 001 gonorna. en su mbs <tmplio sentido. pero con vn etlfttsis tspec.ial en el Q8f'IOffl<l humcano.
1:. gen6mica QOt'l"eSponocle a la Obtetleitl del mapa de un genom:a, que <t sv puedt ser
consideradO oomo la estNC:1unt fina del matenal. gentloo de cuakpet espeae. Pot !.afilO, constiruye: 1a O*Se una
Blotogla MOlecular e lngef'llerla GentiCa modernas aplicadas a la s..dad
De acuerdo con esl06 oo,etrvos. se pueden di&tif'9J.r d06 oireas dentto de la Genomica, oonsecuttvas,
aparentemente independieole& pero totalmente relacionadas entre si:
En primer ._,g.,r genmica fltruclurlll, al estudio de las tcnicas y estrategias necesanas
para obtener aolo 1os mapas lisieos. del ger'IIO<&. posibles a diSllr'llos <.loe .-;omo secuencicllotal dol
DNA gen6mieo. o mapa flsieo a la reSOiudt'l maxima. el l'luCietdO Los m..'lo>a$ fi$1CO$ IMto d6&1Q05 oomo
modem06, se descnben en el presente tema. mientras (J.le la secuenciaCOn diCha. o Ot$<;ift300 e1e1
conunto de "1ecra!l que oonslltiJYen la informaciOn bblca ele OIJ8lquier (3 300 Millones de pb en humMO$}.
se descdlen E!f'l et rema 18. La mayoria de IO!l ptOyectos genoma $0 cncuentr.ttn denlro de alguno de estos
ot;t01dio11 de la En el del Ot'nom1 Hmnano (PGH) , &e est llegando a lO largo del
no 2000 Ullin-:> e$1ttbn, De ahi la etl<)lm$ de lodos lO$ proyeew& mpicados en este gran objetrvo.
En segundo IU98f. la genOmiea funcional, c:otl"espotlCiiel'lte a la caracteti!aei61'1 del prolcomOJ, C$ doeer. el
conjunto de todas las proliltna& Ollglnadas pot el genoma, bajo los diversos petrooes poSibles de expresin gniQI 3
proteinas. modificacin y degradaon ptOielca y desarrollo de su 1\inc:IOn. IOdo euo dentro de cada tipo de oful3,
momen1o oelul<lt, condiCI()l)l)$ in VJVO. etc. C<ltresponde. en deflruuva, al estudio tt.w.c:lonaf del ONA
toclir.eante. Por anaiOgia se l,1ma prol,pmic-<J '*' conjunto de tcn1cas y e&trtttegias utilizadas para el estiJCIIo del
proteoma. En COt'llraste con la estructuf'i'!l , la protcl)mic:. so oncventr;:. en &1.1& ncios. y slo se tienen datos
para alguf'i06 organismos mooelo ante$ de COI'Iooet' al COOl)fleto la t\lnci6n dG tod06 los genes
humanos y sob'e todo para dar Vlllidad ClfflCiiC3. en sv caso, a 1M l)tl::)(eil't3$. IMto c:n W.SiCOG como aplieados en
fa'IOI' de ta rn.nanldaO (por a la tliome<f!Cil\8).
218 GENOMI CA. OBTENCION DE LOS MAPAS GENTICO Y FiSICO DEL GEHOMA
El PGH es un proyecto de tal ewwergdn que sus oo se puedlet'l alcanzar con el Simll"t (ll&tltcamiento
de buscar mlodor. para la etapa de secuendaci6n. a pesar de su creciente eficiencia. De hechO, el progteso logrado ha
la lmpcacin de numerosas Hciatlvas y mecodOiogfas que superan con cteoe9 dicha etapa. Ante te
lmpostlilldad material de recoger toda esta informacin (por otro lado. ya disponible de forma espec.allzada dra a dla en
lntomet), M prO$Ctlt;tn en O$le tem<' y el tM lineM un enfoQue 'lgico" del oonocirn.ento del
geooo>a.
la elaboracin del mapa. o -mapeo". de un genoma, tanto el tunano como lOs de ottos organlstnOS, se ha
abordado a lo largo del dempo en varia& e4apas consecutivas, a niveles credentes de resolucin. E'5109 se
corre&pOnden. a orandes rasgos. con tres grandes estrategias metodolgicas. oomplemenlaria& entre st mapeo
goniltico, mapcro fis ico y sccuonciacin Adcmlls M sidO neot'$t' rio el do l6<ric&ll para
re190r. aimae4)nttr, distritluir y et cr&Ciente VOlumen de Oblenictos.
Fases del PGH Caracterl&licas
Mapoo Mapa gJentico Prol)(lrCion3 mellC' roSOiuc;iOn. Sit<'l IQITI'III en k erom0$0mt'S
o de dlvtrsos IOCi (de genes y de oi!O!l marcadOteS o secuenCias Identificables)- El
de la <iStanCia y. por la ubicacin relativa de genes o marcadote-s, se
basa en la frecuencia oon la que los pares de loci se tr.lnsmiten oorlootamente a la
de&Oendenciil.
Mapa IISiCO
ASigna IOcalizactones a loe marcadOtes, definidas por dlslandas en pares de
bases. Oestacan entre sus variantes los mapas de reatrlccin (ordenaci6n en el
cromosoma de las danas para enzimas de restnccin).
Eql.livt'le a l;t obtencin del mapa genmico en su nivel mas delai;ldo. Su Ol)jecivo
es estaOieoet la secul!tncia nuc:le<:ltldica c:otnple4a del getiO(N!I humano. e.xploraf'ICJO
lO$ 3,300 pb (te la Oklla 1'18pi01de {6.600 en la clula d!plolde). Se lleva
a en paraii!IIO y oon ef apoyo de 18 ln!Otn'\8CIM proporelonaca por los rnapeos
gel'l1loo y trsloo. Hace u90 de y mtodos sumameole especlflcoe,
ceda \'Bt mas automcnizados e informatizados. S. describe en o' toemtt 18
17.2 MAPAS GENTICOS
lnicialmome, los map{'$ ge'*!i(:(IS oonsistlan en una representacin grfica de la ordenacin y ubicacin de los
genes en e&da Sin acbJalmeole se InCluyen en est06 mapas no &lo genes. sino otra.s regiones
del ONA, de MOCIO que pata e"'JJIbar a arOOos se emplea el til"'*"o lt\lllrcador gen4tlw: est. papel p..ede
desempenarto cualQUier caradertsdca flsice o molecular del ONA que dffiera eotre D:lividuos y sea OOtoctSible en el
laDOtatotb. para poder seguir su patrn de herencia. Como marcadores gen&ticos, por laniO. " inc::lt)<cn tan10 rogiones
que fOrmM parte de un gen (m&.rcador g'nko) oomo &egm$nl05 no coctilic:aneos (marcadcwoA no gOnicos). La
gran mayora de man:aCiores en 10$ mapas actua'eS son marcadofes no gnloos.
de la bm:od11:
rnarc1nlurb senCdi.l!l
.o
Mapas
se OOI\5IJ\I)'e0 irNI.irt;.Jrwmc,a pnrtir dt la
hercno.-.a do:: los maretKIOte& (enl.:vlnOOo
ttCombiNICi6n)
Mapu Hdeos
Cl)lll>11VyCil rfin"('Uin'JT/t' ,
loeahunOO b poJ.ciCl dt luo:
milll:lUklrn m
17.2.1 Fraccin de recombi nacin como medida de distancia en un mapa gentico
0\w-ante la miJIQI5i$ tiene lugat el o lntetcambio reciproco de fragmentos de ONA entre
cromosomas homlogos (tOQOmO.ir)8CiOtl hOm.loga o meln'ca. pg. 106). Debe destacarse que la nunca
tieno enlre cromosomas diferentes, sino Unicamen1e entre los dos miembro$ de t.l"' l)t'r de Ct'OI"''W)SSmas
hOmOIOQOS. Los mecanismos moleculares de ia rec:on'lbin.aci6n no se dtseribcn on q te libro, IXlt ootres:poMer a un
tratado oe Gentlce. Aqui interos.,n las eonseouet\Cias del pt'CICIMO. Por un lado, qJ$ toe crornoeomas
Que en e.cs. gameto ya no son ldntl009 a los originales (paterno y materno) y, IXlt olro, que la
vatiBCion gentiCa te-sutt&nte depende. obviamente, de la del &ebrecruzamiemo en cada par de aomQI$0m<ts.
MAPAS
219
Como 1;)$C a &a Obltl'lol'l de mapas getleleos, debel'l recoroarse algunos l&rmlnos btlsiOQS;
de \'t\)liiO.Xtll'llll.-. (}' ffi>!l'l;ih..iM; 1 Wfl:.l r.cl6n de lo)' .:1\'lHloOM'In\M<
en 111 l (jlliUI fnmm pal'l e de gal!-.-.cll:l11l!' > do: be! ('1\111lllbdil;, (1l
1:. 11 IX'll':'lu il p.lf:lt a g:Jl'lll'"lo.'S ('adll $1' de fnm l lk-IM"lldk-ntC' di'
1\"'lS ;jen,'i,; ( 1 05 ). L<tc md.:prnlbc'nto: dr r \l.ilil o no,)
"St-:reww-iOn" di' ald.;.'l!l "' ... cin lk o.kiJ 11!d<J!, ok kN:i dlf<"l\"tt!CS oJe un ffibii'IO cromOISOOlll
durante 111 18 ) l-- Skl dlli'$C si ha entn- o o)!; b:i. y ..
11'1Ani rteSfll <t'l el mo)men\1> de la ""gfl:lt:tcin de llH o:nm!OSOOI:tli y bl l'RIIl'liltdll .. ti tkrn'tu'l(l
.. l'IW'I:rt'!:IICiUD" ok alfiOS (A } U) J'IW& p!J(I'Cff CMU'lldiclo.'rio. P'IC'S indi(ll o.]lll' Csi\'\S
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11. 1'!. 12',1 . }'
(lllllll'\111-Hk 11 U y(
La c:arac:ISI"isuca que daMe el mapeo genooo es el anilli$1$ dtr o d ntcombinaci n.
deh!a oomo la probabildad de que los a!elos preMfl(os en dO$ 'oei direren!a (corre11ponclientes a la pc)Sicin de lOs
mcweaOOre:s <:on$iderMO$) $C o como OOI'ISeCueneia oe la t ecomblnacin meiOilca. Olcno de otro
modo. es la llocuenc:ia oon la qvt dO$ alelO$ deterrt*lados apatecen recomblnado9 en la descendencia. Como se
diteute 3 oontinu&eiOn. tracciOn depende de la distancia entre los dos lool en el cromosoma. iO que permite
pata estableeer el mapa.
,,,, "'
11);;. 3 l"c-i >On htti'I\'ICr!.-.'lt.Co.'l.s..
(Qb\ iamo:ntc. b rccombinxi'm rwltt!\r
llar.cclldn'l.:-ia en Joci
';4 .obr.xnu.omoC!IIlo) <lt kl <,.._todo
IW!If l'fl}60f oJo ..
lk <IIK ..,.ha),. "''"'11("""
. ..,_.,,..u Id"""''"---
c;x: ----,
At 61 C 1
ex
A , C: >\ 6 e, A , B e
1
>\ 0 C A O C:

J -
;\ : Ht (_' A: B!Cl A: B!CI

-..--.- -,.....:-"
La ll111lld de l0 (6) OOn).O. 'f\ -:111 un numo,;ona onpnal . no t;_o:ni!Copo itual:tl de 11110 di' b
p.i(lfC>o), t;IUC (> l ll'\.N'I UD IU!lln-1 1 '''" \l!l,fl .fMOitpo)
"'<...? "'<...? "'<...?
A y U se h;.n sc n:, lldo: A y B se han cobcr t'dado: A )' H se han t'Ohtf"f'd:ado:
u y C han cobtrt'dado: u y C .;e han t;egrc odo; 1J y<. so: htm
,\ y C :.e ha11 _,.egrejptk! A y C ,e A ) (.se h11n sc n.-gndo
220 GEHOMICA. OBTENCtON DE LOS MAPAS V FISICO DEL GENOMA
Conclusiones de mtcr-.s. r..:tocionndas con la construccin de m.npas gc:ntlcos:
a) S IQCI muy en d cromosoma (fKK ej .. A)' U:
E$ dilicil que: se prodUZ(-11 r'-""Wmbinacin en una posicin intci'ITiCdla entre a.mbo.h: pt>r tanw, hay
baja /frt,"'lJCmtiJ de rct'OI11binJ('iOO t2 de un total de- 12 game1os = 16.
Con a ha probab11id3d, IOO dos aldM quc:dtln en un rnu:m<1 ci'Of'l\05\)l'lla y l'(lfllilltda t>C roiN.-n.:vJ;nL
aldos q11e se t.obcrt:dllo con frcoucoa ntil;llima (es decir. que nunca se SICgregall) se dice que
esuln L!,ic:amc:ntc:, kls )ocj de cromosomas difercmcs nui\IC"a estilo lig:ados. o tienen un
li$.1hl1t'111<' ;Cnk-., nulo
Al C:OOJWliO de 11l<los klotnhM,)s en UN! rc:gJ6n dd cromosoma se l e denomina baploti>o Se
pootquc sus aletos !lC eO!lJUI,amcnle {S<"' :ddos lig.ados).
b) A mll) or ..CJ""na.:l(>n O:nln! d ( pqr 0 y C o, A )' C);
EMstc mayor probabilidad de rccombinacin en posiciones intem,cdlos: por Lanto. hay
mi}'Or ftiXucrt.,;il d.: recontbiuein (para 8 )' C: 4 <k 12 .-. 33.4'-. paro A y C: 6 de 12 - 50%,.
J\l sufrir la rttOtbina.::iI'. l<l d<Jo$ ale los queotbm en distmto por lo qul! h11y
m('nor problbllidiJd de q.x hcrroen JIU11(K.
Nta: la tennin<llogla es an m.ir ' 'atiadil de la QU: nnpkll.IOO ilquf: pt ejctn)IO. una illt.a
de I'OCO!nbitlll.CJII rjntUmO di.' htl't:IICtfl tl'lnjUtltll infn.><:u:l'ltl.' , OOhCI\":!I<:i:l SC$n.-saein de
(roc:u..:nle y CQ$('JI:r\.-"l.IICIn puede di ficultat, n la cornpren."jtn dd
stgmiic:do de -rn:cu1!71cla do: ret(lfllbl1lxt6n".
17.2.2 Obtencin del mapa gentico
Una \'8Z oonocicias las po&iCIOfMI$ relativas de un n(lrnero elev<ldo do gen61ico$, so I>UO(kt 13
frecuencia de oon respecto a ellos 00 IMtYO gen o $4.1(;Uoncia y asi sit...., su IOC:US en el
definido por aqullO$ Do OSt'l fonn3. se c.1ico Qt.Je $e N mape&CSQ' su POSicin en el (n)c'n()$0ma. Ur'l8 vez localizadO, el
nuevo 98'1 o <' ..-.grQ$11' 01 do que forman el map{t
l a escaltt en gentiCos $e rricle en uniclacles c:entimorgan (cM). 1 cM oortesponde. pot' defflcln, a la
diMancla Que separa o:>s to<::i que e.xperimentan reoombii"'&Cibn en el 1% de las meloSis. Empineamente, en el genoma
humano e$la distanCia aproximadamente a 10' pb (1 Mb).. A parW de la frecuencia de reoomblnacin se
las <ftStaneias relativas entte varios k>CI y se puede estableoet su ordenacion en el Cf01UC)$0ma, comenzando
asl un mapa gentiCo:
Como <:J<:rnpk> rn11y simpl<:. ul estl.idi.ar 1n:s,loci c:ualesquicra, X, Y)' Z:
de t<:tOOlbi nacin observada
para cada pareJ3 de loei :
Distanci-a c:ntre los lod:
X
y
z
X
y
X
..... 201}.
y

JO%
">
X
y
,,
"
20cM
z
,,
' "
z
\11
inlcrprt'tlldn (mal)<l
10
.
---l!I]i-- -1[8]
IOeM
30cM
Se ooncluye que ellocus
X debe: c:stn.r entre ios
loci Y y Z. o lo <1ue es lo
'os ltX:i en
i.'lordenZ-XY
(O YtC:I!"V<r.lll, y . X Z)
E:w.perirnentalmentG, 10s mapa& Qentico6 reQuiefen Nb.ldiO$ f.atniliares con tu'f)Oies geneaiOgioos. en kl>S que se
examina. para alguno de los mt'lrc:ldoros, In combii"'&Cin de aleiOs que va siendo heredada. Estos se analizan en bs
distirrto6 individuos <' lo &argo <Je v-arias, gerwaciones: en humanos nonnatrnente se pana de de clulas
sanguineas nudeac!M. La de una u otra fonnill altica M de1G.;I<' POt lo$ que
permitan distinguirlas. bien a travs de su Influencia sotwe el fenotipo ob$eMII)IQ, de
etc.) o bien mediante tcncas. moleculares de de4ecC:iOn Ot secuencias (hibricJ&CIOn In Situ por tiUOl'escencla, metodo
Soulhem o amplifi<;<'QIn POt PCR). A partit' de la Normacln de ta herencia de alebs se caiQ.II'an las frecuencias de
MAPAS FiSICOS 221
reoomblnacin entre $10$, Con .stc pi(II'YIC<'mienl<> se !\al\ poclido entre otros. los mapas genbCOs de
lk'l'ltM, levadura, Dlo&ophiJ8 y ratn
En humanos es dific:i <Sttermil'l3r mediante tsl\.ldlos farMiares las frecuencias de reoombinaan de kx:i gniCO$,
Es10 se debe, por un lado. a &a e&e&&Ol: de C3$0$ MIOS qve se traMmlten s.nuttneaments dos aleiOs representatiVO&,
por ejemplo aquiiO& de dM ertfetmeaaoes. Por otra parte. la bafi1 de reprodvcc.On del &oOt
<lticult.3 el elllcviO fiatlle de <Jicha frecuencia. Para supwcw esta limitacin, 01'1 1(1 se 3 marcadortt$
polimrfir:os, es decir. aqullOs que presenan en la poblacin vn ele'vaOO ""mero de nteiOS (f<)tmtt$ t'!tetnativas), OOC'I
10 son mw tteeoontes los lndlvtduos heteroc.g(iCOG y la reoombinacion se Cletec:lar en ul'ltt!to poroerua;e de
1a (recufdese que 13 recombinaan de loci homocigQ!icos no .se puede aprecia!'). Los marcadores
poirnOrficos son en general no relacionados con o oon sino Si!T'I{lletrlei'Yie
dlt DNA deteetaeleS en una posidn fija del cromosoma. Entre e1os desu.ean 10$ oasaCIO$ e.n e1 ONA mini y
miO'OSa!ellte que ptesenlan pohmorli&mO en el I'M.imc:> de (VNTR. pg. 383). EJ nUmetO de marcadorer.
poJimOrfl009, especialmente lo$ ho <:roc:ido do iorm:. a iO largo de 106 anos. de modo o..e
se di$1l<l0t de un mapa pata cada cromosoma oon la ublc:acln de eiev..OO nmero de rn(lreldOffl$
La utilidad del m;:apa gcnbeo se ilusata, por oon la posibilidad de focaizar el gen rtt$lXlfl$&ble do Uf'\l
enfermedad hef00it9fi;), <'Un $11'1 oonocer la kJentldad oe dlc:no gen nlla base mo6ecl/ar de la eniermedM Pttrn ellO, $t
busca, enlrt todO$ 10$ que componen et mapa, un alelO de oo marcador que estO en los ndiviOs
pero no en tos sanos. lo que lnlca que ef locus ele 1011 m<arc,dot e$1il lig01do al del gen t:>us.eadO. Por O()tl$iguiente. el get\
debe estar muy prximo a la posicin OOflOCid(l Otd rno'll'ea<IOt en el mapa. Esta posib6dad de ubicacin de genes se
potsnoa s se elabort'., oon mar<:adOt'e$ dispuestos a lo tatgo de todo el genoma: se ar.egura ttsi . por puro 3Uit
qve siempre tue1$1t' 1'1\811'e8CJOr S:Ofieientetnente prOxlmo al gen oomo para qve ambo$ e$\n De esltt rorma
,.. ha POdido ti'I<Xlfltrar, ()01 eemi)IO. la loca!lz:acln CI'OI'no66mica de lo& genes ae filltos1s qt.ristiea 13
f;)ledorme, la enfmedad de TaySachs. el slndrome Xfr.igil y la
17.3 MAPAS FSICOS
Como $e M .ndiea<, estos mapas rr.den direccamente dlstanaas fisicas (es decir. en pares do bases) entre
genes u otta.s del ONA en el genoma. Las estrategias son muy diver&as y ooncb:en tt dislintas
variantes de y l'livde$ (le resQllcln. Dependiendo de la escala o nivel de resolucin. oonocida oomo unidad
o de mapa-. se distil'lguert tres resducln {varia& Mb). alla resoluQn (hasta 1ct bases) y
teSOIUCIOn nucleocldlca). En este capitulO se de&crilen Unicamen48 lo& dos pnme105 niveles.
dejando la secueoclacln del ONA para el tema 69Jente,
17.3.1 Obtencin de mapas fislcos a baja resolucin
Este l'livel de mapeo oomtsponde a la a&lgnaCIOn de caOO marcador a un cromosoma o regin cromosme<t Se
utilizan distintos plantoomlento& que ademils rnuostrtas dif8f91'ltes, $t9IVn se doKrib$ il En
general, el marcador se detecta empleando $0nd<l$ o ccb<'dores de PCR. ambos esPOc1fic.os sv secuencial; en el
caso de vn marcador gnico. puede acudirse 19rntlli6tl &la detocx:ln de sv prodvciO l\ln(i(ln(ll o RNA)
17.3.1.1 Mtodos basados en empleo de lineas celulares somticas hibridas
ConSiSten en la bsqueda elel marcaoot (9nfoo o no) en lineas celUlares hlbfielas, preparactas ele tal forma que
oontlenen material gentloo de do& origenes diferentes: el genoma completo de 111 roedor (aunque oon vl'lil m,'acin
Util. explicada ms adelante} y una parte del humano. POOde $01 <:rorn0$0mas, vno solo o vn
fragmento da aomosoma. Disponiendo de una OOieccin (o JWttJ{} de toles Clone$ cekllvres hfbri!Jos, cad3 uno <:0n
partes distintas del g.enoma humano, se puede ensay.-r la pre$1(1:flcia on toc:lo5 ottos <lel marcadOf y asi en qu
crom0$0tTitl o PCW'O del mi$11'10 w cncucntm Repitiet'ldo ef proceso para dlst1nl0$ se llegtl a con$truir vn
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MAPAS FiSICOS
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\'lAS DE Rfeu>EAACIOH DE BASES PAAA OBTfllfR NUClfOTIOOS

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223
224
GENMI CA. OBTENCtON DE LOS MAPAS GENTICO Y FISICO DEL GENOMA
0 Conset'ur.ndas del (ultho de las cHulas f:n mtdio 11AT
qt.: el moclu,) li1\ 1 tw: req11.im L1 fusK!n de clulas humanas se: rcolioc: lii)CaS
roedor n)utantcs. ddl cltniH cD la a<thidad f'IUhnAtlt>a HCIR.1'. xlnl l:a v.:. rocupcmcin,
Lasc cO.:Iub:- de n)C,Iqr de la viu de /IOlO. que no es usado habitualmcmc por las clula<>
nom'lllks. Oc <:a forma. Cl) d bbrid(l se oomplcmeuala caracidad de prolifentdn propi:a d.: oCiulll de
rUo..'dr c\ln la c:ap:cd:ld tSc crccmcnto en m1."CCt0 IIAT l.lp<ll111dll por la Pf('$('ACia ck material gcnCtko
humaoo (que si posoc d gen de la cnrima HGPRT U(lfmill).
de W ruw )'. cn.-cirn!C'Ito.l c11 cuhi\O
r *l)(l o.k t.f.lub Rula mcabUCa ea 11u:di n.ural en .,,.,.llo UAT
llurnan.; (1 do: Vlalk.O\o.l
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La p-eparnOOl de hibl'iOO$ <t pertW de cttrur.-s slo l)(tfmite iOOntib el crotn0$0IT'I<I en el que
esr sittA<ldo ol ONA de inrcr6s Se a!Q1n.QW mayor re$01ucin dO mbQeO omplcandQ similares
OOt'l unO' por()iOn del genoma humano: flibrldos mooocromosOmicos, oontenier\00 un tolo
crom0$01'1'131. e hiM<k>$ WOC10m0$0mi00$, con lragmento de (tQtr'IOSOma Con t.ilbmO$ se consr.n.rye ro Qve .se
denomina m;)pa dO asig!'\81CiOn re.giOr\at'. e.s decir, la loealizaclon oe cada mateedOI et1 Ul'la tegiOn aete"'*'ada de un
cromo$()fn;t
17 .3.1.2 Obtencin de mapas mediante ensayos de hibridacin con sondas
fl uorescentes
La ublcaclon de marcadores para formar un mapa flsloo de baja resducl6n puede taiOOin conseguin;.e realizando
ensayos de hlbridacan con &Ondas que contengan la propio! secuencia del marcador. E&ta lcnica ha adquirido gran
aplicabilidad en el mapeo a ltl$ $o(Jntlas fiVQrO:SQenCO$ {hi bridacin i n silu por fluorescencia o FISH, p(lg. 172),
la SQnda so con un lluotooromo, bien de totma directa o a travs de un grupo "lndleadot" (repot1V.f, por ejemplO,
tliotir\a o digolllgenlna, pag. 185). Para ldenbllcar el cromoeoma o la regin del mismo donde hlbrlda la &Onda &e puede
acudir a la observacin bajo el microscopio de Doorescenc:ia o a la citometria de flujo.
a) Mapas por hibn'docin in situ (FISH) cromosmica
La hibridacin se realiza sobre PfflP<Ir&QOfles pera el microscopio de cromosomas meflicos, previamente
desnaturalizados. La identidad de los cromo&Omas se revela pollas * nie<is d dol tttrioti"po
(forma. tama"o y banc:las ba;o 6nci6n) , El ONA dianlt so m<'nillt$10' bajO el mierQS(:(IpiO do fiUII)reSCencin
oomo lumlnoSQS dobles. debido a la Plit>ridl'tdn oe la sorda oon las dOS ctol'l\il!idas. Se alcanza COI'I ests teenlea
un nivel de reseluon O'OI'l'IOS6mioo o si.CX:romosmlco, y es posible IOeallz:ar o Sil'l'll.llneamente val'bs
marcadores empJeanclo varias sondas con tloorocromos distintos
MAPAS FIStCOS
Q(ltTIO:ICII)II ..
tPk1;111'1'1!tflli)J dd 01\t\
b) Mapas por dtomettla de flujo
f'udlol oJW t. c.toktwl de DN \
r()rl'( el
ordcn-.it'* & 111!
cl (lf&ft J-:1'11111'$
wmJU)
Wn<-lde 0:0111 el onkn en d pxna
de< '-' )1.-.WII<.'.., de mu;!h
t. >ni"Jifl.'IIIOn " di!"ff>tJ
225
u. i(Jetltillcaci6n del c:tOt'l"'ISoma en el que se encuentra cada marc:OOor ove<lo wmben realiZarse si ta S()tt(la se
hibrida 00t1 mue:stras que contienen cada ooa 1.1'1 solo 1.1p0 <le cromosoma. stas l)ueden consegutse aplicando la
de otulas activada pot tJUOtescencaa (FACS. 1>ft9 126), al mapeo oet mocJO SigUiente: Los
cromo$()(1\3$ se tratan con fluOfOCiomoG Que &e intercalan entre ll'& bl'ses nitrogenadas apiadas del ONA; los de mayor
longitud puedet'l Incorporar mayor cantidad de ese int8fC\IIaonte, PO lo aoquwen ms ftuotescencla. E5to
POnnilc diferei'ICiar los cromoeoma5 en la e4apa de anillisi& o caraeleriueii;ln, CH'(Ipotdonando lo que .se ha llamado un
de IJup, a&l como en la de dtt$1f!C3Wl y O()(ener mues118s, cada una con un solo bpo de
cromoSOO"'a. Fii\CIImorrto, o&tos cromo$0tnM puedet'l emplearse, pot e,emplo, en dol-btor <;on 1<'1
sonda esoecil'ic& para el mareac101 DLtScado.
17. 3.2 Mapas fisicos de alta resolucin
Estos oomptemen\MIO$ a 10$ .. nteriOres, permiten atcaf\Zar una resolueiOn Wenor a l Mb. induso hasta
legar a unos nvclebdos, 10 <ue ya supone et nivel molecular de resoluCin; de ahi que $O<W'I &o$ me.ooo.: de
mapeo fi&ico Sirven de e-'*loe entre lor. mapas fisioos arrteriores y tos de o mapas de
resoluCin tcl<'ll O$Cala de ul'l nudetdo (tema 18). Se plantean pmcipalmente do$ tipos de ;)bc)r hitrid<lCO'\ y
enzimas de reslriocin.
17 .3.2.1 Mapa fsico por hibridacin in si tu (FISH) de alta resolucin
La baJa resoluCIn asoquible Ct<)(nOSOmas metalilsiCos se puede aumentar medrante ta h1bnaOOn sOOfe
cromosomas menos
'


Ottoidl.' 111 l!k\!ll!ll!f;l\11) \11
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226
GENMlCA. 08TENCI0N DE LOS MAPAS Y FiSICO DEL GENOMA
17.3.2.2 Mapa f sico con enzimas de restriccin
Antes de que se descubrieran las endonucteasas de restr!ociOn y se su uso en el laboratorio de
itwestigacin, se utiiuwon otras nucleasas para secuenciat RNAs, siguiendo et mismo vtilizado l)t'CWiwnente
PMa M<:vencittr I)Oii)pt:ido$. es decir. &a fragmentacin de la molOLfa por puntOs de caracteristie3s OCli\Of:id3!& y
del OOI'Ijuntc) sol:.p:.mionto de los fmgmcntoo. E&&c me.odo no diO 108 re&l.llados esperados COt'l
ONAs, debido a su mayot tong!tud y. SOOte IOCb, a la menot espe.eifi(i<UM:f li!& ONasa;, PO' lo que &lo &e consigui
secuenaar algLJ"'I!S Oligodesoribonudetldos.
de RNA o DNA problema
de cscos 1)1Mte811'1iet14os inic:i31o$ es que Sitvieron oe para 1<1 confe<:dn de los acl\Jales mapas
i'isioos oetgenoma a panir ere ttagmeMos de DNA otigi!\&dos por enzimas dct rostric.cin. Un map.- dCJ '"triocin
una regi(lr\ <le(erminMa <Sel genoma estA I)Or ul'\3 ref3ei0n Ot'Oct'li8dt'l de silios puedon w cortados PQf
eN:Imas de resttiedOn conetew, COt'l II'ICJicaeiOt'l oe las diSIMCIBs enlte ellO$ (en PI>). A <Jo los maoos
genlic:os, pata su elaboracin no afecta le funcionalidad de la regin de ONA (su car8C1er gnlco) ni ia pre-senCia en
ella de (salvo sw alteren precisamente el sitio de reostriocln). Pof el si mponan algunas
que ()Vede svfrir el ONA, oomo lran;IOQ<!cionft. detecioncl$ o inserdone&
La reSOiuciOr\ o escala de los mapas de restriccin depende de la separacin entte los snlos de oorte o, dichO de
otro modo, de la lreOJeneia 0011 que le secuencia diana reconockia por la enzima aparece en el geootna (/tectJevlrda de
f9COtlocJm.i&nlo del genoma pot ta en'na). Por ejemplo, en un ONA de gran longltud las cuatro bases
queden di5lribuidas aleatoriamente. cuanto m;is corta sea la &ecuencia del sitio de tM!riocln, ms probabilidad habt
de enconttCMia. por PISO azar. e& decir, mayor ser la frecoonciil de reconocimiento;
tamatlo de la

lamatlo terico n
9
terico de dianas
Meuencitt
una
medio de IQS enttgenom.-
<Se reSteor'l rragMel'ltos humano naptOide
.,.
'

2$pb
256pb
13. 1ft
6pb

4 ,096 pb 4 096pb 6 . lo'
.,.,

65.536 pb
66.535po 5 . 1cf
La lrecuenei& suele ser Inferior a 10 tericamente cab..Udo. debido a vanas causas. Pot un lado, la distribucin de
baSes en et genoma no es IOlalmente aleatoria, lo que conduce a fragmentos de longii!Jd muy variable (frente a las
cifras promedio lndlcedas). Como ejemplo, bs fragmentos ele DNA humano generados por distnas enUnas de
reostnocl6n varian entre lOs 300 pb en promedio obtenidos oon Alu 1 (diana de 4 pb) y las 9,7 Mb para Not 1 (diana de 8
pi)). Otra causa que re<llce e4 nUmero de slclos de corte en el genoma es la presencia de regiones ncas en secuencias
CpG, que al eslar notmamente metlladas no son aensties a las enzimas de restnccin.
la construccin de un mapa 00 rHiriocin se Mnplifica si el nOOloro dct $11io$ r0=$lricci6n os te<J.,u::ido. os
.specia!mente "'-P'0' molbeui<1S <M DNA.. en lBS que las sec:uetlda'S espee!r.eas pata laS
enzimos de reS1rhx:i6n hatliluales se hacen muy runerosas. Para e&tos fragmentos graneles el mapeo slo se puede
abotdar enzimas COI'\adoras ir'lfrewentes y electroforeSIS en c:empo pUiwnte, En c:::uilkluier.J de lO$ Cil$0$,
et roYeltt<to <10 geles y te hrlridac:iOt\ SOUthen'l con diversas soncas permllen Of!<!Uclr 1a diSttiDuCiOn oe lOS SitiOs de
rtstrioein, o del mt'll)a.
Para tacllltar la comprensin del mlodo de obtencin de m.apes fl&icos de restriocln, se proponen a oontinuad6n
unos ejemptos prclk:los. En el primer caso. &e emplean dos enzamet& {A y 8). <tisletdamenle o ., forma
conjunta (experimento de doble diges66n) En el segundo ejcml)lo, ltl$ dos ad(lttn de lorma suoesllia. En el
tercero, &a digestin es iCSMiiea. at primero, pero se emptea la para enriquecer la Wormaaon
O()(eniCa,
1
MAPAS FISICOS
l:Jcmplo de aphac100 dr las enzimas de resmcck\n J"''U'8 IR\C\tlp b
J'(lt'ICKMl ck dclmranada$ $CCUmt"lllS de DNA (nJ&pro dentro de Ud
ff"'pDee\10 ck de in1erC:s (por ejemplo. por la J)Rj('ft(\6 ck un gen)

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.... 1) !.l ) O S IS 1(1 21 tc'(ll't:ll\llmcnl.:l
A II AA AIJAA
MAPAS FIStCOS 229
17.3.2.4 Mapas do cnUgos
Se denQmin;. <tsl 10$ ITiiiPi'$ q"" $C obtienen medil.'lnle el solspamiento de de DNA. Estos
fragmen1os proooQon <.le 13 dqeS:Iin parcial eon enzimas de restrkdn de otros fragmenos mayoreg,
C3d<'l vno de 10$ evaleS se NI ooce.nido a su vez por fragme.ntadn de los 24 tlpo.s diferen1es de cromosomas (en
hvManos) de 18 El planteamiento del mapeo es Idntico en ambos nrYeles, y similar al desc:n"' para las
Para la deduccin del orden o solapamiento de los diferentes fragmentos se acude a la de los
mare8d0tes preserues en cada W'IO. qve oonslihryen generalmente mapes de restriccin o mapas de STSs o ESTs.
X
Un c-romosollUI c.>mpkto, o tm\1 pa11c de l
de
X X
X
X X X
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rruop:o del
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fragmento 7:
ddx
con Jo.., mup:I.S

ubi(IICin de genes y
eJe mnrc3dc>rcs de
d1\crsos 11pos
.
Jkl m..mo S< puc..k J\olf1iCf'lllt' l.ki
lk moaf'f11dnn 'IS ck
r01.uadtv UN srs1.
'-
u d4' I:.ST Cll d ll" par1U ll" 1)\,i,\
/
Tema 18
Secuenciacin del genoma
y Proyectos Genoma
18,1 Introduccin-- 231
18.2 Ml!todo quimieo de seeuenel acln del ONA ................................................................ _ ............................... 231
18.2.1 Marcaje hebta dGI ONA ................. , .... _,_,_,.,,_,_,_,_,_,.,._,_ ,_,, _,_,_,_,_,_ --- --- ,_,_,.,. _,_,_,_ , 232
18.2 2 Modificacin de las bases y fragmentacin del ONA 232
182 3 S4Jvaraon dl:t lo:s froyrneniQ$ y ;;tnai$i:s -- - - - - -.. , . - - , - - - - -- 234
18.3 Mtodo enz;i mjtiw de $Ccuenciaei6n det DNA - 235
18 3 1 Sinte$l$ <.lt DNA eofTC)Iert'lef\tatiO Cle tongill.Jd vatial)le ........ . .. . ............... -- 235
18.3 2 frtlgmen!O$ y t'nttli$i$, ...... ,.,_,_,, .. ,_,_,_ .. ,._,_,_,_ , --- ..... ,_,_,, , ,_,_,_.,,_ ,_,_,_, --- 237
18.3 3 A.u40mt'tiz.cin ...... , .... , ........ , ....... ,............................................... ---- ... ,_,_, -- ........... --- 237
18.3 4 Vtlri(lntt$ del tl'lf!'!odO ,_,_,_,,_.,, _,_,, ..................................................... _,_,_,_ -----.. -.................... ---- 238
18.4 SeeueneiaeiOn del RNA ................................................................................................................................... 238
18.5 Proyecto Genoma Humano (PGH): Caraeteri&tleas e&enc::i ale& .................................................................. 2U
18.6 Otros p royGC::IO& dG $G'C.IJCnc::iOtc::in dol genoma humano ............................................................................ 2-1
18.7 GonOmie comparativa ................................................................................................................................... 241
18.1 INTRODUCCIN
Los esfuerzos inlelates pata secuendar cldos nudeloos dieron poCO$ rewltados. Hasta k)S anos 70 era di(teil y
costoso secuenCial' induso fragmentos de s6b 5 a 10 nuctelldos. Fueron los m&loaos quimloo de Ma..am y Gitflert
(1977) y enun-lioo de Sangm (1980) \os Que abrieron el camino a dicho gran objetivo. Se consiguieron molculas
mayores de ONA y &e defu.eron algunas secoencias concretas como la& del fago (5,4 kb). mtocondria hl.mana
(16,5 kb). lttmbdo (48.5 kb) y virus de EP$1cinBcm (170 kb)
Estos dos M(OdO!I piotletOS ese ta seeueno.acion tiet'\oen en OOtnn atgu1"1011 aspe.ciQS, como lt\ d4J
fragmentos del DNA Orignal escindidos oon enzimas de res-ttlocln. el marcaje del DNA de lorm:'l rac:lioctiVil o
(oompuestos tluoteseentes). el empteO de mtodos etecvolortieos para sepatar lOS rregmeniOS ete.. La
m!.$$tTtl de ONA de partida para &ec::uenciacin procede generalmente de clonacin oetular. de amprlflcaelon por PCR
o de ll' digeSlin conlroladtt con unO' enZJm3 de nnlriocin de 1.1n genoma. un cromo&OIT1a u otro fragmento ele ONA. Con
frocuoncia muostriiiS $0 ampllfietn por PCR oora disponer <le $UiiQente cantidad Igualmente. es converuente la
puri!'ieaci(l(l para eliminar ONA oonwnir.aMe en 1a muestra (por ej ONA y reactivos procedente5 de 1a
purifieacion o ele ottos lf'()Cesos previOs (como y nueleOlldos res.tnnles ele 1(11 PCR). Se !X*fe aoodir tambin
1'1 del gel et ONA oonUJniOO en una banda oe electroiOteSI&
18.2 MTODO QUMICO DE SECUENCIACIN DEL DNA
b te procedimiento. \lflO de lO$ u&ad06 pero acruatmente de&p6a.zado por et mtodo ef'\Zimtieo. se ba!Uio en la
hidr61isis quimic& y en u!'l disel'lo ONJinal opli(;(lble $9CIJenQOI$ de ONA d4J menos de 250 nudebd06. Se conoce
hablbJalmente oomo mtodo de Max.am y Gi l bert. Puede oeseritlirst en tros .,<'IP<I$' marca1e del ONA. hidr*si5
qulmlca selectiva del DNA y anMsls de tos ptOduetos.
234 SECUENCIACIH DEL GENOMA Y PROYECTOS GENOMA
18.2.3 Separacin de los fragmentos y anlisis
Para analizar la& 4 mezclas de fragmento& obtenidas, t;e separan lodos ellos de acuetdo oon t;u lamafto,
emp6eando elec:l1oforesi&. El lamal'lo de cada fragmento marcado indica directamente &a posioin en la secuencia del
nucMcldo oonespondente al oorte.
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es obvia Si to Mc>t 1 l;.ls c111Jes
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lllllli\:CC bonda en laG o C. f('$P':WV'.lm<:u.lc:

18.3 MTODO ENZIMTICO DE SECUENCIACIN DEL DNA
El mttO<Io o de SangtH es 13 base de 13$ VllriMl OS ms utiliZadas aetUllllmente l);')rt' I.D!iocoonci<tcin a
gJ"iln O$C\!II3 del ONA en ., no so dmdtt ti ONA oomo en el m61odo QuimieO. $d:) auo so aci.Jd6 a lcl intetrupcin
conlrOiada de ta sin(e!li$ de ur\8 hebra eomptementatfa durante ur\8 replicadn m VlfO. Esta SiMeSis, POr vM
ONA I)Oiimer3!S<t <Jel\ne., enzimt\lioo del
Puesto que 18 acllvidOO s el(()(lucleasa oe las ONA natuq:tes no es aq.ri, se u$311'
v\\risntes, tates como et '"fragmento de o tr&gmento granot de In ONAPQiimerM<l 1 do E. eoli
{pg 147), o form&$ del& ONA PQ!irnoras& del fago T7 (tttgvn&li con ot nombie
d4J $t!CuOMSOI. Tamtli6n emplean en ocaSiono$ trtan$criptaSall o la ONA p0timcrt1;a TtJQ
termoestable de la arqueobacterla TbMnus &qu$l'leu$, conO<XIa pot' su aplicaCin e.n PCR, pag. 189). ES1tl$
atterl\8llvas ntootan, adems de evil.ar la acuvidad mayores procestvldad, actl'IIOa<l
enzimtJCa y eficaoa sobre tegl008$ lw:lmopo(mricas y regiones oon lenctencia a estrucl\lra &eCundana. Todo
ello conduce ;) 1(1 df: eMtl vex fragmentO$ mlls l(lrgO$ y oon de error
lguatME!t\te, nen kJO SI.W!}lletldo distintas var.ianles del mtoOO irlieial et'l 10 rel811vo al upo y de marcaje ae lOS
nucleOliCios. espedalmenle el aparecer 106 fluorocromoe como atternallva a tos ls04opos radiactivos. Para slmpljllcar. y
puesto que eJ fund.amento no varia, se expone a contii'K.tacl6n una de ellas. que emplea cuatro fluorocromos distintos y
odrece la posibilidad de automatizacin. El mtodo puede descnbirse en tres secciones: slnte:sis enzmtic:a, anlisis de
lOS tragmeniOS y auomatlzaeiOn.. Al final se Indicaran tos matices que supone el empleo de varianles allernalivas del
me lodo.
18.3.1 Sintesis de un ONA complementario de longitud variable
Dado que se emplct' ONA P<'f<" $in:tiUN' lleOrn comptomontanas a aa que se qu,ere secuenciar.
una prirnora <:t'lr(ll(;terisOea del melOdo es 1a df: ut'l <:eb&OOt, un oligOnueleQticto di$Cflt'I(SQ PlV3 que se hibtido
con et e tremo 3' <le la regiOn que se quiere
La seogutlda. y caracterlstica Ge este Cle es el uso de dideso inuc;letidos ,
anlogos estrl.lcturales de 106 desox!nudeddos que provocan la Clelencl6n de la reacCiI"' de stMeSIS de DNA. Por ellO,
se oonoce 1ambin oomo sotCUencICi n diMoxi o de terminacin de cadernt
lljcmpkJdc
o;htl>4\ltTII>:Inu('l00lldo (ddN fl>);
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La razn para utiiiUit dldesoxlnuelelklos es compiten c;on los desoxinucleOtidos en reaoelon de
sinles.:s. La DNA vtilit<l ct ddNTP oomo suMrato. pot su ana!ogla estructural con el dNTP. y queda
iroeorporacto a lallet:lra en crecimiento oomo ddNMP, poro a partir de l la caclena no se pueoe etongar det:liCIO .,,.
de 9'\410 -OH en 3', que Impide que ronne .,._,ate IO$tJi6$l cr oon el siguienle nuclebdo. Los ddNTPs, pot tanto.
de1fenen la slntesls.


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tJdNTP o:t'l Ulda ro:11i6n. R("lkjan. laiiiO. bos posicion" dcl nudeOtido
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MTODO ENZIMA. neo DE SECUENClACION DEL DNA 237
18.3.2 Separacin de los fragmentos y anlisis
se slgtue un prooe<llmleiUO i.lnlOifQ ol mtodo ql.limco
18.3.3 Automatizaci n
l a posibilidad de usar un fluorocromo distinto en cada una de las 4 reaocionos de siMesis 1*11'1ile automabzar et
mKIOO. de torma que se si!Tll!tneamente las nebras marcadas oomponenW$ de las 4 mezClas, Adems, esta
lectura de la ftuorescencla se puede hacer en continuo. oon b que la elettrofore&is s.gue trCI05turriendo, las moloolas
de Menor tarnai"'I, ya detectadas, se salen POI el extremo tnfentlf del gel. y se sigue la separacin de
mOictAas mayores en el gel. de modo que &e amplia el nUmero de nucleotidos que N ClCJeden SGoCuonci<'!r en un &OIO
experimMlO.
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238 SECUEHClACIN DEL GEHOMA Y PROYECTOS GENOMA
A lltuiO Cle lOS f'kll'l'letOSO$ lltl()(()(t()f'l'IQ$ cftSponible$. se indican lo& 4 usado& ms oomnmente para
Sf>CUCnciaci()n en 18 (tOOQs tomo N-hidroxisuocinimidil&teres, forma acttva que petrnl;e su unin a un grupo
del nueielicto).
Nombre
prpoledade$ de nuornoencla
comUn nombre OOI'I'Ipleto
A,. (nm) 11m (nm) color emi1idO
FAM
JOE
TAMRA
ROX
(5 6)<arboxifiUClf8'SCtl'Jna
(5 6)<arboxi-4',5
(5 6)<arboxitetrametilrrodamlna
(5 6katboxi-X-rodamina
18.3.4 Variantes del mtodo
494
522
555
590
518
550
590
605
rojo anaranjaoo
t<*>-OUf'i)ura
prpura
azul Y&f'd090
Adems da mediante el mtodo iluSirado, el marcaje de la hebra de nueva slntesls se puede conseguir de ottas
maneras. a ocro& compOf'lentes de lit reacc:iOn en la que M sin1ebl.an dictlas hebras:
de le hebra nUIW$

En el dicteS<dnuccelido En el ceclldOr
En los de!IQJOI'ludoOclos
._..,.,,
<-31
texlremo
(a lo ele 18 hebra)

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sal\<l que la di de lo mi)C..sm en 4 origiaal de
en ._, debe b.>er.IC de :i'unbr o:l b:.dctr
N Ola 1: Emplllldo durntue .w sJMCt&s qulntien o bien POJ <111i(ru\i;ll del ;,xtllu,f .. lr
.:Otupl('tl), ncl!lante IQJ de ( vCMc el mure:.: de :IOt'll.baJ.
Nl)lll 2: <:cltlllDII de kt)C dNll'$ II'Uirt:adO Ca b!OpO rlldiiCtl\' ((J. P. <l)JSo C(m llUOfOCI'\)tllb, que le
lnC"'l"!r.lri <'ti pui'IIO! S 111 hcbnl tri Cl'l:Ct1D.Itii.O /'<t>!'$e (lile. ti <hfCtc'JtCO l.ld Quln:JI<Ie
Cft CIISO el i$t(IJXI debe c:ct;ven d fil'%fllt(l a (oo om ti y ). IJIII' 1'11 el itnicl) que ,.,e in:orporlldo l'll el I>NA.
Mf'l aesarrolle adems de estas modiflceclones, otras que aktctan al y alcenoe del mlModo
quimleo y, especiatnen\e, del enzlmcico, y que 9$1n siendo en los distinto& proyecl06 bajo e$1udio
en el momento accual Sin embargo, c:ntetnO$ que &u d9$crip(:in ttk.Code la<6 pot;ibilicl;lde$ de te.Kto, 8<1$le c:il<'r
entre ellas la secoonciacln cicftta, 1<' se<:uOnci<'c:iOn mU!IipiO, 1* QuirniQiutnirl$ctnc. y 1<' teeuttnti;)<;in en f3$e $()liCM,
18.4 SECUENCIACIN DEL RNA
La secuenciaOOn del RNA e$, en gonerttl, difiCI que la Gel ONA. cnlre olla$ Cf!USa$ POt su menot est3bili030.
E posible deducirla a partir de la secuencia del ONA del que se traneeribe, o ambln *&tlZ81 un CONA a pattlr del
RNA de Inters y seruenclar aqul. Sil embargo, a veces M nace&ario seruenc:iat directamente et RNA, &Obre lodo
cuando &e desea delenninar la5 poaciol'l$5 48 moc:ificado5. caract01i&ti006 de lo$ tAHAs y rRNA&. Para
PROYECTO GENOMA HUMANO (PGH): CARACTERISTICAS ESENCIALES
239
ello, se 1'\a desarroAado un procedmlenlo que empleoa dislintas RNasas que cortan en el lado 3" de nuclecidos
espe.ciflOC>$, oon lo quo $C puQCfe ()t)I.Me( una serie de fragmentos que re4lejan las de cada Squ.et'ldo
un planteamiento anlOgO al de 1a seooenclacin qulmica del ONA &e puede entonces deducir ta &eeuenca del RNA.
5' . . pNpNpA:pNpN .. . J' E> , .. . pNpNpA' + NpNpN .. . J'
, .pNpNpG NpNpt-1 ... 1 RNii S:I T I , ... . pNpNpG'

NpNpN , . 1
X
5'., . pNpNpA... NpNpN ...
RNa.ia Phy M
, .... pNpNpA
+ NpNpN .. . r
, , pNpNpU:XNpNpN.,. r . pNpNpU: + NpNpN , , 1
J' .. pNpNpOf- NpNpN .. . J'
de
... pNpNpU;

NpNpN . .. l'
_t' pNpNpCf -NpNpN .. . )'
X
B:trillus et'ft'fl.f
... pNpNpC,

NpNpN .. . J'
ASimiSmo. at menos en teoria. es poSil:lte aplicat el metodo de secuenciac>n di<leso)(i a RHAs en
de la ONA pollmerasa usada pata secuenc.ar el ONA, se precl&:a t.na inversa, capaz de emplear el
RNA de mters como molde para sintetll8r una hebra de ONA oomplementano (pEig. 196), partiendo de la nvsma
mezCla de dNTPs y de un ddNTP dt:&liniO en cada tubo.
18.5 PROYECTO GENOMA HUMANO (PGH): CARACTERISTICAS ESENCIALES
la conseooc16n del mapa completo def genoma humano es un suel'lo del siglO XIX. que tom fonna en la segunda
mitad del siglo XX oon la inb'oduccin de los mapas gentioos y fisioos, y que se comple! oon el iniao a partir de t990
de la sewene1ac16n. graClaS a la puesta a punto y ta au!Omatiz.acin del mlodo enZJmlloo de Sanget.
Se trata de un enorme estuetlo de IIWe&bgacin, bajo la duecctn lnietal de J. Watson, financiado por 109
Nlleio<nales de de EE UU y ta F Wcleomc Trusl del Rwlo Unido. con un ambici060 objeb'Yo, la
secuel'lec&ein et1 15 ll<i'w>S de 1os 3..300 ml!lones de pwe$ de MM$ del genomo hvm.-no, por tanto, la pane
eodi!lcante (3% ae1 IOtal tormancJO unos 100.000 genes, au\que reeienlemente se dttn cifr.:ls aUn m(ls dl$Gordi.lntes,
entre 30.000 y 200.000 genes) y la no cod!flc:ante (el 97'% restante). Han partiel1)3<10 16 ectntn::l$ pl)blicos y ptNados de
lrWestlgaclon de 6 pa1ses (Alemania. Cenada, EE.UU .. Franela, Japn y Reii'IO Unic):))_ Enlt"e ;)q\.ICIQ$ C<'lbc cilar. POr ser
respoMables del 85% de la secuenclaclon, el Centro Sanger (Can'()ridge Reii'IO Uni(J()), 13 de Wa.shington
(San l._. Mi$50vn. EE UU.). el Joinl Genome ln&.tiMe (Callf.oma. EE.UU.), el lnsMuto Whlteneao (Cambridge,
Mas.wchu$$Cit$ EE UV.) y <s. modttin.- &.ylor (Hou&40n. Texa&. EE UU). El director acruat ael proyeeco es
Franeis Collins y. ert Espatla (que no M .n!eNenidO en C$1C prOyecto), Santiago Gn&olia preside el corrut para el PGH
de la UNESCO. EJ Proyec10 ha sido OOtnparac, pot su al O&Scubrinw:nto do , .. T.-bltt Peridica de los
Elemen1os Ouim.cos (MendeleJev) y. por su co"" y oompleJia<l. a la faMcacln de la bOMba 310mice (Proyeczo
Mar\ha'IIM} o l:.le9ad:t do(!! hOmbre lot L.vna (Proyocto Apelo)
el PGH consta de tu gr:mdos ot<1pa&
1. Se parte de de ONA de voluntarios, de sangre y mantenidas para su oonservaCIOn en
nitrgeno liquido (196 e).
2 El ONA. se $'ilca"'lde en fragmeMOs. por puntos conctetoS, mediMte de rC$tnc00n E51o se hace en dos
fases. una para originar ft'agmetUOs relativamente d(l 150 kb y, a partlr de stos. una segunda
escisin para dal fragmen1os ms pequenos.
3 Se clonan los fragmeMos. mechante la11'16erdn oe cada uno en un vec:IOC' (ptMmido, BAC YAC ) e 'ncorporaclon
a una clula anfilriona (bactena o levadura). En junio oe 2000 se hablan donado vnos 24 000 fragmenlos,
&qulvalent &S 97% deiiiOI:tl del gefloma.
4. Separacin del ONA a partir de cada clon y en SIJ ea:so (l()f PCR. para oblener mi!es de COJl'IIS
iQntiCCJ<S de fragmento.
5 <::ompleta y rePMida de caa fragmen10 de ONA {lM'IaS 7 en pOt' mtodo de
Sanget. En jUI'IlO de 2000 se Mbio MCvcnci.-Oo ""37% del genoma, oon una preclslbn <lel 99%. Esltl lrewsu. su
finalizacin para el al'lo 2003.
6 Ordenac;iOn de 106 fragmentos secuenclaooe para es-tal:lleoet su j'Xl$iein Original en et gonomtt
todas eS1as etapas. e$pEICJalmante para la secuenci&Cion y el OtdenamienlO oe lOS frl)gr1'14;1'1lOS ha sido
n&ee$3nl) un gr<tn pntSupuesto (450.000 da pesetas), un gran nmero de pet$.01\M (t:n torno a 1.000 en todo el
mundo). y el doWJTQ!Io de vntt gran \eenoiOg!a y una elevaci& capaeklad de aviOI'N'ItiZ&cin inf()f'r'Nltiz;,1c;i0n
240 SECUENCIACtON DEL GEHOMA Y PROYECTOS GENOMA
18.6 OTROS PROYECTOS DE SECUENCIACIN DEL GENOMA HUMANO
Como a!tematiY"a$ M PGH p(.CliCO, OfiCial, h8 $urgkl> etilOS illi1110$ una serie tle proyeao&.. en cierto modo
oon un carbelel mareadatnetote oomereial. pero que har'l COt'lll'lluido a adelantar ra obleneiOn de la s&euenOia del
genoma humano, obviando en 9ran parte las etapas previas de mapeos gentico y f'f:slc:o. Estos planteamlet'\los han
dado lugar a acaiOtada polmiCa tlco-denUtka, ante ef Intento de apoderarse delluet8M campo de \a bloleenok>gla, a
medio camino en11e lo cienUflco y b indu&trial, a modo de una batalla para hacerw con ol dominio de la mediooa y la
bioto<:nQiogi<t detl fub.WO El hec:he> de que indu$0 algunos est&n tood&r'ldo sus J)lq)ias empresas, p8rtl
eq)l&r sus dC que lo haga.'\ otros, t\8. ereacb una Inquietud en la Cientlfica y ha
dt'cto lvgt'lr 11 '' int<ef\'onciOn de aos gOCiernos llnaneiadores en apoyo del acc:eso pUblico y a lodos lOS OMos del
oenoma I)Of parte oe lnve,.lgadOtes delseCIOt acadnb o '\dustrial farmacutico.
como eje-mplo feptesenlatlvo. cabe citar la ptesencle de la empresa privada c.ta Genomlcs (ROCI<\IIIte, EE.UU.)
que. con oontreiOS nw.itlmlllonarlos sin precedentes en la historia de la biologia y la eplicacln de un nuevo
planteamten4o de seooenaa<:in, ha oon&egi!Ado en slo 3 ellos &eei.H!Oeiar el hurn.ano, tras haber verillcaOO
previamente la viabiklad del oon la $0CU9ncioloi6n del getl()f'l'\1 de ()rQ$q,M;, t.a 16c:nica
empleada se puede re&Umir en 3 elapas:
1. Secuenc&acJo $hot-gun f en o en ES1<l teenoiOgia et: muy direrence ta emple$0<'1
PQl el PGH. Se ba$il oo &a es<:i&In <tlc<ttori<' do IOdO el genoma en p.e,quel'iOs rragmMtos (unos so 6 70
se c:tonan por:. kltmar g&r\OI&eas. se procede a secuenciar tos dos e.xttemos de C9d8
(en el mayor nUmero posible de nudelbo6 perm'ldo por las lc:nlca& de secuenciacin disponibles).
Esta Wlgente tarea. realizada de fonna robolizada (se han requerido 300 sOOJenCiildores ilutom<'bcos
dla y noche). ha permitido seooenQill varias veces cada rragmento (4,6 de media, lo que supono Vl'li'l prt>Ci$i0n
Inferior a la del PGH). en slo 3 (abril de 2000) 1<' &oc:uenci3 del 99% de lOs fragtneniO$
procedentes de un genoma de varn. El anuncio de estos resu!I01dos se hizo fJfl un ttml)iento vn W O$PeCtaCu'-.
2. Ensamblado de los fTagmontos. ConsiS1iO en un ttabajO infmllco, &t.C'Ique de gran magnii!Jd.
tt rocomponor correctamente lOS fragmertiOS anteriOfes, a modo de punte gigante. hasta lograr en un
$010 met, et mapa completo. Se ha conseguido asl. por pnera vaz en la MIOria (mayo de 2000), la secuencia de
un gertoma humano. Sin embaf90. este rewii.IIOO h<t "eniOO t'oomp.-1\;ado do fuorte$ por Mf menos
ordenado ms rpdo} QI.MJ ol rnt1odo del PGH.
3. Anotacin (o E.$13 P3ra oomplelar la secuencia de todos lOe 1ragmentos y tratar de
localizar la posiciOn t 10$ genes en et genoma IOISL Es, precisamente. la ms compleja (prevista su consecucin
pata e1 al\0 2001 ) y a 18 "ez la mas lmpottante. Equivale, en realidad. a le. fetso protorrka PO$torior ta lf! gen6m.::a
(pg 217),
Estos dOS eJ pUblico (PGH) y el pnvado (Celera), de$9U& do vario& V'Oft>i'llot y criticas
mutuas, l*:tNOn fiMmente un aCI.Iel'do. sin vencedores ni venc:iOOs. acerca de lo$ datos aleanza<s por C3C.Ia gt\l)O
COmo se NI elaborado un "'botrador' comn de la soooenc:i<t del humano aiCanz::ada bajO
distirrtos. Presentado ef 26 de P,mio de 2000 (fectla ya hiMric<l). a nivol y con inlerveneiOn
de clentlficos y poUtlcos. &e pretendo que ftle borraoot sirva de l)artida para fututos estudios. ptesumlblemence
reallz.ed06 en adelante Y<l ct. l'orm;a conjunt
Pot otro lado, ebe Indicarse que grupos, incluso antes de eonoterM lOs res:IA!aCIO$ O& la en'C)r'esa
I)Ubliea y privada. nan emprendido proyecten centr<tdo& _, la sewenc:i&o:iOn de lOS genes, el(<:luSivamente.
presc::lnd!e.nOO de las reglones no codificanlos dol gonOma. Con'IO eemp10 reptesent&!illo, debe citarse la
tb'nan Genorr.c Sciei!C$& t992, he conseguicll) sewenolat (hasta junio de 2000) ms del95% de los oenes
que .se expr(!,S&n. Ll!lleniea ulii!Z.ade &e be&a en la lranscripe;in in'w'CfS<' del mRNA de oelul:.s e!lf)eeifietliS. para oblener
su cqli8 de cONA. que os il fUCntiacin. Su Objetivo, lrttetmedio entre 10 elenUflco (sewenciar slo lo
que os til para la mG<icintl) y 10 oomeorcial (latltfear medicamentos a partl' de dichos genes), Ml adQuiriendo una
trayeaoria dominada marcadamente por el econmico, Y\ publie.v los resultaclocs de cara a la elaboracin de
patenles.
En ea50, los avanOI:I$ conseguidO$ M&ta ahora han supueslo, sin lugar a dudas. t.na reV'OiuciOn de gran
Impacto en la socledild Oo hocl'lo la apariCin de lOS tn8fl88 y la secuenclacin del se han convortido on ol
centro de ateneiOn Cle lO$ mediO$ de oomunlcaein. Peto na de recordarse que la genmlc3 es el rll'\flil de un
$in() el oomienzo de todo. Urta ..-e.z supetad06 estos objetiVO$, so en la tase )f'Otetr*:a o de deduccin de la
l1.1nci6n de cada 961\. su expresin y la aplitaCIOn de 13$ proleinM lctm&OaS. Slo asl se podrn con0081' la&
a1:erac1ones prOielcas re&pon&able$ do much<'!s p;)lo!oglas y empez:ar a obtener benellclos del PGH. airados en ccwnpos
1an dlvers.os como la idontificacio, dingnOstieo. lerapla y pteYeneln de muchas enfermedades. el conocimiento de Ir.
diversidad gentle<' {POiirnc)(fiSMOS del DNA). la elaboracin de tratamlenlos ole.
Qveo&i igualmer'lle pendien4e 1.1n aspado muy mportante del genoma humano. Debe quedar Claro que en rwgUn
caso existir una secuenaa nica P8fil el do IOdoS los ii"'CCMCiuos de la especie 1\tlmana. pues e& bien oonocida,
deSde naoe muchos anos. la existencaa do ooa divtt'$i<Jad o polimorfismo gentico entre ntivlduos de una
misma especie. Este""'**' QI.IO terb ana!iz.ado mils adelante (tema 26), nos indica que los proyectos gonom<'l, $Obre
lodo en 1.-s reglonos de DNA M c:odifiC8r'lte. debern ser considerados bait> e&*e nvovo prisma. 9o e)((lliea que lOS
PfO)'OCIOS aetualmenll!l en o.no ya estn lr.ltcw:fo de illbordat este aspecto oon la secuenc:ladn oomparativa del ONA
<Je ii"'CCMduos-fepresentatwos de distinta& razas. como un l)'l(ipiO de diS1inc:IOt'l en1re genomas pollrnrllcos.
GENMICACOMPARATIVA
====::::..:.::=::.:.._ ____ --------- -
241
18.7 GENMICA COMPARATIVA
la Wtterpretaan del genoma humano se facilila por comparacin de su secuenoo y sus genes con 10$ de otn
organismos. En el actual$$ s.guen de$arrolclndo y se iniciado o e&tliln plaoneadO$ oi.TO$ pro)'e(:I.OG
genoma. En la lista &e incluyen b$ de la S<1e<:hM>mY"S corovi$1H. 01 ofQ9<VIS o I;J
ni0$Ctl del vmagre Dro$0(JIIif8 meutl'lfJ9'3SUtl'. Entre lOS mamlleros, oestaca el J)tO)'eoCto genoma Clel raton. de g1an intetS
aplic:ldo en y por la eJ&vM& flomoiOgj a con 10& gene& humanos. El genoma de Oro.sophiJB mel800{}8ster.
rooentemente secuenciado con la intervenCIOn (eKCepc:ional) de G:SP<Iiof(l$. o& uno do los ms
ubllzado& para estudiar el oontrol genlioo dol OOs;motlo del: orgttni$m()$ complejo$, osi como l)<irt'l el .Siudio do
tTii$1QfnO$ Qvo ofo<:111n a humanos. Un 61% de los genes de se nal'l vincul&cJO a hl.'laMs
tale$ como ti el el Al%heimef y la <li3l;)etes. Igualmente, es im1)0r't81Me el ger.oma de otras espeCies
como modelO$ ptu<' 01 estu<liO oe troS;tornos y SQbre tos tjrmacos s empleaf De ahi Que lOS ptimet'O$
genomas ostOOiOOos fvtrol!O lOS oe mi(J'00(9Mi$(n()$ caU$antes de ertfetmedacles humanas.
MvthOS mils oe lo que se pensa00 se encuen1ran et1 diversas espeocles anmaleS. Con el tiempo su es:uaio,
o gcnmie<t CQtn!*Miva. permitirA avai'\Zar en f!l COI'IodMienlo de I)I"'OeSOS biolgicos baSioos. CliviSion celUlar,
fertilt<*J, diletertdaein sexuaL. desarrollO oet cuerpo y rganos. melttbollsmo del envejecimlenlo. aprendizaje,
wscepbbih<lad a frmaC06, evolucin, etc. Adem&. 69 aportar informacin &Obfe el mec::ansmo de la e\/OfUcl6n: en
este sentido, mereoe de&UK&r&e el de&elb'mienlo 6e lo que pockia Hr el *genoma ne00$;1rio para mantener la
VIda de fQJm3 (300 dellotat <.le 470 genes de 13 bat'eria Mytq)i8sm8
Genomas que se han secuenci ado (mayo 2000) (ordei\CidO$ por lamao)
Organtsmo Caracterl$bcas
P.P esurnaoeso Tamao ae1
de gei'IOI'nll (Mb)
VIHI (\'lfi.IS. de ini"''U\\det.lciei\Cia nuMatta} virus 0,0097
ONA mitoeondti;a 37 0.0165
Cromosoma 1 de Leishmania maor procariola
0.27
hf)ocoptasma getl.iraNum
procar1o1a
470 0,58
hfycopfi"1$m.'t pnOoumonii"IC prOC<"Jriotv 677
0.82
Crom0$0m812 de Pf(j$m0dii,Nfl f;JicipMI.Nn
1.0
Chtamydig tr.Jehomatis procariota 1.05
RickGttsia prowa.zeWi procariota
1.1
T repon9flla paiNdum procariola 1.234 1,14
BotteNabulgdOffen
procariola
863 1.3
Aqul/eK 80NCU$
procariota
1.508
1.5
MetMn()C;OCC<J$ Nmfl6$C/W &rQueobacteria
1.692
1,66
P)'lon procariola 1.590 1,67
Hatobactenum h8f0blum
1.7
MethttftObactelfum arQueob."'leril.'l 1 855 1.8
Ttle.mtOtoga proctttiOI<' 1.8
Hae-mophi(l)$ procariola 1.740 1,83
Pyrococcus tvri0$1.1$
procariota 2.1
Ate.ha6oglobus ftilgidus
arqueobacterla 2.471
2,2
Pyrob8Ctltum 8efOPhNum
procariOia
2.2
D&JnOCOCCU$1'9dJot:Ju(8t1S
ptOCariQia
3
S)'nechocystJs sp. pr0<:;3riol<\ 3. 168 3.57
Ck>$t1idium pro:;.ariola
.. ,
&ciNus svbtitts ptoc:ariola
4.100
. 2
Eschencma coN
pt()CariQ!t' 288 4.67
$(jcch,romyce;$ corevisjoo
(lev<llduril de l<l cerveza y del pan)
euca1iota
6 03<1
12,1
Brazo q Clel cromosoma 21. Homo sapieM

225 33.8
Brazo q del cromosomA 22, Horno $o!!pion$
euca(IO!a
(1tf cromosoma humano
seouenQado, 1999)
545 34.5
C8enomabdt1Js
C-VC<'lfiOIO 17.000
100
(gusano nematodo) (1 getl()(n\ onim;:\1
1998)
Oros.ophJia melanogaster 13.600 180
(mc:l$Ci;l de la fruta o del
(el mayor gettOtl"'& (secuenciados
secueneaa<lo)

ovcromiltica)
Tema 19
Transcripcin
19.1. 1
19 1 2
Transcripon y transcnpcn lf'lversa .. _ .. ,_ .... , .. _,,,_ ........... -- ,., __ .,, _ ... ,_ ... ,,., _,., _,,, _,.,,_.., _,,,
Cooceptode gen, _ .
19. 1.2.1 Oefinrc16n d.llsica. no mOlecular ....
19. 12.2 - ... -..
19. 1.2.3 Situaciones paniculares ...... --...
19 . 1 2.4 Nomei'ICialul'a .. . , ... _ ... _ ... _,,,, ., ... _ ... __... _ ... __... __,,, __,,,
.... 243
. 244
. 244
,. _ .... 244
>46
246
19.2 Enzimologi.:J de l a tr3nseripc:;i n: Me<:anismo de la reaccin RNA. polimeran ..... ,_, _, .... - ........... _ ,_ , _ 246
19.2 1 Torminok>gi<l ... ... _,, _.,, _,., _, 248
19.2.2 Orlentacin delasecuencla._,,,_.., _,,, _,,,_,., _ ... _,.,, _,., _ .. ,_ ... _, _ ... , . 249
19.2.3 Carcter aSir'rlbltloo._ ... _,,, _,,, ,.,._,., _,,, ,,, _ ... __... __... _,., __,,, __,,, __,,_ .... .... 249
19.3 Tr:.nscripcin en eucl!lriotas: diferenci as con procariotas .......... ., ... ,,_ , ,.,, .. , _, ,.,, .. , _ ........... _, .. , _ ....... - 250
19,3. 1 Relacin con la condensacin del ONA_,,_,, _,, ....... - ... - ........ ... - ... - .... .... 250
19.3.2 Solo &e tran&eribe una peQU81\a parte del geooma ... _,., _,,_.,, _,.,_,,_,,__ 250
19 3.3 El prooeso oomp!ejo que en procerlolas ..... -... ,.,_ ..... -... .... 250
19.3.4 EJUS!M \13tias RNA polimetasas ,.,_,,..... .... ... 250
19.3 4 1 ES(le(:ffi eidad (le gen RNA formado.
19.3 4 2 Loellil0QI6n y c.n6d8d .. , ................... ,_ ..... _ , _.,, _ 251
19.3.4.3 Susceptibilidad a lr.Nbidores.. __ ,, __,,_ .., _ ... ... . , 251
19.3.5 Las pollmeras as estn formadas pot"ul'l gtal'l 251
19.4 Etapas en el proee-so M transcri pciOn ... - ... - .................... , ... _, .. .,_.,_., .... , ....................... - ...... - ... ................. 252
194 1 l n11Ci8e.n , .,, ..... .......... _,,_.,,_,,_,, .... ,., _,,_,,_,, ,,_,,_,, ... 2$3
19.4. 1 1 Formoon de' de iniacion,_ .. ,_,.,, .. _ .. ,_,,_,., _ ,,_,., _,,_ .. _ 253
19.4. 1 2 Oesnaturaliz.acion del ptomotor .. -.. - .. - .. - ......... -... .. ....... _, 253
19.4. 1 3 Form;)Cif'l de k>$ priiTMiilfO$ enla08$ fosfodistet , _,,_ .. , _,,_,,_,,_,, ... _,, __, 254
19 4 1 4 Liberacin del prom040r: de lnic>acl6n a elongaCi61'l .. .. . .. . .. .. . . 254
194 2 RNA .. ,_........ ,,_ .. ,_,,_,., _,,, __,,, __,, _.., __ 254
19 4 3 Termii\(I>Qn,_.,, __, __ , _,,, __,,, __,,, _,,., _,,_,,_,,_,., ,,_.,, _,.,_,,. _,,_.., _,, 255
194.3 t Temwlaan en procarrotas ........... - .......... -... ... .... . 255
194,3 2 Termnaan en eucanotas , _,., _,, ,, _ .. ,_,, _,,_,,_,., _,, , 256
19.5 TranSCflpcln del genoma mitocondrial. ............... ,_, _,, .... , ........ ,,.,,, .. ,,_.,_., _, .. , .......... _, .. , ............................. 257
19.6 lnhlbldores de la tra nscrlpeln ......................................... ,_ .......................... _ .. _ .. _, _, .. ., _ .................................. 2 S8
19.6.1 Antibiticos ele upo L _,,_, , __.., _, .. .. , .. .. ... 258
19 6 2 Aotibiticos de lipo 11. .. ... -... .,._,., _,,_,, ,,_,,, .... _,,_,,_... . 258
19.6 3 de tipo 111 ,.,_,.,_,., _,, _,,_,, _,,_ .. ,_,., _ .. ,_,,, _ .. 259
19.1 INTRODUCCIN: CONCEPTOS GENERALES
19.1.1 Transcripcin y transcripcin inversa
Lt'l b'<'!\$c;pein os el proc::.e&O encargado de la sl ntests de una l'l\()(ll)(u!;) de RNA <' p<1rt11 de la informaan
gentica contentda en la regln CO<flflcante oe un ONA. Es dlt a una de ANA (con secuenc.a no
i06;ntic.a. sino oomplementana y anttp8fateta) a partir de ul'la sewenci;) "moldo" en una de las hetltas det ONA. E-Ste
proceso conslltuye el segundo paso del esquema c:tMieoO. lTOin$mi$i6n de la nformaOIOn gene-lica (p&g. 1).
244 TRANSCRIPCIN
Se tnll8 vn l)rooeto etUi!'tiOI) catallzado et1 lodos lOs Otganismos por una enzima RNA polimerasa
(potimerasa de RNA de ONA. o p(lg 14 7), Como ecepciOt'l. n.Jehos vin.IS con RNA cornc>
material genetieo (por tos retrovlrus} utilizan su ptOClio RNA oomo molde para la si ntesis de un ONA
complementario (cONA). mo<.liclnte \1M de ONA <pet\\::iel'lte de RNA (ttan&Ctlptasa invetSa, pgs. 147 y
195). Pot esta razn. el e&QliMia general del flujo de infQnnacin gcn6ticn $0 oonsidem quo es
bldlreoclonal en su ptJmera pane (pg 2). U. l)reMI'ICi<tdel OH 2' en la ribosa. qu.t Nioto ;al RNA mjs ronctivo (pig, 35),
pvee elq)llcar que el papel del RNAcomo material gentioo (probable en todos tos organismos al inicio de la G\'otucin)
se haya desptaz.aoo al ONA. una molcula mil$ e5tabte.
p 1
,, .. ,)

milllipiC'J. ptt:Jt1o..M
(<llfoo:moec prii!W'JO$}
.......... ,.
,_,.___ I'I'Iitipkos
rn;uillro
19.1.2 Concepto de gen
citosol
\
"'
19.1.2.1 Definicin clsica, no molecular
mitocondri
O
DNA
(un nomowm:.)
o"' - '1''"' '"
--

(O l f\t""'lloot pnmariN)
...

En trminos gentioo& c;l$&i00$, et gen se deh oomo la unidad de horoncia, 13 regiOn t!sk& y
tunclonal Que c::ontrol<l vl\3 (;lltl'lctet1:Sik::a hereditaria ooncreta. la do 1<1 informaeic:W\ gentica de una generac:iOn
a la $9JI$f'ltO, 1<11 que gobierna, en deflni!Na, las c::aracterlstictls do un rHgO partiCular.
19.1.2.2 Defi nicin molecular
En tb'tninos moleculares, puede <istinguirw entre 13 visiOI'I Of'Vtlal y el conoep1o actual.
En una tase (lf'eYia, la definiOOn de gen ;e b8I&O en l)l&r'lt.Nmlenlos muy sln1)6es, relacioMdos oon los (JV8r'IQH
ptOOudoos c::on el tiefT4lQ
Hip(:rteSIS un gen-\Jna Basecla en el gen como resxll'ls&bte de la slnlesis de enzimas.
primeras molculas con funciones ettlas clulas.
HClQ!ollis un gen-.na Basada en la nocin (W'iginal oe que eod&s las enzimas son pro4elnas
(hOy que algunaS molc:utas no pro1oials, como &ambln tienen fun<::ioi'IG$ ccrta!itic:M).
Hip(osis u.n gen- un poll>tptldo. Basada en Que mucttns pro!A!inas estiln formadas por varios
pol.pptidos, cada uno ccxiflc:ado pOf' un gen c:r.-erenle.
CONCEPTOS GENERALES 245
Como consecuencla.la deflnion basica. la conSiderada nOI'n'lalmenle como villida y aoeptarJa. es-
Un gen e-.s aqulla ttogtn del Que contiene- la (nfonnae!6n necesaria pata slnt&tlr.ar une molilcula
de poli pepdo.
En el momonto actu31, ftitt debe ser atnpliMo para dl'lt (!(ltfada a dos nuevas
do un gen cvttlquiertt. (:KiMenCia (le dos llpOS de con ruociones oderMtes. una estructural o realmente
co<liticOOora y olril do 1& y en la reg.On esuuctutal de 1egi0nes cocllf;cantes y no
codificarno$
.. .,
'olli" \1\l1l iiC
ptodr..n cmlll'lt t'flder
(lltiiiJIImnltlllk '""
c-tolllut lol>
J'f (>(C',.Of dt-
tr.n,n!p;Km,

5'
FJem)!> de
dr un gen cu.::anl ico Lipico
(<Ji: tipo 11, p3.1<1 Ull3. p!XlolCE\Ol )
3'
l.mnscnlo prmu.lfM.l (pn ... IJIRNA () hnRNAJ
re:tC>n
tr""'"-110
rnu
ellmm11da
l


fl'lttiulcmllot u\11

y mRNA maduro: 3
... (I<"'W .. ,
1
4
hrr t+!o\t
lfil!!n t>ll _.. 1 nu t.WU.-.Il
G"""'"' """ .,'WJ
N (
111 l l
'"
L.:t regin cstrvduraJ rf}.al COmprende dQs tipos de en 1\lnon do 51J
capacidad de expresin: intlonH. o reglooos oo coddlcames presentero en ellnte(a del gen (Pag. 276). y e.xones. cue
Incluyen tanto las secuencias oo<lfficantes como las no codlficantes de ambos extremos del gen El conjunto de exones
e intrones de la e&truct\ral se ltanSt.:rib& para dar a un RHA llamado pt9CUr$Ot o transc-rfto pt lmario.
ro<uicrc un pr<>ccs<> 01diei0flt'll po$\Crien !) b3nrscnrx;r0n, P<lf'OI d\\1 lms mo1kolas foncaonales de RNA (tema 21) la
mayor p._'lrt de 1(1$ ttanscri!os fOr'nl&dO$ en y $vi re iel'<> proceso. ll<tl'n<Jc>
postnt.nscripcional, s.endo excepd6n los mRNA.s proctuiO!iQOS;, que! so .:;inlet;it:;;.n dne<:tolmcntc 9n $U tonTI3 Nnr;ionet
Como pane de ese pcoce!IO se b9; tnuones, y los e:Kones se unen lit'IC31t'l'lle(lt1)., t\.11$13 Ct)n$1.itvw .,1 RNA maduro o
funcional {pg. 280).
La re-gln reguladora. sin tUf'lcrbn oocMcante. esl notmalmente COftiente art'ba (es S'.
pg 249) de la regin estrue1ural Conoone dhuinlas regiones pcomotoras, encatgadas de intetaocionar eoh Jos
de protetoo& para 19g1.11er PQ61hva o negatiV.-menle el lnloo de la traMCflpCtOO (p&g. 264)
t..o I"'4JOI't<NIIO P<W'# dcJfinicin moloc:ul<tr dol gen e& 1& tormaCIOn a panlr del ONA de do& upos de proouclos
gnioos: RNA.s o prole;nas tunCIOC\8ies Prtra 18 fOimaliOtl de 10$ 1;:1 !rt'lnSQII)cir;)n y. en su caso. la
rnadufacion poslransOfl:>Cional. Slo uno de los tipos de el metl$3,ie(O, Sii"Wt como punto dtJ p3rtlcl3 p;.1ret sin1otr.c:ar
el segundO produCio gnioo, la ptoli!'lna funei0n81 Ello ha requer;oo, de tr;)ol:q;c:npci()n y mitdlJfi>Ci6n
la lf8duccln o slntesls del pollpoptido y. en la mayoria d& los easos, et pleg<'miertto prQ!aiCQ.
nooosttnc> p3r3 tu tnifrc;o tiA lvgf)r do OtXi6n y P\1' <' ol su luncin
COI'IlO eonseeuenelrt, la definiCin 3Ciutll $0 M Dmpliodo: vn gen H el conj unto d& secuenc.ias de
OHA de todo tipo. estructurales llntrone-s )' y regulado!'as. necerias para codificar un produt-to
gil nlco, s.a Hte un RNA maduro de cualquier tipo o una I)(Ot&i na funcional.
Ob&MtSe cue ambas deflfliciooes moleculares estan basadas en la un gen rnt p(J/ip>tldo,
S<lt CKtof'ldi<:J;::t$, no so<r fri)WCnto 1\ilcerlo. a:
Hlpc)tesls un ge.n-u.n RNA, tXII'nO pnmP.t )rexb:log&.nloo
1
H.potesls un gen un ptodueto g4oic:o
246 TRANSCRIPCIN
19.1.2.3 Situaciones particulare.s
gene& po$tllttn que requieren forzar las definiciones en esos caso. se deOe
acudir a le lnterpretecl6n ms funcional del concepto moderno de gen. ms que a Jos detalles de la definicin So
il'ldiean algunO$ eemp6QS.
005 gent:SOVO<Itl'l ser es decir, untt misma regin de ONA(pag. 249). bien cada uno
e&t<i en \.lOa! hebr.'l di&tinta (y, por l<tnto. &u& secuencias son completamente dlfetenles. pg. 44) o bien
lnc:tuso ef'l ta misma hebra (lo cual no Implica que 189 ptoeinas CO<II'Ilca4e:!l compart3n secuenci<' amino<'lcidir;a,
debido a la e)(lstenda de tres marcos de lectura, pg. 288).
Algunos genes dan lugar a varios productoe (pg. 276_). Un ejemplO es el gen oe Jos rRNAs. que se 118t1Sctibe en
un RNA preeursOt maduradOr\ se t:Jaf\00 V3nO$ rRNA$ funcio"-105 (p,'Jg 283). Otro C<l$0 est en
el ONA mi!OOOnc:fnat. cuyos 3 transctitos pramarios pam dar uno RNA.$ 284).
genes proe3ritiCO$ s. a un mRNA \neo que sin embargo da lugar P<lf trsduca6n
a varias pt01efnas (mRNAs pollclstrnlcos, pilg. 301}
En otros casos. una misma seeoeocla de DNA puooe aar lugttr alterMiiv!men"' a dOS productos gCnicos, trorv6t
>ll'lrWltes oe su eliPfesiOn Qenlea. por ejemclo. POt un 41fetente proeeJ3miento P0$1.t'a0$CtiPcioMI o
postraduocional (tema& 21 y 24}.
Igualmente. en NJmero806 casos la protelna es& formada por varias &ubunidades: en caso. no existe en gen
para la prote!na. Sino para cada uno de esos poUppticJos (JXlf no se habla oe1 gen de hemoglObina, sino
de len gen" de ICII .globina y la
En casos excepcionales. oomo Sar$ un 98'1'1 nico sutr. roorvanilacaonn en 11u
secueocia ante& de &ef b'ans.crito. de forma que da a una vanedad de polipiptidos (los diRiniO$
anliet.lf!>rpos oon f!SpeeillciCad para anti9f!'.nc>s
19.1.2.4 Nomenclatura
l.O$ QOI'I$5 se nombQII'I gcnera!mMie con ttes letras minseulas y en cutslva (por ejemplo. ras}. la ptOteina
codile.da por l a el mi$mo l'lombre pero comenzando eott 0118 retra mayoscula, y sin curS& (protelna
Ra:s). En ocaskln9s se emplean* tres tatr&& en may&eula (por APC),
19.2 ENZIMOLOGA DE LA TRANSCRIPCIN: MECANISMO DE LA REACCIN RNA
POLIMERASA
Como y3 se ha i'u::fi+e&CIO. !OCIOS lOS organismos, procarlotas y eucariotes. slntecizal'l el RNA de acuerdo 00t1 una
reaocin cataizada fXX la RNA
Previamente. po1 &u significado hl$1rioo t n relttcin <::On 1<' siniOSIS <le RNA. debe eilarse la et'IZim&
pol.inucletldo fosforilasa (descrita por Marianne Grunberg-Manago y Sevvro OehOa on 19$5, y
asi por su arWOgla oon la tos.lorllasa heptlca). Esta enzima requiere un cebador y Mg"
1
, pero t'l no utilitat un ONA
mo10e conduce a una pollmerlzacl6n IW!eal al azar. no predeterminable:. La pOiimeriUJoCin se produce por uniOn de
miiCI'Ios S'NDPs mediante enlaces 3'-5'-fosfodi&ter con la 00tl'e$pondierrte liberacin de P. , para formar una molioJta
semejMto al RNA n3Wrat (un poliffli)OnuCiel!do):
u inOOfpcf'&eiOn ae cada nucleo!Jdro depende de su concentracin relativa {respecto a bs otros tre$) en &ai mo:es.t
de tO<Icn Mem6s, la posiciOn de de ta reaccin favorece ms la fosiorolisi:s que la polimeriz.aci6n. No se
conoce c;ue lt\S o&lui3S Ulihoen enzima; se cree que puede servir ms bien como mecanismo de degrildaciOn que
d.a slnteslsde RNA.
El mecanismo de la reaccibn fisiolgica, ca'-lil<'ldi! por 10'1 l:r3nscri0tau. es idntiCo al de la ONA
polil'nerasa (pg. 146' La reaccin global es la siguM!nle:
EJ deseonsooe eoorgla Jl)re de 1a reacdn. para ceda nueletldo alladido. es.40 .. = -2.6 kcalfmol = -9 1tJimQI Es
decir. es y espontnea. AJ igual que en lit ONA po!imetM<t, !t' tC<'IOCin 0$111 asislidtl
IOimo<linllmieamenle por 1a rup1Ura def enlace fosfoeMJdriclo del NTP y la hidrlisis del PP por ,... pirof.osf3"1<'s. Se
asegura a&l que la! reaccin lran$CUn'il en ta direccl6n de sin tesis.
La adicin de nucietido& a &; hebra de RNA nuevtl y tas eaoraocteris!icas de la reaocln se exponen
compata11vamente con las de la reoicaCI6n:
ENZIMOLOGIA OE 1.A TRANSCRIPC*N: MECANISMO DE lA REACCIN RNA POLIMERASA
Mf(_ kiACU'
tll1k n1 dt ;...-:;:::;-""'
'
(hcf>OJ ('
0"" na(iefl!<:l
' '

, .. ...., .. _,...,,
ttH.\.,..0. ....
O(n-( ....
RcaL-<in
d( la
..
ONA
polimt'raSII
(M.OJ4o!O)r.l>
...
Nfflp.nlb'\"001

1
..
.. ,
Reaccin
de ht
KNA
pctlimenun
'
..
' '
"
"
"
.......
+00
lr=:J>
1 '
o

1'
"
1
"'
....X.. f)..A n""
.,._, nwt.sloloi,lo)o.
..
...... ...
+00
o
.k RNA
1><1
(PI' 1 _,. P,
247
248
SMI'Iuttneamerue.
conserva una de la& hebras
Iniciar la slntesls
como c.ebadOf. que se aparea por
de bases y anliparalelamente
La M2ma asociada al DNA mOlde flaee
3 OH lilm' 31:tque IIVCIOOfilic;)mente
prtmeroNTP ya apareado. Se forma
l la:e fostodltt&ter. se rompe el fostoanhidndoa-tl
PP. Su hldrOilSIS favorece ia reaccin de
nucloofili()(.)$ del 3 OH del
sobre el de cada dNTP tpar$CtOQ.
s,ntesls es en dttecCI6n 5-3 de la t"KJeYa
DNA es OOC.r en dtre<:C!tl Y 5 det
19.2.1 Termlnologia
TRANSCRIPCtN
oomo oe
actuar como molde
pero no almultneamente. Tras realiZarse
la copq de Ul'\8 SOla tlebta {l8 molde), se oonsetva
apareado. La ei\Zma asociada al DNA Moe
que este 3' OH l'll.aqoe al <1 P del
2' NTP ya apareado. Se forma 1 enlaoe
f06fodster se rompe el fosfoanhfdri00- 1} y se
libera PP. cuya hidrOiisas favorece la reaccin de
'
Para una descripcin dldccica de la transcripcin es CltCOn&oef,tble trazar "" ot ONA dot>lo l'lebrt' Q\.10
se va a se oonsidera a la hebta superior(extwno 5' .pala izquicn:lo1} oomo Mbro1 no-molde y <'1 1<'1 interior,
at\(iparalela (exttemo s derecha}. oomo hebra molO.. Vofviendo Osta. PHa il sor lil suporior en su
eon el RNA Mntetlzado, que &e &lla. arrtiparalelilmente (e.xttemo 5'-PPP Q la ilQI,Iien;ta y 3'.0H o t& dO:IOc:ha), det>a;:> de
esa hebra molde. La sfnt.sl& ele' RNA, que &e marca a menudo con lno;:t (inicio) y flt.l;ha (scnliOO), ocurre on sentido
5' -.3' del RNA E $lo e<!'lrvale a decir qve lil hcbm moklo de ONA se tran$Cribe (se 1ee') en direoeiOtl Y - s .
,
; 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
3
DNA )' f ""iT""TGt J'
l l l l il i llf i l l i i 11 111
lt"J;.\ 1 !1 11 t 1111 ...
l< OtCGOUl<C lo
RM
1
1
1
hebra no--molde ------
'"""' "'""''
inllo"u''
- +"
hcbrn molde
1rnnta"ilil
infomuui\a-
"110 codi ..
"anti!iefltido"'
bellm no-molde
M unmtnl:a
"mfatmali, .. -
-C!Odifi.:antc.''
"con 5(111ido"
.. . -
La secuencia del RNA nue'IO es. PQt i(:J6nlic;) a la de la he-tl'a de DNA satvo por la ptesencla de
U en lugar de T. Por elo, esta hebra se llamacodificantc o i nfonnativa a la secuencia de bases del RNA
y opinart\. l)()r secuencia de amlnocicbs de la protel na). Tant.n se c.onooe como hebra no transcrita,
hebra sentido y hc:t.lftl positivao (+). La secuencia de esta hebra e& la que normalmente se documenta al d...- &;t
&ec:uenC'a de un oen En eonson.-.ncia oon lo ante(IOr, la hebra de ONA mOlde &e llama hebra
no JnfOtmatlva, lransc:rita. anti sentido o negativa (-),
250 TRANSCRIPCIN
19.3 TRANSCRIPCIN EN EUCARIOTAS: DIFERENCIAS CON PROCARIOTAS
19.3.1 Relacin con la condensacin dal ONA
Al gual que en la repllcaan eucanotlca (pg. 151). un problema especialmente .tni)OI1;3n-" el nNel de
eonden$&Cin DNA ar ini(;iO del orocoso Clt tranc;ripc:in, En los CtQI'l'l060mas metaf&icos. donde la oondensacl6n
&S m&xima, est tOtatmenre impedida ltl . .;$t;ot tiene lugar dvrme la interfa.se. PJG$ &lo ocurre &OOte la
eonf()rmociOn de fibr35 de 10 nm, $minina condensa<:in (pg. 85) y, por tanto, ma)'OI acce&ibilldad a las RNA
polimera&a& y otras prolelnaos necesanas para el proceso. La mayor descondensacln nunca se da slmurt.neamenle a
lodo lo \argo del Cf'OITIOaom&, k> que e.IQ)I.:& la oorrelacln obsew'v&da entre actividad ttanscripeional y
posicin de las regiones descondenaadas (euaomatlna. pg. 87).
19.3.2 Slo se transcribe una pequea parte del genoma
Como ya se il'ldic, \.W\8 mayorla del DNA genmico de: f'ltlnea se ttanseril>e (DNA no oo<lificante:,
en l:lueOb ().llf1e ropell(iVO. pilg 106) . a t$1e no hmcional o simf)lememe no tr8nseribible (pg. 107)
aparecen oopias deieuo&as de genes (pseudogenes y fragmenios de 98f18$, pg.. 112). 8$ltuctlJras CtOmOISmcas
oo se 1renscriben, etc. Slo se transcdle ellS% restanle, correspondiente a los exonesde las reglor.es estructurales de
tos genes. sean de secuencla nica o repelda, y a aua Wl trones (aunque stos, eslrlctamente. son DNA no eoclifical'lte).
Adems. denrro del ONA que se puede ttanscribir, ofulas diferentes transetllen dlsdnlas regiones de DHA. segUn sus
t'W!e6Sicl&des y gracia!l al OO<plejo proceso que ccnsli1uye el oonrrol de la ex,presin gnlca (rema 20).
En este CXJtltexto parece 9decuado Insistir en que no e!l vlida 18 deflnldon de gen oomo '!leeueneia
de ONA que se trensctlbe. porque eJt<:luye ta r&giOn Clel genoma que oontrota la tt&MCf'1X:IOn (pg. 244).
19.3.3 El proceso es mucho ms complejo que en procariotas
En pfocatiotas. la mOlcula de mRNA resunante de le transcripcin (transcrito primario) es ya funcional. no
pteCi&a sufnr el proat$0 de maduracin postranscripcional y M utiliza inrnec:iatamen1e como mok:St P81'8 13
en el mismo oompartimenro subcelular (puesto que no hay membrana nucle-ar) . Existe por ello una a.sacMcin temponJI
y i nlitn.f y traduccin: de hecho, un mRNA puede empezar a traduche antes de haberse
<:OmpeltidO su slntesiS por transcrlpcit'L Por ef contrario, la meyorfa oe los lANAs y rRNAa deben sufrir maduraliOn,
a.noga a 101 de outalrie>tas.
En el tT<Wl$c;:riiO prim;lriQ, o RNA resul!anto de ltt tr3nscripci6n, experimtoto en el r.Uci&O lamtJ<I.ur'$cin
o J)IOCe!J.&I'rliooto postral'l$crlc<:ionll. Los RNM mt'lduros te l r(ln$PQI13n luego al cilosol p<'lrticipar en la 1111dueci6n.
E:lli&te. por tanto. una htmpomJ ontr tr;)n$cripei6n y lntduoein, que SUPOne uno"! mM
de la expresin gnica, contrb.ryendo ata en variedad y funcin propia de las clulas eucariotas, Ellle
<:ontrol se 1evt1 a eabO ef'l gran medida por regulacin de la acrMdad de la RNApolll. El hectlo de qua esta enzima no
se una QI)OCirJC.<tmetl-10 oor si misma a ros promototes euceriticoe ea otro signo de le complefidad respeao a
procatiO(;)$
EVCioRJOT/oS.
-
19.3.4 Existen varias RNA pollmarasas diferentes
..
f!N-Dio.>
p<lrBotrlfiOOIIAI
o.M R.NA
En y orgnulos $ubcei!Jare:t (mltoeondrlas y de euearlotas) se utl lza ul\8 sola RNA
polimerasa para llinleb:Zar los 11ft tii>O$ de RNA oeUar (mRNA, IRNA y rRHA).
En el ncleo de existen tres RNA pollme.-asas diterentes (1, 11 y 111), que slnt.etiUin C8d8 una dr&btllos
tipos de RNA. Sus catacleristlcas diferenciales les confieren un mayor grado de especiatizacin en cuanlo a su laboJ de
si mesis do RNA. Adomlls, empleat'l distit'IIO$ 1-ac!OteS de ttansetlpcl6n QUe se unen a ptomotofeS auados en dlstln18
posicin ( tema20).
TRANSCRIPCIN EN EUCARIOTAS: CHFERENCIAS CON PROCAAJOTAS 251
RN:A eucaritk:u
Transctlto Producto Localludn Acti vidad Efecto de ta

MRNAS (pre.mRNAs) Nu<:leoplasma
' ) y mayoria de snRNAs
11\h:ibiein
pretRNAs IRNAs Nueleoplasma - 10%
pre-rRNA pequel\o tRNA <le SS
('J y vatios RNAs pequeo&
RNApol (') rRNA$, mRNA$ y tRNA.$ y Ninguno
miiOOOndriales o clof'qllilsliOO$ CIOtoplastos
19.3.4.1 Especificidad respecto al tipo de gen transcrito y RNA formado
caoa RNApol ltanscrlbe un Upo de gen y da lugar a 118n&erltos pr!manos que onglnarn por mac:ful"acion
disbnlos tipos 6 RNA Por tlhOI'tl se eotnenl.a SOlO el prlm&IO
l a RNApoll trtlnKriOO et del pre-rRNA -grande' (4$$), Clf.Cursor \ir.::.o do 3 de b$ 4 1.'100$ de rRHAs
oomponente6 del ribo&Oma ClloptasmAtico (pilgs. 70y 80}.
La transcribe IOdos tos genes de protelnas. $1tLIE:ttzando lOs RNAs nucteates hetetogtleos (hnRttA$).
que son los precursores de 'o$ mANA$ (PO ello, el h.nRNA estil COI'Il!ituido pOr m016cul;)$ tamao& muy
variados, de foque procede !lu L:. misma RNApol ll transcribe tambi6n la mayori.a de genes do lo$ RNAs
nuCIIHUOII de lt'll'l\8JI'Io pequet'lo (snRNA) . Pu0$10 Qvt RNAPOIII transcribe 1(1 grt'ln mttyori ele gene\S. los que
C$10' onzma se repre:sent.ativa Oe
l a RNAPOIIII. POr su parte. tranlKribe los 9tf'ne& dlt toOoo los tRNAs, sintiJ!iUM1do sus pre-tRNAs re&90Ctivos, asl
como el gen del pre-tRNA que madurar para dar lugar at cuaf'lo rANA (SS), y los oe ouos
RNA$ pcquet'IOs.
19.3.4.2 Localizacin y cantidad
De eon w especifiCidad. lar$ R.NA.pol se localizan en el nvcleoplar>ma (RN.A.Dol-11 y 111) o en el nucleolo
Este es una reglon densa del ncleo. de lincln mas lntet'lsa, rica en RNA y proteinas, no rodeMtt t)Ot
memtlf'8t\8 alguna ni 00$0tvtlble dutante 13 milos-s- Svrge de 1:1 <e k>$ gCt'le$ de rRNA, proceso muy
actwo ()fO()OfCiOn<ar clevOO. t:Mti(;!;)d de ribo$0ITitll QVc:t 114J(O,..t' l tt cilul3
La cantidad de cada tJpO de A:NApol (medida oomo freccl6n de ta acclvtdad enz1mtlca tocal) fefleja la 6ell'landa de
sus procklctO$ gniCO& respeccivos: es mxima para RNA.poll. 1ntermed18l& de A:NApoll l y casa reSk!IJal en RNApollll.
19.3.4.3 Susceptibilidad a inhibidorcs
Es la drferencia m& &igniflca!Na, al periTII!Ir la distincin expetmental de las 3 polimeras;)S por su
respuesta a la l).amanltina (101til'l8 de Am$1'1if8 un oct;lo6pti():) biciclico con vanos aminocidos infrecuentes
(p;\g 2S8). En c:!ultts anima!e$ e$\e compuEI$10 no afec(S a la RNApoH tntube fuertemente 1a baja OOI'IcenltaciOn,
1 o M) <' la RNADc-11. y dbilmen., a la RNApol-111 (a mayor entre 10 tQ' M aunque 6e torm.a
variable segUn la especie).
E.n CJ.IMIO a ta RNApol rnitOOOldl'lftl, no se ve ofott<)dt' pOr <N'Im;)nilJna, pero si por la rifampieina, que no
aJecaa a las polimetMas nuclesues El'l l:t n nn-tos inhibidores pelimeras.a mitocondrlal se comporta !Igual
que la RNAJ)Ol de (rocun:lese el probable origen endo&mbitlco de las mltoconar'ias, pag.8).
19.3.5 Las RNA polimerasas estn formadas por un gran nmero de subunldades
E&la es una ear8ct61isbea comitn, 4\lnq ... e con Cte-J'I:ts direrenci:ts Clfltto PI'O(;ariol$t )' eue<atl018$
l8 RNApol de proe8fiota:s (E eoiiJ, la mejOt estudiada. eS1 PO' 4 (posiblemente S)
asoeioCIOS en ta 13mt'ld<'l cn.timn o Pnra inici&r l;a transct'lpcin. la enzwna mlnlma requlele la unie'l de
ocro PQiip6plic;!c> lfldeoondiente. t.;a subumdad o f-actor o. que partJcipa reconoaendo las. secuenCiaS promotot.s en et
ONA. o sitio de ncio de la lran$Cripan. Una V$Z iniCiilda l.a transcripcin. la subunldao (J se vueiYC ., de la
el'lzima mil'lll'l\8, que eortlinVa etong8<lc>et RNA.
252 TRAJ4SCRiPCIN
Es1ruc1ura de una RNA rnilifi\Crasa procuritica lE. to/i)
t.l (35 kOa
P\151 k0u)
p (1SS kOaJ
ltl ( 11 k0:1)
o (70 klla)
la& RNApol de son muctlo mil$ Aparecen como \}fandM agregadO$ de m<l$<1 cercaBa a
600 kOa. fOOTiados por entre 1 O y 14 subunidades la &Utlurtidad mayot <M la RNAI)OIII contiene un don-.nio Cterminal
(llamado CTD, de C-termlnal domaln) ooo mllipleg fepeticiones (50 en mamiferos) de la secuencia TytSerPto-Thr
E$te $$ rosrOI"itadO et'l ser y Tht, una elevada carga n&g&liva, lO cual esl&
relaeionlldo ton su funcin en lit tr.ln$il;ln .,tro fa$CS do inicittcl6n y otong<JOi()n (pAg. 254)
IUCARIOTA'i
I'ROCARIOTAS
. ..Aw.-
f,.M ....... itl\iu RilO
200! p.:l-1 p.:l-111
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(l.IJaj tEIO
Patro de
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19.4 ETAPAS EN EL PROCESO DE TRANSCRIPCIN
la llllnln.ldad IIV)'IIr de elida
R.\' p;btc de
.k'Cuo.'OCJI coo. la lk llli (lita!!
A lf'.t\-d
k: une
1M 81:"plndlli sobunhkdCl.
t ll tsentllll'n mucMnm
homolot:a t.'lltre Ji. ti
Jlctnu de' la c-..t.ltl.ofod.
Para que tenga .r lit transcripcin es necesaria la preseocia en la hebra molde de la llamada unidad de
tra.nscrlpcin. QUe incluye la secoonCUI del ONA que $8 tia de ttanscribir ms las dos seooencas consenso que la
flanquean {llamadas promotor y termjnador). E$ impropia l:,t de'riniei6n de unidad <.le ttansalpclOn com:o regin del
DNA que se exlleftde entre el promotor y el Es oonslderar al promotor como la
del ONA qu& se transcribe'. Se reserva el trrNnQQpctn '"unidad de transcripei6n en procatiotas

ONA de doble hebru
Al Igual que la replicacin, la transcripcin en eucariOW tr;)l'ltcurre en laS 11es tases cls.cas de lniciaaOO.
efoogacl6n y tenmnoon, oon notables diferellCia& rospoo a trt CV<'!tlt() al te(;(lnoclmlenlo de las
secuencias promotora y terminadora,
ETAPAS EN EL PROCESO DE TRANSCRIPCtN 253
19.4.1 Iniciacin
E&. eon mucho, lit etiliP<' md$ d@ la llan&etipcie'l (y, por ello. en la que tJene lugar la mayor parte de 1.ao
regulacin, tema 20). Requiere la separacin ele '" del ONA ef'l un pequeno tramo ootcano a la &ecuenda
promotora, para petmlt.r que la RNA pollmefasa sint.e:tioe un fragmento oor1o de RNA (ele unos 10 nuclelidO$) )01'
apareamiento con la hebra molde la regin ()e ONA que sulre este desenrollan-.ento pardal se llama burbuja de
sta se fonna en el 1nicio y durM!e ta se desplaza a b largo del ONA junto
eon la RNApol. PiWa 1ct inici3ciOn tambin se requiere la unlOn al ONA de prote-ina& llamada& fackRS ele inicio ele la
ltilnscripci6n o. comUnmente. factores de transcr ipcin (TF). Tanto &tos como los promotores se estud1arn en
adclattte (tema 20).
En procarlota& y 9n es frecuente que un mismo promotor Inicie la corranscnpcin dtt vario$
genes contiguos Por el el gcnorn.a de eueariotas, a part.r de cada promotor sto se transcntKI un
gen. Olstlnto6 genes, en especi.-1 en funcin del& RNApol , utiiiZM distintos tipos de secuenCiaS promotoras. a
se f)istintos faCIOfes de transcnpci6n. El proc;cso de iniciacin Qvt se deserll:le COMO tipiCO de eucariOUI& uWiza
promotores Qvc tienen ta s.e<:uenela TATA, pet'O no la lrw (lamados por ello de tix> T ATAIm- ) , cuy M Cl)n'ICICf'itlleas se
descfiben po5leriormente (pttg.265). La secuoocla TATA es reconocida por la RNApol inditoctamen\0.
intet".CCIOtl <:an lOS TFs. Es imponente resa!tat que tanto en ptQC&tioiO$ como en eueattotas, la ink:laCOn tequiele la
presencia de la RNA)c)l oomplela u hOioenlima (es decir. RNApot bacteriana COflla sub,miCIM o. p&g y RNApol
eucanO!icas oon todas ws con tos f&etor&S de transcripcin}.
La IMCiaciOn puede $Ub0rvi<.IW'5e en 1re' $Ubct;.;pld. que slo se para lO& genes transcritos por l<l
RNApolll (gEWles d6 ciase 11) lo$ gonos de cl osc 1 y 111 se l tanseriben por mecanismos slmllates, salVo por lit
y pecul&andades de su& promolores y TFs .
19.4.1.1 Formacin del complejo de inici acin
Este cof'I'IClklp plurimolcM;ul;n o& impre-scindi ble p.ara que l a pueda aeuar. la OM6n de vario&
TFs a las reglones Pf(ln"'Itoras del ONA y intc)t'J)O(tlciOn de la que parudpa en la forma oon dom1nio CTO no
(pg. Se han propuesto dos modelos pMa 1.3 fOtmadn ese es-te oon el miSmo resutl.ado. sus
se desCI'Ilefl posteflonnente. una Y$Z estudiado$losxomotore$ y lOs TFs 267).
et modCl:fO d"J I'IOJOefllim8, en el que la RNApolll se une pte-\'iamente a lO$ TF$ y ti oonjvnto 01
-
El modeloescalomtdo. en el Que los TFs se v3,n <"tS<>Ciando a 18 reg1on Pf'OtTIOIOta uno a oontlnuaciOn del 0110 y en
un cierto orden. Es el modelo actualmente ms acept.aoo,
19.4.1.2 Desnaturalizacin del promotor
El complejo de prOduce en 1a regiO(! ese iniciO de la transcrlpCOn el y separaOOn de las
dos hebras del OHA (desnaturalizacin local}. esenCial par.t '" de las b8$C:S a 1& RNApol zor\3 de
hebtas separadas. butbuj.a de transcripcin o complejo abierto, es el lugar donde v<t <' tcne1 tvgar la sin1escs de lil
oe RNA, Esta etapa requiere, al Igual que el ncio de la replicacin (pg. 151), una actividad ONA.ftel kasa.
presente ahora on dos de los rnctorcs de lt'Oflstrlpci6n, TFIIF y TFIIH, con un gasto C>JWg11co (l'liCirOiisis oe1 ATP). 0110
faCior. el TFnE. estabiliza la rGgl6n desnaturatiZild<'l del prom04o' (paQel ten Ciet1o mooo sa'l"liltlt .111 ejettl<l<> I)OIIil RPA en
larepucaCIOn,pag.
1
N
1
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N
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la rco(.,, m el UNA ) al --.; a

l)l;tWitW.!fil': unl la 11.1'-A All11. ,e onl(!l(ld: llliDII!oCo>n.
El 11\!CIIl 1\'wlll(ln hl ONA ( rt1incl(l ,. bJrbut !lctlilllf(JKS!\,1
w,, ,, poli _...,..
254 TRAHSCRIPCIN
19.4.1.3 Formacin da los primeros enlaces fosfodlster
El entaoe fQskcfi6stor iniiCit'l $e forma entre dos ribonudetlctos. a partir oe sus NTPs et1 ronn.- libfe Uno de ellos,
9(1110flllmtnle oon !);ase purinica (concretamente ATP). se aparea con el nudeticJo 1 et1 11 hebra mole de ONA. El
otro M igualmente aoatado con el nucletido + 2 de la misma hebra.
pppA +
! IOlnudeltd(l ( ATP}.
U(:! (la como
Se cvn T -1 1
!k l:a hebru m(l lde
DNA
pppN

tril06fa10 (NTP)
emnpk ml!'ntllri o ni
nudelido de 111
+"2 de la
h(hr. molde
.. pppApN
RNA dedos
nUt:h.,iol1d011,
oon en su
1' . unido
;1 l a hd>nl
pp.
'
\.. 21'
'
E$1e primer enl<'o. oonesponde, pot tanto. al extremo S' P del f\NA naciente. La reaceion se reQilo $Obro ol
extremo 3' del dinucte6tido te$Uitante, y asl sucesivamente hasta Jormar un de unt'$ 10 bases, que
permanece temporalmente unido a la hebra molde de ONA como l'llt:ltldo RNA*DNA. En O$Wt momento. 1& RNApolll se
separa de lOs Tfs unidos a lOS promolores l)ibfHltdn <Jf/1 PI'QmOIO() y comienu a desplaz.ar&e por el ONA (en sentido
3' - s de .ta I'IObr3 moiCJO), Este momenlo se oonsidern el final de la etapa de inici9Cin y el de la de
elongaci6n,
19.4.1.4 Liberacin del promotor: transicin de Iniciacin a elongacin
En proc.otriotn . e$1a tr;:.nsici6n se desencaOena pot" la di&OCiacin de la subunidad o de la holoenzlma RNApof,
quedando aqurlla disponible pera su interaccin oon una nueva RNApol ndeo e Helar la en un nue't()
promotor. El 1'9$10 de la pollmetasa { RNApol desprO\IIsta de la subunldad o) conlinU& aetuat'I(JO en la'l
el0ngaei6n.


.
de C ,,., 1'

df la
lt"A
r- uo ........... -,
t:&
I>NA
\ .,
En eucar1ot,;uo. la traMicln entre las fa&eoS de inicaacin y elongacin vtene marcada por la iosiOrleciOn del
dominio CTO de la RN.A.pol-11 (en la fase de Iniciacin la forma no fosfOtlaoa). Eslil foe-forllacl6n la le\ta a eaao
et faelor de transctipcic'ln TFII H.
19.4.2 Elongacin o alargamiento del RNA
\.a RNA polim...,s;) oootin\1;) t'lt'rgttndo 13 de RNA mientras avanza por el ONA.. de&pla:zando junto con
ella la burbuja de transcnpcln. El complefo de elongacin ya &61o formado por el ONA abierto. la RNApol y el RNA
naciente. Durante "te avance continuo ocurre lo siguiente:
Por detente de la pollmerasa se aeparan las dos hebf'M del ONA por rupcura de los puentes de l'lic1rOQei"'I (avar.ce
de la burbuja). La tensin cseada por el efecto de S\4)el'erwolamlento debe set compensada por lopolsomerasas
(pg:s 66 y 1S1}.
La pollmeta.sa alarga el RNA M<"tdiendo nuc:JeOtido$ al e:xlremo 3' CSOI RNA El Ultimo trttmo permaneoe
dcnltO & la b'ansiloriaiTI!ffl como hibrido RNA.QNA.
Por de IJ POiimertt$&. lJ de RNA nuevo se va separ<11>1l00 de la hebro molde de ONA. saliendo de la
y <1\*iai'IOO oomo ANA de hebta wncilla. En el ONA se vuelven a apa.r$il{ la& dos hebras y &e produce el
o rebobinado de la doble hlice, de nueYO aSIStido por topoi:somerssa&.
ETAPAS EN EL PROCESO DE TRANSCRI PCI N
E
L
o
N
G
A
e
1
6
N
r r.\\ bat.. '1' 10 pt."blfiC'flt!OJ 1< .iep(llil dt lo:l Tr }
llf'I*'><Jo>U llutkilnOOud 1!).1!T,._,J' dt b c.dcn.tl ,,,. RNA Lll bu.t.p. d.,. tr;,IIK'1'"'lQn
1 avance de l:t.
Cnu-. d&,;pli1Mfllmw) t kJrls.-:on dl'la c.ok111o lk II.N.\
__ ,_=>_
255
P11ra que la e1oogac1on sea efiCiente se requiere. adem<is. ta ayuda de los llamado$ htctorH de tran5c:ripcfn
g-enerales de la elongacin ( PTE) Se del(:onoot $u mecanismo CKSCIO oe &elu&Citl. Son p.-otel nas que se agrupan
en vanos tipos: PTEFb y SU oviton l<t lenin.CiM premetura oe la CIOI'IgaeiOon, mief\tras (Jie FIJF, Slll (o etonguna) y
ELL aumentan la velocicSad de la elongacin altwl)rimi los Pil1.1$8$lratl$i\Ori:l$.
19.4.3 Terminacin
El complejo dG tnns.cript.in re'$p0tlde a especillcas para rlf'UIIizal el proceso. separnctose el RNA.
formado.
T

M
1
N
A
e

N
19.4. 3.1 Terminacin en procariotas
E$ impart;)nle 10$ mee&n!Smos Wsieos de termi1'18Ci(:ln <le l;"t tron$tripei6n, bien <ffforoneioldO$ en
ptocarlotas, '/Que han servick>de 80PQI'te para compreN:ter los mecantSmo9 rn:s complejos en eucsnotas.
El prmero, denonwlado terminacin i ndependi ente de p. se caractenza por la presencia en el RNA. eon
&ormacin, en una posicin cercana a su extremo 3', de un punto de terminacin" definido por una secuenoa
pal il'ldl'miea. intrf-nseca 811 RNA, Obvi81mente esta secuenei8 e Clebe a unt\ 1&g:i01'1 P31in(lf0mi3 on ol ONA de doble
hebra. sitvado en eMt momomo en de C<:mo c:onsecuenc:ia, el RNA fOI'lTia una h01ullla,lo que
por alguna razn, nodaramenle de&Grita. haoe que ste se separe del ONA molde y &e intetrumpala slnle:sls def RNA.
El m<te;)nismo donomn..OO dopqndlef'lto do p $9 bas! en lil pro$$nc;:r.;a on el RNA de otra secuenCiO
espec:.illca. rica en C y pobre en G. de 5090 nt 00 longitucl. Cuando e&ta secuencia e&t situada en el RNA ya formado y
fuera de la bwtluj.;a .,teracc:iona con una proteina llamada p { ro). heltaiY'Ica ( 275 llOa en total), con ac:twkledes
ONA!RNA.flebcasa '/ ATPasa dependiente <fe RNA. Al parecer, ul'la vez uniOa ft etYIPiez.a a de!Pit'UU$C el RNA.
en settlido 3', fl&81a alctw\l&r el OOtrlplejO de el0tlgaei6n. En este eomacto, p provoca la oesnatt.mlllil:tteo6tl del h bnOO,
liberando el inl$'1'\lmpicndo l a tronscrix;:in
256
Tcrmioodn indc!'!C'ndieme de p ero)
o intrin:>t.'Ca
Actila como SUC'nc:ia dC' ll'111linadn
una n:-gKm d RNA
t4UC lbnna unu borquill.1) SC.1,'Uida de
\'lirios residuos de: uridina.
,.
ONA _ ,.
,..
,.
lllid
I(WI!Ilj!<h>
TRANSCRIPCIN
S' OOCACA:GC'CCC'CAqi''I'CCOj:'!'CCCGCOT!'UAAC'M'TAATCA j.
3'

J'
,.
. .,.
1
p.Wlttdw- riu .:11 tJ
!P .... e e e A e A " u u u
;
h'jjlnfilo>ialll&i
RNI\.._.....,
.......

c-G
di{!il
omtn,.;.non ton 11
I,..A)


.., ili.:I!U.."
&k k"'" ) ll.'" ,, ,
19.4.3.2 Terminacin en eueariotas
Al ..,nu.r dol,ermill.WM $0CUMeias del DNA eucariOtJeo, an poco carat(erizadas. se produce la tenninaci6n.
oomo conse<:uenc:iit de IJ de dOS raetores o m&CMiSmos: ladffilnctn o pausa de te ftNA pollmerasa y la
dHestabUitaeln del hlbrtdo RNAJONA El resultado final e& la separacin <kt k>$ (X)mponontos del complejo de
uanseripeion y. en el caso de la ftNApolll. su desfosforilacin pera que pueda enwmblar&e <1 un nvevo comptejo
inici&CiOt'l y oomenz.ar otto cielo de transcnpc:i6n.
La de lO$ dOs mecarismos Merw::lol'laCSOS es Ollerente para ceda una de la& tres pollrneras.as
eucarl!(;il&-. A difereflcia de proe:triotas. parece ser \.-'\ fleChO &a ausence de teg.iones pallndrmlcas del RNA
Que partiooen en la terminaciOfl de 131f3nser'iC)Ci6n, I.M earactetls.llcas para ceda RNApol son:
Tcrmon.xin de BNt\ vcd-1 <n
a 111 tntrnS<'U de
Utw JI; PRUS3'" o '"l'f(ltdnn c:rmil\adorn'" se un.e :o
tfpcdfic!lf del ON;\ )'lk'licM d ll\'III)(:C fk la
RNApol.
lJtt:l \ 'I'J. l a poluru:ras.. la Oc Wlll
rica <:fl r I'IOmolde fci fit:o l d<l RN;\.
N(l p:olindr6tmn.
;
tcn'llir.&OOn:
Rc:bl p en
rfF.t en simitar
TRANSCRl PCIN DEL GENOMA MITOCOHDRlAL
l'i'lltl1lla{'III ds: 8: NA ooH 1 Cl'l
n'": O:atltlmO St.milur ,d dcpcodtentc J) en
tn II'UJ i tJtk'S \knl ro> lk regin de
h:rminl!c)n" lu RN1\pol u- dctwe.,:. lo'!uC putil.: tk bcl":: a
eu el (la de pauso ..
qU(' 1.uK'n &1 ON.-\.
Una :;tm i lllr a p (d bccho. la pt'(lpu p
produ<"< el ll'II:U'II(l ;:f(!('tO SI: une al RNA
w
Ntl ha) resiiln palindr6mka.
Tnnma.:"(m <!(. KNt\ooHU .m
smilar a emniiWICin de protarnllas.
1 u RN\poi se detien..- en t.lcl ONA (M
$.,. lmn .. do pm!einil:; tt rzt11tlildotas.
Una \C( duudlll In rrc!lencia de unn
ri<--l en T 1111 hcbrn tll)mulde f:cli la la d.:l RNI\.
No bll) rc8in palindrrnic11
;
pro)lcfll3

I<NApot.-111
257
,.
Finalmente. e independientemente de 9$10$ mec<'lnismos. es impon.ante acelantar que el eXIremo 3 del R:NA
tunC()f\81 1'10 OOttesponde al punto donde ler1'T111"1a la debitSo a que durante la maduraan
OO$lrH1<$c:tlXIonal se cona la molcula de R:NA recin transcrita (pg. 279) Por t$1:t t.320n es menos wrtpol'lante
pteciS311a terminacin 9n que en y t.aMbi&n se e.xpllca la dlflcu!tsd del estudio de las secuenoos
y mecanismos de termii\CIICin euC<If"IticoS (pves C$ difiCil aiSlar los ltansctltos ptlmarioe.. de corta vida).
19.5 TRANSCRIPCIN DEL GENOMA MITOCONDRIAL
Como ya se na et cromosoma Cltcular ml!ocondrlal humano. y de maml'eros en 99neral. es transcrito por
una sola RNA.pot que est poe un SOlO polippliciO y que. para la "'telaOIOn. requiere la pte&eooa de un factOf' de
ltl'lnSCriJ)eiOn mtTFA. El mtONA se lranscribe a panir de 3 ll)9ilres de dO$ pafll lt'l hebra !)&SaCia (H 1 y H2) y
uno ltt (t), produCindose asl tres transcnlos primarios diferente& (dos de ellos y
COI'fespondient9$ a tOOO la k)ngdud <let CtOmOsoma. t6.5 kb}.los 3 promotores se EI"\ICuentran &lluados en la regin no
codlficante de control o O 160 y 378). AUI'l se desOOttoee si el inicio en H t y H2 depende de un mismo
promotor o de dos indepenc:!lontes ('princip{'ll" y se.eundttrio'), ui'IO de <les.conoCiCio.
A partir IU!Jil'r de iflleioci(>n de 13' hoef;lt& (Ht) se ttans.cribe et ONA que eodrflca los
rRNA 12$, tRNA y rRNA 16$; ta transcripan se debene Ira& este lbmo. mediante la de un f;l<';tOr de
(mTERF), Cuatldo la ttanscrlpc::IOO comienza en el segundo punto de inicio H2. localizado inmedalamente
tras el tRNA"-. el transcrito prim<.'ltiO (L2) ms all del punto de terminacin anterior. comP'e'tando el resto del
IDR$M!pt.In
de 111bl:bt.a
"'Zj
u\>ln"n.-,...,....,.,.,
...... .......... ,..,....... ...-...
,,.,._,..o ...... t .,.... ............. ........_ .. o''
" " b ..... b .,.,OQ dr lt'-'
JuniO<I l a <k 01'<11. )'110
bl\A
l)(ll:l
U-Tfl" 11
258 TRANSCRIPCIN
cromosoma. POt taniO, el lugar de lniclaCi(>(l oenne Qu&til)() de RNAs. ribosmiCO$ o mensajeros. deben sintetlzarse: 1a
stol&a::iOn del punto oe inicio ostb a su YOt POf &ilos hormtlf'ICI<S tiroidNs. Gracias a es&a doble unidad de
trtm:;cripcin la 1111teliza mud'la mayor cancidad de RNAs ribosmioos que del .-eslo de proouctos g6niCO$
(unas 60 veces ms). con ta Sluaei6tl aru'tiOga en el genoma conseguida grilCias a la abundancia
de la RNApoH especializada en transcribir rRHA, l)g 251 )
A l)fr1ir del promc>1or do l;t hebr<t ligera se sintetiza una soia moacula (que e9 una hebta pesada, H) que sOto
oocific:a 3 tRNAs y un !TitNA.
los 3 transcrito6 prlmanos wfren luego maduracion para dar ligar cada uno a varios rRNAs, lRNA.s y mRNA$
maduros (pg. 284); def vanscrilo H se Oflglna tambin el ANA oeb800t para la replie&eitl <M la hebra H.
19.6 INHIBIDORES DE LA TRANSCRIPCIN
EXIste uf\8 sene de oompuestos que inl'liben la transcripcin al actuar sobre la RNA poiiMerasa a travS de
distintos .necaniSI'I"'IS. Sol"' de deSde el punto de Wsta y PQr su <iplie<tein oomo antibitioos. por
n'IO$!n'lr SObrei3!S c6h,llas pn,x;ariQticas y evcari6ticas.
19.6.1 Antibiticos de ti po 1
Es.1e grupo eaui formado por los compuestos que se unen a la RNA pollmeJasa, de mocso
Perleneeen a este grupo:
Rit.lmid nas (prOOucidas POI Streptomyoe$ msd.iterrane:u:s) y sus derivados semi&lnttioos (oomo la rifamplcina}.
que se unen e'Spectflcemente a la 13, de la RNApol bacteriana, el In lOO de la ttansetlpcl6n. La
petmanencla de la enrlma inac:Mtada 90bre el promotor impide la unin de otras molculas oe RNApol 1\0
modific('ld3!5 Sin cmb&rgo, tiC) tienen ofoeto $Obre ltts C>C)Imer&:SO'l$ nuc:te.3rC$ oocttri(JiiCM, por lo qve &e vtiliUin
como agenle$ bactericida& fren:e divenoos tiDO$ de ink.tcciof'ICI<&. la RNApol mitooondrial tambin es inhibida.
aunque con menot potencia que la procaritica.
E$treptolidigina (prOducida pot SVeptomyces lydkus). que tambil'l se tija a la fl,, 1*0 inhibe 13!

L3 es un inhibicJor e-specil'ieo oe la etapa de elOngacin de &a slntesls efe RNA en eucarlotas y no en
procariotas. Su efecto inhibidor se ha emple-ado oomo -..n Ct$P9C*Q (liforenc:i<ldor ontre JH 1105 RNAol euc:;ari6tic:N
(pg. 251). ES!e agente tl6co es un mecanismo de deklnsa de la 5t1a venef'Oia par<'l nit3r su
La h lox6cacln no provoca sln40mas nnediatos. sino el deterioro de la funcin heptica en lo& dfao&
siguientes, debido a la taita de produccin de nueVO& mRNA.s para la sintesis oootinua de proteinas.
19.6.2 Antibiticos de tipo 11
En eMe caso, la tran&eripcin se inactiva indirectamente. PU8<& el anlitli64:ico &oe une at ONA impidiendo la uniOn do
1.8. potirnetesa o bien su 8\lanoe. Por ello, se Inhiben por Igual todas las ANApol. asl como las ONApol (es decir. la
rePicacin), ste es fl easo de la aetlnomlc:ina D. Sintetizada por vallas especies de Slteptomyoes, tonnada por dos
e>ont<'lp6Piid0$ Qclioos unidos a ul'l sistema anular plano oe lenollzona. t:ste se inlercala et1 la doble hlice del ONA.
entre dos Pt're& de b35ot:5 G;.C svcosiYos. OCfonnando el DNA. Al mismo tiempo, tas dos estrucl\.W'aS pentapeptldlcas
abt<lzan ola doble llCiicc. silu&ndose en et menot. ES!a alteraei6n lmpi(le e1 mcwimlento de la DNApola 10
taf9o 094 molde. la actinomicina O e& mvy tOica, pues impiQo ta do los 3biertOS, tliOqueMciO el
paso de c:ualqUlei llpo de pollmerasa. Al Inhibir la elongacin en clulas nlactas y en extractos Qllulares, es til
pata kflf!ntlftcar prCIOO$O'il oelulares que dependen de la slnte&l& de ANA
INHIBIOORES DE LA TRANSCA:IPCtN

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259
Otros compue$to.s mtercatantes son la a"idi na y $1.1$ derivadO$, Qvt la $intes.s de RNA oe una letm3
similar. y lo y sus derivados. que se emplean oomo qulmloterapeuiiCos en dt\'ersos bpos de canear, ya
que actan preferentemente sobre c:lul<l & con cu.,cimiento Por Ultimo, el bromuro de etld.lo, de uso comUn en el
laDOtalorlo para la tlncl6n de ONA en efft(;troforcm (pg 138), un agente .,_,en:at8tlfe {aunque 1'10 emple3CSO
como MlibiOtieo}, IO que justifica su toxicidad, que debe tenerse en cuema durante su rnat\lPUiaein
19.6.3 Antibiticos de tipo 11 1
dox<MTUbtclna o ndriamtetna
011
fiJ
O UU t
)
l l NI{
Los anlibitlco$ de tipo 111 son l<lmWn inhibidoros indirectos. Qvt "c:IUM on este C3$0 im()::ttldO <'C(i()n <!e l<t
DNA gl rasa procaritica. la enzima que inl!Oduce superenrollamientoo nega6YOs en el ONA (pg 152). Se comprueba
asi que son necesarios para la separaun de las t.ebr89 de ONA. lo que penn!ts la repkacl6n y la ttanscnpclon
lO$ (lfQ;iP<'IIO$ ef'l e:$te grupo son 13 cumemtici na. 1a novobioeina y e1 cido nal tdixico
..
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Tema 20
Control de la expresin gnica:
pretranscripcional y transcripcional
20.1 lntroduccJo gc.neral a la rtgulaeiM de la expres&tt .. - ... - ........... - ........... - ..................... 2$1
20.2 Control pcional .. , .. _ ,, ........................... ,_ ,,_,,, .. ,,_ ,,_,,, ....................... ,_ ,,, ............................................... 2&3
20.3 Regulacin gentica de la transcripc;in ........ _ ,_,_,,_,_, .. ,, ........................ ,_ .................................................. 264
20.3 1 ElomeniO$ Que actan encfsy transcomo reguladores de la transcripcin. .. .. 264
20.3 2 PromolOft$ de lOS gene-s de Clase 11-. ..... - .............................................. - ........ . .. 2M
20.3.2.1 Secuencias o elementos del promoi<W . -... --... - . . ........ 265
20.3.2.2 Secuenciesoelemen\Ospro-..nales ... ... .. 265
20.3.2.3 Secuencias oelemenlosci:stales , _.,., _.., __.., __ ,, _.., __.,. __,, 266
20.3-.3 Factores de transcrr.>c;i6n de Chl$0 11 , ,, ..... ,.,_ ... ,,_.., __.., _. _, __.., __.., __, - 266
20.3.3.1 FaC$0resclettan$Cripangenera!es ...... "" , 267
a) Ensamblaje oonsewtivo de bs factores {modelo 267
D) Modelo de la nOioenzlma_ ... _ .. _,,_, .. "' " ... -... -.......... -... - ... -... - ... 267
20.3.3.2 Factores de trans.cripctn proJOmale& 269
20.3.3.3 Faaoreg de transcnpciOn inctu.cibles ...... ..... ,,. .,. .. ... 269
20 3,3 4 de los taetores de IIM.Sc:t1pcln oon la pollmerasa.... 270
20 3 35 lniQ0Ci6n e a 1)*1ir Cle protnOlores .... 270
20 3 4 de la lr;)nscriO(in c:se genes de y 111 .. - ...... - ... - ... - ... _ ... - ...... - ... ... 271
20.4 Regu1acln .. , _, _ .. _ , ..... _ .. _ ,_, _ , _, .... _ .. _ , _, _ , _ , .. , _ .. , ........ _ , _,, .... _ .... , _ .. " 271
20.4.1 Metlacitl ONA y control de la exptesin ... _, _,,_ .. ,_ ... _ ... "' " ... -... - ... -........ . .. -... ... - 272
20 4 2 P.11r6n de metii3()fl Clurartte el <teSarroiO ... -... -....... _.,, _ ... _ .... ., _,,_,,_,_,,_... 272
20.4.3 MeblacinycnOE!'I' .... -... -... -...... -... -... -....... -... ...... -... -... -...... _.. .... ... .... .. . .. -...... 273
20.1 INTRODUCCIN GENERAL A LA REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA
U v.;in global del control de e)(presin 9$f'MC<l 95 especialmente difiQI e:n evct'riolil$ en general. y en
organ1smo$ on Por &jtmplo_ tc.xl<t:$ l<t$ hvmMM eontiol'tt'n ol mi$mo go;noma
(salvo mutaCIOnes somlicas). emten daras 6ferencaas frente a las oUa<s procaritica&. Es ca&t un mlsteno el hecho
de que ta<s de organismos complejos. procedentes 001 desarrollO de una misma oUa. (el cigoto) y conten'Eindo
un ONA ldnbCO. sean capaces de expresar funciones tan diferente& y \mica& en cada rgano o tejido parucular. Es18
enonne lleKiDili<SBCS et1 el control oe sus genes vie-1\e por los tipos ae grtH:ll
diloronciiJJ:
a) O.Sbr\tos tipos <Se clulas en especie y. de 6S-taJ, en rgano o teii<lo En humMO$, $0
unos 200 tipo$ cetuhlrC$, agrupCII(JQ$ en segUn su funCJ6n Hpocifica: epiteliales. contrctiles.
sanguinea&. del sistema nnunitario. sensonales, neuronales, etc
b) Variedad en eJ nmero de genes en cada e&pecie. En humanos. el tol81 de genes pareoe ser del etden de 75.000 a
100.000. aunque recientemente se dan dfras an msolsoordantes. entre 30.000 y 200.000
<:) Proporc:t6fl de gel\es expresados en e&da tipo celular. En humanos. una eerula SOlO eJCpreSJt. en eo'ldl'l momenlo un
1020% del total de g6f'les: es ceeir (aSUtnienGO SO.QOO.HX>.OOO genes). solo $e e"'";)n entr 500 y 2 000 gones
en cada clula.
d) lnftuena:a &Obte la expre&tbn de cada gen de los esta<ltOS del ceclo de dlonslon celular y del desanotto del Mrviduo
necesidades metablicas o de otro bpo. respuesta a agentes externos, etc..
262 CONTROL DE 1.A EXPRESIN Gf.HICA; PRETRANSCRIPCtONAl Y TAANSCRIPCtONAL
Oentto ele 9$195 posibilidades. es de destacar la vanaciOn de la genlca Clurame el pri)Ct$0 do
d!fetencaCIOO oolular, es decir, la a<lquisiCiOn de propiedades esp&efficas por parte 00 las ditvers.as do un
organismo, que tiene durante la embrlt>oene:si$. Ello tl,ece que exi$1/Jn Qell:et no responden a cambio
li$iolt\giQQ o pOr Ql oontr..nio, ftln sometiO& a "*1e oon1rol como Q)(l&eCUencla del desarrollo animal o
dtt 13 OIQM!Utein dG c61vl:t& oo tqjidos y d4:l! tejidO$ en orgni$ti'IO$ oompletO$,
La n\M'Jifesutein pmcipal cte et;'* .,, ta $1Cpro$!n g6nic;a " la en ceda celular de
proleinas en P'OPQ:iones diV91'Sa&. de$de muy elevadas en unos c.asos a mliY bafa1: en otros. D&do que &8!1 proteina$
condicionan las pro>ledades celulares 1arqulwct\.U celular, aCIIvtdades enzimatiCas,
ntetaC(Ic)nl))t'l el etc ), IOdO to deeif que es 1<'1 proporcin de genes implicados en la
do pum un<J <'"AAOt"*Wd<l 1tsroa o
r ...... lrl.,
f!t\"tiii!H C()j!Jii .. llll
Jl!lf ,.,.,_ ""-
CICUd);ICo' htib bun
lA exp.esion de los. genes de un Ofganlsmo superiOr puede set regufada a <tiStinlos niveles. Desde et punto de
Vl&la patolgtco. os. wnportarne re:saltaf que la a!tefilci6n O. cu<'IIQvior;, diJ 10$ J)MO& on la Ol1Jlf0$i6n 96nic<l
pueden causar enfermedades.
NIVELES DE REGlAACIN DE LA EXPRESIN GN>CA EN EUCARIOTAS
I)NA )
R."4A
trun>e:nw
pnmuno )
RNA
n13r.IIIRI
., .... ,
lHII'lA'>M'\
...........
fhO<twlnll'lll"
,_.II.'IA

.,..,...
S <.oould
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...
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)
A.:fol!!itoiMokll)"" .....,..."""',..,
l ... n6t18Ki6e 4<! la f'l.llll.ullf
'-'"''_," .. old ll''
f'""""''""' v..,_odo.J ik "'"-"' diO\4 '"'*""*'f"' l"o
Vclol(>r6ld d: tJ,...,,., .. , <Id R"<\l,..,o" "f"'-1
U ....
\ tkOfi.J-s cll' !W'I'<flliOCftll)
t.i.t!IUJKItto ..., .....
lf" tl_.,.liolod old JI 'lA " ' """'"
r..,. .... ,..,..t...
\ Mf1411k;o-
1
fm,...n<,.. (lno:od.l &Ir ,.,,..,., de
VclooOiANI ck
l ..... .. t;;;;.d(lfo 4t t. 1n ol..:o611
t ..... II'OI <k
,..mculnll'Mio IJ (JOO:Ia lit lnoodotxa;umro.

l'u-oelr onor
I ICIW\"j 0: tr-lllo:OJ>;iolfl
1 tlm.loi&
CONTROL PAETRANSCAJPCtONAl
263
El e$1Udio en prol\lndid<l<l de e:$10$ niveles de QOntrol <tebe Moetse et1 lr.lt&c)()$ En
lelltO slo trawemos de desglosar de forma paulatina lo esenCiaL cada uno de elos en &u eotrespondiente proceso de
expreson genu (temas 21. 23 y 24)
20.2 CONTROL PRETRANSCRIPCIONAL
EJ nJclo de la transer!pcn requiere que la maqulnana mo6ecular responsable (RNA po!imerasa y factOf'es de
1ran&eripci6n. pg 264) pueda ,a,coeder lisic.ment o le bNes de 1., flff)f1 <le ONA que se ha de uanseribit. E.IO
supone la desoon<lensaa6n previa del cromosoma durante la interfase del ciclO de diwsin oelul<lr (E)ilg 98). tn001-81\1c
mec:anhmos moleculares an no oonoclttos exaaamente.
La uatkSC'/ipein oo puede tener lugar sobre DNA en estados de condensaocion supenores a la fibra de 10 nm
{r0$:uio Cle nuC:IeOSomas, pag. 35). En ocaslone5. el ONA se puede 1ranscnb11 wando M encuentra bajo la forma de
con las hls.&onas {nucleosomas}. pero tarrOM puede ser necesario que se desensamblen para permitu
el acceso al ONA. En 98""''"" 1o11 del ONA * 13trMScripein o actividad ttanscripeiOn.al de 111 cromati n:a,
est relacionada estrecflamento c.on .. 9'34<> de c.oncsensaei6n (&)hg. 87) y puede valOrarse experimentalMente por la
sensibilidad a la acCibn de ONa&aS.
Se pueoe 001\Siderar que el acceso al ONA neoesario para la transcripon es una combnact6n de tres
moc.nismos
a) Posicin precisa de los nucleosom.a.s.. El reoonoeln'lief'lto de las secuenciss ptOn'IOtOf8S del ONA por lOS factores
de ltan9Cr'lpcl6n (pg. 264) puede tener lugar. al menos en alg\ln caso. graaas a una poSICin muy especfica de los
nvciC0$0t'l'laS Cle !Offl'la (1\le t8I&S secuE!f'lcias queden en la regln lntetr'KICieosmiea (ONA espaciador o Ntlk.er.
pg 86)0. si fortnM pMe nuoeleOSOO'I<'t Qv&Oen orienlaCitl$ $4Jpet'lic.e
(J{ii rc!llooe'o<k' llA Pb.!r -
lll ll(>;vce;;:la lmc.JI of,lo.IJn l'lht/0111 Cft

cjtmf!l.,. t l)ll un
pr.x..-.u. f"a<" dtiOI!!Knp:ionl
b) Reti.rada de lOS nuc1eosomas. Tanto el teconoeimle.nto de 1aa secuenCias ptomototas por lOS tac10tes ae
ltan$CflC!Ci6n oomo l.;l unin y 8\ranott de 18 RNAlx'lf pueden requerir 18 liber&On las Mtone:s o .;ll menos ul
oesplazatniento de los nucleosomas. para hacer el ONA aocestie. Se hM >rOieinas Cle
erectv<'l r esle de la croMatina-. gtaiM 3 _, hidrlisis do ATP.
AOP P,
e) Avar.ee cOMpatible con l,a presencla de nooleosomas. La IUinsct'lpCIOn pueoe tel'ter lugar E!f'l regl()tles oe DNA
con nucteosomas Integras: posiblemente, && A:NA pollrnetasa se desplaza a 10 largo de la nflta ese 10 Nn.
lransetlblendo una Meta gr&eias a un desensamblado parcial y revei'Sible de lO& I')OCieosoml'ls
fi 1A>II11J
Al .. RNApc,l. ti ,e
dcs."lt'l:lmb&a
qw _ ... dc'flllll'll b mi1;W ik lns
ok la ptrtk\Jb 112A Ii211).
Una \ <!'/. la N
lF.llboC'ritO \'Se' lrw'IIO.k UNA l><
fOt'lloU\ 11)'<' d nu<:lobOma.
REGULACIN GENE'rtCA DE LA TRANSCRIPCtN
265
ptopa RNApol en el reconocimiento de la secuencia del promotOt y se encargan de la de 18 Su
<iversidad Et5 aUn mayOr que la ese promo4ores.IO Que l)em'lite la gran llx:ibiliMCI eldstente en el conlrol de la expresin
de los gene:&. Los TF$ wdenominoan tombllo "f-Ktorn que <11<:1\.lan en o fc;tonts pue5 sus gene5 e&tan
en po$1CiOn a1eaaa y no relecionade oon aquella regl6n genca cuya e.xpreSIOn & eapaei0$0 ae unin 3 1(1
moi6CIM ONA. easi Siempre reC(l(IOCiei'IOO Cie.ta$ secuencio de e-:stb mediada porQut l<t
PJ$$enc:aa en la$ molculas de TF de motivo5 estrvctvrale5 de \lfl...;n al ONA.. oomo do<IO$ de z-'1<:. homeodomniO&. etc
(pag 60).
La especializacin de las RNApol eucatitlcas pata slo detemW\adOS gel\e!l (p&g. 251 )
<Setermnada por la regulacin de estos genes por secuencias promotoras y fae1ores de ltansetlpciOn <Jo.leremes. Antes
de describir 10$ pormeneteS del CC)(IItOf <M la transcripCII'I de lO$ de dase 11 eonvieo:r'oe reotll)ilar 13 terminoic>gia
empleada para 1M que Se <'istingi'O <'!Si cntrepromO'ores <.1!&13 c:l(l$C 1, de la Cl!'$0 11
y de la clase 111. Los factOtes de transcrip(;iOn respectivos se nombran oon las TF tipo de RNAPOI
t(l(l l<'t que pueden actuar (1, 11 o 111) y una letra que lOs ldentlflca (por ejemplo. TFIIA. TFIIB, TFIIO son 31ac:tores de
para la RNApol-11).
pollmerau
genes que
producto g9nic:o
promotor"
fil!<:tores de
ttanscrlbe transcripcin
(enr.lma)
(ONA)
!ANA o ptotelna) (ONA)
(protetnas)

declase f
rRNAs de 285. 185 :z: 5,8S
de clase 1" TF!
RNApo!ll
ctase u protelnas y snRNAs de a.ase 11' TFII
RNApoiIU de clase ur tRNAs. rRNA-5S y RNAs pequenos de C185e n TFIU
20.3.2 Promotores de los genes de clase 11
La regulacin de tos 9900:5 de cla&e 11 (transcri!Os por la ANApolll) es del mXJmO Inters por ser responsable de
la sfnlesas de los mRNA y. por tanto, de la sintesls de todas las prot.elnas. Sus promotofes se localizan tfplcamente en
diteceiOn S' (ton"iettte an'()a) del eriget'l de transcripCin y MUe<!V&n uM M8yOI variacin de s:ucncia que IQ:s
promotores para RN.Apol-1 y 111.
Los promotores en genetal. pero de forma caracterislica los de ase 11. se pueden dl'ldr en 3 tipos. oe acuerdo
con su aoein y su ubieael6n. Su funcin se comprender mejor al estudiar lOS faeiOres Cle (\le se unen a
e nos
20.3.2.1 Secuencias o elementos basales del promotor
El promotcw btlt.al sect.enci3s Que dfJiimm el punto de NNCio de la tmnscnpcln y son
NnPfflf(;indiQH.$ Pilrtl ql.'9 4sttt oo.rruenc. E$ una regin sulda en POSieiOn adyacente al ortgen de ltan&etipciOn.
oorrwnente coniente arriba hasta la posian -30. Dentro de esta reg161\ puede distinguirse como m6 Mbit1.1011 la
secuencia TATA, caja TATA o caja de Hog.ness. sll1.1ada Uplcamente atre<le<IOI' de'"' posiciones -15 a 25 (no debe
conruMirse oon la taja TATA de proc::arloW o caja de Pril)now. oon secvonci<1 consen&O TATAAT y &lluada en -10t.
011<' $OC\14t0Cia fre<:oent est;asecuenc iniciadora lnr. situada sobre el ptopb origen, entre 3 y 5
promotor b.'lsal
En ousionos. ol promolor de tm gen se califiCa. de acuerdo con las 9ecuef)Cias flat:ales que proscnta. como de
llj)() TATAII'Ir. TATAfnr-. TATA-tnr o TATA- Inr-
20.3.2.2 Secuencias o elementos proximales
Genera!Met'lte. el l)r'OmOIOr no es suficiente por si mismo para pt'CWOC8t el !nido de la tr31'1$Ctii)OOn. sino que
se reQuiere la il'ltet\'eneitl ele otra regin conocida como promocor )fOJ(Imal. esta oereano al promotor
basal. pero mas alejaCio <:orrienle arriba del ongen. oomOnmente entre las pos;ciones 30 y 200. POr tanto. esta rogin
266
CONTROL DE LA EXPRESIN G:NICA: PRETRANSCRIPCIONAL Y TRANSCRI.PCIONAL
de ONA suele $91 de m&yor u.molio ta * promQior basal . Los proitl"'ates no la posieiM de
Inicio, '!o que la frecuMCiit con fa <N/19 .se eJ rrn*<H lit fnM$criiJt;in. Ello os posible e qve
sobre ellOs se \.W'Ielft daver&OS factores de transcripcin que faYOrecen la interaccin de la RNApol-11 con el ONA en el
punto de inicio y su .CIJvidad Aunque el\ general las secuencias son mas valladas que las basales. &as dos
ms caracterisbcas. son 13 o socuenc:it'l CAAT, 60 y -$0, y la caja GC, Qull) en eoj)i3$ mUUii)IO$ y
oon cualquier orientacin a ambo$ lados de la caja CM T
scc ncm .. .ten..:1a
(o( ( .'\:\1
1-120 l -90
20.3.2.3 Secuencias o elementos distales
t<t epro$10on nlgunos genes sufre una regulaelon aun ms compleja. que depefld& de &eeuencia& sitvatdcts a
gran del p.uno de inicio, ineluso de varios miles de pb, eotrienle 8ITba o corriente abajo. Esto ocurre
especiaiiTJ91\te para los gones i nducib!fl. aqullOs que no se expresan continuamente en la clula. sino cuya
xprotit sufre una regulacin amph'a y pr&Gisa como r&5puesla a di11'61'$.9$ (POI' ejemplO, las
et!eroides y tiroideas). no se suelen contemplar COme) tales. o,..s .socvenc:i*S promo.oras det:lef'l tamtlif'l
oonsiderarse parte del gen, atendiendo M conc:epco funcional de ste (pg 244), En s-e 1M l!t\m.& secuenci as
promotoras por enoontr.trw del otlgen, o tarTlblen, de acuetdo con su funcin. e-lementos
espeelficos de mOdul O$ do control o e tomentos de respuesta.
Estas secuencias prornoCoras son rroy variacJas: y especif!C<'IS para cada gen Otta pattlculatfdad es que actilan
tanto activando la transcriPQ6n c:omo re.Qucindola. De acuerdo con ellO, se c:lasifican en dos tipos:
aaivack>res, intto$ibdoros. amplificadores o estlmutadOteS fltlhancers}. Pueden aumenlal
rru::ho la veloac&ad de inicio de la trnnsc:ripcin (y, pot" oottSigulente, 18 del proceso completo) conseguida a partir
de promotores ba9ates y proxlrnaleuitu<Kbs en la misma mol6c:uta de ONA
snenci.ctores o Ti'*' el ofr.cto opuesto, generalmt!t\le porque toe laetores de
tr3n$<:tipc:it'l se unen a ellOs c:ompjten con la accin de lo$ espeeific:OS de los promotores poterw:ladOteS y
proxim.ale$
0
Los
distaks pUt:dcn
del
promotor por
mili!:' di." pb
v
..
dispcl"o.I)S. p...-ro pr.mO$ ni orien,
la inici: se
aprox.. cncn: SO y 200

d.: ll('cucnda muy
rrxin'h)i al origen. determinan el
punto d.: inic.io; e
lus12 30 o 40.

Ekntl'"")'l d15J;tlr5 <ft01rada.;loro y sjkocydoo:s1
prximos 0010: si p::ro II.IC-jlld(ltl dd (ln$Cn: reaula.r1
12 dioc.: del inici de latral'lSCt'ipcin.
se distribu)'CD \'TI un mati?('D d.: unol! 100 pb
20.3.3 Factores de transcripcin de clase 11
La iMeracclona con gran variedad 00 t;teto1es de lfanseripcl6n (TFU) dependierxto <191 gen.
habitu.-rmente de forma s;muttnea con !Al nmero de ellos. E.stos tactores se pueden cla<sificar en
generales. proxi""*" e indueible$, de acuerdo oon su unin a unoe k>$ 3 tii)O$ oe tecueoclas o eleomentos promotOfOS
recin e&eudiados So cstudittr$n a oont!nuac:iOft con cierno detalle los que actan sobre el PfO<IIOt TATA. mept
COOOdOOS
REGULACION GENTICA DE LA l RANSCRIPCtN
267
20.3.3.1 Factores de transcripcin generales
nombn:t k.lo$ TFs que AK:Onocen IOG elementos basales de un promolor. Son muy
conservadas evoliJiivamente. que promueo.oen la lormaCIOO alrededor del punto de IniCio de un complejo '*"rmolecutar.
Wt et t)t()ti'IOI.Ot WMI. 10$ proPQS lF 94)ntr&l$$ y 1<1 RNApol+ll Se puede decir que al reoonocer el promotot
basal ach.ian de mediadores para que se fiJe la potimerasa. de-finiendo asl el punto de inic;.o de la y
actrvando a la enzima para que oomience a sintedzar el: RNA.
Se conocen las funciones de algunos de los factores de ttanscr1pcl0n generales asoci:tdos "lt'l RNAPOIII
TFltO. $1 ms significativo de lodos ellos, es el: nteo con especdiCIOBCS pot u11a secuenci3 dO DN.A. lil de
TATA. A pesar de eJIO, parece actuar tamblen sobre que no c:a,;a TATA. Este factor determina
lt'l RNAJ)OIII t'ctOc a Vl\;l cioi'Ul dist<lneta del promotor. dei'Witendo eJ punto oe lnleiG de la ttanscripci6t'l
(nuelelido 1). Tiene un grM mOiecvtar cercana a 800 k.Oa). al estar formado por dos tipos de
QOmponontc:;
Una molcula de T&P. o "proteJna de unin a TATA. (rATA 8Jtt<NI'I{J Ptotein). que conl'iefe a TFIIO te
eapacidacf de recono00119nto de la secuencia pomotOf'a. Su uniOn a Mta es e-.1 priMe-/ paso en ltl fOtmt'ICI6n
deJ complejo de Inicio. oon la pamcutarldad de unirse 8f surco Me-.r\Of Clet ONA (CI diferenc:ial de ta mayotia de
protoinM. Qve se \Kief\ al ONAen el surco mayor) y provoca la Rexion de la mo6ocula de ONA..
Varias motcutasde TAfs o "factotes asociados a TBP" (T8P-assoclate<t fact()($), chfeten1C$ ontr& si
pueden variar para le unin a promo(ores C11ferentes. Son subuniCisCies Cle 30 a 250 k03 QuO lorm(ln Pttrte
oeHFIID en oomero <)e 9 a 12. tipicamen.111.
TFIIH es partiCUlarmente Importante por su dOble activlc:Sad eruimatiea. oomo heliei'$<'1 y como quinasa.
resiOentes en distintas sul)unidl)des U hetic;lsa esto\ .-nplicad<l on de las hebras del ONA en el sitto
do inicio. necesaria para el aoceso de la polimerasa a fas bases. rr.entras que como quin.asa 10$10t\la e1 dOnw.c>
C.termI'ISI de la subunldacl mayot de la ANApot-11 (CTO, ptog. 252), en 6s!a un cambio
ei comienzo de su desplazamiento a k> largo oet ONA. la separacion de algunos TF$ y en <linitiv'it. la
llansiei6n enlre et iniCio y l<t etongt'e-On de 1<'1 tr<mscnx;in. Este factor de lranscripCin es tambin singular pot
intef\tenir en 1<t reP&ri!lcin del ONA por esasin de nuclebd06 (pg. 359).
P.ara la fonnoon det compleJO de inicro se han propuesiO dos mecanismos. cuyo resultado fin,.l es et mismo
a) Ensamblaje consecutivo de los fact0f9s generales (modelo
SegUn esu. hii)te&l&. 10& TFs y la ANApol-ll se van asocianao a la reg.on t)tOf'l'IOtON'I en un orden uno tras
otro (pig. 268); se oon&ldeta que cada 'actor va establecietldO un complejO oon lit adecuada para que se una
et $igc.Jiente fQrmnoOn delcorrdeiode intciaan corr.enza ooo la unin de TFIID al DNA en la .eeuenoo TATA y .a
oontinuttcr6n. so vcm a:sociando tos factores TFtiA y TFIIB, que permo.ten la unin de 1a poli"'*'M<' junto <:On el faaor
TFIIF, y 110 mcorporan TFIIE y TFIIH:
b) Modelo de la holoenzima
En C:$t;) t...x>tc&is attemativa. tambin apoyada por estudios In !litro. la RNApoMt se a$0Cit'1 p1evramente a vano$
factofes de transcripCIOn. formando una enzwna actn.oa u holoMzim:r quo luego 11o9 une al ONA. en la secuencia
prom04ola defma polla unin del TF 1 1 D.
EJ re$UIIado es el mismo comi)ICjO inici..On que en el modelo esc:a!Of'lado. que )Ormito ti comienzo de la
transcrlpei6n. y la polimer3osa abandonaria y avanza1ta IgUal que se na it'I(:Sie;XJo on nqoel modelo.
REGULACIN GENICA DE LA TRANSCRIPCIN 269
20.3.3.2 Factores de transcripcin proximales
Tambin llamados faaore& de unin oomente arriba, &On protelna& que reconocen especfficamente los elementos
prolOITiales del proi'I'IOtor, oontribuyendo a aumen1ar la ellciencla de formacin del oomplejo de -.:lo o favoreciendo su
activicSM sobre la pol!metasa. Caca ptOfTIOIOf en particular requiere un COt'ljunto preciso de estos lactOteos para su
elq)Ie&in plena.
Como et faaor de ITan&eripcin CTF (o t-E1 ) intera.cCJOOa con la c;aja CAA T. siendo aparentemente el
mximo responsable de la ef.lcienoo del promotor. mieniTas que el factor de transcripcin SP1 se une alas cajas GC.
Los promotores que slo oonlienen elementos reconocidos por TF s generales y proximales oonlrolan los llamados
t:OriStituliVos, aqutlos que se de una fOtma eonst.ante, a la misma velockS&d 1000 momento de
S. &StM1e oen.Mmente que ftle oon<::eplo es sinflimo de o (houseA:eeping
genes), aqullos que &e expresan en todas las clulas del organismo; el nombre se debe a que codifican lOs ptoduclos
que aseguran las funciones indispensables para la vida de la clula. Ambos conceptos Incluyen t.anto genes que se
transetlben oon porque sus ptodl.lctos gnieOs se pt'edsan en IOtma acundante, como genes que se
ttansetlbetl a baja veiOcklaCI porque sus productos se neoe:silan en pequel'la canticS&4, pero de form;l conlinua
en ambOs cosos
expresin rcguladll bssal
(gel)($ indi)Cibll:ll) (ge:ne.s ci'IUJtutl\'S y
-....- + -...- + --- + ---
regin dd b"Cn ..____
1 ol
1 1 1
20.3.3.3 Factores de transcripcin inducibles
tct ten:;er grupo de f<tctore; de transcripcin lo conscituyen aqullos que reconocen los etemenlos del
ptQmOtOf Alli de forma similar 01 10$ f...ctOte:& proximales, es decir, fat*lando ta formacion y actlviC&CI del
complejo de de la transcripcin o, por el contrario, d!tlcu!tndOias, regutan, por tanto. la lfai'ISeriPCi6n t;)nlo de
forma posittva oomo negativa {08 acuerdo oon sus promotores. sean potenCiadateS o l)(lg 266).
A difetencia de los generales y proximales. estos factOtes oe transet1pcl0n no esta.n prese.ntes en la ottAl de
forma contn.aa, sino que se sintetizan o se aclivan en momentos eS()f!(;lflOOS o et'l tejidos P<tr1icut;nes Como
ta expreSin oe los genes cuya ltatlseripciOn cor'rolan eslil en ti(lmpo y espacio, es
decir, se activamente en ocasiones y no 10 naoen et1 abSOluto l'! OIT3S; oon fr.cuMcial. en mvchos tiPO&
gen concreto no $t: elfeSa nunca. Se lOs llama por do genes inducibles {poi oonlraposecin a 109 genes
OOAJtltvWos). o d9 xpr$$16n
270 CONTROL DE LA EXPRESIN GENtCA: PRETRANSCRIPCIONAL Y TRANSCRIPC:IONAL
Como efemplo caracterlstlco se pueden ctlar loa receptes nudeates para hofTI'IOI't3S asteroides o tlrotdeas. La
umn de In hOffllQ(l<l lt' IXlnJOrl'l13ei0n <fol qvc ((lm() l<'ctOr do tfelnS(ripei6n 00tn(lt<\f su
afinidad por ciertos promocores dist.Ms, denomin<Jd$ el emntos de rnpuesta ;t hormonas (HRE). Como
se acttva o se blOquea, segun los casos. la lnlnscrfpd6n de genes esp&cltk:os, los ptOdiiC&OS Pf"''6COS de
C$10$ gene$ J>*f!!il<' t.:Ua 61 mt.e('lnismo de respuesta aJa hOrmona
20.3.3.4 Interaccin de los factores de transcripcin con la pollmerasa
Cabe pregunt.arM cmo lo& M t.WlCIIlet promoloeftlcjnnoll <JIIoriQon de puQdon pariiCIJ.)af
en el oompleje>de iniCio (mecanismos de regt.Cacln a dlstanae). Pata se debe considerar la .,x!bllldad de la
ca&AII de DNA, que p&tm1ll1 la aproJUMadOn fl.Sita de lOs tres tipos de seeuendas promotoras a pesar de su
la *IX!ncia lineal de DNA
FIU."t(lt(';j; lr.lt&'tlpo.i
indudblrs. unido5 o
ckuu.tto,. d.stuks., Jc
tll)II.\1111CIC'm
s
O. t0m13 lO$ 13CIOre$ de lt'41n$CI'\pei6n unldO!I a las reglones basal, proximales y t!itale9 pueden oonlactar
entre $1 y eoo la RNApolll, por lo que partk:pan a& unisooo en el oootrol del W'IICIO ttan9Ctlpc.6ft.
AJgunoG TI=$ no intoriiQCionon con la polimerasa, sino QUt hacen emre ()(tos lFs. Se
han lden!Jficado PtOielnas o OQmplojos dCJ JWO'qino$ qut: Q)Operan oon k:$ fACIO(e5 adlvadOfeS, oooeet.Mdofos COf) la
maqujn:ana basal paret lit P()f 0$1tt f<'ltOn. oonoeen eotno o cofacc<>res
entre ellos se incluyen tos TAFs (pg. 267). qu. we<:on d$EimpeMr un O. mediOO<ltet en 18
inlef..c;d6n onlre b5 t;,ct()fes gef'!er:&les por un lado y los faCiores prox!ma1es y d!Slales por 0110.
20.3.3.5 Iniciacin de la transcripcin a partir de diferentes promotores
La inic:tacin de li) tr;;.nl;r;ux;in en promotOre!'l no bailados excluSiYamE!ffle en la ceje TATA (Pg.. 265) tiene lugar
oon CMaeteristlcas. conoc:di!$, 6rlocntes a lo1S estudiadas .
En los promotote:s basados en secuencia lnr $in <:ttia l'ATA (I"ATJWn r+), la rormaciOn dei de
OCiac66n uene lugar cuando &e unen ar1 elomen1o lnr de transeripc:in .;mP, p101einas de unin
a IN). Enlre stos se eDCuenltan TAF150, VY1 y t propi<'l POr Jo dertlil$, 61 prOOMO y tO!I
dt unin de f&eiOteS de transcnpcl6n para el inido son smilares a los promolores TATA+ lrv- Y<l
e$tudhdos..
En lOs que poseen ambas entran en fU890 tanto la TBP como las IBP. dando
tormaci6n do oomplf:!Jo$ '''rll)' es!ables.
E.i$ICJn lncltJ$() PJmQIO!$ qu& no lienen ninguna de 1M dos seeu&.nelas {TATA-Int- ), en ellOs no se &.abe cmo
tiene lugar el inioo de IC'IIJ();I)$CriX:in
REGULACIOH
271
20.3..4 Regulacin de la transcripcin de genes de clases 1 y 111
Como ya se ha !nd!cacto.las promotoras y el oof'l.lunlo de lae4ores de 1ranscrlpei0n empleados por eaoa
una de las RNApolimerasas eucariticas son diferentes (pg. 265). La diversidad de promoiOtes y TFs para el inicio por
RNApoll y 111 es muy inferi01 a la oorrespondienle a la RNApolll. Eslo puede rellejar Wnplemente el metW:lt nUmet<> de
Que $()n tn:mscrilO$ oor dos enzima$: lo RNA.tl<lf.l sinlotiUJ un solO transcn4o primano {el precursor
grondo de ANA ribo$6mioo). mientrM Quo la RNAI)Ol.lll lrl.'n$<;ribe IJI'IO$ POCOS 98fle& (el pt&1'ANA SS, IOf> cerca oe 410
IRNAs y algunO$ RNA P!Uei\0$. pg 251), Ello contrasta oon las deoenas de miles ele genes pro4eico6 de cuya
transcnpcin es responsable la RNApoJ-11, por b que necesita una maqUI'narla MM cof'l'C)Ieja para su regulaCiOI\
individual. como se acaba de ea.udiar.
los promotores de genes de la clase 1 (para RNApof-1} se kX:allzan, al igual que la clase 11 estudiados hast3
en direoein s (eorrleme anib3) del !)untO de inicio.
pr(lniOIQt b!lsal.dt Ha 20:
, m wcutn(ill TAr A
UBF

p..,...,.,.. prom mal . tk ll 1(17
( l A: 1: .
C\"G oti!Nos:.l .ntbc!t "'"' '! C2
I)U ltiiii iO:n p.;oc'oll lJlW
, .,.,.,MlNimrihrtfC}<I t<Vt..: 11* al.u

r ... ,l Li
) o:liCXICI I
1)U8f :urnc- al (l!tn fiiA!II ,
(J('ko:t/V: }Qr1(>f"). (omuodo pcor 'r6 1'
d mo.mo quo; "-'"m n'IID.
ltqui 1!1) J'f('I"!Oo.lt(JI .
o;&Jil (o<r- r A
o.Jo: kt o.kt ITIIDt
Jt:)LI h:ocot Q1A' :>< - II M<Ii.,l'""' )
o;.onnt'll('\' b
Entre tos genes transcri!OS por la RNApo!-111 se et'IC:uenttan el de rRNA SS. Ios Cle tRNA$ y el <le lO$ ANA$
nucleares pecuel'los que in4eMenen en la eliminacin de inlrones (&nRNAU6: pg. 281): todos ellos tieoeo promotores
y TFs di'erentes. l06 promolores de rANA 5S y tRNA apareoen en dWecctOO 3' del inioo abajo), $itv;)nc):)$(1
dentro de la regin estructural Cef gen: por ello se llamM regiones i ntetnu de c:onttol (ICR) L3 PO:sici6n e i0en11dad
de la<& prom040rt':s y b$ oorre:;pendientes TFs son diferentet para los genes de rRNA SS. tRNAs y snRNAs;
muC$1r3 $IO c:omo ejemi)IO el primero
--o@

1) u ra.:....-.r ,,_nr-.:,...,. .,
r Mtlna dl-dll< .lo: ?u!\', ,;e 1.1::<
pr<>l'llo)(;.'J(il,;.
!) TfiiiA m...-:.1 n mc.
J) TfiUC :tinte llb.:l<or ' rt"HI R,
fo.lrtG:IOJOpctl tni$1TU) IJII<' l\lffill
'11"110) .. ' "'"'''".:a.:o: cl
bay Qji1
TAF'l (dlfo:lt'Dir.s de 11)10 de TntO) !'>l. l l
4) Tfln(' ..... y,..;.. b puli..-.,. ) .asl
o.'OIII>oCIU1ll:l tr"""'"I'('I'
Cabe resallar que en la iniaacl6n por las 3 RNA pollf"l'loOO"Isas il'ltCMetlC un f(I(;IOf de tran$<;ripc:tn de varias
subunidactes (SL1. TFIIO y TFIIIB. una de tasc:ua1es es la prote.ina de ..,.,.on TATA, TBP. Las otras subunida<Jes son
T AFs especlloos pata cada tipo de )rOrno40r. Mientras Que en lOs ge.nes de tipo 11 TBP es el factor Inicial que reconoce
la caja TATA (pag. 267). esta n0 eJCistc en tos otros casos (genes de tipo 1 y 111). En enos, TBP no se
diRJc:tamente al ONA reconociendo la secuencia promotora. sino que requie(e otros r-..c:tonn de transcnpcl6n para
a$0clarse. Parece qJe TBP desempel'la una funCI6n comn a los 3 tipos oe prom040ie$ la interacc:in oon la pollmerasa
respectiva para Situarla en el pun1o de inicio.
20.4 REGULACIN EPIGENTICA
Este seguooo tipo oe regul&ci6n <fe lo expresi6n o{tnica, Que oootribuye a expltcar la diver9i0ad l'l'IOtfOiglco y
funcional <Se clulas oon un mi$mo gcnoma, depende del llamado componente eplgef\.tico ce ta eslf\JC:Iurtl (1(11 ONA.
es <S&dr. no consiStente ecn $4.1 :sec:t.l8flc:ia. Concretamen1e. se ejerce a llaves la rne(itaci M espec;ifi(".il do algunas
ba&e:s del ONA. AunQue;., efecto reguladOI. se ooocx:e el ta metlaein del ONA propio en &as bac:tenas. oomo
prolecCIOn frente a las enliinas oe rettrio:;i6n de lit mi$rn;a o6tuta (pg. 200) Corresponde ahOra esll.ldiaf el do lo'l
metilaCI6n del DNA en oiU'*$ de vertebrados. para la de sus genes.
272 CONTROL DE LA EXPRESIN GI!NICA: PRETRANSCRIPCIONAL Y TRANSCRJPCIONAl
20.4.1 Metllacln del DNA y control de la expresin
En el ONA de vertebrados una de los r.sidoos <: (en huM3nQ$, el 3%) se tne'lllados,
prindpalment.e et1 posicin 5. Esta metiacln aparece casi exdu&NamEM'11e 60bf9 la &eWencla: <inucleotidica CG. Qoo
adems es especialmenlt reglones promotoras de los genes, dando lugar a los denonwtados lslote.s
CpG. Los ge11es Que se transcbefl en teji(,SO$ poseen i$10ieS CpG sin metdat (o IStot&S
hpomtHilac/os). mlerrtras Que en \o&1ojidos dondf) ol9tft no so st t'!SIM meliadOS. Por tanto, la meiA&ciOn de la
DIOsM!a un papel en la fegutacin de ta e)( presin Q6nic&
La detenCi6n de la transcripciOo de un gen como consecuoncia de ta d 9l\lsS metilO o.n l<'t de
ONA se puede ellpkar mediante dos n-..cttnl&mos, no ttxduycntos:
\' "'''
b '""' itlutn CpG nu
"tiln mt'li'laltM.I fllMt'flpccOn
lllida m flltw'OC'l de tus
I:.Cki'I'U de c111nKrlpc16n a,lecw.in
la di bk ..
pmn!OOitM lmp..le 1 un:!lm dt
f...:corn dt uunu:npucm. d
;en no 'l' c.rnn,;cnliC'
t. nwtiWcll6n o:n 1 pr.,vmJdlld
dd (lflllt:ll 11< (1\111t'otlrrl'(:!f>n. ro.
M.'llHII)(:Id& 111'1 (C:;.JI'roh
MI:CPI .,_.
III I)NA impid.K'.Ildu 1
111111Ktixl(on (po.llf Qnnplg,
b
puii!Mf1lW (o IJ!J!pollll'fldo b
\IRIO. dt kJC ok
ttanwr!.,cl(.n l
20.4.2 Patrn de metilaein durante el desarrollo
Como de es1a tegtAacin por mediacin. c.a<Ja, leiido prtsenta un earacterlslloo de meli&cin
del ONA en sos clulas opigen&eO). t!ste se c:of\Sigue y conserva durante el desarrollo embrionario,
mediante tres procesos sucesivO& d di$tribur)t) de lOs grupos mecilo:
ONA CllD p!llfn * JI!C:ltlfiCII':cl de: kot. t*)l'tl>
-o o
c;c::J
Cl r::J.-C:I
d;::k-

DN,.\ con pamln d<' pn.,.i.:o
Ui'JMC"" Cl
j l('d)dOO RIIIJitfllmknla 1
........
;c7
Cl o=

l:tl una ril$ muy fllttOl de' t.
I:Wl'ldo 111) notslllMln difcrt:neiaOO:s. $C'
d imclllil ('(Hf.,kt3.fll(.>olle del I)NA d p:cttn de
mt:tilaciii brtrtdado de PnJi'.'"'W,:
c:on l:c lilrmxi6n lk b
1ipos telulnreJ (que $e Q!SII!lu:m en llrjidw..,
pm ejemplo c.on un cmbnn.
de 8 W' AII>NA un
pultm e!;p('dr.oo dt O'l.!'Nflio t11
&i tu)bf u., jXTO dlf(fJit en cadn qulo
/ a..1.- ronda ck rqlltoo:a.:(n. ""
rw:lmmlc: llli de- filA d
t':'lqumm dtl pt(:'Jnl!O cr1 111$ hdns
rt'(lj;O:IUIIXl!S. {!\.Ole lk 0e l':W
fottfll. (l:tlf'I) se en m
hP.. de Pll tipo
REGULACIN EPIGEN'TICA
273
De los Pf'OCEI&OS de metilacin se encarga una ONA meti ttransfentsa (o metilasa) , aunque an no se sabe oon
certeza si la meliacin de novo y la de mantenimiento dependen de una rrusma enzJma o de dos diferentes. Se ha
podido aislar esta enZMna oe I'I'MJIChO& or9Qnismo&, indt.ryendo 10$ humanos, e inCluso &e han donado sus genes. ACAa
similarmente a las metlasas cue t()tl'nan parte de lOS $zSletn3s <Se metl3<:i6nrestrioei6n en proe&.rioi<'IS (p;)g, 200} y de
do mRNA on oucoariotas (pg 278), emP'etlndo como coenzima donador de gl\lpos
metilo (l)g 22} y. en eS!e ton fnpcQficidad PQf citidina adyaoente a
( 11 -' ;H
La reaccin opuesta, responsflble el prooetO de dt$:mctilacin global . la cala!iza una desmelilasa, que reconoce
las $0Cllet!Cit'IS mctiiOOtts "'CpG elimnaodo el grupo metilo de ta tosina. Esta enZima se na podidO I)Wificetr <1 partir de
ctul<'s tvmor.-165, en las que es especialmente abundante.
20.4.3 Metilacin y cncer
Estos prooesos de metioclon4esmetii&CIOn 0e1 DNA se pOdi(:So inve:stisJw gracias a la observaciOn en oe-uas
cancero&as de alteraciones en la rne-tllaCIOO del DNA. posiblcrncnto responsables de la modificacin en el l)f'ogtatl'la <Se
expresin gl!niea earttc:leri Stiet'l del pr008$0 l\lmoral, aunque no su causa nlea. El\ esas ctuiM ONA Mt
gtOba!meote hipomctil01do. pero al mismo bempo aAgunos genes e91tu'l hipet"metilldos (concretamente. los genes
lumot"Ct$, 30} Esta aparente oontradlocln es el reS\.flacto, por mec:anismos complejos, de una
eleva& el!J)t'esiOn de ambt'$ enim;li$, la me:tilaw y la desmetiasa. La h!pom&liladOtl ptOYOCNit\ eKpro&in de genes
que 1\M)i!u&lm.etlte esllin silenc:iadc>$ (inc:l!,liOo el de la desmelil&aa). condueief'ldo j)<)Sibtemente ., de los
cteS4jus,te:s eausM\.0$ del cnoer. mientras que la hiperme1llac0n de tos S>JOC"O$Qros de tumores bloquea su
expf9Sin, elif'IW'Indose su funcin natural. el lreno de lt'l' PfQiifcracin celular. y oonduclendo a la
anrquica de las clUlas que genera el tumor 30}.
Tema 21
Maduracin del RNA o
procesamiento postranscripcional
21,1 tntroducciOn - -- ................... ,.,_,,,,, . - ............ 275
21 1 1 Mab'Zaclones a conoep40 de gen ........................................................ _,_, .... _,_,_,_ . . 276
21.2 Ca.rac-tc.risticou, difOoronc.ialo& de 1011 maduracin ........................................... - ................ -....................... 276
21.3 ProeCS.3mionto del RNA mensajero ................ _ ............ ............................................................................... 277
21.3.1 Modi!leaciOn del e.:tremo 5' ....... ....... .. .......... .............. .............. ................... 211
21.3.1 .1 FormadOt'l de la O 5' ,.,_,,. ,.,_,_,_,, ,_,_,_,_,_,_,,,. ...... ............ 278
21.3. 1.2 MellladOn oe la capenaa s ....... ,.,. _,_,_,,,.,. _,_,_, _,_, . . . . . .. ........ 278
21.3.2 Modificacin del extremo 3' ......................................... .............. ,, _,_,_,, .,., . --- 279
21 .3.2. 1 Formacin del extremo 3' y su relaCin con el final Clt 1<11 lr(ln$Cripc::in , ... .......... 279
21.3.2.2 Polladenllacln del eXlremo 3' . ......... , .. ,_,_,_,, _,_,_,_, ................... ,_, 280
21.3 3 Eliminacin de inttone6 y empalme de axones..... .. .. ...... 280
21 3.3. 1 Magf'duddelosinltOt'le& ........................................... - - - - - - 280
21 .3.3.2 Seeoef'leia:S que delirniton el fl1r6n , ,_,_,_ , _,_,_,_,_ .............................. ,_,_,_,,.,,,. _,_,_,_ 260
21 3.3.3 FOIITI&eln de cuerpos o complejos de emparrne , _, _, , , ... 290
21 334 Moec.ant&rnodelareaocln ....................................................... . , ., _, . , _, _ 281
21 3 3.5 01.10$ tiPO$ de n roneos ................................................................ _,_,_,_, 282
21.4 PrOCHaMiento de los RNAs ribosOmico y do tr;ansforen-cla ............................................. - .................... _, 2*2
21.5 Madurac:&On det RH:A m.itocondr i al ................................. ....... ..................................................................... 284
21.6 Regulac:&6n posttansc:ripc:ioml y pretn,duccJon;al de 1<1 expr$$.ln Qnlc:a ................................................ 284
21.6. 1 Regu180t'l de 13 t'l'\&dUr.'ICJOn <Sol RAA ... ,_,_,_ .,_, ,,, .. , _, _,,.,_, _, _,,.,_, _, _,,,,,_, _, _, _ , _, _, _.. 285
21.6.2 Vida media y degradacin del mRNA ......... .... , , , , .. ................................... - . 286
21.1 INTRODUCCIN
La ttaMCripc:i6n del ONA os proceso qJe no d1ftere. en esencia, erttre prl)(;<lriotols y eucanotas: las RNA.
polmerasas se unen a promoi.Or.ls especifiCa&, y se realiZa ta slntesis en dircociOn 5' - 3' a lo laroo del gen.
$In embargo. surgen Importantes dl!erendas en1rc (lrnbo$ tJpos de clula& cuando se consiCier la fQon3Cin del RNA

Se ll;)mt'l trans.crito pr imario o prec-ursor del RNA 1('1 f1"1Q16.cula de RNA que resulta directamente c1e1 l)fott$0
de Todos. los transcnlos primarios tienen 13 misfn3 socuenoa que el fragmemo correspondiente de
hebra (no trai'I !IC'Iila) <f<: ONA, s<tlvo por la de U en lugar oe T. Eis.ten lrttnsc:n,os pnmarlos para 10s
tl'9$ 6po6 de RNAs en eucatlotas y para lOS IRNAs y rRNAs en procarlo!as. En OOMraste, el mRHA <le procariotas es el
Unico RNA que de \M'I I)fetur&Of' ,lo que permite su empiOQ inM!IKiia!.O p;ua la traduociOn (que oeue incluso M IOS
de finalizar su POf !Kin&eripc:in, pues no existe subcelular. pg. 250).
los ptec:ursores de lOS tre$ 111)05 de RNA fotmacbs en el ncleo eucariolioo no pui)(S&n dGMmpel\al dlreC1amente
su hncin (en el caso del mRNA, oomo molde para la tradi.ICdOn). sino que nan ese convorwse antes en ANA
m<Jd<lfO, tuncional, en un proceso laMSOO mOdificaciOn o procesamiento posttanscripcional o sunplemente
maduracin dol ANA. Esta tiene lugar en el OOcleO. y S(liO Cu<'ndo se ha co,.,.eUKto pueden las do RNA
lfflf'l$Cl(ltl3t$e Jll Q4op!Mma, donde ejercen su fooelon. Este tr,f'\$portc tiene lugar por paso de las molei.IM de RNA
maduro de 10$ p0r05 do la membrana nuctear (o poros nucleer c$}
276
MADURACt0N DEL RNA O PROCESAMIENTO POSTRANSCRI PCIONAL
El procesamiento postran5CfiPCionaf consiste, dt modo on una o varias oe las reacc:iotles
tambin pg.. 28J):
Modlflcecln oovalente de nuclesid06
Adicin de RJcletidos a lo$ e.Ktremos
E&CJ$i6n de nudctidos e.xtretnos
de ta molecllla en varios fragmentos
Proce:$0 de 8y\1Ste, ellmlnadOn de lntrone&. o corte de introne& y empalme O. CKonc$
Como se \<era ms adelante. la maduracin coofiefe ost3l>ili<l3d al RNA. btSieamet'lte por una mayor reSistencia
lrente alas nucteasas y pot un plegamiento triclirnet'l$ional OOITIPaeto (el'l el easo de tRNAs y rRNAs).lgualmente,
su teoonocinVento por otros COI'T1PQI'Ierrtcs oetulttres. que mejora la funcionalidad para la tradocdn.
21.1.1 Matizaciones al concepto do gen
La maduracin po6transcripcionat es uno de k:4 pr<>ce$0$ Ql.le 4t'ln lugar a en las que la detlnicln de
gon debe o forzarse ligeramente (pg. 246). Concret&mente, pueden Cllarse dos !li!Uadones:
Un gen se ttanscribe dando un prRNA. es J)n)CeS3dO por esdsiOrn generando varias molo..Aas de RNA. En
e9le caso. el O. gen se puede apliCar al gen gk:lbar de panda, pue5to que e& una de
lran$Cripcin, con sus region&S esttucbJral y reguladora. Sin embargo. tambin C$ aplicable a cada una eJe las
regiOnes MpatCiales de DNA qua oodifican uno dlt loo RNA$ flnale::$, I)Ues son los pnxluC1os gnicos
1\Jnt:iOnales. Ejemplos de esta situacin los tonet'I'IO$ en lOS precuf!es de RNA rlbosmico, tan1o pnx:aribticos
como eucaritlco& (pg. 283) <:uyo gen globar da -.gar a vaos rANAs maduren, y tambin en el ONA
mltoCOndrial. cada lA\0 de CU)'O$ ttanec:r110S primarios se procesa dando una oombinacin de rRNAs. IRNAs y
mRNAs (pg. 234).
El transcnlo primario obtenido de uf\3 regln de DNA puede sufrir su maduracin IXIJ dos rula$ o vai1"Mt.eS
distintas, dando lt.9iJI por euo a dOS productos genicos difefen(e&. E.ste o& et del ayuste arternativo
(p&g. 2$5), donde se pueden emploaf dOS seeuenc:ia'!l de corte y empalme pera la elimin;,(in t intrones
(pg. 280) dependiendo. pc;w ejemplo, del tejido en el que se exprese el gen o de la llegadtt <'lla e611Aa de dlvetSaS
&et'\ales.
21.2 CARACTERSTICAS DIFERENCIALES DE LA MADURACIN
Las en11e procanotas y eucariolas relaliv.s a la maduracin del RNA se centran en el RNA mensaj ero;
los tRNAs y rRNAs suffen una maduracin similar en ambOs lipos de Of9Mismos. Pue&lo que, adems. <JJot;ta a In
sin*is de protelnas. nos centraremos. por IMitO. en el an!ISaS de ia maduracin del mRHA.
En un gen proteioo procariti<:o IOdo el DNA es (exdu')'endo la regin regulodora. que en este lema
no nos lntetesa considerar). de moOo qve al traMCI'Iblrse origina un tran&aito primario qut es yt1 el mRNA lunclooal ,
cuya seeuenc::la corre5()0nde & la del ONA. E-s decir. el mRNA de proc;eariot:l$ .-s 01 Ul'liOO RNA que oo
requiere POr el oontrarlo. la transcripc:in de un gen prQieico eucariOUeo 9f!'\CI'8 un pte-mRNA QU1J debe
sufrir mnduraaon para ttans.forman;e en ...,..., mollk:vlal luncional oe mRNA. El de lo& dihwentol pro-mRNAs se
latr'la RNA nuclear heterog9noo (hnRNA) , debiclo a que oonsb.tuye \.1"101 de molc13!1 de tarnat'IO muy
variado.
Oencro de lt'$ diferenCias en1re pre-mRNA y mRNA mo'lduro, l:t rns llamativa es que ia &ec:uencia del mRNA no
corre&pOnde c;om'Jie1l'!mente a la del pre-mRNA. ni a la del ONA d&l t:JJe se ha (se dice que ha: pc. .. rdido 13
ONA y RNA '), Eslo M debe o que granctes lnlemo& del gen la
Estas r991'ones del DNA quo del pr&-mRNA en Stl maduracin se <lenOmif'\31'\ i ntrones . Aunque
son ONA no c:xxiflcante (pg. 108). deben como parte del gen (pg. 245).
Se pueden definir tarrtlin los intrones como reg!One.s no codificantes situadas Qn tt1 .vMoriof de un gen, lo que da
lugar al slnonlmo secuencias inWrealilldM (lVS, lntetYening sequ&nees}. No &On aquellas secuencias que
!Otman 106 ex11emos 5' y 3' del mRNA maduro. 8Uf'Q.Ie se trale eJe ONA no OOCJIIIcante; por ello. una tercera
definicin de intrQn CQ1'r10 regin que se tntnscribe PIHO no Sot no es estrietamente oorrecta.
10!1 son carac::lerilticos ese los genes eucariticos que <:Odffican proteinas, tar'Yibln fl6tn
l)re$el'ltes en a6gl.n)6 Q8f'l9$ de tRNA '1 tRHA, en especial eucaritioo&. En &'os el intr6n se: puede definil!lnlcamente
oomo la r9(JIOn de ONA {O de su pi'OCIIJCIO transcnpclonat. el prO>RNA) Qu& se elimina durante la maduracin
Fina!mentG. la$ regiones que nanquean a tos intronos se consetVan en el RHA maduro so a su
voz uones.. En ger'lefaf. son la I)Mie <:Odifican.1e del gen. pero el ptWner exn y etl tlimo tambin lnctuyen,
rQpcctivamente.las regiones S y :r no tr-..cidas. que no son oodificantes.
PROCESAMIENTO DEL RNA MENSAJERO
ll (..,.ll(ll.lt lii!I,IIO,:io,
tia u11
vrtnM llllmnes:
inte1ulltdu no cllhr'K'll'*"')
'
' M-o C\tllll.., ( k'cucncta<;
qtll' " m prl..: !k
"'''') . nt
1 Gen para un3 ptOteloa procarltiea 1
w
s

rcgi&l estructuml dl'l gen
ONA (slo 1-a hebra cmhficaot<l
1

_j lru"nldu,
--
L

5'
U'allSI.'rito pmurio a mRNt\ 3

no t.n .ntlklww.ll'ln
,.....,r .. .. lllll
1 Gen pare una protelna eucarltica )
regin CSUUl'1urnl dd
S" tr.mscntn pnm:trit) o #- mRNA 1 3"

m: t Gnuone. )



-
t'
cltmllli)O:tt"- de onll'OIIDt
277
J'
Por tanto, el DNA de genes procat ltlei)S de ptOielnas se puede fOrmado por un exOn Unlco, sin
lntrones. que alttanSCflblrse octgina un tran.&erlto :ri'nano tat'l'lbn sin intrones.. Sin embMgo, C{tsi ooo ol ONA
de &ucari04as contiene vanos intronefi y exones. y se tra.'lscrlbe a ptecursotes de RNA con lo$ mi&mo$ intr(lnC$ y
exone&. Como parte del prooeso de modificacin postransc::rbdonal se los tnuooos y se unen tos
l o lormac::iOrl dol mRNA eucarilieo maduro a partir efe su correspondiente pre-RNA consdruye un fYICI(JI!b ideal
pattt ol del procesamienlo postransaipoional pues sufre todos los lipos de di(hc)
pr0<;c50: O;'ldicin O. noclotkbs al extremo S'. metllactn posten:lf, alargamenco de la cadena en el 3' y
minatln 4Ct lntronos OQn vniOn dO f"Wrl4J y empalme1 Una vez comple1ada esta maduradl6n., tamb1n se
ptoJCe el paso del mRNA maduro 3 ltavS de 10!\ porO$ de t<'l mombr.-na nuclear Mda el cilol)laSm.a lugar <!Ondt:t se
emplear para la &ln.tesis proteica. Se esWdarn con detenmien1o cada uno de pll$0$
21. 3 PROCESAMIENTO DEL RNA MENSAJERO
L.& del mRNA puede describlt$EI mediante tres de modificacione-s, que pueden tmn1K:urnr ()e
lofma SUC$$iYA o $imullnea. todas oJias en el ncleo.
21.3.1 Modificacin del edremo 5'
EJ el'.1remo 5'-PPP OOJ mRNA comf81'1UI a moolftCenoe muy prOMo, poco despue!l ese ihit:l3d:,l &.1
Se tmta de una rnoetffi(:."'<;in qu. globtt!mente, implica tres bpos de (loelawa,
guanilillransferasa '1 me61asas) y que oonduoe <' ta lrlO()t'J)(lt<'CIOtl $ingutar do un nucletido protect sobre el NTP en
poscin .$' hliTI'IInat del RNA (no,..,..lmente purlnoo, ATP, el mi$MO <IUII'I ac;t.u como cebador en la vanscrlpan)
278 MADURACIN DEL RHA 0 PROCESAMIEHTO POSTRAHSCRIPCIONAL
21.3.1.1 Formacin de la caperuza o casquete S'
S. INiiz<'! tn <So$ etai)M. una M.sfosfotl1.acin previa y una guanl11tac&6n a costa de GTP.
'
t etup:
CK.,ibqdri

7
lkt
extremo del
pre-mkNA
tm:liin
.,
mOlcula
'
9"""""
radical: guanllo
nu
2' Clllp!l:
\1c: un p\IJ)Q
(rndl .. lll del
gwnilatoo GMrtlkl GTI'
al -4 IQtOt.u.;.
dtl . mJI.NA
guatlthlaeuSn
'
u
'
9"ttnill'II:Q (GMP)
guanoollo guanililo
Auroque en ta segunda reacci6o s. lr(ln$1lere un residuo guanllilo, el resultado conjunto de las dos 1oacciontts es 1<1
ltloorporacin al mRNA do tan slO un de guano&ina. e& decir, una gu01nosilaeiOn; "'diec qu6 el mRNA ha sio
en 5' l<'! estructt.tra teminat resultante se oonooe COITIO caporuu de guani na. caperuza 5' o casquete 5'
{tn inglt$ C8,0). Se trata de una estruaura que no so encuentta en t*lguna otra parte de nucletidO& ni cidO&
nocleieos, oon respecto a lo& &lguiemes critorios:
Unin de dos nude6idos a Ir<'"" de oo enlace trlf06fsto.
Un nuclesido {g.lano&inl) ur'lidO en setllldo opuesto al del resto de la cadena polinuc:leotidieit (erMoee lti!Oslato
entre dO& po$11Cionet 5').
ES1a caporuua ejeroe un etecto protector de la molcula frente a 1M eonucto.MI.'Is (l)uef $1as tolo act6an sobre
3'.S'..1osl0cfister), marca e( pnHI'IRNA PMtl $U OMI)Ieo po$1erlor corno wstrato eo otras reacciones de
procesamlenlo en el neleo y sirve wmo de \rit'l del mRNA a bs rlboeomas al Inicial la sl1'!18tli5 PfOkloicCII .
21.3.1.2 Metllacln do la caperuza 5'
los tres primeros nuclelidos de la estri.ICti..Wa 5' -guan06ha.,.rif06fa!l>mRNA son entot'loc$$ modiflc&QS por
metlltransferasas qvt S-adenosiiLmet:kri'la (pg. 22) oomo ooenzim<'l doo<ldom del gt\4)0 meo!llo
(reacdOn similar ata de <le (:i!QSII\89 que rE9Ae la b'anscripcin, pg. 272).
la meliaociOn pueoe tenet lugat sobre varias posiciones
El N7 de la guanoslna terminal . para dat la de tipo O, o eapetUZ& de (c.'JP 0),
La teaocin &a catallza la mRNA(guarina-N7 )melitlran&'erasa. EC 2. 1.1.56.
del anterior. eJ 2' 0H de la ribosa atfyt'etn!IO (1 nucleotldo orlghal del pre-mRNA: 2' de la secuencia
actual), dando la caperuza de tipo 1 (CltP 1). E-sta reacan la cataiza un& dilf!f'lte, la
mRNA(nuctesic:So-2' O)meli!transferasa, EC 2. 1. 1.5 7.
de las dos antetlores. puede metilarw d 2'..0H de la tlbOsa Siguiente (2" nuctetido original ;
la secuencia actual), para dar la do tipo 2 (C8P 2}.
PROCESAMIEHTO OEL ANA MENSAJERO"----------
J
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.. '... , >lo
"'
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... , ... \"

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\" ....

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"'""e_:;:;
metilt ransferasas
..
L
279
'ou ou
: OCil,
Se Ei3b& que las mmila&ils y las guanililtron5totMas $41 asocian al dormnio CTD d(t l;t RNApolll
252) y l!evtltl o cnbQ 13 rta<:c:ifl dO prCXe$01miOOio Oef RNA \'lnle$ de qve ellrtln$CMO yn tamJ(Io
<:le unos. 30 nudlttidos. Parece, por 1an10, posible qoe la IOffl'lec:IOn de la caperuza pN'Iiope en el ca!TbO de enieira<iiOn
de la ttanscrlpaOO a elongaaon
21.3.2 Modificacin del extremo 3'
21.3.2.1 Formacin del extremo 3' y su relacin con el final de l a transcripcin
Olra ef mRNA eucaritico es que el exltemo 3' del mRNA no corresponde a la poSK:ton donde s:e
termina la lranscripcin (qi.IO' se produce graaas a la tnteracon de las RNAPol oon protefnas de pausa o lefl'I'WW:Ioras
pg 256), Sino quo denva de la esmif'l de lit moteculca de prmRNA en una poslclon comente emba de su exltemo 3'
Como el mRNA 0$ mb$ ()OrlO en $U 3' Q\IEI l;U pnm;trio
- ;tlr.t:.J:
_, .... ,. . .,
111M. ' " pu41mkml:o00
'
- 1
.,.,,.....,.. .-?III.O..w.,...l,
.... c. c-lo\. y b t<Uolouw
.. .. ...
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-

'
" kN\ l'lo fm10:11lnl
-
280
MADURACIN DEL RHA O PROCESAMIENTO POSTRANSCRJPCtONAl
21.3.2.2 Polladenllacln del extremo 3'
Sobre el extremo 3' -OH resdlante del corte por la endonudeasa 8Cbla una RNA pollmerssa especial, que no usa
molde y sOlo aoep!a como sus.lrato al ATP,Iamada poli( A) pol!merasa (EC 2. 7 .7.19). COmo $0 ;,1
RNA un gran nmero de residuos de adenllato (AMP), formando una "cola" de polladen.llato o cola do poli(A), de
longitud Upica emre 40 y 250 nt (como excepan. los mRNA$ de M:tonas carecen de esta 0018). Es&& estructura, que
permanece intacta 1\a&ta la formaCIn mar del mRNA. wedo patticipar en procesos de 1an gran significado oomo el
lran5D(lf1e del mR.NA al citoplasma y la determinacin, en PilrOO, de'<! Nt.atlilidad y vida rnetia del mRNA (pg. 286).
La presenci3 CIC la 0(:113 de I)Oii(A) VniCNI'IeOte en 10$ rnRNA$ .e eon fines experimentales.
para &a putlr.eaCiOn Clel conjunto de mANAs de una clula. tcnicas oe atlnkiad oon sopotles que ()()M!enen
cadenas oligonuc:leotkk:as de poll(dT), poli(T) o poli(U), complemencariss a la cda de poii(A) (pg. 136).
21.3.3 Eliminacin de intrones y empalme de exones
1.01 f:lt<aPit tiO lo ma<JuraeiOn po$tr;.\nscpeional del transcrito primi.'lrio t\Mto 4ar el mRNA eucoritiQo
tonSoSt.e &a etiminaeiOn oe 10!1 introneS y te Ul'liOtl o empalme oe lOS el(()(les. ESie proceso se OOI'IOOe ctll"nn corte y
pegado, corte y empalme o ayuste {en spiicing).
21.3.3.1 Magnitud de los intrones
Debe n:tOOfdar&e <liJ4J lo6 oenn dO; en lOS se encuentran casi Sie<pre
intenumQidO$ ()c)f intr ones. que separan 1M regiOnes eoditicantes o exones (pg. 276). Como exoepcln, las hisiOnas
son uno de lOS escasos ejemplos de genes que carecen completan'lente de introne:s. lo ms frecuente es que la
total de tos -.ror"'e$ supere ampliamente a la suma de los e)(()l')66, por lo que el uwnal\o del gen depende
fuertemente del nUmero y longitud de sus intrones, Aunqutt la; c:ifras $0n variobtcs.. se h<lt>lo de hl.'lstt'l 40 intr'()nOS por
gen y de una longitud de nasta 20 kb por intrn. lo6 exone:s son de tamal\o roochO mas PIQUiel'lo. lipiC3mcnlb inferiOr a
kb.
21.3.3.2 Secuencias que delimitan ellntr6n
La ellmlnaci6n de un intrn est determinada por w secuencia, y no par su li'lmat\o. Slo interVienen dOs
secuencias especificas,. quo Oclincn 10$ OKt:temos del intr(Wl. y Olra oe su inWrielt, conOCidas en su conjuniO OOfi'IO sitios
o t;:ntros d o corto y empalme o de ayuste {eenlfo 5'. centro 3' y cenb'O de ranWlcacln). Todos lOs dios de corte y
omp<'t!me ser equivalentes, mientras que fa secuencia del re51o del intrn no tiene trascendencia sobr ol
proceso.
Tm S'UCDCias conns. nh11meo1e OODS<O'ada!l, detioen 11>5 cwtro' ck tllrl t y
Parn S' >' ' 3. slo 008 o:m .,..,.. el de vn
ao.kPiiiiiO. El dt \k la$ 3 ()OOje(lliO pueden v11rur 1 lc:rvnnne.
lo:o $1CIJ'Ip OOfiiKI1.dltl p(lr GU y ltnninllll por AG (ti cl kNA (GT y AG
en la hebra no ua:n:rita lid DN\).
Un eambiO en el Sitio de oorte (por ejemplo, por mutacin de uno de los CQn$01'11() esenCiales) darla
tugl.'ll t1 un ayuste ertOOeo: se utillzarfa pera el corte y empalme ta $iguiertlo secuencia oonsenso, si la nublera, con lo
que el lntrn o parle de l induido en el tr'IRNA. ESIO eonaudtia a la srntesls de un pollpptldo alterado. con
una inserc:iOn g,_ndc en su secuenCia de amlnoddos, o Incluso con cambio de toda la secuen<:iit a Pilrtir del pun!Q de
atter...ein debidO a un desplaz.amlenlo del marco de leaura (pg. 350}
21.3.3.3 Formacin de cuerpos o complejos de empalme
El CXlf1c de intrones y etl'lpatme <te axones est mediado por t.na asociacin ma<:romolec:ulor C:UCI'1)0 o
complejo oe empalme, o ayustosOfl'la (.sp.Vceosome). E51e se forma por del preomRNA (alrededor oe tos
centros Cle con vartas rlbonucleopr otlnat nuclearu pequiJ.,s (snRNP, dt!nOtnin&das U1, U2. U4, US y U6}.
constituidas a 541 vez POr protelnas y ANA nuclearH p q..,.os (snRHA. del miSmo nombte). El 1amat10 def
PROCESAMIENTO DEL RNA MENSAJERO 281
es de unos 3.000 kOa, con un ooetlcienle de seownentadon de 60S, a la subunldad ma)'Of del
nbosoma eocari61ioo: en total, esl formado por alrededor de 4 5 poli!>otidos y 5 000 nt de RNA.
E&.\e complejo de CO(te y empalms es necesano tanto para el rQCOnootn1811\lo de los pun1os de e:sas16n oomo para
la ca181i&ls.
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(rt..X:lll'lfll..'\: ".XI.ll"!ICi:l.; de cl R.NA
y I"CliCC.:t()ntS de COI11.' )'
21.3.3.4 Mecanismo de la reaccin
La reacci6n. de Cl011o y emoaltne! $Up()OC. ttPi*ten1omcnt.e. 1;, ruptura de dos oni<K:e:> 'osi'OOiGstcr (lo$ que &el}<tlan
ot lntr6n de ambO$ exone:s) y fa b'maciOI'I de un nue-vo enlace fOSfO<Ii<)ster entre lO$ dO$ e..Mones Sin ernbargo, el
1)01" el ayuS10$()1'1'13 no ttanscutte de e$3 toona, ft() My acCin de nur.te:,sas y ligat..1 $ir dO$
reacoones de ttansesterifleaciOn.
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1
PROCESAMIENTO DE LOS RHAS A.IBOSMJCO Y DE TRANSFERENCtA
283
En eueatlotas. et proceso es similar. oon un transeri1o primario que genera 3 de lOS 4 rRNAs y con trar't$CriiOS
l){im3rios SOI*'adors ti OlfO rRNA y C3CI3 T31bin on alounO$ ta$0$ hay d intrones.
En el caso de IA:NAs se prOO.Joe. adems de recorte de los extremos 3 y $ , la adicin. a las mola.las de
1RNA que n o la po&ean. de la &eeuencl8 .CCA en el extremo 3"-0H. Lo& tRNAs, especialmente. sufren numetosas
ntaOOone& de QI.M:t deierminan que en a;.$ molC\II<J$ maduras abunden lo& nuc*Jsidos
lflfocuent.- 13, 21, 72 y 74). a 10$ CU<tlro que Oilrtlcipan en 1t1 $intosis dol RNA <A. G. u. C) E$1<ls
mocJirle&eiO"teS C(l(ltfl)uyen a naoet mas resiStentes lOS tRNAs a toe l)r'ooesos <.le deyrttdaei6n eelulal, ttuntntancJo, pQt
tonto, $11 mcti!Oliea y su vid3 me<lia
1 Resumen de las n)()(iilicaciooes espcrinwntadas por los dislinto.'IS upos. de RNA 1
Jlf''li'SCW
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l'ROC.\kiOTAS
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o.:(Xlf'IICII)Il J'W'If t\"OAC
., .... oJo: nltl:IIIC"'
+
+
284
MADURACIN DEL RHA O PROCESAMIENTO POSTRANSCRIPCIONAL

'
parlmiKtip;ioul;
n'oii<Jura<'>On dr
ocluMnaotton
mOOiti(rin ok nr,do:,ib
<)eltRNA
1
>' de kvadurn.: f
se escinde la s.xo..:ncia en 5'
se escinde UU dd cx1rcmo 3' y se aade CCA
se mdilicom co..,.,ltntementc \arias bases
se elimina un mlfnde 14rluc:ktdos
'
+
21.5 MADURACIN DEL RNA MITOCONDRIAL
La transcripCiOn molCUla de ONA mitocondrial humano (pg. 257) produoe 3 RNAs transcos pri!Nriot <Se
gran Cli)'O prooesamleniO da klgar a todos lo& mRNA.s, IRNAs y rRNA$. Es.1a llene lugsw
por escisin del pre-RNA y. en el caso de los mRNA$, p01 (pero no hay
10rmacaon de caperuza 5').
1ranscritn Ll tRNAf'tw
(YCr PIII, U7)
tranSCrito L2 -.. ''RNA 4 (no funcional) + 12 tRNAs +
lr.tO$Cl'ito H _.. S tRNAs- 1 -+ RNA oo (uudonal
+ cebador pll'll la rcplie<Jci6n de 11
21.6 REGULACIN POSTRANSCRIPCIONAL Y PRETRADUCCIONAL
DE LA EXPRESIN GNICA
A pesar de que la mayor l)all1e del oontrol de la elq)(esi6n giri::a &e oe anto la oe lnieio de la
transcripcin. a trav$$ de 106 f3C10IC$ de lrtii'I$Ctlpcln (pg. 264), 8J'is.ten mecani&l1106 de regul<'lc:iOn on IQdas las
etapas. de lil exwHiOn (p6g, 262). En 10 que respecta a 106 proc8$0$ posteriores trt'ln&ei)Cin pero previos a la
IJCidvociOn, ex.iSten ejemplOs de conltOI tanto en la madurCtCin dol RNA C(lf'I'IO et'l su transp:tte al citoplasma y cambln a
travs de la regulac!On de la vidtt rnc<ill del mRNA el'l el Ciloptasma (velocidad de &v degra<lacln), Pot faZQOt$ drt
s.indicidad. 50 este Ultimo aspecco.
REGULACIN POSTRANSCRIPCIONAL Y PRETRAOUCCIONAL DE LA EXPREStON
285
NIVELES DE REGULACIN DE LA I;XPRESIN GNICA EN EUCARIOTAS
I>NA
RNA
111111$Crim
pritn:tri()
RNA
)
)
.. :::-

RNA
mu.<hcro
(mRNA)
{'\IIWt"l m:
11'\11\<ol;np:IIONI
COIItrol de
llliO! ... .,p;lo'lot
c,..rolde

6r! kNA
Coouol <k

R"<A
del D' A a )11 lr.'l'*f'ICI'-"n
l:CndcnSlltll}ll de: '-.:wmama
j ,\l ctllack'lll&t
il!ll.'loHk 11
+-
old ltNA 1po< .. N,...I
[ fKtwi <k '- IW!oO(rlf'"''"
dt: pruec..am!tnl.,
Jobdur..:oo allcrnlllh"il
c, ..

Sd.:I.'Cfl'n l; qvt JC ltan$porbll"f
lli:U\'11 a 11.: lw IJIIttlf.
21.6.1 Regulacin do la maduracin del RNA
Tcm,, 2C)
do: .._, '"""<'-ll>lr>.
J &ll:>lt:J. ..se.
r r"'*""' <k '"' """'"""'"'
Las dls.!lnlaS etapas de procesamk!Oto de bs pre-RNAs. son lgicamenle $V$GOP!iblc$ do
(eguta.clon, lo Que &lactar a la tasa de <.1e: Esa regukl<:i61\ JIQ slo tiene lugar el\
cuanto a la vetoc::idad o efiCiloeiil r(lt'IQCioMS de r'Md\Jrac:l6n, SitiO que en algunos casos uo mtsmo pre-RNA
m.advro .segUn pt00e'$05 disbntos de)el'ldie!'IOO de la clula considerada, formando mRNAs edap1ados alas necesidades
proteicas particulao'Mo de Ufl teiict<> o de Ur\(1 s!I\Ja()C)n tl!llologlca cooOI'ela. La lmpllcac:ln d8 este t4X> de vanablhdad en
el contrd del prodveto final., enotr'l'le y, por ahOfa, poco conoada: a este nivel. tero-a mucho que aportar en al Muro
la prote(mlica (p&g. 2t7)..
Vn e,empiO camc.terl6tico de esra torma de regulic1CIIn O$ (11 \1Y\I$1CI qve COm(omt:ntQ de:$m:lt'!M
papel (ll'lla dlterenc:aa.cln cAaryen el control del des.atrollo {por ejomplo, on lic1 dol sO.x(l tn
Ejemplos
de ayuste
altetnativo
Je:t-

J lrJda..--..:in L
----..-
\'KIMk "cutU" dd l"!ht*rciclo
Tema 22
El cdigo gentico
22. 1 y gener ales del ..................................................................................... 237
7.2 1 1 LO!!. codones del cdigo son IJ'Ipletes ........................... , ... _,_,_,,,,.,_, ... . .................. 288
22.1.2 Lot> tripletes no se solapan ..... , ., . .. ,,,, .. ,,. .. ........................................................................... 288
22.1.3 ElOsten tnn. marco6 o pauta<& do , ........ --- ....... . ................................................ ............... 288
22:1.4 Papel ildOPI.ador d.e!IRNA .............................. .. .. .. .. ....... .. ....... .. ................ ............... ---- - ,_ .... - 289
2:2:.2 AsignOJcin de oodones a ami noicidos c:oneretos - ... .. ..................... ,_,,,,, 289
22.21 ...................................... _,.,,_,_,.,_,_,_,.,. ...... - .... 289
22 2.1. 1 Enswyo 001"1 h()mopollmeros ........................................................ ,.,_,. ...... , 289
2'2 2.1.2 Ensayo con secuencias repetidas de dos nudetidos .... ,_,_,_ - ..... ,_,_,., ... , .,_,_,_, ....... 291
22 .2. 1. 3 Ensayo con secuettelas repetidas de tres nucletidos 291
22. 2.1.41 EIISayos con secuencia; repetidas de OJatro nucletidos ... -.. ............ 292
22.2. 2 Evidencia Jn vhoo del c:d1go genllOO , .... ,_,_,,,,_,_,_,_,_, .............................. 292
22.3 Mode&os de representacin ....... ,,,,,_,.,, . , ............................................................................ _ ......................... 293
22.31 ...................... _,_,_,,., .......................................................................................... 293
22.3.2 r.o,m&to tin::u&ar ............................................................. , ....... , , , 294
22.4 Catacterfs-dcas especificas ...... ,. ....... ................................................................................................... 294
22.4.1 Cod6n de .......................... ,, .... , , , ........................ , ............................................................. 29
22.4 2 Codones de ............................................................ .............. ......................................... 29-4
22.4 3 Degeneracin ..... , .. ,, , , , ...................... _,_,_,,,_,_,_,_.,,, .... _, _,., ..................................... 29S
22.4.31 Hiple$isdelbcllanoeo ... ... .. ................................ .............. ............ ............................. 296
22.4.3.2 Consideraciones priloctica<S .. , ... ,.,_,_,_.,,_, ----- ----- ,_,_,_,_,_.,.,.,_,., 297
22.4.4 Universaidad........ , ..... ............................................. ,_,_,_,_,_,,, . ........... .... 298
El COdigo gentico es el conjunto de pavtas que rigen la transrcrenoil de lit .nform&on oontonil:i<l en ol mRNA (y
en delinitrva en el DNA} para la de 1<1$ PI'Qteinas. tanlo Cl"' procariQUI.$ como el"' eueanotas, ta
dos 1eng1,1#1jes infOtm.lltivos: <M 1'\uelelidos en el mRNA (elle(!(Ju8frJ COit cl.l&fro lettiU de
lOS I'CidO!II"'ucieioOOS} y la sect.tenela de amlnocldos en el polpptio (leflguaie con fetms de las ptO(einas). Ms
concretamente. el ccllgo gentiCO establece la (ll)l'ttt:$pon00ncitt entre lO$ 64 triP'etes de b-1$1!$ df;l mRNA y lO$
20 aminoeid06 de las protelnas. E$ frot:;veole. O$Peeialmetttc en el ecligo gcn61i0o y la t1&0UCon, ucili%3r la
palabro "ba$e' oomo sinnmo de er"JIO a la seeut!i\Cia del mRNA}.
22.1 ANTECEDENTES Y PROPIEDADES GENERALES DEL CDIGO
Hoy dJa es relattvamente fa oonocer la corre&OQndencia entre amino<:idO$ de un.- y triplotH d
nu<:;I&O!ldos del mRNA que lOS oocMican, me<Jiante simple comperadOn de la secuencia de ambos. Sin embargo. fueron
muChas laS aproximaciones realizadas.. a partir de los ellos 50, que contnbuyeron a descifrar el obcigo
gentico. a la vez que a entender la transa.,cin y la tradocan Globalmente considerados. estos estudios han
supuesto uno de 10$ m;Jyorcs retos et'l la historia de 13 Bioqui.....:a y la Gef'l6ti(:a.
t..<'l inforrt"'lttCiOI'l pt"evia la que se aas.a el OOf'IOCimleniO del edigo gentico es ae dOS Upos. Por un laao. k>
rtfcrenre al tRNA que. a pesar de no ser un elemento propiamente dichO del cdigo genetloo. su Intervencin es.
esenCial para entender la OCMTespondena:a entre mRNA y protelna. Por otro 1800, el rtbosoma (pags.19-at,, orgfnlo
cltoplasmuco donde &e reaiza la sntesis protGICS, segUn se demostr empleando aminOOcidos marcadOG oon isOtopos
tadiactlYOS.
288 EL CDIGO GENtnCO
Se OO&criben a oonlinuacin las caractari&cas generales y particulares del OOdigo gen61ic, basadas on
de lOS mtls tepresetlt&liVOS QUe Mn conlribuiOO 01 ISo&eifrar el o6cigo geneico y su retadn con la slnteSis
pro<elca
22.1, 1 Los codones del cdigo son tri pieles
Lct 'hiptesi& de los codones se demosiJ' al obsetVar que cambios en ta secuel'lda de un mRNA a
a!ter...cionell en la secoencia <kt aminoacidos de la prot.eina skltetiz:ada (eo el bacteri6fego T4). EII'UT'Iero mrnlmo oe
nudeticSos otteewno para un aminocido (tamatlo de las unidades de codificacin o relacin de oodifleaei6tl)
$t deduce PQf' un simple cloolo malemflco:
unidad de
4' = 16
para oocMlt:2'1r
20 aminocidos
3 nudetldoa 4, 64 mas que
La unidad do codificacin es el tripleto do nucletidos
Por lanto, para poder codificar lo& 20 amnocido& naturales se necesita que cada aminocido venga especificado
poJ una secuencia de 3 nucletidos. llamada trlplete o codn. El es i8 caracterlst!ca que ttenne la naturaleZa
general del o6diQo. Obviamente. kas 64 posib)e:s cofTtlinaciooes exceden las necesld.ades para 20 an*loctoos; mas
adelante se analizar cmo se acomoda ese exoeso de lofOI'In&CIOn (pg. 295).
22.1.2 Los triplotes no se solapan
Una de las propuestaS .W:iates para la dl!ltr'b.lei6n de lOS (:()(J()nes en el MRNA fue que tr'iplttes C()(ltiguc>s
compartieran nueletldos.
Hipcesis de
tripl<"ln :solap;mte,.,
wxrpu(3t05
litptc;:ls di: tripktt$
no
lA 8 C DE F G H 1 J K L M N . .. 1
e u1m n Jdl,o. 1,,. ni
1 '
elida nudCi)cido> (por cj , J;J
CD!, D!F, ! FG, FGB, GBI, HIJ, I JK ...
CD!, ! FG, GHI, I JK, KLM .l
--------- cW nudMudo ibmla "1
--...:;"':;;"<:.ok = 'c: -==-- _)
OOOliSutl!l. ABC, D!F, GHI , JKL, MN0 .. .
l)(t ...--
'---"'-""""'--="---' b ood..-s tiC) cUIIIpanm
En la hlpte&IS &daipante. la 68CUencia del primer triplete re$1ringe la& po6ible$ &ecuencia& del $Ggun0o, &ta& a
$U las del teroero. y asf suOKivament-e. por to Que la socvcnc:itl (Jet <tmino<ICKs de f3s proteinM
condicionada. no podria Mf cualquiera. Sajo esta llip(lt.Mis la aneraeiOn dt una base a vaO$ OO<Iones, ti> QUt
pnxlueirit'l ttllemc:iotles en mM de 1-W" altft:)lleio. Pli&!lto que estas previsiMes no se cumplen en te realidad, se pucto
<klm0$tnw la hipO!eSis sorapante I!IS los ltlpletes nunca compartan r.ucleOtldos. no se sdapan. Esto es
asl para el coct90 gen'tioo de todo& 106 seres ..tvo&
22.1.3 Existen tres marcos o pautas de lectura
El hecho de que bs oodone& contiguos no &e &elapen no impliect q..e exista setlal de separacin entre ellos {es
decir, no e)(lsten 'pui'TI06"' o int.emJpc:iones; tal 5eP<W8CiOo slo se Mee notar sobre el papel , par f.aci!itcw !a
lectura e <l<t 10'1 SOQ..Iencia). Como consecuencia, en p.1nc:ipi0 1a <too mRHA en la se
S)O(Iria iniciar on euatquier ru::I&Oildo, 10 que a ste como el prtmer l'klc:leeldo del codn de lrklo de la
signil'ka la em!encia potenCial de tres en cualquier mRNA. dependiendo de en qu
nueloOiido se inicie la l&et\n de lOS <:OdOnes: se habla de ltes o pautas de le<:tUJ'a. la traduccin def mRNA
siguiencJO cada tn:t de enos formaria ttes pollpptldos dl!l'.lntos.
ASIGNACIN OE COOONES A AMINOCIDOS CONCRETOS
J fomna.. d.: lttr" l :M.'l.'\ll.'tlClJI Jd mRNA
J d.: l\'leltlftl
1": ABC, OEF, GRI , JKL,
BCD, EFG, HIJ, KLM,
J" CDE. FGB, I JK, t.MN, .
Id J' )':1 CCIIII \"1 (WUlll"M. d
1111MI'IO lluUqfJ(: C'Ot'llliYI llnliMicidO m('tiOS)
(A 8 C D E F G H I J K L M N
289
Sin embargo. en 1:. ll'ad!edn (tanto in ViVO como in \!lito) no se manifie&t<l e&Ut t'parcnl(l (por
ttl ltlltluct et mRNA a un gen). Una 'Y8Z lniCill(la la tr..OO.CQn $gl.in vn m.'k'CO de lettura,
puede docir lO$ ouos dO$ carecen de infOI'IT&aein. Sin embatgo. uno de 10$ otrOIS mt\rtos puedo on
mensl!jo vtllli$0 pata otro gen dlstlniO, caso de bs genes solapantes (pg. 249)
El marco de Jeclllrn puede cembl&l debido a! det;plazarTilGOio im 1 O 2 PQ$iCiOM$ del !)ul\10 de eOtCiO o. OI#'!We lB
traoucdr\, por salto eccicfefltal de vn nuclelido mientras et mANA roCOtrido por el rlbOsoma. la oonsecuei'ICia del
cambio de maroo es que a parlir diJ e:so de t:1 pi'Oieina nueva es dl&tlnta a la ori9nat. E:s!a es el
mecanismo utilizado a \'eCOS p<tra fotnl(U do$ protelnas relaCIOnadas a pMir de un mismo transQ"'to. Tambin es
el resultado de atgun<!s mtii.Ociotl$ 3q.ll!llas en lr.i que se insertan o eftmlnan nudetidos l nmoro no
m6!tlpto de 3 (pg 350)
22.1.4 Papel adaptador del IRNA
l)(tbe tOCotdll se la '1!!CWrn .00 la secuenca de c;odones esta protagonizada por los IR NAs (pg$ 71-75 J. que
el p;))Ol daptttdores de la IC'Itormadn gentica a ia sec.uencia proteinas lntervllm8f1 para elo
estroC:IUr..'t$ Oetivas e$f)eei:;t!lzaclas (lormando los amlnoacll-tRNAs), que dlrtgen los anlWIOcidos ha<:ia el mRNA slluado
en el nbo$0ma E.n e$te gtlnulo UMe lugar la lnteraccl6n det tripJete de bases del amlnoaQI-tRNA COtl el
tripltltt de bas.e-s del mRNA (codn) determinando, dolante la tradocci6n. l:a incorporacin especifico
Ir ente a cada postc:n del mRNA. Pof tanto, ctno oc:u11e do aqui en adelante, se dtoe <ue
"un codn determina o oodifica un amino;!K;ido
Et tR.I'o"A e' d modi<tl.lor
el .X1 mRNA y l;a
SCC"uc:nc-ia d\' nmino:il,do' del
puli'lfpti.do quo: Jo.C c.s.t
$.intcaiz:tndo

un ami noeidQ
nho .. oma
22.2 ASIGNACIN DE CODONES A AMINOCIDOS CONCRETOS
22.2.1 Traduccin de pollnucletldos sintticos
22.2.1.1 Ensayo con homopolmeros
La necesidad de un ttdete para codibr un anwlOc:ldo .se demosiJ' lniCISlrneniO Jn lllt!o c;on el emp&eo de dos
lipos de componente$:
un eXff8ClO libte de cJIJJ83 (lntcialmente de E. coN o de tiHIC:liiOCdo& de oonejo. hmado S-30'), que
apof1a 106 oomponentes neCEIS<lC'IOS para qve .se de$iiii'J'Oife la sinlfJ$Is pnxeka. a excepon del
P wh
=
c::ga

ccnLrifugacin
"""""'
D"A
mltNA
1RNA


mRNA
..

1.-'UI.Unll!>
37"C. ..
l5 mm
l it NA

cntUi lD
"tnratto S:.lo
290
El CDIGO GENTICO
Un hOmopolin10MucJelfdo sfrltelico, por ejeil"'piO poi-U, IXlf con polinucteeldo fosforilasa
(pg. 246) a panlr de UOP y un cebedot, sin necesidad de mol6e.
RN A C'cb.,dor
+
...
Molcula de llpo RNA
(poli-U) +X 1>
Al afladlr este pollrrilonucle6tldo al exttaciO acerurar (S-30) se eonsr!ruye un siS1el'ntl do lr&Civec:iOn in vilro.
produciendo un homopollppciOO. Empleando amlnocldos marcados oon lslopos radlactrvos. se pve>e 3'Yt:tigut'r cvl
es el polipptido oblenldo.

1\ltru
pllnien<l<> ok (ldi L partinaOO de poll<C r ""''"e"e"'""e::"'c"'"'''c.Ce__, e/ '' ,.,..,,
j I''C,.._. 1 l'"t'l"- j I'"':iti I"CII.li


e 5 e
r .. 1 ... =..J l ..
- '-flo !k ino:ubec'ocin lil!ltlN tiempo> <k;
A penor .k d no.-.. -.b!> oll'>t>k lllolia:d'iltlld prlplublf IJIIIf*ln.l) co el (\IR INif!Ca .. ft11ll,_.,
I'IOC""' d l'lwlpkk UUU ""'-bd Jl')ll-l'h:. l!llo'l
de ld.._'li'i.lii._I"CJJ'W Iu ,_.lit f'OI.C.poli .(;;>poii<A
Los an&eriote& slo permiten algun05 <:odonc$ muy p:!irn do5velar ..,
oorresponencia entre lo$ dom:; todonos y 10$ 1'1mii"'I6Cil:los se polirrlbonuetetdos oon secuencias
rooetl!JN de dOS. tres o eu&tro baSeS. que conducen a 1& slntesls de polipptidos con uno o unos pocos afWI'\Ocidos eo
pattOI"eS tepelltlvos.
ASIGNACI N DE CODONES A AMINOCI OOS CONCRETOS
22.2.1.2 Ensayo con secuenci as repetidas de dos nucletJdos
de un.:a hebr: de OXA
siMtlioo. de liuencia

uh;oauo:klllkl ;
Mltltii!OO
dA
dG
dA
dG
dA
dG
ONApol
..
dN'rl's
r de
l PNA
dA- dT
dG-dC
dA- dT
dG- dC
dA- dT
dG- dC
dA- dT
dG- dC
d.A- dT
dG-dC
dA- dT
dG- dC
dA- dT
dG- dC
RNApol
..
l TI'
(!P
IT,m,tnpc6n
del 0!\'A
mR."'
u
e
u
e
o
e
o
e
u
e
o
e
o
e
lile tQrmaiJII )l(lto;, llpo .k pollpq,udo.:o.
cnr dos nnunoQ.:ldof;
(a.mermmdo pw"IIO o pot
si.slcma de
..
lraduedn
in u'tro
291
Se conellye que 105 tripletes UCU y CUC Leu y Ser, o vioe"o'ersa; oon es.te ensayo oo se puede definir la
correspondenda de cada uno. Fueron expenmeniOG posteriores lO$ e dCn'IO$lr.lfon que UCV wdiflcil Ser y CUC
cod!tlca Leu
22.2.1.3 Ensayo con secuencias repetidas de tres nucletidos
Para slmpl!flcar. se dlreaamenle el mRNA. en este caso con una secuenCia trinucleolidica
u con o;adl uno de
, ,.)'T
A
SMlnut\:f>:'de
IThr
e
IIUnl II)C
1 L<u
u
1nplcsn 9011
, ,.)'T
A
iguale!>
l'lr
$lo; oblicoc UIWI
e
1"
ILcu -...i
nw.l111k l
u
s1stcma de
ITyr
homopohpipbdo$
A
m 1irro
fn ..
e
1 Lcu
u

,,.).

A
fn"
e

IL<u

u
, ,.)'T
A

fn"
e:>
e
,, ..
Se estae6ece. pues, 18 OOespof\Oetlcia eotte Tyr, Thr y Leu oon UAC, ACU y CUA, <le nuevo Sil'l )(l(ler <:telinlr cvltl
de los oodones OOCI.tica Gada uno de 105 3 amlnoacldos.
292 EL CODtGO GENU ICO
22.2.1.4 Ensayos con secuencias repetidas de cuatro nucle6tidos
u
ITyr
A
1 lle
u
ser
e

lleu
o
ITrr
A
C'fl lln(l .k
l ile
o
los. J m31\!0S de
1 Ser 1 S.r
w ubticnc una
lei!Wf11 CliiUCfl.i
e

!OC
lleu

o
un altcn'lando
ITyr
pnlipfptidot..
..
l ile 1 lle
tt'almcntc b
o
1'
sistc-mn de
!Ser
rnumn ti'UCI'ICP y
e
IL<u
lo e"
lllttiMflt1do es
o
Haducctn ,;, ilro
1 1'yr
ITyr
d p:nmcro
A
l ile
o
1 Ser
e

luu
lleu

o
ITyr A
AL'('
CIJA
111

l,cu
u

!ser
1 Ser

e
ILeu
u
ITyr
A
l ile
l ile
o
1 S.r
e
1 Leu
...
ITyr
El mismo planteamiento exi)Erinental puede &el extendido a otras secuencias repelitivs& (de S. 6. etc ..
nuclelid06). observilndcne siompre 1;1 oorrespenc)en(;ia entr un un amioob<;ido, Esttldiando a&i la sfnte&is O.
vn gr.an nUmoro do mANAs $inttti00$ se pu(IO d0$Ciftaf 13' asignacin concreta <Se ocros lriplcle$ (c:od(:l'\0$), 31a
se te del 00c1g0 (pag. 295).
22.2.2 Evidencia in vivo del cdigo gentico
Son vatios los expetJnentos in vJvo confirman las concbsiones alcanzada& in Y.itro; en especial .
a"*an el efecto de las mutaaones sobre la HCUencia peptjdica (tanto ii'IIJucidas como e$p(lf\ti'INI, pg. 344). Como
ejemplos *.lsb'ati'Yos se pueden adelanta aqui algunos ;errcspondien1os a los geno& do la subunidad o: de &a
llemoglobina, En ambo6 la sv&titucin de una sola ..., .a OtO nom\i'll U'\ cod()n, 1;011duc:iendo a la
di$!into en ltl seeuencNI peptldiea .
...,..
WI:I!lD!Il
\ AA ( LYJ)
A-> G
CA1\ (Gi u)
Sustituc:iOrl!e$ de nU(;Ietidos en el g-en, GM(Gi u)
\... (.;
GGA (Giy)
que C3uSM m W\ aminocido
GAA ((ilu) G_, .\
AAA (LY!')
dd polippcido, cooontt:ldas en la
GAA (Gtu) CAA (Gin)
c:.otdc'-" a de hcn.oIOOinas hUin.'lnas
ll.nQrmales.: GGU (CiyJ
(; ... A
G' U (Asp)
CAU (llis) C-> 1 li AU (T')r)
AAU(Asn)
AAA (Lys)
MODELOS DE REPRESENTACtN 293
22.3 MODELOS DE REPRESENTACIN
Se han elaborado diversos modelO$ esquemas. para representar de bma dara y sencdla la
correlacin exls.tente entre codone& cSel mRNA y ()el 0Qiil)6plldo lfaducido. En todos ellos, la seCJJencla del
triplele se refJete al codn del mRNA (de ahi '<! pre:sonci8 de u y no de T), tltlnca se lrldica (X)tr'l() del ONA ni
como antloodOn del tRNA {aunque se PIJOdon y deben Moer referencias entre las secuencias
correspondiente&). Las btl&e& de c;do eodOn se numeran. 0010 siempre, en la dl'eocln S-. 3', la misma en la que &e
sintetizo el mRNA: asi. 13 1"' x:.sidOn es el extremos del codn y la 3
1
po&lcln e& &u eldremo 3',
22.3.1 Formato en tabla
L<' 11JPreset'll3CiM mas c:omrvnef\4e usada uliiza filas y columnas. a modo de tabla de doblo entr;)(f3.
$CnlarSe dos variafues;
"'
OASE INTF,RJ\1FJ)IA 01-.L COUN)
7
1"
u e
A
o
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u

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e
'"'
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I' 'II:U

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z
uJ
uJ

<
"'
En b \'Crsi6n liblt
1udican d 1 nuclclido y las
el 2". 16
cuadrrcubs. Al 11!\ldir d
m.w.:lo.-tido panx:en 4 tripldcs en
.:ada cu11drlrula. id6n1ioos Cfl sus
lkl11 pnmeros nucll:hdbl.
Finaln'IC'II1c .se india. el
amii'IC)dcido por cad:1
codn.
En u11:1. .,.-l!'t'SIOO algo mft!l scndlla
$e t\ itA La com;pkt.A dc:l
1 ... c006n. 1 u nudecldo se e:leni)C'
b u:quierda. d arrib!{,: d ) t
b hn cad11 eu ricula,
libio liC kltl nminoicidos
codif'tcados.
294 EL C0DtGO
22.3.2 Formato circular
Un modelo ms posblemente ms sencillO y fcil de ulli:Zar, emplea eirtuiOS oooe6nlri005 on 10$ que se
Indican. del cen11o hacia fuem,los 3 nuclelldos 6ef OOdn y el amlno&cido Que eo<Jili(;fl,
22.4 CARACTERSTICAS ESPECFICAS
NutiWddv!l :
blse del codn
Z' OO.sc: cod6n
Y b.'tSC: del COli6n
Aminoi ddos:
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
-
(:abn.. -vl ;nuM> 1 y 3
(Asp, lu)
(lys, AJ'8)

C(ln :t?lll'rc (("ys..
llh .. -<JIolcs(Scr. 'l'hr)
amidns (Asn. Glnt
nromtix> (Pflc. TyrJ
T'P
ntiftJCOS (Leu. Val. 11<:)
Pro
Al
Gly
o.\o:! .,._o ri prv,::tama
fl>m'W;o:;) ,Jc !k III,)IIdoS
1!11111'>.'11111"" RII'M!II: tm!lllllll'oipUII
o:uluti'J u.o.;urwpm
-hl\lkliJUt.
Se pueden analizar etnpleando las represeoladones an1eriores. Son las siguientes:
22.4.1 Codn de i nicio
El codn AUG. el unlco que codifica metionlna, es responsable como cuaiQuer otro oodn de la lnoorporacl6n del
aminocido correspondiente al polipplido. p4:1ro al mismo lien'C)O PQM8 de ac:Cuar de forma
como codn de inicio en lt' de bs (;11$0$ (!Xln mvc:ha!l menos ttecuencia se uS81n oomo iniCio ouos eoctones.. en
ACG, CUG y GUG) Es docir, 1<'1 s.intosis (Se'*' mayOri a de laS protein eomier'lu el'l ul'l cod6n AUG: ellO
explicn que Siempr-e ocupe la CX)Sici6n 1 (IniCial o N-terminal) de o.salquler pollpptldo recin sintetizado. Como se
\'OrA h.lt)OO 306). las (lf'OteiMS eoeariOiicas poseen una me11onlna Ntennlnal. mlentfSS que en procarlotaa se
oomo fotmll-metlonina. Para que AUG acWe oomo codn de lnioo en eucariotas se requiere <PJe tonne parte
de una secuencia especifiCa (seooenaa de Kozak. pg. 306).
22.4.2 Codones de terminacin
Se puede ob6el'var en las representaciones del cdigo gentico que los oodones UAA, UAG y UGA no ooc:Mlcan
aminocido alguno. sino que causan la finaliza<cin de la sfmesis proteica (p,ig 314) Se les donomintt codones de
termlnadn, de paro, codones $top ... o Wmbi6n c:odoncs si n s.enlido.
La PteSenciCI de 3 eodones (je tormil'l<'lcin en un total de 64 ir'ldieatia que, estadistieamet'lte, la alntesla no se
ill:lrgttri.& mas all de unos 20 aminocidos (3.'64 a 1/21 = 4.7'%). SJn embargo, la regln estructlJral de los genes pata
j)n)teinas conuene una frecuencia muCho menor de oodones de terminacin. La regJ6n del ONA entre un
coOn ae Inicio y t.I"'I de terminacin se lama abiec1o de lectura (o,oon nMdinp trame, ORF). Por ojomplo. l);l<r.l
una proteina de masa 60 kOa se reqV$riri;J m;wQQ abierto de locbs<a OQf1 unos 545 codones (masa media de un
residoo aminoc:ic:lo = 110 Da: 60.000 545).
CARACTERISTICAS ESPECIFICAS 297
los de\alles mo!erulares de las interacciones e Wa1son y Crlek (p&g 41} y 13!$ menos f.3"o'Ort\l)lcs (enlaces de
Hoogsteen, pags. 60 y 73) son 106
/
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(1'
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11'
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""'"'.....,_ <lt

<k 1 looJ::"W(n
et nock 6tido (5') \:n J" nuciOOI.OO (3 ') en
d amk od6n (IRNA): d (:odn ( mR.NA):
1\"'>tllt.lh.:lt':
e
G t\\'aiS(tfiCnclc:)
C r'C\JI)(IC;.' Ull ;.l
A
U (Wa1$011Cnck) \ \In wl(l t'OIJn
l.1
A I WaiS(II'ICnclc:)
G
(mis ISCbd) t 1 d11._ \:l)IJn!W'

C t WaiSOnCrick)

G
-"!
u
(ms dbil)
o.l1l;.

.e
=
A ( ms ..SCbd)
E
u e mas dCbil)
l rccont'I.'C ln:s
e
(ms dtbil)
22.4.3.2 Consideraciones prcticas
Todo 'o antttt detetmina que el ;,ntioodn de un tRNA ouede leer uno, dos o ves codones de un mRNA, en tos
cwtes la$ 2 primefas bases son idntic-.3s. veamos ahorl cmo puede calcularw el f'nero de antacodones, el rnero
de m()lei.JIM de I.RNA nece$811as 1)81'8 10$ 61 eodones OOdiliC<'Idores de loG 20 aminocidos. Aunque en tas
otvlas s&a es una cifra impi'Eicisa, desde un pfanteamiento te6rico, basado en ef aptovecha"*!nkl al mlM'IO del
balt\nceo, orlm'\(11'$0 <1ue so fMICID$il.<tn .W mtttOS 31lRNAs para 'leer" todo el cdigo.
298
}
tft).<\to. ,

)tJU..""'

n Je
1
Wtllllo:CidCI
1
,

1


22.4.4 Universalidad
n" dr an.llcu..lo.IL"'\
Kir .llnurwOcidu
2
3

EL COOIGO
p.w hat,p'"""' m ) 1m>11.0M "" L', r '1 A
l llfJClldoJft el ,.. ;:odbn ik' la
fii!O<!ric..tl - tul.lllilro.
n" IV1al de
n toto) d
rl' to.al de
antioodQncs
cod<>n<o
2
,

2

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1 1 l
5 10
1j)
J 9 18

,,
,, 1
Lo; pnme.os e!Uudlos Indicaron que la Gl'ltre todones y amenQ<\ckkl$ ltl'3 ltt mi$M3
lndependientemeo1e del Of9il'll$mo e$bJdiadO. eondueiendo a la atlrmadn de et cdigo gentico es unlvenat',
Actualmente se sabo no es oomple4amente derto; se han encontrado ex.oepciones, auf'IQIR escasa&. en tas
mltooondncws hvmt'IM<'I$ y de otrOJ mamifmos y en ciertas bactenas. Debemos, PUf!$, decir que el gen9tico G$
cui u nive-rsal
AGA. AGO
AUA
UGA poro
paro
M<t
T'J'
Por taBio. el mlsn'C> goodco los procariotas. los ncioos do todos lo6 y ltl$
(1(1 Pal'eOe probatlfe que IIOdas las forma& de vida toniOO un eVQtut1vo oomn,
con un SQt) C'.(dlgO gentiCO, que se ha conservado rooy bien <J lodo lo livgo de l;a ovqb':in Las diterenclas.
pueden hab surgido durame fa eYOiix:in por lr.lnsfc:renc:k'l de4 getl(lma J)tOC&roUoo Of'i9inal, oon cdigo genlioo
universal al rTIIIocondri;,l
Tema 23
Sntesis de protenas: Traduccin
23.1 Caract&ri&lica& de .......................................................................................... _,,, ................. 300
23 1.1 Sei'Tiido de <JV&nce de 1& sinle$i5 l)feie<tl ...................... , .... , ... ,., ... --------- -------.......... ,.,_,_, 300
Z3 1.2 monoeistrOrioo o xlicistrnioo del mRNA .......................................................................... 301
23.1.3 Fases de la traduccin ......................................................................................................................... 302
23.2 previa: &etivaeln de kls amlnoddos en forma de amlnoaell--tftNAs ............................................. 302
23.2.1 Reacciones de amlnoacllad6n ............................................................................................................. 302
23.2.2 Amlnoadi4RNA ..................... . ......... . .... . . . . .. .......... ....... ........... 304
23.2. 2.1 TIP06 da sintetasas _,_,_,,..,_,_, ... ,..,_,_, . ., .,.,_.,, ....... .,.,_,_ -- .. -- ,_,_,_,. -- 304
23.2 2 2 lt'$ $iniCUISt'$ ---.. , _,_,_,,_,_, _, _,_, , ... , , ,,._,_,_, , .... 304
23.2 2.3 ese reeonOOI'l'liento de lOS amii'IOAeiS ()Ot las sinletasas .................. - - 304
23.2.2.4 Mecarusrt"W> oe reconOOI'l'lle.Mo de 109 1RNAs ()Ot aas sinletasas ......................................... 304
23.2.3 Coeoclon de etrores por las slntetasas ............................................................................ 305
23.2.4 Balance energ&lloo de la activacin ..................................................................................................... 307
23.3 Fase 1: lnlclacln .............................................................................................................................................. 307
233. 1 E;peafiCJdaddel pl.IO!odeinicio..... - ,._,_,_,,.,,_,_, 307
23 3.2 dol metionil-tRNA inioodor , . , 308
2333 Pt'$OStvcetiVO$enta lt'lseeleinicio........... ........ ............. .. 309
23.3 3 1 Oi&oci8cin del ribo$Om3 1) . , ......... 309
23.3 3.2 y Cfol mRNA 8 1<'1 S1.1b1.1n.:.IC1d menor dol ti:lo$oma
oomplep do <Paso 2) ... 31 O
23.3 3.3 uni(l(l oe 1a $l.C)ur'lidad mayor: iniCiaOIOI'l (paso 3) ..... - - .... - -- 310
23.3.3.4 ReutiliZaCin de IOslactotes de iniei&Cin ............................................................................ 310
23.3.3.5 Balance energboo de la I"'ICiacin .................................................................................. 310
23.4 Fase 2: elongacin o aJarvamJento de la cadena pepddlca ........................................................................ 311
23 4. 1 Ubicacin del amll'IOOcil-tR.NA en el t;ibo A (pa&O 4) ........................................................... 311
23 4.2 ll'<'nlll<tf)titlaci6n: formaQiOn del cnl;x:c pepCidlc:o (PMO 5)... ---- 313
23 4.3 Transtoeaeln: deSplaza(l'j(!r'lo del tii)C)S(lt'l'la en un codon (paso 6) , _, _,, 313
23."1.4 Repelk:IOn del ciClo <le eklngaCiOI"' 4, 5 y 6) ............................................. ............. ............. 314
23.5 Fase 3: terminacin ......................................................................................................................................... 314
23 5.1 Unin del faaor de iberaan paso 7) ............ ................................................................................. 314
23.5.2 Hidrlisis del peptldlltRNA (paso 8) .................................................................................................... 315
2353 Oisoci<tein (peso9) ,, ,,,, ,,,, ,,,,, .............................................. ................. 315
23.6 Eneorgl!Uea de l a sintesis de protei nas ...................................................... - ....... .......................................... 31$
23.7 l nhlbldores de l8 traduccin ........................................................................................................................... 316
23.8 Regulacin de l8 sfnte-sls proteica: Hlveles de control ................................................................................ 318
23.8.1 ConiTOI delb'ansporte de mRNA ...................................................................................... , ...... ,.,_,_,_ 318
23.8.2 ConiTOI de la capacidad y frecuencia de tr8duccl6n de lOs mRNAs .......... ..................... - - .... 319
23.8.2 1 E',etnPIO 1 Cc)(ll.r()l de 1<'1 $in''"' de terrilin& CIQr bloqueo del mRAA ................................ 319
23.8.2. 2 EjemplO 2. Regulae.otlcse la sinlesis de nemoglobint'l por de
un factor de Iniciacin .................................................... - - .,_ 32'0
300 SIHTESIS DE PROTEiNAS: TRADUCCIN
23.1 CARACTERSTICAS DE LA TRADUCCIN
La traduccin consiste en la slntesis de las protelnas mediante la unin de aminodd06 segUn el ord&n
por la secuencia de oocle6tldos del mRNA y el cdigo gentoo. Se completa asf el 'dogma centrar de
transmi516n de la nformadn gentica a parti' del ONA genmioo original 1 y 244).
Puesto que este prooeso es esencat*nente Igual en tipo de organismos {salvo pequel'las diferencias en 106
mecaniSmos y componentn nuestro e:stvdio se centra en oucao4as. aludiendo a procariotas cuando to
requietan sus aspecto6 particulares en faVQr de una mejor comprensin del prcx:e10 en IGrminos moloc:\lfaru, Se
plantea en escrec:ha rela<:in oon el cdigo gcnlioo <tema 22) y :so oomplol<lrll con modificaciones POStracb:cionales
(lema, 24), para el e;etclclo de su tuneiOn: nnalmente, se analizarn lOs de degradaeiOII, de
f()f'l"l'\8 ai'IMOga a 10 ya tradicional para olnls blomolc:utas (gfl}cldos y lfpklos. prlndpalmente). Con todo elo se ci&rran
los dos grandes niveles. bioslnlesls y degradacin, de' met.aboismo proteico, Este enfoque es impfe$clndible hoy dfa-
para oonoc:er el funcionamiento normal y patolgico de las protefnas (bctse de la:s molec:ulivw, 28)
y para abordar en ef futuro los rvanoes en 1;11 naciente ProtEKimica (pg. 217) con vist3S itl y len:tp6vliea.
Desde vn pvnto de vista biocluimloo, la traduc:ci6n se catac:terizill por la gran V<1ricd;)d Cfo protoinas 6ormt'dtt$. su
elevado co&te energlicO (consvmt un 81).90'"4 de enwgi3 de blosinteSb) y ta necesdad de una regulaCin muy
estroc:M en roSC)uesla a las celulares y al Mmo de degradac:IOn prolelc:a. Es. posiblemente. el ms
c:Qmpiep de lOS j)t()Oe'SOS de slntesls, en el que participa ._... mayor nmero de diferentes. Las
principales son:
un IRHA especial para 1:a lnldac:On (lANA! en proc::ario&as, I.RNA.,. en eucariotas; pg. 308)..
3t tipos de lANAs pot\8deltes de amlnoac:ldos. en t.onna de aminoac:II-IRNAs. En realidad, ste es el nmero
minimo terieaMet'\te (pgs. 298 y 304-305). en las clvlas suele h8bef vn nUmero superiot de tRNAs
pot ejemplo, 40 es una cifra frecuente y en la cepa K12 de E. coli se 1\arn cncontr3do34 tRNA$,
Albosomas, fOfiTiaOos per numqtQSO$ rANA$ y protolmn (p.\g.. 80).
Un mRNA, de $fK:veACi3 di$1inte. cada sintetizado.
Faelores proteiCO$ de RciO, y de la slntesls.
En e.xls.en rrAwes de estoe unos 20.000 riboSOI"'''aS, 100.000 molku!as de enzimas y
tactotes proteloos, 200.000 de tRNA&, e4c. Se reqviere, ademlls. ..corvo {pool) 00 mtnos 20 aminoac::idos, ATP,
enzimas amlnoaeil-sintelasas para ac:frvar 105 aminocidO$. GTP ll0m grupo$ r&doctotes, ones (Mg ., y
K\ enzimas avxlllares, etc. Intervienen, dhc;l<'l o indirec&amenLo, eati todas las esttucwms SIAX:elulares (nc:leo,
0o1optasrna. atgnutos y mef'l'll)f'anas), A PNar de elo. et es muy rApido: en veloddad de ttacfuodn
es de LI"'IS 20 anW!oeiOOs por t.egundo. mlellCf*S Qt.te en eucariotas es ms reducida, se incorporan de 2 a 4
amlnoddos por segundo,
23.1.1 Sentido de avance de la sntesis proteica
El primet aspecto b900. el sentiOO en el Qve se teali:Zf!lla slntesls. puede seJ oonslderado desde \.1'\ doble punto
de ':Sta: 1a secuencia nocleo61Jica del mRNA se l&e de s a 3'. m1enb'8s <JJ8 ta secuencia an*\oac:ldlca del polipptido
se inCorpora deSGa f.ll e.xttf!ff'IO amlno hac:ia el c:cwt>oxJo, Esto \ilt1mo $oC (!lom()Stt por primera vez modiat\te lneubae:iM
de (prec:ursote& de eritroci!o$ quo hemoglObina) con amlnoddos mateados. i8
radlacdvidad en la globina aislal:t3 In!$ distinlO$ tiempos de marcaje.
'

,.
'

!'

Loul lll!Ci\'111 6d INfl."ffJC en 111 proldl!ll
complclilll litmM.!II:
Al61udllf 111 ptoM:ina i::OII'Iflk'a a <hSii111o!JS IJC:fllp(.'S lfal> haber aAIIdido
Ull n\fll(':llljo, f;II) bo J'IIIMC \k )fl)ICIM que
se 111t1 &e alllldi elominolc!do m111'1:';ld(l:
.... Ut4o f'IU6.o
... ..,
m11eillr.l 1 :
mu;S m;mde !lo A
inc\lbldn eon uft
Ul'llllllitcido tnan..OO
--"
r..to.1111011'\'ll.lad
r.:rio1daal
n iR'ruo Nrboxllo
de lll proltbw.
"'
ron el 1ic:mpo. la
klod $e
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I:IICOO!rtllldo
e el de b.

,:. tubru 111 pro&C"inll
' romrlct:l.
.

--= =
.. dl!O-
.. -
Cooc:tus.iOO, la
PQt c:uremo t.'"'ermm11l, )' l.:n umincQ.:-.1.,...:
Yllnllillldiendu G.lexb'l:mu Cltnninal dd prinn
anunOOei40 '1 dtl pohl't:ri.OO OIICKI'Ifc .
Es deo: ir, Clllb :u11ill0ioeido> incorporn unicndclou
pupu 1>mi110 al
CARACTERI STICAS DE LA TRADUCCIN 301
23.1.2 Carcter monocistrnico o policistrnico del mRNA
Un en retaeiOI'I con 13 traouedOtl es que Ul\ mRNA pueae <181 1ug111 a la sinresis de un
polippti<IO o de E.$blpropled9d se define mediante el conoeplo de cistrn. que 001'1\'iene distinguir del de gen,
sunque etl<'tn rtH8eiot'l8dO$ y ambos pueoen considerarse una unidad" de fur.eionaliead ger.etiea.
Los mRNAs tnonoc::l:sttl'lleos. pteSentes en procarlotas y dpicos ele eucariotas. ooddlcan UJI soro polp6pl'do. Ello
que 1a ttaducx:ln se IniCia en un solo s!lfo del mRNA. el cod6n de ncio, para f.nalzar en otro sitio. un cocln
de termina001.
Los mRNAs poUelstrl'l.lcos. que slo apare<:en en y virus. codifican vtmos polipptldos. por lo que la
traduccin se inicia (Simu!lilnM"*'lO o no) en v.-ri()$ SitiO$, en variO$ (:O():>'It$ de inioo. l)(lr;) fil'lo'lfiz,r en tefl!))$
oodones de lerminacin

5' tli> 1r.Jducid11l .,.
mRNA procaritico )
l' no tn.cluc:iW

endona pol1pcp1idics
-

, ,...---.,., (!>. e varias <adenas poli pc.-,tidicas
-
N
1 mRNA )
... _ .. IJM
3'
'lll f'l.l'li( ,, )

'
e un.1 I)Oiipeplldica
El OOf\Ce'I)IO de gen (pag. 244) eorr&Sponcse 3 una regitl wdil'c:<mte dc:ll ONA gen6mico, re&QOn&<lble de un
produCio gtco. sea s!e ANA (por transcnpcln y madiXacln) o proteina (por madUrtleiO. lrMuctiOn y
modificacin postraduooonal). En el caso de mRNAs monoclstrnicos. et oonoopto ele eiSttn es praetieatnente
indi5tinguible del de gen la diferencia importante surge oo los genes que se transaiben dando un mRNA policisttrieo
(y, IXl' tan&o. slo il'oct.;t procariotas),
B eotloepto de elstrn. en forma se dilerer.eia. a) pot ser 1'1'1&$ 01 de 94'0. al considerar
oomo reorp tanto a! DNA oomo al RNA (ambos dan lugar a un ptodUCIO gntee)). y D) ()()f w al mismo
tiempo ms estncto. pUes se define como la regin del genoma (ONA) o del mRNA que eoclll'iea un Clf(lduCIO Qt1<0
(11'1100. se $()lo os1o Ultimo caso. POt lo que I.Ml eistrn es la de mRNA que eocllfica
una moi6M de polil)t!pti(SO, Recvrde$e we la def'inic:ibn mk amplia de gen a induir casos lfmlte oomo
()()I'ISecuenc:ia de 13 maaur&ein posttanseripciol'lal (p&g, 276); de fQfm3 $imitar ocurro on el Cii50 nos ocupa, el
mRNA oon uM ul'lid&<S de que ooeiliea v3rios prOduciOs uwnbin
oomo opern) Por k) lallto. en este caso se trata ele un gen poNcistrnico.
302
SiNTESIS DE PROTEiNAS: TRADUCCIN
23.1.3 Fases de la traduccin
1 Resumen de la traduccin
(El aa actJvacin
Dentro del proceso de ttaduoeion
()ufldetl distinguir vMas o tases: uM
previa o de actlvaeiOn de lOS
pteeursores y tres tlien diferenciadas.
lnJelae&n, elongacin y terml nadn, bajo
lA'I cnlerio anlogo al &eguido para la
replicacin y la ltanscripcin (tema& 12 y
19) la maduracin
con&idert'd<' voc:fl como s rns.e. $0 tr&1<'
hOy di& ae modo lndepencrrenle (tema 24).

aa- tRNA -=:::::::._

\111 p.!llpl'piiiJ.-1 dt },;
IIC'n'SIIll
N le:nl.c"
iditos
complejo de iniciacin
terminacin
polipf plido = (aa)\.
23.2 FASE PREVIA: ACTIVACIN DE LOS AMINOCIDOS EN FORMA
DE AMINOACIL-tRNAs
La unlon a ceda tRNA de1 aminocido rorrecto (el que, odigo gentioo, e&Ui <:Odificaclo por el oodn
del anueodn que P06G8 G$G tRNA) es posibloment., J>SO mts critico de 1<1 g6nic<t Si no
se haoe de fOf'fl'\3 QOtrect<'. de $Onlido tO<JO 01 c:;Qdigo gentiCO. Esa uniOn OClJtfe en ee Cil0$01 oomo e1
retiO del ptOOf!'SO de trtlduociOn, y supone la ectlvacin de los amlnocldos (en fonna de amlnoaciHRNAs) para podef
tormar enlaces pel)ldoos. De este forma. la fase de accivadn defne el papel coneelor del tRNA con los aminocidos
en la traoucon.
"

'-='- \. '=! ._ aa
1) atlfvacln MJ>
*
2) unin
ominoociltRNA
23.2.1 Reacciones de aminoacilacin
u. lnQn <:kll <:on el tRNA se vetlb mediante dOS reatC:IClOf!S. ambas catallzadas por W'!a misma
(en un oetmo acll'\10 o en dos centros prximos). Esta enzima es una de las aminoacil-tRNA sinteta&a&
sintebl9M o aaRSs).
1 Resumen de las reacciones J
F.IITUN '" J'illktluOl
amloollc::ido-tRNA lill)lil eH: 6.1 l.x)
rta(d00: acth11d6n dtlmlBDi<'id(l

R.CII(Nil:).COOII AMPPt .- l:Mil"lll 2..... i;.ti1JII-1\MP.('Q.('"II(}o:H#k + PP
1
..\V"' .. )2,1 Ulmo!
.. iH IAT'Pl

el ll&:nIM<> Jd A '1'?. iJIC hid"*-'
rv, -
mo:rtiiNAno <f11<1
IK!idu ... llC'IIIro ..cti'O
:ocnbao> reatcklfltJ
C'l<Dttloo\11$1.'
FASE PREVIA: ACTIVACIN DE LOS AMINOCIDOS EH FORMA OE AMINOACIL-TRHAS
rf1to:('l(ln: unl(ln (Oft ti IR'\
\tP<O-< II(NH.!)K t l kN\.(111
l;,nhn_._.-,..\ \il'i:rvnn
d 11"""' ""''-'' " "'"nnm(Y\"
el ooooo:.,..,-do IR"-"___.)
llt i\A .. ) .("Q.(,_<II (N1-1
1
)--It -t i\MI' .. ln1omll
\1
una futwU
tk ;aiGJ <kl;.mo._oOO
303

El ptoduCio final de 1a doble reecaOO es un aml noaciltRHA. oon un enlace ster en!re et grupo OH 3' terminal 0e1
tRNA y el grupo cafboxiiO del amnoilciOO (v+ase pg. 71 pera la fonna de nombral10). En el caso de las amlnoadl-tRNA
slntetasas de Clase 1 (pg. 304). el cstet se fonna inic!M'nente sobre el grupo OH 2', pero luego se convief'te at
I&metO 3',
1 Detalle de l$5 reaociones J
amirwltdcto
.... t ....
+
z
""'
... ,.,,,\.
..,,....,,


:
o
..
z
-Q
z
::>
arnitl(;u:-il \ \11 ou11 L6
hminoJcil
4
adtBilatoJ
o

tnGJI:
.l.(j .... J1.1.l!.4*"2'il . jb_t, U'mctl
.\'
d"11R'\

ai..""C"hu:.-cml"\>
OOJ:I_HWho* .....
aminoadl)'.r{' \
- aroirw:.diIH' \
3G4 SINTESJS DE PROTENAS: TRADUCCION
23.2.2 Aminoacil-tRNA slntetasas
23.2.2.1 Tipos de sintotasas
So Mn n"'l..lib.Jcl de 811'1"11noaotlltRNA slnteutsas de bact.etlas, plat'IW y animates. cuya rRa$3 O$Cila entte
86 y 181 en alg!,II'IO$ se nan podido secuene:iet y CriS131iuw para e$1udiar su ttlt\Jctur), T<os las sinlctarsas
catalizan de km\a similar'' <Se 3Ctlv&el6n del aminOCido oon AMP, oero difen<:i3$ tw\ 1<1
rNCOn. 1& <le ul'lin al tRNA. unas unen el amlnoddo al grupo l'licJtOJtiiO 2' y Otras 31 3', siel"nf))'6 del
t:<imo AI'Ciolido del tRHA (p&g. 303). oe acueroo con y tamblo ton diferencias eslruCWn'lles,. se dasmean tas
sinteta!la!l en dos grupos <JenOm11\8doe, respecttvamente, claN 1 y clase lL
dpode
grupo OH transes-ter iflc.acin estructura aml noddos que r econocen
.... del tRNA postoOOr da la
<J.& dase 1 2'
es neceaarla
ta mayotfa Atg Cys Gln G!u Ue leu Met Trp TyrVtiA
"'""""'""''"
(10, 10!1 mas grandes y polares}
de clase 11
:r
no &e roqoiefe
lamsyoria Ala Asn Asp Gty His L'f$ Pne Pro S. Tnr
dimric:as ( lO. los mlls poquoi\Os e
23.2.2.2 Especificidad de las aminoacil-tRNA sintetasas
Ya &e ha explicado (l)9. 296} cmo la hipto$1$ del permito que \ll'l minimo (te 31 tRNA$ reoot\OZCifln
b$ 61 ooOone$ que (X)(ific;an bs 20 nn*'OcidO$. se forman, pues, l2 atl'llooaciHRNAs diferentes (debe al\adlrse un
tRNA e&POci5c:o l);)r3\3ltiQOr)(lta(:iOn de la metlonlna de lnk:ladn). Cada ooo de stos h1eracdonar, a travs de &u
((In el oooon del mRNA que codlftca el aml1oacldo correspondiente. En muc:ho& casos. un mi&mo tRNA
puede it'lt&tacdonar con vaooe codones 'II'IIITI06, gracWI& al balanoeo. Pot pal'\8, el grupo de ooc:fion9& (4 6 6) de
aminocidos requiere m& de un tRNA; stos se lclfna,n tRNAs si nnimos e> isoacepte>res (p&g. 71),
Este papel adaplador de bs tRNA$ en!Tc &a inforr'rin genliC:a ctel 1'1\RNA (twele61ldos) y la secuencia del
pollppeldo (aminoCidos) slo puede de&empef\arse gracias a ll' t$1)e(:il'icil:lad de las POt ambos sustratos., el
tRNA y el amnoQOO. Cada aminoaciltRNA sintel.3$tt reootlOOe un UniCO (del que ttma el nomble) y
lodo& 106 tRNA& WYQS codificara ese mismo (OO<Iones sinnimos e.n el o6diQO
gen'lico). Ot ((In *existen en la clula 20 aaRSs distintas. 8 papel de las sinleta&as es. por tanto. esencial
p;ar011 ltl fidelid8CS de la SinteSis ptOtelea '/constituye la esencia del cdigo gentioo, el problema cel'flml de ltt 1!1'1duocin;
pOI' eno. se suele considerar que las aaRSs representan un s.gundo cdigo gonitic:o.
23.2.2.3
Mecanismo de reconocimiento de los aminocidos por las sintetasas
La meraCCIOt'l eSQOC:itiea de SOlo aminocido oon cada sintetasa es anloga al reoonocirento de cualqoies oliO
wsttato por la enz.ma OOtr9$pondionlo. C;)(ta encaj a et1 un de(ermlnadO lugar del ceniJ'O acovo de le
slntetasa, gracias a interaocionn por pueMOs de Plidtgeno. electrostticas e hldrofblcas. Slo se ri'n aquell06
aminoCido$ oon un nUmero sufiCiente de lnteracdones twvorables.
23.2.2.4
Mecanismo de reconocimiento de los tRNAs por las si ntetasas
La capacidad de una sintetasa, espocific<'l 1*11 un niCO am!noAcldo, para reconocer varios tRNAs, '/al mismo
tiempo rechazar otros, depende del tnOdO como s!M inlerecclonan con el centro acclvo de la aaRS. Este
reoonocimien!Q ti$ cx:tnPiej() y tS!erente para cada pareja tRNA sinteeasa. implicando no slo las variacione$
cS1ructuraleS pattlculares de cada enzima (M especial, segUn que settn do el3se 1 o 11), sino tatrlbin la Interaccin con
divtf'StlS zonas de la molcula de tRNA.
L11 p.u1i.::ulllridad de ea.b ltl!Ui.XUIII !k tKNA. quo:
dcpcJNio: de"" tlmlfltep
se pue<lc C$Quemaci1:1U' dd <"lgUJC!Ille modo:
rtpoQN lk la
muiCcula c-.)tjn tnU>y
cmn.: )M
tRNM '!
poi cllu DI) Jl t\'CII Pllfl
di.criminarlni
I'CpiiJC!'
por la nnRS
rC!iiiOOCl>
en C'ada tRNA
11
!(Id)' tcxl t R '"'"'
11Dt icud6o
amll'loaCiltR!'o"X

....
1M principalt;f punUl" de
e.c.Uin en el bf1170
.oepc(lr de ttl\iMkido (c;tremo l'i
y cu d brazo o.kl a.wkodtl
illcluyo:..t& al propl&
Mudlu de b, <"intctuaJ de la d&w: 1
el bliilel)dCI UIIX>OIJ611.
mucha< de la c:IIIS.. ' 11 rttOnOCUI s.lo
d bW'.l'l accpllw. r('O()n(I(;Cn
hay rcq-..lcrcn
adcmir. <11111$ s.co:uend.u y
C$INCiuralcs dd t RNA.
FASE 1: INICIAC+ON
307
Ejemplo 2. Con e.l mismo caso anterior, si se ha legado a tormar errneamente en el SibO &eiNO de
lleRS. se percibe el enot y se hidroliza el anhidrido entre Val y AMP. Es probable que OOOOCiOn ele
ol $ilio hldrottico 00 f:lflzimil Oldmile et VaiAMP (ncorrecto' pero e11.c1uye o reCflaza. pot lmpedirnettto
lleAMP {correcto, ele mayor tamai'lo).
Ejemplo 3. La enZima vabl-tRNA Sintetasa (Va!RS) Sil'tle P<lf1l oetnostrar lt1 cop.a.ci(IOO de coueg.r orrores entre d06
am1noitcidos cuyo tamaf\o es casi IdntiCO por tener cadenas l<'ttetates. muy s.mill\res eoncretamente. v., y Thr VaiRS
reChaZa a Thr por una comblnaclon de dos mecanismos. El een1ro actiVo oe t$ hidrofbiCO e inloraoeionil
ms favorablemente oon Val. de cadena tatetal ms hldrofblca Por el conllatio, et oe-nMo activo oe hiCI!Oiis$ es
hidrofilico e interaccaona mejor oon Thr, ms potar. Como resultado. la Thr uruda por error a se hief(Qiizara
preferentemente. mientras Que Val unida correctamente a IR NA '41 se conserva.
ti *-d.!I.,U!"('II(III
do.' 1\r c.. ;nul;u 111 d:l t "ltt:U
1
<k
b pr-..ro. pcolar,eomd
bolwo h1dmiD.oo mk fu t11t.le
..
Mh
(ll't_n_,.
u/ ,0
A pesar de todos es.os meeau'III!I'I'IOS de OOtteoeion. 18 tasa de OHOr de lil sintoJis prote.cil es mucho mayor qJe la
de, pot ejemplo, la replicacltl (respecclvamence. ooo por cads 10 atnit'l()6(:i00$ y uno POf nvclebdos).
E6t0 es permisible puesto que el error en una protelna desapatece al oegtadarse esta y no l)a$<'1 Murl's gei'IG;ra+ciones
y supone un gr-ado de suficien1c en 1& pr6ctieo, :;in mptioor oo eMf96tico ex00$IVO
23.1.1 Balance energtico de la activacin
El pri m(11' p.Jstet energ6tico Que se debe oonsiderar en la ttaduoclon es el neeesario l);)t& la formacin de
cwninoaciHRNAs I)<W"a todos los anwtOOCidros que componen la protefna. Como se l'lll (Pig 302), en cada
d8 aminoaci.<l<:in se hidrollzan d06 enlaces fosfato de arta el'lergia (ATP AMP -+- PP y PP, - 2 P,) para
formar el enl<tce ftter e:nlre aminoilcido y tRNA.
No se tei'IOIA en eue.\(8 et globlll, <M.Ifl<lue evidentemente es SJgnlbli\'0 en ta situacin real ert ltt
clula, et gasto energ!lc:o desperdiCiado cada vez que un <'JminOOOIOO se rncorpora incorreaamente (p&g. 306); cao:a
error supone dos enlaces fosfato. al haberse slnteliZaoo oo aatRNA intitil. Qo.Mt es I'Mdro!izado durante la OOeocion por
la sintetasa
23.2 FASE 1: INICIACIN
Esta etapa, preVIa a la formaciOn del j'lrimer PCPtidico. detemw1a normalmente la velocidad gkal (le 1(1
s1nt%i&. Tran&OJITe de forma semejante en proeariQias y eucariOt;:s, s<'Jivo por la Identidad de las proteloas lmplicadss,
por lo Que lil el(plicacin se oentrar en e<s!OS (dllmoe. Tanto en esta como en 1<'15 do olong<'on y tefmlniiCin es
caradefi!lbC8 18 ir'ltel\leneitl ele comptojos f0tf1\iltd06 por l<l& 3 molQ.Ms prinCipales - IRNAs. riDOSOtr\3$ (completo$ o
una sola subunldad) y mANAs-. <le Olft)S f;)t*)ro:; proteiCO$, coonzimas.. rones. ele. Para laolilar 1:1 de$Cripcrn
did#lcbetl """ fttscs. $In exlsur c:onsenso al rMpecco, se nace refet"fH'!Ci8 (1 dicho$ comploJOS en tunc10n del
n(lmcro de moloolas principales Q\.19 condenen: comptefos binarios (dOS molculils) y (tres mol+Culas).
23.2.1 Especificidad del punto de inicio
1.;) trOOvcan nunca <:Of'11161'1z.a por et el!.1remo s del mRNA ($l(lf cito, se ha venido repre:senl8ndo u\a

lider 5' no tradvcida'. por ejemplo en pg. 301) Slo un <:odOn AUG (pag.. 294). sltvado intemamei\te en I;J
a+et.Ua como punto de ncio. para lo cual neceSI+1a ser como tal por el nbosoma y el IRNA
inieiacSot'.
308
SINTE$1$ DE PROTEiNAS: TRADUCCtON
En pr ocariotas. cada cis.trn de un mRNA (pg 301) posee ul\3 ll3mada ctt Shlne-Da)garno (SO), que
interaociona con la pequetla del tibosoma, de!Wendo la eleccin como codn de Hcio de
un AUG Sllu<'OO unO$ 10 nt CQ<ente abajo.
proe<Jr iolas


.k s., 12 n.;:uo pulll'l
SO - -
'"'""" <"a >mpltl...,.niM'ill '1
IMiwakl'll ( ri(a tilo
,.-.dinl!>l ddrlt.'i f\ 16S

euc-.arloCa&

l'
En eucarlotas. mRNA es casi $iempre monoclsb'nlco (pg. 301), por lo que tiene un &Oio codn de inicio. No
existe un.- &Ofllll eS()edal que una el mANA a la sublridad mayor del ribo&oma. sino quo _, o$C)O(ii!Cidad se estaOAece a
traY'(:$ <le un tRNA especial, iniciador. la unin do 6:ste fll mRNA. et1 el entorno proporcionado por la 9Alunidad menor
dol rit>Q$0ma. que el codn AUG forme parte <:te 1{1 secuencia de Kotak, y da lugar a un lemaOO"
mANA : (i)O$Qma : IRNAi lllll (como se ver de&pus. el tRNA porticipl' rtalrnente oomo meUonll-tANA asociado al
faaor eiF-2 y a GTP).
23.3.2 Formacin del metionil-tRNA Iniciador
lo5 cooone:s AUG en lOs que se Inicia ta traduccin (residuo Met del extteMO N-tennlnal del pollpp6do) &en
reconodO$ pot ot1 tRNA lnlc:ador. llameclo tRNA'-' (en te le SIJele llamar tRNAr-. pero usaremos el
primer nombre de tonna gentica). los codonos AUG que eorresponden .-Merna& en la cadena
pelipeltidiea lr'lteracdonan con un tAHA disnto. we se llama !limpletnente IRNA . En ambos casos el tRNA participa
como meclonil-tRNAw.:. (etapa pt'e'lia de aC1ivadon del anWiod<lo. pg. 302).
La Incorporacin de internA OOI'I'esponde a la etapa de elongacin, y lieno 1t1gv <Sct la misma Sorma
que otros aminoacidos: la de meti<lt*\tl Ntetmlnal ocurre, &in embargo, dlnnt. la y oe torma llgemmente
diferente en proc.anot8& y eucao1as
En (y en m.itocondt las y eloroplastO& eucaritioosl se rorm& Me4-IRNA""'. que llego e& modificado
con un 9"Uill lorn'MO en el a-emlno de la mctioninf. Es deCir, hay aml hOaell.eln y fonnllaeln. para irn;orpomr
N4ormll-meclonina (fMet) al inicio de 111 ttaduocln. Como oon&eOJEineia, todas lcls PmteinM teei6n Sinleliladas
oomlenzan DQf formilmeiJQflina. Debe resa!tarse que no M 1.11!!1ua fMcl como sustrato, ni wnpoco un IMeHRNA,,..., Esta
etapa un '*"'e"o to.-e adicional pera la tnlduoci6n (que no se al haoer el batanee
general. 315}: oonque ta reaccin no consume eoergla <froC1amente, si lo haoe te. tegeneracin del ooenzi!T'I<I
bmi!!.o'rahillrofota!O.
procariotas
mitocondas y cloroplastos eucarlticos

+
J.
; -U+
:.
0
R " " " M91RS t
eucariotas
FASE 1: INICIACION 309
En ra tradtiCQOn citoolasm31ie3 de eucariotas no llc:ly Ot fOrmilmetionin;a, $010 st re<)vltre 1<1
ami noacilacin oora incorporar metionina <'! inicio de 1.1 sin1osis. Por l;lnto, los pOiijl)c)tido& formados eontienen
en su extremo Ntetmin(!ll ,
23.3.3 Pasos sucesivos en la tas de Inicio
En e&tot; P<I&O&. Mi oomo on la& ft\114}$ de ctong..cin y I Otmif'I(J(';in, intONicnen unil Mtle
de S)t(lteinM lam8CS3s gen6riearnenre pr oteico! de inielaeiOI'l , e1009f1Ci01\ o tetmii'I&Cin. LOS
i nieiaciOn se nombran con la rafz IF en procarlotas, eiF en eucatiotas y en gernetal (e)IF. A pa11ir de este momen1o. sOlo
se describe la tradUccin en euc:ano4as: para faciilar su segUimiento, &e e51ablecer l.Wia div;sin en 9 pasos sucesivos:
3 en la ir'liclaocln, 3 en la elongacin y 3 en la terminacin.
Resumlencto, el de la traduccin requiere la unin del tRNA al ood6n de inldo AUG en el mRNA. en el
entomo del siUo Po pepddllo del nbosoma. No Intervienen en e&ta fase el codn anejo (corrienle abajo) at AUG ni los
sitios A o aminoacikl y E o de (6)(it) del ribo&Om<t (pjg, 311).
23.3.3.1 Disociacin del ribosoma (paso 1)
Debe Indicarse que las dos sub\ndade5 del ribosoma {40$ y 60S en 6utariotas). ""eb:zacla<s en el rcleo y
exponedas a travs de los poros nudeares al citosol. se ensamblan en sto formando ol rix>$oma 80S (vase pg 80
para detales de e51ructura y composicin). Para su inteMtnCI6n en la ltaduccin. el ribosoma dobo disooiarse en sus
dos &Ubunldade& para permitll'. en la& subelapa5 siguientes. a;. unin de tRNA y mANA y el lnioo de 101
1
fin dt la
1;110(111 di: i-.1(1;
cumitnz; 1:.

prUtdc:t
la unocin d.: .:IFJ.
cJt>.4(; y dt>.(; Pf'"'l>:ll
.. (".uribil) ,..,.. r(lll'lmtO(Jnal
e1t wlbun..ksdd
ritwtwm1. lilA' h.:l-qut
'-
K
... ,;v
-
t.os t.:"'rc.;
>11l11 S' dtl mRNA )
oon consumo <k ,HP.
lA lollbunu,li,J
pc.oquda dd
mTGTr- \1 (,
P'
r.-'
V
....-'
A).
H
lliC"Ud..lr,iMI,:NitNA
1
M"'
' " 00'11()111 lflll
dF:.
'-.._que 1:unbin uno: G Tr
'
FASE 2: ELONGACIOH 0 ALARGAMIENTO DE t..A CADENA PEPTiOICA
311
23.4 FASE 2: ELONGACIQN O ALARGAMIENTO DE LA CADENA PEPTDICA
Esta tase InCluye oesoe la adan del segundo M$1.3 et UlliMO. Se 1181& oe oo proceso ciCIIOo que se
repite t.anas veces como amnOO<:ido$ se ncorwcn C<'ldtl 001'1$13 oe 3 pasos. l.Cllcadn 001 nuevo aatRNA en el
Sitio A ael ribosoma. f()t11\l(;i(ln del peocidiOO y translocaclon <!el peptld!HRNA al slllo P. En ellOs intervtenen tres
factores proteiooo& <:itOQiasmt\IX:o& o f:lctores de e&ongaeln: eEF-1a. eEF1ftr y eEF-2 (los faccores pnx.anlioos
oorresponcienl.e&. EF-Tu, EF T$ y EFG $Oin Similares y &eb.ian de la misma terma: EF Tu es la proteina ms abunclanle
en la clula d8 E. coft)
Debe rt$8111arse que la etapa de elongaoOn no posee la capacidad de diferenoar el aminokido we se if'I(;Ori)Ofa,
s1no <Mt es C$DOCifi(;;) eon respecto al anlloodn del aa-tRNA; la ll"'CCrporacl6n de amii'IO<:ido correcto
v.ene J)Or 13 actuaei61'1 previa ele la &!Yiinoeci-IRHA dlran4e la etapa de activa<:iOn. Esto &e
demostr al Mcer reaccionar Cys-tRNAc.. con Ndruro de nlquel para -.,;n;w ej grupo tiol de Cys y obtonor
Ah.'l lRNAo.... s.1e. tklnque sgue recoooclencJO lOs antiCodones oorrespondien4e5 a Cys seg(in ol oc>digo. 1;,
inOOfJX)f'8ci6n de Ala oo la& posiC1one& donde el po!ip6ptido dcbori(l tener CV$.
23.4.1 Ubicacin del aminoacil-tRNA en el sitio A (paso 4)
Tm$ in0()r'p(')11:1rse el Met-tRNA al sluo P del rlbosoma en el compleJO de inttiaon 80S. QVedil ;,1(in v0:1tio-' 5'1io A
en el se prOCJuelr& te lnOOI'PC)t'SoiOn de .. nuevo ilf"!ii'IO<:ido (en la primora vUI'!III'I dl'!l <.:ido de el
arnnoiK:ido n 2). ll'Of del antie<6n de su aatRNA 001'1 el oodn <.:orrespondleole del mRNA.
En d nbosoma hay
3 l ugar:;!> donde puede
unirse un tRN.'-\
n.g.l:r
I;PA. k-idQ de 5' :1 3'

sitJO E
uxu. salida)
Silill P
(p...'jl(idilll)
ri bllSOma
s..itio A
lllllli.Jl(XtCdO)
S' '''''''''''''''''' 3'
mRNA
La entraca de lodos los &ueeslvos aatRNA en el &lo A requiere que estn unicbs al factor de eEF-1a
que, s..nllarmente a lo ya e51udlado para el factor oe inie1aci0n eiF-2. une GTP y llene activdad GTPasa latente (la
eslrUctvr<J de los ciF2, eEF l(l y (!F2 es simil3r en1re si y a 13 de olms prQteinos G, 10 sugiere su
()n)Ced(lnei3 do vn<l J)tO(eiM anees-t31 OOti'IUI'I.} De hect'IO, la f{)(m8 habiWal in vivo de casi todos lOS aaIRNA$ e$ oomo
oomplejo lerMriO aatRNA: eEF Ia: GTP. 5Qf\ es&os los que difu'*" al Sitio A vaeio del ritlOeoma y
teoonocen sllios <se unin aooeuaoos. SI el apareamlenlo entte anliCOdOn y ccxton es eoeCio. et
se ul)iea Cle fOrma estable en el ribosoma. lo que provoca cambiOs que estmulan 1a aeUvid&O GTPasa
de eEF Ia. La lorma GOP de eEF1cl no posee aflnldacs pot el rlbosoma, liberndose y asi el &atRNA unido
al sitio A, dispuesto para las SJgUJentes.
De forma anloga a lo que ocurre ron el faaor e inic:ia(;in eiF-2 (pg. 310), se reg.enera la forma eEF-1u : GTP
pot intercambio de nocletidos me6ado POI' un nuevo factor de elongaon. eEF-1f'r. 69 produce. pues, el cuarro gasto
(tncrgtieo de ta ttac).CCiOt'l (uf'lll molO!Aa de ATP {)01' cada aminoacado il'corporlld(>). Qu&d3 disooniblc
oora ii'Corporar vn nvcvo t'mino.iodo
DeDe ii'IOiearse Que eEF1u interacciona con euatquier a.MRNA O()l'l e1 iniCiador, MtltRNA/' .. ', Que $C
distingue de lOs restantbs IRNAs en la esltiJCiuta sec:IM'K!atia del tallo aoepor. De este moclo, la ei0r'lg:.ei6n. el
tRNA nciador no Werviene en la 1noorporaci6n de Met Internas. Esla espeafld<lad, junto con la ya deS(;rlta en la fase
de rocio. mantaenen la dva!idOO de IRNAs para Mel.
312
'
UBICA-
CIN
8
TRANS
pfiPTI ..
DA CI N
8
ntAN$-
LOCA-
CI N
SlNTESI$ De PROTEiNAS: TRADUCCIN
t ~ d r R X
llWIYOf; (ft ciiCIIfiQillli
que h ei 1RNA 28S)
+-----
lANAs libres
1
1
1
______________________
23.4.2 Tronspeptidacin: formacin del enlace peptidico (paso 5)
Ul'la vez siruadaa taa l'l"'IOeulas ele y MettRNA,- (el'l CielOS sucesivos. efl loa silios A y P
del rlbOsoma, respectNamente, se fOtma et enlace peplldco entre ambos. Esta reac:drn la catatiza IJI\8 actividad
enzlmtlca pepcldlllransferasa {o 118n&pepcieiasa), localizada probablemente en el rf\NA 28$, 001ponente oe la
subunid<a<t 60S; tr3t3, puc$, de uM 78) . iM,Jnqvq Ita$ proteina ribo$rnca:; CXlfl.lribvycn
)OSiblemente a que sea ectlva.
Oetalle de la reaccin de transpepliclacin (paso 5)
en cl 2
12
dclo de dungactn
(1,1nin de 10'! ;'lmino:toCidos 2 )' 3)
,, 11111+
,11,
" l l
con d 1" ciclo de elongacin
(unin ddsaminodos 1 y 2)
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,.,.... J\Uiqlll' nudCDffiitn lid par de- C'lc.:mllle &1 tnlp.l.atnino:o del lllltRM C'lflltanle IC'lfl d Wlio> A) ioDb(( ti -..,
urboxilu q\K Q!ll' d ppc:odo> ao iliiJlNA <f "tiD r 1.
Se: ((llfllll un cnl...:c d tarb<iko d(l y cl;onmudc-1 amn<odD llfM'\'(1.
lranJ-r\tc..:A en b!o>ql>t' del ppc:ido> desde el xitiu P al Alio ,<\ , probllb!tmcl\lc pot del bm.w
ammuiiC'llo>dtiiRNA en J\ .
......... S.: to:nnin;o U111 tJlNA librc, no>('.or;llllo>.. tn d xitiu P y U111 pptidodl!ngil.W<D t i Nilo A.
23.4.3 Tl'ansloeaein: desplazamiento del ribosoma en un codn (paso 6)
El rlbosoma completo se desplaza en sel'llldo S' del mRNA (corriente *io}, vez un solo codn, desde su
Ubicacin Inicial sobre AUG. El responsable de e$ el tercer proteico de elongaoin. eEF 2.
oonociclo como translocasa. ES!e factor interaeciOt'la prii\Cif.II*Yiente con la t ubtridad rn.a)'(lf. onginando cambios
oontorm:.cion;tle$ en Gl ribo&Of'l\tl oompiGio q;e justifican el desplazamiento. Al mismo tiempo, impide la uniOn de un
nuevo aa.lRNA fn el sitio A, cvitolOdo oue se pase al siguiente dcfo anles de tiempo.
Detalle de la translocacin (paso 6)
11\'Jonru la wbonidud rnnfk;
e i 1R:\.\ qt.-t esub11 e
el !.ilkt t' pasa aJ ;Wt. ! .
tn.tnlf\IS el pcpu,lll-tRNA
do:l dtkl A pll):l al f>
..
<11)1' 11'11114o1:11U
tU'Z
314 SiNTESIS DE PROTEiNAS: TRADUCClN
En esl.a llene lugar el quinto ertef96tko, pues la energla requel"'da para cada uansloeaein se
obllene de la hidrlisis de GTP graCiaS a una actiVIdad GTI>asa que fflSide en el propio factot eEf'!-2 o en el fibOsorna.
Tamo en caso como en los anteriores. la hidrlisis de GTP est acoplada a cambios en la
maqunarla de tra<luociOn, que c:ooducen a e se retire complejO el factor que une et nueleol!do y posee 18 ecdvldad
GTPa53
23.4.4 Repeticin del ciclo de elongacin (pasos 4, 5 y 6)
Al tsnninar ta primera tran:slocacio M ha oompletado ia pnmera wolt3 o ciclo de elongaci6n. ller;ando a una
&ltuacin idnbca a la 8.1CI&tents al C01'11181"1ZO: lllio A libre y 9!lo P ocupado POr vn lANA, Y, diferencio en quo ol
MetIRNA del smo P ha sido stJStJtuido por un dipeptdii-tRNA. elongr.ciOn Qf'llinUet de (f!Qt.Jr<t en
pg. 3t2) hasta que se aflade el ltimo aminocido La Pegild" al sitio A (tav.-do SOOto 2. 3. 4, ot.<:,) de
olrOG aa.-IR.NAs permito la unl6n de ios siguicntos <tminocido:s on $1.1CO$lYO$ CielOS de elong2tel0n AJ uno
de ello&. el ppb<lo en sio"'P(c IP'iOO - IRNA 601 .;.mmo it\cXII'l)QI'ado l.O$ er'li;)QtS
pe:ptldico& 54t $0bi'CI grupo NH, det Ullimo. amino,cjcido W'IOOc porado y, por tanto, la cadena polipeptidiea
$U am.no-tetminal haaa el CNboX*>-termlnsl.
23.5 FASE 3; TERMINACIN
Comprondo 10$ jl3:IOS paca fibemr et ya su unin al tRnA en el sitiO P y, al
mesmo bemi)O, di!IOCiat el fihosoma del mRNA. Esw slo puede ocurrir en respuesta a la oresencla _. el sillo A de uno
de 10$ 3 oodones de termlnacion IUAA. UAG o UGA en el caso de mRHA coc:liftcedo por ONA nucfaltilr. y UAA.. UAG,
AGA oAGO en el caso de mRNA por ONA mllt.leot!drial),
En eucanotas lrv.erviene en el procaso un Unioo f.actor proleico do lerminac:i6n o c1e libor*CiOn, cRF ( R<dC$.$itlg
F8Ctot._ en eontnu.te ooo procariow dortde ex1sten Iras (RF1
1
RF2 y Rf3)
23.5.1 Unin del factor de liberacin (paso 7)
No tJtiS(e nmgun tRNA que reconozca los oodones de paro. P<H' lo que cuando el $0bf$ uno
de ellos no puede progfnar t.a En au lugiN, 4111 f;)ctor c:RF 114 une ribcQmtt en al lnanl.e al oodOn de
termln!WO..
. ...,
"'

E-- ., -.)

23.5.2 Hidrlisis del peptldil-tRNA (paso 8)
La un.on de eRF al ribo&ome altera la acbviOOO peJ)I!dllttan&ferasa de 1&1 fonna <PJ1G como agente nucreofll!co se
emPkta el agua {en c:klol gruPO ('lmino do vn &minOOciOO, pg 313). Como consecuencia. se hlcfrotiza el enlace ster
del POPiidil -lRNI\ libert'ndo 1& En et!e proceso adom41s se: tudro!iza una moloola de GTP
asoci<'dl) (11 f<telor eRF, 10 que Su et sexto gasto energtico de l<"tlr;)dveoin
23.5.3 Disociacin (paso 9)
EJ IRNA no earg&do sale del ribOSoma La f()ntla eRF : GDP YfJ no posee afinidaG por e1 rib0$01'1'\8 y lt\rnl:ll.., se
libera. se 13s dO$ SVf>l,u'lidades ribl>$0mie&S (el\ euC<'IriotM, 80S , 40S 60S). Iitoet'ando el mRNA
Todos IOG oomponsmes Ql..lfXfan t'si di$00niblos parta inioor l<t sint$$i& 00 un<' rweva proteina (oxoep1o el oRF. QOO debe
roe;ambi3r W GOP W GTP. I)Or 1,11'\ ciClO $1mll&l a bs estudiaOOS 1)3ra eEF Irl y eEF2).
23.6 ENERGTICA DE LA SNTESIS DE PROTENAS
U! simosis un Pf'QQO$O ""'Y 00$10$0, Quo utkill ul'lill proPQN.:in ele el
eQuivalenW en ATP cliSI)Onible en lodo lo clot;lll.-.clo :rcVI(Imente en ett'Pt'l y lcnicndo en
18 repetiCin e4clica <le la elor'93CiOn se l)ueo& <:alcular el reQuerimiento enetgtiCO minimo (I)OSibiememo la
fQtma<:iOI'I o diS()(:i&oCiOI\ Cle 10$ numerOSO$ complejOs mv!tmoleeutares te<uier.; 3fgUn adicional, as.i
eotr10 la oorreec:IOO de pruebas y. en el caso de procarlolas y orgnuiOS, la torMila661'1).
wn <k N
na:.,.Ju
N

N1 CiClO$ de
elongacin
termnacin
n
11
de!' en.laus
nll total fosfato por
E.sta hidrli&tS de cuatro enlaces fosfoanhkfrldo por cada aminoaeiCIO represen!<! un gran ettmbio en energla libre.
-30.5 x 4 = 122 kJ/mol d amlnoicldo, muy superior a &a etlef'Qa <let peptl(.fi(.O
C$1MCI3r de hidrlisis de unos 21 kJfmol). AuncpJe pueda parecerlo. esto no es un de$Cll'l3tro enerQC'Iic:o, sino que la
m;ayor I)Met de la energia extret (101 k.Jimol) sirve pata compensar la pfdida de Que tiene lvgor durante la
sint.esis pr'Oteiea. Este <lesc;enso de onlrol)fa &e debe principalmente al Ot'denamlento de bs amino()(J()$ en ol
pollpplldo. Tafltif'l se pierde entfOI)ia cuando vn aminokido se une a un 1RNA panlwlar y cuarooo un ttttIRNA se
asocia a un OOOOn especlftco. Asl, el aparente exceso energe1lc:o se ofi'IO!e<'l en CXlflSeSJUl' la c::aSt perfeCia fidelidad en la
IJadvocin biOlgica del mensaj& gen1ico del mRNA a la secuencia de amino6ciclos et 1.-s protel na<s.
316
SiNTESIS DE PROTEiHAS: TRADUCCtN
23.7 INHIBIDORES DE LA TRADUCCIN
Numerosos y divetSOS con'ClUe$10$ aetC&an o dl1'icul!ttndO la traduccin. Su estudio es de hlers por

a) Desde el punto de -vista prctico, porque muChos de ello& &e pueden emplear oomo antibitico&, especlatmente
cuando ejetcen su efecto selectivamente sobte clulas procariotas (bacterias}. afectando pooo o nada a las
eucatllieas. Preclsamer.te el estudio de sus mec:at*smos de accin ha c:ontritnclo a lo largo de muchos aflos al
esdateclmlento de lOs detale:s moJeculares del proceso de traduccin. A e51e re&peeto, debe mencionarw que ol
uso Indiscriminado (tin control mdloo) de k>$ creado uM b<lctoriana CS. gran
IJascendencla tanto con t9$P9C*> tt IJ 11om intestinal ootr10 a la tetapia de las Infecciones: estos aspectOS
deben set llb:ltdados de torma especializada, en tratados de Mic:robiologla.
b) Desde un putlto de vista terico. pot el pepel central de la traduccin en lit Wtta oelular. Son mucos 10$ MttiOCiCOf
y &oxlnas que blOquean o Interfieren en cienos pasos de &ct slnt0$is de fom\31 o flMIOOS on
proearlotas y eucano1as. Esta especif.icidOO es la mejor prueba de ltt diferoncitl entre la ()e tt8dUoeif'l en
ambos tip:)6 de Otganlsmos.
El efecto tnhibidor puede ejerect.rse en di,tintu del proceso de traouoCIOn.
Etapa
Activacin de 10$

lrWciac:in
(P<'SO 2. complejo
de pteinielaclon)
rniclac::b\

00 inkiac:i61'1)
Elongaan
(paoo

ElonQec:ln
(paso 5.
tn'lnspeptidaeln)
Ejemplos
Mupirocinn
(O Cido pseudomOnlco)
E.$tte()40miCil\8
(un amir'IOglic:slo)
SI'IOwdomlelna
lnterfern
Eritromlc:lna
T

Rieinb
(gliC()(IIO&elna de Oligen
Yege(al; con 2 cadenas.
A y B: la primera %la
toxina, 66 kOa
CIOranfenioOI
CldOhelfl'llda
P\.lromic:in3
Efecto
sob<e
procaotas
o eucariota'
p
p
E
E
p
P>E
p
E
Py
mitooondrial
E
PyE
Oet.-llo' de 1., acc:iOn
Inhibe competi!Namente la lle-tRNA mtetasa,
evitando la incorporacin de lle y deefriendo la
s&nte&i:& roteica
Se tif8 de modo .-reYerSible a la &Ubunidad n"'660f
305, por irneraocci6n con varia& de &u$ protena1 y
con el rRNA 16$ Ois!Qr'Siona lb entrMa de rMet
tRNA inic;iador y tambin produce errotes de
leCt\ft cJel mA.NA durante al
subunldad menor 40$
Impide la formacin del
Met--tRAA : e1F2: GTP
l nduoe la elQ)I'tlsiOn de una protelna quinasa que
fosforila a e1F2, inOtc:tlv<'nOOio (de form01 similar al
HCI .320
se une a oo sllio espeelrJco en el rRHA 23S de le
subunlad mayor SOS. Impide la asoclac:in con
la menor. otra boeiOn poSirlle e$
interfiec'ldo la lt8nsl0eadn
Se unen a la subunidad rnenof. intortlricnc;to c:on
la fijacin del a..JMRNA al sitio A
Bloquea la disociacin de GOP del faaor EFTu
(equivalente al eEF1o. euc:aritico). b que ema
$U salida del rllosoma
Se a protefnas do la $1.1bunidad mayor 605,
bloqueando la unin de aa-tRNA: eEF-1a : GTP,
y I)OSiDiemente tambin de eEF2
(tt'anspeptldttciOn)
Se \Kie a una J)tO!eina de la
m3yor SOS. lntetflrierdo en la
irueraeciOn del ,...ANA con el centro aaivo de la


oomo inhibidor comeglitivO
<ti cloranfenlc:ot. inhibe la actividad
peoti(IIINWI$ferasa pero slo en el rl:Josoma
eueariOtiCo {subunklad
Anlogo estruaural del ail-tRNA.. form' enlace
con el pptiOO prQY'OC:<VI(Io su 1ermlnacln
1ura
INHIBIOORES OE LA TRADUCCIN
ElongaC*ln
(paSO 6,
tran&IOCCM.:in)
Terminacin
AnwloglioQsi<S
distintos de 101
ettrtpl()r'nieina
(ejs .. gen18mlclna,
kanamldna. neomicina)
EsparsomiC*la
Acido fusidieo
T oldna <iftriCCI
(proenzim<'!Qroteica de
62 k.Oa: la tol(lf\l es un
fragmento ele 21
No se OOI'IOOe ninguno
p
E
PyE
E
317
La mayori a in!crt'CCIOt'lan con el rRNA 165 de ta
SlbJnidad mayor 50S. lmpldleno la fijaan del
f.;a<;IQr eSe elonga<:ion G ( EF-G, equlva\enle ill eEF
2 eati6tieo}. Los mecanismos de aocin $0n

lnnbe la translocacin
S4:l de form3 eS1able al complejo
EF-G: GDP: rlbosoma, m pldlendo la liberaCin
de EFG. Toun()if'l Inhibe a eEF-2 (faaor
eqtj'valet'lte)
Ca18Uza una reaccin Que eEF2 de
forma (AOPrlbOSitaclbn a oosta de
NAO, SOI,)r(: un reSicluo HIS modlftcao de eEF-2)
----
1\11_ .....
T-lo: ..
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1
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clohcx1mida
o
CloranfcniL'OI


/:H!-on
Puronucin:t
!11 put'OII'ieina C':l un 11n.:ih.'$0
o.kl )'
dd IUIUOOI!cilolkJ'oA
U poromiciM reuiooa
! dC' tll...._'fll a
.:omo 11) 11.-.rlo el
uninOIOC'ii IRNA.
1110 cnlau

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.. c.
111 P<'f!lidil ll'UV'flil.'inll fortnlldl n(>
putde 111 C"kmg;:.ci6n. y
dilill del riboll,rna; la protdna w

La selectiwct.ad de la m.ayoria de antbticos y S()()fe Otganismos (ltOCI'IriO(as o eucaflotas es poSIDie
gracias a las en u ribo$0mils, as.i oomo, et1 algui'IOS casos (pOt ejemplo tettaclclinas), 1& itte&pacldad de la
molkuta d la membrana celular de organism06
REGULACIN DE LA SINTESt$ PROTEI CA: N[\IELES DE CONTROL
319
Desde un punto de vist& bMico. Slo deDemos relerlrnos a una Sttuacin genercll. la do oCulii de ndividvo
adulto Entre las proteJnas esoecilic8S Que se unen al mRNA rean Mltebzado y ayudan a su transPOrte fuera <Sel
nUOto e'ICIJenva un tectot proteloo m.llimrioo, q.,e incluye ;)1 ciF-4E o proteoina ese unin a la (CBP) . ya
es1udiad<t por su papel en et Inicio de la traduocin (pg 310),
23.8.2 Control de la capacidad y frecuencia de traduccin de los mRNAs
Una vez que el ha ttlcanttldO et el oontrol de su traduoclon se ejerce esencic*nente en la
lnlclacion, haCiefldo ele HW 1;) limitante. Prlnclpalmentte se regula la formac.on del compleJo de pte-'ll(;i.-cin 80S,
la ecttvlclad de tos fact<7es do inicio e1F2 y etF..:IE. o bleon a travs de la Influencia de 9$b\lellJtas seOJndnrit'l5 en et
mRNA, por e,emplo n:tgionc$ en OOb46 nebra lntramolealal', que pueden etma&Clfar lO$ sibos de uni61'1 d-el rlboSQm3 y
el codn de inicio Se estut1ian a ooMinuaciOn con cieno detalle dos e,emptos cvyo es bien OOtlOCiOO.
23.8.2.1
Ejemplo 1: Control de la slntesls de ferritina por bloqueo del mRNA
La ferriti na os una proteill\8 cvya flWlcln es almacenar hieflO, como re&eNa para l<lf>ioSifl"te$1$ de nemogloblna,
citocromO$ y mucnas protelnas. y al mismo tiempo pr01egi9ndo <"1 1<"1 <;tuta oontrala IOJdeicS&cS del Neo
libre Sv &in10$iS se (:OI'IItola a travs de 18:s pt(l(elnas IRP. o...e M 1<"1 S 1'10 tra<Jucida Gel mRNA
impidienOO el WliCIO de ta traducaOn.
Las IRP o protenas reguladoras del hiCJrro (Otll'egloii&Jory ptOI&Ins) poseen la capaCidad de unirse a1 mRNA,
con dlsdnta afiniead en funcin de ta OOtiCCnlr<tc:itl inlrbCei'IUW oe ese metal. Por ejemplo, una de ella&. li! l RP1,
cuando el hierro es abundanle lo incorPOra en forma oe nudeo tW!tr.;arufre (cJusttw Fe.S .. ) y no <;on el
mRNA POf' el contrano. el hien'O es esc:aso en la cENuta la IRPI no presenta el nvcloo FeS y ;)de>ta u1\8
confotmaoOn que 1t permite unirse con elevada afinidad a una hotquilla de RNA oon bvcte 59). ilSia se C()c'I()OO
oomo motivo IRE o etemento de respuesta a hierro f/on7(tflf), por 10 que las IRP se laman tambin
protoi nas ligante:s de IRE (IRE-8P, ptOteins) Exi$te un mowo IRE en 18 regin S' no ltadueia (pag. 245)
dCI mRNA de ferrillna, al que se IKIEII'l las IRP lmpitfl80do el inicio de lf3Ciuoei0n y reduclencJO asl la ooncenttacl6n
intr.ee:!ular ae ten'ltu\a. La oluta se adapla as a la escasez de r.em:>. evitandO 18 sinteSis de I.Rl PfOielna que no es
l'leoes,aria. Pot el contrario, eo condioones de exceso do hierro, $C: $inlebcZa libremente la ierrlllna, para poder l'ija11o
GU

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de ftrrilina , .. ,,(In s
01,
l "lodcr''l
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de .:ttOn j '


la pro!(tllll 1 R f' no une
R."A. a la
tf*lue<:n
J'
IC\!IO)f'l _l'
'""' u.Wu.; i&
IRP
EXISte un ejemplo muy smilar oe coordin<'tlct con ltt an!Qnof, ()CtO on C$te (.;)$0 <;oniTQiando 1& v48
media del mANA, lo que cort$SPQn00 a Uf\CI; rogvlcllcin prctraduccional (p6g. 286). Se trata del receptor de
tran5fcrrina. uM proteina de para <l'Je la9 clulas capten el Nerro. En condiciones de escasez de
hierro la prolb\8 IR'P se une tambin a este mANA, que posee motivos IRE, pero al 9$t.1t sto& en su regin 3' no
traducida el efecto es de pro!eocin deJ mR.NA frente a ta degradacin, En conseOJenC$3, M simotrz&n ml!s. mot6cvi<'IS.
del reoeptor O. tr.-nsfenina .- partJJ n11$mo mRNA, W'IP<"Iei,anOO a lit ctttA& para captar hietm (:()1\ mas efltada. EA
la sitl,)(tCin contr,..... (atluncti\lnci<"l de hierro) IRP no es activa para unirse al que se oegada mas rapdamenle.
1edueienao 1a $inte$i$ del reoeoeor. ya no tao necesariO. AtriJos mecanismos de regulaCIOn (tradUCCIOn del mRNA de
fetrltina y degradaCin del mRNA del reoep(Of oe tranaferrina) aCian al unisono con un rn1smo obJGtiYO. la adaptacin
de la clula a la disponibilidad de hierro.
320
en :.u.1senc a
de Fe
nkNA S"
lk rtttllltlr dt
l l'l""' e. ( 11,11
en prn.enti.a
de Fe
nlltNA S'
de: 1 nr lil"

SiHTESIS DE PROTElNA.$; TRADUCCIN
a. prot<ctM IIU C"'(;)bth:i-..t C'l
n1RNA: ltllduee nluC:hil!< ''d
IIU' IKP
3 pnll\.'\113 IRJ
0
tioiu '-lne 111 M.I'A: e l ni.RNA k
!'(ICII'
l kU IR '
IRP
23.8.2.2 Ejemplo 2: Regulacin de la sntesis de hemoglobina por fosforilacln
do un factor do iniciacin
La .slnteSis .reQuiere .stequiomtticas de hamo y de La s2ntes.i9 de .las
glob1M9 llene lugar en pt"eCUMKires erUrOideos y en (e.lieulolos (ptecur$Orcs lnmodittlos de loo eriltocitos), cbtde se
expresan actwamente Jos genes conespoodlentes. La velOcidad de ltllduocion del mRNA <le gk>bin<'! GSi l'(l!jiUiada en
funetOn de la concentracin de hemo en la clula. de modo que si sta de6Ciende, dlsn'!lrklye as slnt.etis U
asf lB ln1P ele la protefna para la que no hay gt\4)0 oroelitt.oo (hemo) La lic'!ne
POt lnhibieiOn ot iniCio de ltt tradoin. inl0tf.Jn8fldo en la reutilizacin del faaor elf
4
2 (pg. 310).
Debe httCf:lrse notar que resul\a inllfblda 1oda nveva incorporacin de una M4:lc iniaal: pl*Se <:Ontnrar la &intesis
de I<J$ )'<! inic:itKf<J5, pero no puede iniCJarH...,... nooV<J. Por otr3 parto, a difercnda de los t;emplos anteriores
(fetril!ns y retefliCW de traoslattina), el oontto1 no afeela almRNA de una proteina, Sino a la lt.:'lduOCiOn
do lodos los mANAs de 1& o1Ufa4 ste aparente perju!oo polendal pare la clula esl jusWlcado porque se trAia de
OiUIM mw t$pecitl!iza<l3$. que $irlte1itan C<'ISi cxdmivameme globina.
Tema 24
Modificaciones postraduccionales:
maduracin, plegamiento, trfico
y degradacin de protenas
24.1 lntrodocciOn ....................................................... - ...................................... _ ................... ............................ , .. 322
24.2 Trfico o desti no do las proteinas ..................................... ,_,,, ........................................ .. ............ 322
24.2 1 Compatlitl"'et\40911Tlplic:ados......................................... .......... ... .... . . .. . .. - 322
24.2 2 Tranc:o ese proleinas en el citosol y enb'e giinulo& ........................ ..... ........ .... ............... 323
24,2 3 Trtflor> de proi.IN!'IM de secrecin ......................................................... ,,,_,............ .. . 324
24 2.31 cara<:teti!ltieaSdel pp!ldosetlal ................................................. ,_,_,_, ,_,_, .... 324
24.2.3.2 Mecanismo de entrada de la proteina al rumen del R.E ........... - ... --- 324
24.3 Maduraelln o procesamiento del pollp6ptido ............................................................................... JM
24.3.1 Maduracin por rnodificadn de ttmino&cidO$ ..................................................................................... 326
24.3. 1_1 Unin do $V$\itvyent0$ <'1 10$ ........................................................................... 326
a) Acetilecin ..................................................................................................................... 326
b) CarbOxii&CiOn............................................... ........... .......... ... . . .... ,,_, ..... , , , , , 327
<:) Fosk)raeiOn ............................................................................. ,,._,_,_,_.,,, ........... ,_,_,_,. _, 327
d) Hldroxitacln ...................................................... ,_, ............................ , , ....... 328
e) Meladn ............................................................. ,_,_,_.,.,_,._,_,_,_, .,.,_,_,_,. ,_,. ..... 328
24.1.1.2 gticosiaci6n , .... . ................ , ............. ,.,_,_,., .................. 328
a) Caracceristlcasdelasg1icoprotefnas ...................... ,_,_.,_,_,,..,_,_,_,, .. 328
b) TiposdegfiCOsitaan ... .. ........................................................................................ 329
e) BiQsineesis de las glliOOptOielna!l .................................................................................... 332
24.1, 1 3 MOdlllcaclon con Upldos ....................................................................................................... 334
a) Acilaein (Cidos grasoe) ...................................................... ......... ............................. 334
b) Prenlacin (lerpenos) .......................................................... ,_,_,..,,._,_,_.,,.,._,_,_.,,.,..,_,_,_,_,_ 335
24.1.1 .4 Formaclnde puentesdesulfuro 335
24.3. 1 5 Olr&& mo(lille&eiOI'IIt$ ...................... , .................................................................................. 336
24 3.2 Madur3dn S)Ot e-sdsiOt'l de l&!l pr01e1naa: Procesamiento proteolltlco ............................................... 336
24.3.2.1 Activacin de ptoenzirnss ptoteolltJCas ................................................................................ 336
24.3.2.2 Acttvacln de de hormonas peotldiCCII$ 337
24.4 P&egamtento de protei nas --- .............................................................. ................................. ,_, .. , ...... 337
24.4.1 Mecanismo del plegamiento ele las protelnas ...................................................................................... 337
24.-1.2 Pfotefnas implicadas en el plegan-.ento: carabinas fi'I01eculares .. , .. ..... . ... .. .. ............ ...... 338
24.4.2. 1 Tipos de carabinas .. _,_,..,.,.,_,_,.,,.,.,_,...................... ....... ............. 339
a) Car.Jbin.as dol tipo Hsp70 ... .... .. . .. ........ . .... ... .... .. 339
b) Carabinas del tipo Hsp60 ..................................................... ....................................... 339
24.4.2.2 Funcin de las carabinas ............................... ,_,_,_.,.,.,_,_,_,,.,_,,.,,._,_, .,_ .. ,_,_ .,.,_,_,_,..,.,_,_,_,.,. 3-40
24.$ de las pt'Oteintl$ ............... _,., .................................................... ,_ .............................................. 340
24 5.1 Ocgr&CSaein liSOSOMita .............................................................. . ................................................... 341
24.5.2 Degr9dadon cnosllca ......................................................................................................................... 341
24.5.2. 1 Ublqu!tina ........................................................................ .................................................... 3..t 1
24.5.2.2 Seales desencadenantes de la Lbquitinacin ................................................................... 342
a) ReSiduo amhc>termlnal.. ................................................................................................ 3-42
b) Secuencias PEST ........................................................................................................... 342
24.5.2.3 Proteasas responsables d$1a degrad;tcin , . . , , , , ....... , ......... . , .. , . . . . . 342
322 MOOIFICACK>NES POSTRADUCCIONALES:
24.1 INTRODUCCIN
la slntesls proteica no termina con la libet8Ci0n del polil)t!ptido 4e' l;Omplejo ele lraduocibn. sino que en IOdos bs
orgarnsmos se requiere una serie de procesos para que el mettsajt11lneat o unidimen$ional dol pelipptido {secuencia de
aminoados determinada pot la secuencia de rucle6tldos del mRNA) 9e ttansforme en un mensaje tl:knenslonal, la
estructura nabva de la protelna responsable de su funciOn. ES!os procesos, recogidO$ do forma conjunta bajo el Mtmino
maduracin o modi'ficac,ln po;straducc'onaJ, OOtl$111.\lyen el colofn de ta slntesis pfOieiea, que 3 $8
lb 5
1
f:.se de ltt b'ilduoei6n, dO$ClVI$ do lit activ..cin del aminocido. lnlci9clon. elongacin y termir'laciOn. Por
diversa$ ralX:lneS. por oo e$t!J(Ji:) o P<Wtial ha51a haoe poco& al'ios. procesoe no han
reclblclo la consterac:iOn que metecen en cuanto a su impottanci3 pam 1#1 Los avan08$ logrados ya pennlten
tener una Vt&i6n global, aunque aproximada. del reconldo que eq>erimet'lt<\ 13 prot.ein;t d05do w 5i nleSIS hasla su
funan
La maduracin postradiJCCIOnal es esef'leiaf en IOdo momento y do la o6Ua evcaritite. Cada
comparta'neniO M.tlcelt.lar requiere protelnas dlierentes.. que no se en 61, pat\'1 $U$ v3riad;a; 1\lnc:ione<$:
ac:tlviclad ca1alilica <le reacciones en todas las vlas metablicas, papel estrucb.Jral en la mematana celular, tran$P()rt0 o
almacn de molcula$ e ione<$, 1\lnc:in motora muscular, transmisin de sellales intra e IMercelular, regAacln de ta
expr95i6n etc. IOCIU$0 las tmocoodrias y doropla:sto&, que poseen un genoma pro!)*), oeceSl&an mullltud de
PIO(eina$ codifie<'d3s et1 el genoma tM:tear, lueQO deben llegar hasu. es1os oroflnulos.
La en cuanto a Ot'ltldic:iorles y drwnstanci:.s p. .. en tiPf) cotult'r y ;:\mplitvd y
complejidad de tos procesos Implicados e.n la moddlceclbn postraduoeional difcil su de!lerip<:iOn. A es1e fin, so
5egUI' un eSQuema relativamente comn y adaptado a la realidad celular. aparentememe toglco. dividiendo el
prooesamiento postradUCCO'Ial en lOs siguientes apettado6. Debe senalarse, sin ernbalgo. que lOs 3 I)M'Ieros procesos
tienen IU9llf gonera!menle de forma Mnullnea.
1 TrafiCO o d81Sbno c5e las proteinas hacia diferenteslocaizaciones. subeelulares o extraoeUares. para el ejerciOO de
fvncin.
2 Madutacil)n o pt()C!e$81mlenl0def potlpeptldo, Es el a$09(:10 de 1& rnodif!C3c:in ComMtnde
modifiC8c::iQI'IeS qulmieas de tos amlnoo:dos y ellmlnacln de lragmen&os oe1 I)Oiij)()ti(JO.
3 Plegamiento OOtl'eC1o deJ pollpptkto has1a aleanz.ar su oonk>rmaeiOn bloiOgle& activa. Req.iere, M muehos casos.
una macb'acin previa por modificacin qulrnlca. oon lo que pleganVento y maduradn estan lntlmamente ligados.
4 . Es entonces. una vez que la protelna ha legado a su descino y eomplido su misin, cuando se debe describir
tambin su eatabolismo. su degradacin l'\a.$ta aminocidos
Con este CltOCC$0 se c:ien'1 <te11nllfvltmente el'et::IO bioiOgiCO de 13 e$ dOClt'
trfico
___.- maduracin -------
plcg.amicmo ---..,
biosintc:sis fUJ)CI)
.....______ nminofu,':!dos dcgr..lda<:in
24.2 TRFICO O DESTINO DE LAS PROTEiNAS
Se eot100e C(Jt'n() lttdico, descino, topogn&sls e lncklso 'aslfrcacln. de protei nas ta M& que Siguen estas
molci.U:$ en &a clula eucatitlca nasl8 alcanzar su 10calizaci6o (intracelular o extracelutar) donde pueden ejercer su
IIJnciOn, y loe mecaMmoe motecuia<s responsables de que sigan esa ruta. El trfico se desal'f'Oii de forma
estrechamente oooectada oon la madLW'acin y el plegamiento del polipptido.
24.2.1 Compartimentos Implicados
El lrMico de protelnas tiene tugar oon n:tferencia al c:ilosol , <t la membrantt y <t 106 compertimon\o$
cerrados presontH en aqul, lo5 Qtgnulos detimitados pOr membr.VI.'"IS, ton$1i!uyel\4cs del 'sistema
orM:Somombl"i'lnoso:
ReUeuto endoplstrli co (RE). Es un sistema intraoek.tlar muy ramificado, plegaOO e interoonectado. de estruellJra
11'8tlada (canales. esferas. rubos. cls!ernas apjanadas). con IA'l espaocio Interior (lul o lumen) ait;lado de' ci!Q601, En
su mayor parte, el RE posee nbosomas asociado$ a so 5uperfic:ie caot;lica {fonnando el RE rug040). donde se
realiza la tinte&*!! de las protelnas .-..egrales de membrana {celular, del RE. del Golgi y de li50601Tlas. do las
desthadas allumen de RE. Golgi o li5060tl'las y de las destinadas a secrecin. Las proleinas con destino y fvncln
clto&llcos, nucte>ares o de 01106 Otgnulos {milooondri8$.. peroxi$()111<\$.. ) $0 en ribo$(1(1\<'$
no asociado& al RE Las prot .. rl0*5 M intofl)Or.\n al lumen <MI RE de forma OOin'lduCOI'\&I (a la ve1 que se
$intetix.an). P\'lr.'l ttlli SUfrir los primeros pasos de la La salida del RE se hace bajo la lorma de
pequet\as VE>skutss. que se dirigen al aparaiO de Golgi. a lisosoma& o a la membfana externa.
TRFICO O DESTINO DE l-AS PROTENAS
midro
rt1iculo
-cndopl:bntica



--
uparuto de
Golgi
o
323
o
, __
CompkiJo o aparato de Go4gi. Se !r;Jta, de un oc:wnpitrtimonto siti.S<I4o en11e el f(E y la merrilr'tll'la ptasmauca en
una dl&poslcin (caro "ci$ .. frcnto RE y e;:.ro a la membf'Ma) que factllla"' llegada de las veslcutas
del RE cargadas de Pf04&1M&. formado oor un apil&mleniO de &8009 o bolsas aplanadas, con fonna de disco
(dlctlosom<f$), no cnttc si. l$ polips:ltldO!I sufren aqui f\LJIWO& ptOOOS&mientos haMa dar t.a
prot.ena y3 dOI.l(l:t de 1a, senales mofecutares necesarias para definir w de&fino ffnall: lils prot.eirlil!i &an
r(lcr!VI."ld3S 81 cltosOI en nuevas veslculas que se d+ngen al o b.it<;it' 1;) e.x1emn
(durante Ste ttanspotte tambin se procesan ITlUeha& prot.e-inas PQf escnsin P'Qledibea) En el CMO dt las
prote.nas que la clula seaet<l 0o1l $e Mbta de de que fin-a!nente se fllnden con &a
membrana llbcri\nOO W cntenidO .81 e11.teri0t celtAat por Adems de esta funcin el
aparato de Golgl d:t a tos i!loson\85 cargados de- el\limas hldrolltlcas. que no slo degradan
moUK:u!as sino tanlbiM pMICJJfas exttaoeuates incorporadas por endocitosls (mediante ta fuSl
de eod<l\Somas con i&oSOrn.'IS)
son $ itl0$ donde tlefte fugar eapecifkamente la k>sfonlacin ollldatn.+a. coola ptOOOcon de ATP
P\>lr<'l \M energe11cas de 18 oluta. Solo una& pocas de las prota#las neC!$$3riil$ e:s!An
oodrfie3das on ol gcnc)ma m.!ocondrlal y ae suuewan en ribosoow mriooondriales por lo que se nqu,ere ta
efllrada a de su dobie membfana de gtan CBnlidad de proteinos sintetila<l<'l$ en el QIQ$()&.
Pero:ldsomas. Soo organubs de peqvollo do.lmitdO$ por l.lntt tne!niJr<\M tin1t:a, fiCO!I en et\Zif'l\ll$
en reacciones .())!id;.tliva. de moloola$ tKieli'S
Otro& wmp.,rtimtntos Quita meoor trascend&l"'Cia en b que respecta al lrt.eo y la mao..wac:IOn, peto
ctwiamcnle con iniJX)rt3tiCI8 l\lnc!Of\8f y que lambin son de!iOOO especfic:o de su& prolad\SS deben
cil.<lr$4:> los doropi;)&IQ$, li!IO!k'l<B!I etc
24.2.2 Trfico de proteinas en el citosol y entre orgnulos
Tod<l$ CQmie'n:Z&n su Sl!ll$($ et1 el C1IOsol (e.xcepto las codlr.cadas en tos genotna!l mltocondrlal y
clorop!M:IX:o), lt'l clave 6f)t por el que las protelnas se dll'9f!ft a su toceliz.aclbn son s.el\ates de claslficaciOn o
forman parte de la prctelna naQente y <klgen el trfico de la molecula haca distiniOs
ompilrbmC!'!IO$ de 1$ Lt'l$ pro1e1nas no ptegentan secuenaas sel\al permaneooo en el cuosol. Eslas setlales
se1 {09*'1e$ de ltt de aminoCidos, de 15 a 60 residuos, frecLtM!emente suuadas cerca de
IQS eKtremos <Ji@ ta cadena y casi Sierren entniMdas por esci:siOn proteohllca pg. 336) una vez han cumplido su
fundon. En ottos casos. s.n embargo, la set'ial e& una regin $Ctal' una disposiCin e$PE!CiftCa
dependienkl de; plegarnief'l'to e la protein;"J, i* ;.lmu't&cld$ nO COntiguO$ n l<t 8$11\lCivra prfm<Jn<J
(t
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u.c, )r liC n.llillobull otm,
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c0111o mcmbrtlua *' fuaor:b
crluhn

324 MODifiCACIONES POSTRADUCCIOHALES:
Et mas des&ac&ble del ttiltieo tntteoeuat y 1'1\b oomUfW'I'Ief"te os el que (Xlf'r9$pon00 a las
protelnas de secrecin. ocooe. de fonna f1'U)' y versa\111, a trovoS de 13 del RE y ;emplejo de
GolgL E-ste sisaema de transporte fmpllca ta lnttoduocl6n de la eaena poUI)e;l)li!Jiea ( en ta superficie del RE
rugoso) en el fumen, a travs de la membrana, la salida de la protena completada en ves.ieutas et oomplojo de
Golgi y, finalmente, &U tran&pOtte en vesloJas de secrecin hasta la membrana plasmtica y su secteeiOn at exeriOr.
tste ser el nico e,emplo que se estudia en detalle, a oontlnueclo: no se abordaran otros aspeoetOS ()C)II"CrelO$, de gmn
inter$ pero Qllt O$C<IP<I" al carruw general del pni$Mte libro. Entre s;os. pueden cilarse la lntegradn de
on mombr;)fl;l d QtVnulo. el trilfiCO a orgnl.lbs especiale$ como nwlocondria, cloroMs:IO o perolSOmas.
el uansporte bajO ta IQnna de vesrcutas de $&Ctec:iOn deSde et RE at c:omplojo <te Gdgi y <1 ta membrana plasmtica, ta
liberaeiOn final de su (l()l'denlo por eJtocMosls al exli!rlor eelul.ar o la de protei nas c:Jel rrwlio
mecian;e endocilosis facilitada por receptor.
Como ejemplo de olro tipo de destino. cabe mencionar et trllfiCO de protaCnas del loSOI a nUCieo para su
o w intetv9nci6n en 10$ Pf00$506 de replicacin, tr81'18cripcln y maduracin
postransetipciOI'Ial. Estas proleinas deben pasat a U.V6S de ros (eS1ruCiuras mvy complejas. fonnacJa<s
por 100 proteinas diferenteS, que la doble A lrilv6& de 106 poros tiene lugar
Igualmente er ttAJieo, en senrldo inYel"$0, de las molculas oe RHA y M $Ubunic:laCics $intotizadas o
ensamblada$ en er ncleo, respectivamente. A\n:lue el paso puede ret'lilar..e '*' 1r>te CliflniOn, existir una
difusin se6ectNa. sin de1ij)iegue de la estructuta trldlrnet'lslor\af (a dlfetenei8 de ros olfOS de tr61lOO). So ha
propuesto la presencia en ras protelnas que se han de transportar al neleo de una secuend8 setial (seeueneit'l oe
locaii:Zacln nudeer) a traYs de la cual se unen a otras "protelnas reoepeores de nportadr\ nUClear", que ditlget\ la
entrada a travs de lo& ll'OfOI5, con &al ell8f91a liberada por la t.drli&i& del GTP.
24.2.3 Trfi co de protenas de secrecin
24.2.3.1 Caractersticas del pptido seal
La secuerw:la para 18:!1 proternas ere secrecin es f'10f'm81menle ul\8 secuenCia pei)Udiea 00118 en el e.xlfemO
N-terminal del recit'l slntellzado, que se denomina se-eue.neia sel'lal o de etiquetado, etiqueta, p6ptido
sel'lal o secuencia Uder (pot su poSiCIOn N--rermlnal). \.WIO o ms residuos oon carga positiva (Lys o Atg).
seguidos de 5 a 15 amii'IOeldOs flkii'OMilklos y de unos pocos residuos rela!Nament.e I)OiateS y de cadena oo11a,
Gry y Ala.
Ejemplo de pptido seal en la prcproinsulina humana
Como &e ver a conlinuaQQn. es frecuente QVO ol 1>6171ido sellar M (llimint. por r_. t'c;c;iOn de
seal (o prote3:sa sel'lal). En est!l& casos, las prote!nas redn sintetizadas. euya seeuMC::Ia senat an no se ha
se <lef\Oinlnan foonas pre-protefna, para dierenclarlas de la molcula que ya ha sufrido la proteolisb del
ppeldo seftal, en algunos ca!I06 sta a su vez es una fotma lnactrva que precisa un proeesamleluo adicional por
ptOieollsls. por lo que se la lama y su precur$0f ricial es. pues. una pr-..pro-proteina (pig. 336),.
24.2.3.2 Mecanismo de entrada de la protena allumen del RE
Como se ha Indicado, roela& las proretlas royo de&dno e& la ment>rana celuf.af. la membrana de RE o Golgi, el
interior de %tos Of9{lnuloo; o la MCroI'l al exterior " sintotiz;.n oo II)O$()m<'l$ a$OI;iild0$ ;)1 RE. Adcmils, reci6n
comenzada su !Wntesis la cadena poipeptidica M introduce al inlerior 0e1 Re , se tr..n$locll o111.men. U (:()tl(liCiOn Vnie3
e lmptt1<5andible para 95t<l e:; 101 prc$Cneit en 1# cadena PQtipeptidial tSo 13 A
M cstvdi:. con detalle eue ptOC:eSO, ooncre-tllndoto pata el easo de protelnas de secrecin.
1. Ptitner ptOOeSO de Uf'litl . La secuencia sel\al se sintetiza pronto tra& el comienzo de la ttaduociOn, por 95tat
situada en el ex.tremo amino del polipp(ldo naciente. y emerge del ribosomct cuan:lo el poipptido alcanza unos
70 aminoacidos de lof\lgitlld. l.a Ml\al .- cn!OOc:CS rooonoc:ict4 t;\C:lidamenre por un OOf'l'lplejO proleloo
cl10$61ico dlt gran tam311'1o (325 kDa), lamaoo partleula de reeonoeimlel"'to de la sel'lal ( SRP).
Estructuralmente, la SRP es una ribonucleoprotel'na formada por 6 polipptid06 y un RNA (del grupo de loo;
RNAs cltoplasmloos pequeflo6 o seRNA&. llamado en concreto RNA 7SL. con una &ocuencia oon la
famiia Alu de ONA repatitrJo. Jlg 114), er RNA 7SL es el dir.eto del re<:onoeimiento de la
SEICUI.IflOO Mtf'i<'JI
TRfiCO O DESTINO OE LAS PA.OTEJNAS 325
cito sol
2. SegvndO pr-oceso de un!bn: la unin de la SRP provoca vna detencin temporal dlt etongacQn del
en el ti.IO$(:tma, hasta que el complejo anteoor {mRNA : nbosoma ; aat.RNA : polipCplido mJCII:mlO : SRP)
ooncacta con la superl\cle C*Sllca del RE. doncSe tea SRP es RJOOf\QCiOO y w uno ;: uno p;oleiM ntegrM M: la
membrana dei RE. Iilm<Jda pt"otelna rcc:Gptor:. dG SRP {SRPR) o protei na d! Como tesu!lado todo el
ootnplciO queda fljaCIO fuertemente al RE.
El .-eeeptot de Sru> es una protema neteroomerlca ooo la capacldaet ce unir GTP y de 4A't31il:or w hidrliSIS
(octiwlfld GTP*'a) La fOf'll\8 con GTP unido es la que l'lterac010na con la SRP. mtel'lttas que al a
GDP pierde aMidad y se !Ibera la SRP
3 Tetcet proceso de unin. 8 corf4llejo ba quedado dispuosto sobre el RE de tal forma que H !avooec su
interacci6n oon ooa prolelna integral de i;t mombran, dol RE. en YM IXI$'Cin VQcn<JI a l<l SRPR E$13
nueva prollna se llama pro1eina re<:eptora del O n'bofori na 50 misin o:s.. h,t
de reconocer ta mtl)'Or d"l nbQ$<:am3 que formA del gr'M complep y .m la f!tl!f ada del
polipplido l)(ll(;iont,H.t intcrOt del RE, e:leeruancso un p.'lpel como )l<lf'O. : la membtl'ltla
a Como <.:o!'l:secvencia de e$te "anel8ie:" ocure 10 slguierue. La i!lutlidad u de SRPR hldrollza ef GTP unido,
dando GOP y P1 de w GlP 1)0(
b Se drsoaa la SRP. quedando disponible en el cltosol para volverM a emPlear r clclo oe la
e) Al i!ber81'$EI la SRP se etlmil'\ll &a lnhibion de t.. trOOtJCCin ft decir, 50 lo tointeshs Yll qn
(11 lumCIIl d<lt RE
d) En ,, riboforina se llbte un car.at de ttansklcacln' que permite la enrrada en el lllrnerl de la cadena
Sl(lfipepli(tica etec:eerne. De ahl los nombres altematrvos de translocua para la ribofoma y de compleJo de
ttanskleaciOn para el comptrefo que se form
4 En la cara lumlnal del RE. asoclaaa a la porcin lnteno( da las riboforlnas def poro, se enQ.Ientra una nueva
protelna Integral de membrana lamaa peptida&a e l a seal. pues esc:inde el ppi.Jdo &ei\al, sepcw.lndolo del
tesiO del poUpbptldo en eredn'J,ento. Una vez liberado, aquf se degrada Msta aminocidos.
5 La l'irla!l;wein do lit sinlc:lsi1: <ffl m lumen del RE. con libec-&ein de la pr()letna, c:uatldo "' c:x1rcmo
ea;bOxiO del polip.(leido 1\a pa!l.ll<IO a uaves de la mentltana del RE.. El f'lbosoma se disocia entonoes df'!l RE y
se de$01t98f1i28 todo el compleJO de tfa<luoc:ion pera volver a rac1c:Sar&e ('aclo del ribo6oma).
326 MODIFICACIONES POSTRAOUCCtONALES:
24. 3 MADURACIN O PROCESAMIENTO DEL POLIPPTIDO NACIENTE
ConoeC)tu&lmcnte es el mlls Mncillo de po6traducdonal Puede l ener lugat tras haber
finaliZado 18 slntesis, uraa vez: liberaoo el poliptoptido <1et ribo$0n\ll o, CQI'l"'nnel'lle, de klrma simul"nea con 18
traduccin. es declr. la regin de la molcula que se ha slnteliledo antes (/16-lerminal) va Sietlc:IO an
se est elongando el polipptido por una regin ms prxima al e.xttemo Ctetmil\8l Esta seguncJ& el
nombre de modlfteadn cotraducd onat, aunque 106 procesos sufridos son lOs mismos en ambOS ca&Ot . Se VlilitM
ena:imlllll y cofaciOfOs espoc;ificos p.va uM muetitvd de rO<tedonos de rnoc:illcac:in
las modifJCac:iooes
"pos:traducciooales .. pueden tcn..-r
lugar de fomla colraductlol'll
S' :..::::::::..:.::::.:::::;:::;::::;..-'
Ji

e:
-
1
e
l
La maduradOn ""Plica dos grandes tipos de moditlcedones def poltpptlOO: la transformacin de tes eaoenas
la1erale9 de alguoos amlnoclctos y la escisin proled1tlca.
24.3.1 Maduracin por modificacin de aminocidos
Diversos aminokidos del p01ip6c)Ci00. $iempfe en Pl)$ieionet .-peci1ll;l$, $UI10n I.....Ccionos <kt nWflc:iCin
quimice, aunque enzim;\'licameoto, Se describen a QOf'ltint.181Cin otgunas <kt lil5 m;\$ freci.'Mtos.
24.3.1.1 Unin de sustituyentes a los aminocidos
Es fr&Wente 13 adiCIOw\ grupos (oomo acetilO, carboxllo, fosfato. hidroxilo o metilO) a la cadena
lateral de amlnocld06 o a los extremo& o carboxi-temW!ale&. Se han ms de ..n centenar de re&Qj06
aminocidos modilicado5: veamo5 algunO& de 106 ejemplos ms COI'I'U'Ie$,
a) Acetilacin
La adicin de Of',C)06 aoelilo tiel'l$ tvg.,r en un 50'4 do protoii'IM euc;ariOticas. Un:, posioin frllcuonlo es al
grvoo <amino tenninal, eUminaeOn del re$1duo de mellonlna N-terminal (pg, 336). Uno de 109 eteccos de esta
modificacin es un aunon1o de a. resiStenci& tila JI el grupo amlno. se acetlla el grupo
amino en lCII c:atna lateral do midW$ do li$int't en 131$ de fOfma esta rnodifieadr'l es en parte
tSpo1'15abto do 1<t rogut.ciOn de tal de la <:romah (pg. 264).
EJcmllo:
el atn:illO de l:a
bl:.tOC'II SC'COCUCIWI't
s1mlprt acccllldo
n t ,t'OS<M C'MSH
(liCCtil.("oA)
ac-e-tii-Ser
MADURACIN 0 PROCESAMIENTO DEL ___________
b) CEJrboxifacin
En algunas pnxeina& se atlade un n 13 endOna ta.terat de un ai'IWlOcido, pot ejemplO al ..Ctir de
Asp (dando (k.arboxiaSPiiMio) y Gl\.1 ('f'(i3iri)OJCigh.JI3m&IO, et\ lOS taoctores de coagulaCIOn y en proteina& estructurales
del hvCJ$0) ,
r,;emplo:
Ln l)r'CI'tncil de un aran nilrnnv de ct1 la r<:in Nlttrmnnl (le la ttornbnn
C!iCI'ICial raro su ao:ci,ili;l.;l cllrno fnclot t1e J:.gulacau. 1::1 r-carbo.'lxtglllllU'IlatO acra como queloMe 6cl
C11' 1, net.::c:linrio JUf.l 111 uci\idad deo la ttombina. Un de l<llamlf'la K '){0"1.'0(11 la
iruuticienlt' dllr.ll'llc la daod IIIM'I si!XIromc: hcmorrigJOO.
e) Fosfon'lacin
Es la mas freci.J8flte. e3$i Siempre l(lrma reversible (fosforflacln-
destostortlac&n) oomo oo mecanismo reyul8dor de 13 de la proteina (reguladn pot mocliflcacln
covatente). Afeeln al gfVI)C) OH <le ser. Thr y Tyr, estanoo catallz.aaa pot protefna qulnasas. oon hidrlisis del ATP.
Produce un o::remento n()l<'tble en carga neg&1iva de 18 protelna. La reaccin opuesta. de desfoslorilacin, la
c;ualizan pro4eina fosfamw$. En 01mbOS casos, se ltttta de una modtflcacl6n estrlctamenle postraduocional. tiene
1uga1 en et O$!Jpue:s de qt.ie se ha oompte-lado la slntesis y el plegamento de la prole/na
E.Fmti()IS;
La fqs(qrilnll b ((l)l'm;l. lltaCti\.o)e.s l'tl1dUCI p.ll la quii'I:HII
datldo la (I)SfiN'il:tJ:t 111 (uti\'a). ql;l( lilxrn IIJC(Is:l l l del ,glucilgocm.l.la 1(\rma 111 lic ltamfOit'llla
de nuevo en b la o.:ciln dc la
La fosforilaoi6n de resif).K)o tle S m b nwJ pcnnitt' la fijacan del Ca
1
, ae1uauOO 1M la lecho:
()Offll) nutrimlt' de r )' c. p.1rn el
protelna QUWtasa
del tipo sennallreonina quinasa

ATr ADP

prQielna fos.fatasa
del tipo fosfo.sennatfosfo1J'eor11na foslatasa
Tyr
fosfo-Ser
Cll,i
O= P-O
()
e
protelna qulnasa
oet llpo
-------.. ( ATP

fosfo-Tyr
H,--fi--A

1)
328 MOOIFICACtONES POSTRADUCCIONALES:
d) HidroxiladtJ
Varias hidrolC!Iasas, presentes en et rt'lfcuiO endopiMn*. C.t81it;Jn la inCQI'POfacin de grupos -OH a algunas
protein<l$; por ojemc>lo. en Pro y Lys del colgeno.
Ejemplo:
t i ltt mtxh lk.ll {nlmU de MI 1r.monn:u:in en colflmo) por hidroKila.:in de
alrtdo."'llr di: un 500. de< ,w, rro. en la X.Pro-Giy. 1..11 cllliml es 111
hidrfl tmn tlioxir:na!'l q-..e uliliu oxl8ft!O mokeu.lar )' 2-o.-:osiUiansto oonu)
y nscorbmo )' eomo eofaciOf'C:S. El en.fmncdad do: una
hidro.Xilncin del COipO, ts produt u,1() ptUII dfio:rl de v'Jiamuui C
lW' 4hidroxiprolitu:
rambieu :ce (orm;a J.hidtl),;ipr()liN
e) Metitacin
Consiste en te Incorporacin de mediO al grupo e-amo de ta cadena lateral de L ys, o bien al grupo y-<:arbollito de
Glu.
E)CUlJllo,::
La ac:bvtdaiJ de ils h1MOCiaS puo:dc rnodlka.1e por: mou;)+ ()
dd n-;;11kf L)'120 dc la hislu u. 11-4. r :wnt,.En apart'tt'
nu.mumt.:til y d!nlchl liinacn al.pm11) wolei n muw-uJurn y m el
('it(KTO .. I) C: (.a (le 1:1 ml}'<l!VIe (WJ;!.IIJS1110\S COOitenC
un trimcliJ.Ii$ina en 11m
metlttran&lerasar.
(EC 2.1 1.x)
24.3.1.2 Incorporacin de glcidos: glicosilacln
metii Lys,
dimctii-Lys,
trimctil-Lys
-(CII:), - NIIT-cu
3
- (CII,J, -NII!?cl i
3
tH
3

-(CH,).-N"CH,
tH;
Se lama gioo&ilacin a &a unin OOV81ente do tadCI"'3$ dtt oligondriclos. {o et la cadona la1oral dt
<llgunO$ on prolt'in;:a$ UtctuO'IImente se prefiere el pror.,o 011 Mt9JQ gJuco-, que quedl.'l res.erv...OO
'*" 10 tsi)6Cilloo de gllloosa ). Esta modificacin es muy frecuente en pr01ernas de membrana y en aqullas que la
chJI& secreta al exterior (etltre las que se "cluyen las protefnas plasmA1!cas). y menos comn en ptOtelnas
lnCrecelulares. Por otra parte. es caracterfstica de eucarir:Qs y Yirus, peto inex.istente en procaricKas,
a) CaracterSlicas de las glicoprOielttas
Las gliooproteiNs en su COI'1Utl40 no tienen una !uncin c:ornOO definida por la glloosilaeiOI'l . Sln embargo, 18
OOICin de cieno un l)ai)et esenCial en la eslructura y en la funeiOn de cada una de ellas. Pot ejemplo,

Cof'!lnbuye a l.a Q)nfQfmacin de &a prolein&.
$U ftt<1bilid00 (POI o;utnP'Q fl"onto 111 Ct'llenlalrieniiO) y SU reSistenCia <.'1 13 digestin por P'Qt00!$0$, COmo
oonsecuenc!a. 8U'I"'ee'lt81a vida media en plasma (disminuye el aclaramiento).
MADURACIN 0 PROCESAMIENTO OEL NACIENTE
329
Hace protefnas ms hidrofllcas, atlmenlando su sotubiklad y por 1anto. fadbtanoo 541 Interaccin con las celulas
def enlOmo
/l.p<ll1a e:slt\Jcturas indMduatizadas que median Ja lnteracc:i6n con receplOfes especifiCO$ y &On import<Jmes
!Mermnante:s
Son innumerableshn proto\f\3S que osU.n (ms que ltl$ no gliOQSilttdilS). como &U':S funcione& y no
&o 6$cutir3n on e$l<.1 ICldo. Como merO$ ejemplo$, Q\le no repruscntan e! de fui\Ciones.. c..,bc ci1l>' $U P\'Jpcl
corro base de loe distintos tipos oe grupos aangufneos. entre enos el grupo ASO I,_Pg 369), ooyos aniJgMOS A. a y O
son Ollgosacriclos oonstrtuyentes de glicoprotelnas y gliOOi lpidos presentes en la wperficie de bs y de ouas
clulas. y en gllcoprote!nas de secrean Por otro 1900. un mtodo Mlnano de 6e la dlabems es la medida de
hem09lobi na <:uya conccnlt<t<;i6n <lo 1<'1 dr: gii,00$3 en (la henl(lgt()binl) une
covalaf\1(tf)1Einte la {illuco&a qult a-tri"Vit:s;, libremente ll'1 membGfn;'l critrQC:kana). lgualment&, ClCiS.tcn abund:tntt)S
ejemplos de patologlas proYOCadas lXX la a!tetaei6n del patrn de gliC10$ilacin
la urvn de los oligosacfldos, qe llene log<Jr tanto de formo colr.lduocion;d erxno d<1 ;,
una gran vanedad de g!iooproteina& e.n la& quo lt1 S)ar\e fcpfOSG'nltl un<- lami;H6tt VilriO'Ible 1;) rn;'J$t'l
total. la 00 10$ compue$ll)$ que poseen -glcidos y con'IO parte de su t'l'IOhkula no es sencilla,
debido a 1;, elCi$1ente. En caso, dl!ereru::.as 1.3010 en cuant-o a la propordn de la$
parlo$ y oei)Udie& oomo M tipo 00 azucares que pattlcipan '/la forma oomo unen entre sf. A patt1r de aqul,
l:e dtl$<:ripci0n se Umllar& a 10 relall'fO atas gliooproteinas ptop.lamente diChas.
OlioopJoceinas
* dkhu
GIK'106 Uc 111mallo 1nedlo (obgos&CirhJos._ .wmfi.;aOOse
l.a a,tucidk. dd 2 1 85% de N. l(lmJ
Protc:ugltcanos
b) Tipos de gllcosilacin
la f!:uk J:IUCidita lmltOf. lroCIIIdl
y ( R"pctit(n de ... diiOidodo>),. Conumcon 111111 pmxm:iUn
1fi1U!t:lltivll de 111nmmu:U.:;uq, >liMnuycnk!l !'1111;, )' urnko,.
(mono:GIIeilridot; coa MI grupo CI-I,OII tmni1111l o:o.ilbdoa COOII).
b prtt .upvne un 8.SQO% llMSII t<ltal.
IIu :olu t1po de: ;lieano.
l..a pent thlpoot IQdll)ol dd l"" tk 1,1 lo,)liiL
rn:.amm propicd111lcs 'itcoMdad.
lullt'iad6a en etc )-
de la 110tCd ctlullll bctoetllttt.
No hay pr!Citll dld.
l.ll U:IIW'lll (1 'l(lr ml ncc tunidiU:II lupt de
las cadeflas g!ocidicas de las glicoproteinas. se dasllican en dos gr81'1des grupos., M luooM de cul sea et
el y el polil)bPiido. E$1i1 da$il1cCKin puee apican;e en oena medida a las propia& ghooproqelnas.
pero talguf\3:5 PfC$Ct'l\<ln &inwoil'l6amf3"1o azUcares unidos mediante ambos tlp06 de enlace, en punlos d!StlJ\!os <Nt su
moiOcU'il
0
Thr
(#Pe;J
1
H-0
H.1
330
MODIFICACI ONES POSTRAOUCCIOHALES:
Otigosac.dos unidos pOf ox.fgeno (0-gicoprotefnas): el a:ruear se une al tomo de de cadenas
laterales de Ser o Thr. En general. lOs 0-gl&canos, ollgosacridos O-unidos o por O son estructuras
sei'ICillas, aunque varledas. L06 ms frecuentes llenen como bese un residuo de N-eootllgalactosamlna unido a
serina o treonlna, pero existen uniones galaC'osa-hidroxlli&lna. arabinosa-hidroxiprolina,
N-aceligluoosamlna-&etinattreonina e galaelosa-cist.eina (con oo enlace $.gli00$ldioo),
monosaericlo.
abre'IICUura: Glc GloCHAc
k?.
h
11
1
1
1 H
t
NH-<:0-('11,
monos.-.drido f!::O:GataC'osa N-.acelll-o. :!):9!.8CIOsamN
abreViatura:
Gal GaiNAc


S'"
"
"
NU-CO-CIIl
Sat flu


ca:t'IICit'JisLicos
<to-Manosa Cl-t.Fucosa


Man Fue
.

1
1 11
1 H
1
Addo SUIIIOO (Neceblneuramlnlco)
Si;a (Neu NAc:)

!13 H
0011
11
n.:present.u<:i n ;abreviada:
"j:-._
o =
Oligosac:!rdos u l'tldo s por nitrgeno {N-glicoprotelnas); el azVcar se vnc at 3-!otnO de l'lkrOgeno amicJico de la
cadena late.ral de Asn. debe fom\ilf parte dS.. A$n.X-5er'Y. donde la poSICJOn de Set puede estar
ocupada tambin por Thr oC)'$. y X e Y son cu<tlquiet an*'ooeiOO Pro. Las de los N-glicano&,
()19osacrldos N-unidos o unidos por N &en m:.s (:Qt'l"'plefaS y diversas. El de l'llOflOSaCridos
es generalmente diferente dol de bs Oogticanos..
J Esuuctuta cetural de todos los N-glicanos J
GkNAe
Asn
Alrededor de una estructlsa cerrlr.tl oomUn $e ul'len monosacridos muy diversos (cido &iillioo, galadow.
N-aoetilgii.IC06amina ... ). cadenas con distintas dispo&*:ione&. De acuerdo oon stas. tos N-gticanos se
daslfican en 3 tJ'UPQ&: riooll.,.. manosa. complejos e hlbrldos.
MADURACION O PROCESAMIENTO DEL POLIPPTIDO NACIENTE
N"'i,,icano del tipo
en '"RIMW;II
(por ejemplo. oola
ti1'01100ullna)
dd cipo
-QOmpleJ(>-
en la
inmunoJotn,iluv 0)
Slo & lll "'\
el!fllCWifl:l tn'l!r-.1. fJ I!ftiCI'(I Jc
y de l''
oh\'l'I"!IU & con
\ Ull lltJII!\'1'(1\')IIIIIbk de l'llllllfil'IIO<IIIC,_
11 ]XItllr dci \!l;nll(ll
Nglieano del
tipo ''hlb kkl''
(por cjemp'o. en
la o\'().11bWttl1111)
"'mil ..... lid
tipo o,)mplejll
El pOOpfplidll,;,: _,m,.. en
MJ: roWtl<l,
l'ft la 1..-: o llf_..lkl Rt
IMffi<lf), D bien 111..:n.&'
o;n ' u ,...,t'Jlor;ma
COJOIIJQMmllWI<I eomocnu 111 -.Jicin
"".Uiln!fel,,
l)cl C'fflltp H- (Qf'IIIQII
' t\knb'\ de:
y dt tnmspunt

l)o;l k l ,.. "'"" ..
Yl'.!io:llln (!lit lr.IIIJJ!OI'Ill!l
el
I""Co&ll!lo;nlo,: :lillt,.ib.J,
hklll ti Go;.ltli
1_... f;ICIIIJif<:
y mcn\1 Gl. s; .. o FtK
..... ,
en 1'{>0
r.unal> <kllfll) o:Ol'lplqu
!IJ.*:oprol.:IIWI>

com!*'llmtntGIIi
subo.:duhnn

(iiltso OC(IlnljiiCU b
n .. & la
faokna dit.'ll>ll('llrid..:ll
331
332
MODIFICACI ONES POSTRADUCCIOHALES:
e) Biosintesis de las glk;oproleinas
La incorporaat'ln de las cadenas oligosacaridicas al polipptido es uno de prooe:sos metab6icos
que tienen lugar en et lumen del retiC\Ao endopfsmico (RE) y del aparato de Qo9. las protelnas. por tanto. se
mantienen aisladas del citoplasma dur&nle su glicosif<'lci()n, tiene k.ll)tlt mientr&s 1<'1 l)t()4elna vtt v!ajtlncJO a 10 18rgo die
la ruta reticulo enclool.smioo _,. ve&kulas de lranslerencia ap<tr;,tlo CS. Golgi vni<:UlM do scc;rocin o dMtino llnal
de ta glicoproteina (pg. 331),
los OiJicanos y N-glicanos &e sintetizan IXlf Mas mctOOlicM cfclr3mente (fofcrcnlos. pero., lOs e.sos
unin de 106 mono&aerido$ ft$1<\ p0r glicosi ltn.nsferasas, espeemeas no SOlo J)ara reooi"'IC:ef' e1
Que se incorpora y la C&<JMa olifiOsaearidiea que acta de aoeptOr, sino tan'bin pata fotmar el eorMee en
l)(l$icionet muy de&lidas del anillO de cada uno de toe azcares. Estas enzknas se encuentran en el inlerior det retlcdo
endoplas.....::o y del apatato de Golgi. asociadas a su membrana. Para poder&e emplear como sustrato6, los
mooos&earldos deben estar accivados por LR6n a nuclelklos: como UOP.Qc, UDPGicNAc, VDPGal,
UDPGaiNAc. GDPMan. GDPFuc y CMPS&a. En otros ca606, el precur&ar es el azcar unido a una molQM: de
dolleol (un lfpdo terpenolde),
HO
La adiCin de los 0-glicanos al reSiduo de Ser o Thr N 1031itl direelllltl"'&l'tle, por unin SIJoeslva de los
mooosaairidos, calafizada por lasrHpectNas g!iCO$illtMS'erasa$. Todas las etaPaS tienen lugar en el aparato de
GOigl, de torma po61t9ducclonal (la slntesil t 13 poipeptidiea se termina pre\ltame.nte, en el RE).
EJemplo do bi0$fn!esis de Q-glic;anos
( ........ dt ll'lll(lNl .... lill tubmullll.,_ paMS)
-
5>11u
-
MA.OUAACtN 0 PROCESAMIE,NTO DEl. POliPt Pn OO NACIENTE
333
La slnles.tS de H-gllcoprolefnas es un proceso ms CQmplejo, que comienza por la Simescs M un Oli!)t:l!l::teando
Pf'OO\K$Of un.oo a1 dohOQI, !!eguida de ta u.-.nswenot3 tn blOque ese 31 tesidl.lc> 49 del:
pohpeplido y finalmente de nueY\ls de adlaotl de monosac' rldos y !amblen de et.minaciOO de alguno!!
de bs prev4amente I'ICOtporados. El oroceso se desatroila secuenCialmente enlre recuto endoplstnioo
(OOlradCCIOnatmente) y el aparato o oompleJO de Golgi (postraduocionatme.nle)
c:ltosol
1).)1-f'l' DviP
ldllttwlpiro/u.-fiiiOI "1
! lumon
: del RE
dd
oi110$11Ciiri00 hu.,1:1 w
fooua definiti\'11

.. Gkt
citosol O
JO

lum&n
_L.
Ad..:III -ul de lllJbellp""'
Q) adw pt)f Hiohcol
l:.a ho nn ollkma de 1 mtonbr.ml dd R[
trcl'fli'PI!OO).I\:.n1Glct. hcl:ll fo,l,ml ,
... '( l;f'hl
o o
o
4
del RE
e


j

334
MODIFICACIONES POSm.ADUCCIONAt.ES:
2 lumen

de Golgl
Qok
Q fol!>fi!h}
1 ( <!} AliKtiln '1 eli:m11ucio'm 11.:
Q nal
1 En tllumm dd )(llut-le$) o 1 l11 t:.trll
Q Ok'lAc Q fuc
mll.-mt dO 1& ti'ICI!l ,. (flrolelna. de
Q taN-\e
O S
24.3.1.3 Modificacin con lipldos
a) Aclfacin (cidos grasos)
Aunque menos conooda que e t>ico&ilacin. la aciliK:i6n C$ \.lt\a modlnestcion Igualmente importante en algunas
protelnas. Puede afectar a las l:l'etaleS o a 10!1 exlfemos terminales del pollppt}do et1 general aumenta la
hldrolobtcidad do la proleina. y ttn ooneretQ ellipio StJPOOe a menudo un pon10 de anctate a la l"f''Qtnbrana (oomnmontc
en la cara lntemcl} C!$1:1 reaeo.on ttene lugar en protelnas diiOS!lcas $Oiubte:&, on t\bo$om9$
......
Aeiladn Cle cadenas ta1era1es de Ser y Ttv (enlaot %1cr con 01 grupo OH) o de cys-(enlaee tlo@ster con el SH)..
wn gt<:t$Q$ c 14C (mirh1t.ato), 16C (Ptdmil8l0} y 18C (ea.teerato y Oleato)
Q-olelln:rina
()

/V' .. /\/\/\/\
1 utOtllr. 11 1
fllelmltdill.nldl!Cat do.i kldo palmhll
MADURACIN 0 PROCESAMIENTO DEL NACIENTE
335
Aclttein de m .:xlleln:)S El grupo 3/l'lln() tbtrl'linal formar enl:w:e arnida eon 1Tnri$1(JIO (1.tC) o p;,lmitalo
1 ' 6C), lo <1\10 t1et1e luO<W & COO'IPielar 13 sintOSI$ &f polippbdOJ La reacaOo pane de
mirlstlkOen:oma A catMzada por\#\<'! mlristiiCoA : protelna Nmlrlstll cranslet<t$8.
\". mir i$1 i k i1111

1-1 11.1, . 1
lt\ln ilfi(J. t:1di.::1l del klll(l nlln UI:Q
l,.....,.l) M.aw. llllflhc..SW 01 1
..
1 .... .....,.._, (l f 1011'lJi ... lt'<
Otl de ""'*''"" ... .,....
"'"""'""'-
._.. ..,,liu..ol -.e ooaoopn<,.,.,.., - ...
....... rn.-.x.x.x. .\ .
"
kclll< ""' Woiwo
b} Prenrlacill (terpenos)
te "nen lr(IS. tipo$ de Qlc.IK:i.'ilc$ f'Ot" unid;)dcs do esoprG'OQ. de all l e: nombre
"'J,lrenilooorn (10C). aarne:siiO ( I.SC) y gcrnnilgoranlo f20C), los dos pnmeros ;;on mulabolitos 1ntermedianos de
la rut.'l t'li0$1ntlHie& clel OOieS!erol. Al tgtlbl $vfron esta mcX:Mc;:<)(;i6n Vf'O'I)intiS $inlet!UdM en


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Emre 1W9 proteioos modllicacas con lamesdo se eocuen:ran la pt'Ot:f)ina R:.$ G y l)ro4einas de la ma<nz
nudear La oncoprotelna Ras utiliza et fameSib para andatse a la superfkiB dtt loa l)l<tsmtica y poder
las sel\ala$ nlraoelulares que desel"f!bx:.an ef1 el fenotpo ear-ceroso eJ b(oqueo de 13 iSOPOI" 'l(:il';ln .coniiOV(I
pl)r<Jk'3 de lt' a<:l.iviC:SOO por lo que !>e han desaf'f'()(.ado Mrmacos antJCaneetOSO$ b.<lsaoS
en ltt rHlieibn de lll
24.3.1.4 Formacin de puentes dlsulfuro
Muchas proteinas forman entrecruzarrlentos cova}e(ues mediante puente-:s dlsulf\lt c:nlrt re"os Cys de la mtStna
o de distlnla cadena (nlra- o lntercateoaoos. respectlvamente) EstO$ enl3!.'<!$ qve menor trewena.a en
pJ'otoin.;J$ que en las que la clula panclpan et1 et plegamiento (pg 338) y protegen la
eonrormac;i(ln .'ttivo de 1{1 frente ., la dosnawrahzaCItl en oo ambiente que I)I)OO(t $el' m$
agteslvO La ele Mll'IOtS diwtlvro (uN) rOOox) wene por la enZitna
lsomer as.a y por oon SH (tiOI). 13 pnnoipat de cuales es el glulabOI\ (f"
gM:ImiiCi'$letnilgliCI!)I)
GSSCi
"--
lj l;;,miO.t
2GSII
_.1
d!!U..I!t.n) I!IOmr.t;t!,;a
tEC53 4 1)
336
MODif iCACIONES POSTRADUCCIOHALES:
24.3.1.5 Otras modlflcaclones
Para ejercer su actividad muchas proteinas procaribs y wcariOCic<ts grupos prost.Cticos, algunos <So&
M:ls unidos covalentemenle una ve:z que el POiipptido ha mdont'OO ol riboiiOfl'al , En!Te e$1Qs grupos Ptle'den
citarse la blotina en la <N::elil-CoA C'rboJI<'IS. o el grupo 1\emo en MMOglobina y elocromo c.
La actividttd de alguMS enzimas se regula mediante la adiclOn de mononuetetldos. Por efempiO, la glutan
(do! s.stema fijador de nl!tgeno en procariotas) en su fonna inoctiva se enruentra aclenilada en
rt$ic:IOO Tyr. EtgrOOO de adenlladOn es controlado por una Pf'O(elna reguladora.
Ul ADP.,.ibosilaein es Olt& reecdo de modlflcaciOn que acta de fama te'Yetslble con carilcter regulador de &t
protei1'18S dtopi&:Smicas Transferas:as especificas actan sobre His,Jvg. A&n. tys o Glu,
etnPieaf\CJO oomo oosuS(rato el NAO . la misma actividad es ejercida, perturbanOo la rogutaciOn ()Ot 1<'1$
tolllnas diftrica. COlrica y pertsica.
En algunas pt04einas se la sulfaQc:i6n de Tyr C()(l 3' fostoodenoslnaS'fosfosulfato: tiene lugar en el
wml)lojo de GolgJ..
24.3.2 Maduraci n por escisin de las protenas: Procesamiento proteoltico
Este segundo tfpo de maduracin P)(eic<' wnsi$to ett la ruptura del polipplido en
pollppt:IOOs mas pequel'los. cada uno con distinta activ!d3CJ, o en la etmlnaciOn de una pordOn sin lJndOn
(generalmente pequel\a} dt'lr un Sc)lc) polipl)tido activo. En cualquier caso. se trata de un proceso de ac-ti vaciOn,
de preCU'&Ore& a ""*'int'ls No debe OOOiuncl!ii"Se eosta rowra con la respon&able de la degradacin
proteica (pg. 341)-
Adems de lo5 prooe$0$ de &CIIvacln por proteollsis, que &e describen a oontinuacin. se deben
dentro de este apartado 1<"1 .. iminaoeln de residuos amlno y carboxiterminales, esencialmente la !ibelacin
do a. meliOniM N termlnal (previa desb'mlladOn en protelnas procaritiCCI$), y ta *"in..-;iOn de aa: lam&Oa secueneia
s.eal (responsable de la direccin o destino de la&; mach.ma5,. 324).
24.3.2.1 Activacin de proenzimas proteoliticas
1.as P'Oieasas <Jiges1lvas trlpsl na y qulmottipt,i na se sintcWan en forma ir'ladiva. como ptecursores o
denominadas z:lmOgenos (en realidad, rec::in sinteiled3$ son Pf'ept'o-prOieinas. pues poseen un
p6ptido que 1&9 maree como ptQteln$& de MerociOn y 1uogo es elir'IW\Ildo).. De ese modo se Pftl4eoen las oUas
dOrde se sintetizan y se reserva la actuaciQn par<' ellubO digestivo,
la trlpsl na. produCidoa en el pancret's. se $CIIva por elmlnacln de su octappcioo PQf lcl aociOn ele la
enter oqul nasa producida f)O( la$ de 13 pareo del il'ltestino
aminocidos
1... 15--16 .. 2324... 147
prc-pro-prot.:lrn prctnJinS.c'C>
pro protdna ti'IJSint:eu)
protdna actiHI cripsinu
La trip$in.a a su vez activando otras p..-oenzimas o z:imgenos. ol'llro ellO$ el pteeursor
de otra enzima digotlivtl pancrellea.la qulmotrfpslna: esta aclivacin os algo rnh OOMI)Ieja:
pro'flfotdna qll i mol p!!inltgeno
residuos amino8c1dos
1819_. 164 .. 263
(: ..

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m
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> ) "'t.m"""ci.-&1
po:pbOO K&l
ln!*lllll
<fiJlC<I.:..'lrl fl'lf
:

l.ot. ) (l .t.
e

PLEGAMIENTO DE PROTEiNAS 337
24.3.2.2 Activacin de precursores de hormonas peptdicas
Como ejemplo caraaerls1Joo, veamos la a.lntesiS de la Insulina Ademas oe demot.trar la maouraciO' )()( escis.tl
proteol11ca, constkuye un tipeoo de modificacin qufmlca por formacin de enlaces dlsulturo 335).
1. La Insulina se sintettta en l cu; clulas B (o fH de los Islotes de l angemans del bajO la b'Mil de
preprolnsu1ina. un preoorsor pofpep(ldioo inactrvo. Se evita asf la posibilidad de que la Insulina activa P\Jdieta
actuat sobre dichas cHulas. La presencia en su extremo amm de una secue.ncla sel\91 detef'tl'lina, OOtM en !Oda
protelna desbnada a la secrecin. el transporte de es1a motcula rnedianle veslculas hada el eX1er1or oerular
tlllll llllllili:ldllS
L. 142L 54-S:L. &990... 110
m>insulull'!
e t
..
"' :
proteh\11 n;th a i nsuli u ( '>) (-.
:

( >
p:pbdo C(_.,
2. En el rctic:uiO tndoplt\smico MI la secuencia &ella! dando la proinsu11na, el verdadero precursor an
E:ste M pliega en lridimensio!\31 C$pOcifie<t. e$1able. que la formacin de tres
effl\ct$ <liSulfuro.
3. La pf(lirlsulina se ttat\Sporta haSta en e1 t'IPl)rllto dt: Golgi, dQndC w PO' en
IMulina activa. Las mol<:IABS se acumulan en !)r'6nv/o$ dfJ .$e<:f"(.iCitf, donde se
completa su ptoteollsls y se almacenan ha"a que la clula reCIDe las sel\aleS que detetmii\M la secre66n de 1;)
msulina al medio extracelular.
24.4 PLEGAMIENTO DE PROTENAS
Uno de les probletnas lmponantes en biOiogfa molecular es oomprencser cmo 18 ir'lfOrrnt'lc:itl oontcntd<t en la
secuencia de aminocidos de una protena da lugar a &u estruCiura lrldlmenSional <IStlnli\la, regponsable de su lunein o
;:tCtividt'ld Er;to Oe \<1 e<tef'l(ll PQI'ipeptidica. QJa tiene lUgar en unos segundos, se realiza
sifT'II.II<\neamenW tll tr'fioo y a unt'l do la cel polipptido, PQr lo qua maduradon y ptegamief'lto es&l\n
ligMOs.
A:edentemet'lte se ha descubilerto que los defeCIOS en 1M MaS (Jc Plc9itmiel'llo y trfico da las protelnas son la
causa molecular de varias enfetmedades.
La flbtosls qutstlea se Otlgina por ooa miJ!aei6fl er'l el gen oe trCin$PQf1adora de cloruro, que suprime
uno de sus af1W'IOclos (pg. 3.51 ). Este cambio la seoorociM <Jet complejo proteina<arabina (pg 338).
10 que a su vez mplde que la protena !lalga del RE y oontinUe $V y trfico hacia la membrana
eitOOia$mlica.
1.4 de Alzheimor, ttfe.ct:t t'll 10% de l<1s personas mayores de 65 anos. se orlgiM en 1)3f1e por 18
acumulaCin de agrag&ckl$ !Se un ppbclo derivado de la protcina P<llribde. e&OS agregadOS poSiblemente estn
causados por un defecto en el pleganVento.
Una forma herdaria de enflum.a (enfennedad pulmonar se proOOce por mutacaones en el gen de
la (pg. 376) qua conducen a la agregaein de la ptOteiM, impidiendo su seorecin: la deficiencia de
la protoina en plasma prodUCE! susoeptlb)iad al desarrollo de la enfetmed8CI.
Por U!brn(), la <:onocid<t onfermedad de &cls vacas tocas, en ovejas y de Crcutzfoki-Jacob en
nurnanos son <:aus&CI8$ por \lf'ltl protefOCI con plegamiento anmalo, la protefna prinica PrP. AvncNC 1(1
descripcin de este supera IO'lS PO$ibilidades da este libro, baste deat que una molcula Cle l)f()4cina
plegada anormalmente lnCiuoe et mtSmo tn rnol6culas de la misma proteina, conducienoo asi
por "' lacio al desarrollo de la enfermedad y por otro a su lf81'1Stni$i00 a Olro$ individuos
24.4.1 Mecanismo del plegamiento de las protenas
Algunos polipptidos. espeaalmen:e los ms peqoonos, pueden adoptat su tndimenstonal naliva de
IOti"M espontane,a, pero en la mayor parte de los casos et plegai'Nen40 correctc:> reqviere la de protenas
espeaates (<1rSiinlas de 1as se la lr.lduccin del trmino ingls Ch8perotles na llevadO a
chaperonas, chaperoni nas, <:el&doras o earabins; etnPIC0rcmos eMe ltimo nombte. ms fiel al significado Otiginat
de edad acompattsnte de una JOven, que evita intetaocione:s nt:orroctas') Al p;;1rec;er no slo estn Implicadas
en el plegam19RIO, 61110 18nan en la lranslocaein 8 travs de tnembr&nas suboelularos y en la degfildaOIOn de las
prolelnas.
338
MOOlFlCACIONES POSTRADUCCIONALES:
Adems <Jo l<i$ <::<U<tbinM, en tas eon!tlbuyet'l al plegamiento dos lsomerasas que, al catalzar
y de aoeletan e-1 plegamiento sin afectar a su tesultado final. Entre elas cabe
cital 1& protai na-disulfuro isomerasa, Que lnlefeambla enlaces dlsllfuro entre dos molculas (pg. 335) y otras
enzimct$ Q1J8 C<JI<'!IiUJn 1(1 inter00tlv'$i6n <le tas ootiormaCiOf'les Cl's y IJ'8nS de ta foonando enlace peptldioo,
cont:OOv)'onoo <\mMs a que ta pollpepUdloe adOpte distintas confonnaclones en la bsqueda de la de m' mma
cnergi<t
Et conoc-nlento e bs mecanl&mOS e interacciones que ltt 9$11'\lf;iurt\ surge de
e.xpenmen*OS pioneros de de51lat\lraliuac;in y ron3turrllizaei0n ptOieiCa (OOf' ta enZima ttiXlr\ucteasa, de pequetlo
tai'NI"''o y un &olo dominio) y CI0$1orM;.mcnte de la .,plic:aeiM de l'r'ltodos biofTslcos de anlisis y tecnoiOgla del ONA para
PQ!ipepliclos Dada la variedad de protelnas y la 00f'11)1ejjdad de b6 mecanismos implicado$. no se
conooen aUn a.., regl(l<S que rigen el plegamiento in vivo: an no somos capaces de predecw la estructura tridimen&ional
O& una a partir oe su secuel'laa.
Sil'l embatgO. est daro que e& la &ec:.uenCJil de ...-ninokidos ., que detenniM por sj n'isma 1a estructura
trldlmenslonal activa. la estruct\lra prm31ri;l o lineN cte la a$()()ia(:l6n por enlaces pepfdfcos de 10s
aminocidos {delerminada a su POt l<t $0(:U0t'l(:i31it'.e411 de bases del ONA a 1raves del mANA) define la di&pOSicln
de la cadena polipeptidica para formar puentes Ot hldr(lgeno, la capacidad de sus residuos hldrofbicoe pera
acomooarse en el lnlenOt de la molcula y los eSitiCO$ que definen las posiciones ms 'd6neas de la
conformacin na1iva. Este pvnlo linct de incklle pr&etka, blotac:no!Oglca. porque cualQuier mocbllcacin de
la secuenCia stn.-clum final de ta prOielna.
Lls tl<'Ps del proceso de plegamiento pueden analizarse, de klrma aDrO:UnOO<', siguiendo lOs niveleS de
organilataOn oe las protefnas globulateli. En gener<lf. .,a pleg&mieniO viene oetern'inado pot considefaclones
energelleas oorvespordentes a las estruellJra& seca.mdaria y terei3ria. &Quelas Que petm!ten el mximo nmero de
puentes de hidrgeno e interaociones de v0111 dcr w ... ls, inie&S e nidrotbicas, es decir, fa oonfonnacin de menor
energla la mAs e-:staf:)le).
Mucha& st !)legan a tr8'Ys de eslados globtAares interrnecios. conociesos oomo de fundido"
(moNM COf'I'ClGCias aunque mas abienas y ftexibles que la col'lformciQn c:on una esuucrura
se<:un<i<lrial ocmsidert'ble, mas o menos slmllaf a la de aqulla, pero que carooen do su estructuta tetclarla oel!nlda.
las cadenas lat.-aln de los at'l\l"'ocidos en el glbulo fundido no 1\an e:stablocido aUn sus il'lletllociones muruas,
pro$0r'lU.n libertad oe e h eracc:in oon el disolvcnto, osmalmente 1&s hidrotOblc:as. Este primer
plogamiel'lto seria oomo el &Obre $1 que $0 la estructura ltldlmen&iOn&l deflnltlYa, asl oorno un
pliegue en e la 4:1$b'Uelurit firwl
El pmcipio b&sioo del p&egarriento, en su conjunto. es la presencia de resldOO$ hidrofbi(X)$ de l<l c:&el'l<'l en ul\
ambeenle acuoso altamfntt pelar: el efecto hidrofbico. el mi&mO que Oeterminit &a t'SOCialciOI'I oe los l!pido$ el\ las
membranas celulares, O$ lt' prinopetluente de estabilidad de la oonformaci6n Pie93d<'l de una proleil'l&.
24.4.2 Protei nas implicadas en el plegamiento: carabinas molecular es
los oollpptidos en de glf)ulo fundido. 106 plegados oarciaf o inoorrectamente y aqullos
que saletldo del tilosoma {cadena$ NJoCionlot) exponer\ en su superllcte residu06 hidro'bicos que en la
()f'()telna nallva estar&n siempre dispuestos en el norior de la molcula ("escondidos' o enterrados por la 91\YOitura do
residuos hkrofilloos que torma la 11uporficie de la proceina). Estas regiol\es hidrofbicas. !*it evil;;ar 1<1 con et
medio acuoso DOlar. tienden a a&Ociars.e entre si, conduciendo a &a fotlnacin de agregados dtt V'ari3s m()lCIAM {().le en
o
lu c11rabin.u ptUtcgco 1
dfludole
ll('rnp<l p(lra 'I\M: 9C

ronklnnacan nalwa



ronnanativa
(plepmknt
correcto.
eoerglK<'mC:IIIC
ms c:st<lbl(:) ..,..
1
f<tMn
ho<l lvt> .... .,.,
"--
PLEGAMIENTO DE PROTEINAS
339
algunos casos consdwyen tos llamados cuerpos de nctu&ln"). El plegamiento por tanto, requiere uM
ptOiecclbn frente a es:la posibilidad, hasta que la la ocasin de encontrar su MbV3, ms.
estable; este e& uno de 10& papeles de las carabinas moleculares.
24.4.2.1 Tipos de carabinas
Las ptWneras ptotelnas ldentiflcact.as oomo aocesorias. auxllares o catalizadoras oet plegamiento se oam&ton
protelna-s de choque trmico (Hsp, por he8l. ShOCk prorein), porque su slntesls se al SOf'l'le>ter o11.11as en
cu!6vo a una elevacin temporal de la temperan.a. Esto es asl porque en esas condiciones aumenta la canl!dad <Je
molculas parcialmente desplegada$, Ql.Mt es 1'1ee$$ario replegar. Actualmerue. el grupo de Cilrabinas Incluye otras
muchas proteinas. no relacionadas enlre si. imoortames para la viabiliclad celular a todas las temperaturas y bajo !Odas
&a:s Ortunst&nc::ias De .-cuen:So con su modo do 3Ciu<lci6n, se pueden disllngw dos grande$ grupos de carabinas
molecui<UO!S
a) Carabinas do/tipo Hsp70
Esta lamma (CU)'O nombre procede de su masa molecular de 70 oomprenae protetnas que se asoc..&f\ a
s&gmel'ltos peptldlcos oonos.. en conformacin eJttel'ldda o desllegada y riCOs M amino&cldos hidrol6bieo&. Pot ello,
ceoonocen las cadenas polipeptidicas naaentes segn estn saliendo del rilosoma. Su aocl6n ptinc:c>al es ev.tar que se
agceguen por r.teracaones l'lktofblca& lntetmotecutares (reoordando la metalora oe la senorlta). Existen carabinas de
esta familia en procariotas. eucanocas. mitooondnas. ckltoplastos y en el intenor del retfculo endoplsmioo. Su unin y
separacin, reversibles. con la prolelna desplegada dependen de la hidrlisis de ATP pot parle de una ae1iVtdad ATPasa
propia de la H$070 Es1os prooe&O$ estn a menudo roodulado& pot otro tipo de proteinas. la familia Hsp40, con
e<tP<I!CidM de activttttore:s 00 13 H$p70 (oo-C<Wabinas) y tambin de carabinas molecares por 5i mismas
d " "
H ..
lll'""'') ""' (1<. (111\10
""';mn.1 "\' "'
Jllo:..ll)rj,p
las carallirlas HSp70 estabilital'l , por t31'1to, tas c:eden<'ls potipcptidicas naetenles. proteglnoofas aeta agregaCin,
y mediaMe tos CiC*:>$ oontr(ll;l(:k)$ dtt l.n6n y proporaonan un entorno seguro para que ta proteint'l pued3
plegarSe ac:secuadamMte. Sin embargo. no contribuyen a deflrw el plegamrento. que soto depende de la secuencia oet
pollpptido.
b) carabinas del tipo Hsp6Q
Estas rom\30 un<'l tt&trvclura multJmrica muy caracterlstlca, en fonna de caja CilMrlle31. en cvyo mtcrior
se tos potipeptidOS y <'Ondt experimentan !SU ples)amiento, aislados del entorno y de nuevo 13
con ovas molculas de>sptegacia'S o parci3!mente J)legnd3$ El ejomplo mejor oonoado esta ptotelna GroEL ne E. C()li,
cuya estnJctura se ha determhaoo por criStaiOgtafla de ta)'()S X a 811<'1 reSOlucin Con la colaboracin de GroES.
Jl'O(elna de la familia Hsp10, dfige el (lfe93Mietl'O del poliptl)tidO. Si &e pliega completamente en un CiClO,
puede volver a entrar en la callidad para contil'lu::tr hasta tlle:tnUM' 13 e$lructura naliva.
34,,-: 0 __
MOOIFICACtONES POSTRAOUCCIONALES:
GtoEL (Hsp60)
GroESUbpiO)

de IIH:Oo
! l cad.l lolll) .: ..
"' de 6() lJ.);,
7 \ _ _____ _: 1_:P_
U vni6116c: A n
((IU(QfRUCiolllllften h .mtll llf'ir.M, doo& oc
unen OroES 1 Su.tfiiJj) ryt;S
...,.,., a!lll.14od:' tW la.:ujil,
11M un rompll!rtllllnllu hidro.llilbi<o
1 \DI'
1 " 1'
Fl flltpl'nMio tmnl"une
6t u.uion o;
hoo.b'Ololg dt 1\ 11' Jlllt p!lf11!
ck hu: dt
(ftoll,
Se han h(lm()(o:)gOS del sistema CtoeL-GtoES en I'Tftocoodrias y CIOf'Oplastos, y protei nas mono&
estrechamente ref<lcion,'ld{IS on et l'!i!OSOI eucaAOCico.
24,4,2,2 Funci n de las carabinas
Uts cart'bnt"tS mole<:ulares deosempenan un papel esencial et1 vari;)& tirounsiMQ.1S:
En ol dao& la gran den6idad de orl)lnlos y macromolc:\la$, Ita W!ricd<ad y eilwOOa eoneent.racl6n de
ptdeinas 9111 I)(O$$t\1e$ t1\ tase de plegamiento la probabilidad de inten'lociOOO$ '/ de
agregaciOn protei.n.ns, oomo se ha comentado. es avit<Kia por las
en '"" mil(l((lndria y el c:loropi;tsto lntvlenen en el ne;ee$ario para el ttatioo de de origen
cilOS611Co a travs de las oldorna <! aet otg&ntAo, M oomo en el pSegamiento en 5111nWtof, par.J
adQulnr fu!'lcionalidad
En ol lumen d.,& RE ifltracoonan eon las protenas inc;arn;,ct;,rnr.nte (o l:.s proteiM!. dimflcas o
mulbn'l6rk0s no ertSambladas de forma aOOcuada), con 10 que quedan retenidas en et RE hasta que tiene
IUQtW t!l plegamlemo Slo enlonces (al que 1$$ proteltlaS pleg9das desele el pnncipio) se
tra,,sponan en \'eslculas hacia el (;(lmpltlo Go9. En c:aso conltarlo, las proternas no plegadas tioon degrod.,d<'!&-.
24,5 DEGRADACIN DE LAS PROTENAS
En l)arNIIetO con el desernpeno de &u funon, l;.as proi.Cinas se degradan en la clula E&te pr001it$0
continuo. \lNOO a'<! bic)llm"'!ds, ell8tflado recambio PfOteloco (fltl ingSk. twn(W41") . que tiene lugat a b largo
de toda fa W:la cdull)t y t!S necesario para mantener eo lodo momento un nlv<ll adl!euado de pt"Oteinas (estado
ost<1CJOnOriO). nfJSpeo!\'SaDie para la acwidad celular, il(lrtt kl acumulacin de protelnas anormales o no
y pam Jacll!lar ei recidado de los amii'IO&cidO$ oe foi ma genc'lca, se puede door en una una
prole-in;, ' sobrevive- en promediO uoos dos dlas anlCis de sei Ol!gradada, lo que da idea de la groo aelividad do IC)I
prQQO$Qs dt y de degradacin
E.ltlsten protelnas que l!IJ sarneti;fM y degradan (se recambian) de forma muy rilpidtt rt:Spe<:IO a aa vida media de la
oU a donde se enC\ICnlr.ln Entte ellas se encoen1mn las protefnas por ejemplo poc haber inootpOtado
amfiOcldos incorrOQos en la sil'llest!l, las que no desempet\an !N !Uncin, a \'eces un simple cambio
quimioo COI'v,erto l) una prol elna en b!anco de una accin prot.eolitica. Por el conttario, otras protelnas. la& nooos:.ri3S
en todo momen1.0. $Otl muy es.!ables y pcx ello no requieren una sintesis continua a elevada veloc:icJcld Asi ocuue. por
con la qua puedo lodO el tiempo de vida media del eritrocito (120 ditt$ on hunw\0&).
En eucariotas axisron <Sos !listerMs prinCipales de degradaQOO de las P'Q4CiM$. uno los IISosomas y et
OltO en el CMO&OI
OEGRADACION DE LAS PROTEfNAS
341
24.5.1 Degradacin lisosmica
EJ pl'imet SiSiel'l\8 de degradeeiOt! se realiza eo !os lisosoma& l!bemOo9 lnleialmeflte poi' a paru1
del complejo de Golgl (lisosome& prlmano&} y que despus reciben enzimas hiclro!lt1C8S mediante YeS!culas procedentes
tamblen del GoiQI. Estos etgnulos delimlta<bs por una membrana &efl(;illcl aet.mulal'l mas tie 50 enzimas htdrol bcas de
tooo ttpo, capate$ de atWll $Ol)(e iu::idoo nvcl$ieos lfpido$, gtic;O!Iticas. etc , oon una gran acbvldad
al pH c:aracto:sb<:o del fa!rcdedor de 5) 1..3$ om:imti:S li3C)$0tni'lle!l Q\lt l'ndrohun protcinas
SEt denomMn
las envmas hidroli6c&li P'.WI'IIos en IO$Ii$0$0111liS de Upo d9 Ulula. como ejemplo las
of!lutas pan!l'fMtlcas coobenen con en.rimas capaces de en las .sigulfmte& rulas e degradaCin
Para la WCOCdOSIS, o lranlijlOfte de su oonteni.do ennmllc:o al ex!enor de la c:etula isecreclbn}
ta fagOQ((Isi$ o tormacin de liSO$Orna$ ftlgiCO:S Oilri'l igoorir
Pi.tr;J dStruir fZtgoetbC3$ con <le'" $upet1icit ctlul<"tr
En pal'a (()rllper k>S y libel(lr $1JS tol'l11M3S, cooduoendo 8 la :'MhSIS ..
Olula (una de l:ts tonnas ce muerte celular programada. que lnteNiene por eempto en el desartolo embrionafiO)
24.5.2 Degradacin citoslica
U. m;1yo,-la 00 las prolelnas presentes en to1ma b!}te en el dtosol se pueden degradar por esta ruta El proceso es
rruv selectivo, est bafo un e&triao centro' y es la ruta de degradacin que requ1ere mayor de ATP Al gua! Ql>e
en et ttftCO da protenas. inlervtenen como mediadores en la degradaon seales esoeciales
()O('ICtetamente af'I'W)Ocidos Nlemw!ales y la protelna ublqultl l\8...
24.5.2.1 Ubiquitina
1..'1 \lbQ!Jitintt es un.'\ PJueM -<!e 76 ltolffl;)c,t asl por ef'l
{e:s ubicua) Es poslblemenle una de bl$ proteinas consef'ladas entte fl8:s de te-vfjuf'3 y
humanos 96k> se diferencian en lfes anwlOc.ctos). De carcw globuW, tigida y muy estable, lnteMene eo'OO marcadOr
de la degradacin de otras {)roteinas, at unirse ccwalentememe a euas. de forma qoo las protelnas
ubiq(l{tJn.<KJas quedafl oora ser digeridas por los !i4temas. proteoilboos.
La ubiqulti nacln. ubiquitlllilacl6n o uflol6n tt fa ubiQU!IH1a a protelna e la deslruocon se
realiza en un ptoceso ckt tre$ reacciCwtEI$. catalizada:s por 3 enzimas diferentes
rruh."!IU M:
debe degrlbl
r:3 \lne laubiquiri n11
Ci!lbda p)ll' 1:211 Ju
protcina diana.
un dci10111
ubiquilinll
r:nboc
<Qirr ,;
Gly .. 'TIIlUI.U
y unu C)'S d..- F.l

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1

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1:2 o t.>(ll!JiflJ ponadotJ

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+{(l. ' ' "'l W.'O.
'
laubK(uJI.II'IIIllt:
cransfi<:r;. de El a "
t:Cin un cnlacr - - - - -
sunJar
accu:u..ini'IC:Il de F 1, f.2
4 )' E3 t'l l y;4 Jl dr::
la himaubiquitina unida 111
tttcur,:r:ntr .te proc.::inu ii<.ld..:n ' '"' cudcn11 de
ubrq11111n:t,) nwllkulti de
' - -
------
rrotcinu
lada. con
mbtcc i!iOPtpddir::o C'JJtrt
ly'<(e)Nilt y Gl.)o(u)COOI I

poltub;qm11101b
El enl8c:e amida de la con l:t ptotqif'l<\ i&opeplfdico porque no llene lugar con el am.no " su'll)
oon el e <le la cadena '<ltal de lyt constituye L<t fJIIIffl el marcaje parCJ la .woteol!sltf (se te ha
el ber:so de la muerte"). e&.peeialmente coando My mu!llublquitiMOiOn (ha$13 20 lflQiOI.A. 1S do ubiqurtina untdas
en cadena a de
342 MOOIFICACI<mES POSTRAOUCCIONALES;
24.5.2.2 Seales desencadenan tes de la ubiquitinacln
a) Residuo amino-tetmfttal
U lc:Sentidad del amno&c:IOO Nlerminal pareoe delemnar que una protelna reSIJite 11\iWCa!Sa con Ublqultlna con
map o menor tacllldad. Rewrdese que en eucano1as est& resdoo resulla de la eli"*""cl6n de Me! y de cualquier otro
proceso de mao.w-ado de dlctlo exuemo; las setlales aOW'IotecmirWes parecen 1\aberse conservado durante miles de
mtllone$ de anos en la evolocln.
amino..\r.ido en !)O!.io<lf
grupo 1: basicos Arg, L):$ Hi:s
gruPO 11 hidrol6bioos l..bo,lle, Trp, Phe, Tyr
grupo lll: netJ:roS: Gly, Ala, Val, Ser, Thr. Cys
1
Mcl. Pro
b) Secuencias PEST
Wla media de la protelna
Prolongada
Prolof!g.ada
eo""
Por parte. ltlmbi6n 3S()(.IB una vida media OMa con ta presencia en la protelna de regiones de 12 a 60
amnocidO$, rlc<'ls en Pro, Gl1.1, ser y Thr {P, E, S, T, eon aa abrevlann de una lerta._ E.sw teglones acwarian a modo
de esqo.ema de rec::onoc.:imiento par:. lot Sistemas en211'n:\llc:os que degradan las proteM\as de vida cona.
24.5.2.3 Proteasas responsables de la degradacin
La de l{t$. ptQI#Jnas marcadas con ubiqulbna puede ser responsabilidad da disbnlos da
prOtM$.3$ se h&n de!ICri'lo ealparnas, proteasaa. QIJe reQUieren calcio para su aauacin, pero d sisWm<a mt'l$
import,ow)to es probl)blemenlcl et del proteasoma
Se denominado ptoteasoma a un gran complejo proteic:o (2000 quo ttp<troec en tnuehM Clulas
eueat!Oueas, lonnado por dlstlmas wbu.nldade& PfQieollb$ El oon)unto, prot..1$oma 265 o cOMplejO ptotelnasa
mutueatalUco, eonbene d06 comPQC'8fltes a&OdadOIS entre $i
Un compooente central o protea&om<J lOS. fofmOOo por 28 en uM d$posb6n clllnclrica, que es el
ndeo catalltiCO responsable de la proteoli&is oon r.tleraOIOtl de fragmen1os peptldloos y de ta9
unidades de ubicplina int<tCI3$ J)flffl su fetltllizaCIII- (En cierto modo, recuerda a ia estructtKa de las caraobi!\a$
Hsp60 )
Uno o do&- CQml)C)netnt.es latetaleS, eompt&jo 195, oon acciVIdad ATPasa y capaciOad de re()QI)Q(;Or
o*PO(:if<:4ltnente los conjugados protelna-pollubilquilina.
Wl:t!fii.:J'O :grllu.ku 1%
17-Zfl iiAIIPIIdlldo.:!l
p.Ji rpo.:phcbtb dtl'c't<nt .. 'S,
( de oon CAp.xldad
AH'"'
j'lf(ll taW!I\& :!OS
1 l"f 7
fl!'lifli.'Jlllthclh
(:$(111 \ II)ICI
...
\
l'tiOOMCC b ru:ina
coo llbtqUnna. illdtvidad.
o!I(INJ'llllbo,a )' do.'>iruamralba b .,,..._ <

rrotdna
Jl(llmbiqu .unada
'
Tema 25
Bases moleculares de la mutacin
y la reparacin del DNA
25.1 Conc41pto de mvtad n ..... N ..... ............................. . ........ . . . . . . . . . . . . . . . ... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ....... . . . . . .... . . . . . . . . . . . . . . . .... . . l44
25.2 Clitslfic:aciOn de l as mu1aeiones ................................................................................................................... 344
25 .. 3 Tipo de c:6tula que s utte la mutaeiOn ......................................................................... - ................................ 344
25 3.1 MulbeiOn en o&ll.lla9 de la linea ........................................................................... 344
25.3.2 Mutacin en clUlas somtlcas ...... _, _, _,_,_,_,_, .... -- - - --- -
25.4 Mutaciones a pequet'la escala o puntuales ................................... ............................ ............................ 346
25.4.1 Camblos en la secuenCia del ONA ................................................................................ ,., _, _,_,_, ...... 347
25.4.1.1 SustituCIn ............................................... .. . . . . . . . . . . . ......... 347
a) T ran9CIOtM!'S ............... _, . ,_ ................... _, . -- ........ ------ - - - - -.. .. . . ..... _, - - - - - ---.. . 34 7
b) Transversiones ............. ....... . . . . . . . . . . . . . . . . . . .... 347
254.1.2 Oelean. ptda o 348
25.4 t .3 l nsereiOn ----. ,_ ,_, ...... ,.,_,_,_,_,_ ,_ ................. ,_ ,_ ........... -----, _,_,_,_,_,_ ........... -------. .. . . . 348
25.4.2 E1eclo sobre la secuencia de la proteina &lntellz.ada . ........................................... . . ............. 348
25.4 .2. 1 Mutaciones silencio&as ......................... -- ... --........ _, ------ - - - --. . .. _, _, _, - - - ----.. . .. 348
25.4 .2 .2 Mutaciones no silenoosas. . . .... .. .. .. .. .. . . . . . .. . . .. . . . . . . . . . ... .. . . .. . . . . . . . . . . . 349
01) Mut.-cio""" Que el $Cnlido --- . . . . -- -- 349
b) Mut:W:Iol'le$ que caml)isn el maroo de lectura ......... --- ------ . --------- 350
e) MutaciOnes que no canUarl el mateo ... ........................ . ................................... 351
d) Mutaciones oon tennlnacion prem!Wura de la ptOielna _, ........................... ,_,_,,, .. 351
e) Mutaciones oon tenninacin retrasada . . .... . . .. ..... . . . . . . . . . . . ..... . . . . . . . .. .. . .. 352
25 .. 5 Causas y mecanismos baslcos de las mutaciones .................................................................................... 352
25.5.1 Mutaciones endgenas .................. . ........................ ................ . . . . .. . . . ... . ............ . . . . . . . . . 352
25.5. 1.1 IncorporaCin de nudetldos errneosdlltanle la tepflcecion ...................... _,_, _,_,_,_,,, ... 352
25.5.1.2 Otras rrMJtaciones espontneas ................................................................ 353
Sustituciones POt desanw1aci6n oliJdativil _,. , , , , --------
b) PerCikJa oe bases por inestaDIIICiad quimk:a del f!fllaoe Ng!icosidioo ..... , _, _, _, _, _, _,_,_,, 364
e) ModifiCaCin de 189 base-9 pot mutilgenos enoogenos ................................... 354
25.5.2 Mutaciones induCidas o axgenas.. mutagrnesis .................................. - ..................... , _, _, _, _,,, ... 354
25.5 2 1 Lesiones o mutacioAC$ nduciOM S)Qt QV;irruoo11 , ... ,_, . , . . 364
25.5,2 2 Lesiones y mutnDOnes inducidns por <tgenles fi$100$ ,_, --- ... 356
25.6 Reparacin del DNA ......... - ......................................................................................... - ................................ 3S6
25.6.1 Elimin:w:ln de aget'ltes ml.llgenos ........................... - - - - - - . . 357
25.6.2 RevetSin dlrecia de ta tesl(ln -----............................ . . 357
25.6.2. 1 Reparacin de lotocli meros .................. . .... .............. . ... - - 357
25.6,2 2 iOn de btliSCS i!IQuilo _, 357
25.6. 3 Repat:w:in pot .................................. , _, _, _, _,, .... _,_,_,_,,, 358
25.6.3.1 Mecanismo gene1s1 ae reparaeiOfl por escision de nucleolidos . 359
25 6.3 2 Mecani$ITIOS especffioos de reparocl6n por oe basas ... , .. ,._,_, , _,_,_,_,, ,_, 360
25 6 4 Reparacin de 1r1oorrectos ........................................................... 362
25.7 Enfermodade$ hum.11n35 a la reparacin .............. ............... ................................................... 3-63
344 BASES MOLECULARES DE LA MUTACtH Y LA REPA.RACIN DEL ONA
25.1 CONCEPTO OE MUTACIN
Clsicamente. se dMlnc 1<1 mutacin oomo una atleracin en &a secuencia del ONA de un indi'l1duo se
tr<'l!'l$11Mc par hete:n<;ia "' $1.1$ dO$COndiontos. Loa formO' del ONA.. ll<'!m..OO tipo S<Jfvaj$ (en logls.. wird
IYJ)t).. se c:::otWierte asi en 01ra fOrma. pc:lt\M()ra Cle tal o tiPO mutlltlM. t.as mutac:iQno$" prodvcon POf Off'QrO$ en
la tepllcacl6n. por la aiteracl6n esporWiea de ru::te6tido9 o debido ata aocl6n e agenleo9 fl9ioos o <J.!iMieos (mut.tgenos),
pero oomo eonsecuencaa de la reoombinaeln mei61iea entre cromosomas hom01og08 (pg. 106).
El carcter l)efaditiwio inclt.so en la OOfirjcin $\4lQne que la rrMaein debe presentar&e do modo estable en las
Q{:tui<JS Ah0r<1 bien. OliO no 011 cstriettwnontc <t$1 AI.Jnquo <:On frocuonc:ia &e a"'me que ta rrMacin &lo
c;:()n'e$I>Oflde a socuenciM {gctles), siendO las en los producto$ (genefillmollle
protelnas} 1M '"l)(ln5able:5 de 1M Mre<liUJM$, el eonoep1o de muloci6n es llOY df.ai ms arrPo
Us mul8ci00e$ ticnon ligar en 10<10 el inthJyendo las seouencias COdifie<tntos o no. del gonoma nvcloilr
o en chJIM getmii'\8Ae$ (llercd3ble) o (no Por t(lnto, 1{1 mut4'lci0on cs. ;unto oon la
raoombir\;lein mcilica (p.ig 106), ta fuen$0 de v<Niabilidod 9CIW)tica en lodo liPO de organismos. y sv os:tudio
tiene inter6s btiSieo y aptieado 1)01 su rei9Cin con I)'OC(ISOS tan alejadas eorno la CYOIUCiOn Cle las
espoeieS, la idel'lllead g&ntlca de un i'ldlvlct..IO. Ias aheracaones pa1016gic:as de su g&nOma tesponsallles e enlermedaoes,
el dlagn6slk:o prenaW o el trMamieniO de enfetmedades somllcas (por el ci'lnoer) o de ctulas germinales.
Aunque rruchas mutaCIOfl% se generan al azar, y existe la mbma su&oeptibiicJOO dlt mutacin en toOa& t.as
regiones del genomt'l, las QL.e ocuncn &Obro el ONA (3% <101 eotttl) tienon peores eonsecuenetas. DenltO Cle
esttt mutaciOn gitnica se ei)O distinguir ontrc la de la regin del gen diroettwnenle responsable Cle la in!on'nacin
(fe910.1) estfiJCtul'al), qua altera al RNA o la protelna sintetizados, y la que ocure en las &eeueneias no oodilicantesdel gen
lmpllC8Cias en el oonttol de la expresin (regW:in lllgUf8dolcJ). que no a!tefa la prololna $lno "' slrl4e&i$ (aumenk:l o
descenso en <:Onoentracln).
25.2 CLASIFICACIN DE LAS MUTACIONES
OOOa la variedM de tae1ores implicados. plal'lteam1enl08 para c:tasifical las mutaciones. Se
estOOI<N'c\n bajo tres Criterios: lipa de clula (germinal o 90mUca), magnlbJd de la ITIIJ&acln (pequel\a, mediana o
granoe) y Mee&f'ldn'C)S causante!'. de la mutaOn..
z
e
Lo
.,
....
1
" ' ,
1 1
{ G.:mlinal
lp()v..tU S ..
omau<:a
,._kcanismo
Grandes mutaciones o anomal ias c:r..'lf'llMmicss
Mut:l(:iones mcdia.n3s': ett r.ecueflcia.'l re>CCidas
Mutaciones poqudlas o punluoles
f
rron.'$ m lo
....OOg<t!,O\S Oesami.l\i'ICR OXid:.lli\'0'1 de base$
(cspontancas o fortu11a:s) ) qufmic:t Nvl icosdH;(l
\ Mutg_enos clldgmos
{
Acein dir.."Cta
Agcnlcs qumicos Alquilantcs
lntc:rcalantc:s bi r uncionales
c.xso.onss
(indoc1das por mutot,oenos) A3tntcs fit<kos
{
UV
ionit.:mtcs
25.3 TIPO DE CLULA QUE SUFRE LA MUTACIN
25.3. 1 Mutacin en clulas de la lnea germinal
Se origina en algur\a <kt las <ivisiOnes o meitlces de la gal'n9$0Qnesi& {pgs. 102103), a p(lrtir de
o6fulil$ progcnitor..s cf!ploidos Clo laS got\aelas. La mutacin puede no en el fonoliPO do ti! clul;, o indi'I..O quo 18
$1.lfro. ni M 1:. cop:.c:ctaCI de ele, pero, puesto que el genomiJ se tr.1nsmile "lil do$()1Jf1(1oncict, la mutnoi6n
se hereda, IJansmlclndOM a todas In dluln del hijO y generando. en su caso, la alleracln o enfetmedad
TIPO DE CLULA QUE SUFRE LA MUTACIN
345
hereditaria. Obviamenle, esa tran&rri$in Clopet'l(lc etc Que en U IOCUno::JaOI'I participe un game!O pottadof de la mJtaan. A
su las clulas germinales del hijo tambi9n la oosoorn (al igual que lodas sos Clulas por lO que se
volver a transmitir a la &iguiente98f!Cr<'ICJn en la rnui&Cin se como una variaCin heredable,
que estaril sujeta <tia &el9cl;i6n nttlur<'!l; se l)uecle deeir que son la mareri8 prima para los cambios evolt.tlivos.
La irl'l!X)ft)nci<'l dct C$I<'IS df!S:let'lde olrectarn&nle ae cul sea la lunclon a!eccada: si esta es esenCial, se
originan orgni$m()S .wit'ble$ ('f>Ortos tempranos, a veces no deleelados), mientras que SI la funcin no es esencial,
pero si mi)Of'lt'nte, se ongitltl una enletmeci9CI oongnlta o herdarla, o una sobnormalidad. Sin embargo, no debe
otviCI.-1'$0 3tgun01s mutaCiones resunan bef'lelleio6811 y son la base ele la evolucin.
Las mutaciones en la linea germinal son habltuatmente acontecimientos espordicos. minoritariO$ y rolativamen1e
inlrecuentes en la poblacin humana. Su laS<l" de W\01& 10.o 1'01' IOOUS y cliv.sin Celulll!. A este re-specto,
se puede calcular el nmero de mu\ilciQI'I(lS que IU!Pf dun:tnte tas Olvis.ones milticas y rr.eiOIIcas de la
espermatogones.s. En la tormaan <le 1.m csperl'l'l<UOtoidc humNIO tp&teOen a!1eoedor e 100 mutaoones detlilctas a
errcwes en la replicaQ6n, lo que. lenicndo en cuenta ti t3m<'ll\o de su ger'loma haplolde. supor'le una mutaclfl por cada
33 Mb. La mayorla de ellas 11011 reoesfvas o por el txlf'ltr3o U.n -.t'tes Que no son fenotipieat'l'lef\le evidentes. pues no
alcanzan la conoepcibn o el Oc que lt' de mutaCiones de la linea germinal oon
muy
25.3.2 Mutacin en clulas somticas
A <iferencia de las antGOOf"O$. 1M mul3c:i0nos (el'! no slo se transmllen a l8S
G61ult's tlijM (en 1;<t meosis), y t10 a un etgarwno COI'Ilple!O. Pueden alectar a CualQuiera ae tos 46 cromosomas de
cualquier tlula (lipiOi<Jt, en cualquier rgano. o Ch.Ra a.stada, durante el desartQIIo ptecoz o f.nal del
org;ani$mo. o en su <'1Ciu!l3 Estas mutaciones determinan laS e&raclet'sucas normales o patOlgicas del Individuo.
pelO los tarntloOs nunca SOr'l
$0n mayOtltaas potque las ce-lulas somMicas son las que mas se davlden 4LW!as 10
13
OlviSiotles cle'ScJe el 0190to hasta el lr'dvlduo adulto). La wa de muteCIOn. Ge' orden de 10 por pb y
di'Vi&IOn oekllar, es infer101 a la de olulas geri'IW\illes. Sin embargo, se iru:;:remonta OOt'I'IO oonsecuencial de la exposiOOn
a mutgenos (algunos de ellos CilflCerigenos). de 1<1 edad y de la de 10$ ni(IC;)rli$1l10$ de
del ONA, llegando a p!O\'otar miles cl8 nuevM mulaciooe$ durante la de vn adulto et'l ca<'l 15ioin
en el oenoma y en CI.ICIIQuier PMC del orgonismo
El rndividuo portador de una mutaCin somitica QUe se h3 <Se:Spus del pero vntes de <'IIC3nzar
su dcs.anollo puede un 1110$"ico, t6rmino gel'ltieo que defitle la prosenoa de dos o !inens
cetul3rCs gerlol:tic:tmetlle diStinla$ Cletivadas oe un miSmo cigoto. A lf&vs de la las Clulas somtiCas oe1
incJNICiuo ao..eo Qertel\eCf!r&n a dos lineas o clones. ta prop;a o y 1a anm8l8 def'lvaca de la clula que SU1rio 1a
mutaciOn. Los oon una rplica fiel y oe ambos bpOS de clulas. muesttan lt'IOS8lC'ismo somhco.
Este fenomeno se puede observar. por en clertM trasaornos citogendcos oon alteracin en el rnero oe
cromosomas (pag 406), como la !Momia 21. Loglcamente, Cl.18nto ms temprano llene lugar la mutacin en el
<tesarrollo del organismo, mayot sera la abundancia de cltAas de la linea anOtnala sobre las de l8 llr'lea notmal.
el OOI'Irpkt()
una gran de
por.; .. lllf'U' <k l.;a
.:-1 fg;l.ll ismu cvmplt-11) 11\"nt"
\dul;lo pnn ... s. r;b do.
rm.l.l 1\ln

St.mliltela
l:ardi:o
346 BASES MOLECULARES DE LA MUTACtN Y LA REPARACIH OE1. ONA
Las que seat\ compali:lles eot1 a vicia de ea t)Ueelen, sin afectar <'t tu cocirnietlto. Et
efecto de ta mutacin soete la dtlula somttca depenoe en pet1e de su COf'J'C)81lbllldacJ con el dCIG oe dMSiOn celular,
pues la clula afectada se dlv\de aCiivamente y conducir a la ptOiiteracln de la ITWJiecin, pudiendo ocaSblar
probiema& cllnioos. At;l ocurre, por ejefll,llo, en proce&06 dtt etwejecimiento celular y transtormadn neoplsica. El
cncer &e inicia por la mAacin de genes qa.e <:Ontrolan la divi5in celular ( tema 30).
25.4 MUTACIONES A PEQUEA ESCALA O PUNTUALES
El est\dO de las mJ.tadones en f\.tnciOO de su magnllud, lOngitud o grado de ta lelliOn per!TM(e en
pequetla y gran escala {y. a veces. f'I"'ICCiana)- Las anomallas a gran escala ocurren por duplicaciones, prdidas o
reagrupemletdos que alteran una regln de millones de pares de be&e& y &e rel\eran en la estructura del Ct'Ofi'IOSOma. Se
laman tamb1n muuu;lones cromosmic," o volvmino&,a;&, Sv e$1\KfiO $C re&ei'Va pare el tema 29. como anomalias
crom0$0mic:N En 6s.tc nos timit<trcmos as mutaciones a pequel\a escala.
L$ a escala, uncillas, puntuales, mini rnas o mieromodificadones, implican
nQfl'n31monto <' vn $010 tiUCielidO ( y, Ct.111" consecuer.cla, a su ()()tl'lplementario en la otra nebra del DNA). Sin embargo,
t<tmf>l6n $0 aqul otras leSiones a pequel\8 o mediana escala que a vatios pb. Nuestro estlldlo
ptetei'IOe cubrir. esenCialmente. los tipos de l'h..llaein punlual en cuan&o a ta modificacin en ta secuencia del ONA.
como punlo ce pankla para su hfluencla soble ta 8$ltUaura y func:l6n proteicas,
Clases y tipos de mutaciones puntuales y medianas, y su grado de tnddencla
Clase Tipo lncidenda
Sostituci6ro npo de ml.lltteln oompnllvament.e OOfi'l en ONA codd\canle y no
-...
Expall&itlnc$
repetid<'!$ <)e tr(IIOICS
EJmn3CiOn o De \.W'IO o unos pocos
Ms oomunes ltls lrt'M:iciotles que las SOilr'e lr::XIo en DNA
mitOct.II'IOiial
Las slntirna6 son muCho ms oomunes que las no snnimas en ONA
las oonservadoras son ms OOfl1l6le$ q,e l<t& no
"""""'-..
exceptO en dertDs IOd tepetldos en tt.ooem o repelldones
9U1*18S
Muy comn en ONA no codific;ne pero infrecueMe en ONA oodificante
lnfreeuenet. !)erO puo(le c:ontriluir a vatiOs ttaSICW'I"'I$,.
neuroiOgicO$
lni'TecueoMe: pn:x).toe e
i1"1Ser016n oe Etlet'l'letoiCS transponlble8
Muy OClfi'1 en ONA no cocliflcante pero infrecuente en ONA coclit'ic:<lnW
......
Gr<:WKIOS dQioeiones lnfr6cuetlle, ocurre a merudo en reglones que contienen repeticiones en
18ndem o entre repeticiones di:sper$a$
Las muteclones puni!Jales son tan representatrvas que a veoe:s se como ill Unico !iPO oe mu1t'ldn
Es itl'f)Oflante resaltar que es la estabilidad del cambio b mutilociro &e pcrpot.Ue en la
J)t09enie celular. al pasar por repllcaOOn a ceda nueva copia y permanecer en las secuencias oe ONA de (:3(18
Estas variaciones genticas heredadas conlribvyen a &M: diferencias eMre indivickJO$ den110 de una potllaciOn.
EB algunos casos. cuando la modificac;iro " produce ero uM g6tlie8 (estrucaural o teg.A000f8} puede set
sunciente para &u mefl$;Jij4J, <tfodandO a la funelonalkiad de su ptOCiuC1o gnlco y ooncruciendo enfermedad
herdaria, Al dopqndor do la 81tetacl6n de t.r1 nico gen, estas enfennedades se llaman monognica.s, y se
caraacritan por tfMSMilirse a la desoendenaa segn las leyes de Mlmdel Como excepc:in. las n.Ai:\Ciotles en 01
90notna tnilOCOndrlal se ltansmlten por hetencla materna debido a QVO ol do miiOOOt'dias que
apona el espetmalowde en del cigoto os muy inferior al procedente del OVulo.

25 .. 4.1 Cambios en la secuencia del DNA
La de&a'lpcin <le lo$ disliniO$ tipOS de mul8do'IC5 IIC Nwtl Mencliei'IOO a su causa a n!Yel l'l"'IteeJiaf en el ONA:
mt.llacione& por r:>o insetetl ypot deleci6n.
I)NA orgml
ABCDEE'l;HlJKU(NOPQR .. l'
Este estvdio se aOOf'IWI\3, etl C8da 00 $\1$ ill)artt'tOO$, oe e;emtiOS especllloos Indicativos de las oonsecuenaas
patolgicas do lt' mul3c;in,
P!Lra la dcscnpce<'u'l de nmtSICM)JtC':I MI:> ...rectos SObk la pc'(lttl.na '-"1\hi.:'IIIIa :;e hari
... qu..- ,;es de la .... do: 30 lb de ONA que ('(xhii..:-11 los (l(itnt."fOS 10 31llitlt.'11Cidos
k In pi\1Cclnlli}gl;.,hinn humnnn iCQn m tOIJil de 1 J7
25.4.1.1 Sustitucin
Como su nombre inQiea, la mutaciOn COMiste en ta ap3rlc.6n de un nuc:tetldo (OOIO<Iularmettte, una b89e) en t.W\8
posiCIOn de la secuencia ocupada por otro: dicf1o de otro modo, un cambio de \.1\a &da base (O
nutlebdo}. Es retetivamerrte oomW'I en el ONA. tanto codfficanle oomo no codib1te En ca&Os raros. pueden
swn.llt.Aneamerwe WNI$ btlW$ <19!\IPCiidO$.
5eO(n 13 nat.uraltll w rinie<'l o l)irfrri:liniea de 1.-s dO$ f>\l$e$ $$0$111'l!)Je entre transicin y tran$vet$1(ln,
a) Transiciones
Son sustl!uclooos de una plfW'I'Ikllna por oua (C T;
r ...... C) o de una puma por oiTa (A-G o G A).
e,ci$ton, PIJH, 4 PO$ibilid<k!C$. l.l"tl P<r.! bMO
Origit'llll
-..,...,.,--...,.,...,...,..-----::-...,-
t rans ici611
inicial
2"t fin01l
A-+G A:T
Grc
G"""'A
GIC
AT
T-+C'
TIA
C:'G
('_,T
C:'G
T:A
b) Tronsversiones
Son susliruoones de t.na ptA'Ina por una piM'Ii:!ina
(A o G - T oC), o viceversa (T o C o o,.
ElUSien 8 posi:lild;Jdo&, dos w bt1$0 origln;;11
par mic1al par final
A_,T
,,.
nA
A-( An
C'G
G_,T
G:C' T:A
G
>(
GC
C.'G
T-+A TIA NT
T.-.G ( 1..-\ C:C
(-+A
Ci
,_,,.-r
("
G
C'G
G'C
348
BASES MOLECULARES DE LA MUTACIN Y LA REPARACIN DEL OHA
T ericamenle, a. la SI.JS1itucin de las bases fuera aleatoria, la fl'ecuencla de una ttansversin en el genoma deberla ser
m<t)'or quo lo! 00 un<\ PUO$ h&y doble PO$ibilidad de q.,e <Xli..WI'8. Sin embargo, &e ob9etV'8 en diferentes pt'00&&06
mulagenieos q.e las tr;)r'lSi<JOne$ $On ti'IM oomunos que las O<'lf"'SVCf$iofiO$, cspoeialmente en el ONA no foo::ional.
Como ejemplO especU'\co pueOe citarse la transin de una base (G7A) en la no traducida del gen del factor
IX ele la coeg..Aaean (regk'ln que conllene ISioles CpG, pgs.. 167 y 201). El cambio de secuenola en esa regln regtAadora
Impide la uniOn de factor de transcripcin dave que, en oondiclones normales, activa el promotor del gen. Como
conMQ.Ienc:ia. dismir.JY8 la exnsin del gen y se sintotiza O'l8flO$ factor OC.. lo que prodvce hemofilia, de tipo 8. tras1omo 00
la c:oagulaciOn oon I.A'1a accWidad (li);)Q!.ItlnOO disnW!uitla en do& tvrclo$,
25.1.1.1 Oelecin, prdida o eliminacin
Conslsoo en la prcida de \KIO o ms nuctatidos de 1.1'1& &eOJencia. Es muy en el ONA pero
fnfrecuen1e en el ONA codfficante. Notm;llmarrte &On pewaMs. y slo en raras OCit$lone:s afectan a zonas b
como ()01"3 ser viSible$ a niYel d!Ogen!lieo (en regiOnes con rel)eticiono& en tbtldem o et'llte
repetieiones Puedenorigll'l&f un cambio en al marco de leclura (pg. 350).
25.1.1.2 Insercin
Se trata de la "uaan contraria a la an&erior. la ap.aric:i6n de uno o vario; en $GCI,IOf'l(ia,
Es muy oomn en al ONA no codfficante, pero rara en el ONA codifiCMIO. Un e)en'CliO es 13 oe o
do un Clf1 el nUmero de copiM de un NJdeC!Iidos ObMrV&dO en o en sus

25.1.2 Efecto sobre l a secuencia de la proteina si ntetizada
El eernbiO de del ONA que supone la mu1adn puede cenar dlsthlos efec40& &Obre la secuenc*a
i'!minl)8(:1diea oodiflcada y. en consecuencia. &Obre ia secuencia de la protelna que se sintatlce y su funci6n. Se
dit!ingue pot e1o enlte mutaciones sitMoosas y no s.IJ&ndosas.
Tipo de mutaciOn
Causa posible
SustituCin OeleciOr\ ll'tSerciOt'l
Mutac:iones sner.closas
;
Mutaciones no silenciosas
; ; ;
oe senticb allerado
;
Conservaooras
No oonservadOtas
del Mareo
; ;
Sin des.p!e:zamlento del marco
;
; {!ripl!) ; (triP'ol
T ertnirwion prematura
; ;
Te.rminacln retrasada
;
; ;
(wando no se Indica lo oootrario. el cambio afecta a una sola base)
25.1.2.1 Mutaciones silenciosas
Se 1M llamt' tomtli6n si nnimas , ssii'Womb'cas o con sentido (dellngl$ Stlm$6 nwtations). y &On muy
(2325% de todas las ITI.JIIaclones en DNA codiflcan1e). Se caracterizan PQI'Que. \ll pQ&r do Mber un (:3mbio
en 1$ SewetlCia del ONA. no se allefa la secuencia de su prodl!cto proteico Esto es po$il)le ClebiOo a la cJeogeneraciOn
del o6d9o genlloo (Vilf106 tripkfto& o c;odonts codifiCan un mismo aminocido, pg. 295). la mutacin es
afocta ., la 3 baSe de un COCIOn de tal totma que el ooevo trlp!ete es annlmo del original . .s
<dil'ic9 ol mi$1n0 anwobcxlo
MUTACIONES A PEQUEA ESCALA O PUNTUALES
1 hii)O(lio)
Lu mVI;M;in ro de f l)()f
G en d cudiln 4 Tlu d lil he-lita 1)()
( ACT). o d.: A l)(lf C en
hebr$ 3 1111 oodll
ACG en la 1.-brn no-molde) en <:1
mRIM, t:o>ehtic: Thr
(wr c&lg-1)). f'(lf lanto. 13 procd'*>
l<flteti7ada e$ la nornlll l
349
Igual ocurro $i la $USiitucion de la base OCU'I'e en la t posian de lripleles. conc:teeamente. CUA
UUA y CUG <b UUG. Que C:OOtlcan l eu (ver odlgo). y AGA(:) CGA y AGG <b CGG. paro Atg.
Obviamente. l3IS mvlac:iotles silenciosas pasan inadverbdas, pue:s no se <l riYet lenoupco ni conlleren
ventaja o oesvenlaja alguna al en cvyo ge:I'IQmtt surgen. En eonsecuec'lcl&, no escn sometida& a la P..SIOn
de soletei6n eVOlutiva ,.; Influyen en la susceptibilidad fnwlte a enformed006S Sin erOOargo. pueden originar una enOI'ITie
divetSidad genebC& en una poblacin. conoOOa como polimol'fis.mo gecn6Uc:o, ett esle caso no gnioo (tema 26)
(se incluye ;)Qui una COI)Ia del
o6digo para
el &n61i$i$ de tos eiel1'4ib$)
Cdigo
genlico
25.4.2.2 Mutaciones no silenciosas
,,
r

'
En este caso. la alteracin en la secvonci& de nvtloOiiciO$ afecta a la Pf'Ote-ca, pues OO<Iiliea uno o
vanos aminocidos diferentes do lt\ soc:vet'!Ci' Original . Depencier'ldo del electo que tenga M 81ter&ei0n de la secuenCia
proteie3 sobro su hJnc:ibrl. se pueoe d!Silngulr entre mutaciones con efecto beneliCIO&o y con efecto petjudlcaat AUf'IQUe
unas pocas mutaO\Of'leS (menos del 1%) pueden tener un efecto beneficioso o posi tivo, por ejemplo favoreCIIOdo la
1\.w\ciOn de &a proteil\8 COdifiCada o le lntersocln entrtJ gen$$, son l<ln POOO fJ:UOI'lltJ& Qu4. on l<t prActica. os oornn quo
no se En cualquier caso. bs mecanismos que l<l& oener.an son los mismos quo si el oreeto os perjuttici;)l
Por et contrario. intetesa ti$Wdior eon IOdO dtla!le la$ mutaciOneS oo silew'lciosas que se manlfles!M con efecto
de19t8rlt0 o C:411at1r6fico.
A se los efec(t)S mas frecuentes de las mutaciones no silenciosas sobte los c:odones y, en
OQI'lsecvoncicl. sobre l<t seeuenCitl del prOducto proteloo.
a) Mutaciones que alteran el sentido
Contrariamente a las mvtaciones silei'ICiosas. donde la sustilucin de \,Jf'l<t OO<sc origint un nuevo triplotc que
O()(jfioa o1 misnw:> O$ mas oomUn que diCho tambiO ptOduzca un c:ooon nuevo que COdifiCa un atTlinoaOIC)O
dife<nM. S. lt\$ llt'm<t C>Or mutaCiones r10 sinnima$, sMtldo oquivoc11do, f!tso o ingle$.
lrJ,I,$Un$C mutfllj()n) , La mayoria de las mutaciones en teg!Ot'les ooddleatl!es son de e1te tiPO (73%). por 10 que soo
causa de muchos trastornos. Adems. la lormacin de ms da una vetSIOn proteica supone que el poUmorflsmo
gtnic:o generado por estas mutaciones da lugar tambien a un pol imorlismo proteico (tema 26).
Lgicamente, estas son cuando uonen lvg;ar en J9g1onN gjnic.-s
estructuraR P<lr ejemplo. son de este tipo la mayoria de las mvtaciones que PtOdooen hernoQJoblnopatias.
350
BASES MOLECULARES DE LA MUT ACIH Y LA REPARACIN DEL ONA
) '
1.& de A Ten el
\'Odn (,..(;tu de !11 hdx-.1 no
(0A(i). o de T pot A la bcbrn
tt:lu!ltrtt:a. cunducc un t:01ln (JU(i

en el mR.NA. codifk11 Valen
lugar do: Glu. f-<lll
Y ... .. J ' S. a$:) b causa
u ,.Vnl ilis lA-u Thr Pro \'al Glu Ser Ala... de la :urernlll fatd fornu
1 2 1 4 S 6 7 9 10 o-"\ (ps.J82y396).

Dentro delli<S mUiaCtOnes de MOticlo altetado se dsllnguen dos
Sustitucin cons.,-vadora, El aminoilc:ido es sustituido por otro con una cadena lateral qufmiC8t'l'lente POI
lo que el efecco sotwe la e:slructura y funan de ta prolefna puede ser mlnimo. Esta Situacin se aotelM'Ia, t11.1e$.
taos mA.aciones silenciosa&. En ciel1o modo. parece que et cdigo gentico se ha adaptado para reducir el efecto
e las mutaciones. pues. ademk de la degeneracin, los codone<s espeallcan amino&clelos simiiBtes son a su
\'el pateeicJI'>s. Por ejemp6Q, lOS COCIOne.! paut Asp (GAC, GAU) y Glu (GAA, GAG) $Qn muy parecidos, de modo
que el cambio de la 3 base en un codn GAN (donde N es cualquier nucletido) o bien 0$ 11ilcnc:iQso o lief14J tXI
efoclo mlnirno, el cambio de un anwx>c:IOO cido pot el otto. Tambin pueden ser CX'lf'\!lei'Y&dores Mgunoe eatl'lbios
en la primera posicin dd cod6n, por oj, CUN {lou) t:$ GUN (Vt'l), >nc:t. N rCIP'8$Gnta nueleodo
no El amlnoddo es sustituiciQ pOt otro no similt'r. <:iferen4e en polaridad,
tamar.o de la lalef'af. etc. Son no conservadoras las sustituciones on l;a t o 21l06icin de un
oodn; por ejemplO, CGN (Atg) GGN {Gty), CCN (Pro), CUN (llltU) o CAN (Gin/HI$), ..e,
b) Mvtaciones que cambian el marco de lectura
Este es un conoep40 Importante, por la frecuencia con la que afecta a la secuenCia del produCIO proleloo. El
dKplaumlento. desfase o cambio del marco de lectura (/ramefJI'Nft muta.!l'on) en que la lnsetcln o delecln
de nuc:lGOiidos. &In <afectar en gran medid<t <a la socuencia de ba$8$, cambia la forma como se teen los b'ipletes
(pg. 288). PQl' lo Qve PfQduoe un;t on llec:\leflcial de la
se produce un e8Mbi0 de marco hay inseteiOtles o deAeciOnes de tM'IO o rnM pares de basO$, on nUmero
no mU!tiplo de 3 (es dec;lr. un n6mero no .-Mero de codol'le$), El c:amblo en la s.cuencla de aminocido& se produce a
parbf de la primera l'lsetein o delacin, hallla el extremo carboxilo-tenninal de la proteina. Por ello, en general la
resulta fT'IIIY Mef'8(18 en"" eStNCWra
TC
bcb111 trntlifi:Oia de DNA. o
1 Ejemplt.'l hrpotllt(l)
La prdida() dekti..'ln de e tn el
Co.ldbn 4 Thr de hoeln no ttansetita
fACT), (.1 d..- (i en la
uiplctc y todos los
tse di q...c
dc,.-p.tana.:lo d man:o de lcctj,lr.t ).
una
)):.!mcrlU:: ;dtcr.adn en li\ :lobinn
Como oj(lmpiQ CIIPOc:ifioo e>uode lt\ mutac:i6tl mil$ comn encontrad.& en Mhktntlzi (es doeir. con
.-ntepa$ildols de EufQP\\ del Etr} 18 enfennedad de Tay.Sachs. un trastorne> auiOsmieO reeeSO con
de gangliOS.CO$ 41" k>$ li$0$(lti'U:t$ neuronales. El gen afectado es el que OOdiflca la subunldad oe la enzim&
liSOS()miea tlexosami nklasa A. (ISoenzima A eJe la La de&clencla enzimtlca total es
responsable oet grave 008ei'Yado etaslc:atnenle en i8 forma lnfantl de la enlermeclad.
Alel<l norm:d
<' ... .. J'
' ... FGtiJWA)!Cl)!l<fUAJGC:cc:uey.q '
... Arg lk Ser T)'' Ala Pro Asp ...
,_, At! lk Ser lit ltu C)'J Pro 1At1 ..
la d 4 uuck.Stidi)S T ATC ttlla hebra no o.l de A 'I'AG eo la bebru
cn.rnbio el m3100 6e kcrwa, Adcmli$ de cnrnbillr todo$ los llminocido:f de
a p:nr del pustU> de en d nue"\'0 mareo b:y un co)(!6n .Je
tcmunactn mAs adda"e pot lo q\le la protdna t s ns co.lna >' DO funciol.
MUTA ClONES A PEQUEA ESCALA 0 PUNTUALES
351
e) MCitaaones qve no cambian el marco
la lrl$CfCi6n o deteoQn de 3 pb en el DNA (O de tres), aunque a..O. o clillWla algUn amir'C)Acido a la
protelf\CIJ. no el tnareo por 10 que el testo ele ta se<:uencia es f'OII"nal. Et e1ecto de estas
mutaciones es. por anto. muCho menor y puede no <tfectar a la fvnc.<Jn de la proteina.
Como ejemplo e&pecil'loo. 4141 el 70% de tOdoS 10$ (!lelOS asoeiaaos oon la mucovtsddosls, o fibrosh; qui&tic<a.
se observa una deleci6n triple. et tr0rn()SOM3 7r La mutacin afecta al gen de una p!Oieina de mombrttnt\,
ttansponadora de aniones c:lot\lro U prot.tiM se pliega II'IOOrrectamente. por lo q...a durarrte su proo8$amicnto
posuaducaonal queda retenida on ctlurnen <fd reficuiO en:)f)lilstl'lico, uniOa a protelnas carabina (l)O& 337338): M
ssr su Uegacla a 'a membt<IM pi(I$M<\tiea, CQf1 eonsec:uetlCiM que ateaan a verlos tejldor. y glandular. endocnnas
(lnwtlclencaa pancretica y aktccione$ re:.pitt\'!Otitl $). Lt't entermedad se diagnostiCa por un exceso de cloruro en el
..-
A leSo
Alelo norm:,l
de iibro;,
/""' La pCtd1d:, de 3 (Tr) en, hehn oo U1U,Srilil. de t.\\ .:-n 111 llcbnl tmnscn1a.
"n en Ita cadl.."nll p.!plldtca.. pero lil delcdtl un mUhiplo de
nud ... d de IC'('Illi".L El c\liJ6n 507 se ha \ isto afl;lodo> ror la
u1uiAI.'M'nl. a 111 d4:1 ulh;ru
4AL C:llc -t \ Ul ':lle), f.t Phe-SOK dc:sapltece, PI"' 1<> qu..- lo\ 1111
mlll,liClOn ;e dcnomllt;t hkkti(tu di.' la 503) _..,
d) MCitaciones con terminacin prematura 00/a protelna
Algun.-; mv1acione5 no i!ftX:l<ltl a lt1 secuetteia de amii"'Ibeidos ooelllcados. Sino que 1& suS(IIlJc.On. la lnserciOn o
la delecin de uno o vario$ nvclelii:IOS Ue11e oomo e!eCio 18 apark:ln de un codn de 1ermlnact.n o de paro (UAA
UAG o VGA en el mRNA <:il())tilsmieo de eucariolas SYperlores, pg. 294). Como conse<:uencta. se provoca el cese
prematuro oe la tradoceiOl'l oet mRNA y se obtiene una protelna aoortada (en su feQin Ctornwtal)
Er.te tipo de mulaciones. tambin mut;:tciOOH sin sentido (nonsen$e mtrltitiOrJ$. (lue no del>e
confundne oon m/ssoos-e ITNJfations. mutaciones de sentitk> eQtliYoc:ildo pOr $1.1Situcin de un x>t otro) son
poco trocuentes: POr ejemplo, terca del 4 % de 18S sustituCIOnes oo el ONA oodlfican.te. El aoottamlento oe 1a
proteina C$ <' ITI9r...:fo eonsid9f3blo. pot lo que se ven atecLadas su esttuc1ura trldlmenSioftaL su
e;t<lbiidi!d y fvncin Con fnJcvtl"lcitt C$1.3 aoetera la degradaeiOn intracetulsr Cle la protei.na oo funCional .
ocasiQr\atldo un electo lenotiJ)Ieo.
tupo11ic)
Ln tk ,\ J!Ql Ten d
OO<In )l..l ys d.: la hdlD oo r,.n"lcnl;a
( '1 AG) ( d<!" J' piK :\
JranscniA) ;:(Induce a un UGA
en d mRNA, c!i un C)ll;'tn de
par. di.'" l('lll'IUt:l(tf'l < dn """
sen1wlo La de prot4:in:, !<>e
dchcne alllepr a Cl, x..- lo que b
l'r(IIC na llll :a.."<:ad::. V lr\11\l.'ildl
352 BASES MOLECULARES DE LA MUTACIflt Y LA REPARACIN DEL ONA
COrno ejemplo ewoc;if'ICO, la mutacin de la neutoflbromatosls tipo 1 (NF1) o crcnfcmliOd<ld de
Reeklingh:tus e:n, un lrttS'Omo tuftoOOmico dominante (pg. 395)1ocalizaclo M el Cf()fl'l()6lOfl 17q.
A caus&nt.e
deo .wurulibrl!lmllJM'Ii upo 1

l,.a de ( porTen la hebra no li'$RSiUI (o <k G pof A ca la
hl>brJ.tnlll!:lttiua) pwoclllllparidn lk un cQCJn de tC'tJT1inacin UVA.
Por tanto. d ald muUIOO chftoea una prottfn11 aconada..
1nltibc la do! l;a
p211'a'

no mhibe la foocin de 1
OO!JJtOttina p2 1

frena la .xhllar la onoopro>tdna pllr.u :u:ta lbftomcntt:
Pu(';Slo c:1 ten nofmal lt f<lf'fhal:iOO lular incorttrolada
dt un turt'lr. Jlc d.tce que e$ un fl<'.'1 supru<>r
tk <t umiifflr:t1gcln (km:t 30}. (,mn:.crn di: un tumQr
l.<'lllliJlacin PVe<Jo PR)(Ivcir la ol ooOn delerminacan. oomo en los ejemplos f'I'IOSb'ad06,
!)ero tambi6n pve4e 1\aoei'IO incJWeclameole, 11"160i<llnle un en .. m(lrto <te lec;tura oomo ejemplo, el
polimorfismo de grupo s.engul neo ABO, 369}.
e) Mutaciones con terminacin retrasada
Oo 1<1 mi:stl"'<t lollTI3 QUe p..m11.1a1 13 t'll*ic;in de 1.1n codn de tormio<lcin, !;)mbin puede
olmfl."'r l.lnQ <tislon1o, $U$Iil:ll)'l:ndOIO por OlrO que OOdific:a un 3mirw)eido, (;3$0, dol mA.NI\ oontM
ms al del eldremo 3' codiflcaMe Ollginal. hasta <rJEt se ak:8noe ooe10n de Por tllt'lto. se sintetiZa una
PI'O(ellna de mayor longitud. cuya MCUeflCJia do aminocidos en la regin c..eminal no tiene significado ni
funcionill. lar$ con&OOJen:;ia.s fcnotipic;ts $01'1. en gonci'CII, imlclros a &as de &a temW!adn premall.ra.
25.5 CAUSAS Y MECANISMOS BSICOS DE LAS MUTACIONES
El ONA sometido a daos. IG:sionos y mocliftcclcionos do dMII'$0$ bpo$, provocados por distrt@s causas
Estas ser fortuitas o endgenas y provocadas. inducidas o e.xgenas.
25.5.1 Mutaciones endgenas
Son QI.IO se 90ncr&n por SituaciOnes o agenteS !)rOPO$ del bajo condicaotlet
normt'IICs, ilslos son la fue,ttc mayoritaria ele I'Y'IU!aeiotles. Pueclen Originarse por eores en aa o bier\ por
reacciOneS OCIJrren de tonna espon!nea como oonsec1J9ncla ele la Ns18billdad Ql.lln-.ca <:le la molclM ae ONA o
de la accin da &utlptodiJCk)S del metabolismo C91lkt (mutgenos ef'ldbgleno$) ,
25.5.1.1 Incorporacin de nucletidos errneos durante la repl icacin
La repllcac:i6n I)Of la ONA polimetasa, rncwinclose a lo largo det ONA. co..-ntWla la inOOtPOfSan de a
la hebta n1.1eva con la correccin de pruebas. de forma q1.19 la doble hlice con una gran tideldad. Ms del
99,9% de los eti'OfEI& <le replicacin son rtipic:iamerrlo oorregidos por enzimas reparadoras q1.1e reconooen e&
irM.:Orteclo en la hebra q1.19 so G<Stit sintoliundo y lo por uno wroc:to. oomplomont.&rio 011 de la mokle.
LOf orrof9s do rcplic;:aciOn ob$4.1f'VOOo$ oon uM frecuencit'l m1.1y boajil. 10
4
<' 10'
11
m.rlt'lcionos PQf nuciOO'Iido
en cada dcto <!e <JWISin c::etJiar. Esta baja tasa glObal de mulacln slgnlftca que slO se lntrOCJuee un
ru::leobdo k\oorrecto pot cada 10.000 Mb. Puesto que el genoma dlploide humano tiene 6.600 Mb, elfo se traduce en
monos do un .. nueva POf Cilda divisin A po$;111 do ello, ol gran nmero do divisionos oolul<ltn
6solt1to In vida de un irdviduo quo ol nUmero de rrutociones se:. signillc::Mivo.
CAUSAS Y MECANISMOS BSICOS DE LAS MUTACIONES
353
Una de las causas de incocpor;M;in <te en la tBtllomerfa de la-s bases
{p,fJg 14): \M rormas lautomf!.ncas menos estable<s (mina y lacbma) de hidrgeno ciferentes, lo (Jle
petml!e et aparearnlenlo de un nucletiOO incorreceo en hebra Cle nueva slnlesls. Adem<s de los on
ic!et'ltldao oeii'M.!Cielido durMIC l<'t rcplitaci11 IMll:li&rl se ir\Uoducen mutaciOnes debido a dNiizamieniO$
oe la ONApol sobte la hebra molde. que PfO(!uoen o insetelones por repeticin de una PPJeiia sec:venci;a
25.5.1.2 Otras mutaciones espontineas
Las baSH en el ONA pueden experrnentat esi)CW'IUneameme tet'CO'-$ ($lr'l inter"VenciOn Cle enZima algUna) que
transforman su klencldad. <le modo Qut si no son corrogir;ltts por lOS Cle se COI'l'Yienen en una motaon
a) Sustituciones por desaminacin oxidativa
CoriSiSien en la prdida de 1.11 gtUpo amino exociclico. con apaof'l de un grupo catbonilo anUlar. Ello da IIJ9ilf a que
se altere la formacin de puenle& de hidrgeno (tf'II!O I;)S b;;'t$e:$.


O N
1
"

() "11
1
, 11, ,,
':"' ::"':""::":'':"':':':":' :'m=l :=.
O N H N
1 1
O la al no 1mcr grupo nmino r.rlm;nc),
'j__ {y'"' --, ...
O N
1
<l
la adenlna se en ?e
H 1 ">
N
1
Las uansbmaoones e-u v se pn:dloen lentamente. unas 100 Yeoes ms rpdamenle que las
y G-X. Por ejerrc)lo, 1.11a desaminacin de citO&ina al dia POI' cacla 10 C en el ONA ele una clula tip.ca ele marn1fero
(bq.,e oaviv<Q 100 pot dia).
CAUSAS Y MECANISMOS BSICOS DE LAS MUTACIONES
355
AgentH quimitos at.qu.llante-s
Transfteren grupes, g&nef""'lmonlo mctiO o eblo, a un !OmO nucleofllioo (O o N) de las bases nitr()!)!\3(13$ env.
106 mep estOOICidos e$1<'n:
(CHl pso,
Oll'nellrnittosamlna: (Cii:)hN:!O
Metllnltrosourea

Et*netanosul'ono1o
\ .fliun"'lf"llnidlnll
IMNNG)
- -
d
lt:\.ISr
b 1'10 a()Qrh!
111: t.).,ll<l oon 1.1
)'
11-N
N>:0
r'
o \
mut-.:in poc <li.J\'1'11.: alqubmt"
h:ji.-rtl)IO: MN'IG)
t:n i.lguK'nll.'$ replicaciones purdc t"RIIill
cimu101 en b1pr de nr .. Mna:
"'"udu oo uft) htbtll _ e"==
1' b nuol.,.ltl
-"C-- ---ti-
__ , __ -<--
). J.
,.,., '6. .... 1.1 ,,, ... 1<'.11 ,.,., "'
---
U9
.... ....,..,.., b ,,.,,..., .....
AgerHM l.ntercalantes
la I!'IC'Iilguanu:sa pul'dt
hflll "l
Allnsenarse entre 106 pare& de OOM5 aoilild05 del ONA, distOrsionan su es.tructt.tla helicaidal. Algunos ptcwocan et
desplazam.ento del maroo de loctvr.-. miontras (lt.Je otros blf1Jnc10r\81'es) eslableoen enleces cruzados entre
bases de la mt$m;ll hebr& o de opuesaas.
Naranja de 91Cridin&, ()n)flavna. ere.
ooode lOs prOOUCIOS que se enwentran en el tuno.
Ntr()geraQ mostaza
COmpuestos Cle ci!IC)Iaboo
...,_,
,-.. ., ......
Otros agentes qulmlcos
5-bromouraCIIo: se V'ICQrpora en lugar de T Olxanie lt.J replicacin, a w tm;)IOgia c$1tuelurt'l
(pg. 132).
f:#jo nitroso (HN0t): acelera la d%aminaetn e-u
Cotnpuestos que pueden metabolilaf"&e a cido nilro$0, como nitritO$ o nitr<JIO$
Hldtocarbui'O$ arornticos polieicliOO$' bonz:o(&Jpireno, 2iloet<tmidonuoreno, Nrne1il-4-.&ntrt'CCno
Anwoas aromticas (MAS),
V<triM drogas: cidotosfamida, <:JietilestilbeSttOI.
CotnpuestoS naturales: dacbnomlclna, aflatoxlna.
Compvesto$ norgtiniCO$: <*t56niw, berilio, cromo
356 BASES MOLECULARES DE LA MUTACIN Y LA REPARACtN DEL ONA
25.5. 2.2 lesiones y mutaciones inducidas por agentes flslcos
Son var'i!0$10$ .,gontO$ qve originan lesione$ por exposicin. oon efectos mu&agnloos o canoerlgonos
La radiacin ultravioJc!,t.:a, componente de 1<'1 11.1z: &Oiill. Pf'O\'OCa la reaccin en11e d06 residuos de limidina
adyacentes en 1& misma hellta, rorl'!l<'ndo .- pMir do $U$ dOOI8$ enlace& anulares un sistema trlcklloo con un de
cidobutano. que se conoce OOtnO dfmero tH Umin. Esta a.ociacin oovalel'fle de d06 T mpide que puedan apatearst
oon sus A y una e!llructura lriclirnensio!\31 bc31mont.e oon el 9iro de 18 dob6e
hllo.. fotmtt un QX!o' en la mo((;ule de ONA. Adems, se patallza la reple&Cin, pues 1& ONA no
puede tos dimorOJ y M deliene. la irraciaci6n IN tambin o.a otra reacdOn entre T adyaetnl.e$, con
fOtmaCIt'l oe dmeros difer'ef'ltes la!TI&CIO$ fotoproch.lelo$.. en lo$ <Mt el eriaoe aparece entre el C-6 de una T y et C-4 de
ta ooyaeente.
Las rad.laclones k)niz.antes trayos X y rayos '() pueden PfO\'OCSf apeftl.l'a de lOs anillos. fragnentaci6n de las
bases. asi oomo rotufa dM esquele4o oovalerrte del ONA. Tambin generon (por fotolisas del agua) radicales hidro& .
que producen 8-hidroxlguanina. entre otro6. Debido a su mayor poder ele penetracin. e!Ma& radiacklnes afeaan a lodo
tipo do tejidos. a <flferoncia de 131uz uv, quo provoe. losionot S(ltovncntc en la piel .
25.6 REPARACIN DEL ONA
La capacidad de una <:!ula Ptlr<t y N)O(lrt1r dati\oo$ en el ONA os CM!flcial para et mantenimiento do la
k'lteglicled estrudural de su genoma en general y de sus genes en pattlcular. Exlstel'l 0011 OlljetO dlYetSOS sistemas
enzlmticos In vivo, que pueden llegar a ser tan oomplejo& como el propio apar81o de repllcacOn, lo que pone de
manifiesto su gran imi)OI't8nCia para la supel"'livencia cehJiar. Ce hecho. la Yeb::ldOO de mutacin es el refteio del
balanoe entre el nYmero de errores OQ.Irridos y c.orrogi!JO$: una btlj<'l IO'tS<II de n11Aaci6n indica una gran efiCiencitl de los
ele repar&citl . l'l-.etltti!IS que un fallo d<S MIOS ooncJuOe a un auMento del nMero de MutaeiOr..es.
En general, no pueoe ee.tabWteerse una e&.trategla nica de por perte de la clula, 9ir'IO que exie:teft
distintas vias.
Tipo do Ejemplo
ElinWcin de mutilgenos Superi>:ido dismutasa Se evita la formacin de la lesin oxidatNa
REPARACIN DEL DNA
357
25.6.1 Eliminacin de agentes mutgenos
El primer meCCifiiSmo pata reducw el dal'lo .al ONA no Cl$ PfOQit'lmttnte una via de repar&dtl, sioo que oonsiste ef'l
evltat las te<siones antes de que se produzCIWl . lt1 nevtn.'l!:ac:O'I de mu!genos. Uno de tale9
meCW'IISmos de des:t().)(ificaci6n lo ejerce la $\II)O(ICdo dismvi<'S<!I. Que eviU. l(t aeumulaCfl de radicales supet'C!ido,
&gefl.les causantes de lesiones 01ndatfvas en el ONA..
rJdkallibr'l:'.
JlfMhlre dafu,. mr
dd ON,\
25.6.2 Reversin directa de la losin
Es ta forma ms Inmediata de reparcw una mutacibn. l<l de: liJ MM daiiilldal revrtiondo 1tt
qulmlca que na sufrido. Este mecanismo no es facti.lle en la mayorit'l do 10$ a OK.CePcin de lO&
ejemplos
25.6.2.1 Reparacin de fotodimoros
Ya &e ha explicado que la luz \llr<Molottl proi!OC<) la 1Qnnaei6n <le MillO$ de cidOOutano entre dO$ piflm.Of'M
adyacontes (pg 356), 10 Que S!)I)Otlt una <liSIOttiOtl estructutal que lmpiOe tlsicamente la replicacin y la ttanscripciOn.
El m81C<'ni:;mo de ,. r:>asa et1 et reoooocimiento del fot<XJimero por la el\Zima fotolla-s.a. que 10 esCitlde,
untt re:.cc:.tl de erecttOOiCa IniCiada pot absorc:On de luz visible, regenerando sus dos bases
originales La tolollasa llene como FAOHt y oo cromOforo que absorbe la luz e iniCia la rranr.ferencia de
electrones Este requeniT*!n&o de luz (arul o violeta) hace que se ta l ame tarmin aNima fotorreactivador a En
efe osc:uidad se requieoref'l ottos sistemas para reparat estas lesooes. Esta si64ema se ha encontrado en
algunas especies. pero no en orras: asi. existe en bacterias, hongos. &iJ lcvaduro CG:I'$vi.s.o.H. peces,
reptile$. l'll'lflbios y m;Mnif.ero& mtu:supit'llc$.. pero no aparece en Sd,;zosaC'C.Itatt:lmyoes pot,_ ni et1 rnatniteros
l)la<fltOriO$.. a lO$ hurn&t\0$. En argui'IOS organismos. OtoropluYa, se ha <!eMCtadO oua lotollas&
que reparn ros IO!OptO<Iuctos 6-4, a su vez en E. c:oN, levaduras y humanos.

25.6.2.2 Reversin de bases modificadas con grupos alquilo
El caso m.ils conocido. muy bien estucflildo en E. coJi e igualmente presetUe en eucanocas (levaduras y humanos)
y en todas ros t!$pec;ie$ esta repar&cin de y cf -clilguanif\111. prodvcm XX .,_ modilie<M;in
<!el DNA por agel'ltes f'rll.C&gef\C)S alcuilantes. oomo nllrosoguandr'las, mellrnitrOQiourca y (pt\g 355)
El grupo alquilo de la base es eliminado por l.I'IS que to ttansliere a un eisteina de su
PfOQio oentro actiVo. EM no puede regenerarw. por lo que la cathsir: inactiva la propia enzima (oon ro que
estrictamente no es ero:ima ni C<'lltllliza(Sor, pues no se Cuf'I'ICIIe la condioin de Que no se <\!tete como consecuencia da la
reaocin que aoelera). O&c:la esta inacltllscion. 18 clula Clebe nl016c:ul.as do p'lra
mantener el proceso reparador, por ro cual en de un nivel excesivo Cle rnutaeioi'ICS POO(Ie tener
lUgar tona saturacin" del sistema enz:mtioo de reparacin.
358 BASES MOLECULARES DE LA MUTACIN Y LA REPARACIN DEL ONA
Ot'aiQuilguanina
r '
t .ntl llQ
Q,.,sl 1
1 '
" o
()---'(
l--{c;J:-"
)'-H
"
-
25.6.3 Reparacin por escisin
Se ooooce bejo este nombre genrico a la reparacin cM lesiones basada en la eliminacin la ba:se
Ntrogenada. nucle!X!O o segmento de ONA defeauo&06 y su pot otro ruevo. de secuencia correet;&. A
dillererM:ia de la reparaein por reversin, sle es un proceso complejo. que !lene lugar ett varias tases. que uliliza variM:
PfO'elnas (slo algunas especlficamenle reparadoras) y que conlleva siempre la slntesls de oo fragmento de OHA
(denoml!\iltda sintesi$ f1NmJ progvame), El prooo50 se inicia a traY& del reconociiTII8flto molecular de la 6esln (base
altcracta o cambio er'lla estrvctura llfdirnensiot\81 del ONA).
De forma gk:lOaJ. en el mecat\llsmo de reparacin se pueoen di$ti1'9.1J 3 13. primor<'l <:li$tint3 Pt'rtt lo.
rneeanlsmos '"get'lef'al* y especif'loo. y las dOs comunet;:
,.
,.
HH HHIIII-
,.
. . S'
Mec:.msmo
gclll!ml:
Escisin de
rl'le... -anismo:l l.k rtparnctn >Or
\tecani.smo
especlic.o:
Escisin de
nucklidos ..,-,--'"'-.,-,
5' ,.
, Dlllllllllll ,.

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.l' Ji-11111 s
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111111:111111

H
H-H 1+ 1-H 11
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.. ,.
,.
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} ' ) '
J' '1111111111111 S'
REPARACIN DEL ONA
359
25.6.3.1 Mecanismo general de reparacin por escisin de nuclctidos
En e$!e meeatliSn'IO (HER. llueleotJde f&PBN') lnleMenon PfQteiM$ qvc di$liniOS de
altorQcior'IC$ we causan en ta doble hlice. como 106 dimef06 d& timina o untt bl'&e con un susbtuyente
volunw'IOSO (Psoraleoo. clspiadno. aOOiamidol\.loreno ... ). En humanos. es ef 5i$40m<'l de I'S impottal'l.e contta
et dano al ONA cau$CKk> por el numo dellobttCQ. ro$pons<'lble de mas Clel 30% de las muertes 1)0( Cilnoer en el
mundo .
El comietlza 001\ el reeonoelmlento de
101 por unin de prote1nas componentes
del oornptejO de reparacin, con gasto de A TP.
En la fase O. escisk)n un CQr'I"Clfejo proteico
que incluye (lfldonvcle<'l* hiOtOiiUI sendos
enlaces fot;fodi$10r de 1;) hebra leSiOtlada a
ambos &ados <le! punto de mu1ac16n (pero no
jvnto a l: a 21 y 6 en
humanos). La pec:uliaridecl de cortar &61o vna de
las nootas y en dos $$PCWOOO$ lt'
distingve de Oltil$ .....:;IOt'$(1$, pOr lO QVC $t 13
dcnOIJWl{l escinucteasa. e.n hu'I'Ulii'I09
ION'Mada por 16 pollppbd06. A cononuaan.
una heUca-sa favorece S.. separacin del
Ollgonueletido liberado (de 12 6 t3 nt en
PfO(;al'l()(t'$ y unos 28 nt en AIQI.IIVI.S
de tas suDuniCades de la esooueleasa
pet'l"'''ttlrw!een unidas al tramo de he.tlta sencilla
Nsla que sean des4l'aZ&das por la maquinaria
ce reptieaCIOtl.
A continuaCIn. en la fase de " slnte&i & de
rep.atacin", una OHA poli meras.a relena el
hve<:o dojaoo POt la C$<;invclct'$.3.. 1a
del ox!remo 3 .()H r.otmaoo en el
corte anteriOr, Et v$0 13 01ra hebra coMO
molde asegura que se lnltoduee la secuencia
correcta. En eucanotas, realizan esta slntesi&
las pollmerasas S y r, juniO con s.us rae1ores
acoe:sorios PCNA y RFC {pg 154).
Fina!met'lte, una vez que la polimems:a ha
relk!nado todo el hueco y slo queda una mella,
una ONA ligua \jne el extremo 3'.0H reCin
ol oxttomo 5'.p 'orm3do on ctl
corte Cle la hebta orgii'ISl. cerrStldo la
(fa-se de sel lado o ligamiento).
A G
\ J\ G T
ll-W -

, , (j
-J"',

(j 1
.}J
(j
''"
N
A
-J
,,
. .J
ES!e mecanismo de reparacin posee la particularidad de esu.r relaetOnado con la transcr1pc&, gtaclas a que
partiopan protelnas comunes (pm<:ipalmente. el rootor de transetipcin TFII H, pg. 267). La RNApolll detenida en el
punto de tesin guede actuar de &ella! <ti repi'lr3ci6n. y adems w observa una reparacin preferente
de 19& regioneq; de ONA QU8 y, dentn:) de Cllt\s. dO 101 hel.lr<t molclc
360 BASES MOLECULARES DE lA MUTACIN Y LA REPARACIN DEL ONA
1.3 C$ un 9'<Nl oomplejo proteioo (oe:a de 1.000 kOa en totBI) que se pue<Je c:::onsidcrar
Jo1mt'dO por 6 S\bA!idade& runcionales asociando y separando a 10 latgo dell)f()(;:e$0, ton$1il\lidas por un
tolal de 16 cadenas polipeplfdicas. Se conooen ya prcticamente ts sus QOnes, las proteinas y su h.rlcin. Si se
suman las prolelnas nn.ponsable& de la repllcaciOn y sellacJO, et1 total partiop.an en el prQQ0$0 do por
oseilll:)n 00 nuctetiOO& 0006 30 polipptidos

XPA
RPA
TFIIH
cadenas
pol iMptidiu&
,
3
7
XPC+HHR238
2
XPG
Funcin
Reconoce la lesin en el ONA y se une a l.
Pose un dedo de zinc c. (pg. 63).
Re<:onoce la! lesin en el ONA y se une a l. Es la misma protefna de
unin a '*"a interViene en la replicacin.
Es el miSrnl) ltlc:IOr de genor<lll de loo genes de cta.se 11.
Ae!Ua por su adividnd IIOWtandO lt.'IS hobr;,as def ONA en la
regln a reparar. Su aecividad j)tOteino quinas;a. no es
XPB Helicasa 3' -+5'
XPO HCiie3$a 5' -o3'
p62
...
Quin;)$a: p41
p33
.,..
Ouina<sa dependiente de cictin<ts COK7
Cictin;t H
Funcl6n de&oonocida, poe;lblemente ayuda a estabilizar el complejo
e&einucleasa
Endon.lciN&a que corta el extremo 3' de la regin escindida. Presenta
hornologia de secuencia oon la endonocleasa FEN 1 (pg.. t56)
XPF-+-ERCC t 2 que corta el extremo 5' <te la regin escindida.
Not.t'I' IOS XPA XPG proceden de A'IfO<Icrmicl pigmento;a 363)
DNA
(XrF)

la! nomponciUc:<
del
;.e \111'1 soeiando pi)t
ill1e.-.oc:i(WICS murWi (- )
lOI!t\' la rcpn del ONA
qucluy que rl:IJ!Itllf
<:orte S'
d o:Otnph:J(l
0011lpie4l) (!lllt
lllit& la.
"''""" akalll.la 1015
I.OOOkOa
oont.: J'
25.6.3.2 Mecanismos especlflcos de reparacin por escisin de bases
Este sistoma (BER, OOS41 $C encarga de bases OSpe.cifiC3$; pOr lt'nlo, actW en
sitio$ conou:t:IO$, reP<trando k>$ione:s quo $On demasiado sullles pata diS10rSionar el DNA, es C!Odr. no $On
por el saslema de e!\ebln de nudetldos. Pot puede OOegir danos pot hldriiSs
o perOIOa oe base). oaacln por radicales fb'es de O)(lgeno. alqUiaciOn. y derivados no \'Oiumlnosos
como la timina gliOOI, NMf!(l190e0ha. 8-hldroxlguanlna, etc.
REPARACIN DEL ONA
(se represerrta solo la que se repara}
La fase de esciSin se diferencia de 18 reperaclOn
geoetlll porque, en ptmer lugar, se eWnina la base
alterada o lnoooecta, y no w nudetido c:omp1eto. Una
N-gJicosllas.a de ONA reconoce un $Oio tipo de ba<se.
anOmala o apar$<1da W'ICOHGoet.;wncntc, $ l'li(Jro!W) w
erce N1Jficosdico con la <Se:&oxirriboS<J. donelo lugor
un $iliO apiriridilbCO o apurinfOO, segUn sea el caso.
En lO<Ias tas oUas existen varias N-gftOOSilasas.
especllicas pwa bases distintas y POt tanto. f9P<Jfiln
diferentes.
Una vel genortldO Cl $iliO 8MS<O. et\ ul\8
dct la fa M de esei5.i6n se el COftt' de
13 hCbrl'l de DNA jurtto a esa desoxlrrlbosa no esta
undll a ul'l3 base n!ttogenada.
Entran eo juego para eiO las endonucleasas AP {de
apurlnloo y apirirrlldi nico). que hidrolizan oo enlaoe
rosfodister. onginando una mella; en
(kJvadurtt5 y mamifetO$) eorwn 01 5' del
:;itio ab<\$100, generan< un extcemo nucleo!iCI03'0H y
otro ; .-osfc'ldlesolUrrlbosa.
361
A ,\Gl'
ll-m ...
A partir de este momento, la reparacin contiOOa dlt form.a similar al mecanismo .- 13 intorvtnciOn do
una ONA pollmeri!Ju que elongo et nuclolido ;){)Mico y, en OCMiOI'Ie$. variOS 1'1\b {e it'llrOCiuoe 13
secuencia oorrecta pcw c.orTPemenlarieditd oon let otra En $41 h&n cncOntr3do mocMismo$
a) RePQfa<:in dct un solo nudetiOO, medinnt.e ta
ONA.p)IIJ. qve posee oos actiVIdades enZim&!lcas:
desoirtiboloslodlfltetas.a. que elimina e\1 nueletlcto
absico. y polimerua. Qve lo 5u&lil\lye por uno
Fmlmeote. una completit la
reparacin oetrando la mella
bl Reparacin de oo tr.1mo mil& largo. realiz.etda POf
la9 pol lmerasu 8 o c. j unio oon w& factore&
a<:ott$0rlo$ PCNA y RFC. y ltl endonuel us.a
FENt (pgs. 154 y 156). Finaliza igva!mente oon
el sellado de la mella por una llgasa
362
BASES MOLECULARES DE LA MUTACIN Y LA REPARACIN DEL ONA
Como ej9mplo de N-glicosiasa, la urtteiloOHA glico&lta.w es una enzjma muy e&()GCifice, que no acta &Obte
resdm U del RNA. pero reoorre el ONA reoonociondo oomo etrallo eJ uracio (que &lo se diferencia de la timlna
en a. motilo). en l<ts so rodi.IQO PO$ibHid.&d dlt U se in()()I'JlQn) en &a si nte&IS del ONA
grac:iM l dUTP piro fosfata..,_, que elimit\& el nyelelido (UTP - UMP + PP), Sin ornt>.wgo. on el ONA ya
sinteliZaO se Jorma u oon gran fl'ecuencla pot 18 desam1n9eln de C (pBg. 353). Si td ONA estuvie$0
IOtmado pot u (en lugar de T) serf.a irnpc)Sible <lllerenclar 10s residuos u JormadOs a partir ele c. y 18 n"'lttadn v-e no
podrla ser repaN!da. Gradas a que componente del ONA es T, y no u. es posible la teparaeln de la mutacin
frecuente U...C y el man1enimlen10 del par NT. Esta mecanismo se con&<era una de las ventajas por las que el ONA
(oon A. G. T, C) 1\a podido eYOlloclonat oomo un mejor depo&itario de la informacin Sin embargo, no ocure lo
mismo oon las Cl4o&inas metilacia&. relativamente cornoooEt$ en el ONA eucari6tioo. cuya desanWiacin oXJdativa prodiiCEI
T. <PJo8 no puede ser de los T Pf'C.lPIO$ del ONA
Otras glicosilasas de ONA de forma anlo9a div9r$CII$ OOses fl'l()ljffic:adas:
Eru:lma
utaeic>ONA griOOSIIasa
3-metiladelllrlVONA gioosilaSoil$
hidr<Jto de pirimiclina ONA glioosllasa
u
3-Me-A. 3-Jilo-G. 7-Mo-G.

8-hidroxigl,.anina,
klfmami(Sopil'i'nidinM
l:ltnlna gllcol, plrimldinas
ollidadas o ftagmenledas
{")Me= mebl
t.sln que repara
desamlnacln de e
mtl'lilacin dtt A. G. C o T.
d0$&111inotcin do A
ox.icJacin do G
o:dclacl6n de plrlmkllnas
Finalmente, debe mencionttrso ol M los siriOs AP es vitM no $610 para oomplelar la aoei6n
previa do N Oiic:silttsas. sino para corregir la desputlnacln espontnea. que es un hecho relalivamenle
(pg. 354).
25.6.4 Reparacin de apareamientos incorrectos
los mecanismos de tepataCI6n an1eriotes actan al poco tiempo de cp.e se 1\a prodllcido la
mu&CiOn, anteS de q.e se perpe(e debido a 18 replicac:ln. Sin embargo. exis.ten ademk otros PflXl8SOS,
denominados oe repataeln posteprJcacln, que corrigen errores comelidos en la replicacin o errotS la impiden
por una vez po1 cada divisin celular). Entre elos se encuentran la reparicin por recombin.ac:i n y la
reparacin de apareamientos Incorrectos. Comenu.remos solamente esta ltima.
Los incorreao& 54 prodi.Jcen PQf errores de la repliettc::i:M'I o COA' OClW'\!$6Cl!fl"I'ICia oe teoomDinaeiOt'l.
el nw;mo sistema es tambin dtt eorregk pequofl;as insetdol'lf!S de 1 a 4 nudeUOOs en uM de ias hebras.
NOtmalmente, la mayorla de los errores oomelidos porta ONA polimorasa M roctffi<;an gr.'lCiM <' su propi,
aaiviclad oorrectota oe pruebas. o exonuc:leasa 3'. perro Uf'IO$ poco$ pueden sin e, en4onccs
cuando entra en JU091> este mec;tni$1Tl0, por proleiMS que reconocen la presenda de un pat de Dases
lneotJectamen.le apareada& y elimi nan 00$0 f:lfTI'ICtt oDien un tramo de 18 hebra de DNA que la contiene. t!.stss son
luego repVHt<l$ por los mocaniSmos de repar9cln ya estudiados. con fntervencin de las ONA poknerasas 6 y t. y &us
OOfadores RFC y PCNA. En tunanos se han podido idemibr $ gones QUe c:odific<tn PfQ40in31s de es1e SiSlerna de
reparacin, ll&ma<I0$11MSH2. hMl.H1. hPM$1, hPMS2 y GT8PihMSH6.
La cuestin mponante que es: cmo dctermirwll<'l ti\8()Jinaria de reparacin cul de las dos bases de un
par InCOrrecto es la en'nea. la que llay que eliminar? eld$fir varios mecanesmos para esto. pero uno de ellos se
basa en la metlacin del ONA {l)g 272). l-3!$ entirnas encargadas de la metilacln de bases &ardan un tiempo en
aduar. por lo que en el ONA d(.lpleJ( roci(ln roplictldO 13 hebra ooeva an no est metllada. mientras que la hebra
progenitora $i lo ESio permih! a las protefl\85 reparOOOtas dlferenolat 18 hebra nueva. qJe ha de '* la que
oontiene lt\ mut;)ci(ln, y eottegir sta. Este mecanismo se oonooe bien en E. cob. y posiblemente act\IG bajo principio$
similares en eucat10t89.
ENFERMEDADES HUMANAS ASOCIADAS A LA REPARACIN 363
Consc<.'Uetlcas s-i no SC' corngc d
Com-edn 1k nuc:let: id().)
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Yll Cl' II'IIIJ(O.blc
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25.7 ENFERMEDADES HUMANAS ASOCIADAS A LA REPARACIN
Se ooa sena dlt enfermedades atribuiGas a defee1os en genes Que todilc.n Poteinas de reparacin del
ONA. Estos defedos oonducen con frecooncia a una mayor del cincel. pue:s se PfO(Iuoe una aGumulaan de
mutaQOtleS no corregidas.
EJ (fe, piel denominado xerodcrmi.:. pigmenl os.a, o pigmen tari a (XP; tal'l"()ifl xefO<Ien'ni3 d<t K<li)0$1 o
tne'-nQ$i$ prog.esi-4), C$ un<\ neredittuia causada ul\& defieiei"'Cia et1 algtM'IQ de 10$ geno$
e la reparaciOo por esoslbn de ru::le6tldos, cor.duclendo principalmente a la acumulaclon oe dlmeros oe
limina. La piel de es&os enfermos es extremadamente sensible a fa exPOSicin a tos rayoe. UV de la 11.12 SOlar.
ocaslonndoles: cnoetes de piel con U'l8 frecuencia 1.000 2.000 vooes superior ala de petSOnas nonnales. Tambin
sufren una Incidencia de 10 a 20 veces mayor de cin08f9S en rganos internos. y slntomas '*IOigloos como retraso
menlal , Pf'Qgrc$iva y $0fdcra Se idcnti(IC<)dO defct;1o3 C.IJ$t'lnlcs de XP en 7 genes del sistem<' de
que COdifican CQnl)OnenteS de la e$Cinuele3$a XPA, XPB, XPC, XPD, XPF, ERCC1 y XPG 3e()).
El si ndrome de Coekayne (CS) , CMacterizado por enaniSmo. retraso mental y sfn!omas neurolbglcos progresi\IOS
causados por tamtn oon una senM*Idad moderada a la raciacin ultravioleta, se por
mutaciOIM!S en los genes CSA o CS8, relacionados ambin con la reparacin pero ms bien oon su conexlon con la
transcnpcin. AtJ;p.nas nYJtaciones de XPS, XPD y XPG dan lugar a sfndi'Of'I'IG<S solapan tes XP/CS.
Otra enfermedad gentica relacionada oon la reparacin del ONA es la ttlcotiodlsltofla (TTO), OO*:Ia a
mutaCIOfles en los genes TTD-A. XP9 o XPD. Se trata mas bien de un defecto de la que se puede eoeglr
in vilro ()Or microinyeccin de TFIIH a las cUa$, Sus sintotn.<Js (en los dos Oltwnos C<l$0$. sotapantes con XP) .,cluyen
e.et dental. telio$is, onomali<t$ c$WI:IICtict\$ y retrt\$0 menlal pn;grcSO por dcsmiotinil:aan
El colcwrectol si n pofipo$i$ (HNPCC, hcrodil"ry n()tijXll'yt.JOsi$ ooiOffJCUJI cancell, uno de los
ci"'CE!res heredilatiOs mas comunes, J)Of ctefeC10S tn 10$ h1ASH2 o hMt.H 1, .arri.lQs rnponsables de
la reparaclon de apareamientos incorrectOS. Se pueoen mediante VNTR, pues el 3istei'NI de ep,racin
defectuoso no ellrrlr\8 pequenos bucles de hebra desapareada de ONA, 10 que conduce l) ....,.,_ mt'Y'Qf lc)ngitvd do
algunos microsatlites de ONA (pg. 383}.
Otras enfermedadG& asociadas a defecl06 en los sistemas de reperaan son la ataxla-telan.glect.as\.a, uoclaaa
oon mayor $$A$ibilidcld al dao del ONA por r.I)'O$ X, y la anemia de falconl . que parece deberse a un defecto en
la del dalio por ef\treeruzal'l'liel\40 qoimieo OC
Tema 26
Diversidad del genoma: polimorfismos
26.1 Introduccin 365
26.2 Diversidad derltro de ul'\8 es-pecie- 3&6
26.3 Mecanismos Implicados en la vari.a.bil idad ge.n91i<:41 ..................................... M . ................. . ....... . .......... . . ..... . 366
26.3. 1 Doplicaein del senCbOo ....................... , ...... ,., ...... , ... , ....... --- ., .............. , .......... ,., ..... ---- 367
26 3 2 Transposicin.. ... ........ ........ . ...................................................... ,_,_,_, ---------- 367
26.4 Consocu-onci<ts funcion.tJ.ICS del polimorfismo ................ ............................................................................. 368
26 4 1 Polimotfismo en o t>Oiimotfismo Qei\ICO. -- ... -- . --- - ., .. 368
26.4.1. t Sir\ electo iet'toUploo ............................................................................................................. 368
26.4. 1.2 Con alteoraciOn det fenot1po ..................................... ......... ...... .... - ............... 369
26.4.2 represenl.all\1'06 de polimorfismo gn1oo ------ . -- -- 369
26.4.2 t P<*norfi$1n0 ele gtVPO ABO .... .. 369
3) ldenlidad de tos grupos sanguineos y aspeetOS Clir'lioos ....... ----- .. --. 369
b) GentiCa y bloquirr:a del sls.lema ABO ........................................................................ 370
26.4.2.2 P<*norflstnO en ellocus de la ga!actosemla ....................... _ . .......................................... 373
a) Oe&eripc::i6n y bioqu:!miC<t de la ......... ,_,_,. ,._,_, .. ,_,_,_, ........ ,_,_,_,,, ............. 373
b) Gentica de fa gala<:toGetnia . .... . ........ .......... ...... ....... ........ ............ .................. 374
26.4.2.3 Poirnorfi6JT'IO de la .......................................... -............................................. 376
26.4.3 Polirnotfi&n'IO en regiones gnicas nocodlficantes .............................................................................. 376
26.4 4 Polimotfi&n'IO en reglones ..... _,_,_,.,._,_,_,,_,_,_,_,.,,, ... _,_,_.,_,,._,_,---.. ------- ............ 376
26.4.5 Polirnc:w1i&tnO en eiQGnoma mitoconctraal ....... .......... ........... ......... - ..................................... 311
26.1 INTRODUCCIN
EJ OH.\ geOOmloo fltCiear es una et'ltiCJaocl variaele. no slo etttre de
diferentes (vMCJcin mxima, tambin entre intividuos de una misma especie (vanacln mlnlma.
intracspecie}. Es13 6versidtld es resport5ttblc do fenI'neOQ$ biolgloos de 1rCtsottndonCJa oomo la evohJCIOn dola<s
especies y. oeruro <M especie, <te a ptesenoa de dilerenci31e$ en c<'d3 ndividuo. t.leas e
lrrepeoores. La dl\lersl dad o vsrtsbJtldttd geMtlee se debe a vaf1aei0ne$ en la 0e1 genoma. pOI' tanto, en un
sentido ampliO el OOtloel)lo <'e dNet$l dlld se naoe $)tlimo de polimorlitmo (en sv r11orat mvcholS formas)
o. mas eoncretamenle. polmorrismo etOMOSOMiOO. ae 5eWP.t'ICia o de ONA. 1.0$ provIOS do soouQnOICIICin
del geooma ya tienen e_n cuenta es.la dlvetSidBd; notma!mente se seeuer.cia et geno;n* de individuos conen:ttos.
representativos de distintas razas o etnias (pg. 20J.
El PQiimorlismo lanto a regiones del genoma (pollmorlismo (/nko) COMO no eocllficantes
(pOlimorfismo gen6tieo en En ambOS casos eonMiir en 1<' de SOlo par o. ba:se:s del ONA
o, meoos frecuentetnente. de n'A:lnes de pb ( m&erOMutaein). El ptWner caso se o::lf'IOQC: hoy diil como polimorfismo de
un SOlo nueie4:1do o SNP (aetnlmo Ingles de SU'IgJe-1'/UCieOllde polyr'IW(Jhism; t::Oioquio!mertte.
varnacin pvede lene lugar en clulas germinales o reproductoras. oon 10 que se transmite a la desoenooncia
(pOiim()rfl$mo por eifmpiO en 1M orrfcrmedades oongnita<s), o bien en clulas &Omticas, no reproeluCioras,
en cuyo es, so n0 se lrttnsmlte (pOiimorlismo no het"cdit.tlnO. por Qjcmplo on lt1 mryorfa de los cnoete$).
la oefit'lidn de se n:lklritl a la$ prote:if\315, y luego tt sus oan95. Hoy dia, se debe defrllr
como la slmunanee en una poblacin de genomas oon <Jiistlnk:l9: alelO& P8ffl un h:X'us deleu1'Wlado", sct<t ste
gnico o no. son variac-:ln95 de la secuencia de ONA pre:serM en 1.1'1 Joeus o po6IC:iOn dellnla et1: 1.1'1 er001osorna
(pg. 94): en una dii)IOiCSe IOOJ$ eS1 ocupado por dos alebs. uno de origen
patemo y 0110 materno. situados efl cn)r'nOS(Imat homlOgo$ El grado do polimorfil.mo de una pobtaclon es
MECANISMOS IMPUCADOS EN LA VARIABILIDAD GENTICA
367
26.3.1 Duplicacin del matorialgcntico
Se habla de a gran e-scala cuando aJecta a grandes porciones oe un cromoSOI'I'Ia. S11'1 er\lt'flr a
describir los aspectos del proceso (propios de una Gentica Molecular), OObe indicarse que ha actuado
progre&tVamente durante fa evohJon. mediante una vanedad de c:omp6efos.
Lct a 1)9que.- H cala es de inlars cuando tiene lugar en rGgiOMS codrficantes del genoma. afectando a
gene:s por k) Que t.amtlin &e lama dul)icacl6n gnics, selectiva de genes es.peclfiC06. La aparicin de
mUlliples del itlici..,.lmente id6tltit*s, 5ucle "<J(;i.- l.a fOfTI'Iatin de copas
ligeramente drferentes. De esla !ena, t.ll\8 c::q:lia ar.ceS(ral de ul'l pueoe origit'lar IOdOs lOs miemt.lr"O$ de uf\3
(genes que codifican pollpeplldos oon sec:oenclas relaciOnadas, pg 110). Estas lamilii'IS diversn&-
protelnas 1 px:as de eucario1as: por ejempb. globlnas {POXelnas de ltanS(IOI'te y de oxigeno et1 sangre y
tn$CIAO). (par'le del aparato contrctil en oeuas musculare-s y del citoesquf!le.lo el\ ChJiaS no rrlu$Cultlre$} ,
opslna:s (Que detectan la tuz a drfetenles IOngltuOOs de onda en oll.fas de la rettna} . eolgeno (en difef'Mtes tipos oe
tejido CXlt'ljuntrvo). t'lbmintts e inmunoglobulil\3$ (en (llclsma sanguineo), ele.
EJ pli'lc)pal mecMismo respot\Sable de la dl4lli*i61'1 oe genes oompiC:tos a 10 f3t90 de 13 ro<oh.-cin y, en
definitiva. de la generaeiOn de tan gran varled&O y canl!daa oe DHA repetilivo en las regiOI'Ies no coomc.ntes y
ooalfie&Mes del genoma eucar16tlco, es la no homlOga o desjgua/. tsta ocurre la meiO$i$.
ttntro homolOgO$ no OOeetamente alineadoS de un oor de en 10$ QtJ& POr tantO. 1'10 coinck:Jen las regiot'l8$
equlvl!llet'ltes (como si ocurre en la reoon'lllnaciOn pero si se tegiQI'le$ 001'1 similill.4 de $0C';UOf'IOO
Cot'no consecuencia del sobrec::tuzarr.ento ae (pilg. 106), un puecse recllir tMyOt canliaaa m;'tteri;)l
gentico que el ocro (lo que supone en ambos, una rrserdn o duplicaCin y ooa deiOOIOn).


ro;, oUi(lll' _,.. ""'
(141 de CI(IPI(OSOC'I'IIIS
re.-:umbinnnu:s
1\ IQ<>It
('J'(Inl(lS()maj en la-; .
(pm
'
<
cambhr la
de
codo cromo;oma.
p:ro n(l su
canudad de DNA
ca.nbia la
y
ado:rn.b 111
...,
".s.; .. ' 1
11-' '"
rll(OtJI;

can1idad dt
ONA
':- cronnoma
1
,.-<:1 g<'n se ha
Col t_!c:n \ Cf'dc pcnJrdo (ddc.;:in,
h;r duplicado n.duo:c:um,
(HtSo.-"f'tinJ
T8mbin han surgido por duplicacin gnica los genes que codillcan, en tejidos las J$0{0.1-mM (formtts
anemativas de una j)I'Oteina) o. en su e&$0, IM i$()(tfllimtts o if;ozirrws (fOf'lTiaS alternativas de ooa enziMa). Por ejemplO,
la tostatasa aJeal ina, OOdilieada por at mer.os 4 gene$ Que se exresan de forma diferencial en ca<1a .ejiOO.
Tres de ellos estn agrupados cef'C8 del lelmero del crornoSOI'n8 20' ALPI de in.1ostino, ALPP de placenta (con un 87%
de tmililvd entro si) y ALPPI.., smiar a la de placenta. El gen de la cuarta lsoZima, Al.Pt., de higndo. riiln y
otros localizado cen:;.a del de 1p y muestra una similitud de secuer.cia de 57% 00n ALPI y SQ% con
ALPP. Tan eleVada homologi.n inc:ic<t quo estol$ fonnas especificas de la miSma enz.n&!ica se Originarol'l por
una dupllcaclon gnle3 8flee$ttal.
26.3.2 Transposicin
011<1 fuorrte de vanabilided geneice es el ptoceso de tral'lspotjcin, tl.etl conocido en btrc:teritl& pero
tarOOin presente en el genoma de la$ Consi51e en el desplazarruento. de un SitiO t1 otro del
aomosoma, de fragmentos oe ONA oamaoos mdY.iles, etefl)(fflt0$lr.1tl$ponible.s o transposones: su
es vnrit"ld<'. de:>dc UI'IO$ cuanm cientos de ruclelidos a decenas oe- mileS. La lrttn$()01$iein es responsable en
eucariOtas de ul'la gtan dol ONA repetitivo no codificante, destacando las se.cuencia$ Atv y LINE-1
{pgs. 1t4-115}. que pot si SOlas supol'len el 10% delgenoma r..wn..no.
Existen dos mecan1smos de lranspoSiciOn WC8ri013$
En el mecani smo de cortr y que tambin se da en proc:ariOtas, e1 lr'$rl$P(l$tt $0 del ONA
donador pata il'lsertaf'$e en el DNA diana. de modo Que ta moletla donadofa queaa itllerf'I.Jfl1Pidtt. y el
transpo&n cambia de molcula. LO$ COt!es y uniones e&tbn ca1alizados por enzimas especificas. transposasas, Que
368
OIVERSJDAO OE1. GEHOMA: POLIMORFISMOS
reconooen Cief1as &e<:uen<:itt& de 10$ ex:llomot del !J111'1$C)(!Sr'l. Er'l algOOO$ casos. 18 ttansposasa est oodlllc:ada por
parto de la sooucnea3 c:tel tta$1)Q$n,
1 OESPl.AZAt.IIENTO GEL TAANSPSON POR CORT'E Y PEGADO 1
Rcgi(H) 1 de DNA dUpkx
(o.Jun,;oo.J(II'J)
.,..,.._,.._,, ..
1'\\!(UI<o;,.Ja. NI"

1 PCR RETROTRANSPOSiX) 1
Rqio! de O.'llA Q diu),
en o:l mHifiC) Crot'lll)fOITlll o om"> di:JInw
...

---------------
ft de retrotransposlc5n .. exclusivo de 1.1 regitl <Jet DNA dOt'lador que 96
tr<tntPOndnt se transcribe pftne/0 a RNA (1>01 RNA OOh,.JI<We$). A partir ele t una tr&nscrlptaaa Inversa
Of'igtna el OOfl'espondlerue cONA (pgs 195 y 206), que tve.go se inserta en el ONA diana. Este mecanismo e<s sinU al
de la en retrovrus.. cte CIO'* r&CIDe el nornbte. Debe OOStciC<tl'$0 dl:lf de OOI'tar y
pegar anterior. en etto caso el transposOn no cambia meramerrte de lugar. sino Q\10 adel'l'ltls se dupliCa. Pot (Jtllmo,
llgvnO$ rottQiransposones oodlfiCSn en &u propia &eeuencia la! tran$Cril)tMa .,versa necesaria pera su propagacin (Por
L!NEf).
26.4 CONSECUENCIAS FUNCIONALES DEL POLIMORFISMO
El pOiimorfi$mo puede 1ener dlslinta trasoendenc:ia <1esde et x,no eso YiSia ti.eional. dependiendo de si afecta a
regi0t1es. oo codlncanles. regt.Mdoras o rodificantos del gonoma y 18mllit'l del MOdo como afeC1e al men&af& gentico
<te euas llimas.
26.4.1 Polimorfismo en regiones codlflcantes, o polimorfismo gnico
O. t;t parle ooelftCante del genoma humano (alrec5edOt do 100.000 genes), se aee que unas 1res cuart8s penes
son monomorlos, genes nicos compartido& Al variacin CIOf ICXSO$ 'O$ stos constituyen la parta del
geooma com(ln o "de referenclat. q1.10 demtla y detetmiM sus caraC1erl&llC88 (1>0' eJ., en hum;lf104, presencio
oe cabeza, tronco, extremiclade$, etc.}. T<lln genes son easi idnticos a kl6 correspondiente en la Mpecie
(en nuestro caso. el gorila}. El resiO. wart& patte del total {WIOS 25.000 genes}. son polimorfO$, &U$ vari3Ci0nes,
en nu::hOs CSS06 mini mas, detorminl\n el pQirnOrflsrno gnlco.
Dentro del polimorfismo gnico, $0 l)u&Oen dos sitlJaciones de acuerdo con w traSOII:OCJenCiJ funeiotlal,
es decir, &Y efeelo &Obn:t el f.ootipo,
26.4.1.1 Sin efecto fenotpico
Aun %1MdO la vatlaDIIIdad lOcalizada en una soc:vencia QX:Iilicante. et polimorfismo puede no tenor
ClOn$$CVOnOM tobce el &ei'IO!lpo (es decir, &Obre el produc:Oo g6ni(:O}, por dos motivos: que no &e altere la
SbCuei'ICia proteica (oomo conMc:utnCia de la degef\eracin del o6dlgo gentico, caso de la$ mtlf.ftre(QM.S
sJ,IencioS&s, pg. 348) o que la variac;.Otl oo..rra en una rf4n de la prot.eina no e& Menci<'!l par<' SIJ (e-nlfe
ottas, las mutacion6s p6g. 350). Podrfan nclulr&e tambin en 0$10 Uftimo caso lOs polimort19.moe que
afec.an a tos lntrones, reglonH gnita$ poro no (que, pot tanto, puedan oonsidorarse tambin
polimorfismos no getliOOS, p&g. 3?6}.
CONSECUENCIAS FUNCIONALES DEL POLIMORFI SMO 369
Este llpo 00 pobmodismo es el ms comn respoosable de una dNerSidaa genbca f!tlletamen!e normal Las
Of'Q!elnas fOOTIIM'las por tos cs:lu'ltos aletos de un kX:us ae es!e tipo !IOn vammes tel<tiNAm(tflte comunes. con
secuencias y estructuras o s.imilarG<S y manteniendo una runaona!idad similar Aparece por e,empiO, en
QtOtelnas pta$m.illlcas totTIO hapeog1oina. transrem.,a y cenloplasmna. y en olras
t:mto inCr#l CXImO aos. estas formos- o de fueron
p(leipal produ.:co fVJftJt:iltbfe del paimortlsmo, gra.:;itt$ a tu m!i(lnle; eiCWOfQrC:Si$
26.4.1.2 Con alteracin del fenotipo
En <>trO$ "'@. lo variacin en l;:t seo.,Otleia del gen modlfi;) la de '* ltlt que aroct<1 a
$U luncionalidad. Aooque esta puede ser booeficiosa (base de 1;, evoJuc::i6n), )o mas comn es encontrar oo
polimorfismo patoiOgioo o delet.fec> (petjvditi<tl) l{l al.1cr&ein pvrxie: mod!ll(;(ll lo$
fi$iolgic:M o nduso morfOI(IgiQII$ de la eMula, pudiMdO leg:tr tt Ofi9nac pf'OOeS()S en klr'IOI6n de la
de diCho eJecto h!nOtlplco. Se puede distinguir
Vanaciooes fenoliPIC8S Que no Influyen en la susceptbib<lad a enfermedades caso de ios
lll$poosables de ICJ estatura. el color do pelo. el grupo sangvineo, Ole: .
Vtrri<'ICiOOO$ renolipil;tl$ qve innuy(!n iOtm:t o trtit'lima en 13 sus;oeptlbih(S.1(f <:eer!QS prOOHO$ ptltoiQvioos.
1rtiC$ (QfllQ I(:JS poliMorliSti'IQ!i de} taSgO$ motf())Ogi((loS COrt'lpljOS
VMaCtQnitS que un papel en la BparieiOn <k uM l)l)loiQ!Jitr Esto 10 t'
ocurre, lOf oon 1$$ hemogtObinas atloona\es, se man:lle$tan en l()(n'l3 de gecltlleb!S
el t:OnOP.ClfO de Mfern1N11d tlf!l'lticiJ lot mAs y n vooos mM
ele un cam!).c) genfiOQ.
26.4.2 Ejemplos representat ivos de polimoismo gnico
A oonllnuacin so Y<ln a de$tlrrollaJ on detalltJ tres ejemplos de polimorfismo proteiCO ben ooooc!OOG. algunos too
impliellOC)t'les p:<!IOIOgiCM, por st:r\dO$ polil'l\()ffi$fn()IS gcnb<:O$ en regi<ln(l$ cxxJificantC$
26.4.2.1 Polimorfismo de grupo sanguineo ABO
a} JdemKJad de Jos grupos sanguneos y aspectos c/lnlcos
La existencia de los grupos. sangulneos humanos del sl5tema ABO rue el l)(lmet caso 1990) <le
diversidad protetca cretermenada genticamente la elUStenola de 1tes a!eiOS determina cuauo en SCI!Jl9rc
humana denomenados grupos sangulneos O, A, By AB . .:stos se deben a la pte$ene.a d!let"el'leial de do& anf.i9ei'OS. A
y B, en la superlic.e de 10s E.stos antlgenos son o19Qsaerldos difetente$ et\lre $1 q1.tt rorman pome de
glucldicas mayores en y glleollp.dos, situados tal'llO en la cata extorntt do mombr.lna del
erllrocrto como Ce la de las ciiJ!as del orQSnsmo (especla!!Tie(lte epiteliales y endotet:t!es). r111i como en
(j)()f ejflmplo. en mucna:s: ''" tipo de g!icop)telnas pre&ente en $W/a, jugo gastrt.co y
seereeu)li tntestJMI)
Una paruculatid.ad del SlStema ABO es que en el plasma de I>Or&Onfl so cncuentron hab!ua!mctnte anbcuetPOs
contra tos antlgenos de ios que carecen su!! ollu&as. Se trata de lo qe;e $C como que
(ooluraJiy occumng amtbocbes. NAO). es deek, 110 son et re$1A1ado inmune. Son de
bpo lj)M {a d!ff!fenaa de los anlicuetpOS ""unes, tg(;) y enlC)iel*t a pr()(:l(.l(;irsc "partir de los 3 6 meses de vida. En
consecuenCia. en cada lndiv10u0 una trttJe tos l)fU5er40:5 en 1ots eriltoclto6 y los
lt!'IICucrpo& en el plasma.
Al)li;.t"IIOS
<:n
,.m; .. ntfO.:li<JS

cu d
llla:.ma
y
Grupo O
y
Gr11po \B
(Jwpo ( 1
y y
:umA y llllllU
370
OrvERSIDAO DEL GENOMA: POUMORflSMOS
Lit trascendeocia de e!IO$ anticuerpos nacurales tadlea en que detennlnan la COf'll)atlbllidad de transfusiones
y de trasplante de te{lelos. Una comtndn competit:te es en la q.e no ooinclden antiQ81106 de lo&
erilr0Cito6 del donaMe con anticuerpo6 del plasma del1ecepklr, En el grupo O e:s don8nto y et A8 .s
receptor universal
Compatibilidad en lransfusioocs
L.-"" dd no de"'-'"'' anucuerl)(ls .:oura SU!l anllgtOO!> cn ln
del rt-ccpt()f (s.i fw:sc-. .se produ<'irb In de los cnlroc:ios doondl).\)
rc:sultados
scrolglco para detem1inar el grupo sanguineo ABO
Ala;J(hr o. mfls comii:nmenu:, de un gr\11'1(1 san;uinoo oooocido a los de un11
de btm (imnlu, si el suero coBticoc ()Ofltr, prt5CnJc!l
en la .Mipcrfw;ic de:
Reactivo
resul tados
Suero de
( ..- - )
grnpoA
yupc) o grupoAO jy\lj)O o
:a.nu ll
IIOI.lA
"'t""'
llnli A
1/ iU'IIICtlcrpo$

1\ que
f\1 ueslra
'! IUmU
COOti('t!Cfl
:t:ruooA A
+
-+
grupo a B + +
de
AO
1\) u
+ +
+
@.rupo O ru"llunq

IX .. 'C'll
b) Genticb y bloqulmlca del sislema ABO
DeS<te el punto e vista de la biologl01 moiOQI.IUJ, es de sumo il'llris considerar &M mplleaoiones en arrtles
ae un Sistema pollmiCO tan repro$()flt{Wiivo como e-1 de JOS grupos sangufneos ABO.
Et ABO consis:te. corno se 1'18 Indicado, en oo polknorfismo de oUgo&.adridos que es el
t$$Uitado de un polimorfismo protleo en tas glco&llttansferasas responsables O. lcli simosis 00 e:sos OllgOSaCrldos.
tste se origina, tt sv "ez.. en un polimorfismo gnico. '<! existencia de 3 alelO$ el getl del sistema A80 que
codillca lt\ g!lOO$illranS'erasa. P otra parta. la ell:pre&i6n do lo$ <'n1igenc)$ A y 8 O$tb condiCionada adems por la de
otro gen poirnorfloo. et gen H, cuyo prodiJCtO ptOttieO e$ otra g!lcoslltrans1erasa que sintetiza el cart:lohidrato ptecul'$01'
{;wltigeno H) SOflte el ae1an tas transferCIISO):s pot el gen ABO. Los aspec109 pattla,dare& de todo el
si$1e11'18 se muestran oomparativamenle a
COHSECUENCIAS FUNCIONALES DEL POLIMORF1SMO
que detcnnm11n lo\ grupos <;angumeos A. By O:
c,m H que ttencn
pm:unnr 1J IIMIJC!ll.' 11.
AUO la ltCOIIiihnlll!ikfaolO n f"Mtlt J.:-1
., .. I!C'IP lf . .,oc.-.loot A. u B
IAeut ,\UO:
en fu bimda cmrn,"lfi>nticu 1).141
U ;en 1\ UO cubre en 101111 1 '1' ,i kb, w n 1 ) (
I.M q ionC) CUiblk,lniC) Jllmllll 1.06:! rb..
9
f..t lJi (11 'OIJI!I)IIIW\'k .,tiJI1' o,k ()) "1
!k lo.lS 1) R <li)I!I'IOOO:Kius. O:Utt
un; m.J,.;a u-.liUI:il'dr .t 1 l:l)ll) a; m t 1...a.:;ol1llll"ft1-MI.l
rt r1udui.'lo;l dclufrio () .am ,(,In - Amtooflridn,._ 11(' llene ilal\iiLfd t'll7l11Wica
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371
19

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l'l!'f'llfl\llblc .. 1
f'.' lml<rti ..
'""'!!lineo;;; Al}.( 1, qur w
11 <'<ol\Uflllll\11'111
Pilfa una mep- cornprenslon de las dif.erencias causan!e'9 del pobmorflsmo, se detallan lOS pVnl.o$ pohmrficos (on
los 6 '1 7) de la11 :;ocuoncias <le mANA y proteina sin1etaaos PCIC' ca<la aieb, oonsideranoo el A como t(lfeteftei!."t
y el B y o como mc.sltl(liO(leS de a<u" l
mRNA y J)I'QCCntl 1>0r d alelo A:
CONSECUENCIAS FUNCIONAL ES DEL POLIMORFI SMO 373
Los aspecto!> considerados se pueden resumir moslrando las re!aciones entte lo6 dos tocus gf'llcos. sus aletos
los productos gnlcos de s!os y los 81\(lgenos resultantes de la aocln de Has enzimas
"""
Anl.igcno
Alelo
Ptodudo gnlc:o (proleina. g!loosltltans.lerasa)
generacso por a
(o tocvs)
- indicen vsriOs nomores" su de dll:&irlcac;on eq
*oslttransferosa
Hh H Fucoslltransfetasa
H

GalllctSoO 2L.fuoo6illrar'ltrl!fa!:a
HdomtnranUt, EC2.U.69
h f0ott$1VO h No tur.clonaf nintuno
A80 A GalaCIO&.anWliltral'l$fGra$CI A
3 alelo$; Ttll"'$fera:aa oet l1lJOO A
A y S uN&eellgellletOS8,........1rlr'rSMt8S8
coclonw1antes, ec 2.4 t40
0 fOCEISI'YO
8
Giii<'Ciosittran$iet<IIKI
8
Tr&Miet<l$01 tl gtVPO 6

EC 2.4 1.37
o
No funcional nin uno
El geo ABO oonstJiuye un e,emplo dslco de mtlalellsmo: bs alelos A y 8 son ood011Wlances, mlflt\Uas que O es
,.;eSIYO. POt 'o lOs 6 gonotipos PQ$ibf(t$ dot.ermnan 4 fenotiDO$. En :uani.O al gen H, 1Xl'$ee Kilo 005 atelos. uno
domintsnte (H) y et otro rec:esivo (h) . qve prOOuccn 3 geootipos y 2 fenot()O$
G
t' fenotipo antfgenos antlc erpos pr esentes r upo& sangu1neos: geno 1po,
y u
Genolipo

sintetiUtd<'ls nlasma
AA
grupo A HyA H(pocotyA
andB
AO
HHOHh
se
80
9""0 8
Hy 8 H(poco)y B
aMI A
AB
grupo AS
H. AyB H (poco), A y 8 ninguno
00
grupo O H slo H (mucho) anti-A y antiB
AA
grupo O A ninguno
anll H, 8tltio.A y &nliB
AO
hhC)
B8
grupo O
B antiH, MtiA y
80
A8
grupo O AyB
antiH, uotiA y ;ni).B
00 grupO O
nif'9J'lO
anti-H, antiA y anUB
.
( ) En el caso de genobpo hh no &e S1ntec1za el antgeno H poc toque no se {lW<Ien Stnlettt:or '0$
antigenos A ni B. exi"an de tipo A y/o B. Por tt'nto. et {.JrVCIO
wngulneo e6 &patentemente 0 : &e le llama fenotipo O.., Bombay
26.4.2.2 Potimoismo en el locus de la galactosemia
a) Desetfpcin y biOqumica de la galaclosemia
La es ul'\3 cnrermed<'ld *"'osmica rece&iva causada por la impos.Mdaa oe metaboli.t3r ta
galactosa. oue como consecuenCia se M sangre. sintom:t qve dctorrninta _, nombre e l;l. enfenneooo. En
teoria (vase ta ruta metabOiica). ta 9<'1t'ct()semi<l uede deben;e a mucaaones en <lis1intas enzimas, oe hf!CI'IO, <'l$i M
ha de1T106trado, aunque con escasa El'l 1& prbclict\, 1<t miu; rt.cuente &OO mulaconea en el goo que
codifica la enzima ga!actosa 1f06fato urldltl!ttans.ferasa (GAL T). En Situ&eiOn est3 enz;iml' , de 379 aminoadoe
y ur\8 masa de 43 kDa, dimero que calaliza la reaccin
Gl!rlhP UTP - UOP-G&I .. PP,
El norrtlre corredo de la e.nzlma es uridili tlr<'II'ISfetMa, I)Of(lue se transfiere a la ga&actosa-1fosla10 oo res10
urdt<IIO (UMP); s-" embargo. se suele usar utid'i!1r(ln$fet11S3. Ob$6M:IM que sta es &Oio una de las l enzimas Qt.Je
un grupo \n:ltlalo.
374 DfVERSIDAO DEL GENOMA: POUMORfiSMOS
1 RESUMEN DEt METABOLISMO DE LA GALACTOSA]
m1a 10031 de utilincin de la galactosa
fE!\Illac;l""'\

ATP--.... 1
galactoquinasa
ADP_.,- .
O
\ITP\( e,.., . \
enzima 1 enzima 2
PP, _./ "'--- ) '-._PP, 1' -<P 0
0 0
1
d./
(ll)PGw p d UDPQio; p "d ' -......__:;;;;;--
.............. glucogcn()!,oCncsis
UOP .galactosa Opimerasa
UOP.gtu<Xl6a eo1merasa
enzima 1 : EC 2.7. 7. 10. UTP-tlc:xos., l fosfaiO o
gaUlctOs3lfos-rato undahhr.tnsfcrasa. o GALT
1 la cnr.ims cuyo polimortismo Sl" dcsl-:ribe aqui)
enzima 2 : EC 2. 7. 7. 12 UOP-gluc()S:lhex:osa-1-fosfato unddtllransfcrnSIL. o
uridi l uun.s-t'l'TilSil
en21ma 3 : EC 2.7.7.9. UTP-glucosa l fOSf3tO uridi lihrans tCrasa, o
g.Jucosa l-fosfato uridihltransfc:rosa. o UDP-ghtC(l($.1 pirofosforilasa
La deJicamc.:ia de .:uodquicro de CSt.'IS cn7inl3s dificulta la uliliznctn de la gaJoctosa y.
por t:uuo. e,<. causa potencial de galaclosemia:
GALT (enzima 1) epimc,_"'f'.ua
enzima 2
la <le in1cr:s cllntco es 13 dcflcicnciu en la cnzama 1
Los recin naCidos con 9*losemia comienzan, en las semanas trM el Qcio de 13 a desarrollar
ptOblemas gastrointestinales.. c:in'o$i$ llti)Atiea y ms adelanta la enfennedad rOita$0 mental y con
rrecueoaa rewl\a fatal . Se evi* 1a mayQt parte de es!os efectos ad'l8t$0$ climioanoo ele ea alimen&aclo 105
productos laaeo& y todia 1\len'- do lactosa o gataCIOSa.
b) Gentica de lB gafactosemia
Los niflo& afectado$ son hOf'l'loeigtieos en el IOcu& GAL T para un aloto Se llal'l eocol'lttado al menos 150
aMios diferenes tl'l este tocus (&Muado en la barda uomosmiea 9pt 3), con loftuenca variable 50bfe la aoctividad
y. consecuentemente, sobte la PQ$ibilidad de dosarronar la eotermedad. Las frecuencias de eSio5 alelO$
vorien muc:r.o dependiendo de la coosidCI'ada, como suele ocurrir con todos lo& poli'norfl$11'10$ Los aleles ms
frecuenle&. N {nom'ICIII). G ClsiCin, O ("Ouane o "Owrt9-Z') y I..A ("1.11)$ ngeles o ouar1e-1") dan lugar
a las $ib,lnci0c'll!$.
CONSECUENCIAS FUNCIONALES DEL POUMOR.FISMO

NN
GG
DO
tALA
NG
NO
NLA
GO
GlA
OlA
ACti'WidaCI entimtlea
100'4
<5%
50%
140%
50%
75%
120%
25%
70%
95%
FenoUpo b loquimieo
normal
galaetosemla dsca
normal. Quane" (accividad lWI tra&Gendencia) n
normal Los (<'letividad exceSiva. p
normal (actrvidacl redtJcida, sin tra&Oendencaa)
normal (aclividacl redtJcida. &in tra&eer.dencaa}
norl'f"'al (&etrvidllrd excesiva. sin
srtuaon llmte
normal (aclrvidad redtiCida, sm tr\\scenclone.a)
normal
1") El l eflotipo bioquimieo "Ouarte se ientil'tea porque la eru:ima GAL T se ptesenla M \lf\3 tsOIOt'l'l\8
m&s aclda {coherente con la mui.8Cin oe asparragtna a asprtiCO que se explica despus). oe punto
metiOf. que avMZa 1'1\M tapidarnente en electroiOr'esis y en ISOOiercttooef'lt.oque se Si!W.
"'* oet <\1'1000. La$ V31'1Mte:S Ovarte t y 2 $& diferenoan &etivid8(1
375
TOCios lOs lenotlpos resumidos antenormente son a su vez polimOrllcos. \..a reduocion de ta aciJ'YidacJ enzlm&tlca
varia en distinto grado segn la rombinacin de alelo& <JJe presente el indiVIdUo
Detalle de las mutaciones causantes del polimorfismo en el kX:us GAL T
Se lllolle'lrn f; do: l.r. fll (lleiiU! VAL! ll()fiiNI i l(lo.:o.t$ b t1M11b o,:rv,.,...o\rn"" 'Jrl J
1..(>1; m11md<H o:ue(lriinnu njl(IIO:cn en NU1
MSRSGTOPQQ RQQASEAOAA AATFRANOHQ HIRYNPLQOE WlJLVSAHRHY RPWQt"/./VEPQ
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111'11 (l l wPr< .. tli") ,...., dc;l Mu) ach..> l''!rilld:i'' o::.'*'('l'r)t'l'a; kb ;,k hutidma p.wticip;m rn
la So: b:a ido:nci fio:nd..> oom Ollillla..:oiln. 11 I IWQ (l hJ-;.Gin, nu nqui l. qut :..focta d.n"Ciamemc ni nctt\(1.
muucin Qt iSR (Coln At.. dcbilb 11 UN tmnsici6n ei IJ o:n ('(Oro
b f' .W,a CUIVP,:II y CondulY ._... a:lildlld
nut-.. 4Gin IS11o:J un aminu.kido a!lilrllento: (lllt 111111 " cwno:ul 111 1\oncio.ion. pr<obobktlll;niC rcoo
o:o:rQnia al centro ttni'\l) y 1101'1
lA lllutu:t un K-2115' ddltd11 a un!! lnlnS\cl"'iM Ai\Ci ->A\ 11 e b 01\i<. l;j
o!IM(J'Ie._ ((11(ll pic.,... eravcs
l.-11 rnuuon S IJSI. dcbtda 11 1111a tJ;J111!Cj;in TCG-.Tr Cil ll .... lld;lntC 1 \le
JIIIICIOIOffl:l a un; la po\>IIICoo)tl aconca'l"leiii,'Anll oJc: r:a:l f'ICf:111 1((110(111"' Y &Ctl\'idad <nromil!icn no<>< rc"(luddo. en
di!>1in111 mo:lbdt )l;ll'"' ti tt')ldu nm.-:>deraOO. Se (lUC'dr dl'll'CIIll n!o:ka Rflf'tpis .}.t( t 1. 111
no\lh('On lq,;-o: una diuna pm-a la enl':ima de le'lrio.i, ' m r;,q 1
b m...ncin dcllo.:b " oon:. 1ran...c1M ,\ AC .. toA(,') ('a(l'll'll;oi otica olo: IOh f''""''I'W -Ou.tc-,.,.,
''tJw.t.nc.l-1 y "lo)S 10 "Owtto:I-J, ti pntncro -.e C11r.lo.'lm-!ll p u11n .. cnntnal ie.l te((uo:ida <k;l
'\(l"o), ('J tou,....,I,..IICt""'ad In de (IW;;,I, [1 knlll opo ''I.Q< wc:ll;
fW:i('lllar. do: In on11 U: un tlcool....,.. ( ' lA n A. quo: pm"\'\:1.' )l;f
ll'"P'Uh"'bJr dt una 1'1111> rl(lio.b ). J)(ll d.to. oJc: uru dt; <lllna o.tUf <"\PI""'""- o:1 ;u,ment.;. en
netni&d Al 05"AI qooo: I!Meoii)f, w llfl!lxl .. moxll\rllt.C kfLP. J'IOC->!0> q11r 111 m .. l.ouoo
A_,(j artnre>:o:r <lana f\II"J 1:. ok n:l!tri.,'<:'o.:. AJ 11.
CONSECUENCIAS FUNCIONALES DEL POUMORF'ISMO 377
mjs not<'!bles genom<'! un e$ la exC:IUSiw:l""d su petfll (satvo (lata lOS hefmanos gemelo$
univilelinos, individuO$ dnioos que lerd'lln lOS Mi!I.MOS a!elos el\ cada uno de sus IOc::l , aunque induso M este caso
pueden exls.llr diferencia& debida& a mulaC*:Wte$ somtica&}. Se pueOO, por tan>. ubhzar el de e&IO&
polimorti&tnos para ta ldenlfficacin de una per&Ona, con una fiabi!idOO 1gual o $Up(ttior a 1<1 de leas huellas daccilaores, b
que ha dado lugar al trmino huella genioca o dactilar (p\g, 385} Con este objeto se
pnnciP'*nentelos polimo.rsi'T'IOO en IM regiones de ONA mint- y mi0'0$316!i! e (p3gs 114 y 221), Por otra parte.
que la& secuencias no codrficantes no proporcionan informaciOn sobre C<'lr<'!taeri:s.ticas .spociales de 1M P8f"&&nas
(posibles enfennectacfes, cualidades fisica$ o -..) . .- b<'iwdo en polimOrfi$m()$ de '190'1'" no
codificanles po$&8 la ventaja de evil.ar cualquier 8tic0.
26.4.5 Polimorfismo en el genoma mitocondrial
En el 9l!'t'IOM8 mitoeoi'IOriaf darse MU1aeionea que generen un pollmotfiamo. Su ONA
e:.perlmenta mayor proporcin de mo\aciones (pJe el nuclear, debido a la exposicin a especies reactivas de
resultantes del metaboltsmo oxdativo nvlocondrial, a enconiTar&e ms desprOiegido DOt carecer de tuslonas y a la
menor ellcaC*a de lo& de n:tPat;JQn mitooondriales De esas mtJiaQOncs, <1 rogioncs
codificanles (ms del 93% de la molku13 de m10HA) svolen tenor oerjUOiCiates part' 1& de
las ptO(elnas Qlllt y P<Wil 1<' de lct o6fula l.<ls mut;tcionos en lil r(:916n no CO<IifiCante OOtlsetvan oon I'MS
facilidad, al no !XCcr A<)Jcllt'l$ que no son l)efjudidales dan a 1)0timotfi$ti'IOS
genticos: c&Oa "et parece ms C:IIII'O que 18n-cx>OO son oompleltlme.nte ii'IOC'I.JOS para las dferentes funciones
celulares Por ejemplo, vn3 oombin3(i0n de ;)lelO$ en variOs loca DQiimorfiCOS del aomosoma mltoOOI'Idtlal
IM.lmano (poco lreeuent.e y "MI)t091\1PO T"J da lugat 3 eSC)ef'l"l\8tOtOi<les con motJildad teduciGa.
Como COtlse<:ueneia. tos polimorfismos mils comunes son aqullos que afectan a la nica regln no CIXVflcante del
DNA tnitooor'ldtlal , conocida como buele O (pg. 1&0). En este corto tramo de ONA (1.112 pb en hl.l'nanos. menos del
1'% del meONA total) se acumulan mu1ac:aones con untt frecuenCia cinco veces superior a la del res.1o <ktf ONA
mitooondriclf En p;llflitlllar. la lt'l$3 <le polimotfismoos es maxima en dO$ pequeiias poreiot\es deo.! bUCle O, Clet\Of'l"'inacsas
OQf ello hipc.rv#lrillbkt.$
asa de des-plazamicnl t), bucle Do 1 112 rbl
nu..nM:'I'utiln

1.,.,, O., DNA 7S
n."til'm dd
CfUt!l\XoJfll.l llorig_.:ne' de
t0))
\k Tfllll .... fljXIOO 1P1 ,1(' IJ"
I)('SJIL.I Hll }' hi[Cfll (1
-
11 hi1nn uriuhk 1
dos regiones. pankulamllle
ricas en polimotfl5nlOS,
.a;.e util i,,.an habi1ualm.:nl.:
.:n d.: Mknti<.bd
d
ltlllllo."'Oih.:lfl;ll
C .. uck
lnllnc't..,h>
t' ll ""'11\1""'
anhfll)lanu U
"r .,;
Ml\1:1 {Cn:il Jd
o
El aniiSis oe polimorfismos en las reglones h!pervatlables mitoeonl';lriales eSt) Qran <tplicac:a6n en
esb.ldlos fartaares. aotropo!OgieOs e...otutlvos y tambin de ldentifitaC:il)n, A &:Ste 6xil0 OO'*ibvye lambi6n lO
oonvenienoa de obtencin y maoop de mi*StTas mitooondnales. gracas a ta emtencla de un mayor nUmeto de ooplaS
(cien1os de mitoooncfnas par olula, cada con decenas de copias de mtONA}, 10 que diSminuye la probabilidad de
que IOdaS estn de$1ruil';l3!1 o dal\als, ttad!Ciet'I(I()S.e en mwyor estabilidad del ONA Por 0110 lado. al
ser las tegfOfle& hlpetVarlabtes mucho ms cortas en el mtONA es imptObable su degn'ld<'lcin en 10<1<'15 !;as (X)Clr.CI$ do
ONA de la muestra.
Tema 27
Anlisis de genes. Deteccin
y aplicaciones de los polimorfismos
27.1 ll'ltrO<Iueeln -"' - .. 37$
27.2 Anlisis de genes .. ,,, __ ,.,., .... ................................................ ,_,,,,_.,, .............................................. 380
21 2 1 81jsqvedtl de )()r ;)n(lli$i$ oe ligartliento,_,,,,_,_,_, .. --- ...... ........... ... .... .. . . ...... . 380
V .2.2 Empleo de mtooos l lsic::os parara iOentlficacln de get1es ............................. ,,.,_,_,.,., .,.,_,_,_.,.,., ...... 380
27.2.3 ldentlflc:acl6n de genes por secuenC18CI6n ................ ................... ..... ......... ... .. .. . .. .. . ........ 380
27.2.4 ClonaCIn funoonal ,,.,_,_,_.,.,_,_,_,_ ,_,_,_,_, ... ,_,_, . .,.,.,_,_.,, _,_,_,_,_,_,_,_, ,_,.,_ ,_,_,_,_. 380
de gene$ y bioinfQnn6.tic;n .................. - -- ... -- -. --- ---- ,_,_, -- 3SO
27.3 Dotoc:ciOn de,l polimorfismo de s.ecue,nc:i:a de DNA .... -.................. - ............ - ............................. -............... 381
27 3 1 PolimorfiSmos en 1810tlgitud oe lOS frttgmer'ltos de resbiecin { RFLP) ---- --- ,_,_,_,_,,.,_,_, 361
27.31.1 Ejemplo Polimorfismo en 131\...giObir\3. do lf oncmi<' ktlcif(lm"'I 382
27 .3.2 Polimorfismo en e1 nomero <le reoetieiones el\ tM<Iem (VNTR) . 3&3
21,4 Aptlc:ac:iones do Jos po!imC)tfi$mOS do DNA ....... .......................................... . ........... ............................. .... 384
27 .4. 1 poliiYIOrl'i$t'I"'IS SNP .......... ........................... ,_,_, _,,,,_,_,_,,,_,_,_ ,_,_,,_ ,_,_,_,_, ,,_,_,_,,_,_,_,,, --- 3&4
27.4.2 AA.llsis del ONA oon fines familiares ...................................... ........ .... ........... ........ ........ .......... . 385
27.4.3 Huella dactilar de ONA ................... ........... ......... .. ......... ........... ........... ..... ........... ........... ,_, _, _, _,,_, _, _, 38S
27.4 .4 Anlisis de polimorlismos con fines ciagn&tiC06 .. . .................. .................................. .. ......... .. 386
27 4 4, 1 Oi;igns.tico dCJ oongni!Q$ del 337
a) Vt\IOr<ICioncl$ prclimin&IOS , , , , , , , , , , , , , , ,_ , ........... ... ..... , ,_, ..... 387
b) Ensayosgenelioos .................................. . ................. . .. . ................................... 3&7
e) locld&ncla de las enfermedades congnitas .................................. ,_,_,_,_,,,.. 3$7
27 .4.5 810Chlps o de ONA .... ............................................................... ........................... -- 3$7
27.1 INTRODUCCIN
Son lOS aspe.ciQS de intets en et e$t:vdio del ONA gnico, t<Jnto desde el punto de vista bilsico
(WormaciM sobre el )(()plo gen) como. espeCialmente, pata su al)lielli6n t11l ostv6o de 13 enfermedad t1"1CAecular con
fines diagnsticos y teraputicos. Aunque et eonoclnVento del factor gen&lic:<> (1() t:>il$1<1 l)<'r& resotvet' definitivamente la
enfermedad. si que es obligado conocer el aspecto molecular del get1 o 9f!i1eS cisrtJneiOI'ISies re$1)0tlsable$ (mut<lci6n o
mutacione-s) para poderla Identificar. El rnero de enfennedades pata las que ya se tliSI)On& de inforrn;:tCin 96nic<;l Cll
muy amplio; se pueden a.ar, por ejemplO, anemia talcif<ltl'l'le, cnoet oe mama y de ooiQn h(!IC(filtt rios, de
Hunbngton. distrofias musculares. enfennedad de AIZhetmer, enferme<latl de TaySachs, fibroSoS quf.sbcl1,
neuroti!)r(ltl'll'IIO$i$, po!iQI'i$10$i$ renal, $ii'!Orome de Marfan. 5indrome del X l'rgil, &Ofdera hereditana. etc.
El objetivO de la estruetural 217) .s 1<1 &CQ)I(ttlCIOt del genoma oomplelo y, sobre lodo,
klcallzar tos genes responsables de ef\terMedaeos. Aul'lque el I'IUrne;o de gel'les ht1 ereodo
exponencialmente dl$$de bs ao& 70 hasta la ae1ualidacl, lo& ya ientlflcaoos suponen menos del 10% deltolal de
gei'ICS presen1es en el genotn;J (.sl'nitOO como media en unos 100.000 genes, pilg 239). que a su vez sOlo
equivale a ul'l 3-5% !Otal (Pllg 108).
Entre 106 aspectOs estl.da<IOS cabe eltar 18 locatllaeir'l tiC en tos cromosom&s. la identrficacin de la
funcin de sus productos gnloos en la clula, la bsqueda y tleteocion de genes ;)l'l()m(IIOS de
cnfennod*& wnocidas o t'IUeVa&. la identiflcaciOtl de mutaCiOnes respons.ab6es de m tii'IOr'l\allias., el esttldio del
polirnorfi$tn0 dt &ec:vencia. el anliSis de las prolelnas sintedzadas en forma alterada, las pruebas geneueas en el
380
ANLiSIS DE GENES. DETECCtON Y APUCACIOHES DE LOS POLIMORFI SMOS
<iagf!O&tioo <:llnioo de enlermedades monognlcas y "'uraaorlales, etc. El de estos y otr09 aspectOs se
ihcrementan'l en los prximos atl06 con los recientes avances en el conoc:wnienlo del genoma humano.
27.2 ANLISIS DE GENES
Bajo un tOmw'IQ t.1n como el do anl isis de genes se estudian en esl.c lcm.."t tllguno$ dO k>$
pqtlteamientos y hemltl'llentas bSICBS sobre las que se asienta la nueva medicina molecular. medicina geoOmlea o
medicina del futuro y en lOs Que w ba&a la Industria fannacutlce en un de de&errollar frmaCO$ accen
t;Obre gei'IEI$ anmalos. oon P<'ftl o wroglr u funcin. N1.1011tro orrfoquo,
r"lringido, no se dirige al esllJdio de enfermedades cor.cretas, mb propio de 1ra1ados especializados (clfr:os,
metod016giCXl$, etc.). Y\0 a la desctlpdOn de algunos aspeciOS aplicados en ei diagnstico y la teraputica. partiendo de
la INormaciOn apottada en los temas precedentes y siguiendo como objetivo los punto& incluidos en los temas
siguientes.
27.2.1 Bsqueda de genes por anlisis de ligamiento
Un primer paso en la b6squeda de genes es ta decennintaeln aproximada de &u presencia en tos <:rOITIO$Omas. El
anlisis de llgarrento clsico. ya 9$Wdiado pera el mapeo <181 genomtt (g 218). pormitc la proximid<'d entro
do6 genes a paftlf de la fT'Qwenci;J oon 6.-os recomtlinados en la descendencia. Ef'l se
loca!iucin m;b prOCi$a Sl el 311illisis del gen llust&cJO se Mee no tespeeto a otro gen. sino a marcadOtes
genfiCOS. tspe(:it'lmetlt$ lOS I)OiimOrfiC:OS (pag 221).
27.2.2 Empleo de mtodos fsicos para la identificacin de genes
EMOs propon::iOnan uf'la IOC&IIZ.ac:IC'lr\ ms pteds& de los genes, ya que se describen en dislanclas ab&olulas de pb
{J).tg 221), So l'laoe uso de m'lodos basados en algunas caracteristkes de 106 genes. ausentes en regiones no
eodillc.ntcs
Is lotes CpG. Se ecnoce la de ISlotes CpG hlpomedlados (Pi'i9. 272) en la regin promotora de genes de
lo'ertebtados que se transcri:len activamente: ms del 50% de los genes humanos tale$ i$1010$. es
posible udizar las (pg 215) P<tr& butcr eS1e tipo de seeuei"'Cias y aSi idenlir.ear potenciales.
OOn no caracteriuados
Marcos abiertos de lectura.. PIJesto que 18 regln codlflcante de todo gen ha de empezat por un oodn de inicio y
.,.., oe tem'lirw::ln, 18 bsqueda en las genotecas de segmentos de ONA emn, $$\os
tripiC:!O$, $0gmentos denominados marcos able.rtO& de lectura (ORF, de optM ffliading frame: POig.. 2941 es otro
me!Odo pata encontrar geneos potenCiales.
Genotecas de CONA. EoMentemente, \ft gen que se Gxpre$8 en un tipo <:etul8f oetennina(IO M de estar
reotesentado porta presencia del mRNA IT8nscrito a paftir d8 l El en!i&is do gonot.ecM de <:ONA (P89.. 216) es.
POf tanto. fuomc para la bUsquf:da de 9f!toeS nueV06.
27 .2.3 Identificacin de ganes por secuenciacin
La soouenciacin serta la Jofflla mas diMCI& '/ sendle de analizar un 90" de un po!imorlilimo o una
mutaciOn. Sin emb.ttgO, en la pdtcllca. este objeth-o no es f.ic:il dado el tamal'lo y oomplejldltd dOI ge:nom tunano y tos
prwemas talicos espealiZ.SOOS e incluso econmicos <PJit te a gran escala. Es pteterble
seleccionar o cribar", pcw alguno de lo& mkdo$ antefiores.I()Sftagmontos candidatos antes de secuenc::iartos.
27.2.4 Clonacin funcional
se plantea cuando ant.es de conooet la alteracin del gen se su prooueco g&r.co. por ejemplO ta
proteina respoMabte de una enfermedad (como la tf.globina en la anemia fatCilorme). El obje:tl\10 es entonces
iOentifiear la secuenCiB deJ gen alterado a partir de la sewenc:;ia do l)'()(elna anMala, proceso conocido oomo
clonaeln 1\melonat A partir de la secuencia de ;,minocidos se <teduoe la de oocle6tldo& del gen y se
disefla sond<' {pllg 180) que permita kleallzar por hbtdacin el alelO mAarrte a&Ociado a la enformodi!IIJ,
27 .2.5 Identificacin de genes y bioinformtlca
t.a Br\lotmtka o conjunto de tecnologlas de la informacin 411 esaucJiO de lOS &en6menos
estA su oerw oon ocasin del Hvmt\no. Ha sido la teenotog!a desatrollada
para <Jilucldar el ordenamiento de lo& HCUoncie Que se van deScifrardo. Eh esta momenlo se habla ya de la
biolnfonnAtica (o bioQuimioinfom\Mica) como \W'WI ciencia que teOOge infonnac:in de reas de oonoc:imlento antes tan
separadas enlre sf como 1<'1 t;lioquimiea, la biologla rnoteetMr. ta estad:lsclca. la rarmaooeogta, la ti&ica, la Jisiologfa.
DETECCIN DEL POUMORFISMO DE SECUENCIA OE OHA 381
gentiee, la qufmlca fi5JC8, etc., en oolabot<Jcin dCf,(t'n)llo oe las nuevas 9f!t\81'8Ci0nes de ordenadores, Internet.
la r(l()6(1ca. etc.
A m de idenblicar las secuenoos que definen a los genes, $e 1'130 ell\bOfOOo lOs llaiTIS(I()S programas ptedletores
de genH: exlsien ya unos 20 de ellos. basados distinlas al)f"OK:im&eiones y C'X)I'l'\tlndo et empleo de Slsternes de
reglas. tecles neuronales, Inteligencia artificaal. rn00e1o$ eS1adi$1iCX>$ y, mAs meto<loelingislioos.
27.3 DETECCIN DEL POLIMORFISMO DE SECUENCIA DE DNA
Para detectar las variaciones (I)Oimol'llsmo, tema 26) en 18 secuenda diM genoma de dlstinlos 1ndivtduos se awde
a <:isbnl.a; c:tll-tr<.ttogios con enfoques earaetetlsllcos, o W\8 oomblnaCin de ellas. En principio. lil fotmil m;fls
detectar ut'l polil'l"o()rliStnO es la secuenclacln del ONA. pero pot su laboriosidt!ld so $1.1CIO t'QJdir ll QC:rll:$
13$ que deStac:atiiO!I ar\81isls RFLP y VNTR.
27.3.1 Polimorfismos en la longitud do los fragmentos de restriccin (RFLP)
Quiztt el m!Odo ms empleado. se denomina simplemente PLFR o RFLP Fragment Length
Polym<Np11/'$m). No se basa en un cambio tenolfpeco, un cambio identificable 00 l<t epresiOI'I morfok'>QICOs
o tunc1ona1es. 51no en la detocciOn de variaciones Cle ta secuencia e1e1 ONA {codlncama o not que llenen como
ronsecuencia <:.ttmbio en un<'! diat\a tesltiocln. Por Lanto, los. fregmentoe de re&lriocin que &e obtienen son
<frforcntO$ dC:pencier'ICio Gel alelO ptesente.
cada de ONA generara fragmentos. de longirud en oe lOS Sitios de resuiCCiM
presentes. Pues10 que muchos de elos no OOtJ$$pcn:len a, la regin que se pretenCIC: C$bJdiat. generalmente se utiliza una
sonda que hlbrida en pot;idn oercal'lil al &i6o polim6rfi(:O y se 10!1 por el m4odo de Southem
(pg. 171). Se puede por ello <'!firm;af QvC: el RFLP es un ar\&!isiS de polimorfismos basado en ta hibridacin.
X
X X
' '
1 Caso 1: una secuencia de restriccin est presente en un ale*o pero ausente en otro )
\lelo A
lo. Mlii)$ dl: cone
1\Mco U ww.
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-
!oo(lflib :!:
... ., ....... ,.,.p< ... _ .. .....,.,.r."" ......
'"*"""'"""'-"'"""- r ..., ......... ,.,.,.,.,r.;, ,. ..,,, ...,...,.,
27.3.2 Polimorfismo en el nmero de repeticiones en tndem (VNTR)
383
Este tt><> (le polimorfismo surge de la ptesencla de ONA no oodfiCSnte en eucanolas.. concre\amente de
repetiCiones en l8ondem (0 NA satlite. minisatile y mietO&atlite. pgs.. 113-114). EJ poliffiOf'(tSmo, ent10 ndivicM>s y
emre lOS dos ateiOS de un ml&tno t'ldlvdvo. surge porque el OOtn$1'0 de <kt ropeliciOn que f(l(rT\lllf\ C*l3 bloque
no es slelTipre el mismo: de ahf el nombre. POiimorli$mo de n(lmero varit'ble de repetieiol'les ef'l lilnCiem, o sln\C)Ieme.nte
NVRT o VNTR (V<Jn<'te M.mlbtJr o1 Repe&rs). La ta:zon de que v&rle eon facilidad el: nUmero de
011tit en ltl X>Sibilidad de recoti'"'aCIOn entre etas oon sobreetuZ&mienlos. desigu&le& I,Pilg 367)

de n:>1n.:.;,(nl.
Sil(o )oc.'
X
<1 que hibndn conl;1. wncln
X X X
lea so 1: deteccin def fr&gmnl o de restriccin que contiene l bloque de repeticiones: 1
C':td.'l alelo conl icnc l)l oqucs con un nmero di ferente de unidades de repct1d6n.
Pur tanto. nUmero nptlidus dcrliil del lk d.:lctl<ldt.'
por una ..... ,n,b que hibrid focrtl de la!:
Aldu lt
J
p<o)llblo
un flh:10:
AB
mm
----
mm
------
----
(2
811nobl< en
<k !ubnd;uu:un 1:.

(1 .,.,... ) 1 b,,.,_j 1 '
+
""
All AA
tllllt;Oo:C)
----
------
-
-
-
-
384 ANLISIS DE GENES. OETECCfH Y APUCACIOHES DE LOS POUMOR.FlSMOS
1 caso 2: deteccin del propio bloque de repeticiones: 1
En CSIC caso. la hibrida con la secuenCi."11't'p!lida. EJ resultado es similar al del caso l.
Ah;IO t\
1!!!1!--
Alelo;'! O:
.. ----
LOS l)(llil'l'o()l'fiSITIO$ VNTR ave $C e:mplean en la prctica corresponden a bloques moderaclamente grandes de
unidt'dOS de S<' 64 OO. OOrrO$pon<'icn1C$ t'llos hipefVariabiN. Otro& tipos no suMen recit* ese nombre,
como eii)Oiimodismo& repeti(iOilt$ Soelleii13!S en tilndem (uniclac::l de repeliciOO de 1 a 4 pb, es decir. ONA microsa1lita)
y el polimorfiSmo de repelielor.es en tancJem asocia oon grttn<Ses bloquet do ONA s.atlite. los Joci se
llaman asi pot teoet de Jorma caracterlltlea MuChOS alelos. Los mareadores 11\M in.tormtt!Nos l)enen decenM (le; afeiO$,
por lo que es poco probable que dos individuos no emparentados compartan los miSmos. E!IIO!I mate:MOres VNTR
proporcionan mucha mbmacin para el af'lflsis de li9Jimiento genelco (mapas genticos. pg. 218) y para la
idenlific:cu;i6n de individuos (prveb<.s forOI'I$C& y dtt patemiditd. pg 385),
Tonto 104 RA.P oomo VNTR h&n incroment&do tvor10mon10 el nUITIGfQ do marcadofes POimrfioos de que &e
di$(l(lfl4J la diver&i'*' entre indi'li;IVo$ y P't;J soguir 1;11 segregacin de (tierentes porciones del
genoma a lo &algo de las familias. Se han descrito mUes de es:IOS pollmorllsmos, IOca!lzadot en tOdOSiot ctQ<IS()(N:S,
Como atternatlva al metodo de Southem. para detect&r el pollmorllsmo VNTR puede apliCarse \.1'\8 8rY1plllie&el01'1
por PCR (pg. 188). En lugar de una sonda. se precisan entonces dos cebadores que hlbriden a sel"'dos ledos del
bloque de repeclcione&. PueAo que asl slo &e amplifiCa ta regin qoe contiene eiiOOJS polimiCO, no es necesario
purificar el ONA. ni digEriio oon enzimas de restricci6n. y en la electroforesis slo se observarn (sin hibridacin, basta
la ti'lcln normal de OHA, pg. 138) las bandas de los fragmenlos que lnc:il.t)'en el de repetiCiones. de 1811'18009
dis1into6 segn el alelo presente.
27.4 APLICACIONES DE LOS POLIMORFISMOS DE DNA
El anlis:s del polimorfismo gencico da pie a RJfl'l8t'06a5 aplicaCIOfles, tankl en rl\'8stigaci6n bsica oomo en
dinic.a quo u on los tipos do polimorfismos antos descritos.
Los polimotfismos <Sef DNA que no tienen efeeto fenocipko se utAzan pata 18 comprobacin de la ldeolldad
(huella daailar gentica). Se emplean para e!lo los RFLP y VNTR. Por ejemplo:
Olagnst!co de la paternidad biolgica y seguimiento de rbokl<s genea16glco6.
Identificacin de 606P9ChosoS en procedimierrto6 penale$, por comparaQn con el ONA procedente de
diversos restos biolgicos (sangre, semen, salva, raices de cabello. te;itSoo corporales diversos. piezas
derrlales. *te.)
ldontffic:;l(;i6n PO$tmOnem de indi'lhiOs, en easos judiCiales o caltlstroles.
Otras aplicaciones Oe Inters diver&O. Por ejemplo, M aplicar e&tM ln6'todologlas a muesltas
cJ(tjcas con el fin de oomprobar lldenidad de las biopsias. posibilidades de
genotica caraaeri&1ica de c:ief\os tui'TlOflls, c.
El estudio de los polimorli&mO$ QIIJ9 tienen una <:onlribucin minirnl o tovo o la susceptibilidlld frente a eiertos
procesos ()O$flt interft mi<liOo ... en la de etotermedaoes oomplejas.
Lo$ polimorfiSmos que un papel directo en la aparicin de un lenoc!po pa1olglco son,
e'llidentf!<ente, aplicables pata el dlagn6stko, asl como para el estudio de los mecanismos rnolec:dares de la
enfermedad (Pa1o6ogla Mo6ecular).
27 .4.1 Mapa de polimorfismos SNP
Los polimorfismos SNP o de un solo RJcJe6tlcto (pg. 365) son responsables de una gran parte de la diver&IOad del
geooma runano. Aunque la mayorfa de ellO& no origi\an directamente enfermedades. en ocasbnes pueden kx:a!izarw
muy otlfC8 de mutatcionn o PQimorflsmos involucrados en procesos pa10Qet'IOS, lo que lOS haCe UtileS oomo marcedOtes
gon61iCO$ (pig, 221 ). /loJ it'te earacaerttancto cada vez mayor de esiOS polimorfismos, se hace poslbkt la
construeciOn de Ul'l mapa dt SNPs. lo que se une a la utilidad propia de algunos como determinantes de enfermedades.
Se 1\a iniCiado un gran ptoye pera Identificar 106 SNPs del genoma humano y mapa de tt!tct re$01vCiOn
con la posleiOo de unos 170.000 de ellO&. En l participan, desde abril de 1999, ttN centros <Se inYMtiQaeiOn,
por 10 grandes empresas farmacuticas. el Weloome Trust britnico y Motorola. En abril d4J 2000. con ul\3 in.-sin
Que supera tos 5.000 millones de pesetas, se habfan identfficado y cai10!Tafiado mts do 41,000 SNPs. l' PMir CIOI
material gentiCo de 24 Individuos de distintas a.nias. En este proyecto H ha aoon:li!ldo no pa.tentar las socueneiM
deSOl.Clieftas.
APLtCACIOHES DE LOS POLIMORFISMOS DE ONA 385
27.4.2 Anlisis del DNA con fines famil iares
El arWiels. geners!ment9 POf RFl.P y VNTR, de ur.os cuantos pollmol'flsmos permtte reaizn oo .. umiemo do tn
befenda de lo6 aielos respectivos y ot:ltenet conclusiones sobre las relaciones familiar-e& ef'ltre
AnlogarMI'Ite, se pueden rM!izar esluOiOs ev<lii.J(Ivos y tale& como el soguimien!O oe ta:$ migrlK:iones
numenes desde tiempos pret-stoos y las. relaCiones entre los antecesores de la rsz.a l'luman.-

1'\' .JUl lflllt<: del aMo> ij -
' '
-

tO \ un
Q IIIJIIJO:I l
--
.... f"'""tot'('nu.. ---------
I (S!II UII'll.; o.kf Jllclo\
AnirJis1s:
1 no es hija de 3 (le falla el alelo O paterno).
S1 U :l tuUI er'lfetrncdad sutosmictt m:cSf\'a (simbolos
' ' '
--
--
3 la (ho-moctguoo), que 1, 4 y 6 cttlf'l portadores (hctcrocigtioos).
'
:]
5 hered de su padl(' ( 1) utdo 1\. con lo que se extin3ut la lk'tt.'tlcia de la pt esa ruma.
El po11ador de la cnfcnncdad de 6 fUe hlm.'d.1do de su PGdrc (3). oo d la m;ttdre (4).
IX la (tJtunr S. 10 y 11 SQn portadores, micnlrns que 9, 11 y 13 c:stin Sttn06.
Una de la$ ap&:aoeiones de es!OS es1udlos familiares t\a sido relacionar la presencia de una
geotk:a. causada pot un defeao en un gen an de&COnocido. c:on lt'l de un polimorfiSmo det.em'liMd<>.
Mediante un estudio amplio del rbol familiar. basado on 1.;1 IT.trn$mis-Otl del gen ()atOIOgleo y de bs
marcadores polim6rlloos. se puede legar a enoontrt\r un ntelo potimOrfiOo que est ligado a aa enlermeded (por la
proximidad de sus b:i respecti\106 en el genoma, 218) Esto oermrte. en primer lugar. ldentlllctlf de iorma
aproximada ta posietn del gen patolgico y iSi sv bU$Ciueoa y. (lO( otro lado. et diagnostiCo pteYentlvo de ta
enfermedad modian1e la deteoci6n del llcto JX)Iim(rilCO *$0C.iedO Este se 1'18 apicado oon algunas
enfermedades QOtnO fibrosis quis.tiea y la oorea oe
27.4.3 Huella dactilar de DNA
Como &e h<l visto M$tt' 3hOra. 10$ potimodismos. RFLP y \INTR se b::atlzan con una sonde parucular. para
exftminttr tocus Unico. Sin embargo. ta msyotia de secuencias repebtlvas que &e estudian en tos pollmorfi$mos VNTR
en mUitiples zonas del genoma (recurdese que los rrw-. y rr.crosatti.tes son ONA moderadamenttt repetitivo
y aispeno. Otganlzaoo en tooques dtsperso& de repetietone& en tndem. pg. 114} Las unidoele& de r4WetiCin
ptesentes en pyntos diSDntos del genoma pueden ser dnticas o bien lo sufiCientemente $WI"'il&re:& como Plf<l permitw su
deleoci6n &iiOOitnea en lodos e$0$ kx:i. Si w utiliza oomo sondo ul\3 q.,e pueda hil:lric:W con IOdOS '0$ tOCi
de una ,..mili.- do ONA mini o se pvede observar sil'nl..ll3l'leatl'lente el pa!rOI"' polimOtfieo de todos e11os
oaoa 1a OQmbif\&Ci61"1 oe gral"' nmero de variaclcnes lnctwlduMes. es ptctlcameme UrVoo para cada IndiVIduo. Por
* al pab'n resunante se te llama ' tluetla dacllJar de OHA' (DNA . SQlo tos gemelos dndCOG presentan
huellas
la l'luella gentica puede utilizan;e en es-ludios famili;ves. de potomid3d. de recien I"'OIXIO$.
forCI\$C$, etc Otra de $US al)lie&o:iooes. es la deCeceiOO rapiaa cte somatieos. del gMOma.
I)Of ejemplo, al eompatar ONA ae tejidos normal y neoplaslco. En una aae proporclon de 1umores malignos. la huella
gen(lca sufre cambloe:, que consiSten en la aparicin o prdicSa de bandas
386 ANLISIS DE GENES. OETECCt0H Y APLICACIONES OE LOS POUMORFISMOS
J p.1rc:jas de
los
b 60
O
Se ONA po.lr
- -
h1bnda.:an SCJutlu. 'Til, llOII
-
-
-
una ,;onda que dctta
- -
- -
pubn1otfi<ma$ VNTR en
-
muchO$ lncf d..-1 moma,
--
- -
-
-
-
-
-
- -
- -
Cada pc.'tllllllOl rnut'51l11 un p.1ttn de
- -
-
-
di(crcn.e (huell<l dnctilar de
- - -
-
DN,\). C'lttepcD l11 prii!X'n de
- -
- -
-
-
acmc:lo:s, que 1ieocn d mismo. Por
cUo. han de SCt#Cftl ftclj idnticlb.
- -
- -
-
o id;.tirll!l. U8 otms
-
dO!! pct.l\'}aJ j()ft IIU
--
-
idt:lic:o}, bhilcliuo o dkitltkcto.
-
-
(En d km.:f" cuu. okl cm de C'..if'llr,
-
-
dos gemelos M
- -
puo:dc.on !K'r vutn y mujer.) PQr Olfll
--
panc. puede o6mo la hocUa e5
- -
ptlt:li.b ft'lltl: ratlltl!at\.'S que
-
-
-
Cilltl: tnd.-1.,..08 no empan;:nCIIdo.'l$.
-
-
Cc.meht$i6n: unicigti<:O$ diciglC06 dicigtic05

60 O
27 .4.4 Anlisis de polimoismos con fines diagnsticos
El anltisis de porllflorflsmos es un ml6todl) p&no el <fiagnO&tico. en especial por la posibilir:lad de detectar la
Olfi40$ 00 que se o prccisposiciOn gcn6tico't tt ciott;:a$ cuytt no QS E$
ononne imcr6$. '* eje<piO, et diagt'IOSbCO ptenatal de enletn"'edades oong$\itas, O$ docir <te toda del
oesarrOIIO morfOlgico, estrucWral , funcional o molecular presente al nacer (aunque pueda manifestarse ms larde),
eJCtema o Interna. familiar o esporcica. heteditlria o no. Unice o mUitiple-" (definicin de la OMS).
Esquema gencrnJ de ltt sccucncin de acontecimientos de la cnfcnncdad genlica.
1>cw ejemplo, p...n un:1 cnrennl'tbd morwgnu:n (ra.t.n"m de h<. 'TC!nc-1:1 mendcli:um por nltern.;;Qn en
un pWllO ll'oo del gen, que una sola prOicina).
goo nonnal
ftl ll lltd611J'-+-{\.
lt\.'71 :=:.:! Qpro.lrinu un-(unll Q
Cl'l1.1Ma
J\'CqJI(JI'
118nspo!1ador
"""'"""


(ac10I de
fnetor de conu lnciJI
'"'
incorrcd

c:1pl'lcicbd de unin,
sub.:'elulat.
Clilllbil ict.J,.
dtpbei6n.

CIC.

tnftnntdad

11in1omas clinicos
Una vez realizada la EU(pkw'acln rnlOca del paciente, e& decir el fenotipo dfM:o, la <:onlribuci6n del
l;abota!Qrio tal di;lgn$1ioo Pvode a lre& niveles: y f'leteneia de lOS gce$ (nlvcl genieo o gcnorna).
SObft el prooucto g6nic:o anormal resultante (lo que hoy se llama proteoma), y Vla metebllca o desequilibrio
qui mloo afectedo (nlvet bloqulmlco). CUalquiera de estas situaciones oonstitvye un objetivo y debe ser estudiado en
Patdog1a Uolecular, una materia hoy dla multldlsclplincw.
1.0$ errores <:ol'l9nllo& se putM:Sen con&ldor.tr como .,.r.'ldig!M de 10$ tm$1ornos bioquimiCO$
t)fl l<t y fun(:in do molc:ultls La $implemento ltt il1.1str..ci6n fni\s
elliOer\le de 008 vatiaeiOn gentiea q..,e alecta a la salud.
APLICACIONES DE LOS POLIMORFI SMOS DE DNA 387
27 .4.4.1 Diagnstico de errores congnitos del metabolismo
A <iterencia de adul'o&. donde se &uelen utiliuw mve&tril5 de 5<109f u OIJOS tejii:Sos. et1 et di&g1'10SbCO prMatat se
u'l!lzan dos tipOS de tocnicas: no inva:s.Nas. aoe inc*Jyen ultr..soniOO$ y radiogr3fi.a. e ltlvasivas, corno amniooenteSis,
biopsia de "ello&ldades oon6nicas, oon:looent4Sis o biopsias de hig..OO {Pllgs, \ \9120). Si el oonteniOO en DNA de
ra muestra no es suliclente, puede amplilicart;e de intetes per PCR {teMa 15).
a) Valoraciones prefimjnares
Emro 10$ de careaer bttsico o preliminar para 18 monltonz.acin fetcd y el Pffltli!U.I M
1& gonadotrocl na corlnlea chCG), una glicoproteina Plducitla. pOr el embriOn en eS&rr<*:>, que se detecta
como Indicador de embiltuo d%00 tos primc:ros de 1<'1 OOI'Ioepcion, el laetOQe-no pl&eentarlo (hPL) sintetiZado por
la placenta. aue el trr'I'WlO del etnbarazo el'l sar.gre matema. y el estrlol , un e&4erode sintetizado POI'
feto y placenta Hoy dia, 0$10$ el'ltayOS Mn sido por la Jn\'estlgacin oltra&n1ca y cardiotocogrlica P(ll(l
est.abkK:et riesgO$ de matfo,mac;.Ott $e miOe la a fetoprote(na (AFP), slntebzada en saoo melino e h.igaOO fetal.
que debido a so pequeo ta!Tiiii'IO del plasma a ta orina Cetat y. por tan40, at fluido anncico y sangre materna. Un
aumento po1 encwna del C$ indioe de anotr\BIIas oongnlw, especr.almente defe<:I06 del cierre del tUbo
neurat (espina blfllja. anencefatia. ele), Adern&$ Cle C$to$ parmetros, p.eden tantwn metirse, con distintos fines
OiagnOsllOO&, tos nrveles Oc bilirrvbll'la y ooncenlftleibn de k>!lkltipiOos et1 nuldo el pH. oases sangulneos y
conoentracin do el'l sangre letal, e1c..
b} Ensayos genticos
Et en$ayO gen&lloo detectar la pa!Oiogfa buscando, como ya se ha descrito. el aleto n$0Ci(l(k) .,,., $l
$e QOtlooe su gen, o mediante otro poirnorfismo cuyo lows muestre ligamiento con cri IOOV$ P3tol()gieo (StSC(l(I()CdO. Se
aplican 109 metodos ya descritos, ba$OOos en elligamienlo de genes, polimorfismO$ RFLP y VNTR. reaccin de la PCR.
etc. Como ejemplos cabe citar
Medida de un si6o de ICStnccin aneracto pot ta oomo en et pollmorllsmo AFLP con Mst 11 en la aoemlil
382).
EndeO de 0190$ Sir'l.tetioos oorno sondas. para la secuencia alterada. cuando el trastorno genboo se debe a un
ca.mbio ul'l l'ludetiCk> especltlco. Un ejemplo es la defiCiencia en tJ.-antitrip&lf'la. <:Ne oonduce: a molyor
probabilictad de desarrollar enfisema pl.llmonar, debido a tn canDo en una 50ia base (pilg 376) Un
Soutnem con una sond;a $1n1bc;.J 1>9nnit9 dctorminar $i el ONA contiene la secuencia norm:tl o la Mutada.
Ensayos por PCR. Puesto que esta lcniea petmite amptlftcar la secuenaa de ONA pocencialmente defeetuosa,
emp1Mr$e el dlagn6stlco prenatal de enfermedades donde se encuentra en westin eJ sWo e11.acto de
MVI<"Jc;.Otl
e) Incidencia de las enfermedades congtMftas
Se han descrito cerca de 4 000 fenotipos n\OI'lognieoe, <te lOS cuales 1& mitact <Xll'$litttyen uastotr'IOS genuoos En
centenares de estas IMtO tas oomune$ OOtnO las mas tarll!$ se M teco1'10Cido el ctetecto bloqul miCo
W&ico y, en 1'\a aislado y c:IOt\ado el gM tesponsabte. Esto quiere Cleeir que eJ$te hOy inlormac::iOn de
algunos o v.'lrios de los: tres antes cteserltos, para unoe 500 ttas:tornos con heter'ICi& mer'KJeliana Su lncldencra a
mvn<:lial uoo de caoa 500-800 nlr.os.
E-s precisamente esta elevada ncidencia de errores del metaboli$li'IO b QI.Mt 1\<t motrvado la <'P<aricin
de: pcograma$ de cri bado ( $crceninpt en IOdOS lOS paises En Espar'\a se realiUII'I ya en tO<JaS
1as comuniOS<SeS Autno:nas.. Su et;e!J\Io es diagnostiCar lo ms precozmente posible la altetacln melabllca, antes de
que se manifieste en Aesones irreverSibles. Esta detecon inioar on tratilmieolo precoz y ms efiCaz, lrt'lando
de fa\toreoet el desatrOIIo de una vida nonnal. lncloso en casos. po1 ejemplo la fibrosis qui:sbca, en que la enfermedad
no se puede evi\ar, no slo se puede oonooef precozmente sino que se pueden ))f9Y9'W las wfec;ciooe$ o tratnr l<a
panae<'ltica
27.4.5 Biochips o chips de ONA
El de ta caus.a e las el'lfenne<l.ades geniJCas en familias se ha aoel&rado gracias al anlis;s de
marcadores genticos. En el Mvro se podr Cli$CX)ner de mnr(;;)(IC)(e$ n'I<\S li3ble$ y $01l$1iCi)(IO$ dagnosticar
qoozmen4o ta a!terac:l6n motcC\Itar, <' rwet cetvtar. anteS de que cteje de 1\JneiOoot ef orgai'IO. Et di(lgnOstico
hacia et O!II'IOCimiento de catalogo de variaciones genetlcas mectlante una apllcaciOn tecnifie&Oa, ll\lto de estoS y
otro& avances en oor;uncin con la bX:wlform;}!Jc<t Se trida de un POrR gentJco que nos permta identificar las
enfermedado& a tns Que poc:temo5 .S.I<H pre4$pVCS;tos (por ejtet'npiO, bJ<Ir m;lligllQ, P0)1otogia C(IR.Iiov<eul<lr, 1\CI)O)tib$,
neurocse.gerwatNa), oesoe el punto de vls&a de las mutaciones. En de!lnitiva, va a sui)OfW un 913n 1)3!10
hacia 1& medieil'la predi etlva, Qve permllil'll lOmar medidas terap+UIIcas pJeooces peta el!nwtar el riesgo de
enfermedad.
\.0$ llt'ITitldO$ Wochips , gcnrxhips o g9nosC!:nscm:s, fruto de 13 fusin de lt\ biotogla. moteeul..,r <;On la
automatizacin y la inklfm'lica, estn destinados a reV'OllcioncM el diagn$tico molecular del rutlKO. al discriminar de
una manera sencilla. rpida y at.rtoma(lzada la presencia de la enf9f'ITIOdad.
388
ANLISIS DE GENES. OETECCtON Y APLICACIONES DE LOS POLIMORFI SMOS
a11la poskia del. biodlip
uni.,..n
difctmlr

.:on t.ll'mt>i'IJ;).
\'k UNA ..


!:161(1 ....... nutlft':lnte
(hibtiobeJAn ptUI ... IOIJ
oom.1pondknu: 111 olq.'V
ok lll mueum
Se IT818 de placas de silicio. vtdrb u otro material, de unos cent1mettos de talT\811\o. a cuya superficie se han
adherido segr\ ur.a oroei\8Cia, eooociea, llien <versas rnolo.Jias de eDNA o bien oligonutloticiOs de
MCIJtnciOI$ iget"<'"'*"O et;pe<:ifiC..$ vn gen O un3 rogitl de ONA de inlor&. La tecnologia
ernpleaoda permlle unir en cada biocl'lip entre cien!O$ y deoeol$ de mile& do mol6o.ltas diferente$, por lo que &e puede
haoet un de ensayos 11'11.1)' elevado de b'ma slmu!tn&a a partir de t.l"il muestra mLIY pequetla (pe!( ejemplo. una
gota de sangte o Met'IOS de un mictogramo de mRNA total pur1flcado de oo llpo Of!'IIAaf eontte40). E.seneiaiMMte, se
de un de hillftcfaclon (tema 13), M el que el papel de sonda 10 desen'IC)el'lan las MOlculas t.WllcSaS al biOehip
y et1 este caso se matea el ONA o RHA de la muestta. La mueslta. desl'l&turaiiZada, se vierte sobre el biOCIIIp para que
hibride c;on 1<'1$ de este. ' e lava y se <IMecta en qu posiciones aparece el mart<'lje.
Una \'el Sl4M!fado el afn por el esllJdio e.Kcllsivo de la secuencia del genome htii'Tiano y atmitido que sta no es
la pMelpai c:uestin, &e ha encrado ya en la necesidad de aplieat lo& I'IUeYOS conocinVentos a la klentlflcacln de los
genes conteNdos en dicha seruenc.a y sus alteraciones, es decir. las muUICiones y su detecci6n con fines diagnstico&.
Posteriormente, !\abril de daf$e a 13 funcin de 10$ lo ave algunos ll;)m{'ln dal1e sentido 31
analizando la e.xpresiOn de lO$ mRNAs QI.M:t Vn3 Clttu13 un momet'l.c.> d*'O ("lr3nseril)tom3), En es.1os dos
<'trC3$ y e:xpresion geniea) se base el progreso del diagnsaleo del ttJiuro, y es ptecisamente en ambOS
c:ampos donde adquiere inters ta aplicaCin de 10$ biOehips.. inlc:iatmei\le desafi'OIIacJOS para idenliflc:ar s&euenc:ias de
ONA. So conMtgUidO ya bioc:hips de tamai\o muy c:>equel'io (la,......s de vidriO del tarn.ailo <Se una ul'ia),
donde se deposita una fina de 10$ cONA& obtenidos a dlt los mRNA.s de un tipo de c61ula,
aderuadamente. Uoit Yet a..Oiea l<t mueSir<' ton ol mRHA J)n)Oiem&. se ObSeiV& (:()ti <H: 10$ CONA$ del bioehip
hibrida. Con es!OS biOdlips se pretenoe identifiCar milels de mRNAs humanos reMCIOOados con enferme<laoes.
Tema 28
Enfermedades moleculares:
enfermedades monognicas
28. t Conocepto y ...................................................................... -............... - ...................................... 389
28.2 exogel'l.a.s ................................................................................. -.................... 390
28 .. 3 Enferl'l\edades ge-nticas .................................................................................................... ..................... 390
28.3.1 ExtensiOn y frecuenoa de las enfetn'IOOades genticas .................................................... _,_.,,_,_,_,,, .. 391
28.3.2 Cla&ifiC&Cin de las enfermedades gencicas ...................................... . , . , .............. 391
26.3.2. 1 Tipo de clula que sufre la alteraOOn .............................................. --- .......................... 391
28.3.2.2 PfOducto gnloo defectuoso que da lugar altrastorno .......... ....................................... 392
26.3.2.3 Extensin de la alleracin .................................................. ------ --.... ----------- 392
28.3.2.4 Tipo de cromosoma afectado , , , , , 392
28 3 3 Enformedodes monogi!omeas nucleares ........... ...................................... ...................... 393
28.3.3.1 EJecnpiOs de enfermedades .......................................................................... 393
28.3.3.2 en familias.,,,,, .... ,,,,, .... ,,,,,, . ,,.,_,_,_, .. .. , , , , , , , , , , 393
28.3 3.3 de tos trostornos moi'IQ96ni00$,, 394
a) Etllermedades dOI'nir\&tltes .... ----- .... ----- ................. ------- 395
1)) Eltlermedaes reoeslvas ......... ...................... ... ....................... -- 395
<:) El\lermedades oom!nantes ligadas al cromo$()f'l'la X ......... , .... ,... .. ...... , 396
d) Entermedades recesivas ligadas al cromosoma X ...... ---- .... , 397
> El\termedildeSII\)3dasat cromo$0tl'laY ....................... , 397
28 3.4 Enforll\IOdadcs ..................... ......... ........... ,, ,, . ,_ ........ ,_,_,_,_,_,_ ,_ ............... ... ,_,_,_,_,_, 398
28.4 Enfcrmcdac!H potignicas, mixtu o compJej;as ............................................................ 399
28.1 CONCEPTO Y CLASIFICACIN
se admite hoy <li3 que pr;ktieament.e todas 1M enfermedades lienon un<' molecular Cualquier
f!flfermedaCI, tf'ICiuyenCio las eonoeidas tr&Ciieionatmente, cursa en m.ti)'OI o tnel'll)l mcdit!a ()()1\ en lt'
estru<:rura. propiedades, metabolismo o funcin de las btomoleulas. Enlfe las causas que Inducen la enfermedad se
encuentran agentes flsicos. ambientales o no; agentes biolgicos como wus. bacterias, parsi!O!I, ecc., y lrastotnos
gentlcoe, hormonales. hmunolgtOOS, nutrlclonates, etc. Todos euos se traducen en di$1\Jnck:lf'oes tisulares y oelvlnre$,
lemporales o permanenle&, cambJos en el medio interno. vaBaciones en la fu'lci6n de rganos y S6temas y se tetlejatt.
en !tmo lmuno, en fom1a ele enfermedad. aqullas clebiclas a agentes externos (118umatlsmos por ac.ekJel'ltes.
cat<h-trof91. o-te), obvitamente son COmQ de no 5a OOtWierten una Y$Ziniciada's en
enfermedades mOleCUlares.. Oe ahl que un estudio moderno de la enfermedad requiera la 00f1Si0et"l)Ci6n <10 105 a.spectos
moleculares qua a las observaclone& cllnlcas y &e consideren v88d06, oomplemett&att>s y no
10$ dos bPO$ de claOOcaon d&la enfenneciacl:
l.i'l$ cl i nieas &e btt&M en el dittgnOstioo tt partir <le la observacin mdica (exploracin) OOfl el
apoyO de tos datos <fe lt'b()ra-torio (fn89'lit""'" l>iOI(lgic.')&. istopo$. ratiologa. ele.). Desde el punto de vista
genbOO, se basan f!il un <:rilerio renotipiCO. Ia manifesltlci6fl bajo la forma de slndrome ctinico. Este tipo de estudio
es exclusivo de los proteSjQt'!ales Ci!nleos.
La& clasificaciones molecul ares. o estudio de la enleMledad &ajo un enfoque $C bi*san CKct..tsivamenta
en critenos genot!picos. Dependie.nOO de las causas que attefan &a OOt'ISlituciOn del Qenotl"'l) se distinguen trO$ tipos
oll.6gonas. 9Mticas o miiC.\a& Al no conocerse todava oon preci&tOn la cavsa molecular de mucl\89 en.termedade$,
390 ENFERMEDADES MOLECULARES: ENFERMEDADES MONOGENICAS
es.tas c:la$ilicacione& son imperfGcta$, Este tipo 00 e&ttldio lo Jl'leden rttali:zar hoy dfa diver&O$ pro6esionale&
on et broa lt\ biomedieif\11.
El Of)jetillo Ot la pat ologia molecul ar es el conoe-nieniO Ot l3 d(l$t et ponto de vista
de su 811eraei6tl molecular, para contribUir al diagnostico y la terapia. Empieza a ob9ervetSe a comienzos del siglO XX, al
esttlbleoerse el ltri'IWIO congni tos del meteboh'smo para describir aquellas alteradotles heredllari:.s.
perennes durante tOda la vida del paelenle, que afectan a Mas espectl'kas del metBbol!lmo por ebetse a 1a o
klactlvacln de ennas especificas (entre ocres. albinismo, aleaptonur1a, clstlnuria y galaciOEDetr'lla). El Inicio leal y
slstemleo de la patoiogla molectAat. que tiene rugar en los a'\os 40-SO. &e desarrolla con las tCIIIcas de es.tudlo de 109
cromosomas humanos y su papel en el desarrollo selWal y en las anomatraG cromosmicas relacionadas: en Espatla, la
patdog1a se introduce en la dinica en los aitos 60. El rastreo de determinadas enftii1Tiedade$ en recin
nacidos y la ayuda de nue'Vas tcncas de manipulacin y anisis del DNA, a partir de los 70, transform la gentica
mdica. Al tlnal de bs anos 80 se hablan recopilado ya varios miles de alteraciones genflcas heredkarias tistinw. casi
siempre con amento o disminocin de la actWidad de ooa enzima especifica. Bajo el ttmino se inollf)'e OOy
dia no &lo e.l del genoma. ino t<wnbin ltt ()plic;-aciQn tJc, OK{im(lnc$ p<trtt iOonlific::t'r 1()$
I'$$POI"IS<'bles dlt uM enfcrmed8d. detectar en una poalaeiOI'I las petSOnas con rie$00 y aSi oonltibuit al <M la
enfermedad. De forma anloga. en el futuro la protemk a reafirmar el papel que desen..,etlaron las pt01elnas. en
sotllano. en el riciO de la pMologla molecular.
Clas-ificac.iln mnlecula de humanas
irtt(l:..tcadoncs, infcccioo\$.. debidas a >rioncs. nulricionalcs ...
d tipo de (:luln {


S<l.nucas (camxr)

(en f;CI)Ctal)
{
Mutlld(ltl ... { 1:-..!1 1\."S.il)ncs (:!>ltiJCfUtlll cs del gen
f_nfCTII'll."<b&l>
{
Cnicas En rq!.ionl.'ll n:gulador<J.Sikl <n:
.
1
ahcru(:in de: la
lll.'t.UO ('
IIPQ de Mutac-in
ahcrnc-in
e
,. { NvmCric'" (miJiacione!l
'n,'Ul l(l(I'IUCIIS Cll(l$.enc11Cl'IS
EsllUCtumiC$ (crornosomopati il$)
28.2 ENFERMEDADES EXGENAS
Se denomin;tO Mi 1<'$ poc agentes de lodo tipo. externos al individuo: intoxicaciones por
pnxlue1os qvimico$, drogas o medicamentos, persi!Oe unicelulares o pluricelulares. toxinas agonle$
como b3c::teriaS y viM, ete. Tal'l'lbln se "'uyen las enfem'l9dad% por alteraciones rM:riliv<as (genort'lmemo
carenciales) y las causadas por priones (prolelnas de plegamienlo anmalo C<IP<'CO$ do in<lucir el mismo en ollas
molculas de protel:na notma1 y por ello consido,..d3!S il'l&eoec:i0sas1. Ninguna de ellas se tta1a de forma
especifica en este lllro
28.3 ENFERMEDADES GENETICAS
Son el grupo de enfetmeda<IO$ moiOculares pot excelencia. Para su Inclusin en este grupo, la enfermedad hit do
cumplir ias siguientes cttr;;u;tori$1iCM:
Debe ettar geneamente, es deor. deberse a mulaciones que alteran la HeuOnci3 <> 1a (W'98f'lizacln
del gtmom<'J COCiilleMte .
DebO 3foctar a motecutas en cantidad. estruaura. actWidad o En cspoC13J. $& altetan las protelnas. en
cantidad o en acll\Iad
La alteraclOo bloqufmlca cau&aMe de la nfermed.-d debe w el reSUilMO oe las altdraclones en tas molCIAas,
que afeccan a estrucl\ltil$ o vios metalllieas en las que se encuentran 1"1)1icaoas (en espe<:ial. la$
pf01einas de caracter enzlmtlco).
ENFERMEDADES GENTICAS 391
28.3.1 Extensin y frecuencia de las enf ermedades genticas
en cuanto a la eten$in dt l<t onfetmte.too, debe entre inrvidt.IO!I portlKiorcs de def.eciOS
gen61icos tnuy :lbundante$, pero et1 lOs que oo se hace evldenle la enfermedecl pot la exisJenoa de un alelo sano que
SU(lle la lun(:iO(l del allefSdo, y enfermos o afeaados por el trastorno oeneico E&te itlimo caso correspondo &la$
enrene<:Saoes gentiCas pr()C)Iamenr.e dichas. de gran olob;;llrnenle P<twr diJ l<t b&i<' fr.:;uencin <.le cndn
una. los datos suelen ser ineJCactos. tntre otrO$ moli'l()$ por ert'OieS dl&gn6$1loos y por 18 cofYIC)Ieildad del estudio,
especialmente en las
/\lgunas cifras n:lotivus n las enfc:tmedad:$llentic-<S er
l:sJm pr m 30"'.{. IOO:s;.l:ls humlll'lll$..
S< c:lculln unas 7.000 cl'.:nncd3dcs Cll g.:nkica.
J:n nuo:ho:. do: los 4.500 lod desctiws se coooo:c al menos una forma de
3$0C-iada a uo U'.ulorno clinioo Si,t!.nilicaii\O,
Hay dclh'tOS de aislados en un 68% de lil' cn(cnn .. "(bfk,. mflunes.
Un S% de 1.11:; pi.T.sQn:as de 2.S ao$ pnstnu. Ufl Lra;.tu'l0
Son 111mbiCn 101 cau$ll de muchtLS di.' aduhos.
$1 :;e mc:luy<11 1&:> rasgos C(nll'll.cjos aparicin un de personas
ptcstnla .cnfctrncdadcs oon innucr)l:io en l.in1 m<JfOcnl o de !'11
La frecuencia oon la que aparece ooa enfermedad se expresa mc<lianto dos magnitOOe:s epidomiolgit:<J$:
iACidei'ICia y prevalenaa. La lnckSenda es la fraccin del nmero de casos respecto al nUmero de individuos n&eidos
vivo.; e>vede reSUQ:at dil'lcil de es.tlmar si la enfermedad oo se observa flsicamenle o no se dragnosdca en el momonlO
del nacimiento. La prevalencia, o frecuenCia de casos en una poblacin d4t llldivOJos viVO$, 9$ a(m mt\s dific;il do
estinar, sobre \Oda cuando la poblacin es grande y la enfttm"ledad tata.
28.3.2 Clasificacin de las enfermedades genticas
Se pueden seguu V<IOO$ cnterlo$
28.3.2.1 Tipo de clula que sufre la alteracin
I.<'IS enfermedades que se transmiten de generacin en generacin son de carcter hereditario debdo a que se
origiMn por una al!eradn en las cl ul as germinales (pg. 3.44). La alleracln de las clulas somticas oo es
herettllarla nt afecta a todo &1 organismo. y da lugar a pocas enfermedades Enb'e &Uis debe cilan;e el eilneet
(tema 30), Que se estudiar como ejemplo de enfennedad sombca, a la Y9'l que de carcter IOOfiO o 1001tifaeloriat
la mullle'in en - r..'ba:e -.lu .. a M>ln
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392 ENFERMEDADES MOLECULARES: ENFERMEDADES MONOGfHICAS
28.3.2.2 Producto gnlco defectuoso que da lugar al trastorno
E!ite criterio ha pef'l"Cido estl.dtar mUChas enk!rmeclade!l y estat6eeer la$ clasibcionC$ Clfq)ia& t1e
patolog1a moleoLAat tradiCIOtl81. oon muchas variantes segn f!ltlpo de protelM
la enfermedad &e denomina dis.enmla cuando se altera una enzima. Consbtuye el caso ms !recuente de
e&tudio de una '\Ita metablica allerada. Se molf' IC8n sus caracterfstlcas oinclcas o su tegulaCiOn (sensibllldacs a
inhibiOOores). S. 4i$11W'!vye 13 actiOOad, puede desapateoer el producto de la reoocin catalizada y,
cmo et J)I'Odudo llnat <le 18 via o 1;) que ptr1enece la enzima. y lambin puede
t'I(:UI'nvlt'fle ct suitr3"10 corre$pondiente: o 1,.1n procur$0f
t.o ..,om31i a puode oft:tr 3 1.1n3 prolei llal implic-'a en pro<:e$0$ de trilln$por1e dlt moloulas por el organismo
(cilosol . $<1ngre o medio extnloelll<lr) O a travs de membranas (plasmatica o intracelulafes).
Alt...CICione$ do 1(1 biotintosi5 o 13 degriKiacin de otra& llfQ4Ginas. a de mecani$1'1'10& Ktruc::turale& o
procesos rnetabOioos tates COMO W"OnteripciOn. proeesamietlto tr;)(Su(:Qn,
mo<llflcean POSII8duoconal. agrupedn oe &41bunidades, ltlico, fotmaciOn de complejos mu!bPfOtetoos, etc.
Alteracin de proteinas ntructurales. po1 ejemplo, CQIT1X)08flte& de las membranas.
AllontCiortot pr()1oiml$ en J)fO(leSOS de transmisin y transducc:in de sealtts {hormonas,
factores de crodmionlo. y de mombr<'lnJ o etc.),
en la hOn'leostasi s o en la defensa (Inmunidad).
28.3.2.3 Extensin de la alteracin
Aunque el tamao de la alteracin no condooe a una dasfllcaci6n estricta, este criterio. ya utilizado para clesc:d:li'
las (pg. 344). es una simplffic:acibn a efect06 pedaggiCO$, Se disti'9*1 treos ca1egorlas de
iJIIt<trttCJOnot gcn6tic3S, y denuo de una se I)Oedel'l otros tactof'es. COmQ origen de la
eonsecueneias fu(I('M)t'l81es. patognico. productO gnleo anetadO y re.giOt'l g&niea atectada
La alleraein puntual, debfda 8 la mutacin de un SOlo nucle6tido. da lugar 8 las enfermedades monognleas,
<J.te &e de9criben a eontn.raci6n.
Una altef'ad n mediana tiene lugar normalmenle en &eO.JenCias repetidas. pero no &e disovtlrn por ser poeo
conocidas.
la$ altetac:Jones a gran es.ea.la, erom0$mlc:u o a c;:rQITIQ$Om:ts c:ompllm!s o a grandes
fragment06 cromo$6micoo, Su M M estimadO en un 0,65%.. se Cl iS.ingue enlre MOI'I'\llli.&.s os
decir, en el n(.mero de c;:rotn0$01Tli:1S existentes en 11!1 e6tul:t, debicMs a segreg&ein eromosomiea errOIW!.a (m.Jt3Cin
genmAca). '/ anomal .es estrucll.lrales o eromosomopatlas, debidas a reordenamienios c:rorrmmioos. Se
c10$Ctibir6:n on ler'n3 29.
28.3. 2.4 Tipo de cromosoma afectado
Las enletmecJaoes moleo.Aates puecten afectar al genoma nuclear. caso ms frecuente por su mayor tamai'IO, o
al genoma mhoeondtlal. Dentro de las nuc$eare$, el defecto gentico puede estcw klc:alizado en lo$ c:romosomn
uuaiGs (1 par) o en 105 cromosom.as autosmicos (22 p.;tres). Esta dislindbn, con et dominante
o rooesivo con el Que se expres. 13 ef\lermedad, es la elasltlcadn ms sencilla, la ms conwnenle empleada en
gef\flca. y se ll!lll.tatpara desc&lr la ttarumisn pot herencia de las enfennedade:s monogNcas (pg. 394).
MuUM:in en ui)Odt 106
rl'II(J50f1111S
t:nf('f'MJi dC$
M ulllcn en un crumoi:lflmll
S0.":\"1101.1:
11 Jt-Xo
ENFERMEDADES GENTICAS
393
28.3.3 Enfermedades monognicas nucleares
Se pueo:!oetl considerar OOrt'lO modelO de gel'llle:es. al ser que se 1\811 e$1udiedo y oon
mayor rigor a escala molecular. Se deben a una mutacin pun1ual que afecta a un unico gen. un alelo
t.a discusl6o se cenuara en las aneracbles tocakzadas en el genoma nudeat. dejarulo el C890 de las
rnllocondf'lales pata un apaftado especifico. St el e10 anormal aparece en los dos cromosomas homlogos.. el lndrYidiJO
es OOmoQ96tico pata dicho gen: apaceoe 6b en uno. con et alelo normal en el otro. el mwldoo es heteroOgtico.
28.3.3.1 Ejemplos de enfermedades monognicas
las alleraoonos. monogn.c;)tl gcnert'ln muct\S enf<:tniO<IildeS. A tituro wWmutM> eiWf'5&
a!bil'llsmo, (o dtepaoOCAemia). da!lonlsmo (eegueta para algunos defcieooas
ef\Zlmllcas de adenoslna*saminasa u,-anblnpslna (pg. 376). glucosa-6-fosfa1o-deshidrogenasa,
galactosa-1-foslato unoutranst'et&$8 (o \JTP-hexosa-Hoslalo-uridlll!transferasa. causante de la galaaoseOII<I, pg. 373)
y fenilalanina-4moooxf96nasa (o fenilhidtoltilasa, rHPOO$able de lct rllltltnicliJ, l51101iil
muswlar de Oucttenne oorea de Hurotington. enfeiTI'IGdades do Chau;ot-Mari&-Tooth de Toy-Sactts. de von Gicfil(l y do
Wll$01\, muc;oW$Qd(:l$is (o fibrosi. qui!Jtial, pflg 351), hcmorllkts, ramilia1. nwotlbron'I&IOS!S
tipo 1 352 y 395). OSIOOgnesis .nperleela, (pg stndromes M Hunrer y Hurler
(muoopoliS\'Ietuid0$1$ 11 y 1), $indrome del X lrgl. tumot de \VIIm, ete. La dormaclOn actualiZada y ms completa sobre
mcndliano11 humanos (ftsiOtOglCO!I y se enOJentra en el catalogo de Mc:KuslCk lMenc:lettan
lnherltance 11'1 Man), pucleado cada 2 aros, y se cenlrallza en la base de da!Os en Interne' OMIM (Onlloo Mendelian
ll'lheritance 11"1 Mt\1'1); en amtlOS se le a519na a cada 9M un nl.lmero de 6
28.3.3.2 Transmisin en familias
Pueslo que los trastornos mon.-1100$ del genotipo 4lf\ un solo loOJs. SO$ de hefenaa familia1
son mvy so potfOnlil$ st tt lo e$cn.o P<lf ltt 1' ley do Montlof l"Y de 13
$eg!'egaf::i0f1 los par de CtOmOSomas del gttnie!O<:ito pnmariO (2n. AC) se sepan.,n o
en la rne!I0$1!1 1 (pg. 104), de forma que cada cromosoma hOmologo aparece en un ga(rleto secundat!O (n. 2C). En la
met0$1!1 u se separan al azar las dos cromtldas pera formar los gametos (n. CJ. Globalmente na ocun1do una
dl!utlbuclon Independiente. aleatoria (pg. 10S), de bs cromosomas pateroos y male.mos y de sus cromatldas. oon 10
que cualquie-r Wld'f'lduo hereda ele C8a progeni10r (y transrn:te llego a cada descefldlenle) un cromosoma de .cada par
autos6mico y un cromosoma &exuaf Por tamo, IOio s;e tr.-n&mte uno d& los dos alelos Oel gen presente en ceda looos
Para e&tablecer pa1rones de he,erecia de uastom010 se aoue a: la facilitada POf los
fam6tlres del qvo se resumen en br1t1rt de irbol En th.!c so en'llllean una
nomcnd.'ll1tna y s.tmb<llo-. partiaA; .. ;
394 ENFERMEDA..DES MOt.ECULARES: ENFERMEDADES MOHOGNICAS
28.3.3.3 Clasiflcacin de los trastornos monognlcos
Como se ha c:omefl\aOO (pg 392), es oomVn las enfennedades monognicas de awerdo con el tipo de
n!oct.;Jdo (sexual o y el t 3r*' dominttnW o rocosNo (P\ig. 95) do ; u expresin. Si el kx;us
P<l'OI09ico esl<'t en un Ct0r'n0$0mtl sexual , se llabltl de enfOi"mcdad ligada al sexo; en e.MO oontr<"triO. o.
enfermedad aulosmica .
LOII ;)UIO$(lmie0$ y lOs ligados al cromosoma X se puedet'l manlest3r de f(lml<t d<>n*\anee o receSiva,
mlenlros QUit bs ttl (:R)r'nQS(Ima Y no tienen esa posibllkJad. pues s6b existe un ateto et1 cada individuo,
Q1.11e: hll de w $1 11'1dMO. Sir\ interaoeiOn oon un I'IOmlogo.
RC:o.'Ortll.ll('f"K'' <.k chminanda dt' (\ase p:\. 9$):
Vn aldo t!l d .. cnlllll lll(' (lUOIS cuando su prc:!lmcill se c:n el fc:OOtiJH).
wdcpt:udienlc-c"colc de cuil s-.'3 c:l cero aklo.l (uno potc:roo y el ouo mntc:mo), El f<11olipo <3 iB'caJ pnru los
udi wduoo hootOOigti\'\'l!i del donunan1c- idmK-015 <'" mbos bomiOfCS) que: p.1rn b bc:lc:rucircicos
pckl<,o!! difer>."'''lb en C:ida ucltl}. En a.ccula. ptJd. l11 IUntklnaHo.lad dd otroaklo, d rrtnh'O.
f'lo!lllkiootl ;on l'OdQmin ... fC'lii O :w:midominallfH) cuandO el ho,'ti'f'OCCg_61Jt0 rl:fkjala PfC'-Setll:'ll de
amOOel. s.ii:Ddo inu:nno:di.o c:ntrc los dos fc:ooci poe; Oiocho de oii'U ml)do.. tiC ckt .. "CC:c la expn:i t('"
cada alckl en pn.-scnda dd 01ro.
a In de las t'nfc-rmt'dndn gl-ni:lc(<.l!>
Se d.ce tIJ( una tofetult d:ad tf tkm'licuuut o 11t1 pauOO de htrt'cldfl domhulll l c Ctllfldo c:loklo
p.lt.;lgi.:o:o <!' dumcn:inte .Mtbre d nOrr..aL La cnkrncd:.d {fcOUC1pU se lt'lllllificsaa igual \'ti
que en hdtroctgctoit; 00..'112 un alelo pttulgu:(l p:il'a que !OC pr;lC'III(' 111 Cl'lfl'fl"tlo:dad. C-()(1)()
ejemplo de cnferm .. 'Ciad nut%C)mica igualmente 8J".l'''-' t:n el hiJtcnueig.(llc< }'el
bctl't<M: ';!!alico. pucdoc- cuarsc 13 OOI'<'.t de l-luntiopoo.
LM t"nl(:rc"co.illd<:s de ('llri;."c:r scmi-domillantc: o cOO.Ominalltc tlC' rn;Jntfiest:m formn mi$ lc\<c en lc:d
lltl"tcroetg(tLkus que e11 los hocnocigtiooos.
l.a C"nfennedadeJ o COII 1..-l'ellcla rccnha CS1ll por un lelo f(\'flte al nonnnl,
Slo lll' rnamlk'llt.a b cnfcmt.-dlld cuandolo8 dos alckl61000 atlormnks.. es dlxir. co bomoti.g(ltOS,
1- n."Cut:ncia de las ncmogni-cas
La indd.:cK'ia es de 1 caso por cada 100 nacimientos vi\'OS
El 70% $00 domiBanlc:s. d 2.5% recuivu, ().4% al cron<,.MI.tl X )' !tlU)' CSoellllit.S las ligadas al Y
A oontinuacin &e lo$ 5 tipos pOSibleS de en.termedad monognlca, de acuerdo oon su patrn de
transmisin hefOOit.aricl Se ilvl>tnrn 6tbOieS genealglco6. en los cuales se han utilizado los siguientes crilerios
Wjo un ptameamiento ped8g6giee:
Se con&idetan 3 (l, n y IH) y $610 esos parejas (en les generaciones 1 y 11: el 5 rbol es tna
excepcin obligada!) Ello supone, Obviamente, una IIJiacln et1 cuanto a posibilidades de emparejamiento y
aparicin de indiViduos sanos o enlennos, homoci(Odcoe o heterodgticos. varones o mujer$$.
Enlendem06 que la exhaus!WiOad de p(esentttcln de posibiidades de transnWsin, al igual que el uso de datOS
reales. v<a on dctli'nento de lB Clatidad concepbJal que se per&lgu$.
La geM1'8CiOn 1 est fonnaa por una wyo$ dO$ l.'IICios (siempre teterido1 t1 un UtliOo toeus gnleo) se
muestran et1 COlor azul para la prifrl(ll(<a PEir&an<' y n rojO para la segunda. La asignacin de aletos a ceda pet"88M
varia en los 5 rtloles. pom a 10 que se quiete ilusttat en cada caso.
La gGtlOr.lc:Ifl 11 ost.6 klrm&ea por 4 descendlentos. aqullos resuttant95 de la de bs 4 alelas
prQ90nilorcs. oe 10$ 4 nljOS. 2 son varones y 2 mujefes.
La gener<I'Ci6n m eslil Jormadll por lOs 4 deseendien(es de "' de tllelos de lB pare;a
fofmooa por ui'IO de lOs indlvkl.los de la genetacin ll y
Para fflelllar el seguimiento de la herencia, el genotl>o de eacla indlriduo se expresa 00t1 los siguientes rotores y
letras:
Alelos del prmer rt'DE!d'lbro de &a 1)3r.,_ 1
Aletos det segundo m.embro de le 1
AleiOs del nuevo mtembro de la n (OIOICn(IJ la l.atnilla
!nidal)
LC!n'l N (O n) J)8ta el alelO normal y P (o p) para el pato!09ico.
Leila A para alel06 presetllett en .. \1106(lft'l<t$
Leb'as X e V para alelo& en cromosomM
Leila may$CI.lla (superindice) J)at1181e10S dominantes.
leiJa minsQAclt alelO$ reeeslvos.
DO
DO
o
DO
ENFERMEDADES GENTICAS 395
a) Enfermedades autosmicas dominantes
El gen k>cn!ia:ado en uno de los posee un alelo pa!Oigieo (P) que dominante el
normnl {n}
1
11
111
t.os dos SC)tl)$ portMIOS 3leiOS normal (n) y patologieo (P) del gen.
La se ttal'lsmite por igual a varones y a
AulOSfnl(a
dominante
La se manifiesta en homoclgolos (PP, 1113) y hetetocigo4os (Pn = nP).
Todor. 10$ Wldrvldoos no afeaados son homocigtioos (no).
Cada indiViduo afectado tiene un progenitot afectado.
Los hijo& (U1 a 11-4) de pateja mixta enlle afectado hateroo:;iglico y no at'eclado
lienen un 50% de probabirdold 00 el taSS)Q O lo que os iguill. I.Mt individuo
afect9do hatenx;iglico (11.4) ticf'llt un 50% do prob<Jbilid0d de tr<'ln$111ilir el rttsgo
pMoiOgiCO a COda
Pof &ef dominanle
E"o& trastornos con$1itvyen OOrc<IJ del 45% da .,_fcrmod<t<ics monogniCCJ$, Aunque .,._,c;:hos 10n poco
COITU!e$ indiY1doa!men\e, son \an numero$0$ que su incidencia en oonpJnto es apreciable, y en ocaSIOf'les
espoCiillrnenlc _.,3 en Mefls googntllc&s
Ejemplos de auto.Omicas domi nantes
oofelmed&CJ protefna sfectsda IOCuS del W
tf!p!!p?le&terolemia familiar de tipo llA Receptor de li!)!?!l!O!einas LOL 19p 13. 2
Corea de Huntlngton ' Huntirgt!na 4p16 3
Net.wollbroma!OSI9 de !!po 1 Neurotibtomlna t7g11. 2 pi!9 352
SirdOr'no do 15q21 1
b) Enfermedades aurosmicas recesivas
En caso el 9et1 teS()Or'IS&Ille. loca!iUI<IO en uno oe 11>$ 3'VI0$0m9s, flO$Oit ..., alelo patolgioo (p) quo es
receslvo con respeao al nonnal (N).
1
11
111
'
Auosmica
tCICCSiva
396
ENFERMEDADES MOLECULARES: ENFERMEDADES MONOGNICAS
1.0$ oos u.xos poi'Uin IQS aletos normal (N) y paiOIOglor:> (P) del gen.
La se ltan9tl'lite por Igual a varones y a mujeres.
Por autos6mic;a
La enfetmedad se manifJesl.a slo en homoclgoiOS (pp, JJJ-3}. Hay lndllftduoe no
afectados hOmoagdcos (NN) y hetetoagticos (Np = pN}. Estos C.ttimos son
portadores. se dlc:e qUI'!' et'len ef rasgo. no la f!f'lle.rmedad ..
Los padrG$ de pet'$01\M $0n gonor<*nontc fletorcx;igliOO$, portadoros
it&intomiliOO$, normales.
Por set dominante
Cada ti'ICiiviOuo areetado tier.e dos proget'IIOres aledados o J)Ofl8c)Ofes. Cada
portador tiel\! at tnei'IO!I Uf'! pottsdOt o afededo.
Ltt falciforme es un tlpioo oe traSkl'r'll:) autos6rnioo reet:Sffl>, que fue 8detr'IM la primeta prueM
$1CPOrimentat do \lf'ltl enfermec:la'u1 causada por mutacin {en 109 81\os 50). El slndrome dinleo es consecuei'M::Ia de la
alleracin de un tluCieOtldo en el gen de 18 fl-gtoblna (pg_ 350). oondl.lclenOO a una pt04elna j.l
5
Los hOmocigotos para
el gen fl
5
man!l'iesl.an ef ttastomo (a.nemla faJclforme). mientras que los hetefoclgo4os !t'tl' se dice que mueslran el
rasgo producen taMo hemoglobina normal (A) como anmala (S). una parte de sus etitrockos son
falcormes y padecen una anemia ie\oe. Por &anlo. la dominancia e:s incompleta. EJ diagnstico es meciante
RFl.P (pg. 332).
Ottas enfermedades autosOmleas reeeslvas
eflfennedad
o.tiaenci3 dO ADA
(XO!olna altada locu del goo
En1bema hete<Matio
Mooovfscidos.s
(tibro$is guistiea)
Adenosina.clesamhasa 20q13.11
et,Antiripslna t4g32. 1
R..,.dorde la oonduet<'!ncio 7q31.2
transmemb'ar'la (CFTR)
Subunicled et de ia isoenzima A de
Enlf!ffl'leCaC3 de Tay-Saehs la 1}-N-acetlh&xosaminldasa
15q23-q24
Fenileetonutia Feniaf.anlna-4-monoxigenasa t2s24 1
etTalasemia a.-GIObina tpte!=ptl.3
(!: Taf.<Jsomic f!:Gioblna 11pt5.5
En conjunto. 8$ie tipo de traMomQ$ del25% de las enlennedades monognk:as.
e) Enfetrtl6d:HJfJs dominantes ligadas sf cromosoma X
Las Mujeres pueden set o heterocigticaos para IKI gen que 9$IG en un kx:us del
cromo60ma X, pues tienen dos ropias Oo eJ!.tt &elt\lal. No ocurre asl en los vatQf'IE!S, que, al poseer un
solo X. no pueden ser homocigtil:lo$ ,.. Mterocigtieos eso get'l o rasgo: se diCe que el vatOO es hemleJgtleo.
SI el alelo patolgico (P) es dominante sobre ol l'l()n'l\\ll (n), fa$ padeeern la entermedad tanto cuando
PO$e01n vno como los dos :.lelO$ P, mienlfas que 106 V8II'Of'les la padecetn 81 u Onlco 8ielo es P.
1
11
III
lnUJ(f SAl
.:.....,.--(lXBX"
2
ligada a X
domi nante
'
Los dos sexos portan m alc:tiO$ norm.,l (n} y patoiOgiCO (P) del gen.. pero ies mo..fetes portan 2
copi;)$ y 11)5 varof'le!l solO una.
U. entehf!dad se 1ransmlte a varones y mujeres. pero afecta ron frecuenCia a esaas.
Las mujeres afec&adas { U4) transmiten la enfmo<<a4 I)(M' igual a flijos e flijas (11M
con una probabilidad del 50% s-son tMH&rocigOtk:as (Pn) y del 100'it si fueran homoclQ6ticas
(PP).. POf .t co*fiO. tos vai"CW!S afectados (11) slO la transi'Men a sus hias ( H3 y 11-4),
u. enfenned&d se manll'ieeta en mujeres hOmodgdcas (PP) y he:lorociglic<t$ (Pn), y en
varones hemleigelco6 (P ). Los rldivickKI& no afec:Udos $Ofl mujeros hQmOCigOticas (M)
y varones hemicigtico$ (n-),
Cada lndlwctuo afectado tiene un progenitor afectado.
Por a ligada al X
Por ser doi'!Wlante
ENFERMEDADES GENnCAS
397
Para la presenaa de do$ copias del Qen on las n-u,.JjorO$ ("doble tol'l'l()letneni01, $ut o61u!as slo
el(pl'esan bs a1e1os de un cromosoma X (el ob'o est inactivaclo COITIO cromali'la fa<:IJialiva, pg. 87), En consecuencia.
las mujeres h!MerocigtJcas 1l08den 0$1ar o no akloct;ltd;cl$, dcpendienOo de Que se e1 alelo patOIOgioo o el
normal: generalrnen1e. ma maniffitacin en difet"ente en un{ts o61u!as y otras. p.es la seleCcin de c:ul de los
cromosomas X resull.a inactivado 1iene lugar duftlnl$ uM oml)riontllit' pero mul!loeuat y es ef'l
cacSa Y1oil do SU$ un3 ve:t e$1tti:II&Cida la IMclivaCitl. lodas las OOIIAa9 descendientes posleriotes manuenen la
&eleccin
d) Enfermedades recesivas ligadas al cromosoma X
AJ Mr on "le domirwlte el *lo normal (N) sobre el palologieo (p), las Mujeres l)aoCieeen fa enlene<JaCI slo
CU(IInck> SOf\ hOm()CligOtlcas, y por taniO oon frecuencia muy baja. Los varones la padecetn de forma simiar al caso
amer10f, cuando posean el ale6o paiOiogiCO.
1
u
ID
Ligada a X
reccsi va
LO$ dos sexm portan lOs 8ltllc>$ norm('ll {N) y potolgico (p) del gen, !)erO 1:1$ 1)()1'1<10
dO$ OO()r<l,5 y los vtHones Slo una.
l.<t enlermed<W:t se lf'M,mite a varor.es y m.Jjeres. petO afecta oon mayot lteeuMC:ia a aqullos. Por ser hgada
81
x
Las nwjoles portadoras (12) traMmiter\ la el'lfetmeOacJ por igual a r,.os e y 5).
oon ul'l3 probabiliOad del SO%. Las mujetes Mfermas (pp) t.an'bitl. pero oon ul'l tOO%.
Por el coottatlo, los varones enfermos ( 112) slo &a 1ransm1ten a sus hijas (1113 y
La eruermedad se manifiesta en mujeres hOmoolgOtlc&s (pp) y varones hemlc::igOCieoe (P).
Los Individuos no afectados son mujerM homocigbcas (NN) o hetstOCiglOCic:as (Np) y
varones hemcigtioos CN ), Por ser don'Wlante
Los vatOI'Ies afeelados llenen ptogenllores sanos: &a madre es generalmente portadota
asiMomuca.
Corno eempk> caracterlslloo. la hemofili a A se debe a un defeelo en el factor VIII oe la ooagulaCIOn. El gel'l de
esta pro1efoa est srluado en el cromosoma X (banda Xq28). por 10 que la transmlsiOn sigue et palt6n llgaOo al sexo. Se
han k!entlfleado varias alteraciOnes dls.linlas del gen Que causan la enfermedad. Sus alelas se exptesoo oe forma
reoeslva oon respeelo al alelo normal del factor VIII, por lo Que tas mujeres sufren hemofilia con muCha mel'lor
frecuencsa que lO$ varones (se suele decn que ta hemo A slo la padecen los varones y no las mureres. pero es10 no
0$ c;omo s. a L<J frco:;uoncia 00 lelos ptofgioos en PObi<llcin es O. alrededor de uno
por eeda 10.000 alelO& nonnale:s. por b Incidencia en varones (hemlcg6tleoe pwa el gen) es oo 1110.000. LaS
mujetes 6fo padecen la entermedad cuando son homoclg6!1eas pera alelo$ patolgicos, por lo que la nodel'leia seria
de 1110': con t.l'\a poblaCIn mundial de 6.000 millones. esto equivale a 30 casos viVO& de muJeres aiecl8das en IOdo el
mundo, frente a 300.000 varones: da ahl se asl.ITia que las mu;etes no padecen sa enfennedad. En cualquier easo.
$1 o; rolovnte fn:lcvoncia 00 mujcwe$ hoteroo96Cicas para a198f! del faC*>r VIII. que tran&mibl' la
enf.,.,.,<Kiad a sus hijo& vttrOfloe$ (1110,000), Slo la OOsoendenc:il de una mojar portadora (X x') con un varn
l'lernofllieo (X"v} pue<;te dar lugar a mujeres enfermas (xf'x
11
).
Otros ejemplos de enlermedaoes reeeSivas al cromosoma X son la Jisttolia Museutat ele DucllMI'IC
(Xp21.2) y eJ daltonismo (Xq28).
e) Enfermedades ligadas al cfomosoma Y
Se expone es.le caso por razones pedagogleas. a pesar <le que no se COI'Iooe l'lii'IQUI\& Mfermed3d lir:fadll <'1 Y L<'l
primef"a razn es el pequef\o tamao del cromo&ama Y (en realidad. aUn menor, pues parte del'( ttene regln l'lom61oga
on e' X y El$0$ loci &e compoft<W'I COt'I'IO lO$ autosmioos): por ello. $$ conocen 8$C:8&0S ejemplOs de earactetes
asociaoos a Y. y f'lirlgui'IO es p,at<:IIOgioo. la segond& mtn 0$ que qoo una debe haber un gen
cuya funca6n sea lmportanle y. lenlec'ldo en cuen1a que &as Mujeres de 1a1es IOCUSiigaclc>s Y, no pOO/itln
desarrollar esa funcin.
ENFERMEDADES POUGENICAS, MULTIFACTORIALES, MI XTAS O COMPLEJAS
399
Entre las enfermedades asociadas a mutaciones del ONA mitooonthal &e pueden citar taos sigl.llef'lote&:
Neuropatla ptica tletedltarla de leber (NOHL). Fue la prlmeta enfermedad donde se demostr la tleteneia por yla
matorl\8 de un delee&o el'l el gei'IOf'l'la MiOeondrial.
Ol'lalmoplejla extema prO'!)I'eshra crnica (CPEO}.
Slndrome de Keams-Sa)'l'e (KSS). una oltall'fiOPiejla ellterna oon complicaciones varla9.
Epilepsia mioclnica con fibras rojas de aspecto raido {IIERRF).
mitocondrial oon y episOOio$ simil;nC$ a <'I>OP'eti<t (l.El.AS)
Adiciono*nonte 0$ PfOb{tble '- imolie$Cin f'nl.llociones mitooondriale$ somMe-.3$ o <'ldquiridl'$ como uno de k>$
f.aclores que al proceso de y a Mtermedades neurOCI&generalivas, incluyendo la
entenneoacl' de AIZhelrner.
28.4 ENFERMEDADES POLIGNICAS, MULTIFACTORIALES, MIXTAS
O COMPLEJAS
Muetlas enfem'IE!dades genlicas no estn causeoas trieamente por el deieceo de un ge.n, oanao lugar a I..Wl grupo
de traston'IOS oonocidos bajo nombr&S di!erentes, de difiCil delinwaein o caracteraados de fonna .ncompleta. A
dlfE!C'encla de las enfermedades monognlcas, la dlnica es un retlejo del efecto combinado o interaocin
acumulativa de alteraCIOnes productdas por factores genticos (mlliples mutaciOAe$, a veoes en un
nmero de genes} y ambientales o exge.nos (de todo tipo: nutnc10na1. agentes txiC06, eslts, etc.). En
cualquier caso. la complejidad d9J origen explica el conjunto de efe& diven;os produadOG y los disdiTlOG nombres
recibidos, Estas on!crme<lades mo!tiact<lnales no doben oonfunditt;e ooo lot; trastornos croi'T10$6mi()C)$
genticas., gran escala. tcm& 29), en ambas IJIVI8d<l tMcr lugar una anoracin oomptoj3 del oenoma.
AJ no $Or lr.'I$10ri'IO$ de \1'1 gen Unic:o, la de estM afterOOone$ no $iguc la goteti(;3. CiMie3 mendeliann A
pesar de ello. $i obsetva una mayor estas enterrnedtlde$ dentro <!'e un:t fatl'lilia que entre il'ldiwluos
no tmparentados P(lr<'l que., $indrome M ITMStniW 3 otro mictmC:lto de 1(1 millfl'l3 f.amli;t os ne.ce""no qve, 119 r.Of\1 un<'
COI'I'Ibineci61'1 de cal"''li06 gnlcos.
Entre estas enfennec:tades pueden Cllarse vanas maliormaclones cong,._as, como el labio leporino, las
oongfllas y los defectos dell\ltlo neural {anenoefalia. espina blflda y olras). y ciertas enfermedades de la
edt'ld OOt.lln, como (llgunos enoer y las de ta.s arterins ooron;uin$, se 1\8 ob$Crvndo un3
preolsposiCIOn gentiCa. Oe todas ellas slo se conwerat et car.cer, 1a mas esrucuaaa oesoe e1 punto oe vista
molecUlar adems de por su trascendencia clfnlca (tema 30).
Tema 29
Enfermedades cromosmicas
o citogenticas
29.1 lntroducc-.in ............................................................................................................ ,., ... , ................................ 401
29.2 y nOf'Tienelatura .................................. , .................................................................................... 402
29.3 C rQfnosomopalias nu meas ....................................................................................................................... 403
29. 3. 1 Eup!OiCiia ............ .. .. .. .................... , ., ... -----................. , .. 403
29.3.1 .1 TrlpJoidla .................................................. ............. .... -- ......................... .. .... --- 403
2'9.3.1 2 Tetraploidla .............................................................................................. --- 404
29.3 2 Ancuptoidia ........ ,,,,,,,, ........................................................................................... 404
29.3,2 1 de generaciOon do ttnevploielia , , .. .,.,_,_,_,_,_, _, ..... ..... _,_, -------- 404
29.3,2. 2 MOI"'ISOmia .......... , .. , .. , .. ,_,_,_,_,_,_,_,_,,,., ...... ... , , ,. , , , ,., , , ... _,, . ... 404
29.3.2.3 Trlsomla ................................ ..................... ........ ,.,_,_,_, 406
29.3.3 Mlxoploidla ................................................................................... ,., _, _, _, ............... , ....... ,_, _, _, _, _, _, _,_, 406
29.4 Ctomosomopatias estrueturaJes .................................................................................................................. 406
29.4.1 Un punco de ruptura en un cromosoma: delecaOtl tetmr\al ......... ,_,_,_,_,_,_,, .... ---- .... -----.... 405
29.4.2 Dos puntos de ruptura en un O'Ofi'IOSOma ............................... . -- ............ . ,.,_,_,_,_ , ---- 407
29.4.2. 1 lnver&an ............................................................................. ----- .. .... . ,_,_,_,_,_,_,,_, 407
a) lnver&in paracnt:nc.a ....................................... ... ..................... .... -- ------ 407
b} rrwerS:iOtl perie6nlfiea........... .......... ... . ................ ,.,_,_, 407
29.4.2.2 DeleCinlntetsi.ICiar................................ ... , , , , , , , , , .. , ............ ................... ..... 408
29.4.2.3 Cromosomas anurares .................................. ,.,_,_,_,_,_,, --- ------ 406
29.4.3 Dos puntos de ruptura en cromosomas diferentes. transroeaeiOn , , , , , . .. . .. , . , . . 409
29.4.3.' TranslocaCIOn recfptoca ..................................... ,.,_,_,_ ... _,_,_,_ , .,_,_,_,_,_,_,_,_,_,_,_, 409
29.4.3..2 TranslocaCIOn de Robettson o fu'Sion Of'lttiea. ,_,_,_,_,,. 409
29.4 4 1$0<:fQfi10$0mas ,, , , , , , , ... ............................................................ ........... ,_,_,_,_,_,_, .. 4t0
29.1 INTRODUCCIN
En este rema se t;aUitlln tns entermiXI&Cie:$ uno ele los tpos de enfermedad molecular (pg. 392).
Como au nomDte Indica, &e original'\ po... la artetaeiOn del rUnero o ta C$1ruc:lurt' 00 lO$ CI'QITIO&Omas: de ah que se
lletmcn atleraciones UOn10$micas a gran escala, aberraclones.traston'los o Momalias CtOI'n0$6micc.s Al poder
Obscrv3t'SC tos (:3mb/o$ oon el micro&<:epio plioo. son \ambien consideradas oomo enfermedades eiiOgentic<'l$
Son artetaeiOne-s espot6dicu y de baja frecuCtlci;:l, quo so perpei\Jan al ser ea$1 ii'ICOmpatibles con ltt
supervwencia y la reproduccin. Sin embargo, cuando 10 l\aO&I'I, muo$tran manifestaaones cllnieas, flslcas o psiquiea$,
muy gr8\tes. a vec:es dtam.illlcas. POI' 10 que pue<:Jen 00f'l$ii:Jerarse la$ principales enfermedades gE!f\6tlca$. oe hechO.
son responsables de una gfan propordr'l de ab0t1os malformaaones congnitas, retrasos mel'llille$ y
tufTIOfes.
Como de las consecueooas de esta'!l enlermedaoes. l<'lmbi6n alt8f'at;ione& en el metaboksmo y en
M s inletis o iliCIiOad do lltQ4elnas. Talos vanaciones bioqulmlcas pueden $4J(;Unl:iana$ a la enfermedad, a
d1terencla de ras que apweoen et1 lt'IS enfermedades monognieas, pero son tguarmente Obiec<> de 0$1velio de la
pet<*lgla molecular actual.
402
ENFERMEDADES CROMOSOMICAS O
:\lgunas cifra-s .significati\'$, re1a:ti\'aS las anomalas crmJ.usmicas
Se p'wnl.nn en d 4.; de IM tnuctl\IS
Apa.rca:n en d 2% dt." los cmbfii'UO$; mujt"tCS mayO"s ck 35 alkl6
Jr;:So."'ri.:S en d 50% Jos ahorlos cspoolAnoos du:rantc <1 primer tnmescrc
l a fn:cue.uci;3 h atitl rna)Of e itnpr('(isa en la etapa embrionaria (aMes de
it ;.cu\tl!lt$ de: del oolcn dr 15 por coda. l.OOO <"mbsioocs
Se han unos 60 sindromc:s
Las son mucho m& ax.tensas QtMt las produCida& on 1()$ lti!JSIQrnos monog6nieo$,
(lOf granaes camDIOS en el nmero de nuclelidos (mile:s o miltonO$), en l;t esuuctut-a O& 109 ct'O<I9omas o en la
de gone5 por sn$0f1;i0n o ddecibn, ttanslocacl6n, etc.
Pueden 3 lOS t.lutosornas como a los cromosomas sexuales: en ambos poeden ser
constlwtivas o adqwidDs
Son c;on$titutiv:ul Jtqu611as que afeclan a IOdas las clulas del organismo, por aparecer durante la
rvisKwt mei61ica. de la5 cUas germinaleS (g:tmetogneSiS), o bien durnnte la primera dimi6n mltcica del cigoto.
Como COti$$COOnc;ioa, son do mayo gr1M!dad.
Las aberro1<::io01ts adquiridas o somfie89 slo octlll'en durante las mllosis po6cigt:icas.. Se ncian. por lar\4o, Cn
soml\l!e&S, sin afect.at a todas las clulils dol orgttni$1'00; de l{t mOI'Ic)C' giltvedad (a vecea ml nlma) di!
sus oonsecuencla9.
29.2 CLASIFICACIN Y NOMENCLATURA
AnoltliU 1 IIIS
cromosmicas
{
el nmero de: c..-omosam:as
Ulrucumlt'1: se modilic:.l:r es1n 1CIIU!l (k :algn cromosom:.
Entro Jos abotWs por ane)matias cromosmlcaa dufante el primer trWnestre do 01 96% $e deaen a
altGf'<IQCIIr14J$ numl;riCliS y el <l% a e!.ttuctutales. on madre:s de 35 :u'los, el 85"' de tos abonos
debido$ a CR)ti'I()SOrr.:lp8tiM oot'J"eSponckln a las anomtllllas numric;.M y el \S% a las
En la desctlpdOn ele las anomallas I;IQ01Qs0mfeas, la nomenclatura ullizada se basa en la de la
CfOC'l'IO!IO\ICa oormal, es decif, 4f,.)(Y en o6U&S di)bdes del vatn y 46,X'X mujer. Se a"ttden ilblevi;lVNJ$
aspectos re&MIVQS il la morfologa del cromoeoma o para n:licar las cwsas dO 11 anormalidad. Los. detalles de
t'PiietrCi61'1 de la nomendatura &e descrtxtn en eild01 onO(l'ulfia,
46,XY
olula masculina Mm\8!1, (ipl(lidO. 46
46,XX clula femenina dliploide
induyerdo un X y un Y
46 QQmOSC)maS, IncluyendO 009 X
47,XXY
un Cf'Ot'l)I)90ma X adicional 39.X:X:X olul\) lemet'llna trlpiOide
p ..... cono
poi origen patemo

brazo largo
mol oripen ma&erno
con
een!JmciO die
crQm0$0m& d ie6nlrieo
lo<
o.xtretno (setmlnttl. telmero)
d
cnwnosoma dedllado
dol de!eciOn
1 ISOCromoeoma
'"'
1mercon
'
cromosoma anular
dup duolicadn
mar
"""""""" ..,..,_
'"'
,,.,_
,,.
$illo fr;jgil
1
-

oanancW
...
teclproca
prdida
rob
de Robertson
(O(Uf8
msaieismo
.. tOCura k: unin
CROMOSOMOPATiAS NUMi:R.ICA.S 403
29.3 CROMOSOMOPATiAS NUMERICAS
rembin lamedes slmplern(!(l1e afteteelones genOO'Iieu. implican 1.11) cambiO en el ct()(l"'()90n\&S, bien
prdida o ganancia, pero nunca se a!lera la organtzac.n def cromosoma. Son les anomaiJes mM trecuentllS y se
originan en gran parte dwanse la <ivisin meitica (pg. 104), con lo que se lmnsmhen 11as la feoondac16(1 a todas la$
clula& del hilO o hta En general 501'\ ltflale&.. impdiendo que se SClb(epase el de&ar'l'OIIo embriOI\IWlO, coo abonos
espon!M@os de ta 00t1oep<:i6n.
l tt5> num6ritv$ se dt'1$diean as:
Nombfe de l;:t c;rom()$Omle.,
NJ do
EIC!fi'IPIO$ fhumanQ$)
Crott'lOSOrNS
N d1a
o
... ,<>Cllo6
a uews

._.,
n 2J X
Eup6oidia

._.,
zn <16.XY
( xn)
T_rlpiOidia
3n
69)00'
Pol!ploklla
Te
la
4n
92.XXYY
...
'"
NIAosomla 2<>2 44.XY,2k21
MoAO$o!T1ill 2<>1 45,)( 45.)()(-18
-oila Olsom1a lnotmBI, no es zn
(tt xn)
aooutlioidfa)
Trlsomia
2<1
47 ,X:XY
4.S.XX.t21
PCIIiSOtnio
,..,
49 )()()00(
Mhcoploldf.a Mezcla da dos poblaCiones celulares con 46.,XXI47,XX.8
d.stlnta dotac::jOO cromosmu:e
Se habla de heteroploldla en todas m s!luaCiOOeS (OOk'lfeadas) et1 1M que ti
nUmero de Ct'Of"llOSomas es d!fere.ne el normal
29.3.1 Euploidia
Recit>e e&le nombre (del griego eu, bien. W!teladero; piOidfa eone<;la o to1 $IIUtiCIfl on la que e.xlste w.
!Qnero entero de docooones cromosnlcas haploides complel89, es decir. el tlllrnero de cromosor'f!Ol$ C:$ vn m(ltlplo do
n Para los C3$011 ton ms cromoGOmas de lo normal f2n) se habla ele poUpfoldta.. En el extremo se eneuentrl'l\
o6Mas como plaquetas y enltOOflos. que carecen de nil(:leo y se Olee que son nuliplo-idts.
29.3.1.1 Triploidia
Ea;. la en l3 que las clulas conoenen 3 juegos eromos6mlcos (Jn, en huma!W)" Jx23:oo69), que 3
crom()SQmtt$ ttJu,<'llot Es poliploit!ia ms oomn, llegando a ooosbtu1r N 2,. de tod8's las oonoepcionet$ s-'1
embttrgo, s1as S suelen '* tlbor\o cspon\3neo. por b que la .,cidencia es muy baja.
l M iblll!li!lk,
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404 ENFERMEDADES CROMOSMICAS O CITOGEN81CAS
29.3.1.2 Tetraploldla
En este (4n. 4a3=92) la oontiene do$ doi.Cieioncs extras.: $0(1 siempre 92)(XXX o
92.XXVV $q por un'*' en 1& primera mitos.s del cigOto: tras. W!a normal del DNA no
13 division cetul81 que deberla formar las dos primeras clulas embrionaas.
mfwsb
((fi\\ 2n. 2C
pnmcras <kl6
ciluJasdel

@ID @; ....
!' r .. ., 'Jr
2n,4C.......__ S '- \U)
2n.2C
29.3.2 Aneuplolda
Este nombre se a las anomeli.N J)letde el carcter euploide. es decir, el rnero de cromosomas
oo es mltipJo del t't'l9tO Aaploido n, Ello M a '& variacin del rnero de copias de un &do crom060ma, no de
JU890$ de cromQ$0mas. En general. se una copia de ms o de mono& ($e vn $010 crom()$0ma,
especifioo en Qldlt ptOducilk'ldoee. una (3 c:n)mOSOMa$ hOmlogos) o una
monosomta (una SOla ClOP'Q.. no hay homlogo}. En COOMOI.Iet!C:i3. la dotacin cromosmlca IOtal es de 2n-+1 {4&t 1 =
47 cromosomas en la trisomla humana) o 2n1 (4$&.1 = 4.$ c:rQI'I"'Isomas, monosomla tunana). El cromosoma extra &e
l'dea oon un y el ausente oon un signo-.
Son las anomarlas numricas ms trecuentes y elinicllmente sq'liflc8Was.. aparecen en el 3-4% de lo6
embarazo&. asOCinOo&e oon un <:14n3rrc:*> fi$iOO o mental anotnalos. En las clulas cancerosas tambin apareOI:Ifl 8
menudo aneupiOidias exlrci1\M, (;(In 81'1()(tf1811dades eromosmiCil$, Cuando falta un par do homlogos., ra
anom81ia es letttl, y $e nutisomta: pot ejemplO, 44,XY.21.21 (varn) o 44)(X.21.21 {m.,.;et).
29.3.2.1 Mecanismo de generacin dala aneuploida
Lll aneupiOiclia se genera por una falla de dis.,.-.cin dur3n1e la meiosis., es decir, un talO en &a seperad6n normal
do un par de cromosomas o ele crom1idas. Las 00115eeutneias cJel proceso son dlfetetlr.es dependiendo de la <ivi$in
melclea (1 o l l}en la que se ptOdu%(;<) el ta!1o.
La ausencia de eromosmiea duranre la me.osis 1 hace Que los do& homlogos dol
afectado pasen juntos a uno de 10$ seoundarlos. y el otro gametocito Quede sin oso c;rQtl'l()$0m6. Los
2(n-1) cromo50n'lill5 restaniO$ 1\af\ sufrido la disyuncin normal y, por tanto, han $U$ hOmlOgOS y cada
gametOCIIo M<:unC<ri:> n-1. En 1a subsq .. 11ente meio&is 11. con nonna1. se separan roelas 18&
parejas de eromiltic:IM:. Lo& gametos madi.Wos lienen una cromti!Jda (;)llera ya cromosoma hijo) de ms. o bien una
oe menos. siempre oon lOs otrO$ nl (:n)f'l'IOtOmas ootrec40&.
La no disyuncin de la$ c;:rom*'idtts afecrado <M-ante la meiosi& 11 (tr..s un; moio$is II\OM\SI) haoe
<PJe ambas pesen *un mi$11'10 gameto, que queda a&i oon dO$ c:QI)i.<ls del (:n)n'II)SOma a1eetaOO. mientras el otro no
eon6eno ninguna. se fotman rambin otros dO$ normales.. El resto de CfOtl'tOSOMas (n- 1) separan sus
erol'f'\:tiC89 (;Ottectarnente.
29.3.2.2 Monosoma
Como se ha n:licoldo, C$ la siruaciOO en la que hay prdida de tn solo homlogo <le un par de Ct01'1"10$0ma:5 (en
lotal. 2n-1, 45 en humai'IO&), El ojem)IO m6S frecuente es el sj ndrome de Turnen, una rnQI'IO$Omia et1 Ct0fi"'090mas
sexuales. oon carioeipo 45,X y. pot tan\0, femenWlo Se origina pOr 18 no ClisyunciOn de loa Ct'Ofi'IO&OmitS
$CXU31e'S (casos 4 o 1 en la figura: el Q'OI'!'IQ$(lf'l"'8 de COlor rosa rayado seria el X. prooedente del gttm* normal).
Su incldenCiia es de 1 PO' (;Otd" 5.000 niflas naeicias v1vas (la mayorla de l<ts set pior<Sen prenatarmente).
Otros ca<&OS 1n et mismo fer.o1ipo mosslcos 45.X/46.XX o 4S.X/46)(Y a oontinulk:in, pg. 406).
CROMOSOMOPATiAS NUMRICAS
AnomaliiLS croiD05illJtaS nurnericiLS originadas por n:prto anmalo L1 m<:tOsi.s
llrMI:r,d& mN- 111 (Ofl J '*"' no-u ldf b :J
gametoci to pri mari o
, ......... .. -......... .
. Mciosls flOTflt11
.......... . .......
mciosis 1

dt Hlf('IIOI;I(OI
.... ..
.,, .. 11 ... ('11 ""' -
gametcx:hos
sceundarl os
'-"' pllt!IC'<I d -m. lk roj(>
'""""' .; m
- ,.. dls,-.ndtln \t 1itPf11'1rn
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meiosis 1
n<lmlal
0J)@
.. 2c 1 ll.l{' ., ... ,.K .. l 1 nI.K2 1 n.K
mcKl lsis 11 mciosislll oonnal 11
110,.,. Mf'l tln la d.,. (rn' lct
@) (@),:metos Cfill) @) @,.,,.,
Lt' @) QlD oI('IC@D Cli) (@) Cli)
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405
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I!J 1 :tkk" d irnnott " dof
406
ENFERMEDADES CROMOSMICAS O
29.3.2.3 Tr isoma
En eslle caso existe ul'l BCJiCIOMI de un CI'Of'I"'ISOmB.. es decir. 3 coplas de diCho cromosoma (en &olal,
2tt+ 1. 4 7 .,. humanos). Puede a1eetat a de lOs 23 pares. ExiS!en varb9 modetadamente comunes.
EJ sindrome de Down o mongolismo (en el 95% de los casos) una copla eJrtra del 21
(trisomia 21), por k> que existen tres homlogos de este cromosoma. la nomenc:la!lJra es 47,XY;t-21 para los varones y
para tM mujeres. Se origina por la no disyuncin del cromosoma 21 (casos n9 3 o nt 6 en la figura; 106
etomosomas de COlor rosa y rojo serian lo$ 21). E el tipo de lri$0mla ms c;omUn, oon un<! int;iOOnci., 00 vno
por cada 800 naCidos vivo$. El rio$90 (tambi6n de las ollas ttisomias en general) se: telaeiona ooo la 6C8d avanzada de
1<'1 rn'e. pr(lbl'blemente pot ur'l atM'I'Iento de &a no disyuncin en las mujeres mayores. de fotma que la frecuenda de
lntOmia 21 es de 1/400 a lOS 35 al'iOs y 1/ 100 a 10!140 allos. Presenta. otros slntomas, retraso mental moderado:
1a supervivencia es de unos 40 Silos. No existe anormalidad alguna a nivel gnico.
El sndrome de Edwerd es 1& trlsom1a 18, repesenu.da 47)0(,+18 (varn) y 47,XY,+18 (nqe,). con una
lnCJC!encla de uno por cada 6.000 nacidos vivos.
El sfndrome de Pata u o ltlsomla 13 liene una W'ICidencia de uno de cada 10.000 nac:ido6 vivos. P\leden sobrevivir
a trmino. pero muestran malfolmaciones congnitas mU!Iiples y gr.-ves. 1.<'1 nomencla:tul'8 05 47,XY,+13 (vitrOn) y
47,XX.13 {mujer).
El sil'ldrome de Kllnefeltet, con una incidencia de uno por cada 1.000 naciOos vivos, es tM1.il trisoma eo
cromoSOtl\89 sexuales que produce varones 47)0(Y. Con una ii'ICidt.mCi3 pareiela se enC\.Iefltr(ln !itMCitl tti$0MitlS
47.XX.X (mujer) y 47 ,XYV (varn),
29.3.3 Mixoploldia
Recibe e$W) nombro 1<"1 sitt4ei01'1 et1 la que el l)l'lf'lls.mo contiene clulas con dlstlnlo n(,nero de cromosomas.
Aqu!l<'s con&til\lyen dos (O mils) lineas celulares. cada uM dertvada de una clula madre. Se puede distinguir entre
mOSll ico. cuanoo las CIOSiilneas derivan de un SOlo clgolo. gef*almente pot mutacin en una elapa Rcial del errtlrin,
y quimora, el otigetl son dos elutas msdre Independientes que se han unido en un solo embrin. Como
46.)0<147 .XX, +3 in(lie<'l ul'la mujel con dos poblaciones celulares. una con cariotipo normal y otra oon
trisomia 8
29.4 CROMOSOMOPATiAS ESTRUCTURALES
Este .segur'KiO tipo de anomaflas cromosmicas. menos frec::uonlos quo numOric:f$, corresponde a eal'l'tiOs en
1<"1 estructura de uno o varios eromoeomas. &In que &e altete su nUmcwo (46 on ol $Or humano). El cambiO se debe a la
rotura del cromosoma. col00nrrw:m1e 00 un (O(:!Qn$titucln de ta molcula en una disposicin tiferente, anormaL
Son frocuenttis en la anen'li& de F alconi. la alallla y el &lndrome de Bloom
1.3 descripei6n de )Os dderentes tipos de anormalidadn estruc:tur.-1N tiene en wenta ol nUmer o de puntos de
totura del cromosoma y el cariK:ter (no h3')' Qrdiela de material cromosmloo) o desequ.U1btado (&e pierde
parte del cromosoma).
29.4.1 Un punto de ruptura en un cromosoma: delecin terminal
tras 18 ruptu'a ele la cadena de ONA lo& oX1remos ro"*"ntos se suelen unir rpidamente por la
aco6n de enzimas de reparacin. S. &il OCUltO on un SdO punto y no se repara, el no oontiene el
cenltmeto se perder en siguiolllo divisin oeiiJiat. se OOgina asl un CtOtTIOSOma con delecin termiNIII.
1!\l!ll('t...:nllrbilrM'J:I
.Jc -ltkl

ayu.Jaril obeo:"....,
Cflfllb..l:c, llelll:l
ft:;I,J.1 que \U OIWI III


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-

jll
CROMOSOMOPATiAS ESTRUCTURALES 407
lO$ erectos fenolfpico$ svelen se' grttves. pve$ My p61ida de gcrll1ico d-Hequilibrada).
Adems. MJ'IQue el cromosoma remanente CXlfltlene un cenlrJOOtO. I<I auser.cie d& tele'rlero en ti extremo
resultante del corte hace Ql.lt et Ct0tn0$0ma $ea ll'le$1able y te pveoa aegt\'telat Meitmente
En cu<'n1o a IV nomcnela-tura. $e utiliZa l a C$1<\bleeida (pg 90). OeDe
en este CMO. los nUmen>$ <::e Ct()il'IO$Oma banda. subbar'.da y Sl.C).Sub-bMda donde se pt0<1uo ta
robJra. Por ejefnpiO, 46,XY.del(41(p16.3}-plef indica una delee;oo en et !)tazo 4p de9de i8 benda 16.3 hasta el extremo
(re o. 10 que es igual. una ruptura en la bal'lda 1, sul>banda 6, 3 del brtto:> wrt<.> del vrQill0$0(1\8 4 de un
varon
29.4.2 Dos puntos de ruptura en un cromosoma
Cv9n<IO se M ptO(Iu(lrdO mas de un oorte, las enzimas de teparaaon tienen drfiaAiades para dlsbnguir enlte bs
extremO$ y pueaen unw extremos <l'!e no se ootresponcllan en et ctomosoma ong1na1. Como oonsecuenaa.
svrgen eslrudutales.
29.4.2.1 Inversin
vuanOo el fragmento intermedio formado p01 tas dos IO(uras se we1ve a unil' en su !)O$icion otigit\81,
peto inverticlo. La secuenCia del CI'OI'I'IOSoma reWRa. por tanto, a!tetada. Son reoroenamlenlos pues el
material perdido se vuelve a incorporar y no 1\ay prolda neta de material uom0$mico Pueden dis'-!gunse dos ca:t;O$.
con distinto resdlado:
a)
Inversin parac6111rica
....

1
1
Los dos puncos
' '
de t\lptUf'3 CSie
m d nismo bta:lO
'


di:! Q'OII\iO(IIil )'.


1:0 tlCJI&'i:U\.'Odll.

lhlgfi)Mll(l
-
" " 'Cri.Kio 11(1
' '



7
...
1
Se nombran, pot 9J9mp1o, como 46.XY ..,v(11)(p12p14) para una inversan entre las bandas 12 y 14 del btaz:o
eot1o del crom0$01110 11 de un 1'\19$10 que OmtNI$ ()OSiCIOtles on del btillO p, lill in'Yersin es paracn1rica.
aunquf! no se itleliea eJtpllcitame.nte este ear6Ctet.
b} Inversin pericnfriciJ
1
'
1
loS f'W'IIOS de
-=
<:Sitl e"

lbstinll) bral;l) y d
lll' .. -rtOO
111Cluye el
'
'
1
7

l a nomencia1ura er. anloga al caso anterior: por 46,XY inv(3)(p21q 13) ir'l(!ie&OCIO inver$in on et
cromosoma 3 de un varn, desde la banda 21 del balzo oono a la 13 del bfa.ZO largo (y, IXW 1;11tll0, >eoc6nltica por ,ncluor
et centr6mero).
408 ENFERMEDADES CROMOSMICAS O CITOGENETICAS
29.4.2.2 Oelecin intersticial
El ffill!lmo tfagmef'\10 <:romosOt"lco 10!1 ejemplOS antetloru puede p(ttCier$<: en lugac O V()(Yofle '
menar. por uniOn de lOs fragmenros reslantes. En este caso, el teordenamiento es desequilibrado, f)t.les hay pRIIda
00$& de maten.al cromosmico Slo es estable el fragmento (lnler5ticlel o urnn de 106 laterales) que contiene el
cenlrmero; ef otro (fragmonlO acntrico, pg. 92) se perdetil en la &lguiente diVISin celular. Un e,emplo de
I'IQI'nereclal\r.l &orloa 46,XY,d111(1)(q31)-{q33}.
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29.4.2.3 Cromosomas anulares
Aparecen af unirse los dos exlteiTIO!I del tragmenlo 11\1erl11$dio de cromo&Qm;t lt!hrl\ll\ildo en la
Slo si coni!Onen el centlfn&ro puodon lf(ll\$mi..._ en 18 dMSIOtl celular.
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CROMOSOMOPATiAS ESTRUCTURALES
409
29.4.3 Dos puntos de ruptura en cromosomas diforontos: translocacln
La escisin de dos cromosomas no nomlogos, en un punto cada uno. puede conduar a la unin 1"100t1' ecta de
fragmentos entre anO)s. genetando cromosomas anorrna68s 'hltlndoo o derivadO$
29.4.3.1 Translocacin recproca
Er.la tran&locacin wnpJIC8 el intercambio de material Gntre los dO$ cromo&Of'l'loCI&: al no haber prdida de ma\etlal
QMcico en su conjunto. se de ecsuil ibr<td<t Son relaliv.-ment.e fr9e0entes.
no tienen efecto fef'lotlpleo. pues 109 get'les Simplemente camelan oe CtOmosoma.
...
w MJp!ea aqul -..
IIUO):',.USn
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( :<IA'I )'

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29.4.3.2 Translocacln de Robertson o fusin cntrica
Es un reordEmamiento particular. entre dos cromosomas actOCntricos no homologos. que se escinden muy oetea
del oen1rmero y cuyos fragmento6 grandes se unen por los oentrmeros. Los dos fragmen&os cortos. aOntl'ieOs. $e
pieoroen en la pnmera nwosls.

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410 ENFERMEDADES CROMOSMICAS O CITOGEHETICAS
29.4.4 lsocromosomas
Como ejemplo ilustrativo oe b exist.eneia de otros tte tw'IOmllllias eromosmi:::3s &e mencionan
los itoer"OntOtCm8S. que de una dMSil'l afleante de etemOSOmas por t i e;o perpeocicolar al eje nonnal de
diviSin: 1M eromtlcias del ooeYO CI'Oml)g(lfn8 estn fonnadas por los bra%0$ los largos del eromosomtt original

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Tema 30
Bases moleculares del cncer
30.1 lntroducc:in ............................................. ,_ ................................................................................................... 4t2
30.2 El c:.ilnc:gr como cnfcnnod:td ..... - ..................................................................... - ............................ 412
30.3 Et.1P-'S caractc.fistieas en et dcu.rrollo del elneet ........................ -................................................... ,_,,, .. 413
30. 3. 1 Tumor Pf!0\81'10 bef'ligno ..................................................................................................................... 413
30.31 CrM:er In sltu ..................................................................................................................................... 414
30.3l Tumor tnalignoo c8ncer propiamente dicho ................................................ ................. .... .......... 414
30.3.3.1 Escape lnvaslvldad .................................................................. - .......................... 414
30.l.3.2 VascularlzaC16n o angiognesle ................................................... - .................... 414
30.l.3.3 Fonnacln del tumcw &eC\Ild.ano o metstass ....................................... - .......................... 414
30.4 Mecnlsmos de de cil uloa nQf'mal en tumoroa1 ....................................... .......................... 414
30.4 1 EquilibriO en1re prOflfcrt'cin y muene celull)r ...... , . ,. ....................... - -- - - - -...... ---- , ---- 414
30.4.2 Gene-s responsables del ea.neer ................................. ., .. ,_,_,_,_,_,,., ....... ,_,_,_,_,_,_,_,,., __,.,,._,_,_,_,_,_,_,,_, .. 416
30.4.2.1 MtllaCIOt'l de protoonoogenes: oooogenes .......................... ........ ...... .... . . ............... 416
a} Cor.eepto ......................................................................................... ... - - - - - -............ 416
D} Tipos de I)!Oiooncogene&....................................... . ...... ... ............. .................... 416
e) Caracteristica& de la expresin de los onoorJEifles. .. -- - - --- - .. _, _, _, _,.,.,. .............. 417
30.4.22 .............. .. ........... . ........ 4 18
o) Conceplo ..... - - - - -.......... 4 18
b) TipO$ <.10 genes On00$upre$0res .. .... ............... ... ... ... ... ..... . . 4 18
e) oe la expre$iOn de 10$ genos oncoSAJJ)f"C$0f.S _,_, -------- 419
30.5 Conttol de la proli.feraei6n pot sel\ales extraeetularcs .............................................................................. 420
30.5. t Tipos de . ........................... . ...... -- .... 420
30.5.2 Transdued6t'l de la sel\al eXIrt'loelular N in!eriOr ...... , _, _, _, _, _, _, _, ..... . - - - - - -.. - -.. - - - - , , 4:2 1
30.6 Reg-ulacin del cielo eel ular .......................................................................................................................... 422
30.6. 1 Puntos de control en el ciclo de drvism celular ................................................................................ 42:2
30.6 2 el etelo , , , , , , , , , ... , , , ......... ......... 424
306.2.1 Cielinas........ .... ......... ............. ,_,_,.,_, ...... 424
a) .... 424
b) Celinas Mit61ieas o de la &ase G, .... ,.,_,_, _,_,.,........... .. .... 424
30.6.2.2 Prote4na qu!nasas dependientes de eiC:IiMS (Cdk) ...... ,., _, _, _,_, _,,.,... . 424
30.6.2.3 ACCivdad de 10$ COmplejOS Cdk.Cidina .... , ... ,.... ---- - - - ....... 426
30.6.3 RegulaoOn del eaclo eelulaf por los eomplefos Cdke.cllna y al!eraeiOtle$ en Cl Cflnc:er , 427
30.6.3.1 Es.!fmuiOs de progreslon por el clcb celular y onoogetteS Que lOS a!tettll'l ... , 428
30 $ 3 2 de delencin del Ciclo oelluler ............................................................................. 429
30.6.3.3 El gen supresor del retinoblnliiOmil ( Rt;l) ... . . .. .. ........ 430
30.6.3.4 El gen oncosuptesor pSJ .............. -....... . ................... ----- ...... .. .. . 431
30.7 Apoptosls, muerte cel ular ptogramada o suicidio celul ar ......................................................................... 431
J0. 7.1 E1.8P8s y contrOl del <.le ............................ , .... ............... ............................ 432
30.7.1. 1 lf'lc:luocin ............. ........ ... ... , .. .,.,.,_, _,_, _, _,.,.,. ......................................... 432
30.7.1.2 EjeeueiOn ..................................... ,.,_,_,_,_,......... . .... , , , , , , ..... , , , ............................ 432
a) easpasas y su papel et1 el eortrol de 13 <'I>OI'I0$1$ _, _.,, _ ... ,.,_,_, 432
b) Nueleasas ............................................................................. ... - - - ... .... . 433
30.7 1.3 Fase final de la apoptOsls .............................................................. - - .......... . 433
30 7,2 Relacin entre ciclo celular y apopto&is: p53 como punto de enlace ......................................... .,.,_,_, 434
30.8 Herencia del cincer ....................................................................................................................................... 434
30.9 Marcadores tumora.les ................................................................................................................................... 434
30.9. 1 Allera010nes IOC81es y genettlliza<Sas .......... , , .............................................................................. 435
30.9.2 Al!erneiones lurnorafes y tisul01e11 . ,.,_,.,..... ................................................................................. 435
412 BASES MOLECULARES DEL CNCER
3Q9.2l M;'IIC<'Idores turnotl'llos............. .. ... , .. , .. ,.,, .... ................ .. ...... , , , , , , , 436
a) Marcadores WIYIOI't'lles dO tecroeiOn o 'dtlsieCisM .. .. .. .. .. .. ............. .. ....... 436
b) Citocil"'a!l o medlftdotes SOluble$ de Of9etl celula' ....................................... ,, .............. 437
30.9.22 Marcadores tiSOiefea ............. - ........................................................................................... 437
30.9.3 Marcadores genotlploos o moleculares, _, .................. - .... - ......... - ................... - ............... - ............... 437
30.1 INTRODUCCIN
EJ cnoer. o tumor pUede wnsiderarse una enfermedad gentica (YN&e ta moleOIAaf de la&
enfmediiOI en ()llg 390), que se oesauol& Otgnnismos en la mayoria de los teji!l y en todo Upo de
oU;as 5011'\1ic::as (como tambitn en lr.s e61ul3s geti'!Wlales en er.eeres hereditariO$, pg. 434). Bajo el
nomore <te eancet se engklC& IJl de enfermedades que tienen en comn un crecimiento celular
de$0f'Cienado (lllmot) y colonlz.ac:On tisular (met'Stasls), IOdo elo detetmlnedo por una mutacin ncial seguida de
1<'1 de otras ml.llaeiooes sucesivas. Cada c:ttnOf!ol' es una slruaciOn dls.tlnta con pecullaricfades dependientes
del tlpo de o&lt.Aa donde se origina. sus causas (etiologla) y &u mecanismo. el grado de malignidad y otros factore:&. Por
oonsiguleme. &e diterencia ciarCIII'I(I;nte de otras enfermedades oentlc<t$. Nls monognictls 28) y
las anomalia5 (letM 29} y $0 distingue de: JoJs enfermedades multifacaotiales (Pbg.. 399) por la
en &*as do uroct oorrfluenci<"' de ICJCIOtes gen61i00s y ambien4ales para a enletmedlld. AJ igual que !Odas. las
enkwmoi:Sade:s molttcvlare:., et et\ncer se en artetaelones tliOqulmkas de IOdo llpo a nivel oeluiBr, UStAat y.
pOr 1.'1 apariciOn de marcadores tumotales y tl&\Aates (pg. 434).
Es. la entermedad es.tucJiacla mas lnter'lsBmente y desde ms puMos de vls&a diferentes, habiendo
P<ts.OOO en lOs Ullimos ai'IO!l de un oonoc:i'l'llen1o casi nulo a uo gran avance en muc:hos aspectos molec:tMtes, desde
aquellOs que explican l9 proliferacin exoesrva y la prdida de <:lulas pOr apo()IO&is (muerte c.Ual), hasta lo$
mecanismos pot los que el cnoor genera la5 rne4sta<&i$. Nueslro objetivo os vl\3 visiOn de
todos esos <t$pec;IO$, Quo ya h<Jn bcno!lci<wJo a la Biotogia MolecLCar MSica y son nece&anos para oomprender 1M
aplicao:;iol'le$, y Murtts. on especial para conflgl.wN una nueva capacidad cllnica en cuan10 a pron661ioo.
diagnstico y L3 di$ponil)ilidad acbJal de frmaoos para el tratamiento del cncer por se ver
&UPerada <tlg(ln dia por t'IQ\'CO()$OS tipos de abordaje basados en Ea terapia gnica, asl oomo en la inhibicin especifJca
de la la melstaas y la apop409is.
30.2 EL CNCER COMO ENFERMEDAD GENTICA
La par1iCIC)aciOn ae tos genes en la carclnognesls puede seguir do$ tipo6 do mecanil;mo.
Por un lado. algunos cilnoeres se deben a '"'mbiO$ epignticos. no Oien <;on(l(i(l()$, QUe afectan a la
ell)fOSibn de y puec:en permanecer en estado latente duraMe toda lit vicia de la clutil, Por ejempto.
&On Olbvndantes lO$ agentes que modlfk:an la expresin gnlce alterando la metilacin del ONA
(pag. 273).
Sin eunb3rgo, la Maycria de 106 cnceres se deben a cambio5 genlioos por mulacionQS. L<t c61vll.'l inicial
afectada oreoe con mayor rapidez de b normal y, si no existe vn conltOI ae eso crecimiento, lega a formar un
tumor ptlmao on el tofM:to cireuncl8ilte (neoplasia) o t.l'l tvmor secundario (metstasis) en tejido& lejanos.
Las mut:ac::ionos dol genoma responsables de la en!ennedad son producidas por agente$ cancerigonos. do mvy
variadas naturaleza y (pag. 354), asf como po1 errotes espontneo6 o inducidos en la replicac:in y
reparaci6o del ONA. pOr ellO. et 81\6lisls de la catclnogenia se haoe a la llz del ef:to mutagnico, Hoy 5on bien
<noeld<t$ (:010 de cncer i8s mutaoones que afectan esenciolmentt 1.'1 genes de <lOS t4X>S: 109 protooneogenes
y tos gene$ oneosupresor" (o genes supresor" de tumores) , Esto juslifica uM de tM del cncet, el
ser utl8 enfermedad pollgnlc. lo QUO no debe confU"'occitSe oon su car&ctet monodonal ij)g. 413). Como de
la mutacin. lo6 genes e.xprosan I)(OWtJnas attetadas, sobreexpresan las notmales o no expresan stas, $09I)n lOS
caSO$; ooalquict<J 68 oMo11 efoc:10S modiflea funciones de ia oUa tan bsicas oomo el oomrol de w divisi(Jn (pg. 422),
lo que so en una proiller&cln excesiva y contirtuill o en una reduocin de la c;ci!Mf progratl'lada o
ttpoptOSIS (pg. 431).
pro 1 l'tiiCI 1(1
anonnal
ETAPAS CARACTERiSTICAS EN El DESARROLLO DEL CNCER
413
30. 3 ETAPAS CARACTERiSTICAS EN EL DESARROLLO DEL CNCER
El cnoet. una voz: ongini!do, se manilles.a de torma v8fjlbla &egUn la& cif'Q.In&t<Jooc;i;;.$.. el tipo de cnoet. la ed8cl
01'!1 individuo. etc. A grande& ra$9Q$. su de$arr(ll() suele agruparse en tres fase&, oon llO$ibiCII st.Jbetapas de dltldl
del'n!l.aciOn: la formacin del tumor pcim<trio bcnig;IO. su ptOgreSIOn In &ru y la y apariCIn etc o
tumot maligno.
30.3.1 Tumor primario benigno
Esto (lritnera etapa del deS81Tollo del Jamada tvmorogOnfliS, carcinogfnKis tumora.l o tran&formacin
neoptiltic, es ta mas esrudlada y me,or ooncx:ida. Se inicia con 13 ptogenltora del cncer, que surge
en un tejido por una mutacin en n gen (J)ilg 412). Su prOfileracin da lugar a un clon (pg. 187) de
clulas mutactas, un cton ncopl bico. Este comienzo m0t1octona1 es la pnmers dol cilnoet, lo
direrenCJa do li!S enfermedades muklfactoriales (pg. 399): a po&ar do Oll<l origen comlin las OMJias del don inicial se
Meen gen&lieamente distintas por el aomulo de nuevM Asi, ta mutacl6n _,ielaoota oonflere a la clula ta
susceptibilidad tumoral. una predisposicin para la prollfetaclbn desmedida. la acumulaan en las olutas
hijas de sucasrva& mutacione:s on genes il'llj)licadOS en el ootttrol del cicio celular o de la apoptoSI5, <PJC foVOfez<:an ta
protlferacln o le nmorl<'!lidt'd, <::Onduce ptegreSivamente atas propiedades genbcas anorrn;IIEI$ del cncor
llllii>OCl'
l'liklla y

c.\ltncclular
'"
CIIIIO:I'I'Oo/lj.
lll.'l(ltr "'
mro:rcelulil o oon ..
IIUUi1
o dcgtlldur
lb\'I'DII$
mulmllll t' adhdl(on )
tc'CI'ptOI'C:I tll"Uillll) de
IDI."l''lbffinil. biS



111111 AM;Illtelo)HIIIl' llfi.'C'Ic 11 1111
ten que rq-ul11 cl
;uancnb la prulirtr..ll. '16n de' lll
muwo.b ('fllt as
t i titnlfll una mu.......Un rut'dc-
af1111 a un:. <k_, d lulat!; yll mu....,.ho.
tas o:tlullls oX!n las ...,S
) ".1. ll!le'fildi:l
l l l l!lll,lll'h
,, 11111 '
{.111\'1\'111)
Cuamit.ati1amcntc. se ti'(!C qu< son 6 <ttc Ullll t:lul
en c.anccrosa lda baja 141Sl4e mu1.,1dn (del (IC'I,kn de por y clula). pr.knc:un..:ltte
rmposrbloe q1.1c dich.'l tcngu CM l'nut.aC'ines indepcndi(>ntcs. La probG.bihd:.d d que u M de las
ec-ea d<: 10
14
clulas dd humano sufra& mutuc:ioooe.s e$ ( 10H 1 ctl\ (> 1 oH JOlf>,.. J(ltl),
Es prociso. J'MIC$. q11C cxisla un manismo de multplicacrn 01111 nu._..,_. mul:;,d(ln.
414 BASES MOLECULARES DEL CNCER
30.3.2 Cncer in situ
a la siluac:iOn en que las oitulas del primario no han escapado del tejido dOnOe so of'iOin.;lron
Puesto que el rumor carece de eapacidad inV#Si-4. ef pron&tioo cllnioo es "' general benigno y con tteeuei\Cia puede
por simple exttpacln quirrgica. Slo re:suna grave si por su locaizacin afeas a vasos sat'9Jineos.
msC\.b o neMeos crrtlcos, en cuyo caso, ;)un sin $0r 'ormalmente un <:nc:.er, podrra consiOOtatSe como una IM!OI)faSia
maligna.
30.3.3 Tumor maligno o encer propiamente dicho
la etapa que define ycarectiza el cncer. resplt'lsable de la conversitl de la o6lut3 en cancerosa. es
tv progresin O t\.lmor.lll. A pesar de 6U trascendencia, ha sido la menos estudiada: SOlO en klS Ullimos a"'s
se le esaa prestai'ICJO mayOr y " COflooen en parte sus aspectos ndeo.lafes. Puede et1 vartu
subetapas. de dficll St.tlotdlnac:On.
30.3.3.1 Escape celular o invasividad
Las clula!! constitttyentes de tejlc!OS tiOI'I'Mies se mantienen doblemente adhorida& errtre si gracias a uniones
lntetCleUtlffiS y a uniones de las clulas con el espacio o matriz tr;:te9.1ular. t.m es una eslruct:Ura fcwmada por
lil)cillns de protoit\3$ y secreloldas por las propias clulas, que act6an a modo de soporte
para o separar las clulas o 1*3 pl'()()(:ll'eiOnar elasticidad o fuerza de sostn. En estas interacciones
ln!etvietoetl proleil\89 ttanSI'I'IemCfal'l&, llamadas integrinas, de varios tillos, siendo la mejol descrita la lbonectina. Por
su dcll'ninlo Intracelular. las W!(99riMS se unen a lOe fllament&S de aelina ei!OeSQueteto de cacta oUa.. mi(mtrtts que a
ltavs de su dominio extraoelular tienen afinidad por prote"'as de las clulas veCW'Ias (adhe:Sin c61ul3-dlul8)
y poJ protainas fibrosas de la matnz eldracelular {adhes& clula-matriz).
Amlxl$ tipo$ de i!dho$in se ven atlerados en el cnoet y, oomo consecuencia, la c(ula puede desprenderse del
tejido. convirtindose en una clula invasora de otros la liberacin de las clulas es consecuencia tambin de la
de cnzim;as proteolltica$ o pr otcan&. O$p0Qibs. QU9 destruyen la matriz extraoeiJiar, pem'litiendo que sea
DOr la clula Of4I)Oga(la de $U$ vecinas Entre (lll<'ls. son destacables las llamadas metaloproteasas de
m.atriz (MMP). Que oegradan cesi lodos !Os componentes de la matriz exlraoelltar, pol )O que _,tervienen
oo pt00$50$ fisiolgiCO$ 00 rorncx.Sc::lttc:in ti&ulin. como deWfi'OIIo embrionario. crec*nlen!o seo y cicatnzadn de
hefklas. La adlv'i<laiJ t))(easa aumenta especialmenle en las malignas, COMO oooseeuencia do
oo aumen10 de la bloslntesls de estas enzimas. En consecuencia. la lnl'lticiOn de las ptoteas.as Importancia
<::On fi'*l torttp(IUiiOO$, p;tr3 el tratamiento del e6ncor. A91n0$ de C$10$ adan sobfe la activac:i6n de las
ptote.asas a partir de sus precu90tes inadivos (proenzimas o zimgenos. p&g. 33e}. quo OliO$ bloquean
dtectamP.onle la BCCI6n de la protena activa.
30.3.3.2 Vascularizacin o angiognesis
ConsiSte este proceso en la c.apacidad de un tejido para 'armar una red vascular propia mediante el desarrollo de
RJGYOS va$0$ sangufneos. por mec&ni$ITIOS CUYQ$ dcrialles se oonocen an de fotma Las ol.llas tuf'f\01'81es
produoen agenl$5 actUan sobfe oUas endoteiales vecinas para dar lugar a la formacl6n de una
red de vonas. <W'Iorias y caplal'o$. Ello pormie!J que el tumot' crezca muctlo y rn.ry ritpidamenta. al asegurar la
legada de oxigeno y nutrien1es: la vascularizacin puede asimismo favorecer la migracin de algunas clulas
C<\ncqro$oiiiS torreote Qrculatorio dii\Jndire a otros tejidos. donc:Je generci una meliastasi&. la es
ulO de los ob;e-tiVOcS 00 lOs trnl.3mientOS Mtic3noerosos aeb.lales.l'lacieno:;tO uso dO la cxi$1Cnc:i& de prolttinas 01..o inhiben
el proceso. como etKk'lStatll'l& y af'l!106tallna.
30. 3. 3.3 formacin del tumor secundario o metstasis
Mediante la invasin o disemi1ac:i6n colultn. la$ <;61ul;;a$ dol twnor primtlrio Pl*!en fljt1rse en nOfn\CIIe$, para
mul!iplie&t'$0 y difttef!Cii'U:SC en ellOs, 4;W)(te) lugar al 118m8d0 tumOf secundario o melistasis. Est& etapa es de enorme
dinica y <:OnstibJye la nota distil'llivt' letal, irreversible. dol tumc:w mO'lligno, pOrque supone la destruccin del
tejiCSO sano Que rOdea :1 1M ct-lul<\!$ y ta conSiget'ltoe dflieullad de ellminaCIOn PQI' quirrgica.
30.4 MECANISMOS DE TRANSFORMACIN DE CLULA NORMAL EN TUMORAL
30.4. 1 Equilibrio entre proliferacin y muerte celular
La vid.it media de la clula, o periodo de tiempo tran&Ciolnido de$00 SIJ formacin hasta su destruccin. es m.ry
variatlM (hor:.s., dlas. meses, etc.). Las controlad:. esta ctlpacidad ntrlnsec:. de crocimienl.o tanto en
la embriognesls y el desanolo como a lo largo de la vicia del individuo Atgu\8$. oomo las precursotas
hOm<'ltopQylioc<as o la$ epiteliales. con vida media muy eot1a. eXP8fW'I'Ienlan una prollfef8ci6n constante para dar lugar a
MECANISMOS OE TRANSFORMACIN DE CE LULA NORMAL EN TUMORAL
415
otra&IOO(;h<ts clula$; otrt'$. c:;omo IM dt$1n de dlvldl'se una vez difetenclildas. Salvo stas. todaSICI$ c6h,.113$
se renuevan contnl.amen1e en un ele celular'. En condiciones fiSIOlgicas. se requiere una eslricta
getttiea para mantener esta homeosla&IS o equilibrio ooh.Jittr 'orm<' a las neoesidaoes de cada
tejido. mediante la oontraposk:l6n de dos proce&OS:
La IOtmacin por mltosi& de nuevas OOiul<a$ (en el ciclo de <JiviSi6t'l celular, tema 9) determina la 1858 de
proliferacin. Se asocia a un pr008$0 simultneo etc <iferel'l(:iaelon celular, partJCular para cada tsjtdo o estado del
deSarrollo (aspecto que no se considera en et pteSei'IIC libro). El eontrol de la prollferncl6n comprende dos grandes
MPectos. relacionados pero generalmente no COI'ISider<ldo& de lt' f<ltma glObal neoesarla para fac61ar su
sel\afles extracelulares (pg. -120} y lit del ciclo celular (pag. 422).
LB a.poptosls, muerte oeltAal programad<' o $Uici:Jic> es un frSioiOgico de elmnacln de clula&
al de su >Ada aci.JVa. como parlo del re<;0mbio neoeuril:> para OOt'ltrarrestar la fonnacln continua por
drviSI6n oelular. Igualmente. et1 la formaciOn oe leJidos (por ejemplo, oe.,tas del cnsla!ino y de la piel), eo
la 1'11Qtiog6oosis (por ejeinpiO, tormaCiOn oe 109 dedoe) y en la elif'IW'IaCIOn d4J oon d.Yio Los
do1<'111C$ <fe la apoptOSis se analizan po&teriormente (pag. 431}.
ltl a!lefaeiOn del equilibrio en OOfldjc,ioiW$ patolgiens (nooptasitiS) Cla lugar a un eteelmlento lnOOt'ltrOiado, (f.le
puede deberse a una G)(cesrva proliferaociOn o i!l Ul"'a reduCida muerte oetJiar Parece que normalmente el cn001 &e
origina por una conjuncin de ambas
;;
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41 6
BASES MOLECULARES OEt. CNCER.
30.4.2 Genes responsables del cncer
Las mUI8cb'les, presentes en las clulas eaneeroaas. que provocan la do lt't tuiT'IOf'ales
afeccan a genes cuyor. ptOdus proteloo!i regulan ra prollferaeiOn oeh.llat. ra apoptOSis o ra cerva.t
(etrYejecinw.lflto). La prolit.acin y la apoptOSis se estudiarAn progreslvamenre en esle tema. deSCI'IDienao tanto lOS
rtlea'lnismos 'IOrmares de 1egul&cin como sus conduoente& al cnoet.
Primeramente. debemos C!eflrw la e:<i9tet'lc:ia de dos tipos ele grtu'les. cuya se reraoona con 01 pr()(;Ct$0
cancero&O: onoogenes y genes (y sus pt<lctos respectivos. y prote.iMS
oncosupresoras ).
30.4.2.1 Mutacin de protooncogenes: oncogenes
a) Concepto
Se aa er tiOmbre de oneogen a ra torma mutada de un gen f\Ofl"NNII o ptotooncogn que eausa canee como
consecuencia de uf\8 ganancia de runeln" de la protelna por el gen. El ptOCOOnOOgtl eodll'ica una proteina
normal, generalmenle relacionada con la proliferacin ce....., o la apopto6is, acti.a slo cuando recioe senales
reguladoras especificas. Por el conlrario, la forma molada u oncovin expre<sa una protelna anormal (oncoprote1na)
Que :se mM!icne ttt:aivt'l de las sel'lales regutadoras. I)C)r 10 Qut el r0$1.11<'00 es un<l 98f'l(ltiCi& do
tuneiOn ese le proteina. Se pueoe dec:.. en conseeuet'ICifll, que ros oocogenes son el resullt'tdo de una multtein
actlvadOt'a de la tunciOn I'IOrmal de 109 protoonoogenes.. conduce. segUn lOS e&!IOS. a ul\8 pfOilerac:in
desconltOiada o a una apoptOSi& rel)ti'nida y. en definitwa. a la aparicin del cnoer.
fundOO 1\oi'Jiflllal:
onln) l pcilim de prolifl:fflcin
o C(lfllrul nceuh '' di! llpopiQli s
b) r;pos e piOiooncogenes
Se llan Pf'Ot<:IOrooo98fl85 Que codifle.n nwy
Factores estimul lldorcs del c111cimiento celul.at. La mutaciOn onoognlca otlglna I.W\8 prodUCCIOtl <fel
factor jl)Ceieo o una mayor de s&e.
Ejemplo: el ptotoonoogt'l sis oodiflca la cadena 8 del faelor de crec:Wnienlo aenvado de plaquetas (POGF).
418
BASES MOLECULARES DEL CNCER
30.4.2.2 Mutacin de genes oncosupresores
a) Concepto
Al igual que lOs l)f"OIOQn(;Qgot'IO$, w tnltct de 98flEIS que causan cncer como de una mutacin
experimentada por la fom'la normal, llt'mt'd;) gen ooeosuprnor. gcm su.prnor de tumores o anUoncogen (porque su
aedtl es OOI'Itrari& a la dtt los ona)genes, -..IQUo lt\ .;c,.ron por un distinto). la forma nom\81 del gen (ge.n
onc:osupresot) codlfic& una protl!lna normal (proteina o antionc:0f116ni ca) que aell.ia detMiendo ta
ptollleracln o bien InduCiendo la apol)lo$1$, CuanCIO una mut3Ci0on dol gen (gen onco&A.4lf9$0r oonduce a la
slntesis de una pr01erna no f'l..w\dooal o esa slntesis ("prdtda de funcin"), prolikwacin deja de estar
oomrolada o la I'U'1C8 liene lugal. por b que aparece una prOI!Iereein e:xoeslva, a menuoo eon <'QJrrU;IIein
de gc:tflticos en &a$ clulas, Dicho de ocro modo, la versin mutada de un gen or.cowpteSOr pjefe su 1\.inein
normal. regulndor<t do 13 prolifor..c;.On, y da lugar al cnoet.
cr1 lll)m1al
gen oncosuprcsor,
ge:o supresor de tumores
o 31llionc o
flltt!aoOn gtn oncosupresor
funcin I'M)mlal:
nuol O(l;;lth o tk prolifcrncin
o> oontrol poshh o de apoptosis
b} Tipos de genes oncosupresores
mutado

pro>tcna anmala
(thJ
h::. a protcina
""""'' (l ''"""
no hay proedna
C$Cimulo

Al Igual <JI'8 los los genes on00$upre:&Ores codifican prolelnas que actan en distirrto6 p..Oo& de
las rvtas de del oontrot del cielo ee1u1a1 y ele lo ac>OI)tOsis:
o Factores Inhi bido'" det crecimiento celular Ul tnulaein del gen oncosupreSOr Or)fTeSp()tldiente -.In ,.,
fvneic:naidad la ClfQteina Sin4&1ll8da.
Ejemplo: el gen OI'I00$1Jpre:&Ot dcc oodffica una protefna de adhesin oeUat. ausen>e en el carcinoma de
colon.
o Receptores de esos factores inhi bidorn o de hormonas que frenan ol crecimionto celutar. la forma mvtada
del gen onoosupresor codifiea un reoepeor in:&cnsiblo a su liQandc:) o que no translrite la $8!\al al interior de la
clula
Ejemplo: el gen onoosupresor oodlflca el receptot de membrana para el tactot !l de crecimiento
ltansfonnante (TGFI}).
Protein.11s c:itopln mitic;.11s que i ntervienen en los sistemas de tt11nSduc:c:in do sel\:l.los a bs
recoptont$ U'! sicu&ci(ln varia segUn sea ta hJnOOII cooetela de &A ptOteifla..
EjemplO: el gen onCOSU(ltesor n/1 codillca 18 neurotbromlna. proletna que estimula 18 ac:twldad GTPasa de
R;)s. on h3(;1l'latodO Wt 422). En la enren'l"'edad de Reelellf\9hk$&n. el gen nlf es
mutado (pg. 362). pot 10 que la neurofibromlna es defecbJosa. la ptOtelna Ras no libera el GTP y queda en
fonna acciva mas tieri'IP) del normal. &a proliferacin.
Fact0fe5 de tf01nKti pein que dirijan la exPresin de genes cuyos l)f"Oduotos proeeieOs frenan el Cielo o
producen apopt05i& t..a fonne mVIada del gen onc:osuprosor exprese un' proteina no lunciOnal .
EjemplOs lO$ genes onCSul)rcsores Rb y 1>53: se estudian en deudle mas adelante (pags. 430 y 431 ).
Protcin.u que frenan el ciclo cel ular o produeen apoptosls . El gen mutsdo no expre-sa ta ptotelna o da lugar a
Uf\;1 f<lrmtt no funcionnl .
MECANLSMOS DE TRANSFORMACION OE CLULA NORMAL EH TUMORAL
419
Ejcmp&o de: gen
oocosuprcsor
que frt:na el ciclo
cd ulllt
Gc.-n inhibidor: gc11
C\lya
(de munC'tll.<;) 11
(rcn:at okl


en mul:uk. 111 p!l:ll('il!a f\'l>ullli
wbt\:t\J'Irtsll\kl <l se
(n;na <wtSuml'ICnU: el
1..- cEiulll .. di\ id..- u_,..l'S de nottu:d u fiQ 111
1111>!1.' dcfl(:icnc cr..-.:imienUl)
ptl<'lbk lullu fbosw oon \lUC clmdi1id110
he!l'nx-ig>tlliCI. parll d bCI1 lllUIAd)
\
mnla d ci rt
l naclh'ldQ
gen rnoutldu.l:a pn.Jil1lll
SC SIIIICUllJ (l ('S I!'IIICII\ ll
11\'1 :;< l'lt'rm d llatltA W.
C\C)l\"1 l'.torlh\l:td

e JfiCQIIU\ll .u:b,
quo: SCJi gt:i\ (' SI(J SI CIIIXhHdOO CS
Jl:\111 d sen roo1ndu.
En ('ji C<*SO, al n(lrm l se k llnmn
GI:N ONC.:OSUPRtSOit O l>t 1 UWORtS
e) Caracterislicas ele la expresin de los genes otteosupresores
A difer$1'1Ci& de los oncogenes doncse un soto alelo mutante alecta at fenotipO de la celula, la prdida de la funan
de un oen onoosupret;or lo $0 Pf'Qduoe OrAndo han rntJiado tos dOS alelos (individuos homoclgOtloos. genotipo
OtlCO$upreSOt rntJiado-oncosvptesor mutado. o pp). Es decir, la fonna mutada de un gen onrosupresor se expre:sa 00t1
caracter (pgs. 96 y 395). Es10 es a&l pue&to la mut<w;i6n pnx!voe l)r<!idi! Oo l'vn.;i6n C..'fl l<t
i8s motcul89 de ptO(eina sintelllada:s a partw del normst $Uplir C$& lA 111enos parcitl!rt'lente. Al
IgUal que en el alliO de los onoogenes. la heroncio de tos gene. on00$upre:sores tnutl'tOOs es ta eoesi)Ondiier'lte a su
reoesivo. pero &6to bef'le Jugar .;uanOO 1<'1 ml.ltn()6n 1\3 a e61utas gertnir\81es (ptg. 434).
La probarblldad de muta.;i6n omiltic<'l on los 00$ <'liCIO$ de l,ll\:l misma clula es baja, por 10 que la hOYlOCip()SiS
generada dfJ novo et; mvy infrocucn!c; sit'l embargo, lOS .nc!tiOuos heteroclg()liOCl$ en un gen oncosupresor (que han
hetdado (!lelo mul<'!dO) tienen predispoSieiOn a la apariCin oe Cilnoer, ya que slo necesitan una rnutadn somM!ca
el otro nielO p{Jffl perder totatr'l'lf!f\1e la lui'ICiOn <le la protefna onC08upte&Of8.
420
BASES MOLECULARES DEL CNCER
COI'I'Eisponde estudiar a oontlnuacln con detalle las tres rutas que regulan a. celular y cuya altetacin
conduce a cilncer:
1. La transduocin de sel\ales extraoelllares al interlot celular Ms.la ooneew (;(In fl CielO celular.
2. La rogulaan del ciclo oetJJar (proceso esi!Jdiado pte'<iar'l"'MMe en el teme 9),
3. la apoptosi& o muerte oelllar programada.
30.5 CONTROL DE LA PROLIFERACIN POR SEALES EXTRACELULARES
L8 seMiiz:30i0n .-tic;iOOtt PQf mol6<;v13$ Oldernas a la clula en general, el mecanismo de control de la
pro!lletaeiOn celular, de la del ciclo celular JXlf otras molculas intracelulares. Los
mecanismos PClf tos que las sel\tltes ex!raeeuares dan lug;(lr una re&puost3 en interiof de la clula se conocen
gMerlcamet\4e oomo transd'ueel6n de la ael\al, constituyen un gnm $ig;ni(IClldo en biologi<'l celular e lnterwenen
no slo en el coniiOI de la proiferacin celular, sino tambin en la respuesta tisiOIOgiea a unt' gr3n de
sustancias, como parte eseoclal de la fl.lnciOr\ de tos dl$tin40$ tipos celulares Se ostudian aqui , de forma sucinta. 1M
sel\ates procedentes del elderiOr que a 1<1$ rc$0Vo$1as irflracelularos <Mt en (ltimo e.xtremo el
ckiO oei\Mf y. con ello, la tasa de proll!etaciM. Autlcue se conocen l.l'"'biM 001'1'10 Sef\A1cs mitgenas. OOberia
reservarse 8$18 lmWlo para 188 sustancias cue accan estrictamente sobre la m!toe.ls.
30.5.1 Tipos de seal
las sel\ales que fWYoreeen la actividad del cic:to oea.llar se t:Oilooen como posi ti ..,u o cstimulador u . E.xislon
tambin seflale& eWac:elulares negatt>las o inhibidor as, que acttJan frenando la actividad del dc:to. En ambos C890S..
60fl muy variados bs tipo& y ceracter!s.tica& de tas molculas cue al incidir sobfe su oi!Je diana actCtan como &eftai, a
11<1'16$ ($e ii'I1(11Qtei(ln CQn IOCOPIOit'S O:sPO<lifieo$
Tipos sealizaci n
Por molkulat secretaela.s
Setlallzacln autocrl na La diana es la propia oUa seaetora
Senallzacln paraet1.na la clula &eeretof8 y la clula diana son adyacentes
Senallza.cln en4oc.rlna (u honnont"l) La socrot.Qf"a y la c:Oiult1 d*tlna 9$1jn l.a molo.Jia &OI'Il"l
(hormona) se transpone por la sangre
Sel'ia!iz.aciOn i ntraet'lna
La moleufa senallntemoclona oon un /r'lltaoeuat en la ptopla
oUa
Sefla!izacl6n shptica Lit moloofa seal (neurotran511'1i&or) e:s secretada por \KICt neurona e
ntcraccioo.a con el receptor en ob'a neuona o en una cUa muso .. dar
e&tn en estrecha proximidad (&ir\apsis)
mo!4eula& unida$ a la membrana lnt.ornocin do mo!Ocult'& de membrill\il eon 1'906'Piorc& do
($eoliUC:iOn y uxt:.puesta o yuxtaerl na) membraM de la oUa diana
unlOnes comunicantes Conexiones <*ectas entre el ceoplasma de las dos olulas
Moteulllf. se.at
El ........
Factoru de crecimiento Faaot de crecimiento epidrmico (EGF) y
factor de c:rocimion1o dori..,OOo do plaquetas (POGF)
Hormona.
Pptidos y proteil\ill$ HormOM$ pancreMicas in$Uiir\3 y gluCng6n

Hormonas 8drenales y seX\.Iafes
Derivados de amlnoacldos
Hormonas tiroideas
Neurotransmisores Slo son relevantes en las neuronas
Ot<05
NvcletiOOs, rGtinoide$, derivados de c:iclos grn&06, :llido niltioo.
montuc:ido de carbono , ..
Tipos de receptor
lnt,..cetularas en ciiOSOI y nUctoo, que unen molecuiM seal
hielrOfObieas
De superflc&e cel ular Protelna& lntegraies de menCwana. qua unen molculas setlalhidrofUicas
Con actividad enlimtica intrlnseca E,emplo ti10$il'l<l quinttSils. como el de POGF y ol de in&ulin<J
Asociados a canales inicos

Asi*' proloinas G tril'l'l6ric:M L.M; prolelnas G estal acopladas. a su vez.. a canales iOt'lioos o a
.......
Asoclaoos a culnasas Intracelulares
CONTROL DE LA PROLIFERACIN POR SEALES EXTRACELULARES
421
30.5.2 Transduccin de la seal extracelular al interior
como se ns Indicado. ex1sten pe$ibilid01des do lrons.miSI(I de la se<'l, POr llrr(llic;:i(S.'t(;S lil
(lescripc:On se centrar en el mecar.smo de activacin en el que intorvieno lo R3.s. de numer0$0$
ptOOeSOS cancerosos. Su activacin es un paso esencial en &ti transOOccif'l de $C;!'We$ 1 muchos ftlctores
<le eteelmlento
wimu.lacio de ..,._..:.;---
fa woduin
CITOSOL
de fac-101\'S de
cnximicnto,
hKil\(lntl!l;, e'!.:..
ctLULA VECINA
ESPACtO
EXTRACELULAR
Y SISTEMA
CIRCULATORIO
mduccj'M'l (1 lnfubll.'tG'
<h: lu
1. la molcula sel\al actUa como l igando al interltCcionar con afinidad y de modo reverSible ton el domi nio
utracel ular de una prote-ina especifica, wyo domi nio hidrofbtoo est insertado en
la bicapa lipkka de la membr.ma. EJ nl)mcro de de tipo concreto en e3d& olvla e& mvy vanabl&.
oetde cientos a mi!IO!\es. Ell e1 caso de la ruta que activa a Ras. 18 sena ptocede de dlvet'SOS reoeocore$ el
factor de crecimi!J,nlo de (POGF), el de c::rocim.cnto (EGF), la in$1Aina. etc
2. Al unirse el ligando al receptor, ste se estmuta. En et caso del receptor oe POGF. torma ull dlmeto '/ se activa una
ectMded protefna Qlktasa lntrlnseca, c::onetetamente del tipo IW061f\8 (p&gs. 327 y 425), &oslotilanelo, con
gasto de A 1P. el dominio prooio o bien proteinas
3. El paso que lltunaretr'IO$ t easeaoa de ltallStnisi(ln oe ra rO<Ji;(<'lriiC por v<'lri<'l$ YiM en la$
que, en general. se prOCJueen r'I'IOC21eaeiones et1 la oontorrnaeiOn de ua prot.eina que "' su permi!.(tn 1<'1
ll'lteracc:IOn COil otraa protel.rm ' adaptadoras o su fosfOtllacln.
4. la propagacin de la &etial contina medtante la activacin de ta protelna Ras. protelna G r1'lOf\OfTirica
(tambin lamada p21Ra:s, por su masa de 21 ltOa} . las ptotei nas G actall en nu!T'IE!fosos procesos oomo
"interruptores moleculares. al poder pasar de su lorma inacdva, untda a GOP, at estado activo. uniCia a GTP
(\lanse como ejemplo algunos faccores de ttaduocln: etF2, p&g. 310; eEFh:t y eEF-2, pg. 312, eRF, pg. 314).
En este caso. el complejo activo Ras:GTP transmite la sena! medtante su lnwaccl6n con ollas proteitta
cltoplasmiiC&s (protelnas activndolas, con b que oornlenz.a uM i' cascada de b'&nS<I!!iOn <le la
sol'\tal' Lcl oonsiguiomo del GTP per Ras a sta al 9$18do Interrumpiendo a&l ta
transmi9i6n de sel'\al has18 <PJe Baya un nuevo estimulo. Debe atladlrse que aunque Ras fue la pritnera CleSCI..Ibel'la
y es la ms .nporlante. 8Xisten otras proteinas relacionadas que forman la familia Ras e Intervienen en vatlOS
prOC::0$05 celutaros (CQmO Ri'Jb. Rho y Arf)

cuudc' m * bluquiM
00 .U lr*"M:fll'tlllll
.,._.ndicnee & \a ..:ltll
alteraci6n lre.t:uMI.e en unl propotein elev3<1<'1 tum(Ue:ll de colon y l)(lncre<'I<S) ft &a
ftwtscln deJ gen ras.. dando lugar a U"'8 protena Ras que e$ Incapaz. de el GTP. por le) quo perm{ll'll)(;$
continuamente en su fMN Ras GTP, desencaenandO ut'l3 .senal de proliftf<leiOn eonlinu(l y no rogut<'tda,
responsable de dichos c&ooeres
5. protetna efectora activada por Ras produce a oontinu9Cin carrdoe de oonformaan o f06fonlaaones en
3VOEt&l'lit$ pt040lnat eotnpQnentos do lo "? aascnda de !!el'lnlcs.", entro los que R1d, MEK y MA.P
qulnasas.
6. FW!almente, 81gU'Ia& de estas proteJna quina&a& de la i!' ac:tVan $0\lnt 1m factor de transcqK:in, ., que
f0$forilan Como c.onr;.e.cvcndoa. (ls.tc su oordorml310i6n 10 que- le pel'l"nite utlirse al ONA y aetivl!r o te<)t'itflir b.'l
ITanscripc:iOn de goi'IO$ ospOciflOOS qvc; eodllieao las protelnas. .que regulan el cielo Cf!lular y la apoptosls..
30.6 REGULACIN DEL CICLO CELULAR
Ante!\ de descflbit 109 detales de la regutaclon. debe indicarse <l'Je la repet!do Oleffada y contr'Of.ada del ciclo
celul&r def.ne s;v (luracin caraaerlstlca, es decir, determina el grado de proliferacl6n normal de fas clUlas en cada
1eji00, Cuando 1a ptQiiJerac:iOn celular es conhnua. exceSNa y OOSoontroiBCia se origina el cncer. Como se ha indicado,
t$l0 set OOI"'Setuei\Cia del acunulo (a .. -eoes CiJmnte anos) e alteraciones o muladooes en
klS genes anterloonente descrttos {por e_empto, ras). Analizaremos previai'FIGflte lo& asPI)Ctos dol prooow
""'"""
30.6.1 Puntos de control en el ciclo do divisin celular
la regulaCin del OCIO oo en ttO$ J)IM\105 bien derlll'lldos, que dependen en SY de las condlclooes
itfnbionl<liO!'i mh (nutnentes. 1emperarura, sales) y la presencia de los de creciiTIIGf\40 celular
n:es.'Jrios, t.ot: dOS C)t.ll'llos <1t OOtlttOI ptlnCJC)ales se s11Uan en ia inleffase. ooncretamente en las lrans..ciones de Gt a S
y de Gz a M. El punto se iOcaliza en plena miiOSis. Gradas a este tpte OONrot las ohJias &lo inician una, nuev<t
fase de dNisl6n cuando se han currpdo las condiciones necesarias en cada punto y se ha finaliZado la rase anteriOr
UWz:afldo un sknll. ceo.a puflto oe control aCIUa a modo de "freno de l;t 9lap.- previa Cut'lquitf an(ltmtlf
en uno de (!lo$ hace ccw ltt diYC$iO v lt' consiguiente ptQhfetaei6n oelllar.
REGULACIN DEL CICt..O CELULAR
Pregunta

?

423
interfase
?

Elpnmero $e denOmina ponto de control en GtiS. Ocurre cerca deii'J'Ial de G, (211, 2C). antes e entrar el\ le&e
S, y una vez superado se dispara la repliwctOn del ONA. Este $0 llama 'oicio on ICva<f\lros dCi gcm<'lon
(oomo Sacchammyces eerevis.ICle} y pumo Ro detttstriocin en mamfferO&. donde es el to11tf'OI pnnc1pat del cx;lo.
Al & la tase G1 la ms prolongada <S$1 ddo (6-12 h). es en ella donde ms Jn.tervronon l<1s con<.icioncs
eldracelularos (por .ornpiO. del mc<fiO do <:l.l!liYO), el Ur1IOO punto d<lnde eielo a sellales e:o:lerna$ y
progresa 6111 dependlmcia de estlmukl$ mitticos B P<IW por est.o pvnto lo rtgult'll'l 13$ prC)I(!in.olS ntr;)etlulnre$
llamaoas dclfnas de G, (pag 424),
2. El sagvndo, o punto Ot oontrol en G2fM, 'OCUlte <le G2 {2n. 4C). MtS <1(1111'11(:ic) de 13 niii()!U$ M. S. la ckAa
no sopera %te pomo, pcrm<tnocc (;(In ese conpiOmcn(() doble) de dl)l1101fl ctOn'()Sc)miea Su (Se(\uegular.ln puede
f;8r mport<lnlc on l.:t El paso pot puMO lo tegu\an las protelnas lftlracelulares
1131'1\BCaS ciellnu dt G: o mittlcas (pg. 42-4)
3. El tercel conuoJ. punto M, se ejeroe du1ante ta mitosis (2n, 4C -+ 2n, 2C). enll9 lit (crofl1()$()01a&
oonc:k!Mado& dispveslo& (:n el p&tno d<t ltJ o(ll ul.;.) y t;J kt$ htlmi;JO;)$
vrlid(IS (ti hu$() miiOt.eo hacia cada pob cellell Asegura que &e okU no se diVIda &:1 hay erfOfeS en te tormaCIOO
del hu!IO aaoom!Uoo o en la alineaciOn de lOs CtOmosomas et'l la placa acuatotlat Es ef punto de control cuyo
mecanismo es menos conocido y oo se detallar en este laMO. pero postl(emeote depende 1amb1n de las aclinas
mlltcas.
(,1 fi-. .\RIO pnnkvtar 1ur b dtl cide rt'lul:u-
l.tl< <.: ftOI)Ihrnll c.on y
u tud.J cu .Se la "-1'1'('
,.,J. 1
< on
p1'11(till.l.-" numOOul. m CUI'N'IoU, eon b pnmcra lclr'.t en lllll) !btul;;a,; l'dc2
& '*'" (/; ,.,..,, t'!dc'.
CIC.IIl<le ccll.lrl,
( ' dk .. ndJ-.it-(1f1.4vlf qUIII;!q dctll.'lldkflllc: de- ctehlll. Se ltllld de UN de l!fiiiCII"!'- Cf!IIA:U\Idad
P"l'kiiW'QIIUI/Illl wM r:-.!IJW'I-dc lf>."tl!llllll d.; dc1''11111n<Foh1 So>f> ... Co.'IJilll
quin.llQtl cuando uum C4lrl 111. Cldt.UII.
C"lrlins rnio;mlxn do; un11 lllliludc que \1! unen u l1\ f!llc;;tlll< (_'dk IICIWillld''""'- -.u llfC.:*dc:
la!> que t':\lll.'tltllC!IU W. ni la dJ11k. t'll pwakltt t:UII el C.ll) d.; di\ ftl\.111 "i.;
ela..olio:;m en d-t" G
1
O MIIOCI )" ciclitt .. \ C: ot
424 BASES MOLECULARES DEL C_NCER
30.6.2 Protcinas que controlan ol ciclo celular
En puniQS dt QQ!t1rol G11M y G2IS moMOncn llpO$ C<llilctcrtstoos < proteiN$, las clclinas y 18'9 protelt\8.
qui nasas, qu& se :'ISOCian oompio;o. por<1 c<.mtrol(u la OJCtMdad dGI cido celular. Se ea..udl&rn
sucesivamente los oos lipos e pta(elnas yta .,cnvaciOn del COYI()Iejo por atnblt$. p,ara podef abordar despus
la del ciclo celular por fos opmplejos Cdk-dclina.
30.6.2.1 Clcllnas
El nombre de 91upo de proll:tlnas se debo.-. qVIt 111.1 1 o6Ua Aucb.iot de acuerdo oon la etapa
del ciclo celular. de estlln en \N etapa oonero._. y ds$31)3rteen dur.Jn'- l resto dol ciclo.
Exstan numerosas elcllttas; tas prlncipale!l en htlmatlO$ $OC'l A, e, o y E. de olla& %tiln
relaCionadas entre si; pcw ejemplo, las Oicllnas B1 )' 82. o IB!I 0 1, 02:, 03 y 04. La lui'ICICn e:xacta de 0!18!1 {C. F,
G. He f)se cooooe peor. ta cicllna F parece esrarlmpllcada en ef contrOl de la transld6n entre ras tases S y Gz.
a) Ciclinas de la fase G, o ciclinas de inicio
SM aqui!llas qu& inlei'Vienetl el punto <1& oonlrOI G tiS En hul'l\llnO$ pOrl(lnooon a o&le grupo
cicllnas def llpo O (01, 02, 03 '1 D4) '/la oclina E. Ambas se SinlebZan duranle la fase G
1
{por eempiO, al la
clula en el ocio desde Gol y 6ll conoencr9Cin celular se regula por lranscripcln. Debido a &tl rpida degradaan.
tieflen UM onda media oorta (unos 25 min para lar. o. El balance enlte sntesis y degradacin llaoe que aparezcan en la
olula .-t G1 y de-sapar4tlc:ill'l dur.tr!Co la fase S o t!l iliCtlbar d51o.
Cic-bnas de G
1
o de inic-io Ciclinas mi1tkas () dc- 0
2
fJ $f\UM del anillo
"'"'cn>!t 1 amanllo)
lndu b Cllllli4W
dtali:lprukW
pn...cmc C'n la "tula
a. ad.l mmncmo
lkl n.:.lct n:Niar
b) Cic#nas mitlicos o ele la lose G 2
Gml.tii;H; * .\ .... oJ
-
l..tllctcfmas- proldmu en 111
dlulll ,ufe _.,..tn:coo
del cido.. dtbido" y dcgtW::IdO. a
di:..IJDI\If pmloJl dd niiQII millllpt.."'
t1dirwl. que k' lgtllpan l'll dof
Es.te grupo, fotmado por las cicftnas A. Bl y 82. regula el pooro de conlrol Gl/M. En esle caso se mtetzan
duran1e la& tases Pftt\'189 a la mlto61s. (S o G2) y se degradan rpida '1 especifie:amenle durante la mltools. La dcllna A
patli en el control de la replicac:.in del ONA y en la entrada en miCosis. La ciclina B. que KAo en la mitoGi&.
&e la cicfina por antonOmtl$iol, ll'U'O' 0$ L.. hQm61og;a mt'lmik:rof 13 primN<'! ill
comenzar el "tudb del oontrot df;l ciclo en los OOCdO!I de la mna XIJMJpu$ 1M111S' . la QU& fOrm:. <!et ltJCJOr'
pro.motor de la madUracin o de la fase M (MFP en .,gls).
30.6.2.2 Protoina quinasas dependientes de ciclinas (Cdk)
COMIItuyen una eamma de protetll8S oon una gran hOmoiOgla de secuencia (supenor al 60%), que foslotilan
residuos set'l'ta '1 treoi'IWI de ptotelnas sustra.to especificas. Se trata. PQf t.anto, de &EWV'Iahreonina quinaS8S {pg 327}.
Sin embargO. slo pueden GflWC8' eN <1CIIV1dOO ontlmMietl cuandO osln 0$0Ciitdas con Q(;lin<': por ello, las
llama quii\8S8s dependienteS o COK (do Do <'CUerdO con elo, so eorttldtl'3
que en el complejo acbvo le; C<!k n 1;, tiUOOnidad <'.Utalilica y la ciclinil &a
Lll u11tc'ln. b n d 1n.t
b 'I(Uin.;bll
1 Cllk) a'hH >"
.. l ( 1, 2. ]

1 ...
ruc4e Ullif 11 dilllmU:c (!(}j!Q$
( 111 :! eu lupr !k la 1).
telllltllik! CllolllfiCe!; :..:th id::Jd
p:1ra d!!oollnla. 'O
prntclll;l$ j;lff .. rnlu eol . S. O)
426 BASES MOLECULARES DEL CNCER
Oclina.s dG Ciclinas de Gt
Otros CieliMS menos conocidas
A
B o E e
F
G
H 1
Cd<1 G,ll.1 G,IM

Cd<2 S
\
( G,IS) G,IS
""'
Ci
1
qut
Cd<J
G,IS
el cid'-" C.



-.ciacwlll.$
Cd<4
do: cic! ICI$
GIS


Cd<5
00" ..
( G,IS)

ricto ,.n d
( lltO.:iltciOiu.:s ..S.: Qlllli
e
]j Cd<6
pumo)
G
1
1S
t ll)\'l de:

lfl<lkllll()
oomrol no te
Cd<7
./
Cd<B
por una J
./
?

SIG,
30.6.2.3 Actividad de los complejos Cdk-ciclina
L3 3Cfut;)Citl de las Cdk como proteil'l& QL6\8$a9 no consiste simplemenloe en su unin con una cidlna. M\0 que
sv deo)etlde <Je o1ros mecanismos:
ll} La poSibilidad de cue se 1otme el oomplejo Cdk-dclina depende de la disponibilidad de ambas proteina&; PV8$Io
que las Cdk etiln pr8$0n10$ de Jc>nntt oon!inua etl la clula. soo laS clelinas las 4Je regAan.
a1 ) Tasill de sintcsis de las decli nas: oorno se ha lndJc:ado (pg. 42A), ia s.intes.fs est controlada en funcin de
&;t Cic:Jo, aumentando en Ciertos puntos del mismo, diferentes para las ciclinas A y 8 que para la&
Oy E
a2) Tasa de degradacin de las ciclinas determina, junio con la sinl0$i$, 1<1 CQncenltl!oCi61'1 disponible para SIJ
a las Cdk.
b) Ur\8 vez fOtmado el complejo Cdk-ciclina. sv QOti'IO Quinas& est SOI'I'Ielida a regulacin pot 01raa
protelnas.
DI } d& 1 Cdk pOt' fosfOt'il;acin y desfosfotilaein: la actividad 0e1 complejo
la <te c:ieftOs reSiduos atnk'loacldlcos de la Cdk y no de ot:roe, lo cual fttil regulado por
dislint;a; QUin<)sas '/ toslal8Saa, que a su vez estn reguladas po1 la propia Cdk activO' (v6ns. r.gur3 _.
Ptlg. 427).
1>2} l l'l.tetaeelt\ de &a-s qulna!N:ti con prot9:inn el Ul!imo me<:31'1iSmo reg.AadOf de la actlvklad de
k>S COI'I"'I))ejos Cdk-dclina se ba&e en la e.xi&kncia de mvcl'l3$ C)I'OteiM$ que se unen a laS Cdk. Inhibiendo
direc;Wff'ICO'lte su &Ctiviciacr. se tes llama JnhibidOtN el$ los compi6Jo:s C(Nc-cfcNml , o CKI Sv eto;to es, por
181'110, bloquear el ciclo de divisin. P k) que QOti'IO {Pilg. 418).
Los CKI se agrupan en dO$ f<Wnilitts. on 1\JnciOtl de su estrucruta (exlsle sln.dud de sus secuencias), modo
de aocin y especffic.l<'d $Ystrato:
familia
I'IOn'ilre de la
otros non09s aocin inl'libiOota
proceina
p21
CIP1 WAF1
Preferentemente sobre lo& complejo$
KIP
p27 KIP1
Cdk-eielina d6 G, y S.
En menor modidJ. $Obre
p57 KIP2
Cdkl<idil'la de e,
p16 INK4a MTS1
p15 INK4b MTS2
$Obre l()s eomp!ejos
INK4
do <:ielinas de G, con Cdk4 o Cdk6,
p18
INK4;
pues compilen oon las cic:Mas O
p19 INK4d
ARF
REGULACIN DEL CICLO CELULAR
Q11hUu
(Cdl)

La prt'kll(ll \!(; fe.fOT)T
11!1p!lk;
(\ll...:ic:liN!
dottocnd.u. .li'IC"\Cil
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&im m:.o:u-o (I(II!WI
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ddou o:ch ... lr), balaiX'o: cmrc w


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1Nctico, que IK1Ua la
C&-2.5
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1
1kj!) c.n <ttl on
a<1h (1 o;tllOJ '-IUJI!a)ll
427
30.6.3 Regulacin del ciclo celular por los complej os Cdk..ciclina y alteraciones en
el cncer
El descubrimiento de la relacin entte dl$tln10$ prooesos y las alteraciones en algun06 genes,
especialmente aqulos oon un papel clave en el oon!fol <let dCIO celular, 1\8 pen,itiOo 13 tr<l4oendenoo y tos
de Mtcionamiento de este ooncrol. Olstinlas alleraclones en la$ pr01eif'\8S que ' C9t.lan - ( ic*) de <:ivi&t6n
celular teno (;OmO COI1$0Cuencia la <ivi&in oelular exoesiva o IncontrOlada. <1anao lugtw a ul'l3 prOiifert"cin
celular deSmedida con awmui8CiOn <le 8f\OI'I'IIIItitts genetie.s y fi$iol6gica$ en la$ otula$, que pasan a eonsallulr el rumor.
428 BASES MOLECULARES DEL CHCEII
30.6.3.1 Estlmulos de progresin por el ci clo celular y oncogenes que los alteran
Como ya se ha descnto. el avance por el OOo oelltar se 01 grande:$ rasgos on dos puntO&: fa sfn1em y
degradaeibtl de clctlnas de G., seguida de ta ectNaciOn de sus oomplejos Cdk<ic:Cina. y la etapa equivalente La
aclivacln de estos complejos conduce a reS4)00Sias vanadas, mediadas por fas protelna diana que resultan fosfooladas
pt)t la actillldad Se mueSlra a oontlnuaac'l una v\:s;K)n global de es1os dos puntos e actiYaarl
;djn,a!f; .. 4S
w ,Jur.ntc 111
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de mk Ci
1
REGULACIN DEL CICLO CELULAR
429
Esta estmutacin normal de la ptQSJre$1n pOr 01 <;iciQ puede alterarse. tot'lduCendo a un cancer. La mu18cl0n de
crotooncoocnes Ql.lt estas proteiMS es1imJiadoras del cielo lOs pueden ttttnsformar en onoogenes. Esto
<>eune cuando tas oncoprote*nas respeaiva& actan sin obeOOccr a la una es.tintutaei6n
conbrluaaa oet dciO que oonttu.ce a la proiferacin GXCEI$l'Vil CCIV$Mie cilnoet".
Ejflf'Tiplo de ptotel na reguladora del ciclo
eetulat, codificada por un protooneogn
Ciclina
Efe<-to oneoginiw re&uft.11ttc de
Slntesls. excesiva
Slntesis no regulada de acuerdo con el eido
Sinl$$is cxotsiva
Actividad quina!UI e .. u::eslva o de la LR6n de la ddma
QvinttS<' o protetna tosfatMa
acliv<'ldoras del Cdk<:ldlna
Protelna qunaw o proteint1losfolltlt$<'1
inh:bdoras del complejo C<!khna
Slntesls o actiVIdad excesiva&
Proteif\8 no
30.6.3.2 Estlmulos de detencin del ciclo celular
La regtAaeln normal del ciclo depende del balance entffllo$ e;timvlo$ que le) y lOS negstrYos o
frenos que deolienen el ciclo en 10$ In!$ punto$ de OOfltrol. G.IS. G;IM y M 423), paa la correcta
preparacin de la oluf.a 1<1 fa:se igvientc {1* ejemplo, que se haya con'C)Ietaclo la repllcacl6n ante9 de que se
OOfldense el genoma y se divida 1.a c6h,.lal). Por ClhOfl'l , lO$ me(;3nismos de oe e$$0s estimulos negativos se
conocen peor a escala molecular que aqullo& lXX' lO$ que 6cnc 1193' el eonln)l pO$ibYO: $in embargo, ooneeplualmettte
541$ impicaoone& en la norm;ll y &!tetada el eaneer 90n Similares en ambOS casos.
.......... . .., ........
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la aparicin da ccincer ClOf a!tet<ICIfl del OOfltrol negativo ton'O$(l(lflde a gelll oncosu(!Clt$0r'8$, o $\lllfescttes de
t\W'nores, wya lui'ICiOn noti"'''BI es el CiClO y, al vetSe rr.rtaoos. Clejan de !\&CeriO (p&g. 416). Como consec::uei'ICi&, la
ol!lul:. replica su DNA y se CllviCie pot MitOSis sin aleflcler a lOS puntos de 001'\tiOf y, Cl'l 00ti'S6Cuenc.a. prolifera
430
BASES MOLECULARES DEL CNCER
elleesivamente y acumula <*feaos (por por una mitosis premall.lra ames de que se haya ootl'iplel:ldo
la Er\ln! IO!l mUitijlleS genes svpe$Qles de de"'ilot, lo$ mejor "Miiados &On Rb y p$3. CU)'O!I
productos ptOI.OtOO$ actUan SObre 13 001 cido. A :&e dclall<m $V funcin normal y su impkadn
en el cnO(!(
30.6.3.3 El gen supresor del retinoblastoma (Rb)
El <ht pt\XIi$9C)Sicin herocM;,nia para sulir retJnobJutoma, un tipo i'lftecuenle de cncer que
aleda a Jos Ojos, petmil:iO un gen (denominado R(J) do .,_ 9:1 0011trof del ciclo oelufar. Su
ptOOIJCIQgnleo 1<'1 del rehn0bla$t0ma (Rb. pRb o p10S.Rb. pot su de 105 kOa). &e enouenua preseote y
a:;tU. on el control de .000 14)0 nQrmt'IO$-i de <1hi su impol1ana g.oneral. en contraste con el carcter
r0$ttingi<IO qve dt $u AOmbr6
La proleJna Rb se car8Cledla por experlmentat cambios de fOSIQrii3Ci0c' a 10 largo del cielO oetutw, quo modul;,n
su acwldad como freno en el punto de control G1iS. Es!a actividad 'e dt<!be a la asociaCin de Rb no ros.lorii;\3 QQO vM
gran cantidad de otras proleln.as neoesarias para la proliferacin celUlar, en e$f)GCICII factoffls de lndueties
(piQ 269) c.:omo Myc y E2F

, ) M
Rh
l{ll<lfml .. ,.,bo.ta/
1 111*-'11\11
"'' tihl\''> ..... ,,\ll!i
prokiN' k b
"Vflill,l,l l 1 t t 01\
0.

(1
flllll'llll o.'ll \'.
fTuccU!Sltudo ... illlllai\'i)t;
r l'"(q3
l..a An11a 011 fnt.fcwilndu
dC' Rb l011
de
e nl*k lJ\IC" ao:lfttl
""

A, l),l;
En una clula notmal, ia protelna Rb est siempre presel\le, pero su estado de foskriaciOn (y, por consiguiente.
-tu &Ctlvldad) v$tla a lo Wgo de 189 etapas del acto. Los factores estlrralfadores del aeclmlerrto actao oomo setlal que
favorece 18 acti\laeiOO de bis protelnas Odlt. oon lo que a.n puedefl f05fotllar Rb y ardan su ef:to lnhibldor sobre
la progresin del octo en G1IS.
l.<t prdid;, o mut<tCIOn do (JO$ {atelos) deJ gen Rb anula ta turw:i6n de la procelna Rb, supfinW!ndo et
eonii'OI por Cdk y un premi'INto a tase S. Aunque &a iR8Cilvacln del gen Rb es responsabk! de
cnceces en dWer$0$ 1ejid0$. ateaa en espeoat a las olula9 de la telina inmadura, a la protifacacl6n
Clutar exc.e$iva et relinobtastoma. Los nil\os CJ!e heredan una copia defectuosa del gen Rb poseen un llnioo
alelo normal. pot toque es ms proballte que una anule oomptetamen;e t.a de Rb y t.,.. mayor
&usoeptibilidad al desarrollo de tvmore5 el'lls Attina
APOPTOS&S, MUERTE CELULAR PROGRAMADA 0 SUICIDIO CELULAR 431
ta aocl6n de la ptotelna Rb normal se puede vet tambin como oonsecuencla de aertos
virv$, bonct rx>t oliO :'ICCi6n promo&ora del cncer lndependletl.le de la mutacin del genoma humano
-o ..
l\ protc-nas \ lttCiiS ao:luiltl
Rb e impidiendo su $Cdn.
Ejemplos:
:unl"tno T del hlm<wal SV41)
pr 111cinu 1: 7 dd
proh:i na t; IA d-el OOI.:nonrus
No se la quin.a:.il para
E2f': del contrt)l G
1
30.6.3.4 El gen oncosuprcsor p53
AproQmOOmente el lO$ l\ltn(lre$ '-,m;)OO$ mu!:tciOoo$ en vn gen con ot 0001ro1 del
ciclO cek.l<lr, denomiAaiOO p53 PO' vn& proteinc. cvytt m;)$<'1 moiOCUil!r 05 kD<t e$t0 no Qvicr9 dOQJ Qve l;a
protoil\3 p53 MOri'Tlill $Oil Ja UnicJ <.!el 50% de lO$ tvmore$. PI.H lot mcJt<'Cione$ en otrO$ gene$ cuyo
cf<K:Io oombinodo C$ 13 enfermod;)d. 511'1 las leSiones del gen pS3 I:Cr'len un efecto claro $obre la progrcSI6n
neopc&slca.
El catcter oncosupresor del gen &e debe a las funcaone& de la protelna normal Wt4etiz.ada. que oonsls.len en
i nducir Ja apoptoe.is y actuar como freno n 9'1 punto do c;.ontrol G1IS. L<t ooncentraC1fl de la l)ro(eina pS3 en clula&
normales 95 baja. por 10 Que $IQ adQuiere relevancia en OlKMtCialle$ A$1, $G !'la comprobado oo imPQrlante
3umcnto do p53 <:uttndo d:t"O en el ONA (JX)f ejem()IO, t:XpO$iCin tt r<'(Ji;M;ionC$), cv&nOO se altera Ja
COiOCn!r:tOiOtl de en ta OhAa, en de hipoxia, bajO estil'l'dO$ el(. En 0$<'1$
OOtldiCiOr.es, aumettUil la COloentraCin de la protena p5J y se proiOI)!)B su vlea mE!<Ii8 (pasanao de 5-10 minuiO$ 1\3$13
150 m!nutos). La presenaa de dallos en el ONA es detectOOa por vanas pro<elna&, entre ellas una ptotelna que
fosfonla a pSl. La forma fosfonlada de p53 es un faCior de traoscripciOfl (pg. 264) que lnduoe la ex:tesiOn de alguno$
gene& y reprwne la de 01.106. Entre las protelna& wya aumenta destaca en prmer lUgar p21, que Inhibe la
actlvfdad qulnasa del COf'llllep Cdk2-clclina E. necesana para superar Gti S. En kJ98r. GADD (g(Owfh tf((tt.$1
on DNA damage. detencin del aecmiento por dal'ios en el ONA), una ptO(elna que, al igual que p21, secuestra el
PCNA. faCior de proce&tvidad 6 (pg. t-49). mpKIendo de este modo la replicacin. En consecuenCia. y ce
form3 $imilw 3 Rb, la fun<:i6n normal eJe p53 es 18 progresin del cic:iQ, QVot fl <*uta rQPiiQue ese DNA
daflado. Ms an, e9 po6lble que la propia ptotelna p53 pattlclpe o estimule la reparaCIOO del ONA.
los defeCio& homocigtioos en p53 conducen. por tanto. a ooa falta de oontrol en el pooto GtiS y una re<JtK;CIfl
de la entrada en apoptosls, re&ut1an00 lXIS prollfetacin <:elul&r descontrOlada que ocaslol\a tumores. En individuO$
heteroc:IQiic.os produoen el sindrome de U-Fraumeru, por ooa predi9po&icln al oesarro110 de lumotes.
Por !6mo. de anlog;, ;, lo que OCJ.Jm:l sobre Rb. diver5as proteina& vlnca& generan rumores a travs oet
bloQveo de p53 T de SV40. l)f'OlttinfJ dtt P&Pilom<JVirvs y proteimt E 18 de adenowvs. por eJ91Tlplo ).
30.7 APOPTOSIS, MUERTE CELULAR PROGRAMADA O SUICIDIO CELULAR
La 8POI)tO&I5 e& un proceso fisiolgiCO. controlado geon(lcan'lf!f'tte, que se da en lOdO 6C de
org;lni$11\0$ y P<l' tanto en todo$ lOs rganos y sistemas, med1811.te el cual la& olulas danadas o no
oeseada$ (que 11an cumplidO su Ci(jO vital. p&g. 415) <;uo conduOllfl a su Pl9ia de511Uoon; de ahl
el nombre alternativo de sulckJio celular". No oebe confundirse oon la noe<:rosis, ;)1 efoQo nocivo de
"9Cnte:s e:lde:rnos. de (rotvrca). biol6gca (wus, bac.ten&S), qulmlooffslca (drogas. toxinas,
e1c . que oonctx;en a ptdlda oe ta capaelelacl de regulaaOtl o$1'1'16tiCill, rotura do 1tt mombrana, sa6da del
conter*lo lnttac:8Jiar y. llna!met'lte, tagoeiloSis de tos resic)u()s oet.MirC$.
Se observa reduocln de la apoptoSis f!t'l OOt\diCiOnes ll$101gic:M por una gran proiferoon celular
(desarrollO eiTt:ltlonarlo y posnatal temprano, metamol'fos.s, "'''IC3ni$ti'IO de <'IQCi6n do hormona$ y factotes paracnnos,
etc.). asl oomo en Situaciones patolgicas tan diW!t$3$ oomo el cncer (lit ms rept$8ntaliva de ooa exce&flla
prOileraCi6n). enletrnealk!es o infecciones viricas Ce ahi la del .sl\1Cf10 del proceso apopttlco
y su oonlrol y fallO& en procesos petoi6gicos.
El estudio do 1:. <.!e en oone.:xin con el de la Dtoflieraclon celular Como ya se 1\8 if'ldicado
(pag. 415 ), 1& Clvl3 tanoet<>$3 so consier'a hoy d ia como una clula con una prollferaan incontrotaoa Cet:liaa
pt'Obablemente a la suma de una activacin de la prolifet'flec);l y un bloqueo do lt'l ttPOPIOSis De hecfto. la propia
432 BASES MOLECULARES DEL CNCER
quinliiO&erapia del crnoor estil iri'O.M:Ia de esta dea el .npacto mi\$ bien ti'IOOe:$10 de los tratamientos antiproliferativos,
C<)usttdo por una ba;& tapaddad de proliferacion de muthos lutnOr"'S. con
tratanjentos indt.acan &al apol)losis.
30.7.1 Etapas y control del proceso de apoptosls
Oe&<le un punto O& vi&la y moleQkf, los cownbios en aPQPIO$is tran&<:urrif en 11'9&
relatiYamente definidas. denominadas indllccin, ojowci6n y faw final
30.7.1.1 Induccin
se da este notnbfe a la un estimulo o sel\al. Al igual que en la prollfetacOn celular, es lmportanle
indicar que la induca6n de la requiere estmulos adecuados (:sefla'es po:sitivas), tanto extracelulares oomo
procedentes de la propa o .. lla Existen tambiin Mi\clkl$ nogotiY<'I$ qvo on $0rrlido conlmrio, frentllldo la
apopt06is.
30.7.1.2 Ejecucin
Tras la nducciOn el verdadero prOCflO dt apoptOSi$. que <So aKetaCioll$$ diversas que
oonducirn a la mucnc de f<'l th.llb: y de la membrana ()()fl diSnw'ltlCIOr\ de la adheSit'l a otras
y a la matriz el(1racelular, contraccin del c:iloplasf'T'Ia.. oon00n$<'Cin <18 '" del ONA.
disminucin del 'Volumen noc:INI seguid Cle $0 CJeSinWil'teiOn. rotura oe con '<'eftldo Cle su conteniOO
ap._"'ric:i6n de et1 la MemOtana oetJiar {lenotneno COt'IOCIOo como :reiOst.s). etc. Estas
se deben a la de 'Varias protea5as y nucleasas, que se oon'Vierten a$1 en las
molculas responsables de la apoptosis.
a) Proteasas: caspasas y su pap! en el contml oo la apoptosis
Lil$ eH pans son u!\$ de proteasas ei109611eas
(CienlfO de te clase EC 3.422, dste'na endopeptidasas). En
numanos se 1\an ldentttkado 10, daUlcadas en treos grupos, de
awerdo con su especificidad de su5tralo. Proctucen la proteoli5is
de protei\M dlana o susuato. entre las cueles cabe citar una
protelna nudear con acci!/Jdad de reparacin del ONA (PARP o
poli(AOPrlbosa)polimerasa) y un facb de tran;Qp(:iOn
son dsttinprutcasas. C'$ decir. tiC1lcn un
residuo Cys implicado en d <:C"Jllro acti\'0
($R8P). Las no slo dc.lgntdomdo proteinas
$USI18to. sino tamtlin a otras caspasas.
de su posiCin ett la cascada de accivac:i6n. se
dls.llngue asl entre ca&PMa& 'iniciadoras. y
nltlCUfll
pMl-"\11! Ela
cotts pillidos:
f(lnnllllJnatll,llll
.:<llore int\nsos:
f(lnn:lli liCIJ\'ll"

ProlciDa q...c "oc: llflll
bl"<!ueando su llt'tl vidad
que oorta l11
caspas as
la c-.adcna polipl.-ptidica de
la protc[na sustrato po.s-icionC;S
posteriores a un residuo Asp
Rcsuhado:
La act& hbkmo:l\tl.',
(rastJK'I)I31Cin dd DNA
de 12 :u:l11lli. prd1da
dC' 111 IOOna do: la
Ro1ura d ... (IC'pinull)os
dda cilula
APOPTOSIS, MUERTE CELULAR PROGRAMADA 0 SUtCIOIO CELULAR 433
La 8PO(l4osis se cx;:nt101t' rnedianl.e pt'Oceinas implicadas en varios niveles de sel\alaaon oelutar, oodjicadas pot
protooocogenes y oooosupresores. AJ IQtaal qve el ciClo oetJiar, el control de la apoptosis puede alterarse.
generando &ituacione5 P<J"'IOgicM ont1C 1M que se induye el etu'IOH. Se COt'looetl ya algunos genes que oodlflcan
proteint)$ de la apoptosiS y su altetaeiOn por mll!aCiOnes.
El eontr ol positivo consiste en et ll'liclo de la c:Mcada de caspasas: tona de las prinopales sei'iale& induaora& es
la libemciOn eii()C)Iasma Cle los componentes de las rndocondrias rotas., en especaal el citoc:romo e (integrante de la
c::<tdeNll se uhe a &a protefna Apaf (factOt acdvador de las ptotea&a& apoptticas) formando un
complejo que 3ctiva 13 proeasp89a llkladora. Algunas prote.lnas. oomo Bax, estimulan estas etapas de inioo: en cier1o&
ellneeres BaJt est 1nae11va. anulando su eCecto de control positrvo. Este conlrOI po&llivo de la apoptoSIS es al'llogo al
ejerciOO en la prolferacln celular por la inducan en ca.scada de la actiVIdad pr01eina QVinct.:sa de k>S complejos
Cdkclcllna (pg. 426).
El control ncgo11ivo de ta aporp4oSis, por treno de la activacin de la& caspasas. YTene determinado por protelnas
como Bel2 y lk:lx., que aseguran que el proceso apopttico permanezca bloqueado bajo c::oncliciones normales, En
algvnos clw\ceres se sobreexptesa Bd-2. reduciendo
aun mas 1a apoptosiS. en otros, se sobreex.presan
ptOtelnae que bktquoean las caspasa&. oomo la&
denomlnildas S4Jrvlvinoas. En general. est$ CXlfltrol es
de 111 <kctr<>IOr.:sr;
I>NA de ok lula
"-
similar al e;ercicto soOte el ciclo par l<1 r<ot.lk .. .se:

activacin de ptOieinas que inhiben 13 l'f,._,. _.
-
ptoteina de los oomplcjo5 Cdk..ciclin<'l
b) Nucleasas
se ef'lcat9ftt! de la rotura del ONA
l>NA ml:lct(h
n1ol 6o:ul as do!
gran 1amailo.
i i V\U\tiU1 muy
poco por d
tzd

-
-
-
-
-
-
-
I>NA


mrdc-osomas
: Ollll b
l llllll ph
1 600pb
1.-IOOpb
cromosn'rloo. genera!menle en sus po&teiones ms
acceslb6es. el ONA o n1emucleo&mico,
de forma qua se origiMn fl t9f1Cnlos cu)'O tam8flo es
tnUIIil)lo de 200 pb (10nga1ud aprox.lmada del DNA oe
cada nueJeoOSoma. pg. 86). Por ello, uno de los
slntomas oe apoptO&Is es la observacin, al estudiar
ef DNA por ele<:ttokrresls. de un patrn de bandas e-n
(ONA Jaddel).
- llllUph
30.7.1.3 fase final de la apoptosis
c:;C'.akra de ONA]
Las proturlelanC:ia'S exsernas de la clula, tormadas durante aa etapa oe ejecucin, terminan por separa1se
tormando 109 llamados cuerpos apoptlueos: s10s son caraaerlstloos y oonstiCuyen una de &as diferenCiaS respeeto a
la necros.is celular. Loe cuerpos apoptticos son reconocidos y faQOCitados por ocras clulas. tanto vecinales o del propb
tejido como especializadas (macrfagos), de forma que toda la clula se dEI$Iru)'e sin que &e llegue a liberar
material oeUal al medio y. en consecuencia, sin la aparicin de una reacan inllamatoria (a diferencia de la necroSIS,
d0t1de 111 clula rC"Yienla. liberandO su CJ:)(Iteniclo y prOYQClll'ldO rC$puesta). Obvi:'lrneo1o, IOdo procc$0 va
ti(;Ompondo do QIIOS l)io<uimiOQS,
Clhda
llpl)piI j;-;

434 BASES MOLECULARES DEL CNCER
30.7 .2 Relacin entre ciclo celular y apoptosis: p53 como punto de enlace
como se M tnaieadc> prevfan"'ef\4&, el gen OncotuJ)rCS(It p53 CC)(Iirte;) la oroteinQ p53. reguladora de la
ttarlseripciOf\ de t::lettOS genes retaclonaooos con la progreSitl del ciClo celular (pag, 431). Por pafW, p53 proyoc;a la
apoptosis, cuando las le9b'les del DMA son de reparar, bien sea por su o por detOCIO& on lo$
SiStetruts de reparaOn. Se elimiM asf ta posibilidad de que se uansmittl el DNA gravemonte (oon gran llmoro
de mutacaones. con teOrganlzaciones etotn096rrkas o oon aneuploldla. por ejemplO), l,O$ 11'of(;81"1ism0$ por 10$ c::u;tkt$
p53 I)I'C)OOCe e!S;) activaCin de: la apopt0$is soo I'IWitiple!l 'f ie oonooen aUn de fotm<t inoomplot<J, paro incluyen tarrto la
ac:tivaciOn de la de genes como ae!illiclades no de.., proteina p63. L<t ..ncracin de e:slaos
fooclones de p53, debido a la mutacin de su gen. Impide la entrada de la clula en 8Cl(li)CO!Iis, 10 que, unido a la
desapericiOn de la funan de freno del ciclo celular, tiene oomo consecuencia que las clulas contlnUen prolerando
aunque posean dat'fos en el ONA o defeCio& genliooe. asf la probabilidad de que stos se acumulen y
f<Jvoroeiondo t<J do un cn<*
30.8 HERENCIA DEL CNCER
las alteraciones inducidas en el cncer se transrrillen en la milo&IS de unas clulas a otras (oUas somticas}.
pero no sa transmiten por hefencia da padfes a hlfo$. Para ello habria de elOStir una predispoSICin o susceptibilidad a la
mutacin en la l inea germinal, una susceptibi lidad hereditaria EJ!isten, &oi"l embar9(). taSO$ de cncer hereditario.
ttbi<So& a mVI<'Ici6n do o geno (ln(;Q$Uprosorot en el volo o 01 do 10$ La
c;eu$3 y mocnni$mo rn<l'ecol<'lr del dOtarTOIIO del c:aneer heredMtio son lti miSmas que para el $0(1"1tico, SOlO
difieren en el de clula OOr'Kie se inieaa (germil'lal o som!iea, respecllvamente). Por 0118 pane. una vez heredado el
et.noer. el individuo atectado se OOtlvlerte en portadot y lo transm!l!r a sus desoetldlentes de acuerdo con las reglas de
herei'M':Ia mendeliana y depetldlendo del carcter dominanta o rece&No del gen alterado causante del cncer (por iO
c:omt'.rn, dominante si ee un 01"1009n y recesJvo si se trata de un gen oncosupreeor mutado. pgs. 417 y 419).
Uno de lo& cnceres hetedilarios mejor conocidos y con espocial trascenctoncitt 0$ 01 <te que 1icl'le 6$10
carCier en un S-tO% de lo& (.8$0$, Sv CCMJ n la mut;lcin do k.l$ gono SRCAt dol
cromosomot 17 o 6RCA2 del t3 (de tNeMt g Met', cncet de mama). El I)M'Iero se expcesa eo mama y ovano.
un f<tclQr trttnsc:ripein 001'\ un motiYo d&do de Zinc (pg. 63) f!f\ su tegln N-terminaL Al tiMarse de un
gen oncosopresor. la tr&n$Misi0n hereQilarla se debe geflef'almente a oo mutado, que sao se manifestar en la
hija d(l$arre'llanclo un tumor si !an'bl'l sutre I"'"'U!aei6n I)OSI.eriotr'l'lef\e el otro alelo, heredado eomo fonna notmal
(pg, 419). La presel'lcia de BRCA 1 anonnat se asoaa en nwjores a 50-80% de probabilidad de padecer citl'loer de
mama y a ul'la pre<JiSposieiOf\ al de ovario.
Existen otros defeaos gentiooe AenK!dario&. donde se trcansmile lea prodi$()0$icin un tipO e:sPOOiflco
de {lllgmOnlota {pllg 363). enfertnedad ese LiFraumel'll. oetebtal, sarcoma. laucerrM. ataJtla
tetatlgioCialilil.IWliomt' oo hO(Igkini<'tno. llnfoclliea aguda, etc. Gei'M'!UI!rnente, la aparldn del c:ncer se demora
pues es r.eeesario que se acumulen mutaciooes somtlc:as adk:lonale6.
30.9 MARCADORES TUMORALES
la$ altomc-oocs de las c6tutas pueden c::oraslderarse a distinta escala. Lo tradic:lol'lal y ms udlizado en
d inic:a son que, &ul'l sin estar dlrec&amente o ser responsables del proceso neoptsico, son
OOf'\Secuenda de la exls.tei"'CC& del tumor o Incluso de su G"Y''Ouc:Ifl o a un.a Con
frecuencia. sfee1an a componenl$$ esoeclfic.:os do lit propia o de c61ulall Y()Cinas.. Estas alton'lc:iones cons1ituyen
la base de 10511ari'ICIICSo$ tumOf"a.les y tisulares. esaablec:ldos 001\ fines di nk:os y tela()(')fWjos, en geoorel
c:x>o o1 grt\00 de rnaigl'lidad <Seltomet. Se obsetVan tanto in vluo (pot en oll.llas en clltivo ln6ectadas con Wus
onoogl'liOOS en el QtOOeSO llamado tf8tl'S!ormacin maligna) oomo in vivo. en runerosos CSISO& cllniOO$,
EJ uso dt 10s marcadores tumorales slo es valido si para su determlnaan se cumplen ciertos reQUisito&
analllic:oe. En cual'lto a sus posibilidades de vtiliza,ciOn cli.nicct, deben algoi'\M CQI'ISidetaclones bsicas. Por un
lado, raramente $8 emplean los ooos do maret'dOro$ es13bl6eef un Sino que ste ha de besarse en
datos cllnloos, biopM. 01c: .; on goncrt'll, lOs marcadores SOlo sirven pata confirmar le evidencia de' cnoer.
Tampoco dotxtn matcaoores para buscar cl'loet en una poblacin (salvo excepciones, como en poblaciones
de alto riesgo). En cutmio <11 pronostico oe una .....,ermeded, se exige U'l8 COffelacl6n entre la concentracin del
marcador y la del tumor. SOn acteocuMO!I para el segulrTiiel'l&o del cnoer, on cuyo caso debe confirmarse la
dellfatamien!O Sigulel'ldO la ooncenttacl6n del marcador a lo largo del liefi'IPO, para averiguar, por 9jcmpl0, si 01
aumetdo de un marcador es irdcio de recurrencla de lea eoformodad y o roquiere una. 'eralia mas enrgiea o un
cambio de estrategia.
Las a!!Ot<!Cione$ oe 1&$ c6turas C&l'loerosas son tan var\adas pueden estuciarse e$de <i&tintos puntO$ de
vista,;; aoc310s y bJf1'101'111eS y tiSulares y. Gl'\almel'lte, genocfplces o
MARCADORES TUMORALES
435
30.9.1 Alteraciones locales y generalizadas
El Pf00$$0 eje una directa &Obre la Pf'QI)ia o$11Aa y su vocind;)d (e!eeiO toc&l) o sobre la
lotaida<l del organismo (electo o s.s:Wmico).
Alteraciones
Cil uSd3S por d
t :111(;:f

Muy de 'asos sanguincos.
dc:suvcdn t:dul:lt, <bi\1)5 .::n el sistema nl'r\ ioso, mfoccn. y.
t:\'i'tllu:llntlll. 1'1\U('ItC: dd paocicnu:

ocasionados por W de ha de
reguladl'li"JS.. obsCfVada en n1uc:hos (::inccrcs tun1o d.: ICJtdiX,
c:ndocrinos dpicos como no cru.tx;rtni)S
30.9.2 Alteraciones t umorales y tisulares
Pr.xlutlll!'i { P:uimclnos alttrldoos por el't.) dd tW'l'lo)l'
a!&,. tumo'S Emimll$ q\le ;alt:" .. nlan 1!'1 a caus:a dd IUl'llOf
f;e!Opica P"' un tqtd_. que" tll)! !!131f'lll'!!l 11o) Sll*"l.
ip en m:.plt u fo.lt"" I"IIPV
t.q!doldumk:;.: :.m!KUI.i.l -onnahnm1t ti-' IM)roll(tll-'
30.9.2.1 Marcadores tumorales
Se d<t este nombre a cu&lqdet sus1aneaa relacionada oon la o <ll.l$0:ncitl un tumor trt liqui<los
biolgicos. en ctt>eeit'll el t)lasms o el suero. Su naturaleza molecular es rooy hetei'Oglnea: ln m$ comvncs
fvnci6n I'KltmOnal o en2imllca. o presentan ceraaeristiC<IIS antignicas 54.1 aooriQf'l PviXSen deberse 8 al!erttCIOtleS oe
18 tnorfologia celular. de' (microct:dos, mic:rofiq,mcntos y intermediOS). oe ra supetfieie oe l&
Mf!t'I"'IH&n& (anUgenor. a&Oeiado$. prdidOt 00 inhibicin del crecii'!Wr'lto SlOr OOI'It&eto, reeeptores), oe tooo llpo oe
par&metros bloQuimiOO$ o de l;:t dOI<'ICQn crOf'I"'ISSmiea (carlobpO anotm&l, tema 29). Son lOs marcadores ms se
analizan desdo vn punto oe vista general. Se pueden dlstlnp dos grupos de m.arcaOOfes tumorales los de secrGCin y
l<'!s (O cilocuinas).
a) Marcad<>res tvmoraJ.es de S&Crecill o marcadores "clsicos
Pueden chnificarMt on tvncin de lOS 1-actOtes (liSUiates, mea.abllcos, flsaolgloos. metodolgioos ... J que
determinan su en liQuick>s biolgicos. la sangre. La bS18 de marcadores de secrecin es
enorme y. a etectoo ptctiCO$, pueden ClbSiAearse en funcin del material blolg!oo en el que se pueden
mudiow m;;.n;adofos Hricos. urinariOs, de liquick> cef.alotraquldeO y oe metastasi& Osea&
A oondnuacin se describen algunos de los matC"adores de mojen
J Cnctr de hJtadn ]
oJc con e!11na:turn Ji.m.il;w la (A
1
gl<lbuhnl. aldilicmJ:a pur- un sen
dd 4 S.: :,. 311!1 eOJeentraciM en y hqwOO ll!llll'lliOCO del ftIO d.: 1 <J
l\l(omk )1' )ln!Clll.& tn SliOO \itellllo e 111:1,:1100, con Ulnl! ll b de la Jlbi1mina en ll>.1ilhll<': IIWII.:nt'l b
(ln.:iic.Jo y !l'llmp.ll'lllr Tambim pvu al m11temo. a 1.1\l\'h \le 1$ pla<o.-nlil. b c)f'lil\<a IXII".l
d diaguslieo fl\-oot. del diX'ICt' llcpcko) dr alun wmpo)ncnlesdcl <lll.'<) \itdmo>
436
BASES MOLECULARES DEL CNCER
( ri de In gonudotropina corinicn l Cintem de la lnea germinal J
Ghoopr(\ldnn c:n In d.-attl(: d cnbur':t>. (oma:ada P"' un11 cadt'n;. a (92 a.minoic:idoG).
en el 6. )' oc:r11 1145 nmml.'kidos), Q.prcsadll por 1 pes dtl er<lii'IO&ll'lll 19. S:u mi11iOO e11 t'ifimulnr d
CIIC1'J'I '1100. uDI ''Cltmpbrnad() el vllk> k-cundada. l:a ,;ul:o.tn.dnd P libre se dctectn en $1u:rl) y. (:fl ocusiorH.s.. \"n
Sirve tll'll'otlul) num:d. gntm:IClnd p:n.cMgicas y o.:tpieaJ.
de > ror.oearctnOII.U! lllll'llCM& t:lmb..:W. .._..,el .Andtomt ck Se mide por
muy cual hath'<l!! l."nli) Qlalllh:atnflll.

l l.infomas leumia(j (
f'o.li{lptido.' PJocfi{)C94 aniDOdclo!i) lt.u1iza00ftl todlli$ Jt.- fo;nna pn11e de"" ndgmo de
do:- t.xlu la ce!uW nuck-.adll,. l\(lSIIt o;o fonna soJubk a 111 CIN\IIaein y 111tra en los tilbuko rcn;do. Se
)'en orin;J.. Se con Jndrome$ utkiOflllill!l. Unl'omu y t.eucemill,.. y C'll en
do: utilidad tU tOOO rcn;d IUbular,
(C'J:A))
1 (':inctr de colon 1
f:unili:l de tlr(Oprolctnas e-.\l)fl:sadas p(lr geue!l del cn)m(osonu 19<. f,Jm:tn llmcac,ncs en edul.-.
<h: inkiactn del tumoc-, ea[cid:ld dt- y R'!llbC'in del
inmunciMS"'11. en l'ario:c y $115 COOIO ('ti (fllbrioollrloij; (;k ahl d
tll1tnbrd. Se det\.,.,ufla suero. OOtto tnarcador heterogneo. poX<I (uociaOO a mudl cvcinomas); iC'
11$:1 mA$ <n dinic.a [XItu lurnoru deri''lldoG del c:ndonno foolorrc:endc:s. pu.III'II'I y n11111na ).
1
\ntgrno etuhohidrafo 12S))
1 Cnctr de manu 1
liOOJ!oVtdna lk do!'\'111.10 t\'<MOC.da por un ltltlllCI(Ional. pi'\'So'fltc en V\U'tllll f!rt>L'a(lt; no
1umonles (11X'rem.t.o cm c.:tula& epidi&IC$ del ario).)' a twoi(Jrcs de narna.
puiii'II'I. !*ciTas y colurm:ul. Es p;ua r:1 carciDUII'Ill DU uvAricu. y,.. factor dr pmn&ct.icu p:orn
el COoctr !k pulmn oo nticnxJrJOO. Se OOMO dt dtttl&t r:ll <k ovano (r:MqltO
ltl!l i.
( C'alc:ltonlna)
1 medularh dt llrok1t5 J
Uornl(ln3 pcptldice de t3m300 poq1K110C3'2 arninCiieidos)&cgtcgllda pot las \'tildas C ddllroidu {U parafobeulam).
Fl umcn"' de $11 produoe un de5o:ftlio.'1 de In eonccnmM:iII de libtc c.n pllbna o.kbido a la
inhibic.c)n rqotcifl sc.'a y su tubular, Es litil p:or11 el [lf'CC(ot y el sqrtitni<fiiO ckl
cltleer ll'ltdulf!r ok tM<C!i.
( :ic:ldn (P\ P)
)
( Citnctr dt prslaUt J
En1imn. b !, implicMin m el rnctd.lofi&MO de fOoSfollpldos y pmK-1\I.C
en t i !)('. dr:tta tn tqutdo s..rrun11l. Sf' udli.w p;;wa detUor )'('(lll(n>f:.r 11 coo
dn< dt pn.\$10111n.
\nrfgtntt indo al c:nrclnoma de (SCC0
1 CJnctr dt ttro 1
a.rs!ad11 de del eudlo <ti suero y 1.'0010 ll'lllrc.lor tpidtnMiJo:.
( Tlro::lobulina (TGB))
l Cncer dt- 1
Pro-ina t'K'II l'JI t\'l!oduo)S .k ltnAIIa, muy abt111darote m el to.roodeJ ;:o:omo de .dn""lll )' dr
hom)()IWIS U irneliza el IU(I(MQ o " lul11 tiroedcn. en ,..,.i(IIS :rwdos de yodocin. Se lk-c.c:mlilla tn S*'lgtc.
ltutnr:malb .:11 el boo:lll la tirlduu illl:'loguda y b C'll(l!rmc'dad de fti!J<'dc,... . E$ cospedlic:. pMa
di OOil'W> el clDC'Cf PIIPIIIIr y del foUeulo liroidoo&.
( Qut'ratina!l C\ .. RA 21.1)
1 Carcinoma cscamol'o de pulmcn
l
()ucrtdJII:i del 11p) 19. en t'l cdulat. Su l'alorx.c'ln en es sc""ihtr:
t\'ftll\:5 y (WI.'UI()('nag de pul!nn, I:J un mdlcador <k
pmhfcrnri&. cdutOif'_
Apndices
Referencias histricas
Aportaciones a la biologa molecular e ingeniera gentica, especialmente
en relacin con la patologa molecular
E$1.<1 relacin no j)(eter.oe ser- una ISla exhaustiva de !odas las aportaciOnes que, a tirulo ntividoal o
ooleciJ'Yo. &e han !lOChO C(l(lf9Jrar la materia l)(esen1ada en este lbto. sino que se desea rel!ejar b&
origenes de las pnnopafes aporwcionos, eon una mencin O$>eetle8 para las pet$0na:S e hilos mas slgr.llcatlvos en
l'luestro peJs. En SU mayoria, los daiOS &eleccionado6 han surgido <t de l;tt irrlormac>n <:onMada, Onglr'l:tl O de
fuentes indlreaa&. l06 datos se ordenan CfO(Iolgicnmenle agrupodos baio apartados
1. de la materia viva
16605 Ft Hooke observa las cektilas miCrosOOp.c.as (c6/W.s} del
1?39 Pnmera edicin de la cspai'lota (Farmacopea Matritense}
1838 J, Btr:elitJS sugiere el tl'l'l'lii"'I ptOlelrta pera dertas suS!anclas nitrogenadas de clulas animales y vegetales
1840$ COmienza la te-orfa celul ar de los seres vivos con T. Schwann y M.J. Schleiclen
R. Brown OOSeMI una regln densa circular dentro de las ofulas vegetales
J e. Purkinje OO$erva l)(lr primera et citoplasma (Pf01oplUm8) en el interior oe la clula
1650$ R. VirCI'IQw domueS1ra Que IOO'a ceruta oenva oe otta: surge el concepto de di\-.1Sfdn cerutar
1866 G. MenOOI describe 106 mecanismos de herencia de 106 caraclet$$ (plttsm;,do$ tln svs la.m<>$;'15 Leyq$)
F, HoppeSG'yler oeup;J &.1 primer<'! Cte<:Jr'a de 6iOQulmiea (OttimiC.1 FISiOM)giea), Unlv. Ttb'lga (Alemania)
1869 J,F Micsc:hor deSCubre la ncJCJfil'llt. ut\a sustanCia eicia tita en lstoro (el ONA)
t876 O. y A. HettWig. la sustalld8 genetlca ele loa progen!tOtes se trasmrte en l.a fect.W'ICiaclon
1881 E. Zocharlas demuestra que los aomooomas oontienen la TNJCiefna descubiena pot J.F. Miescheor
1882 W. Flerrming: fusl6n de gamet06 en la lecundaan y posterior separacin del cigoto en doG clulas
1886 Se Introduce la Ot.im1ca BiolgiCa en Espaa. en el doctorado de la Facutrad de Fannacia de la UniYer&ldad
0t MadtiO (Laut'e&IIO Caldern Atana)
2. Surge 1:1 como ciencia
1$69 R. Al!m3M purifica un ONA libre oe prote4nas y aeutla para la nucleinB el trmino .icJdo
1896 NoCel dona su tonuna pata aear lOs premios que llevan su nombre (se eft'll)tezan a concede! en 1901}
1900 C.E. C<ltrens, H. de Vries y E.T.E. Seysseneg reoescubfen las leyes de Mendei, al cabo de 35 an06
1902 A. Garroel analiza \a a/captOilUII8 como alletacln del metaoollsmo: surge el concepto de dlllerSidad gentica o
polimotfismo
W. Sunon concluye que 106 genes 601'1 unidades lisica5 blen definidas y localiz.adas en los cromo&OI'TiaS
1903 Primor libro dct Bioquirrca tn Tratado de Ovimiea dt Jo:5t Roddguoz Carrael(tO
1906 W. Bateson observa el signi!icado gentioo de la consanguinidad y aeul\a el trmino Genetica
1906 F. Ganon y A. GariOCS IniCian la gentiC8 mediCa, oon el oe error e& congnitos <Jel
Sanbago Rvmon y C;ijaJ. pnrrec premo Nobel e&paol (con C Golgi), por su trabafo SOOte la estnJCtl.Wa del
$1$!em3 (ICf"''iQ$0
se tunda en ES()a{W) Juttla pariJ 1.1 de Esludic$. ta0 la prcsi<:SMeia de S R.nmn y Cajat
1909 T.H. Morgan estudia las mutaciones genticas, lOs rasgos ligados al sexo y la tuncin de los cromo!IOt'l'\aS
W. Astbury utiliza por pnmesa vez el 1nnino Biologia Molectliar. aunque sin su significado aC1ual
P. Joi\Msen n rodt.Jee el t6rmino {1(Nl para las do la herencia con carctet transmr:sible
19 10 A. Kossel. premio Nobel pOr sus estudios sobre la ouimica de las clula& (proteina.s y cidos nucleiCo&)
1919 Eke.y acua el tfmino Biolocnologfa para descrbr la -.ueracei6n de la blologia y la tecnologia"
442 REFERENCIAS HISTRICAS
1926 Ptemlo Nobel para T. Sved:letg por la tllr&eenlli'lugaciOn 8/l&lillea para oe-tennin<'lr moleeularc$
A. t.tuller (ptemb Nobet en 1946) demuestra en moseat Que 10$ rayO$ X mutae:iono$
1928 F. Gnftl!h el proceso de tf1M$/()ti'1'J8ddn b8Cftrlana (tran$1croncia <JO tteiOo nucleico}
1929 A. Levine determina <pe la es el azcar presente en loe nuc:teocldo$ Clel ONA
1930 1< I.Md$1.einer, premio Nobel por desctbnr y tipfficaJ los grupos &angu(neoG humanos
193l OH WarW9. premio Nobel por 01 e$1vdio <)el proceso de respiracin celular
1933 T.H. Morgan, premio NOOtl POr de$Cvbrir 1a funcin de 10$ como PQrt.adofes de la hewncia
1934 A. Fomng <:Se$CIIW la lel'lilcetOnLmft.. ul'la di!IMzirnia eongerita
J.O. Bemal y O. CIOWioot pM'Ier estudio de una protefna mediante <Jilraccln de rayO$ X (pepsina
1937 J. WaldestrOm describe la y la jXImera vaAemd de porlirla. ia porfW1a cu\nea tatda
19.3$ W, A&lbwy y Bell encuentran un 059aciado regUlar do 0,34 nm a do - libras del ONA
A. Huxley: la biocecnologia llegar a ser ms impottanle la Wtgenieria mecnlca y la QUimica
1939 Se crea en Espafla el Cmsep de lnVesDgadones Clemilicas (Jos Maria Albareda y
Manuel Lora Tamayo)
3. La bioquimica su m41durctz
1941 B. MeCitliOCk (l)(e....-o NoCel en 1983) muestra que lO$ trati$1)0S0nes cal'l'oOi&ll en el gonoma
G.W. Be&dle y E.L. Ta!um la h1p6teM un gen- una eozlma
1943 G. de Hevesy, premio Nobel por la aplicacin de los i&copos raclaCiivoe a las reacciones metablicas
H. Hlnselmann publica una monografa sotwe el d agnstico de cncer de tero medan!e trotls
1944 O. T. Avety, C. Macleod y M. McCatty: et ONA es el mcuerial portador de ta lnfotmaeln geootlca
Se lnltOtluee la BioqumiCa en los estucflo6 ae llcencialura: comienza la prornoe'l de btoqulmlooe espal\oie9
(I'Igel Satllos Rllizt
1946 S. Takahara tOOniflca la primera <S&enzimia &ilenclo$a, la acaltllaMtnia o carencia de cataJasa
1947 Se mta On Algenl:lnt'l Ol lnStiliJIO do lnVOfbg.'ICior'!Of BOQuimiaf.Fundaci6n C#mpomar Ben'oaf(k) A. HOUS$ay
(prerr.o NoOel en 194n y Lvis F. Letoir (directot dol ln$rltJ.AO dvrante 40 MO$ y OttmiO en 1970)
OOI'l$triii)'On <te la bioqumiCa en HISpanoamriCa.
1949 M ,l.,.. y E.G. Bortratn la O'Omath't en clulas Ge animales nei"MM'a
1950 o. Bevis deseriDe &a deteecar en el teto la hoompalbllldad de tact Ah
1950s Se conoce ya gran parte de la del ONA (anicar, fosfodister y base&)
R. Franklln y M.H.F. Wllldns: primeros da106 ptedsos por rayos X &Obte la estrucbJra del ONA
J.C. y M.F. Per111z dilucidan mediante d!fraocln de rayos X la estrucllJra de mk9001na y
(premiO Nobol .., 1 9e2)
1951 L Pauting dttCubre 13 base mo10ev1ar de 1a anetnia laiCi!Ofr'ne: surge el OOI"'Ceplo de entmedsd
H.G. Hets esiUda las enfermedades lisosomales. disenzimla& asociadas a orgnubs celulares
E. Chargatf es1ablece la relacin eqvimoleoJiar exiS1ente en!Je puMas y pirimidina& en el ()NA.
M, Chase y A.D Horshey oonfirman '111\1$ que ol ONA C$ 01 la inlormaciOn gonttica
Se eq,an Esp31i01.1 de BIOp.a&oiOg/a Cttnk8 (AE9C) y la. Scoedad Espat'fola de Clendat
F"_.(SCF)
4. Se iniclalla Biolog(a Molecular con et estucno de la e.$truetura del DNA
1953 F.H.C. CriC* y JO. Wa1son propof'ICW\ la e-strueb.lta en dOble hliCe para el DNA (premio Nobel en 1962)
1956 A. Levan y J.H. 1)io f lljan en 46 el niinero de cromosomas homan06
Se descubren la ANA y el mANA; el mcn$tljO gcntic rOQuiere $0Coeneia$ de pai t!$ do
F. Jacob y J. Monod la o)ljslcnc:ia dO genes esiNCiurale$ y genes regt.ilaOOfes
1957 ll'lleaa !lOS acllvtaaOOS <:ientl"Cas el Cent10 de Jnvesri,gaciotles 81o10gicas (ClB): proyeca6n de la Sloqufmlca
haCia la MeciiCiOa (Aibe110 Sois y Caf10e A&enslo): se propone el trmno MEdctna Moi9CI.Ifar
1958 G..w. Beadle, J. Ledetbefg y E.L Tarum, premio Nobel por de rec:ombinw;in gnica y OJg"lniuacin
del mcuenal gnic:o de bacterias
M. Mesel&on y F W Qahl ll(lf' o!IJ<tconlrifugacin ol carO'or $9MiO()n$0MldOt' do r!)l)liC:<'Ic.tl
A. Komberg 95tablece el m.cani$mr> etc la rol)lieacan ea,la!iz.aor> I)Ot la DNA I)OiirnetaSa
M J . l.ojovno y R. Turpil'l! el mongolismo est causadO 1)01 un ctOMOSOma supemut'l\C!t'atlo
1959 A. KomDerg y S. OChoa. ptetniO Nobeii)Or sitlletaar in Vo'ttopolnudecldos de ANA y DNA
REFERENCIAS HISTRICAS 443
19SI).I9ro ExpanSIn de la 8ioqulrNCa en lu Facul!ades de Farmacia y Cen01as de Barcelona (Fernando Calvet y Jorge
Bozal; V!c:enle Vll!ar Patas/ y Manuel Aosel). SantiagO de CompoSlela (Jos AntoniO Caoezas}. G.tatl8aa
(Fodorieo Mayor). S.Villa L0$0\d<'l) y Madrid (Ango! Mart n Mur.::io)
1960 Con .. nra <:1 osti.6Q del mecanismo do eaocin de gonos
P. 6crg clOna 1)01 p'nera, v.o: o1 ONA
SO intrOOuee ta hibriC&cin <te lOS O<IOS
1961 F. Jacob y J . MMOd (premio Nobel en 1965): la intormaeiOO ger.e11ca ftUye <1e1 ONA a travs de u"
H. OintzJS der'ni.Je$113 que la ttadJocln <beue en sentidos 5'_,3' del mANA y amino ..e&rtx:>iiO oe ta protena
M. Lyen muestta eii)I'OOeSO oe NM.::tivseiM X en e embrin oe matnl!etoe r.emt>ra
M. Nlrembeg moestta las primeras eoe$C)Or\(fleneias er'\lre CO(t()nt$ y aminocidos. sirueW:al'ldO j)f'Oteinas a
partir \18 un ONA 3r1ifiei31
s. BreMCr y F.H.C. Cfiek.. la secuencia oe OOCJOr'le$1ija ta de a.tl"'inoAeidos. et C<figo no se solapa ni se punta
M. Meselson y J . Welgle: la reoomblnacin geneclca se proouce pot ruptura y nueva Ul"'IIf'' del ONA
1962 F.H.C. Cnck. J.O. Watr;on y M,H,F, Wilkns, premo Nobel pot ws e<sltldios de estructura molerular del ONA
S. Benzer: el ammoacil-lRNA se incorpora en la sin\eSis protetca segn la especdicidad de so antJcodn
1963 J. Calm9 demuestra la sin:esis simultnea de ambas hebtas cbante la rep6c.acin del ()NA
Comienza a uul!zarse el oosayo de Gutnne para el d agnstico de la f*:etonuria
Se ftJ'Ida la Sociedad Espaola de &oquitmca (actualmente de Sioqulmfca y Biologia Mofewtar)
1961 R. HoAday propone l.l'l modelo para la reconUlacicin homloga
M. Aoget oonsigue por prmera vez implantar un 9M en una clula anlitnona
1965 R. Holley determina la primera secuencia po11nucleotfdica natural (lANA-)
S. Benzer elabora el primet mapa detallado de un gen
W. Atber:: bese bioqu1mica de los proce&06 de restriCCIn y motllicacl6n InduCidas por el anfitrin
F. Jacob. A.lwoff y J. Monod, premio Nobel pot 5U5 estudios del c:onb'ol gentico de enzmas y de Vlf\IS
1966 F H C. Cnc:k prOIX)nC) de la IXI$0 5' (101 Mbeodn dVfMI G: l<'!lf<'ldl.lccin
se Ol:>$trva; et paso de matetlales a travs del poro nucteat (po1 eempo, liSSMt'l$)
1967 Se 1nlaa. en Espaa la Bojogia Molecular (An1on10 GardaBeaoo. OaVld Vazquez y etadiO V!l'luela), germen
del Centro de &oiogla Moleculat (CBM. Inaugurado en 1975 y actuatmenle C. S.M. SewYo Ocnoo)
1968 N. Nomura y P. Traub consiguen ensamblari'IX!Somas 1tt W/10 a psnir de StJS compol'lel'ltes
R.W. H. G. K.hOi\lna y M.W. NiremDerg, premiO Nobel por la <k:l C6go gen6tlco
1969 Grart lf110UISO dcS<tt et extranjero de ta BJOquirniea y Biotogfa en E.sp,i\a, por porte de S.Voro
O::hoa, Sallliago Grisotill y F(3f'ICiSCO J Aya.ta. ntrc OllrO$
M Oebiick. A.D Hclf'sheY y $ ,E l.uri<'l , l)rcmio N()I:)OI PQr el mecanismo d& replicacin y la estructura geniiCa
d$VIr\,.IS
se il'lioatl en tos prog1amas de Pa1otogia Molecular con la crO{I(in (Foelonco Mayor) del Centro de
6t y CrOI110$6rru:Cas (CIAMVC)
5. como tccnotogi.1 del ONA recomblnante
1970 R. Johl\son y P. Rao sugieren los dos puntos de con1101 (G,tS y GJM) ert e1 cido de <'visin Colutar
Se obsetVan en mletograflas electiNCaS los procesoe oe lta.nscr1pd6t\ y tradu0ei61'1
R.J. Brlne.n y D.E. Kohne disean las ccnlcas de reasoc:aacin del ONA euea.tico rcl)(l>1ibYO
H.O. Smllh y K.W. Wllcox oescubren la primera enzima de restriCCin
O, Ba!bmole y M. Ten11n: be: virus ANA pasan infonnacln gentiCa a su al'ltrtril'l
G Blobcl (premio Nobcl on 1999) y O. SUbalini proponen Aa secuenc;a s.ena1 para el trfico oe prote\Il:S
1971 E w Sut'*'<ln<l. premio Not:lel por sus eSt.doe 001 meeatll6mo ele aoeion h()rmOr'las
lncia sus act1\ltdades ellnsmuto de 8fologl8 Fl.lf'NJdmen181 de 8arC:e'Ona (Juan Oro. Jaime Palav y JoM
Antonro Sub1rana)
1972 Se crna la Sociedad Espaola
1973 1 Reunin diJ Asifomar. surge la preocupacin Mica por la manipulacin mediante ONA reooabif'lante
1974 R Kornbefg; el es la 5!.unldad bsica de del ONA
A. Claucie, C. de Duve y G"E. Pafade: pren'WIO Nobel por la estruci\Jta y organiZaOOc'llutleiOnat do la chAa
N K Jeme. G.J F. KOhler y C. Mllsteln (premio Nobet en 1984} describen la lM'llca deii'Nbridom8 para produar
M t:w:ueri>O$ monoctonatos
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1975 E;truc;bJrtt do lANAs; anticoeln {triplcto en el asa modia) es complementario al eOdn (lriplete et\ el mRNA)
E.M. SOUI'Iern <SP.SarrOia su lcnlea de hibridacin de cidos rucleieo!l. Con e1a. A.M. Dozy, M.O. Golbus.
Y,W, Kan y S Mllc:hOI Moen 01 prWner <lit'lgnSiiCO prenatal e una tf'lltnnoctacl genliea (a. t'H813somia)
8. Se lnlc:i.a et diagn6sUco moleeular
1975 O. A. Dulbeeeo y H.M. Temln, ptem Nobel por mecanismos de produccin de tur'I'IOW'es pof Vrus
So crc1u" lt'l EspaiiOia ae Outfl'liCS Ctlnlcs desoe 1994 es la SOCJedad Espar'lots de
{Ji()Ou/MIC(j y PaJOIO{JftJ Molecul8f) y 18 A.soclaCkftt Espaltola de Fattr'lltCdutkXJs Ana.IIStas (AEFA)
1977 w Gilt>on y A.M. Ma.xam desefber\ el Qffmer mlodo oe secuenclaciOn del ONA
A Roboft$ y P. Sl'larl) (IC)Servan Que el ANA se transcribe a patt:lr de lragmen!OS drsootltlnuos oe DNA
R. FIWWCII y A. Jenreys oesctlben lOs tNrones (secuencias lnlercaladas) en genes de eucanotas
La Genentech pa1enta el proceso de donacin del ONA desarrollado por H.W. 8oyer y S. Cohen..
hormona del creclmaento en bacterias modificadas por hJenleria gentica
Se crean en E$paa bs tftulos oficlale6 de en An/i$i$ Clinico$ y 8/oqvfmico Clin.'Q
1978 W. Atber, O. Nalhans y H.O Smith, premio Nobel por descubrirlas onzimM dO rottrioein y at)lieartas a
problemas de gentJca molecular
Se produce insulina ht.mana pof donacin de su oen on baCterias
A. Rlch observa el Z-ONA por dfraocin de rayos X do criSialos ele riCO$ en GC
S.M. T!lghman visuaiza io6 R rones en el gen de la globina
G. Cooper, R. Weinberg y M, Wigler dHcubren tos
1979 R. Whne y A identifican el polimorfismo en IQngilud <le lragmen.os de testrioein (PLFR)
O. Lane y A. Lavine de&CIA:wen la proteina 1)63, $inl(lliza0a por t.W\ gon supresor de tumores
1980 w Gilber1 y F, p-emiO Nobel por sus mtodos de secuencladn de ONA
P. Ber9- promio NObel pot' sus estudios de cidos nucle.lcos (en especial. ONA recombinante)
c. Woism:tnl'l lOgra )I'O(IuCII' inteern humano en b6C1eria&
se transfiet'e ONA a animales modelo mediante retroWus
Pnmor do una onletmed&CI l'leredilarla, la anemia laiCnonne
1982 oomorcialira la humana (l!urnruNna). primer t&rmaoo recombinanle
A t.askoy- primera $01"1&1 de IQea!lrac:ton oek!lar que pennfte la entrada de proteina& al ncleo
A. Klug. premio Nobel por la aQIC&eln oe la mlaoecopra eleccrnica a los complejos pr01efna-8cido nucteloo
M Sart:laCid. V NotariO y E. SantO$ ident)tloan el prtmer onoogn ht.mano. lnduciOf de mucho6tumore&
198a K. MulliS:. tc:::rka de la reaccin en cadena de la ONA pc*nerasa (PCA) producir DMA on canticlad
F m;srCio'ldot parata enfttftMISNJ tJe di&eflo oe un ensayo gentico
B. McCiintQCk. p.emiO Nobef por el desct.btlmlento de k16 transpo&Oilfi, &e trasladan de silio a otro_,
olgenoma
1964 A. HigUChi y A. Wllson: primera replicacin de genes de una especie
'1. ComitnUI Gonmica
1985 El Depattamento de Energia de EE.UU. (OOE) plante6 ITit6toOos OMI SOCI*leiar genes, de Inters ctfnlco
Comerclal!zaCI6n de proten.as reoombinanles; hOfn'IQn3 de (Ptoroprirl). ir\letletn (A'olern). ele.
A, Jeff<y$ la rweNa genlics para ldentlbr pefSOt\aS a partir de su matefial
Se ausomati%a la secuendacin del ONA
se iniCian ras acdvidades de la Soclsdad Espailolg del (con$tiluid& en 1985)
1966 se aloriZa una vacuna para la hepatitis 8 proOOcida Jl(lf ingonieria oenotiea
Se crea en los tnsritLNOS Nacionalln de lit Sit/tld {NIH) de EE.UU. el Comit Constll'tJvo del DNA Recombinan:e
H, Aoderick acua el ttminO y mtodos para IOca!iz.ar gene& y hallar su &et\loncia
V.A, Mct<usick rooolila unas 4.000 atleraclones gentica& hereclic.ar&aS di&tin\a&
1987 Se do&cvbfo Que ta me(l!&cln del ONA en eucariotas silencia su transcripcin
Se prooono ol riCio <1e1 Genoms Humano (PGH}. coordinado por la Organfz3Cin 6'11 Gonoma
(HUGO), ooo Londres, Belhe&da y Tokio, En EE UU, &e cnJa la Qfi(;Jnlt dtllnw:stig.<tci6n del
(h..OOO. NBdotlat de lnvesogaci6n del GMOma Ht.amano). presidida pot J.Q Wal$10n M$1a
1992.
Se desarrollan 10$ cromOS()mM ar1ifieiales oe tevadl.Wa (veclores YAC)
REFERENCIAS HISTRICAS 445
1988 J.W. Black. G B. Etion y G.H. Hitchings. premio Nobel 1)0( el tr(ltamonco con Ot van:.s enfern'led&OeS
1989 S Anman y T A cecn. prem.o NObOI oor demoSirar DtOQied&des cawlucas en atgunos RNAs
J.M. Bi&hOp y H. E. Vannu&. pnm110 Nobel pot el desctbrirr.ento de tos oncogene$
1990 C. Venter \1t.SIIIrrotla vnn O$trategi& pau) III)C3titar 1M EST (etiqoelas de expresaaas)
1991 M.C. King asocia un gen Cl'()tn()$oma 11 con ta apart::ln oe cncet de mama familiar
1992 E.H. Fiscner y E.G. Kteoe. premio Nobef por lOs mecaniSmos de losfori adn reverstble de las proteJnas
Se ob!lenen mapas fisioos del cromosoma 21 (0. Cohen) y del cromosoma Y (0. Page)
H. Noller demuestra que la aCiiw:lad peptidiltranslerasa &e localiza en oo rA:NA del ribosoma
tm P.A. Shatp y A .J. Aobens. premio Nobel por observar genes disocntinoos (I'IHOI'I$$elf(ln4)$) en eucariotas
w. Akey elabora fl primer modoto llidimenSionat <Sel tom(JieJO motecu#ttt nude8r
A. Rosses ta c:oneJCJn entre ef gen ApoE y la enlermedad de Alltlelmer
K.B. Mullis.. premio Nobel por et rOOIOOO do reacciOn en cadena <le la ONA !X*no,asa (PCR}
M, Smith., QtetniO Nobeii)Or la tnV!ageoesls dlrlglda mediante Oligonudetdoe
t 994 A.G. Gilman y M. Roobell , Nobel por descubrir las procefnas G y su papet en la transducOO'l de
seales
t996 Se *vetleian lOS genomas oe 1a l)acteria mas pequel'la, Myccp'asma genltaum. y de la levadura oe O!'!f\'eza.
saccn..<tn::m,yc:"e$ cetevi$H
Afflrootryx oomercializ-.a un biochip parn anaizar las mutacione<s del VlflJS del SIDA
1997 Se hace posible la detennlnacin de cromosomopatlas en clulas sanguineas fetales
ConcluSin de' mapa lisco de alta resoluetn de to6 cromo60ll'las X y 7
1 008 Secuenciacin comf)lol<l dOI oenoma del CHnomatx/itl$ tl.,DM$
El gen oe bleomlclnahldroxllasa est ligado a la enfennedad de AIZheollTier. del gen ApeE
C. Venter crea Celera oon &ondos prrvado:s para secuenciar el genoma humano en 3 aros. y descifra el
genoma de microorganismos patgenos y de inters cornefCial y farmacutico
1999 R. Weinbc1g '' ans1orma in vit1o una clula hi.M'I'Iana sana en Median1e genw:as
SecuehCia completa y mapa genlloo del complejo mayor de Nistooompallbllldad en el cromoeoma 6
Un consorcio pl)blico (Europa. EE UU , SCQI.IItlfl(;ia el 9'7% del prmc1 cromo$Qma el 22
Pl\lcbt'S c>ara el <liagnstic:o del eAnee1 colonoct.\1 a lraW:S oe guanilileictua
2000 SiO<Ivimieos, bilogos molocuiBIO$ y de on la&
dd Ciencias (ngel Martfn Munlclo y Ennque Snchez-Monge y Parellada) y de FamttJcJ.a {Julio
Vl!lanueva) y ellnstitUlo de Espaa (Ua:rganta Sala& falgUE!'tas)
Mh.Pa oomplelo oe a mQSICa CROS()f)/"'ikt
Los polillcos oe EE.UU. y Reino Unic pi(Sen el libre acceso a lOS oatos del
Se deSCifra el M8)fl genlloo Cle lOS cromoeomas humanos S. 16 y 19
Se secuencia el cromosoma 21q, que SOfP<nde por 106 pooos genes que conttene
So Mee 1<1 prosontatin delgcnoma humnno (95% $0CVCOCi<t00. conjvrnnmonte por PGH y Celara)
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1
1
ndice analtico
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Las tiPt(llicas se citan por w no en lil e Por titrro'O. Al.thtirMf (enlennedad de)'
Loa noml)ftl <h'l se citan no <:omo de 1ft pnmora Plll"tn Por e,etnpiO.
'ONA pollmoraao' no f<ltma PW\0 de la 'ONA' En goneral se tmQitll ol nombre oomun y sin Ql.l<)tles
lnlermt<IOI, llgulondo el 1.110 on ingll v l<t dt IM-t CIO ta SOCiedad Espal\ola oe
BIOQU!m.ea Ctinlc.l y Pat<*>Qil Mol&eular.
A
AIAT VMNu411b1111C*'
v ...
--ABO aaAS v.._ .,...'IOKIJocRNA
... ".
abeonMcliJd (atiiOI'oOn
dll cldol: nur:t.lcce. 1645
dll baa. niiJ'Ogll-... 'ee
de y nuclelldol:.
28, 166
varlaatl en la d<lf'!Dturallzacin
detONA, 165
ABTS. 1&6
aoen1r1co V611e cromoeoma
2aotl&modolluortno, 355 359
330
330
No.acelineufarn!nleo (fleldo). 330
fl-N;olilht*IMn'llnk:tiiN
V;.N ht'-OIImnciiN A
8oe111aotl

...
y e.pton glnca 28'
-
.. __ 2&1

80CIOtW. 13
6cldo \lfiCO 1 J
ktdol tleciO liOtn ..
delnltutlhLaeln, 16A-
6elelo nudll<:o. 1
abson:tn en tf ultn\'!Oittl, 36.
'"
c:artiCIr hdrol!llco. 34
c:ar<tCier poi!Minlco 34
c:omponon!JM, e
M(IUOIOIO, 32
..,...nudeooo
escruc:tura pm'laf1a 32
135

hdlc*sos 3S
.........,....., 31
tWele$ esa\.1:116ales,. 32
pn:oedade$ b!I!(:OQIII!MioCa!l :M
"""""""' 1 ..
reaoetNICI3CI. 34

&olubrhdad. 134
bpo&, 33
'MCOSICiad. 34
aeilaein ot anww)tlcido$ on
prOICit\3$, 334
acorlarr.ento de los O)ttremos del
ON,6,, 157, 158
acridlna.. 259. 355. Ve.ase naranja
deacrldN
......
t!!ICISin pot caspasas, -432
lati'Aa 112
.a.ICIITICli!"\11 o. 2S8
-
de 118, 179
tX> atl'liV*" ...... 302 303. 307

<rw:tad 91 263
N:M ViNS9atr.,...
-
adilptadot 196
adernna. 12
adenrna fo6fonixl&lltra1'11Sierasa
VeaseAPRT
$-adenosllhomocrsteina, 201,273
5-adei'IOSilmtMionina, 22, 199, 200.
273, 278
aoenoSina. 20
como <M ramirtcacfn, 281
IIJinowol tstr1'111\JW
orto.1011 de. J96

...... 127
MlfiiC:IOI 432
413-414

A.()KA. o:!
geomtttlll Ot to. p.Jres de
_,..
modele rnoltc:ulare$, 53. 54
NJP-nbollriiQO_ 336
act'lemcrn. 259
attnldad, 139
128
para f.(l r&C:CIOn <te mRNA, 280
1>01 lll de pOir(A). 280
ll"'o*""-. m
AFP. 435
170
J9110U, 131
'<IIUbnaclo, 370
JlOOhOf .oatn-=o
en 11 0.1 ONA.
-..

.... 8S.96
CIOhlrtedldoa. 218
-2:20

,_365

liauIICIOn _ 3:$6
,..,.,acin. 360

VHN 0-melltguanlna
fllqullttiMitraaa. 357
dt CllliN. 358
genmtc-1$, 403
Alu 1 '" 32A
450
AI2Fieime-t (en!Mned&O de)
relaCin oon et p!eQamionto, 337
t-tamanmna, 251
etlructur* 258
aminas atomatieas. 355
amnoCirloS
abfewaturas de 1 y 3 leltas, 294
aoetllacin. 326
aclacin, 334
activacin. 302
0$1QAACin de QXIO(It$, 290

carboxilacin. 327
fosfailacin. 327
hidroxilacin. 328
metilaein, 328
mooticaWn en las prOlefnas, 326
prenilacln, 335
unin pot enlace pep!kico. 313
amlnolkido-tRNA ligasa. Vase
artW'IOaCIHRNA
amlnoacilaOOn deltRNA, 302
aminoacii-AMP. 300. 300
vecificaCI6n. 3C6
aminoacil-tANA. 2$9
2'y 3', 303
ubicacin en el sitio A, 311
'NificaCIOn.
aminoacil tANA $it'ltetas;a, 302
ca;aeterstieas.. 304
oenuos aetrvoa. 304
eotreocln de errore&.. 305
do 1, 303, 304
do cts. 11, 303, 304
304
m0<11010 mOIOCUf8I. 300
nl)mero r.eocesa11o. 305
ti)C'O(IO(*'nien10 dOI amii'IOciCIO,
304, 305
rco:onot:in".ef\\0 Gt!1 tRNA. 304,
305
a.minoglic$1100. 316. 317
aminopterina en medio HA T. 223
atl"'l'liOS. 120
AMP delito, 29
amplcllina. gen ele
209, 214
amplilicacln geontica.
Vhse ciONiciOn
amplilieactor, 266
amp', 209. 214
anatase. 99
anclaje de proteinas ., mornOfflnas
il traves ele Hplelos. 334
al'lda:tl'liaje tM::Iear.
Va&e esque6elo nuclear
anemia. Vase falcif()fl1't9
y vt?ase Falooni
403, 404
mocttnismo, 404, 405
:snlltriOM. Vesse clula
MgiOgnesls. 414
aoomalla cromosrmca.
VElase crom0$Qmop."'1ia
anolo:u::in. 240
8fltti0tleo

que Inhibe 1a t.raOJoein, 316
resistencia, 206
Vase tamDin
8fi'Cllcllloa, puromlclna.
rifarnpicfna .
anboodn, 74,289
aporeamiento oon el codn, 296
tu.imero nOOK;'tliQ, 297
tetaeiet\ oon e1 n(ltnero de
ocdone$, 298
anticuerpos
anlioQ9oxigeoi'NI. 186
capliCoillein tr'l ons.tyO WO$!on'l,
173
monociOnales. 121
que exls1en ncuuralmente. 3G9
anti'lieo, 223
anllgeno
A.372
asociado al can::inoma dlt
clulas 436
8, 372
ea!Wiielrt!JIO 125 (CA125), 436
c;a.n:iooembriOnaliO. 436
oeuar Cle clulaS en
prolileffldOt'l. Vase PCNA
H, 372
onootetal. 435
T del virus SV40, 431
amionoogn. Vlrso OI'IC0$1.Clf'0$()1
antiparalellsmo. 441
antlsentldo. 78, 248
v.., antitf1lsina, 376
herenoa, 396
1901orma Z. 376
mUiaclones causantes. 376
u,AT. Vease Cl, anlilripsina
andvif8l21. 23
Apal (l)rOieifla). 433
aparearnleMo de cases
oodn-anticodn, 296
entre 3 bases. 73
inOOtl"eCio. 362
intracat cnMio, 70, 73
\emporal, 248
Vkse tambMn
oomplementatiedad
apilamiento, 14, 48. 166
aplrlmldrnioo. 35, 232. 3$4, 361
apoptos.s
concepto. 4131
corrtrol f'IEI9'llivo, 416, 433
comrol po;silivo. 418, 433
CVOfl)O$ apc:lC)tIIOOS, 433
e;eeucin, 432
con J)fOI&eradn, 414
e1apas. 432. 433
tagocilosis, 433
lase final , 433
n:Juocin. 432
nci$Cin pot c.1ocromo e, 433
papel ele p63, 431
telacn oon proliferaCIn. 431
iNOICE ANATICO
apopiQSis
seale<& 1'"11J9'Liivas. 432
sei\Aie$ PQ$11Wat.. 432
APAT, 223
apurfr'liCO, 35. 232.354.361
AraA o arablnoslladenlna, 2t
AraC o arablnoYcltoeina, 21
rbol genealgico. 385
nomenclatura y simbolos. 39:::}
Ar1 (Otn y 421, 426
AAS. V&se s:ecvenc;:ie; <Je
replicacin autnoma
AASICENJTEL. 211
356
lt$\'1 df dc$00C)Iamion.IO O
de
vease bucle o
asbesto. 355
a&OOftla\o, 328
aspartato aminotranstera.sa
oomo marcador tull\Ofi'll, 437
iii<'X<'I 'Oial'lgi:l<'tsia. 363. 406
ATP como COSUSU1!10 (lit la ligasa. 156
ATPm
dOpenc:JieMe Ot RNA, 255
AttoPhos, 186
auiOinlcladora, 248
au10matizacln
de la PCR, 193
de la secuenciaCI6n enZJmtica
CkJ ONA, 237
de la sint.esis de
oliQooocletidos, 119
9U'Iorraciografia. 170, 1M. 186
au1osorna. 93
A.very, Macleod y Mc:Carty. 2
8'Yidina, 129. 186
ayus:e. 290
alternativo. 2'16, 285
08flff05 de. 290
mecanismo. 281
reconocimiento, 281
sec::uencias. 280
a)/1,1$1050ffia. 290
AZT, V;U6 tidOII\Idin&
azl.ieates
activados oon ntJcletldo, 332
oomponen1es de cidos
nucteioos, 11
ooniiguraein 8/IO<tiea, 20
azul de tripano. 129
B
SAC, 209, 211
bacteria
cpsula, 3
colOnia. 170, 214
i:sis .n silu. 110
Mc:tOfilago, 210
210
M13, 210
Pt, 211
T2.
baQJfcwirus. 210
1
iNDICE ANALITIOO
ballnolo, 296, M. 30ol
.. _297

de Ut'ae.b. 206
blltldU CftiiMOIOii iiCai
GOAyTtl
-
de ... ... ,
de Cn:II'I"'CCIIO'. iO
de prolaM
de promera ..... Sil
barret1 . tnllOdot oe 12
basa! VHu promotot.t
bases. tobft ltl
de!P\ii;IUtttlolto()n I CIA
bases nltfogtt'ladll
flbtc)t'Q()n en ti uaavlolel. 17, 16&
C.tUll(let CidCJ.bllfl 16
oomptamenw.nod8d, 3G
oomponontet do leidos
nuctllcol 1 2
deriv.OO. n'IOI,IItOOt. 13, 72,
201 272
OIIAII'IInaon. 3$3
232
M1n.lelure 12
13
rntll-.oon. 3S5

12
..
...........,.,,
VIU 01 ,.,.... m
eax 33
8d-J (91f1). 417
8c:f.2 '( p10itiftl) 417. <133
Bcl11 (PIOIOlna}. 433
8-0NA 39
355
benzolftdOniM 170
179
SER. Vtl"s.Ndtl6ndt
355
l)iblloteu d8 ONA
V6H OI"''C*CII
l)i(lltOOCIOI'\II VMH
!)fk)eal VMH
bdunoionalel 355
blochp. 387 . ...,.

tlialiaea 212

,.331



OtM1odtrmo 1 1 9
CIWOmtto t 19
Slootn (tlt'ldrome Clet. 40&
bloque de ntpetiCIOn.
VBeM ONA ttptbtfVO
212
Bombay flenollpo), 3'73
......
en la eslructurfl OOt tRNA.. 74
BACA (genes), 434
BtdU o btOmOdesOXIUndiNI 13:2
..................
12e 38 m
...... ,.,
bude o 257. 3n
.._,.,
de 253
de la ctesc*ta"-11>, 25o4
bZJP (protetnas). 64
e
C,H . veasede> de zinc
C,. Vase dedo de Zlne
CA125 (anlfgeno), 4136
CMT (&eeuef'ICia o caja), 268, 269
cabeza de mar8c>, 73
c:&dmiO. 355
ealeina, 13
CAK. Vase quinasa ac.lvaoom

cab'lonlna, 436
-328
c:aipJ.onas.
cAMP. VNSe AMP CICIIOO
canee<

c:olofrectat tiIIII10 IIR

(:lOmO et'llelmec2ad 412
CIOI"'CCC*>. 412
.. -. ....
de l'llgadO. 435, 376
de la linea gennlnal, 43-4, 436
de mama. 434, 436
de cwano, 434
ele prslata. 36
de pulmn. 36
de 436
de Utro. 436
e1apas 413
getmlnal y somtiCo, 434
hetenc!a, 434
lnslfJJ. 413,414
lnYBSIYO, 413
ongen monocb oaL. 413
ongen por mutaCICW'I. 413
vasculafllaCIOI'I, 414
y IT'oeriaco. dEil 273
y tetomera6a, 1t0
CAP VHwPQleit'll AltiCIIC*W"""'""'a
<M AJAP Ciellr:o
capetUUI S'. 278

papllltn .. nc:toct.ll
IJaCIUCC:tn. 309 310
000$0.1y2 278
dpsiCia '!I'k::a, ..
cpsula bactenana, 3
carab*\e.. :517 339
acttvidad ATPasa, 339
fu'ICI6n. 340
11006. 339
caractetes. 95
32'7
--maiOJV
...__

_,_327
eeonogr_.,. VNH Wf'CIIIIPO
C:.Qipo
-
....... 22$
mc.c:uler. 112
QttCIIIrton 89
CO'I-.;llda
o. lf(laltl. 421
Oo c.;I&Ol$l'$. 432
wttlml. 327
cuero (gon) 269
CUI)6Ja. 432
llCIIvacln en cascada, 432
tjOOUior. 432
MlbiOIOn. 33
II'IIOifOore 32
CUQue1t VHH
CIIOpflnl. 3.t 1
C8P 30SI 310 319
Cdc:5. 427
C(f( 424
..,.., ..... '26-4.2e
I(WIIJidQYnaN 425-&27
COl,.,.., 001'1 CIC:Will. 424 426 .
<27

-n

451
del OCle oeUat 421
1 Me .... 425
428
ltpol, 42t
Cdkl. 417
Cdk2. inhibicin por p21. 431
eDNA, 106, 244
como r)Mr1Q, 205
de. 216
oropareciOn, 206
y EST. 228
CEA. 436
otbldo 11 azar_ 183
o.blot. 14$
.. l!nlnaQ!On 1$6_ 157


<*adora
ClfiUI enblona 203 211

Odo c:M.fW. 100
ptWI'IortNI' 102 103

lr!lithON.
cIUII madre
1 19
tot'I)Oitnte 1M
c"ula aombcl!. 97
ciClo oe-IIAIII, 100
hlbrlda. 221
h!brlda. mueelros pera pref)fltar.
ll22
452
clula
oompeten14t, 2t t
en cutt1Vo, CQf'nO muestra, t2t
hbiclo l'n()(IOCrOtnOSmieO, 224
hlbtlclo subcromosmlco, 224
mtodos de separacin, 122
recambio, 411 S
Vld.1 me<:lia. l\popt0$is
cenlimorgan, 220
cenlrifUQacin
de equilibrio de sedinentacin,
124
diferenoal , 122. 133
fundamento. 122
isopfcnic<l, 67, 113. 124. 137. 143
para elutaei6n, 125
136
zonal, 124, 136
cenoro
de ayuste. 280
de ranVIicaCI6n. 290
oenlrmero. 87, 88. 9'2, 98
en vecl<lte& de donacin.
211
y ONA scullle. 113
CFTR. Vdse reg!Mdof de la
lransmombrana
cGMP.
ChamOOrd (castillO tle). 47
vease catablna
c::NipetOnlna. Vase carabina
CN.tgatl (reglas de). 38, 42
ctvp do ONA. Vase
choque trmioo. vease carabina
ocllna. 424
A..424
B. 424
oomplojo con Cdk. 424, 426,
427
o. 417,4.:24
de G,. 423. 424
de Gt- 423. 424
de inicio V4as4 ciclina G,
degradacin, 426, 428
E. 424
F. 424
ml!tca. Vsseclcioa. de G,
sntesis, 424, 426. 428
dciO
de elongacin en la traducr:i6n.
314
del ftii;!Of eciF2. 310, 320
deii8CIOfeEF1(1.312
ciclO celular. 97
eS1fmulos de detencin. 429.
431
estmulos de progresin. 428
tases. 98. 100
freno por p53. 431
onoogenes rtlac:iofl<!ldO$, 429
puntos de oontrol. 422
rvgulnc:iOn, 422, 427
y COndet'daein, 100
clciOtoslamlda. 355
cicloht.ximida, 316
ctgolo. 100. 103
CI'MMOCOf'O, 92
CIP1 (pt'Oteina), 426
CWTQSi$, 376
"'
etemento, 1ac1or o soeueneia,
26<1
Wase tambien Golgl
cisplatino, 355, 359
cisteina. en oef'l(ro aclivo
de la alquiltranslera&a. 358
de las caspasas. 432
dsleina endopeplidasa, 432
clstrn, 301
cititllakl. 27
20
<:itocina. 437
citoeinesis.. 99
cllocromo e, 328
como senaJ de activacin de
apoJI4o&ls. 43l
citofiUOiimetro. 126
caogenlica. 88, 91
cametro de fll.t:>. 126. 225
citoquine&ls. V6.;asecitoclneosis
cil06ina. 12
moli3da, 272
CKI. Vhse Cdk, inhN:tctes
cla:slfieaeiOn de proteJnas.
vease trfico
CIOn

concepto, 187
neoplsico. 413
clonacin
geooraf. 181
*'i\10$, 203
aoeuat Vse PeA
c:tonacl6n ceiLUI, 188. 197
eequema ganeta!. 2()t
204
e1e $01'1(Sa$, 176
del ii"'ser1o, 205
c:tot'18cl6n lunclon81, 380
ctotant&n6col, 316
-""
en la extraocin de ONA, 134
c:SoroplaS1os. S. 323
cioruro clcico. 211
ctoruro c.to cosio. V4a-.kt
conlrlfuoat:in i$0pietliea
cM. Vase centlmorgan
CMPslllco. 332
ooactivadot. 270
oobalanW\a. 22
Ckayi'IO ($inCirome oe). 363
eo<ffic<1co
N)ta<:iO dO, 288
t.ridaCI de, 288
OO<ifleante. Vase ONA codlftc:ante
o6clgo gen&lloo. 287
degeneracin. 295
<*lerenclas, 298
mitoooncfrial humano, 298
circular, 294
iNDICE ANALiTICO
c:digo genfilico
en !aDia, 293,
295

298
eodominant. 95. 394
codOn, 288, 289
apareamiento oon el antlcoan,
296
asignac:ln de amlnoCICIO, 290
AUG o de Inicio, 294, 306
de patO o letn'linaein, 294.314
nmero nec::eS811o, 288
nmero por amhocldo, 295
&In sentido.
VOMcodn de paro
&inniiT106, 295
$01apantes, 288
superpuett()S, 288
ooetlctente oe ex.11nc10n.
vease absortMdad
de &edimen1acin, 80
ooenzima A. 30
ooenzlmas
nucleosktlcas. 22
30
ootac:tor 270
oota CIC POI(A.), 139, 206. 280
IMeetO prorectot, 286
OOI!i.geno, 328, 329, 414
oolchlclna, 90
colonias. vease bacteria
y vase cton
azules, mlodo d&, 214
oompactacin,
V9ase oondensacin
oompMimotntO$ Sl.lteUaros. 322
oornpaliblfl!$. 202
competente. 211
101.109
tsbJOIO de. V68se COt
oomplef>
atliertO. 253
tlinarlo en la traouocln, 307
de empalme.
Vase aytJStosoma
de iniciacin SOS, 309, 310
de inicio de la tran&cripc;in, 267
de inicio de la transcripcin,
n"'IOeei$, 287
oe preinieiac:in 405. 309
de reconocimiento del origen.
151
do reparacin, 360
de 325
ptotelnasa mulliCallllillco. 342
terna(JO en la traducclOO.. 307
oomplementarteaad. 39
imperlecta, 169
perfecta, t69
condensacin del ONA, 65, 83, 91,
96
en la OPiosis, 432
gttldO Cle, 85
niYeles. 85, 100
NDICE AHAL.inCO
--- - - - - -

rWoOn CO'Itl ... 250


y de la tranaa!pCin,
...
152 15A
-
anri y fN' O. lof nl,l(jlfi(IOS
.. Of'/A, 55
C2' fttdo., C3' enao. S4 69
.... -
S'*
-66
SU!)Oftf'lt011&411 67
oonservadofa. VHU motaeln
110'-
)'..,..,...,.m
""""'"'""' (gen). 2$8
aeeooa.arll' 88
cnllgo. 229
eonlrOIM G}S. GJM y M 4:2'2.
23

oorea dt HuntinqtOn.
Hunbn9'on
eotiOf'l. 120
Ctlff8CICIO( de enorel
tfldiiCOO"'. 305
eotreocln de pruebll. 147
corrleniO abajo. 249
corrlenr. arriba. 249

220
C011e y ttrll)a.knt VHH .-yusae
y pegado. VA'IIf ayu$1e
11tular. hibrit*ln 172
COl. 210

Col. 111
cotranteripCIOn, 2$3
cotranslcn'nacin

CPAG 1M
CI'Sf. 2711
crtmaiiiM'8 Cle 64
437
r.,;ermedad
oon el 337
CtO {prol..,. dellllgO lambda}. 62
cromallda, 85, 88, 98
sopar acin ilf!n\lltll . 4 1 o
100
croti'IIW!il S, 8'
ua.w,....,..,. __ .. ., . , 87.
2113
oonOen&ttcin, 98
OHc:Of'ldens:tleiiOn M
mapeo pot FISH.
m
remodN6o 263
C;tOmO, 355
""""*'ma. S
acentnco. 92. 408 409
....oc:alll ..........
. ....,...,..,
al0f71ttt v.._
Qort'IOIOftl(lpoita
.anulr. 408
anlliolaJ. 211
asas 86.. 87
-!19 daslfcaon. es
oet1vld0. 409
dlomrloo. 409


ll'l"'Ctl'lCO. 8$. 99
IMel'ltiiOO, mapeo F1SH 225
isocromosomas, 4 10
e8
8$. ea. tt
mapeo ASH. 22S
88
numtHO, &, 7, 93

JWMdO drl. 172
leooltil;lonotnles, 218
tGI)Il110 "' la divis!Oft celular
10$
-406
----

sexual. 03, 94
submfllo6t\ltiCO 88
-88
X.93
X l'lldl\laC:IIOn. fP, 2eA
Y, 93
392
adquoriCII 402

OQf15tJMiva.. 402
f!SitUCIUtal, 406
nomtfl<llalura, 402
oomttiCII. 403
wr '1 e -"02
CRP V .. N proce1nt dt
AMP cic:liCO
CIUCi!Oimt . 59

ese 363
252. 253, 279
a$0CII!Cin con c"petvta S',
278
en IniCIO y eiOtlgleln 0t la
., ... 2$'* 256
fol:foo'lllaoll, 2$4. zss. 2&1
CTF. 208
.... po
apopt<CC. 433
........
VHU ayustO!Otl'\t
de lnc:lua.n. 33Q
pol8r. 103
....... -.258
CYFRA 21 1, 43$
o
4T. Vsa-st O&tavuelna
dact.nomlclno. 355
da!lonlsmo. 397
OAPI, Sit
->!e

dcc(gen) 418
ddC. Vease zalcltabwla
ddt
453
4dHTP v ....

dadO de U'C. 83, 265
(letectoe nu11Cionale9, para la
MIOCX:In de cton ..

_ ... .,.,., .... --.
ai<Jsello oe tondas..
180
del-gen<oco. m
llrC*IO cte as tiW&ICiOf'*... 295
<J'elecO. )t7. 3A8

cromosmb irlterthclal. 408
tn)(I"'IOIYIIU terminal, 406
dln$lcl.cl VU.gr...,_
.......
353
repaacin. 360. 362
desarrollo lfl'll)nOnrio, 286
84 eo. te
V--
-
desenrollamlenlo. 151. 2.t8
en la lr.,..;pcln, zs.3..25-t
406
te '3Z1
el extr.mo S del mANA, 27'8
esmetilaN 273
en de la expresin, 272
desnaturallucln. 1 $3

cuva de. 1&6
del prcmOIOf, 253
en la PCR 188. 189
lOcal pot .. Uflirl de protelnas.
61
-v-
renIUt(rl!iuein
y oon!onldo en G-+C. 166
y proplf(lades del DNA 165
-361
-
VMseDNaM
tOIOI't\boN, 11
.. o de 13 mell vuso
ttlliaOo de .. mtlla
--.354
"""""'
de p!OI&tnas. 322
deteocln
dt caon. 213

454
dextrgiro, 45
diagnsdco prenatal, 120. 386
diana, 168
de restriccin, 199
diootrico. Vase cromosoma
dictiosoma. 323
didtmosina, 23
235
355
dl!et"enc&acln, 285
dtt061ato, 10
difraccin de rayos X
pera la estructura del ONA, 37
para la estructura del tRNA. 75
Ot<l V9ased90xigenina
digeolfn
doble, 227
enzimtica. 122
(tel ONA gonmico. 216
166
ON:Jtoot!Ciina, 72
<2irnoeto do timina, 356
reparacin, 359
Oiti'IOiilnitrosamina. 355
dmetllsuHato. 355
para sacuenoiacin, 232
dmetoxitritlo, 119
dir'M;Ie$ido PQitos&ato, 29
60Jcetano. 166
328
6. 93. 100. 403
<isonz:imia, m
disgregacin
de tejidos. 133
qulmca, 122
dsomia, 403
<hplasia, 413
6sta1 W..=tso promocor
(i$110fia do OVCI'IoMe, 397
d $Y\Inoi0n. 1 04
defeclo de. 404. 400
dversidad 9J80eica
V&.!H pOiimorfi$mo
diviSin eelutar
Meilka. VI'Mse meiOSd
m!t<>lica. Vase miiOSiS
reduel0r'8. VU.se 1"1'\f!ok)SiS
OMT, 179
ONA, 1
7S. 160
108, 109
aftamonto fW(ttitivo.. 113
analisls de tamallo por
electtofotesis.. 137. 138
basura, 109
chatatra. 109
ciroolar, 145
codificante, 8, 100, 243, 245,
248. 250
comparadn entre las formas A,
ByZ.52
complemen1ario, V4aH cONA
compo$icin, VI.'"' GC
dao y p53, 431
de copia Unlca.. 8
DNA
densidad, 137
disperso, 100, 109
escaleta. 137. 138, 433
espaciador. 85. 86. 263, 433
esqueleto. 84
fetal 120
torm<'t A. V4aH AONA
torma B. Vttase B-DNA
10'"'1<"1 n'IUC{U\10, 344
torma salvaje, 344
lonna sllveslle, 344
lonna Z.. Vase ZDNA
fragmentacin en la apoptOSIS,
432. 433
fragmentacin, anisls
electrofOI'bCo, 433
hijo. 141
inici;tdof, 1 S4
intorfl(.l(;in con 60
inrergnico. pr()CX)(Cin en
Ol QOOOma. 108
inttn'lueiOOsmico.
ONA espaci&dOr
ligero, 143
mapeo por FISH, 22-5
m.a.rc<\ie. 143
""'stA .., ta cOhJia. 6
metabOlismo, 141
medlaociOn, 273
ITiiCrosatllte, tt4, 383
mierosatlise. 8Jplieati6tl a te
huela gentica, 385
mlnlsatllte. 114, 383
minlsallite. aplicacin a la
huela gentica, 3M
mini$0lllito hipqrvariablo. 3&4
mieocondrial, 108, 257
mitocondrlaJ, tllllldad, 3n
mitocondrlal, mue!Mras. 3n
moderadamonle repetitivo, 113
no coctilican&e, e. 108, 245, 250
pesado, 143
progeni\Or, 141
propoteln de bases. 38
reasodacln. Vase
renaiUtalzacin
recombinante. Vtiase tONA
rccar11cin. V6Mo rOCMWcin
e1 DNA
tepe!IIIYO, 8, 108, 109
repeIIIYO agrupado, 109
repetiliYO codrflcan1e, 110
repetiti'YO codilicanlie disperso,
ll2
repotilh<o <l$perso, 109
ropeliiWo flO c:ocllieante, 113.383
rol)f1li!O, an61isis., 116
sallile, 87, 113, 137, 383
li)06 en el genoma.. 1 oe
variantes t$1ruchJraiOI, 51
ele slntesls. 149
ONA gliCQsilasa. Vase
N-iJ!ioosllasas de DNA
DNA llgasa. VOOse ligasa
NDICE ANALiTICO
ONA me'*ransfetasa.
V6iu6 meliasa
DNA polmerasa, 84, 14'1
acliviCSA<SG$ enzimticas. 14$
cambio de a 6 o e. 154
cenii'O$ aeliVO$, 14 7
oellagc> T7, 236
empleo pera el marcaje de
sondas, 182
tn la reparaein, 359. 361
ovcariticas. 14$
traomonto CIC KJonow. 147
tnll$8 n'IOI&Cult:lr, 149
Pfu, 193
procarl6tlc8$. 147148
propledaes, 148
Sl.bllldades, 147. 149
Taq, 169. 235
tetrnoe&table. 189
tipos, 148
nn. 100
ubicac:i6n 9A)celular, 148

l. 147148
1. aphcacn para la preparaciOn
de soncias, 182
1, en la sintesis de cONA. 206
l. fra.gmento dt Klenow, 183,
1$4,23$
11, 147148
111, 147148
111, mOdelo moleCular, 149
(J., 14$. 152154
J.. eo la sintesls de tefme.ros,
100
14$
s, actividad 361
148, 153154
f , 148, 153-154
y. 148
r , 148
148
( , 148
Dn&A. 151
DnaB. 15t
DnaC. 151
ONApol. Vase ONA polimeMSa
ONasa. 85. 199
1 pancrelieoi, 18:2
11, 199
d:!Oie hebra, 4 t
doble hlice, 45
aplamierrto, 48
car.ieler hitfrofilico, 47
.. Cior tlidlo'bieo. 48
curvatura, 57
de tipo A en el ONA.
Vd4HA-DNA
de tipo A en el ANA, 69
eriaces de 48
fl)fm3(in <1t ti1)tt hlieo, 60
hJems e:stat:lilil:8dotas, 48
parmettoe. 46
posicin de tos IO&Iatos, 4 7
rCin con la replicacin, 49
iNOICE ANALTICO
dogma contra! genliea
motocutar, 2. 300
oomparado en ci"'$01 y
milooondr<t, 243
dolicol. 332 333
I0$1310, 333
l)irof0$r,:uo, 333
Clom$1iOO (gen), 269
domin<ant. 95. 394
dolblot, 170
Down (slnorome de). 406
dOXOtNbiC*'\a. 259
dRPasa. VOOH
<Sc$OxStrii)OnUCJeasa
V6.'Jst galaciOSeomla
(diS'!ro!la muscular de).
397
Clupllcacln, 367
CIUTP PrOiostatasa. 362
E
E lA (protelna). 431
El S (proteina). 431
E2F 430
E6 (prOietl'l8}, 431
E7 (prottin,), 431
ed80 1'1\IUerna
y nesgo de trisomia. 406
EOward (slnCitome de). 406
eEF. Vase factor de elongacin
de la traduccin
eleclo hdrolbico. 338
EGF. Vase factor de crecimiento
epidrmico
eiF, VEiaH laelor de inici<'IC>fl CIO
la lr.lduocin
e!MtMa
inhibiei(l por antitripSina. 376
etastN.. 376. 414
electrotore61s. 171. 113
calhacin, 138
en tatTClO pu!sant. 136, 226
fundamemo. 137
prepar<'Cin de getC$. t37
dpos de gel y l<'lrn;u\o do ONA. 137
e!Oetropotacin. 212
electrosttica (Interaccin}. 185
elemento
de respues1a. vease promotores
distales
de respuesla a hierro. 319
de respues1a a hormonas. 270
especfico do tgOJit'lciOn Vhso
promotOr distal
mvil. Vase tran&p06n
nuc:SNI dispen;o oooo.
Vase SINE
nuciNr di6JXIf&O largo.
V<JSGUNE
tranSponible:. V6.Ue 1ranspos6n
ELL. 255
elongacin de la repicacin. 152
etapas, 153
mecanismo. 153, 1$4
elongacin de la 1raducan
esquema general, 312
translocaeiOn. 313
transpeptldactn. 313
\.C)icacin, 311
elongacin de la lranscripc;in
complejo de. 25-4
laclores. 255
elongacin en la PCR. t 89
elutriaCI6n oerurlfuga. 12$
embriognosis
Clel DNA. 272
ef'I'C)aquetamlen!o, 83
endocllosls. 323
endomhosis, 94
endonucleasa. 196
AP, 3&1
de restriccin. Vasq enzimas
de restricetn
de tiPOS 'a' y 'b'. 198
en la reparacin, 361
FEN 1. VMse FEN 1
genetacin del 8Jifi91TlO 3' del
mFINA, 279
323
e.nlermedad. VOOse tambuin bajo
el nombre especfico
a90dada a 18 repamc:iOn del ONA. 363
aul0$00lica. concepto. 39'2. 394
&ul0$6mictl Clominttnte. 395
rote$1vt' , 395
bUSQuC(It't oet gen responsable,
22t. 385

V6ase (;IOI'Tlt0$0mOPlllia
mo1ecv1ar. 390
oomplei8.399
oong.enlta, oiagneuoo. 386. 387
cromosoma afectado. 392
cromosrNCa.
vease cromosomopatia
genlica. 369. 379. 390
l''lefO(:IIIt'lria, 221, 345
aJ s.tlCO. 392, 394
ligada a X dOminante, 396
ligt'l(l3 X rOCeSiva, 397
a Y, 397
tnl1ooondrial, concepto. 392
ml1ooondrial, 398
mo<ia.399
molecular. 389
mc;n:gnica. 392. 393
n'll.llifae1orial, 399
399
prOCiuctos g6nicos. 392
enhsetna, 376, 396
relaCIn oon el pletJamieolo. 337
enlace
ds hidrQeno de 1ipo Hoogsteen.
60. 73. 296. 297
<te hiCirget\0 Clc tipo Walson y
CJtck. 296. 297
dsrA!uro. 335
tosfoan-'driOo. 10
10$f<Xfit6$!er, 11, 146, 247
en\aco
fosfodister alip.co 281
fo&fof;ter, 9

Nglcosidico, hdrlisis. 354.
361
O.gtioosidioo. 329
S.gtioosf<ioo. 330
csol)9plidc:o. 341
lorm.,cin. 313
1i06$1er oon ubiqu!tioa. 341
1opol6gl:o. 68
trifoo1ato (5'51. 278
enrollamiento
en la 254
en$lll"'blacJO, 240
336
enve,ecimiento
y tclmetQS, 160
enna
455
aclrvadora de obiQUitina. 341
<:omo dC sondas. 180
IQIOJrttaC1iva<Wa. 35 7
nidtotilica en IIS060r'l'las.. 341
polladora de ubiQIJ'Iina. 34 1
enz1ma de restriccin. 184. 197
aplicaOOn al mapeo. 226. '221
Cilmeloristic;u gcllOtt!IO$. 199
CQn"oO mecani$t'I'IO <le oetensa en
hU MCtt-rias, 200
OOC'\&OOta infrecuente.
vease cortaOOta
de t!po 1, t99
de 1ipo 11, 199, 201
(lO 1ipo 11, ba(lefla <te Origen,
202
de tipo 11, ej001pl0s conetetos.
202
de tipo 11. nornendallKa. 202
de tipo 11. seOoJenCiaS dlaM. 202
do tipO 111, 199
en 1a l)reparnQIOn CIC gonotoet\s,
216
CSClilcicSOO. 199
e$lruetura, 199
frocuonci<t (lo r.con<>eimionto,
226
nomenc1a1ura. 199
pera hnooizar ..., plsmdo. 177
pera snteSIS de sondas. 184
sitios de recon0Qml8f\1o, 199
epigerntico. 271 . 412
equrlbradas
hebrt'IS del ONA, 44
equilibrado. 406
equtvalente genmioo. 216
erbA.417
erbB. 417
EFICCl, 360. 363
oFIF. VOOse laelor de ten-ninacin
de !tOducan
eriltOI'IW:':il'la, 316
error oongR!o del metabo'smo. 390
escalonado (elltremo). 201
359. 360
456
esci616n
de bases I'IICrogenadaS, 358,
360
de nucletldos, 358, 359
escorbuto. 328
espatSOmldna. 317
especie te&CI!va ae oxigeno, 35ol,
377
roparaoin. 360
o&pGCITofOiometria, 186
102
c$f)efmaloeito. 102
0$00f'm31ogne$i&, 102
e&permalogot*). 102
esperm;uozoide, 84, 102
esperl'Ndna, 34
espemWta. 34
esqueleto nuclear, 84, 8'1
EST, mapa fl&loo, 228
estabiklad del RNA. 286
estavudina, 23
esteara1o. 334
esteoran y viabirldad. 131
esli'nulador. 266
CSkecQvidinll, 129. 186
0$1N)0401i(Jiglioa, 258
f!o$tf'ept(!Micina. 316
estrucruta
trir:Jirnenslon,l oe protefnas,
predleoOtl. 338
!4lf'claria, relacin con la
secuencia, 338
et;trvcPJral VasG gen, $VE!Incia
esMJo famhr. 38!t
otidio. veas. bretnuro O& elic:JiO
355
etiqueta Vhse ppli<JO S$'181
e:tiQvC:tt"l do $0CuC:nciil
veaseEST
euc:arlonte. Vase eucatlota
eucariola. 1
diferenciils con procariola. 5
eucromatna. as. 87
y actividad tran&eripcional. 250
evploidt.a. 403
qxclusin
ensayos de, 129
exocitosis. 323
exn. 277
109, 245, 276
en Ol QC. 245
proporcin en el genoma, 108
exonucleasa. 198
3'y5' ,147
s en mateaje de sondas.
182
expresin dterenclal, 269
expresin gnlca, 2
basal, 269
261
niveles de regljacin, 262
regulacin, 261. 269
regulacin po&,t.ran&erlpctonal.
284
ex1tae1o $30. 289
el<ltemO
3'. modltlcadn, 279
s. moclifkadn, 2n
eohesNo, 201
eol'lesNo, aSOCiacin. 203
eoheSi\oo, en 1elrnero, 158
202
romo. Vase romo
F
FACS. 127, 225
facto.-
acuvaooc de las pro.easas
apopttlcas, 433
asociado a TBP. 267, 270, 211
de coagulacin VIII, 397
de coagulacin.. carboxllacln,
327
de aeclmlento, 416
de cteclmlento de
plaquela&, 416.421
de eteemierrto epidnnlco, 41 '1,
421
P 00 crocirni!JOO> tr&nsfom'\MIO,
416
de rel)ieaein e , 154
de mtlocondtlal, 257
estlmulaoor de la J)Oiadenila(:Ifl
por escisin, 279
lnh!bldor del erecimlenlo, 4 18
promok)r oe la madotacln o
de &el tase M, 424
foelorcs do tlongociOn do
la ln!duc:cin. 311
oEFh;c. 311.312
eEF l (iy, 311.312
eEF2, 312, 313
1ae1ores de IniCiacin oe la
traduccin, 309
o1F2, 309, 310
oiF2B. 310
OIF3, 309
eiF-4A, 309. 310
(!IF-48, 309, 310
eiF-4C, 309
e1F-4E, 309, 310,319
eiFS, 309, 310
eiF-6, 309
1aC1ores de 1ermlnadn de aa
traduOCin
eFIF, 314
laCiores de 60, 84, 253
asociacin en el complejo de
inicio. 270
ooaclivadolee, 270
oolares genetales. Z'TO
como onooprolena.s. 417
como (lf\()()$UPf0$0f 9$. 418
de comente at(lba.. 269
de la elongadn, 255
defWcln. 264
E2F.430
264
generales, 267
iNOICE ANALfTICO
lactotes de transcripcin

inleracc:iOn oon la ANA
PQ!imerasa, 270
mitooonc:ttial. 257
motivo5 estrucb.rafes. 265
Myc. 430
proximales. 269
p53, 431
SAEBP, 432
TF"I. 266. 271
TFII, 265, 266
TF"IIA. 268
TFIIB, 268
TFliO, 267, 2$8
TFJIE, 253, 268
TFUF.253, 268
TFUH, 253, 268, 363
TFIIH, como helle3$J. 267
TFIIH, como protein$
267
TFIIH. ett la repatacin. 359. 360
TFIIH. subunidades. 360
TFIH. 270
TFIII. 265, 271
TFIIlA, 63, 271
TFIIIB. 271
TFUIC, 271
FAO/ FAOH,, 30
de 1a foeoliasa, 357
tago. V6..1$D
faleillorme
deteocin por RFLP, 382
herencia, 396
mu&acin causano. 349
polimorfiSmo, 382
Fai(::Oni (anemia <Je), 363. 406
FAM, 238
familia multiget'liea, 110, 367
ramesllo, 335
fameilttansferasa
y lef'opi<'l arrtitumoral, 335
....
anatitlca, 119
de rec>c)$0. 98
G., G,. G.,. S y M, 98
pos&anatflic:a, 118
preanatftica, 118
Fa&' Red TR. 186
FOR. Vase 1\Jen.a oenttituga
(etaliYa
fOCU'IdaOn, 100. 106
FENI . 156
en ia reparacin, 361
en ia sfntesis de lelmeros. 160
fenllalanha-4-monoxlgenasa. 396
396
fenol
on lit OJCtr<'CCin do ONA., 134
tenollpo, 95
258
ferritlna. 319
, ....
DNA. 120
sangre, 120
NDICE ANALfTICO
u-teloprote<na,

fibra
bbCI dt CIOfN""t
Ve.JM Mn de 10""'
de tO rwn. IS 86 f7
de 10,.., y COf*<ll

de 10,..., y "'*'CICIOn. 2$0
30 MI. ee. 11
lil:lrOIIS qutllet
--
mutaCIn cautanlt, 3e 1
retac::IOI'I con ti 337
Fcoll, 124
FI$H,91,172
cromoeomlea, 224
de atta roiOflu<:IOn, 226
00
tluctwcln. VHN balanceo
131, 1&2, 238
tiUO!'melria, , &e
tunamtnto. 12t
tiV()rOCI'OMO 126 172. 188. 225.
232
en marc:a,e de IOf'IGN, 110, 182
DNA 231
___ ,.
fMel V..,_ H-IOIIU*'t .. O..,.
FMN:!O
1M
IOrmlwnldl 185. ,.
-,()NA
gfiCOtll,..
fon'Mziii'IO, 131
lomwato, pra aecuenoaciOn, 232
l!gl;lll,
30e
lmw::o t6cldo), para
232
NoformilmGtiOfW\11, 308
IOtmilloiJahlcJrolo&&to, 308
lot(Qet'l) . .. , ,
IOSiataaa aclda l)t0618tie. 438
f061awa atcallna, 184. 1&$, Z08
tsOenZimu dUOIICeCIOn
genlcl_ )67
30:l
c:Aicloo, 212
IOt'IIIO 1"101'Q11'11C0 (P t
c. eft NTP
.... , .......
Y ....., tNialfll4t HTP
lo6la:Jo y en NTP
v..,.,...o .. OtHTP
........... __ ..... _.
1, OIMroeenlf. 108
118
bitog1Uoomuta11, 37<4
Josfioptotelna 425
kllforamldllt'l 178
IOstoniiiCIOn
como mecanismo r&gulador. 327
do amlnOCidot en lat
ptOtolnat. 321
OOslonlaaon
de e1F+2. 320
cte1 dominio CTD. 252. 2S4, 2SS
teooersllle. 327, 42'S
IOSkdB:Sa tostetasa, 327
toskWUsa qunasa. 327
-
fosfarasa. 3Z7 42$
........... -3V.4<!S
k*>d mero. eplltaOio. 367
totoliasa. 357
kJtoprodi.Qo, 358
fracc::'l de rooombinatsn
V6aU' trecuef'ICi8
lt&CCIOtles scAX:elularea,. 133
"agmonlo de tes!rlocln, 20 t
''ecoei'IOI8 de rec:orooinadn, 219,220
tucosa. 330
luC06iillransferasa. 372
luerza centrifuga relativa , 122
luniculoceni&. 120
lu&idco (ckto). 317
lu&l6n ceh,lla, 222
lu&l6n 001 ONA VU$e
....,.......,...,
FJIF, 255
G
G.C fC:iONMdOl. 39, 137. 166
lefftnildofas"'
-2S6
GAOO. 431

galactosa, 330
vias metabollcas. 314
galactosa 1 fo6fato
uridlliltranstenua., 373
gatactosaminlltransfet'asa, 372
galacl09emia. 373375
1}-galacloslda:sa. 186.
Vase rarnt:Nn W:Z
galactosillranslera&a, 372
GAI. T V hu
g\'mt!Og6tle$i$, 99
94, 97. 99
O*I'IOC:bvif. , 3
GC (secuencia o Clfl}, 266 269
332

gel ......... - ............... _ ...
...., ... -
"""' ...... 388
90"
--
busqiJeda.. Vease gen. an.if-
301
oon vanos proc:tucGol
2<$27$
eonstlll.lfNO, 269
de c:tases 1. 11 y 111, 265
de expteston difetenclal, 269
definicin. 244246, 276
o casero, 269
eucaritico, estructura, 245
457
90"
........ --,

112
...................... "'
250
---
IYIM:IIdof. 214
mononofto. 368
tll()f1'llf'IC .. Uli. 246
oncDIUPieiOf
v,.. oncosupre&Of
0f08nluc:ln. 217
poilmor1o, 368
no ''llduc:ida y 3', 245.
276
rt<grn no TradUCida
VWo lntrn
r"(J!!n ttaduOicla. 245
ftQiiOn ttan.crita, 24.S
tranecnta ames
Ot la lnlducc:ln, 24S
'19.,... 2G9
MOUtneil e5lruclurat. 109, 24S
MOUir'ICil 109, 245
1etmlr'ltle>ra. 245
. 246. 249
_ .. _
v--

....,..... 112 369
ge. ... 38S
OMOC"'P VreH blochtP
gtnomii. 1 S
cod!IIC:Ir'" 250
CJIOOII . fl
p0imor1ismo
tX1r8nUC:IOar 5
trecoon tranecnta. 250
m!IOQOtl<bll humano. 8
nuc::6cNu', S
numen> de <:romo&oma., 6
tl\imero dt OMtt 8. 241
taml'lo. 6. 7
111)01 O ONA. 1 08
OOnmlea. 211.390
oomparallva. 241
MIN(:Iural, 379
QGnOMnaor
QOIAOietl 215
Cll cONA 216

--
o-nonraca.. 216
dlit dotllle. 216
- . 115
317
dt .,. .,.,... do ba$o$
COt'I'IPIIICS. en A y B-DNA 54
oeran!tgeranlo. 33S
Dtran!lo. 335
01f}m8ajl!nci0n). 87 91
giriiO' 1 $2
inl'lllbtc!n PQf anllbilloos, 259
gllcat10 V6d&-o Ollgoe.acndo
458
N-gllcano, 330
estrucl\lfl:l cet'ltrat 330
rOOCCtOnes <fe biosintesls. 333
tipos oomplejo. hlbrido y rico en
manosa. 33t
Qoglic:ano. 330
reacciOf'les de biosinteSI$, 332
gtioolipiOo, en la biosJI'!IeSIS de N.
glieano&, 333
V64$<t glioosil&cin
glico6aminogllcano. 329
gllco6tladn, 328
en Golgl. 332, 334
en N. 330
en 0, 330
en retfculo enclopl.&mico. 333
IOCAiiucin $Uboeklar. 332
propiod;)(k)$ QVO indvcq en la
proreina. 328
t:C>os. 329
Nglleo611asa DNA. 361, 362
glicoSiltransfetasa, 332
A y B de grupo sangurneo ASO.
370,371
gk>Oina
axpres.n en el desarrollo
anmal, 112
tnmili;l mutrignica, 111
396
Origen ei!OMiYO, 111
polimorlismo. 382
lipo$. 112
velocidad de traduccln, 320
y talasemia, 396
!>'. 349. 382
glbulo tundiOo. 338
ghJoo-. V6a$etglioo
gfuc:geno f0$1orllas;a. 327
gruoosa. 330
)"'ivlamiltr3n$POPii<'<'l$a
como marcadot tumoral, 437
glutaraldehic:b, 186
grutatin, 335
GMP cicico. 29
Gotgi (complejo <Se). 323
gonadottoplna corlnlca. 436
Gppp, 278
gradlen1e de densidad. t2. t37, 143
grnulos de sacte016n. 337
Grisolia, 239
GroEL. 339
GroES. 339
GrunbergManago y OchOS. 246
grupo sangulneo ABO
anticuerpos.. 369
aruigenos. 369
btoqui mlca, m
ensayo &erolgico, 370
lenolipos. 369. 373
90fl6Cie 370
getiOCil)()$, 373
kX:allzaeiOn etomosrrka. 371
punl09 polimrl100S, 371
resumen, 373
gruoo pmstiJCo. 336
GTBP, 362
GTPM<\
prote'M RA$, 421
gu&l'lidina, 134

g..tanilato. Z7
g..tanililacin
del extremo 5' del mANA. 278

del oK.1romo 5' 001 mANA, 278
guanoslna, 20
gufa (hebra}. Vase conctuct.ora
Gultlrle (tarjeta), 120
H
H. V9ase hebra H
H (gen), 370
1\ai)!Ogrupo, 3n
1'18,1)10itlia, 6, 93, 100, 403
I\8C)IO!ipo, 220
HAT (medio de cu!UVQ), 223
hCG, 436
HCI. 320
HONA, 60
-.
arrtisentido. 248
c:oditicante, 248
con sentido. 243
H. V6it$o ONA mit<>CondriN
lnl()f'M:Itiva, 248
L. vease ONA MII(IC()(Ielrlal
llgeta, 45, 160
molde. 248.
V6ase tamttin molde
!lf9111ivtl. 248
no 248
no infQrmaliva. 243
no mokte. 248

pesada. 4S, u;o
posi!Na, 248
lranserila, 248
hcJiic:Ma, 150. 151
(te hitlrido RNADNA. 255
&n la reparacin, 359
en la teiTIWlacln de la
ltan&c:rJPCin, 2-SS
en la lranscripcin, 253
en TFIIH, 267
hlioe de reconocimiento, 61
1'161ioe-buc:te.-r161ioe, 62
hUoe--giro-l'lllee, 61
hlle&-vuellahllc:e. 61
helleiclad del ONA, 45
hemo. 336
oomo regliadof de 320
hemofilia! 397
hemoglObina
laldtorme o S. 349, 382
giCOsllada, 329
nemogiOblnopalfa. 349
herencia. 2. Vase rambMn rbol

de &as mulaeiones, 344
iNDICE ANALITICO
herenaa
434
matema.398
patrn menetlano. en
tnfermedades

patrn I'IC) mondeliano, 398
HetShey '/ OIMe. 2
netetoealior'lte, 222
heterocigoels
y polimorfismo. 366
95
hetGI'OQ"Omalina, 85, 87, 88, 113
oonstitutiva. 87, 92
f.aco!tativa. 87
l'leiCrOdUple,x, 163, 168
neterogamtieo, 94
heleroplasnva, 396
OO!eroploidia, 403
lleJ(oquina.sa. 374
fo6fato i&emera&a
CQn"'I mareador tumoral , 437
fl,OX0$3minid&sa A
l'l:rencia, 396
mutacin, 350
HGPRT. 223
deflc:ietlcla, 224
HHR239,360
hlbridaan. 163
anisi& molect..Cat. 167
<JtONA, 171
OtRNA, 171
oe Sout11e1. V68se Soulhoern
en dotblot. 110
en fase liquida, 169
en la PCR. 189
en stotblot. 170
en &apMe slido, 110. vease
tambin sobre blochlp&
lat$0re& que afectan. 166
fundamento. 168
in siru. 172
.n siru PQf ftuofescenQCI..
VHsoFISH
f'n>!OCIO$, l9
Northem. Vase NOfthem
para la detecdn de dones
reoombinantes. 213
rigor. 168
&Obrtl)ioc:hlpS, 388
sobre oortes. ti&ulares. 172
$Obre prcparacionO$
cromosmicas... 1n
-
ONAONA, 163, 167
ONARNA, 69, 163, 249, 254
ONARNA, de&eSiabilizacin en la
oe tran$C:rii)OOI'I, 256
RNACONA. 196, 206
ANARNA, 163
hidrato de p&imldlna
ONA glico611a.sa, 362
hldraz:lna para secuendacin,
hidrocatburo& aromtico&
poficicllc:o&. 35S
NDICE ANALfTICD
=-------
hldiOioblold ,.
lf'lluerlcil .,. el CMOitniiO
338

aloliiiiN C11t ,.......,,10
36
qlllfNCII ct. 6cJOol Ndeocol 315
354
hidro ... ..,. 138 1H
N<lrOdo (IOn). 3$4
8-tllelt011QtJ.Jt'11tll. 3$4, 35e

ct. atnon06c"ldol. 321!1
hldfOlllasl, 321!1
hidrOXIO (tadlctiJ. 364. 3S6
328
hldruro de ntQutt. 31 1
hierro, metabollamo. 310
hiperooeesterolemll lllmlll81, 395
hlporQfOtniQo. 165
hlpttpi&N. 41 13
hlptt'vfk'..,.. VWt rtglono y
VMN mlniNt.._.
,,._""'"""""miCO, 165
-
un Ofll'HM' poiiPif*IO, 2"
un 9Ift-U' proc1uc1o gOnco 2'45
w. Olf'"U" ANA 24S
tftM'\1 t ...
un P'*""'- 2"
-21
COMO rtkAido Ot 1t
-363
en medo HAT, 223

lo6lonib0111118nterw
Veas.HGPRT
hAOna, 34, 84, ee
acehlaCIOn. 2Go4
IAITIIHtl mu!UQ't!lc:G, 1 10
H1, 84, 86, 87
H2A, 84,86
H2B, 84,86
H3, 84.86
H<l 84 86
Hll, tCMIIIIQn 326
H4 fNIIII.oQn 328
HS &.4 8e
reduoc:l6n 01 .. cerge 26'
.......
----20"
hiiiOnl dltr Qtll 'Nt 2&1

HMG"' 00
NALH1 3$2 J03
-362 363
NASH6 362
HNPOC, :163
HNPP. 186
MANA 10 2ti 1
Hoechsl, 91, 126
HoQnas(c-.a dO) Vi<"'HTATA
holoenZJma Vias rnocltiO
home<ImlniO. 82, 2e6
homoc;Brionte 222
hOmX:igCICO. 95
horrvxll.lplel. 163. 168


hOnldOgl8. de sec:uetOa
e h..tw'daaon. 167
hOitlq)Oilu::leoboo. 289

toogsiJH(l.. V$1 .,._. dt
taOYIO de tpo
Hoogol-
hon'noni'l$ estclfOi<let.
receptores de 270
hormonas lirOideas
00 270
I'IQrQuilla, 59, 70
de tepliC3(in, 145, 150, 1St, 15.5
V6ase r(Hat(l&{t
de RNA, 3 19
y lefYI'Iii\81Cir'l de 18
1Tanscnpcio, 2SS
-
VNH<*ul nfrtnona
hPMS, 362
HRE VS4t .... l101 cJt

H$p
-
H1li
hTR. Veeseii:!IOmefasa.

hl.teAi: dacCitat geoecca 3n. 38S
huella Ot ()NA
y ONA nwi!Niflitlt 114
humo. ptOduc:lo$ 355.
3511
HU1'111ngton (entermedad del. 395
f'M.Iso emlico. 99
IBP. Vtiaseproteina& de un.On alm
ICA, 271
Klentdad. pruebas de, 385
ograma 89
IF VHU lacloret (le
oe 1a lf8CiuC:dn
mlna-errwa vaase
ll'lSE!roloMl. 21<4
181. 185
geneo..ca 366
ft1Citlle {gen). 269

............. 248
n."Jbdoi eoe <liadO pcw heft'IO 320
hbdol (ptomo(oe. etemento o
seo.JMCia). 266
ntlaCIOI'I al aul. 183
.-;10 (punto dre c;ontrot del cido
ceMar). 23
..:iO do la replieaocin, 150
150 151
..:iOdO 13 307
enetgICa. 31 O
elapas. 309
rnoo Ot 11
I)Or ti tX'Iremo N, 3CO
lf'OIOIO dt le
como W*:t di OCJt*ol. 2&'

dlll
--267
mollla 2$3
459
ft'IOOIIIo dlt 267
modelO ..calonedo. 267. 268
ll'lli'IIICIOn a la f!IOI'I!g9CIn. 254.
267
1NK4 426
lnti'II.I"'IOInlllol!l. 128

Qon Y tyul&e altematfYO. 296
inOIII\Il, 21. 72
on tt snboodn. 296
on ti blllllnteo. 297
lnr, 2(i3, 20ti, 270
N&do, ?10
QOrQn 3t 7 _ 3'8
mMoOo de oe

OMO!IO 20<l 20<
1J0 c::ONA 205
......... :m
Wllllgn&. 4 t)_ 414

-
dt tR"-A ClOI'I cwor.w :JOS
91. 18$ 225.258 355
lnfiWtaM 97
y 250
ln*'tron. 316
lnttf9tnleo. 109
lnttagfniOO. 109
277
concepto. 7?. 109.245.276
<ispoiiCIOn en 1M gen. 245
tWnniiCIOn p0r outoc.alli$1$, '77
en fOrma dt ltuo. 281
tn l)ftIANA 2&4
magnrlud. 280
niJI'I'ItiO, 280
politn0111tmO, 368
ptOpOrCIOn tM1 el genoma.. 108
llpot 1 y 11' 77. 2:82
1lpot 111 )' 1 \ 282
.. ,.
-
CII'OI'fiOIOUCA. 11
...... -"07
C*dUIIU 4()1
IAE 310
IRE8P 310
IRP 310
... Cc>O 1$1. 201
tn 13 drt ge119$, 380
272
mu\ICIOn CIUI;.ti'IM de
htmOhM B. 348
IIIObullrllguan"'* 17'9
40COf"O. 90
leocron101oma, 41 o
460
S.OOnzi"" 367
202
i901orma.. 367
Sil'lfet3Stl
correceiOt\ <lo OHOros. 306
342
ls!opos t&diacliYos.. 4., 180. 185.
m
esludio del odigo genl!oo, 200
esludio de la b'aduccin, 300
isontna. 367
IVS. Vase intrn
J
JOE. 238
jun (gen). 417
K
kanamlcina. 317
Kaposi, V6ase xerodermla
Khorana. 1 '78
KIP, 426
kinomic:ina., 316
(fragmonlo Clo).
V6a:te ONA polifYiet'&$8. 1
Kllnelefter {sfndrome de), 406
Kozak (secuenCia de), 306
Kpn, IIS
L
L Vase nUmero de edace
L Vase hebra l
ll. Vase UNE
l19 IV$, 77

l3ulon"'eti3
1aeta10 tleshiCirogenasa. 437
lacZ. 209. 214
lanwvudina. 23
LAPCA, l93
lazo. V Baso inlrn on fotma do
LCR. rogin do contrOl
del IOCU$
louoomia, 436
lcul)n:l vuse etemanera
e\/gi(O. 45
ZDNA. SS
LiFraumenl (&oindrome). 431
ligamiento
en 1a bV:5Qve48 de gent$.
380
ligamientO gniCO. 220
llgasa. 202
en la reparacin. 359. 361
en la &{n'et;i& do leif'I'ICcl'()$,
160
mecanismo de reaccin. 156
pam fOfmat el rONA. 207. 206
UNE, 115. 368
linfQmb, 436
lipo!eocin, 212
llposoma, 212
liquido
31Mirico, 120
articular, 121
a&eitico. 121
celalorracutdeo. 121
petie6tdlco, 121
poiitonoal, 12t
pletnl. 121
serosos, 121
sinovial. 121
lius celular. 132
lisosoma. 323
degradacin de proternas. 341
primano, 341
Lk. V6ase nrMro de edaoe
IObi.IQ!vir, 13
IO(:i. P1untl 'Oou$
ICXUS, 95
diSlancia entte IOci, 219
IOCUS PI. Vase (t18nlitrtl$1na
Los ngeleS. Vasegalactosemla
LPCA. 193
luclfeta$8. 186
luciferina. 186
k.men. V6.1H rG'Ifculo
enctop!Mmioo
y GOigi
186
Ju:l , V4$$C radiaCin
Lympnoprep, 124
M
maduracin
de proteinas. 326
de mANA. m
derRNA. 282
rRNA y lftNA, 77
oetRNA.. 282
posttaiii!ICt1pc:io(l81. 244. 245.
250.275
postrari$Cripcional en la
mi!OOOndria. 28A
po$trJ/ISCripcional. diftrtf'lcia:s
ontr procariOtM y
eucario!as. 276
I)(:ISIJ'tlnscripcional, regulaCin,
...
vea se mlcroesteras
y vase afinidad
manosa, 330
MAP quina$as, 42'2
....,.

V6Me mapa genlloo
de restriccin. 226
de SNP. Vase polimorlismo SNP
ditoroncili.S cnb'e gon61ico
y li$ic0, 218
QCW16mico, 218
mapa li$ioo, 218
oe antt resohJoln. 225
cte baja resolucin. 221
.. onllgos. 229
de EST. 228
fNDICE ANATICO
mapa fi$ico
de te$1r1QCi(ln. 228
deSTS, 228
empleo cte Soutner'l'l, 227
h terpretac:in. 223, 227
resolucin, 226
mapa gentloo. 218
CIP'icacin para locali:zat un gen.
221
Of>teneiOn, 220
180.
Vase tambin mapa
EST. Vdi1HEST
gentiCo, 218
gnloo. 218.228
no gnico, 2-18, 228
no raciacll\'0, 186
polimrlico. 221
STS V6ase STS
185
b.ll'nOtat, 434. 435
VNTR, 384
mareaje. V6.?sc is610po$
y vease lluoroeromos
con cuatro tluorocromos.. 237
con OHA polimerasa. 182
con un in<fcador. 185
con polinuclelido quin.asa, 184
do NTP en los&ato o:. 182, 183,
184
<te NTP on fosf.alo t. 18-4, 232
oetoccin. 186
drec:to. 181
en CLI!ivo. 180
in vitro, 181
rdtecto. 185
no nudeoddloo de sondas, 185
para la proleoli&ls, 341
pOf oobado al azar. 183
pot trasladO de la mena. 182
1erminal. 183. 232
leminal por relleno. 184
marca de &eeuencia expresada.
V6<1se EST
t'I\AtCO al:lief\o <1t loctura, 294
en la btlsqueda <1e genes, 380
ma.reo <1e lectura, 288, 291, 292. 350
desplaZa"*"o oet, 289
Martan (sfndrome ae), 395
material gentico
e.xlr.lnuc:tear. S
nvc!oar. 5
rnalriZ Cldraeelult'll. 122. 413,414

Vase esqueleto nuclear
MaX (pt04efna). 62
Maxam y Gilbert. 231
Mtl,yGri:nwald.Oiem$4 (tinei6n
de).87

MCS. Vt.'JH SitiO Ot
mU!tcl'e
mcJm2 (gen) ., 17
MeCP. 272
medcina prodie1iva.. 387
NOICE ANALTICO
rncn.lla sea
ti'U..10$lf3$, 120
puncin, 120
meto06iS.. 97. 100. 104, 105
0()(1 ITIIIOSIS, 1 04
noodsyvnQOtt. 404, 405
MEK.422
melil. 156, 202. vease rarrtl:Nen
lta$1800 de &a mella
........
primera aey, 104
$Ogundatey, 105
Me$CI$01\ V 143
tne!abollsmo oxlclativo. 3!-4. 377
me1a1ase, 99
melaloproteasa de matnz
ex.tracelolar. 414
melslaSIS, 412,413,414
mebi<ICIn
como sel\a:l parata reparacin,
362
de amlno9cldos.. 328
de DaSes. nitrogenadas.
de la caperuzas. 278
CIC MMtetiimler\40, 272

del 211.212
eo el desarrolo embrionario,
272
tegulaOOn de la gniCIJ,
272
y cncer. 273
I'I'W'Mil&eirHesulcdn. 200
metlladentna+ONA glicosilasa, 362
N-metil4ai'IW'IOalobef'lceno. 356
Nmetil-4-antrooeno. 3SS
me1ilatk"''$, 278
asociMtl$ tt as entil'l\8$ oe
roolriocin, 200
0"-metilguanina
reparacin do, 358
meliloli&in<l, 328
me1i!niltQ$0urea, lS5
l'l"'ellltrans!erasas, 328
mellonlltJ=INA Iniciador, 308
melloniHANA lomllransferasa,
308
metionina. inOOtPOracin intern<'l y
N-terminal, 308
mlodos de inltO<Ivccin del rDN.A,
211. 213
metotreKato. 223
meltlzam!Cia, 124
MFP. 424
mien:)C)S1Cr3$ m.agn6tie3$, 1 28, 135
436
mietoinyecCJOtl. 212
mletomatrlz de ONA.
Vase blochlp
mlctosatlite.
Vase ClNA microsoU61i!c
miCI06COpia, 129. 186
de lluoresooncia, 91, 112
migracin de cll,jas 1VI'T10t<'lc$,
413, 414
mini$3!tllite.
Vtfa.se ONA minisatllte
MifktiiiO, 334
mlrslllaetn de pr01elnas. 335
mi!ooondria. S. 8, 323
divisin, 161
expresin 244
generacin de mulQenOS. 354
I(IIUI;J en lt\ apo()10$iS, 432
mitgonos. 420
milO$$, 97. 98, 100
oon meiosls.. 104
reg!Mcin. 423
$0tit'IC$ de iniCio, 428
$lln CitOCineSis, 404
mii(()CliOida.. 400. 406
MMP. Vase metaloproteasas de
matriz eJttracelutar
modelO del holoenzima p;:n;) ti
inioo do 13 trai"'$CCIpei0n,
253. 267
mo<IOIO para el 1.-.clo
de 13 253,
267, 268
mofic<'Cin

00 amino6CidOS ef'l protenas,
326, 336
pottradueci0!\81, 322
mOoiO$ ae contrOl Vase
pomo1ores distale$
145, 243, 247, 248
molcula! soi\;:1.1. 420
monQOiismo, 406
monocistrtlico. 301
mor'doeal. 145
monomorlo. 368
monosom&a. 403, 404
405
mn..&a. 119
mosaico. 345. 406
ct011'106mlco, 404
355
mob\'o estruaural
en proteinas que se I,.I'W)(I 211
ONA, $ 1, 266
mANA, 70,71
bloqueo. 319
corno mueslta para ciOnaocln,
205
aegmoacln. 286
esUlbAI:tad. 286. 319
e)(lracc-n par atinictOO. 139
2n
pollmerasa que k> transctlbe. 251
precursotes de. 2'$1
proteccin trente a la
degradacin, 319
transPOrte, regulacin. 318

"'*illrans.tera$8, 278
mRNA{I'IIJCI&siCI02' .0)
mctillft'U'Is.terasa, 278
meONA. Vlase ONA MiiOOOn(lritll
mTERF. 257
MTS (pro4eina$), 426
mtTFA, 257
mucoviSoeid0$1$.
libroSis qufstlca
mUMe celular ptogramada.
vease apoptosis
muesca. Vease mella
moosttas
bucales, 120
dsooacn. 122
tipos, 119
MUIUfocal, 145
mup11ocina, 316
mutac:an, 142, 344
a gran escala. 346
a pequcM O$t;.AJ.\, 346
t\$in1(lmbea. V6asesl1encio88.
CfaSillcacin, 344
como Otlgen del car.oer, 346
oon cambio, de$fase o
de&plazamien1o de
maroo, 350
oon V6au stcnci0$il
oon terminacin prematura.
Vase mu\aein sin
sentido
461
oon terminaetn relnlsada. 352
oonservadora. 368
de sentdo a!t8flldo, EIQuiYOCaclo
o falso. 349
<leleein, 347, 348
beneficioso o pectudlaal,
349
en ONA mitooondnal. 377
endgena. 352
esPOntnea. 353
exgcna. 354
troc:vencia. 346
gnoca. 344
germinal, 344
heredable. 344
incidencra. 34&
indvcida. V.':I$C mutaCin C:Jegel\8
ii'ICIUCidt' l)<)t agentes lS<:os., 356
ii'ISOf'C;iOr\, 347. 34&
magnitucJ. 346
materia prima para cambios
evolubVOs. 345
neUITal. Vase &iencaoosa
no hetedab!e, 345
no silencrosa, 34-9
no sinnim<'t Vf.'tse cte $Cn!iao
811Cn'ICIO
por oesamlnaein de bases,
353
por raacin, 356
puntual , 346
sienciOSa, 348. 368
$In c:.a.mbio dq m;itOQ, 351
s-'1 seMidO, 351
Vase silenciosa
S(W'I'I!iea, 345
347
sustihJtin O)nS!f"VIIdOta.
350
462
ml.llaCIOn
Su$tlruc::in no conservadora,
350
tranSiCin, 347
trans.versln, 347
y degeneracin del cdigo, 295
y metabolismo, 354
y JX*norlismo. 366
y antien&ales. 354
mulgeno
eliiTW'IaCin, 357
endgeno. 354
eiCOglttno. 364
Myc: (gen y prolefna), 417, 430
N
NA()o, 30
eo&u&trato de ta ligas&, 156
NAOP-, 30
I'Wlftol. 18&
Mlid-xic (60100),
NAO. 369
I'IMtl'lja do oerittion.. 126, 130
NBT, 188
neetOSiS. 431
neotrW::ina, 317
neoplasia. Vhse eMcer
NER. Vase escisin de
ru:::letidoe
neurollbromcuosls de tipo 1, 418
hefenoa.m
mvloc:iOn cav:sante. 362
39S. 41 e
352
neurOI\3$, 97
n11 (gen). 269, 352
como oncosuptesor, 352. 418
nitrato, 35S
nitrito. m
nlftooeLIIoea, 170
nitrgeno, Istopos " N y 143
nhrgeno mos.1aza. 365
nllt06amlna, 355
nittoeo (c:do). 3M
355
no-disyoocio. 404. 40S
NOR. V Base rejn organizadora
del nucleolo
NQfthem, 171
compAradO oon Soul:her'r'l y
Westem, 173
novobiocina. 259
NPP. 186
Ntem'lil\31. V6.1$e l)rQIOI'Ia. OXIJOMC)
nucteasa
apllcacln al mapeo, 226
aspectos generalet.. 198
de restriodn. Vase enzima
de restriocln
en la apoptosis.. 432
$1, 169
2
nC.Cieo celular, 2. 5
ncleo de la ONApollll, 149
ncleo hlerr03.tufre, 319
146,156.247,313
nucleotde. !)
nucleolo. 251
79
nuete$i(SO, 19
abSOrCin I.AI1'3viOIC!a. 28. 166
at1CirrelrOvital, 23
COmi)OOCOIO$, 19
-<!ltosfa1o, 24
hidrlisis <Pmlca, 2$
lntreeuenle, 21, 72, 76, 283

propiedades flsicoqufmie:as. 27
que forma doe nucle6oos. 20
tipo$, 20
tliiO$lAIO, 24
nuci00$0m&. &4. 85. 86
desensatnbl&, 263
liberacin, 263
posicin y oomro1 de
la expresin, 263
b' nucteolida&a
como tumoral, 437
nuclelido
28. 166
<:fclico, 29
COrnoteiO, 29
complejo con 21
componentes, 23
dlclesoxl-. Vase
cldesoxinueletiOOe
t.:lrlisi& quinka, 28
nQIT'IGinclaMa. 2S
posicin del enlace fosfato. 23
tlfl)piedade$ lisicoquimicas. V
PfOI)i0(13CIO$ inict\S., 27
sencillo, 24
tipos, 23
unido a az.:.cer, 332
nulipiOicJia, 403
nulisomfa, 403, 404
numeraCit'l
de lOs nudeMOS en genes
yen ANA, 249
nmero de enlace. 68
mocificacin por lopoi601'00fasa&.
152
nmero n, 93. V9anse tambien
dU;foidia.. poiploidia
vari&:i6n et1 la lecund;)c;in, 1 06
y ciclo celular, 1 DO
Nycoprep, 124
nylon. 170
o
octlnero de hiSkN\aS, 86
oetappcldo, 251
Oka:tald {tragrnen!OS de). 148, 153
Madlr'&Cirt. 156
progreso de la &lme&IS, 154
unin, 156

olgo(dT). 139. 206. 280
NDICE ANALiTICO
oligonudetldo. 183
empleo como sonda, 177
empleo en PCR. 189
SinltiS quimiCl, 17$
Ollgosaer>. 328
estruc:lura qufmlca, 330
Pf9(;ursor de N-gllcanos, 333
precursor del grupo ABO. 372
unido por N, 330
unido pot O. 330
olivonjcina, 91
oncogn
QC(I'Iparacin con onco&41preSoOt.
419
OOIICep!O, 416417
exprestn aon'inante. 417
que estimiAa el ciClo oeUat. 429
Qf'IOOprOiefna. 4 16
onc$uprell0f
oon onoogln. 4 19

expreSin receSiYa, 419
tlpos. 416
oocllo, 103
oogonlo, 103
opern. 252, 301
ORf. Vase marco abierto de ledura
orgnulo, 5, 322
orr, 151
origen
eompiOjO oc reoonocimiento.
151
de repllcactn. Vase
replicacin, ofipen
origen de ltanscripcin
oomo referencia de t'l.l'l'leracln.
249
corno mU8$1Ta. 122
oro, 186, 212
\1\110, 103
2-o)CogluiM'Ito. 328
p
p105-Ab {ptotefna). Vase Rb
p21 {protefna). 431
p21 Ras. Vase Ras (protefna)
p53 (gen y proteW.). 431
actuacin en el CIClo celular, 429
factOf de lranscripcin, 431
par prOiofOils
vfrlcaa. 431
incxtencia en el cncer, 431
papel dval en ciclo celular y
aiPPosis. 434
PAC, 209
paclamicina, 316
palfndromo, 57
oomo dana de rKIJ'Icx:ln. 201
en hebta sencilla, 59
en ANA. 2$
y ermlnadn de ta
transcripan, 2'56
334
PAP, 436
NDICE ANALfnCO
4.31
paremetOO. di. m
dt .... v .... ....,..,

gecwn ... ., 43
I\"'IIOdd6o 43
AUyCG 41
PAAP 432
pattiCUIIl dt dlt
lliiMNI 324
pattJCI.Aa nUdlo. 86
PalaU jalnc!fOtN de), 40e
ptuen-.dad
pruebas de, 38S
mOiteul!lr
390
paula d8 lectura. VfiN mon
P(:NA 149 1$.4 Vns9
ONA 6 y,.
secuestro por GAOO. 4131
PCR. 183
anidada, 1 es
aplaciOnN 188
tOS
-100
oon ltpt;lcbtt. tts
OOft COftloOI'U'O en cehtfllt 193
115
......... 193
-193
-110
tidei!Oad 1"'
,.
gr.ado de l!mC)I!\CiciOn. 192. 193
.nvtrta lt4
LA-PCA 19G
"'9> 193
lirn.te <to CIIQto<:clon. 193
LPCR, lo:!
numero de Cielos 1 g.2
numero de oopon consoguldi\S
192, 103
objOIIYOI, 188
I)Jia f3 (IOitoc:IOn C1t
pO'in"'Off4mol. 334
1)1111 Ol'>t6nein diiOf'ICIIS.
178
ooeonor ONA dt hQbra
....... 1 ..
-110
retldlf'floeNI) 192
RT-PCA 1915
POOF V..,. '-ICw dt

dt ClfiiQuetM
PEG VMNpcM ...

--)q
ese .. v.._ptOtMrH
del peplldO ..,...
78 312. 3 13
centro acrwo. 81
pep!ldiiIRNA
hldrlllll, 3 t 5
ppddo C, 337
peptm setial, 323. 324, 336
-32S
de f:::nCCCift' .... 32
-329

37


J*Oit:48:S8, 185. 186
.........,...323
PEST, 342
PFGE.
eatr'II>O ptlsame
PGH. Vease Proyecto GGnoma
.....,.no
"
oftelo SOI)fe el ap.areamerno de
bases. 42
efoeto SObl'e aa deSM'llnbaciOn, 164
pinlado oe Ct()tflosomas, 172
pinza desllzame. 149
plperdna para sec:::uenc:aac:In, 232
plrimldlna, 12
plrofosjatasa. 146, 247
plrotosiato. 146. 247
ele genes. 212
ve.s. molde
-5.2011
-2011
..........._.2011

(:()triO veeeor de CIDti800n. 204
F >11
hl'leSIIZaCIOn. 'n
ongen de repllcaoort. 209
pSP64. 177
pUCt9. 209
plegameneo de 244,
337, VH$6 tambn

n-.eearismo. 337
dei!Cleilela en la llbroets
qulstica. 351
enfermedades, 337
pcAI(A). Vease oola de pc6(A.l
pc*ll\) pohmerasa. 280
IX*{A0P-dxl6.a!poli'nera.sa, 432
poi(T). 139. 200. 280
poli( U 139,256. 280
pc:Macriam!Cia 138, 173
-
vease c:ow. de
.. -- ......
V erase cola de polo AJ
_....,..
c:dieabtln. 18S 212
poliOslrnleO,. :101
poiiOOfleCICW, 207, 209
pohelllenglleol. 212. 222
pohelllerwrnna. 185
polimorfismo. 95. 96. 365
Vease tarntltet! man:aoores
pol!mtfico6
aplicaciones. 384, 386
con efecto feno4fpioo, 369
PQI!I'IOffot.mO
coneep10,36$
nw'll- r 385

463
Ot un tolo nudecJII(I) Vease
-SN'


lllndtl"r''
en 9fl'lorN l'l'lllooondtlat. 3n
"'Wltf'OMI :168
tn 10 IOI"'g11\1d dt to$
dt rttlnOCtn
Vf.IHAF'LP
NIOIOQIC:o y palolglco. 366
geniiOo. 36!
QOniiOo no proleioo. 349
gn<o.366 366.369
gnioo y prot9IQO, 349
gnloo no co<;l!fie8,nlo, 376
gr&dO e. 36$
"*11'1111'1'10$ t 366

3A9. 369. 370
RFLP VNH RF-LP
368
SNP. 36$_ 38"
VNTR W..VHTR
y ln!MQOn_ 36&
-..368
lollofltasa.. 246. 290
0\llfliiN.. 1&1 232
... estu:lat el
c6<11go 289
_...67
nl(ltf'lat. 31
pOIIp!Oid!ll 94. 403
POMbonUCittdo. 246
pcflmbototl'la;, 79
poMomo VHse pollrhbo&oma

P<llymorh0p1ep. 12o1
poro nuc:IG<tr 275. 288. 318. 324
postlnterlf)CIOI'Ial
OOf"'tiOI Olla t_.,P,Min g6nlca.
28<
266
pRb VHH Rb
PIPIIKI!On
....... dd..-ltOIII. 135

.., P'Qieol,._
PtC*._,.de"""'*-. 118
-337
__ ,..
324 336
32
336
pre ANA 24$. 250. 27S
con v1r10t genl006, 276
do nntloroi1Cia. 281l
madurACIn Vi.lse maduracin
pot.lrln&ei1JICionM
m!looondnal 25 7 284
mol o PM\ IRNA y 1ANA, 283
464
prAHA
...-*'oeco, 2SI
78. 10. 251. 283
toboeOmc:o di r..,..,." n

...... ,e. ,.... 284
Pl'tll .IJk:fCICIOI .... c:onti"CCI ct.
.. t.:PMIICitl gjMa 283

4Cifl Gt) V.._ TATA
ptl'l'laNI. 147, 148 152

pollmertN (t
- 152
pnn, 337
probendo, 393
f,)r()CArl()ntt, VHH
.,_....,.
dt!oror'ICI .. oon euca11041, 5
gencma, 5
proottamlonto pot1ran1Cf'C)Cional
W.M maduracin
polttJnKI'Ipoonel
ptOCI!tllm.ef'IIO ptOt<l 110o de
..... , ...
V ....
JlfCICU"Vlllld. 148 149
J)loeolligefiO. 328


..,._ ..
--3S$
p!'OtlOtfnOM. 0011ifei1Mtl
PC2 y PC3, 337
pr'ONuiiM, 337
prollletKIf'l. 213
oonlrol pcw
<420
oonlrOI t14t0t#YO, 418
control potlllvo, 1e
equ!llbllo con rnvol'le c:thJI$r,
...
tT'IOOOf;lonal. 4 13
prolil tlidrodlua. 328
.,.,.,.
tlldi'OIU&&c:IOn. 32'8
prometat.... t9
promoeor_ 24 m 2&1
-:M&

w lllOIOdn .... por T8P

diiJ ......_lll y IU. 26S
--2$3
-200
?1S

mMIIIIC:IIn. 272
IMOCCM'IOillll, 257
- *
prounat. 26S

106
cotulflr 2 13
PfOP!do VHH yOO.lt'O de propl(llo
proposaiUS.
32A."""
ptOtar1Wia. 34. 8o'
pnxeasa. 122. 3ot2.. -n
del pipcldo sena&. 324
Cti5Cel pe :arn 432
--336

libiot. 318 ,.
IISCSOmal. 3t 1
ptOIN&(Ima, 342
"""- de gt\()OS luncioi"'MM. 178. 179
pro1ema. 2
accivacon proteotltlca.
veese pr04ec:Mis
como produceo gnlco
vease ptO<IUc(o 9rioo
Oe adhesin. 413. 437
de anclaje, 325
de choqtJe trmico, 339
de membrana, 324
de pausa. 2S&
VNNRPA
de seoeo., ... 324, 338
de ur'IIOtl: a hetn senci.... 150.
IS1
de \ftin a w. 270
det.nn a
-ceP
dt I.R6n a TATA, 2$7 271

$t11Cbl, 181 , 185
enltt tiPO$ ........
262
elCtfemos amino o N!Mml!\111
y caltlOxilo o
:lOO
funcional, 322
G. 421
gliOOSil&dn. 328
inaeracdn con ONA., 60
ltgante. 181
6gente de IRE. 3 19
lgante del telmero,
300,314.338
no 84
-
Vase plegM1iento de procenu
--331

325
,.....,....a del rtlOiom&. 325
,..grl Qdr;n dll r.no. 318
......._cte. V ... ....OC'O!C"t\
de
..... _..
setmll'\adotas de la trantCf1)Cin,
256
transpOrtadora de doruto, 351
Vt1se regulador de la
oondJC:'Incie
1T811$mtrnbtan&
ubiqui!ir'ladas. 3"' 1
tAcJa media. 340
fNOICE ANALITICO
18c:ltnefasa, 335,
338
ptOtlto.,. m
PIOle,. :rrl. C25
oepttld* ... dlt cdne
-c.
TFUH 287

- . 338
Ot" OHA.poj 1, , .. ,
0t pmleiNII rna:&&al eon
341-342
VHNiambHin proteasa
proMOma, 217

-6n
COI'Ioop40, 416, 417
llpot, 416
ptex;m"l VM$6: promoe
Proyecto Genoma Humano, 217
eeraeter(aeleaa, 218
239
ptOytCI08 pnvados. 240
PJP, 337
112
y 2SO
-(-)316

_..... ....
p6l'&4 _ ................ ..
PTE.20S
pUCtt--
.......
.. "'l'ldl"'gol"* .. ., Vase enlace
cidUIO VNH enlace
pul'llo di tM1rioei6n, 23
punto A 423
purlne. 12
puromldne 2 1, 3 16,317
a
quorat!nas. 436
qultiOinCia, 98
406
qulmlolum.nlecenoa.. 186
q_ ....
lr'ltllbbon por iWICI1J'lpSille 376


v,_..,De,
_ ... _
d'r adeec.,...n
IIOICiofa ca Cdlr;. q7
A
Rab (prolelnl). 421
-
IOnlzat\14, 356
oamma. 3M
tlyot X, 35&
utu-avioltlt, 356
.,..lbiO y t1e1 ONA,
357
NDICE ANALTICO
radic31es libres. Vase especies
reactivas de oloeno
A<tf 422
ramiftet'cin. centro oe. 280
Atl$ <gen y protelna). 417
en t.)() 1, 352
f811ne5ilaCiOn de, 335
fvnein, 421
mvlodtl , 422
rasgo faJciiOfm&. 396
rasgos. 95
ra:t:on de aslmecrfa. 39
Flb (gen y protena), 430
actuacin sobre el <:ic:tQ *"a'.
429
COmo SUSIUO de Cdl<, 430
tos.torilacln, 430
.nachvacin por protetnas
v(rk:SS. 431
inactJVaein y cnoo1, 430
rONA, 200, 204
IOfl1\bCi6n, 201
inlfoduccln en la clula
anl1tnona, 211.213
subproduC1os. 208
reasociac:an del ONA.. V.'f.SC Col y
renaturaizacin
recambio prcteioo. 340
receptOf
do lt'letoro& de 417
dC laetorcs inl'libiOOtes oe1
etecimiento, 418
de hOrmonas toroldeas. 4 17
de ltansterrlna, 319
recestYo, 95, 394
Aeddlnghau&en (entermedad de)
VOOse neuroflbromatosis
106, 142
fracQOn. V64$C fre.evcneia
troeucncta Vh$e frecuencia
l'lom66og\, 106. 218
meillca, 218
no homloga o deSigual, 367
reJaciOn oon el mapeo, 218
y segregacin oe ateiOs. 218
rocuento de clulas 129
recuperaOiOI"' de bases, va
metablica 223
rccmplanvnleniO. m!IOdO cM
do virvs
re<:Oml)inant.es, 210
regln
<e oontrol oe1 locus. 111
eeiJ'uCiuraL
V.'fse gen. $$CUCncia&
reguladora.
vnsc gen, secvencias
Otganizadoro dol nuetooto. 91
reglones hiptrv<tri3.!:lle$
trt et miDNA. 377
reglones Internas de cont101. 271
regulacin
pot fosfOtilacin n:rver&i:lte, 42S
319
318
reguladof de Sa ooocllclan(:l{l
transmembrana. 396
reguladota gnca).
Vaso gen, se<;uenCJ<'I$
relacin de ooc:ificacin. 288
relleno. 184
renal\lralizacin, 163, 167
rendimiento Cle la PCR, 192
reparacin, 142, 356
y acbvidad 5' eXOf'KICieasa, 14 7
de apareamientoo tnOQrrOCIO$,
362
de bases meuaaas.. 357
del uracllo en ef ONA, 362
por escisin, esquema globel ,
3S8
por reoombinacin. 362
posreplicaCin, 362
SIStemas enzimtcos. 366
IJPO$, 356
V6.1sot.ambi9n escisin
repetiCin. Vase OHA repetrtivo
directa. 56
e&pOQJta/. 56
invtttiO.'I, V68$e palii'IOromo
le!'lhii\IIIJ. Vase lelmero
replic:3Ci6n, 2, 98, 141
autQnoma, 206
bidireccional. 144
blkX:al, 161
bloqueo porGADO o p21, 431
caracteri&tJCa& oomparad<l$ oon
transcripcin. 248
<:lelo celular, 142
cofactores, 145
comparacin errtro pr()C{Iriolt\$,
euQMiotM y
riloeondrlas. 161
eomplejo oe. vea.se tepllsoma
142, 144
oel ANA, 2. 147
demosb"acin del mecansmo, 143
dUeccin, 146
dlspersarrte. 142
elongaCIn. Vase elongacin
de la tepllcadn
en la PCA. 189
en:timologfa. 145
ert()(es.. 352, 362
llnat Vase ternir'lacin
142. 14-4
I'IQrqul!la, 145, 150, 151
iniCio, 150
mecanismo de la reaoon, 146

monoloca.l, 145
mvllik.locat. 145
no 161
()r9tl'l, 92, 145, 150, 211
miroeondrial, 160
otlgen plasmldlco, 209
orlgenes, m!llple& en un
<:romo$01'na, 157
roaocin <:omp._"trndn eon
247
465
repliCaCin
reaccin glObal. 146
rei&Ci()l'l ooo et <::icto celUlar. 100
secuencial. 144
semloonseMdora, 142, 144
semidlsoonunua, 153
sel\ale-9 <te iniciO. 428
simultnea. 144
$USll810$, 145
tcrminaCJOt\. ve.a.se
ooidao de. V68se replicn
t.W'lidlreocional, 161
velocidad, 149
replicn. 145. 15?
roplisoma. 151, 152
moooto, 155
teMtencia a anbbltlcos. 206, 209.
214, 316
resttioein. V6ase enzimas
de rt$1rloci6n
tesltlccinm()(lifiC&CiQn, 200
r8$1Tictaws.
de r.SIIIociOn
lel(Udlw:ta (hebra), 152 154
retculO endoplstniCO, 322
lumen. 324
retlculocrtos. para estudlaf la
traQJ'ocln, 300
retinoblasl<lma. V6aso Ab
relra&ada (heobra).
Vitso rot:aroMa
retrott;i11SI>O$icrn. 368
reiTOtratl$p()$n, 368
2, 210, 244
r6'191ado del ONA tras
et:Jr()fQft$i$, 138
rever$110t'l di(ecl& de la mlllaeiOt'l.
357
AF-C. 154. vesse 1amoten ONA
polimeJasas 3 y e
A:F-LP, 381
flho (proteW.). 421
riboforina. 325
ribonucleasa
como marcadof ll.mOfal. 437
oomo proteina modelo de
plegamiento. 338
V.,sc t<tmbidtt AN(I$t!
ribOnucleopro!einas t'KICJeare-s
pequetlas. Vase snRNP
rlbosa. 11
rlbosoma. 79
cen1ros aCIIvce, 81
compoSICin, 80, 81
en ol mc10 Oe la
309. 310
en 13 elongaCIOn.
313
6soci<tcl0n durante la
1ri'Oueor\. 309, 315
en milocondrtas y eiO(Oplastos.. 79
neracOiOI"' oon mANA. 81
separacin y roosodacen de
309. 310
$1tiO$A, PyE, 311
466
ribosome
80, 81. 308. 309
79. 80
f<)Ooondo$,
VdtlH $01'1(1<\$ do ANA
tibotlmldlna, 72
fiboz:Jma, 76
at.lloa}N&Ie. 282
ANA autocatalitico. 282
313
RichOickerson. 52
riCW'Ia. 3 Hl
rifamicinas. 258
ril&tnpieina, 251, 258
rigor, 168
ANA,2
7SI.. 114, 324
aounctancia, 70
cala!itieo. V6Mo rii)Qz:wnas
cl!opl9fl\1Co pequei'lo.
Vase seRNA
oomo producto gi'IICo.
V6au prexlueto gnic:o
oomposlei6o de bases, 69
cromosmloo, 2
de b'ansferencia. Vase tRNA
di'IQf'$iOO<f de ostn..cl\r.'ls. 70
en org.nulos, 70
es1abllldad. 280, 286
estructl6a, 69
e&ttoctlla secundaria, 70, 73
Vtiase ANA maduro
genmieo. s
maduracin Vhse madlxacin

n\aduro. 245, 251, 275
mensajero. Vase mANA
rMocondrial, 257
tmocondri$1, madur<'CIIOn. 284
nuClear OOterogooo.
V6.1H hnFINA
node3r Vso $nANA
naCiet'lte, 247, 254
polladenilado.
veasecola de poli(A)
precul'$0f W.:t.so l)f'ORNA
ribOSOrrioo. vease rANA
secuenclacln. 238
tamao. 70
lif>O$, 69. 70
vanspone. 244, 290
ubicacin en 18 Q6Ua, 70
mec;li. , 280
ANA polimerasa. 84. 24A
por et complejo
de Inicio, 267
Cloroplscica. 2S 1
on 101 tratl$p()Sici(ln. 36&
eSC)eeialzacion. 251, 265
inhibicin, 251
localizacin $\lbCtlutar, 251
milocondrlal, 251. 257
pausas. 256
prooorilk.l. 250
procatllk:a, enzima mrn!ma o
nl)cleo. 251. 254
ANA
procatltiea, I'IOIOet\Zima, 254
procarltica, subiJnldad o. 251.
254
SP6,1n
subunldades, 251
tii)O$, 250
b'3fi$1Ctil0$ prl'l\itli()$
slnteelzaCIO$.. 2S 1
' 251,271
11.251.268
u, dominio Cterrnnal.
VaseCTO
111. 251. 271
RNA repica&as,l, 147
RNApol. Vtfase ANA polimera&as
RN$$a, 199
como contaminacin. 111
o. 283
00 BaciiJus cortus. 238
Clegradacin del mANA. 286
Hl, 156
Hl. oe tel<lmerot, 160
P. n . 283
PhyM, 238
Tt, 238
U2, 238
1, 199. 283
111, 283
ro (protefna), 255
anlogos eucaritioos, 25 7
Roben&on. V6asetran&locacln
rOCJamlna, 238
rodopslna, 334
rojo neutro. 130
romo. Vase ex.1remo romo
ROS. vease especie reactiva de
oxigeno
ROX, 238
APA, 151, 360
rANA. 70. 76
5$, 70, 76, 80
5,8$, 70, 76, 80
16$, 70, 76, 80
18S. 70, 76. so. 91
23$, 70, 76, 78, 80
28$,70, 76,78,90,91
285, como tra111$1)0Pliei3N.. 313
gonora.cin pot maCiurac:it:M\. 283
genes ele, 1 t 1
MEldltadn. 282
pollmerasas (J.Ie lo transcooen.
251
precui"SSIfeS de. 2S 1
195
S
saoo
120
119
sa!lentas 5' y 3' en los extremos Cle
restriccin. 201
saliva. m\lestra.s. 120
S&'lgor, 235
[N DICE ANAnCO
sangre
manchas, 120
ftKal, 120
perifrica. 120
259
sa1!ile. Vtiase ONA SUlite
satlite oromosrNco.
vease Cf01"1'1060ma
scc. 436
teRNA, 70
soc ... onm, 236
secuencia
Cit.. V6&$9 Ci$
cos. 210
lnr, 253
TATA, 253
de etiquetado.
Vase pptielo seal
ele rep11C8Ci6n a ... tnoma. 211
estruC1ural.
Vase gen, secuencia
gnica. Vas6 gen. sec ... encia
in*talacta. V6ase intrn
l i<et. Vdakt 06Pti seal
promotOr&. VdttU pr(lm(:IIOr
reguladora.
V6se gen. secuencias
seal. Vase pptJOO seal
subt.eiOmrica. 92
tetomrice. Vease
ttans. Vase 11ans
secuenelacln, 218, 231
CIC QenOmaS, 241
de RNA.. 238
didesolO. Vt:iase secuenclacln.
mtodo enzintlco
en la bUsq.teda ele genes. 380
enzlmtica. varian1es. 238
mtodo en.nmtioo. 23S
mkldo q\lmioo. 231
por 1orminaeio CIC C3Ciona.
Vdase seeoet'ICiaein,
mtOOO en.M'Itioo
S/)()fgur'l, 240
secuenCial Vdase replicacin
sedimentacin, 122
segregacin
CIC: -.1010$. 218
ese eromoSootna$ y
104. lOS. 218
segunOO cdigo gentk:o, 304
selecon
Cle cl.,.las hibrielas.. 223
ele clones recorrbnantes, 213
214
negativa., t29
positiva. 129
semen. 120
$0rNConsef\tadOta.
V&se repllcaeiOn
semklsconthJa.
Vase replicacin
sealizacin, tipo&, 4.20
separacin de clula$. 122
&ematlreonina 327. 424, 425
iNDICE ANALfTICO

WlCO t.ado . 330
SlgliN V.._ ANA ...
,....,..,..,.
-*

&NE n.c
,,,...,. "',..,..., drl fQ;IfoOCide_
m
$ii'ICIHIS dll I)IOQfatfll. 3$8
Sit(Qfl'l), 416
tis.tema end0mtmtlf8not0. 322
"""
311.313
CIO clonadO mulllplo. 207. 209
de testoocn. 199
de fe&toocln 20SI
de secuencia marcl:\dll
VHHSTS
E o diO tahdtl 311 313
unlcot. VMuSTS
p o peptl(ll!loo. )1 1' 313
SLl, 271
Slol--t*M en I'IIDI'IC)IOOn 110
WIIP v ... l)<*mOI'IIImO SNP
SHP Vease Pdlloo.'Wno SNP
snAHA. 7'0 25 l . 271. 280
&afnlnO y U'oOI\ 282
--
tiPC latNIIO 1 28:l
...... "'_
---
288
SCienOidllt Ot 30 nm
""""' , ..
cla5111CaCIOf'l, 17$
deONA, 176
de ANA, 177
diSeno, 179
lluoraacen!ot, 172,2.24
marca.-. 180
Oblenan po1 CIOI'II!ICin, 176
oblenan po1 PCA 176
para det:tatla anemia
IAICIIOII'I'It 313
prepatac.on, 175
.SIM&M, 183. 1&4
Slf'lltCIOII, 177
sopone IWO. unin. 171

IPCIM>'> 11 r.tco Z/7

_,,
n
para diMCW 1r1 anem.a
faleffon'rle 383
para t4tctat RFLP, 381, 313
para otol:* VNTFI 083
$PI*
SP6 1n
SAEBP, 432
SAP, 324
Sl1PA.
SSB protetf\U <Je ut'lln a
hebra sencilla
STS en mapa trSICO, 228
subdonaaon. 215
de a.
ONApol t 147
suodiO oeucw. vease II(:'OC!-

...,..,.. """"""- ..
17
negaDYo. 67, 152
po$111JVO. 67
66
$Yf)tflUO, 364 367
s.JI)OIXido (li$ti'IU!3!a 357
suroo m;t.yor, 46, 48
vnin dt protcinas. 61
suroo me.nor, 46, 48
unin eJe pr'Oteinas. 267
survivlna$. 433
l\lmOral 413 434
sustanaa H. VHse antgeno H
wsbtucin. VBH6 mut.acin
mtodo de preparacan del 'ltfVI
I'9COfl'lblnamK, 210
SV40,210
vease de
..............,
su. 2$5
sur 255
T
TAF vease tactore6 asoclaCIICIS
a TBP
talasenwa.. 396
tallo, 70
TAMAA.238
tt\n(lcm, 109, 383
TATA.253, 265, 270
roeoooewniento 1)0( TBP, 267
lt\utomelia, 14
rolatin con la mu1acin, 353
TJyS8Ch$ (le), 350 395
TBP. V6as.! I)IOle;na ele utliOn
a TATA. Vease proteM
llgante delleb'neiO
3TC Vease liamMJcllnl
Telala&e, 99
tebnerasa. l47 158
auset'l()l, 160
00t1 11)01 oenees 158
.._, ...
f'l'll!iC8I'IIS de IICCOl. '59
y cancef. 160
y Pfofiieoaccw oeUaf'. 160

157. 158 180
tn vf<;klrt$ 211

rephcaCIOn. 1 57
secuencia, 159
slntesis.. 159
y ONA minis<Ull!e, 114
y ONA satlite, 113
1elrrloro
y 160

dlllu..on dtl DHA. V.._ T,.,
enPCA 119

GIIdO U18
.., .. PCR 188
Tt:R V ...
...............
lf'ltwmofal
y lelomersa. 160
-IOn
<N le 157
<N la lrlducon. 314
Clt la 255
467
CIO la lranacf1l(li6n mttooordlal.
267
<Jopendlonte de p. 255
lnCIOpontllonle t 1). 255
PftmA1UI8 dlla lt&dUCCIOn, 351
tetra .. da t la lradi.ICCIf\, 352
IOfmi!'IKio t cadena. Vase
MCulr'ICIIICI6n enuntJCa
*""Nido! 2S2 2SS
t.ti"'""CJo:llldof. 1 89
...,...,. ....... 189 235
........ 33&
... 80idll. 316
gll"'otrt'l o.. 214
!ahctr'*"'*'. 223. 308

... .t03 404
letrald;O. 131 186
T VMNT
TF V..,_Jadorttdt
ttJnectlpcin
TCB, 436
TGFIl 418
20
en modio HAr, 223
11\tltcJa, 132
tlmt<Jino qulnasa, 223
lll"'''lf''l 12
OlmtiO. 356, 359
Un'WII ghc:ol 3S4
df_ 3eO
lntiOn 87 80 Sil VNnH

lll ()NA 131
NOA 91
-72
_..,.
lfWII'Irll ':m. 425
TK ql.'n8$ll
T 166
tt1IIPCR 189
y _, US$
TW.IM

66. 84, 87, 151
ao 11po 1. tS2
on la lraMO'\pac)n, 254
1opolog1t1 ea
10.11''1(1 Chtldlictl. 317
468
TR. VOOse!elomerasa.
oomponen1es
lnlduocin, 2. 244, 245
caracleristJCas. 300
oonoodn espacial y con
la 250
elongacin. V6ns. elOngacin
de 18 ttaduocin
enorg!iea,. 31 S
la$C$ o 302
frecvoncia. 319
inhibiOotes, 316
IniCio. vusc Inicio de &a
lraduccion
macromolculas Implicadas, 300
regtAacln. 318<!20
resumen. 302. 315
sentiOO, 300
lasa de error. ':YJ7
termnaCin. 314
velOCidad. 318
trfico de proteinM. 322324
"""' elementos o $:uet!Cias, 266
factores, 265
VMse tami:Hn Golgi
trM$Cripon. 2. 243. 245
as:imetria, 249
earactoristic\'IS
oon rupli<:acin, 248
oolaetores. 247
eoml)3raci0n entro procaolas y
eucariotas, 250
oonexin -.paclal y tefT1)0!aJ oon
la b'aduccin, 250
del gonoma mitC)()QI'I(t!ill. 257
direocin. 247
e intetl8$0. 250
elongaCin. vease elongacin
ae la
energtica, 246
enUnotogra. 246
ewpas, 252
hebras positiva y negativa. 24&
hebras codificante y
no (;Q(Iifieame, 248
helbtt\$ f#l stnti<:So
y anti$0ntidO, 248
Mbras in10r'I"Nltlva y
no lntormattva, 248
Mbr'as molde y no molde, 248
nebras tra.nscnta y no transcrita..
248
lnhibidores, 258
lnloo. Vtiitse inicio do
IIM$CfCXi6n
mecanismo de la teaocln. 24 7
Otlgen. vease origen
de
promo1or. voose pron'lotot
reaccin comparada con
replicaCI6n. 247
reaccin global, 246
reaccin inicial, 2S4
regulacin. 261
ttansetlpei()tl
tegulaeifl 271
tegulaei6tl gen!liea. 264
regulacin por $01\alleS, 266
regulacin posltwa y negativa,
266
togulacin posb'an&eripcional,
284
regulaCin y acoe:&ibilidad
dol ONA.. 263
rogulacin, t.rminologia, 265
relacin con la oonttenS31ein
del ONA, 250
sentido oonlratto en cada 1\eCf'a.
249
sustratos, 246
temWtacln. 256
tell'l*'ologta. 2.08, 249
unlOOd de, 252
y eucromculna, 250
y fibra de 10 nm, 250
tran&eripc;in inYef'&a, 2

VHH ANA POiimerm
inversa, 147, 244
en lransposicin, 368
dlil)idoros., 23

preparar c:ONA. 206
&eeoonciar ONA. 235
ANA, 239
transcrita. Vaullebr'a b'anserita
transcrito primano.
VMse pre-RNA
transdtA:ciOn do &eal. 417, 418,
420
g100e1, 421
ttar'l$etter\1lcaeln. 281, 303
212
ttans:!etasa leO'nlnal. 206
ttanefetencfa tras electrofofesis,
111 , 173
transferrina, receptor de, 319
211.
2 12
ltati$10$10rllaCIOn, 281
transluSin. compatibilidad, 370
transiCin, 347
ttatlsiOcadn
de protatnas del ci\0601 al
endopt&mico,
324
de Robertson, 409
del ribo$oma. 312, 313
1)3pol de las eatetlinas. 337
redproca. 409
rrans10casa Vase eEF-2
y v8se rbolorina
lfan&peptidacin, 312, 313
transpeptidasa.
VMse pep!idiltransfornsa
llat'l$1)1)110
a trt1v6$ do poros nUCleares., 244
do mRNA, 318
regulacto, 323
fNOICE ANALTICO
ln!n$p()(le
tran&membrana., 323
V'C'Sicular. m
367
transposiCin, 367
11anspoen, 367
transversln, 347
lrastado de la mela, 182
trbol, estructura del lANA. 74
lriC01iodistrofia, 363
trifosfato. 10
lriplo hlioe, 60
lripkrte. VNse ood6n
lripiQiOia, 94, 403
tripsina, 336
il"'hill:::iCin por anliripsina, 376
proteolisis dO la ONApoll, 14 7
tripsingeno, 336
triplOiat'IO.
bbs(ntesls del'klente. 214
cttstosfato. 29
tri&omia. 403, 404, 406
001 cr(ll'l'l()$0m.a 13, 406
<let QrQtn()$01'1\8 18, 406
ctet 21. 345, 406
de cromosomas sexuales. 406
mecanismo, 405
tritilo, 179
tRNA. 10. 71
ftpecificidad PQt aminoikido,
71
estruetura lereiarla, 75
isoaceptOt. 304
maduracin, 282
modelo mctecular, 75
nomonclatvra, 71
nUmoro de dif.,emos..
297
papel la
traduccin, 269
polimernsa que lo transct't)e,
251
procursores de, 251
separacin del polipptido al
la tradl.lcein,
315
sil'l6nimo, 304
lANA-. 306
tRNA,.- y tAN!\-. 306
complejo lernario con e1F2 y
GTP, 309, 310
IRNA 283
lrolobia.sto. 119
(Ort)oxiacln, 3:27
ttq)O(lina T, get1 y ayuste
allematlvo. 286
TFIPI, 214
TRT. Vasttlelomerasa.

ITO.A. 363
rumor. VtMu I.Mlbin C6noec'
l"'"'al9'W:>.414
primario benigno, 413
secundario, 413,414
wmorognesls., A 13
iNOICE ANALfnCO
rungsteno. rmcroesfetas paro
clonacin. 212
Tumer de). 404
u
U1, U2. U3, U4, OS. U6. V.Mse
snRNA y vttase
VBF. 271
ubiCllcin del nmir'loaeiHRNA. 312
341
vbiQuilina pro!el l'lll llgasa. 34 1
ubiQuilinacin. 342
UCE, 271
UDPgatactosa. 332
VDPgat&CIOSa epwnetasa. 374
VOPiJIUC0$1t. 332
VOPfii!U00$8 Qit0'06!0tllasa. 374
UDPNaoelllgalaciOSamlna. 332
UDP-n..at:e1!1g!uoosamina, 332
uttracentnlugacin, 136
isop(cnica.. 67
ultravioleta. Vtiase radiacin
unidad
de codificacin. IM\81\0, 268
<So f(:pOtiein.
vease DNA repet!INO
<le teJ)Iicacln. vease rE!J)IIcn
de 252
de transcril>Cin mi10001'1()1al , 258
\ric:i'90CiOMI. VdaU
triYersa!idad.
vease OOd!go gene.tlco
wacilo, 12
reconoc:wnierrto en el ONA. 362
wacilo-ONA g!ic:osiua. 362
urea. 134. 166. Hl9
urdla'O. 27
undilil1ransferua. 374
urdn, 20
V
vai!HANA slntelasa.
OOtTeocin de errores, 307
valor C. 6. 94
vatlaciOn en la tecundacln. 1 06
vatlacln en la 104
valOr e
vnrin en e CIClO oeltAat,
100
varial>ilidacl gentica
V6aso polimorfismo
va&QUiariUlcin. 414
- ARSICENfTEL, 211
BAC. 211
dasltlcaC*Sn. 208
e6miclo, 210
de clOnacin, 203, 206
de elq)lesln, 206, 215
ese 20&. 210
de propagacin, 206
de sustitucin. 210
plasmtdico. 209
preparaCIn, 207
propagacin. 209
tamao dol qerto itdmilidt),
""'
..... 208
virieo, 210, 212
YAC, 211
vellosidades corinlcas, 120
velocidad de sedimen1aC*Sn. 122,
124
vesiculas. 323
viabilidad. 129
vida media
de ptoternas. 340
del ANA. 286
VI H. Vaso virus de 101
inmunodoliCionci<t
humana
viroid&:S, 78
virus. V6ase ramDMtt l!Eicterilagos
ader.ovlrus., 431
c&pi(Sa, 4
Cle .18 inmunOdetielencls
ttumMa. 23
e1e1 mosaico e1e1 labaoo. 2
Clet papiloma, 431
como vectet.
V6-asevector virioo

SV40, 431
tumorale6, 431
469
VISC061dad, 34
variacin en la desnallJra!izacin
C1e1 DNA. 165
<Mamna B,.. V6-ase cobatamina
vilamina C. 328
vi1amitla K. 327
VNTR. 221. 383
w
WAF1 (ptOteina). 426
watson y Ctiek. 2. vease tsmDJen
enlaCe oe hidrgeno
mOdelo pata el DNA, 39
Westem. 173
comparado con Southern y
Northem, 173
X
xamina, 13
como rodado de la
353
,ccrodefmi3 pgmentou o
de Kaposi, 360, 363
Xgat. 186. 214
XP. V.ase xerodetmla pigmen.osa
XPA.360
X.PC, 360
XPF, 360
XPG. 360
y
VAC, 209, 211
yoduro de propidio, 130. 131
VV1 . 270
z
Z31eiUlllWI. 23
ZONA. 55
mOdelos moleCulares, 55
zeiOSIS, 432
zidOINdlna, 23
zlgzag
dispo5lCin en el Z ONA. 56
zimgenos. 336
zinc Va.so dedo de znc
U~I"'VI'II""'1"'\. V~I~I"""I,"",I"""- 1.1"" ,- -_ - _-
TECNICA DE MAPEO MEDIANTE HiBRIDOS DE CELULAS SOMATICAS
_~0
tres posibilidades de fusion:
2n+2IF86
"Seleeeion":
cultivo enun medio que solo permite
el crecimiento delas celulas hibridas
(p.ej., medio HAT,
descrito en figura aparte)
~
Coleccion 0panel declones decelulas
hibridas que han retenido solo unos pocos
cromosomas humanos. A partir decada
uno sepueden establecer posteriormente
lineas celulares estables encultivo
Sin embargo, las celulas hibridas son inestables y en las
sucesivas mitosis van perdiendo lamayoria delos
cromosomas humanos, con 10que el cIonpresente en cada
pociUoretiene aleatoriamente uno solo 0unos pocos
"Fusion eelular":
determinadas condiciones
experimentales inducen la
union dedos celulas
(citoplasma comun,
nucleos independientes)
2IF46
Ci)
cQ)
2IF40
(raton)
{} {} {}
En laprimera mitosis las dos membranas
nucleares sedisgregan y en cada celula hija los
cromosomas seagrupan yaenun unico nucleo
2
Sedetermina el cariotipo para averiguar que cromosomas humanos estan presentes en cada
cIon(sedistinguen delos del roedor por su tamano y patron debandeado).
Tambien pueden localizarse los cromosomas humanos mediante algun marcador, por
ejemplo una sonda para lasecuencia Alu, que sedistribuye uniformemente por todo el
genoma humano pero estaausente enel deraton.
Las celulas secultivan repartidas enpocillos y se
diluyen progresivamente hasta que encada pocillo
quede un minimo numero deelias. Deeste modo,
al final seconsigue que cada pocillo contenga una
sola celula, que dara lugar aun clon (colonia
formada por celulas geneticamente identicas)
\..
(Deteeeion ){}
Selecci6n y
Crecimiento
encultivo
4clones,procedentescadaunode'unacelulahibrida
distinta(cadaunoconservacromosomasdistintos)
@@@@
(Cariotipo ){} {} {} {}
;
Celulas deroedor (normalmente,
raton 0hamster) encultivo
Celulas humanas dedistinto tipo
(linfocitos perifericos en cultivos
acorlOplazo, fibroblastos, lineas
celulares transformadas, cultivos
linfoblasticos, lineas celulares
fetales, etc.)
'Enparalelo al cariotipo, sedetecta lapresencia en los clones del gen 0 marcador deinteres:
a) En el caso dealgunos genes, por analisis delafuncion desus productos proteicos (p.ej.,
actividad enzimatica).
b) En general, mediante tecnicas dehibridacion (in situ 0Southern) con sondas especificas
(si seconoce lasecuencia del marcador) 0con el propio marcador como sonda (si no se
conoce su secuencia), 0por PCR con cebadores especificos para el marcador.
Qnterpretaeion ){}
{} {} {}
A partir delos resultados (positivos y negativos) decada clon en ladeteccion y los datos ~
aportados por ladeterminacion del cariotipo, sededuce en que cromosoma humano se
encuentra el marcador (gen 0region de DNA de interes).
228
GEN6MICA. OBTENCI6N DE LOS MAPAS GENETICO Y FIsICO DEL GENOMA
(})
La deduccion del mapa sepuede facilitar si, en lugar de la doble digestion simultanea,
se hace la digestion con ambas enzimas de forma sucesiva, extrayendo del gel cada uno
de los fragmentos de una digestion simple y tratandolo despues con la otra enzima
II kb
5,5 kb
5 kb
1,5 kb
seextraen del gel por
parado los fragmentos
y sedigieren con"B"
A3 A4
IOkb
5,5 kb
5 kb
1,5 kb
1kb
-
-
10 kb
5,5 kb
5 kb
1,5 kb
1 kb
Laaparici6n de2bandas indicaque hay
I sitio derestricci6n para B y estaenel
fragmento A I, de II kb (dando 10+I )
Laaparici6n de2y 3bandas indicaquehay I
sitio derestricci6n paraA enel fragmento BI
(dando 10+5) y 2sitios enel B2(5,5+1,5+1)
La deduccion del mapa (del caso 1) sepuede facilitar tambien si se dispone de
sondas que hibriden con el DNA en estudio
el fragmento A4 forma partedel B2; Al Y AB1forman parte deB1
I I
18 23
A
t -+
I I I I I
0 1,5 5,5 7 8
.A A B
--l
*
U L.
~
(sigue sin resolverse la doble soluci6n)
Al
15 kb
--*
Bl
8 kb
*'-
B2
10 kb
--* ABI
A2
A3
5,5 kb
-
AB2
5 kb
-
AB3
A4 1.5 kb A_
AB4
AB5
anal isis electroforetico delos fragmentos derestricci6n
ehibridaci6n Southern con las dos sondas:
11 kb
Finalmente; debe resaltarse que, puesto que un mapa de restriccion no identifica la posicion de genes, su utilidad
es tanto mayor cuando mas pueda ser relacionado con un mapa genetico. Para establecer esta relacion es necesario
encontrar mutaciones que afecten a los sitios de restriccion y determinar su Iigamiento con alteraciones que afectan a
genes, tales como las que producen enfermedades u otros cambios fenotfpicos. Ello permite situar ese gen dentro del
mapa de restriccion (y otros que puedan haberse localizado respecto a aquel en un mapa genetico); este es un ejemplo
de como se complementan los diversos abordajes de mapeo para ir construyendo el mapa completo del genoma.
17.3.2.3 Mapas fisicos de STS y EST
Cada vez con mayor frecuencia, para la construccion de mapas fisicos se utilizan marcadores no genicos
(pag. 218). Dos de los tipos de marcador mas extendidos 10 constituyen los lIamados "secuencias de referencia", "sitios
marcados unicos", "sitios de secuencia marcada" 0 STS (sequence-tagged sites) y las "etiquetas 0 marcas de
secuencias expresadas" 0 EST (expressed sequence tags). En ambos casos, se trata de regiones cortas del genoma
(50-500 pb) que se han podido secuenciar y para las que se han desarrollado cebadores de PCR (tema 15), 10 que
permite su amplificacion y consiguiente deteccion. Se llama STSs a los marcadores encontrados en el DNA genomico,
mientras que los ESTs se identifican en moleculas de cDNA, resultantes de la transcripcion inversa de mRNAs. En
consecuencia, los STSs son marcadores que sirven para elaborar mapas fisicos de todo el genoma, y los ESTs solo
para mapas de la parte del genoma de mayor interes aplicado, los genes responsables de la sintesis de proteinas. Entre
otras cosas, estos ultimos se han.empleado para estimar el numero de genes del genoma humano (pag. 240).
A pesar de que la posicion de estos marcadores en el genoma se desconoce inicialmente, se puede usar una
coleccion de ellos para caracterizar los clones componentes de una genoteca (pag. 216) -genomica en el caso de los
STSs, de cDNA can los ESTs-, mediante la deducci6n del so/apamiento de clones, 0 construccion de mapas de
conl/gos.
~1:"'Ut:I"",",I"'''''IUI''' U&;;;;L\,;U;;'."'VIIII"'\ I rn.vI 1-""I"'''"' """"'1''''''''''''
8.2.1
arcaje de una hebra del DNA
ormalmente se parte de unDNA de doble hebra, generalmente obtenido por restriccion de uno mayor, aunque el
metodo puede aplicarse igualmente a unDNA de hebra sencilla. Esta primera etapa consiste en el marcaje de uno de
los extremos de cada hebra. Lo habitual es emplear polinucleotido quinasa y ATP radiactivo para marcar el extremo 5',
aunque pueden tambien emplearse fluorocromos 0marcar el extremo 3'. Enel marcaje radiactivo es comun el uso de
32p, pero por su elevada energia produce seiiales dispersas y hace dificil distinguir bandas adyacentes en la
electroforesis. Otros isotopes de menor energia, tales como 33p 0
35
8(este sustituyendo a unoxigeno), dan band as
mas nitidas, aunque precisan mayor tiempo de exposicion.
Al serel DNA de doble hebra, resultan
marcados los dos extremos. Deben
separarse ambos, de 10contrario se
secuenciarian ambas hebras ala vez y el
resultado no seria interpretable.
Una forma de separar ambos extremos es
pordesnaturalizaci6n y aislamiento de
cada hebra. Otra forma, comun, es cortar el
DNA y continuar conuno de los
fragmentos, que ya s610tiene unextrema
marcado.
~
enzimaderestriccion que
corteenunsolopunto
-==C
Separaci6n de ambos fragmentos (por electroforesis)
y secuenciaci6n porseparado.
Si el DNA de partida fuese de hebra sencilla, habria
bastado conmarcarlo y no se precisa separaci6n alguna.
5
' P DNA de doble hebra
_______________ IOH 3'
3'HO----- _- ..,.- ~- _- ~- ~- ~- _- _- _- _- _- _- _----IP 5'
~
polinucleotidOqUmasa~ *P-P-P-A([y_J
2
p]_ATP, [y_JJp]_ATP 0[y_J5S].tioATP)
del fago T4 -"---.-
5
' *P P-P-A(ADP) + p.
________________ 'OH3' I
3' HO----------------'P* 5'
5' *P ,OH3' 5' P IOH3'
3'HO----------P 5' 3'HO-------IP* 5'
18.2.2
Modificaci6n de las bases y fragmentaci6n del DNA
Esta es la etapa caracteristica del metodo quimico de secuenciacion. EI proposito es conseguir fragmentos de
DNA de hebra sencilla, marcados, de lengitud variable y que terminen en un nucleotido conocido. De esta forma, la
longitud de cada fragmento indicara la posicion de ese nucleotido. Ello se consigue con tratamientos quimicos
independientes que producen esos fragmentos.
Para facilitar la secuencia de reacciones, los lavados para
retirar reactivos, etc., enla practica se puede adsorber el DNA
sobre unpapel especial, del que se eluye al final.
Hidr6lisis: A continuacion, enlos 4 casos se consigue la ruptura
de los enlaces fosfodiester a ambos lados del sitio abasico,
generando dos fragmentos polinucleotidicos (solo uno de ell os
marcado) y la desoxirribosa.
Se han desarrollado 4 tratamientos para eliminar
separadamente G, C, las bases purinicas (G y A), Y las
pirimidinicas (C y T). Entodos los casos, se rompe el enlace N-
glicosidico, dejando unsitio abasico (apurinico 0apirimidinico)
y manteniendo el esqueleto fosfato-desoxirribosa-fosfato.
Eliminaci6n de guanina (enalicuota TI):
La guanina se metila condimetilsulfato 1%Y formiato
am6nico 50mM. La metilguanina resultante se pierde al
tratar conpiperidina enmedio basico.
Eliminaci6n de guanina y adenina (enalicuota T2):
Se realiza una despurinaci6n enmedio acido, concretamente
f6rmico al 80%.
Eliminaci6n de citosina (enalicuota T3):
Conhidroxilamina 4 M apH=6, 0conhidrazina yalta
concentraci6n salina.
Eliminacion de citosina y timina (enalicuota T4):
Conpermanganato potasico 0, I M, 0conhidrazina sinsales.
Aunque el DNA sigue siendo de doble hebra, s610una esta
marcada y es launica que se detectara. Por ello, apartir de
aqui se representa s610lahebra marcada, por simplicidad.
Secuencia ejemplo:
5' *pATCGATTCTCGGAGTCACACG 3'
pJpJp, ...
hidr61isiscon
piperidina
oaleali
tratamiento
especifieopara
eliminareadabase
Q)
2:~~~::r~,s; 1
A
1
T
1
C
+
marcado, *
termin~~nel P P P P
nucleottdo
anterior aG + desoxirribosa
(eorrespondienteal nucleosido
euyabasesehaeliminado)
Q)
m:d~~~~~a en1
A
1
T
1
C
11
A
1
T
una base, por
ej., G.bajo el *p P P P P P P
tratamlento TI "
CD.............. la muestra de DNA
~
.~ ~ ~ p:~e~i~i~~~:~o~as
y cada una rectbe
untratamiento
TI T2 T3 T4 quimico diferente \
~ A T C GAT
Molecula 111111
origina,l, para *p p p p p p p
las 4 ahcuotas "
METODO QUiMICO DE 5ECUENCIACION DEL DNA
233
Es importante resaltar que los cuatro tratamientos de eliminaci6n de bases se deben realizar restringiendo el
:iempo de reacci6n y las concentraciones de reactivos, para evitar que se escindan todas las bases de un tipo
jeterminado presentes. 5610 debe perderse, aleatoriamente, una de las bases en cada mohkula de DNA (del tipo
:orrespondiente al tratamiento aplicado). De esa forma, el resultado es una mezcla de moleculas de DNA modificadas
3n distintos puntos.
Resultados de los 4 tratamientos para la
secuencia ejemplo: 5' *pATCGATTCTCGGAGTCACACG 3'
mezcla de moleculas de DNA resultante de la
reacci6n en condiciones limitantes (r representa
la desoxirribosa en el nucle6tido abasico):
(se representa s610
la hebra marcada)
n
Q
de nuele6tidos
en eada fragmento
mareado:
~
Tl
~
T2
~
T4
*pATCGATTCTCGGAGTCACACr
~
*pATCGATTCTCGGAGTCACACp + r 20
*pATCGATTCTCGGAr TCACACG *pATCGATTCTCGGAp + pTCACACG + r 13
*pATCGATTCTCGr AGTCACACG
hidr61isis *pATCGATTCTCGp + pAGTCACACG + r 11
*pATCGATTCTCr GAGTCACACG *pATCGATTCTCp + pGAGTCACACG + r 10
*pATCr ATTCTCGGAGTCACACG
TI'
*pATCp + pATTCTCGGAGTCACACG + r 3
" G"
*pATCGATTCTCGGAGTCACACr *pATCGATTCTCGGAGTCACACp + r 20
*pATCGATTCTCGGAGTCACr CG *pATCGATTCTCGGAGTCACp + pCG + r 18
*pATCGATTCTCGGAGTCr CACG
hi"'oli,i, ~
*pATCGATTCTCGGAGTCp + pCACG + r 16
*pATCGATTCTCGGAr TCACACG *pATCGATTCTCGGAp + pTCACACG + r 13
*pATCGATTCTCGGr GTCACACG *pATCGATTCTCGGp + pGTCACACG + r 12
*pATCGATTCTCGr AGTCACACG *pATCGATTCTCGp + pAGTCACACG + r 11
*pATCGATTCTCr GAGTCACACG *pATCGATTCTCp + pGAGTCACACG + r 10
*pATCGr TTCTCGGAGTCACACG
T2'
*pATCGp + pTTCTCGGAGTCACACG + r 4
*pATCr ATTCTCGGAGTCACACG
"G+A"
*pATCp + pATTCTCGGAGTCACACG + r 3
*pr TCGATTCTCGGAGTCACACG *p + pTCGATTCTCGGAGTCACACG + r 0
*pATCGATTCTCGGAGTCACAr G
~
*pATCGATTCTCGGAGTCACAp + pG + r 19
*pATCGATTCTCGGAGTCAr ACG *pATCGATTCTCGGAGTCAp + pACG + r 17
*pATCGATTCTCGGAGTr ACACG
hidr61isis
*pATCGATTCTCGGAGTp + pACACG + r 15
*pATCGATTCTr GGAGTCACACG *pATCGATTCTp + pGGAGTCACACG + r 9
*pATCGATTr TCGGAGTCACACG *pATCGATTp + pTCGGAGTCACACG + r 7
*pATr GATTCTCGGAGTCACACG
T3'
*pATp + pGATTCTCGGAGTCACACG + r 2
" e"
*pATCGATTCTCGGAGTCACAr G *pATCGATTCTCGGAGTCACAp + pG + r 19
*pATCGATTCTCGGAGTCAr ACG *pATCGATTCTCGGAGTCAp + pACG + r 17
*pATCGATTCTCGGAGTr ACACG *pATCGATTCTCGGAGTp + pACACG + r 15
*pATCGATTCTCGGAGr CACACG
hid,oli,i, ~
*pATCGATTCTCGGAGp + pCACACG + r 14
*pATCGATTCTr GGAGTCACACG *pATCGATTCTp + pGGAGTCACACG + r 9
*pATCGATTCr CGGAGTCACACG *pATCGATTCp + pCGGAGTCACACG + r 8
*pATCGATTr TCGGAGTCACACG *pATCGATTp + pTCGGAGTCACACG + r 7
*pATCGATr CTCGGAGTCACACG
T4'
*pATCGATp + pCTCGGAGTCACACG + r 6
*pATCGAr TCTCGGAGTCACACG
"C+T"
*pATCGAp + pTCTCGGAGTCACACG + r 5
*pATr GATTCTCGGAGTCACACG *pATp + pGATTCTCGGAGTCACACG + r 2
*pAr CGATTCTCGGAGTCACACG *pAp + pCGATTCTCGGAGTCACACG + r 1
.~
:NZIMOLOGiA DE LA TRANSCRIPCION: MECANISMO DE LA REACCION RNA POLIMERASA
2
Observese finalmente que al ser la cadena de RNA nuevo complementaria a la hebra de DN~ molde,
Iparecen como un hibrido RNA-DNA. Como se vera, este desaparece a medida que progresa la sintesis, hasta r
II RNA en forma libre al final de la misma.
19.2.2 Orientaci6n de la secuencia
La posicion de las bases en cualquier gen a region de DNA rE31acionadacan el proceso de la transcrrpCion siempre
ie refiere a la hebra no-molde, codificante. Par convenio, su orientacion es la del sentido de transcripcion. Los
lucleotid_os ~!il~sta hebra se numeran a partir del Runto de inicio de la !!:anscripcion, al que se asigna el valor +1
positivo) y se denomina origen de transcripci6n. No-existe el nucleotido numero cero. Los situados hacia el extremo-
~se dice que estan "corrlente arriba" y se indican con numeros negativos consecutivos (-1, -2, etc.). Los r:!ucleotido~
;ltuados_elLeLsentido_deJ a transcDPclon, hacia el extremo 3', estan 'corriente abajo" y se indican con !lumeros
~lV9~ consecutivos (+2, +3, etc.). - ---
5'
3' hebra codificante
origen de latranscripci6n
"",.,nd,, ",orri,n" ""b'''+ ",.,nd" "oorri,n"'ba;o"
numeraci6n de lacadena: G B EEEB B-
DNAJ 5'
\ 3'
19.2.3 Caracter asimetrico
A diferencia de la replicacion, donde las dos hebras se copian simultaneamente (caracter simetrico; pag. 153), la
ranscripcion nunca se produce de forma slmultanea en las dos hebras. AI transcribirse cada RNA a partir de una sola
Ie las hebras del DNA, se dice que el proceso es asimetrico. Ademas, tambien al contrario que la replicacion, la
ranscripcion de distintas regiones del DNA no se reaTizade forma coordinada en todo el genoma, sino independiente
lara cada gen. Dado el sentido unico 5'~3' de la sintesis, la transcripcion ocurre en sentido contrario en cada hebra.
transcritos de RNA formados apartir de una hebra del DNA
. . . . . . . . -
5' 3'
DNA 3'- - - - - - - - - - - - - - - - - 5'
transcritos de RNA formados apartir de laotra hebra del DNA
La informaci6n para lasintesis de los
distintos RNAs de lacelula esmrepartida
entre ambas hebras del DNA. De este
modo, unos RNAs setranscriben
empleando como mol deuna de las
hebras, mientras que otros setranscriben,
en senti do opuesto, sobre laotra hebra.
A pesar de que las dos hebras nunca se transcriben simultaneamente (10que se pretende indicar can el adjetivo
IsimtMrico), en algunos casos las dos hebras de una region de DNA se transcriben de forma independiente y no
imultanea, portando mensajes geneticos diferentes; se dice entonces que contienen dos genes solapantes (pag. 246).
gen I
hebracodificante
5'
A 2 B 3 c 4
>genes no solapantes
hebramolde 3'
hebracodificante
gen 2
3' hebramolde
<
3
B 2 A
3'
5'
2A
hebracodificante
I
B
gen 2
C 3
>Glles sOlapa~
hebramolde
hebramo<
gen I
hebracodificante
A 2 B
5'
3'
264 CONTROL DE LA EXPRESION GENICA: PRETRANSCRIPCIONAL Y TRANSCRIPCIONAI
Un factor impor;tante en los mecanismos b y c anteriores es la acetilaci6n de las histonas de la particula nuclec
Existen enzimas en la celula que unen grupos acetilo a los residuos de lisina de las histonas, reduciendo asi la carg;
positiva de estas. proteinas, 10cual probablemente disminuye su interacci6n con el DNA. Varias de estas histon:
acetiltransferasas son factores de. transcripci6n (en especial, coactivadores, pag. 270). Existen igualmente histon:
desacetilasas que catalizan la reacci6n opuesta de desacetilaci6n.
Histonas no aeetiladas Histonas aeetiladas
o
._(Lys)-NH'i=D-CHj
La acetilacion de las lisinas produce grupos amida, que
no se protonan apH fisiologico. Las histonas pierden
asf cargas positivas. Como consecuencia, lacromatina
se descondensa mas facilmente.
~
histona desacetilasas
histona acetiltransferasas
--------....
o
A pH fisiol6gico, los gropos amino primarios de la
cadena lateral de lisina estin protonados. La existencia
de multiples Lys y Arg en cada histona les confiere
fuerte carga positiva, base de su interaccion con el DNA
Bajo grado de acetilaci6n:
Cromatina mas condensada,
transcripcionalmente inactiva,
Genes reprimidos, no seexpresan
Alto grade de acetilaci6n:
Cromatina menos condensada,
transcripcionalmente activa,
Genes activos, seexpresan
Los genes activos, aquellos que se estan expresando, corresponden a regiones con histonas acetiladas, mientral
que en las zonas de cromatina transcripcionalmente inactiva las histonas no estan acetiladas. Como ejemplo, E
cromosoma X inactivo en la mujer, en forma de heterocromatina (pag. 87), esta hipoacetilado, indicando que esta form
de las histonas es un requisito para la maxima condensaci6n de la cromatina, mientras que el otro cromosoma)
transcripcionalmente activo, tiene un grade de acetilaci6n normal.
20.3 REGULACION GENETICA DE LA TRANSCRIPCION
EI control de la transcripci6n debe describirse hoy dia en' relaci6n con los dos componentes implicados en I
estructura molecular del QNA en organismos complejos: los cuatro nucle6tidos que forman la secuencia (regulaci6
genetica) y los grupos metiloincorporados al DNA (regulaci6n epigenetica).
EI mecanismo de control que se describe normal mente, la visi6n tradicional de la regulaci6n de la transcripci6n, s'
basa en el componente genetico, la secuencia del DNA, identica en todas las celulas de un organismo determinadc
Efectivamente, la expresi6n de la mayo ria de los genes eucari6ticos se controla en el inicio de la transcripci6n, po
mecanismos conceptual mente muy similares a los encontrados en bacterias. Esta regulaci6n se centra en la interacci6
de los promotores con los factores de transcripci6n (TF). A fin de simplificar nuestro estudio, se prestara atenci6
preferente al control por promotores y TFs de la sintesis del mRNA por la RNApol-lI, es decir, la transcripci6n de genel
de clase II. Mas adelante se describira brevemente el control de la transcripci6n de los genes de c1ases I y III.
20.3.1 Elementos q~e actuan en cis y trans como reguladores de la transcripci6n
Debido a la magnitud del genoma eucari6tico, el numero de unidades de transcripci6n es mucho mayor que e
procariotas. Ademas, cada una de elias esta controlada por varios promotores, con 10que en total el numero de estos e:
aun superior (decenas 0 centenares de miles de promotores en un genoma). Es decir, las regiones promotoras estal
mas extendidas y tienen mas elementos de control en eucariotas que en procariotas.
Un promotor 0 secuencia promotora es una regi6n de DNA que regula el inicio de la transcripci6n de un ger
Corresponde, por tanto, a 10que se ha denominado regi6n reguladora del gen (pag. 245). Actualmente se los suel,
lIamar tambien "factores que actuan en cis", 0 'factores cis", simplemente por encontrarse en la misma molecula d
DNA cuya expresi6n regulan. Existen numerosos promotores, diferentes para los genes de las clases I, II Y III, asi com
algunos de ellos distintos para cada gen.
Una caracteristica de la transcripci6n eucari6tica es que su regulaci6n se debe a la afinidad especifica por 10l
promotores de ciertas proteinas denominadas factores de inicio de la transcripci6n, 0 simplemente factores d4
transcripci6n (TF). A cada promotor se puede unir un numero variable de factores de transcripci6n, que actua
favoreciendo 6dificultando la uni6n y la actividad de la RNApol, 0 de otros factores de transcripci6n y, en consecuenci~
determinando la posici6n y la eficacia del inicio de la trans,cripci6n. Por tanto, los TFs tienen mas responsabilidad que I:
268 CONTROL DE LA EXPRESION GENICA: PRETRANSCRIPCIONAL Y TRANSCRIPCIONAL
EI factor A seunecorriente arriba
al factor D, posiblemente
estabilizando suunion al DNA.
A continuacion seune el factor B,
corriente abajo del factor D.
Parece definir el sitio deinicio,
atrayendo aella RNApol-II.
Finalmente, seune el factor H,
formado por multiples
subunidades, quesepara las hebras
por suactividad helicasa
(y posiblemente otro factor TFIU).
EI conjunto sedenomina
"complejo de preiniciacion" y
permite que laRNApol-II
comience atranscribir el DNA...
Tras incorporar unos 10nt al RNA
naciente (fasede inicio),
lafosforilacion del dominio CTD
delapolimerasa por laactividad
proteina quinasa del factor H hace
quelaDNApol II selibere del
complejo y comience suavance a
10 largo del DNA (elongaci6n).
Launion consiguiente del factor E,
que interacciona con laRNApol-II,
modula laactividad deTFIIH y
posiblemente favorece la
desnaturalizacion del promotor.
Enestepunto, el complejo cubre
aproximadamente entre -45 y +30.
Entonces seune el factor F,
formando un complejo con la
polimerasa. Aumenta laafinidad de
estapor el promotor y desestabiliza
suinteraccion inespecifica con
otras regiones del DNA.
TBP (30-38 kDa) seune al surco
menor en lacajaTATA, cubriendo
unos 10pb. Laasociacion devarios
TAFs con TBP constituye el factor D
(700-800 kDa), quecubre unos 35pb.
J - +1 J - +10 J - +30
RNA
~ Z >
J - -50
lFIIB - .
~ --0
~
lFIIE .
lFIIA
Factores de
transcripcion
.&&lFIIH
f'" ..
_lFIIF
+
( RNApol-II )
LOL -IVI"'UUI'V-\\"IUI'I Ut::L1'(1'1'"Ut'I'(U\"t::;)"'IVIlt::1'I1Ut'U;) It<AN::j\.I'(It'''''IUNA
snRNA
Tama.no
(nt)
U1 165
U2 188
U3 210
U4 142
U5 116
U6 107
U7 65
U11 131
Primeramente, se escinde el transcrito primario en el extremo 5' del intron, mediante un ataque nucleofilico del 2
OH del adenilato del centro de ramificacion. Quedan asi'unidos ambos por un enlace fosfodiester atipico 5'-2', y s
Iibera el exon 1con un extremo libre 3'-OH .
Acontinuacion, se escinde el centro de ayuste 3', por ataque nucleofilico del extremo 3'-OH libre del exon 1, con I
que quedan unidos los dos exones y el intron se libera con su extremo 3'-OH libre y su extremo 5' formando u
lazo (en ingles lariat; curiosamente derivado de la palabra espanola "Ia reata"). En este, la adenosina del centro d
ramificacion esta enlazada simultaneamente a 3 nucleosidos, por sendos enlaces fosfodiester en sus posicione
2',3' Y 5'. EI intron en lazo se degrada luego rapidamente.
Como se puede observar, en ambas etapas se escinde un enlace fosfodiester a la vez que se forma otro, e
sendas reacciones de transfosforilacion (un tipo de transesterificacion). Como consecuencia, las reacciones transcurre
sin gasto energetico apreciable, no hay consumo de ATP. Sin embargo, si que se requiere hidrolisis de ATP para E
ensamblado previa del ayustosoma.
Tipos, tamaiio y funci6n de los RNAs nucleares pequeiios (snRNAs)
Funcion de la snRNP respectiva
(U1. U2. U4. U5 Y U6 participan en el ensamblado del ayustosoma por interacciones mutuas)
corte y empalme: reconoce y se une al extremo 5' del intron
corte y empalme: se une al centro de ramificacion, 10ace rca al centro 5'
procesamiento del pre-rRNA
corte y empalme: inicialmente asociado con U5 y U6, acerca U6 al sitio 5'
corte y empalme: se asocia inicialmente con U4 y U6; se une a ambos extremos del intron
corte y empalme: asociado inicialmente con U4 y U5; parece que participa en la catalisis
procesamiento del extremo 3' de los pre-mRNAs de histonas
terminacion y poliadenilacion de pre-mRNAs
(*) corresponden a los snRNAs de mamiferos; en levaduras son de 2 a 10 veces mayores
21.3.3.5 Otros tipos de intrones
La descripcion anterior corresponde al proceso de corte de los intrones de genes de mRNA eucarioticos. Exister
ademas, otros tipos de intrones, en funcion de su ubicacion en distintos genes y de caracteristicas concretas dE
mecanismo de maduracion. Se c1asifican en 4 tipos:
Grupo I: Incluye los intrones de algunos genes que codifican transcritos primarios de rRNA (nucleare!
mitocondriales y de cloroplastos). Su procesamiento requiere, como cofactor externo, un nucleosido 0nucleotido d
guanina (guanosina, GMP, GDP 0GTP; su grupo 3'-OH actua como nucleofilo). EI proceso de corte y empalme n
utiliza ATP como fuente de energia.
Grupo II: Aparecen en genes de mitocondrias 0cloroplastos que codifican transcritos primarios de mRNA. N
requieren cofactor externo, sino que utilizan el 2'-OH de un residuo adenilato del propio intron, produciendo intermedio
en lazo (pag. 281). En este sentido, se asemejan mas al mecanisme de corte y empalme recien estudiado, aunqu
difieren por no existir ayustosoma. AI igual que el grupo I, no necesita ATP como cofactor energetico, yexperimenta
auto-corte y empalme (auto-ayuste), catalizado por el propio RNA en lugar de por enzimas proteicas clasicas. Esto
RNAs con funcion autocatalitica constituyen uno de los casos de ribozimas (pag. 77).
Grupo III: Es el mas numeroso, con los intrones presentes en la mayoria de los genes nucleares eucarioticos qu
codifican transcritos primarios de mRNA. Su proceso de corte y empalme, el que ya se ha estudiado (pags. 280-282
sigue el mismo mecanismo de formacion de lazo que los intrones del grupo II, pero catalizado por la
ribonucleoproteinas componentes del ayustosoma).
Grupo IV: Se encuentran en ciertos genes de tRNAs. EI corte y empalme requiere ATP, a diferencia de 10
intrones de los grupos I y II.
21.4 PROCESAMIENTO DE LOS RNAs RIBOSOMICO Y DE TRANSFERENCIA
Los rRNAs y tRNAs tambien sufren maduracion postranscripcional, tanto en procariotas como en eucariotas. I
pesar de su importancia, no se expondran con detalle sus caracteristicas; por razones didacticas, se consider
suficiente como modelo la maduracion del mRNA.
En procariotas, un solo transcrito primario da lugar, por varias reacciones de corte catalizadas por endonucleasa
(RNasas), a los tres rRNAs y uno 0 varios tRNAs, los cuales sufren modificaciones adicionales en sus extremos 3' y 5'
en sus nucleosidos (vease la tabla) hasta dar las formas maduras, funcionales.
""...,""I'V"'\vIV . U'L.;,L. n.1"t1"\ \wi r"V,",J:.~I-\IVIII:NIU t"'U;:) I t"(AN,:)l"KIt""l,;
~
isofonna ~de la troponina T
(en otros tejidos)
~
polipeptido sin el
dominio C-tenninal
hidrof6bico:
IgM soluble, secretada
gen de la cadena pesada ( 1 1 )
de la inmunoglobulina IgM
exones: J .ll J .l2 J .l3 J l4 MI M2
-ril '21 rj "1 14 1 ' 5
~
polipeptido con dominio C-tenninal
hidrof6bico, que 10ancla a la
membrana dellinfocito B:
IgM de membrana
5, -
z
2
gen de latroponina T
exones: W X a ~
-fIl. I" " 2l J 'j" '1 '4
~
isofonna ade la troponina T
(en musculo liso)
Las tres modificaciones esenciales que experimentan los transcritos primarios durante su maduraci6n (forma--
de la caperuza 5', poliadenilaci6n en 3'y reacciones de corte y empalme) parecen sercruciales para que el RNA
pasar al citoplasma e intervenir en la traducci6n a proteinas (tema 23). Este transporte a traves de los poros nuclea
esta perfecta mente regulado, pudiendo afectar tambien al control de la expresi6n.
21.6.2 Vida media y degradaci6n del mRNA
Cada molecula de mRNA se emplea muchas veces como molde para la traducci6n; dando lugar a numerl
copias del polipeptido que codifica. Como consecuencia, el tiempo de permanencia de una molecula de mRNA e.. _
celula es esencial para determinar la cantidad de proteina producida. Ese tiempo (vida media de la molecula) depenc-2
tanto de la velocidad con que se sintetiza, madura y sale al citoplasma el mRNA, como de la rapidez con que --
degrada en este compartimento subcelular.
La degradaci6n intracelular del mRNA es un proceso que tiene lugar continuamente, a mayor 0 menor velocida
como consecuencia de la actividad de ribonucleasas especificas (pag. 198). Estas pueden ser tanto endonuclea
como exonucleasas. Frente a estas ultimas es importante la acci6n protectora de la poliadenilaci6n, pues debe digeri
por completo la cola de poli(A) antes de que se alcancen las secuencias codificantes del mRNA. De hecho, /;:l<:
moleculas de mRNA tienen una vida media tanto mas prolongada cuanto mayor es la longitud de su cola.
Como consecuencia de estas variables, existen aparentes contrastes entre la abundancia de los distintos tipos dE
RNA en una celula y la velocidad con la que se sintetizan. Asi, porejemplo, en E. coli el rRNA es mayoritario (83%) y e
mRNA minoritario (3%), mientras que la velocidad de sintesis es superior para el mRNA (y ademas varia en funci6n d-
la situaci6n experimental). En eucariotas, la vida media del mRNA es unas 10 veces mas larga que en procariotas, I
que se debe probablemente al procesamiento postranscripcional, que retarda su degradaci6n; esto es esencial dada la
necesidad de que se transporte desde el nucleo al citoplasma (pag. 250).
Como datos representativos del significado de este control pueden mencionarse los correspondientes, a grandes
rasgos, a la diferente estabilidad de las moleculas de RNA (expresada por su vida media). Existe, en general, una
relaci6n directa entre este parametro y el grade de maduraci6n sufrido. La estabilidad tambien aumenta con el grade de
estructura secundariay terciaria de la molecula de RNA.
Los tRNAs y rRNAs de eucariotas y procariotas son extremadamente estables (horas 0 dias), pues sufren un
gran procesamiento postranscripcional y presentan abundante apareamiento de bases y plegamiento de la
cadena. Los rRNAs estan ademas fuertemente protegidos porsu asociaci6n con las proteinas ribos6micas.
Los mRNAs de eucariotas tienen una estabilidad intermedia (horas), porque experimentan una extensa
maduraci6n pero casi no presentan estructura secundaria. Como casos extremos, pueden citarse el mRNA de
c-fos con una vida de 10 a 30 min y los de globina y ovoalbumina, que alcanzan 24 h.
Los mRNAs de procariota~ son los menos estables (minutos), ya que no sufren madura.ci6n alguna y apenas
tienen estructura secundaria. EI mRNA de E. coli se degrada rapidamente una vez formado (se calcula que las
. nucleasas degradan en 3 min la mitad del mRNA sintetizado en ese tiempo).
Existen tambien mecanismos de control de la vida media que dependen de proteinas que se unen al mRNA,
protegiendolo de la degradaci6n. Mas adelante se tendra ocasi6n de comentar un ejemplo (pag. 319). En cualquier
caso, 10 importante de estas consideraciones es poner de manifiesto la dificultad de estudiar el control del proceso de
maduraci6n postranscripcional. Sin lugar a dudas, este se relaciona a su vez con los mecanismos ya descritos para el
control de la transcripci6n (tema 20) y los que regulan la traducci6n (pag. 318).
~ RACTERisTICAS ESPECiFICAS
295
22.4.3 Degeneraci6n
Esta es una de las caracterlsticas mas lIamativas del c6digo. Se entiende por degeneraci6n el hecho de que un
oacido este codificado por mas de un cod6n; a los codones que codifican el mismo aminoacido se los llama
ones sinonimos. Aunque a primera vista pueda parecerla, ella no supane indefinici6n 0 ambigOedad alguna, pues
secuencia concreta de bases define inequivocamente los aminoacidos que deben incorporarse; Sl habria
"goedad si un mismo cod6n codificase varios aminoacidos. La degeneraci6n es una consecuencia directa del
ravit de codones sobre aminoacidos (recuerdese, pag. 288, que existen 64 tripletes posibles y s610 20
. oacidos).
Esta degeneraci6n del c6digo, ademas, no es uniforme, pues cada aniinoacida esta codificado por un numero
2"ente de codones sin6nimos, desde s610uno (Met, Trp) hasta un maximo de 6 (Arg, Leu, Ser).
4codones
sinonimos
(siempre difieren
en la 3" base)
6 codones
sinonimos
(un grupo de 4 y
uno de 2, con las
caracteristicas
indicadas arriba)
el conjunto de codones sinonimos para
cada aminoacido se puede resumir,
empleando los simbolos habituales:
N =cualquier nucleotido
R =purinico (A 0G)
Y =pirimidinico (C 0U)
-
aminmicidos codones sinonimos
M Met metionina AUG
W Trp triptOfano UGG
D Asp aspartico GAC GAU GAY
N Asn asparragina AAC AAU AAY
C Cys cisteina UGC UGU UGY
F Phe fenilalanina UUC UUU UUY
E Glu glutamico GAA GAG GAR
Q
Gin glutamina CAA CAG CAR
H His histidina CAC CAU CAY
K Lys lisina AAA AAG AAR
Y Tyr tirosina UAC UAU UAY
I lie isoleucina AUA AUC AUU
- .-
,
A Ala alanina GCA GCC GCG GCU GCN
G Gly glicina GGA GGC GGG GGU GGN
"
P Pro prolina CCA CCC CCG CCU CCN
T Thr treonina ACA ACC ACG ACU
.
ACN
V Val valina GUA GUC GUG GUU GUN
R Arg
..
CGA CGC CGG CGU AGA AGG CGN+AGR
argmma
L Leu leucina CUA CUC CUG CUU UUA UUG CUN+UUR
S Ser serina UCA UCC UCG UCU AGC AGU UCN+AGY
2 codones
sinonimos
(siempre difieren
en la 3" base y
ambas son
purinicas 0ambas
pirimidinicas)
SeNeSe que 17 aminaacidos estan cadificados par codanes situados en una misma cuadricula de la
aci6n tradicional del c6digo, y s610 3 (Ser, Leu, Arg) 10estan por codones de dos cuadrfculas distintas. Esto
e la asignaci6n de codones a un aminoacido no es aleatoria, sino que entre los codones sin6nimos existe una
ilitud. Una consecuencia importante de la degeneraci6n del c6digo es que dlsmlnuye la posibilidad de que las
es puntuales puedan provocar la incorporaci6n de un aminoacido distinto (pag. 348).
t:L l.UUI\.:iU \.:iI:NI:fiCO
22.4.3.1 Hipotesis del balanceo
EI triplete del anticod6n de un tRNA (formando parte de un aminoacil-tRNA) puede interaccionar por
complementariedad de bases con un cod6n del mRNA (pag. 289). Esta lectura 0 reconocimiento se realiza por
apareamiento antiparalelo de las bases 1, 2 Y 3 del cod6n con las bases 3, 2 Y 1del anticod6n, respectivamente.
3'
'm
CS-S)
el tRNA se ha girado con respecto
asu representaci6n habitual
(observense 3' y 5')
base fluctuante
o de balanceo
anticodon
5'
J
codon
Si los tres apareamientos tuviesen lugar de acuerdo con los reglas de Watson y Crick s610 habria una posibilidad
de interacci6n anticod6n/cod6n, por 10que existiria igual numero de tRNAs (anticodones) que de codones, es decir, 61.
Sin embargo, se sabe que en las celulas hay menos moleculas diferentes de tRNA, 10que quiere decir que un mismo
anticod6n puede reconocer varios codones. Para poder explicar este hecho se propuso la "hip6tesis del balanceo" 0
"de la fluctuaci6n", que se puede expresar en dos reglas:
1. Las bases 3
2
y 2
2
del anticod6n forman puentes de hidr6geno de tipo Watson y Crick bien definidos con las bases
1
2
y 2
2
del cod6n, determinando la especificidad de interacci6n cod6n/anticod6n.
2. La 1
2
base del anticod6n (posici6n 5' del tRNA) puede orientarse de formas ligeramente distintas (/0 que se ha
lIamado balanceo 0 fluctuaci6n) para interaccionar con distintas bases en la posici6n 3
2
del cod6n. Este
apareamiento tiene lugar mediante enlaces de hidr6geno diferentes de los c1asicos de Watson y Crick. Debido a
ello, la interacci6n es mas debil (coloquialmente, un apareamiento "sueIto").
apareamiento de Hoogsteen,
menos favorable
anticodon
(tRNA)
9~~
: I
: H
H---:---""'---~
I :
N N
H/ ~A)
. ~ N
N
' LN
'"
apareamiento clasico
de Watson y Crick
mediante un desplazamiento,
el uracilo puede tambien
aparearse con laguanina
A esta f1exibilidad de interacci6n contribuyen no s610 los apareamientos atipicos entre bases normales, sino
tambien la presencia, en el anticod6n de algunos tRNAs, del nucle6sido infrecuente inosina (abreviado como I, con la
base nitrogenada hipoxantina, pags. 13 y 21), capaz de establecer apareamiento tanto con A como con U 0 C. La
inosina se genera por la acci6n de una adenosina desaminasa sobre la A presente en el transcrito primario del tRNA
(reacci6n en pag. 353).
FASE PREVIA: ACTIVACION DE LOS AMINOAclDOS EN FORMA DE AMINOACIL-TRNAS 305
aminoacidos cuyos aminoacidos cuyos aminoacidos cuyos
codones (1, 203) requieren 4codones 6codones
al menos I anticodon requieren al menos requieren al menos
(pag.298) 2anticodones 3anticodones total
MetTrp (pag.298) (pag.298)
20
GinGluLysPheTyr
aminoacidos
HisAsnAspCys
lie
Ejemplo:@
@ @
0
()
~
c
0
Q)
total
()
OJ
~
0
t
20
c
,Ql
aaRSs
Q)
"0
OJ
'0
()
0
0
OJ
'6
"0
C
'0 ::J
()
OJ
Q)
"
. -. . .
"'
-
- -
e n
tRNA
Gln
tRNAProl
tRNA
Pro
2
tRNASeq tRNASeQ
tRNA
Ser
3
total
31
~'~Guj 0
tRNAs
(al
menos,
Anti-
pag. 297)
codon
Codones (s')CAA(J ') (S'lCCA(3') (s')CCC(J ') (s')UCA(3') (S'lUCU(Y) (S'lAGU(3') total
(5")CAG(3') (S')CCUJ ') (S')UCG(3') (S')UCC(J ') (S'lAGC(3') 61
(s')CCG(3')
codones
el modelo compacto permite apreciar
el estrecho contacto entre el tRNA y
la sintetasa, que implica varias zonas
de la molecula de tR A
complejo entre
tRNAAsp
y
aspartil- tRNA sintetasa
representando solo el esqueleto de las moleculas
se observan los contactos principales con el brazo
del anticodon y el brazo aceptor, y la introduce ion
de este ultimo en el centro activo de la sintetasa
EI mecanismo general de reconocimiento es diferente del de las proteinas de uni6n al DNA (pag. 60), Estas
)Ueden formar puentes de hidr6geno con grupos adecuados en los surcos mayor y menor de la doble helice del B-DNA.
:110 no es valido para el tRNA, una molecula sin estructura regular, con una conformaci6n condicionada por la presencia
le regiones en hebra sencilla (que forman salientes, burbujas, lazos,. " pag. 70) y regiones en doble hebra con
:onformaci6n de tipo "A". EI surco mayor en esta es mas estrecho y mucho mas profundo que el del B-DNA (pag. 52),
lor 10que el tRNA no es tan adecuado para interaccionar con la proteina como 10 hace el DNA.
23.2.3 Correccion de errores cometidos por las sintetasas
La elevada especificidad de las sintetasas hace que los errores sean infrecuentes. A pesar de ello, se dispone de
necanismos de correcci6n que actuan sucesivamente, en el centro activo de la enzima, antes y despues de cada etapa
le la reacci6n de sintesis. .
306 SiNTESIS DE PROTEiNAS: TRADUCCI6N
(Iasintesis
finaliza)
Si las interacciones de
fijaci6n no son
suficientes para
discriminar entre
aminoacidos entra en
juego el segundo
mecanismo.
@.
~
(Iareacci6n
prosigue)
fase2 ~
(union) ''-----.IAMPI
Reconocimiento selectivo del aminoacido.
Depende de laenergia de fijaci6n del
aminm\cido en el centro activo (energia de
enlace); proviene de las interacciones E-S, que
constituyen laprincipal fuente de energia libre
utilizada para disminuir laenergia deactivaci6n
(E
a
) Y formar el aminoacil-AMP. A mayor
energia de enlace, menor E
a
Y mayor actividad
catalitica (mayor velocidad de reacci6n).
~
fase 1 ~
(activacion) C
IATP
I
PP
i
~
aminm\cido
+
... +@
Verificacion del aminoacil-tRNA. Lamayoria
de las sintetasas son capaces de hidrolizar el
enlace ester entre eI aminoacido y el tRNA. En
general, lahidr6lisis seacelera mucho cuando
hay un tRNA cargado incorrectamente.
~
+ (hidr61isis
~ delenlace
IAMPI +~ anhidrido)
-------------- ~
aminoacil-tRNA sintetasa
+
@
Verificacion del aminoacil-AMP. Un centro
activo hidrolitico, pr6ximo pero distinto al de
launi6n, hidroliza el ;Iminoacil-AMP
intermediario cuando es incorrecto, con 10
que no tiene lugar laposterior uni6n al tRNA.
~
~~,'"
I I I
I I
I I
I I
I
I
I
I
I
I
I
I
\
"
\
\
\
"
Ejemplo 1. La enzima isoleucil-tRNA sintetasa (lIeRS) no distingue bien entre lie (su sustrato especffico) y Val
aminoacido de estructura similar, aunque de menor tamano por tener un grupo metileno menos. La activaci6n preferente
de lie respecto a Val en la primera etapa de la activaci6n (formaci6n de lIe-AMP-E frente a Val-AMP-E) esta de acuerdc
con la interacci6n mas favorable del centro activo con lie (energia de fijaci6n superior en 3 kcal/mol a la de Val). A pesal
de esta preferencia, dado que in vivo la concentraci6n de Val es unas 5 veces mayor que la de lie Val deberi~
incorporarse err6neamente con gran frecuencia (en torno al 1%). EI hecho de que la tasa de error observada sea mu)
inferior (0,01%) indica que existen mecanismos adicionales de correcci6n.
('"~ .,,;'" ,". """. d, ~, AM'
contactos
adicionales
aumentan
laenergia
de uni6n de
lie
l I e Val
$
NH
3
/
/CH2 CH_C~ e
CH
3
/ COO
CH
3
$
CH
3
....... r
H3
CH-
CH
CHI 'cOO
e
~,.. '""""VII:I I'lJ o\;:); IKAUUl,;l,;IOIIi
23.3.3.2
Union del'aminoacil.tRNA y del mRNA a la subunidad menor
del ribosoma: complejo de preiniciacion (paso 2)
A continuaci6n se incorporan a la subunidad menor del ribosoma el tRNA y el mRNA; no esta aun claro en que
orden /0 hacen. Se suele decir que se forma primero un "complejo binario de preiniciaci6n" y despues uno "ternario". En
ambos casos intervienen nuevos facto res de iniciaci6n.
EI mRNA se une con la subunidad menor del ribosoma a traves de su caperuza 5', que es reconocida por uno de
los factores, eIF-4E, denominado tambien por ello CBP (cap-binding protein). En esta uni6n y en el posterior
desplazamiento del ribosoma corriente abajo del mRNA, hasta encontrar el primer cod6n AUG (el mas pr6ximo a la
caperuza), intervienen ademas los factores eIF-4A y eIF-4B y se produce la hidr6lisis de ATP. Estos factores
posiblemente actuan tambien desplegando la molecula de mRNA a su forma completamente extendida.
EI metionil-tRNAjMet, por su parte, se incorpora despues de formar un complejo con el factor de iniciaci6n e1F-2 y
GTP. Este factor reconoce exclusivamente el tRNA iniciador. (Mas adelante se vera que todos los aminoacil-tRNAs que
participan en la elongaci6n 10 hacen tambien asociados con un factor proteico que une GTP, pag. 311.)
Union de la subunidad mayor: complejo de iniciacion (paso 3)
23.3.3.3
Para que pueda comenzar la sintesis de un polipeptido, el complejo de preiniciaci6n 40S debe unirse con la
subunidad mayor del ribosoma, 60S.
En primer lugar, la asociaci6n de un nuevo factor e1F.5 activa la capacidad GTPasa de eIF-2. La forma eIF-2:GOP
resultante no retiene la afinidad por el Met-tRNA, con 10 que se disocian todos los factores y queda un complejo ternario
de iniciaci6n 40S "desnudo" de factores proteicos. Este puede ya reasociarse con la subunidad mayor del ribosoma,
Iiberada del factor e1F-6 que la mantenia separada, formando el definitivo "complejo ternario de iniciaci6n 80S". Con esta
asociaci6n de las dos subunidades del ribosoma, y la presencia del tRNA y el mRNA correctamente ubicados, este
complejo queda dispuesto para la elongaci6n.
23.3.3.4
Reutilizacion de los factores de iniciacion
De los factores elF implicados en el proceso anterior, todos se recuperan intactos y pueden volver a participar
en el inicio de una nueva cadena polipeptidica, a excepci6n del factor eIF-2, que comenz6 en su forma GTP y ha
terminado con GOP. La regeneraci6n de ese GTP, que evidentemente requiere la energia de hidr61isis de una molecula
de NTP, no se hace de forma directa, sino por un intercambio de nucle6tidos mediado a su vez por otro factor proteico,
eIF.2B.
A
11L
~vr--.lAI E
~ C i ( ~ " " ::f::~~~:'f .J
-15i C J ) " .,~/
-1 ~\ 'VC--.lAI
") /i,\
~fJ-" .~ -w"'\-"
-~.
- """ ".,,,' .
"--
balance completo del cicio del factor de iniciaci6n eIF-2:
GTP ~ GDP +Pi +incorporaci6n de Met-tRNAMet al ribosoma
23.3.3.5 Balance energetico de la iniciacion
Como se acaba de ver, dos pasos de la fase de inicio requieren un consumo energetico. En primer lugar (paso 2),
el reconocimiento de la caperuza y el desplazamiento hasta encontrar el cod6n de inicio, y mas tarde (paso 3), la
regeneraci6n del GTP hidrolizado por eIF-2. Nos referiremos a estos como segundo y tercer gastos energeticos de la
traducci6n, de cara al balance global (pag. 315).
318 SiNTESIS DEPROTEiNAS: TRADUCCI6N
23.8 REGULACION DE LA SiNTESIS PROTEICA: NIVELES DE CONTROL
La traduccion se regula en las celulas a traves de varios mecanismos. Su velocidad depende en cierto modo de la
secuencia del mRNA molde; por ejemplo, un mRNA con muchos codones raros se traduce mas lentamente (y, por tanto,
menos frecuentemente) que otro con codones mas comunes. Ademas, la velocidad de comienzo varia con la secuencia
que rodea al codon de inicio. Se sabe que una union fuerte del mRNA a su sitio en el ribosoma produce un inicio mas
eficiente (al menos en procariotas). . '. .
N/VELES DE REGULAC/ON DE LA EXPRES/ON GENICA EN EUCARIOTAS
Tema 20
Tema21
Puntos de inicio accesibles
Factores de transcripci6n
Eficacia de los promotores
-{
selecci6n de que mRNAs
son traducidos
Eficacia de los complejos
de iniciaci6n
Tema 23
Corte y empalme
Modificaciones
Accesibilidad del DNA a la transcripci6n:
.Condensaci6n de la cromatina
.Metilaci6n del DNA
Frecuencia/velocidad de inicio de la transcripci6n
.Velocidad de elongaci6n del RNA (poco regulada)
Eficacia de terminaci6n de la transcripci6n
Velocidad de procesamiento
.Maduraci6n altemativa
.Selecci6n de que RNAs son transportados
.Transporte activo a traves de los poros
.Estabilidad del mRNA maduro
.Frecuencia/velocidad de inicio de la traducci6n
.Velocidad de elongaci6n del polipeptido
.Eficacia de terminaci6n de la traducci6n
.Eficacia de modificaciones postraduccionales
Control de
transcripci6n
Control pre-
transcripcional
Control de
procesamiento
del RNA
Control de
trans porte del
RNA
Control de
traducci6n
Control de
actividad de
proteinas
Control de
procesamiento
de proteinas
Control de
degradaci6n del
RNA
Control postranscripcional:
)
)
DNA
RNA
transcrito
primario
(mRNA)
RNA
maduro
NUCLEO ~
eITO' LA:.IlVlA
RNA
maduro
Polipeptido
Pmtdna )
funcional )
Protema
inactiva
23.8.1 Control del transporte de mRNA
Es importante resaltar la importancia (aunque su mecanisme es poco conocido) del transporte del mRNA maduro
desde el nucleo a citoplasma, necesario para que este disponible para la traduccion. Se asume que una vez reaJ izado el
procesamiento postranscripcional del transcrito primario (tema 21) el mRNA maduro se transporta a traves de los poros
nucleares e inicia la traduccion en el ribosoma citoplasmatico en 1-5 minutos. Una de las dificultades para este estudio
es la distincion entre proteinas que ayudan al transporte del mRNA desde nucleo a citoplasma y proteinas que
intervienen en el procesamiento postranscripcional del RNA (ultimo paso en el nucleo) y la traduccion (primer paso en el
citosol).
Estos procesos constituyen un mecanismo celular de control de la traduccion en respuesta a las necesidades bajo
diferentes condiciones ambientales. Surge as; el termino regulaci6n traduccional para referirse a estos casos de
modulacion de la frecuencia de traduccion por factores extrinsecos. EI estudio de este control tiene un interes especial
en relacion con el desarrollo animal; en este sentido se ha estudiado intensamente, por ejemplo, en Drosophila.
354 BASES MOLECULARES DE LA MUTACION Y LA REPARACION DEL ON
Observese que la unica base habitual (A,G,C,T) que se transforma por desaminacion en otra base igualmente habit
es la citosina. Sin embargo, su producto (U) puede ser reconocido como ajeno al DNA y la mutacion corregida. Esta es une
ventaja de la presencia en el DNA de T: si el DNA estuviese formado por uracilo, no se podrian distinguir los residuos dE
uracilos "correctos" de los generados por la desaminacion de citosina, y el mensaje genetico seria por ello menos estable.
b) Perdida de bases por inestabilidad qufmica del enlace N-glicosfdico
Como ejemplo, pueden citarse las despurinaciones espontaneas, en las que se pierde una purina por hidrolisis de
enlace N-glicosidico, dando lugar a un sitio apurinico. Analogamente, pueden generarse sitios apirimidinicos, aunque cor
menos frecuencia. Ambos tipos de proceso se pueden tambien conseguir en el laboratorio bajo condiciones quimica~
controladas (pag. 35). En la posicion afectada, el nucleosido queda reducido solo al esqueleto, es decir, un residuo dE
desoxirribosa unido por ambos enlaces fosfodiester.
NH2
I l~:r)
o N N
O=~-O'C~2 0
I.
o
o adenosina
I en el DNA
..
sitio
apurinico
I I en el DNA
o
I
o=r O~H
o
I
+
NH2
(~N)
N ~
adenina
c) Modificaci6n de las bases por mutagenos end6genos
EI propio metabolismo de la celula genera en ocasiones compuestos quimicos que pueden reaccionar con la~
bases, 0 en general con los nucleosidos, modificandolas. EI caso mas frecuente son las especies reactivas dE
oxigeno, radicales libres producidos en el metabolismo oxidativo de la celula, en especial de la mitocondria. La~
principales son el anion superoxido y el radical hidroxilo, que danan el DNA rompiendo una hebra u oxidando las base~
nitrogenadas.
el super6xido es un ani6n
y un radical libre
O
2 ~~O~~
1 e -
~. ~H202
1 e -
e
~/~ OH
1 e -
+-OH
~CH3
HIT~OH
o N OH
I
radicales libres, producen dafios por oxidacion del DNA
o ~
l~\--{)H 8-h;dwx;gu,n;no dm;n, glknl
H2
N
N I
25.5.2 Mutaciones inducidas 0ex6genas: mutagenesis
Ademas de las transformaciones espontaneas de nucleotidos y de los errores de replicacion, se producen tambier
mutaciones por efecto de agentes fisicoquimicos ajenos a la celula, denominados mutagenos ex6genos.
25.5.2.1 Lesiones 0mutaciones inducidas poragentes-quimicos
A diferencia de la inestabilidad del DNA discutida anteriormente, producida por cambios quimicos espontaneos er
las bases (esencialmente por desaminaci6n 0despurinaci6n), tambien pueden modificarse quimicamente las bases pOI
la acci6n directa de diversas sustancias quimicas del ambiente (naturales 0no). La lista de estos agentes mutagenos e~
muy grande, y los mecanismos y efectos producidos son muy diversos. Muchos de ellos se identificaron hace mas dE
dos siglos como responsables de canceres localizados en obreros en contacto con el humo y hollin. Algunos actuar
como mutagenos directos y otros requieren ser activados a carcin6genos activos por la acci6n de ciertas enzimas.
366
DIVERSIDAD DEL GENOMA: POLIMORFISMOS
2
3
tanto mayor cuantos mas individuos contenga, viene determinado por el numero de alelos distintos existentes para un locus
concreto y se refleja en el grado de heterocigosis, 0 proporci6n de individuos heterocig6ticos que forman parte de
poblaci6n (pag. 96).
L6gicamente, la causa ultima de la existencia de polimorfismo es la mutaci6n del DNA. La distinci6n entre el us
de los terminos mutacion y polimorfismo no es clara ni unanime, pero en general se asocia el primero con situaciones
excepcionales, en especial patol6gicas, mientras que se habla de polimorfismo cuando la presencia de la variaci6
genetica es razonablemente comun en la poblaci6n y, por tanto, estable y nada 0 poco perjudicial. Por convenio, se dice
que un locus es polim6rfico cuando la variabilidad afecta a mas del 1% de la poblaci6n.
Ejemplos hipoteticos de la frecuencia de alelos en 5 locus de una poblaci6n
alelo locus A locus B locus C locus 0 locus E
99,5% 98% 99,5% 93,5% 95,7%
normal polim6rfico normal polim6rfico polim6rfico
0,5% 2% 0,3% 5% 4%
mutado polim6rfico mutado polim6rfico polim6rfico
0,2% 1,5% 0,3%
mutado polim6rfico mutado
Todo polimorfismo es, pues, reflejo del genotipo de los individuos (constituci6n alelica para un locus determinado 0
para un conjunto de ellos). Surge, por tanto, el concepto de individualidad genetica, entendida como la presencia er
todo individuo de un genoma con una secuencia caracteristica, unica para ese individuo.
En este tema se pres'entan los fundamentos moleculares del polimorfismo y sus consecuencias funcionales
reservando para el tema siguiente la descripci6n de las tecnicas empleadas para su detecci6n.
26.2 DIVERSIDAD GENETICA DENTRO DE UNA ESPECIE
Nuestro objetivo es estudiar la individualidad genetica de individuos en especies con reproducci6n sexual, caso de
los animales superiores, incluyendo los humanos, en los que el polimorfismo se presenta en dos versiones.
Polimorfismo fisiol6gico 0normal, de interes en estudios familiares, en la identificaci6n de individuos (indicios
criminales 0 investigaci6n biol6gica de la paternidad), expresi6n de proteinas fisiol6gicas (describiendo, por ejemplo
el color de los ojos 0 la capacidad atletica 0artistica), para el analisis de ligamiento que conduce al mapeo genetico.
etc.
Polimorfismo patol6gico, de interes en el diagn6stico presintomatico y prenatal de enfermedades geneticas, en la
detecci6n de individuos portadores, para determinar la compatibilidad para trasplantes, etc. Igualmente, puede
definir el riesgo para padecer enfermedades (Alzheimer, diabetes, etc.) y condicionar la respuesta a farmacos
(existe un gran numero de personas con graves problemas de salud debido a reacciones adversas a farmacos).
Curiosa mente, los primeros indicios de la variabilidad genetica en humanos surgieron, a principios del siglo XX, de
la observaci6n, en la alcaptonuria y otras patologias, de proteinas distintas de las normales. Hoy sabemos que esta
"diversidad proteica" es el resultado de que distintos individuos poseen alelos diferentes en el locus del gen que codifica
la proteina (polimorfismo gElnico).
26.3 MECANISMOS IMPLICADOS EN LA VARIABILIDAD GENETICA
Son varios los mecanismos que, actuando en combinaci6n, nunca aisladamente, dan cuenta de la variabilidad
genetica durante el complejo proceso de la morfogenesis (desde el cigoto a las primeras capas de tejidos embrionarios
y su transformaci6n en 6rganos) y a todo 10 largo de la vida del individuo adulto. De estos mecanismos, se han
considerado ya larecombinaci6n hom610ga (pag.106), la segregaci6n de cromosomas (pag. 105) y la mutaci6n
(tema 25). Se comentara a continuaci6n el efecto de la duplicaci6n y la transposici6n.
~IL
u. v &;;;;.n.~IL.lI"'\LI LlI;;;;,~\,;n;;;;,nV.YII"'\. rVLIIYlv~rlvl"IV"
mRNA y proteina formados por el alelo B:
Mutaciones con respecto aA: sustitucion
(transicion)
297 A~G
...~cGpUcl F ~ .
... Thr Phe... Gly Leu .
99 100 II 7 I 18
silenciosa
sustitucion sustitucion sustitucion sustitucion
(transversion) (transicion) (transversion) (transversion)
526 C~G 703 G~A 796 C~A 803 G~C
...@ u GpGcl... ...E ccj1 lGC I... ...jUA cj1 lUGF GGpC GI .
... Val Gly... ... Pro Ser... ... Tyr Met Gly Ala .
175 176 234 235 265 266 267 268
no silenciosas, desentido equivocado
mRNA y proteina formados por el alelo 0:
...~C C ~1 GGpGGpG +
Mutacion can respecto aA:
delecion. terminacion
261 G
=>camblOdel marco de lectura => tu
prema ra
5' ~C C E u u pG .J P UP C + $ GtpA A I.... ...jUGC pcl E C GP C +
... Val Val Pro Leu Gly... His Ser... Gly ~
86 87 88 89 90 99 100 I I 7 ~
La region C-terminal de la"proteina 0"(residuos 88 a 117) tiene una secuencia completamente diferente
a las glicosiltransferasas A y S, Y el tamano de la proteina completa es 2/3 inferior (117 frente a 354);
como consecuencia de todo ello, laproteina O'no tiene actividad glicosiltransferasa.
E ncu anto al aspecto bioqu imico de este polimorfismo, los antigenos A y B se sintetizan porla acci6nenzimatice
de dos glicosiltransferasas distintas, codificadas por los alelos A y B. A mbas actu an sobre el antigeno H, u r
oligosacarido componente de glicoproteinas y glicolfpidos qu e, a su vez, es generado previamente por otre
glicosiltransferasa codificada porel genindependiente del locu s H.La especificidad antigemica de A , B YH,qu e define e
gru po sangu ineo y determina la produ cci6n de los anticu erpos, viene definida por los azu cares terminales de 1 m
oligosacaridos.
(R es un oligosacarido unido a una
glicoproteina 0a un glicolipido)
'S.~ancia precurs~) ~R
distintos productos segun clI V
alelo del gen Hh que se poseaJ =--. _
.--: .._------ ----------
. er ~el producto del alelo h del gen
fUcoslltransferasa H . GDP-Fuc h Hh no es funcional: no se
(producto del alelo H del gen Hh) modi fica la sustancia precursora,
no se forma antigeno H
"Sustancia H"
Antigeno H
distintos productos segun el
alelo del gen ABO que se posea
v
R
0-
R
O
el producto del alelo 0
o del gen ABO no es
funcional: no se
modi fica el antigeno H
------------------- ---------------
-0;-UDP-Ga'INAc ~;- UDP-Gal -
A galactosaminiltransferasa B galactosiltransferasa
(producto del alelo A (producto del alelo B
del gen ABO) del gen ABO)
R R
f..Etige12.0H
R
oJ' U LollYI;;;;. n...;J1L.l1"\.U'U'L-L.UL.nVIIII"\.. rVL.IIYlvn.rl..;JIYIV~
26.4.2.3 Polimorfismo de lau1-antitripsina
La al-antitripsina (aI-AT 0A1AT) es una proteina plasmatica que inhibe la actividad de varias proteasas, com
tripsina, quimotripsina y elastasa. Actua principalmente regulando la elastasa leucocitaria, para evitar que esta destruy
la elastina y otras proteinas del tejido conjuntivo pulmonar, produciendo dano enla pared alveolar. La deficiencia ena,
AT se asocia conenfisema (enfermedad pulmonar degenerativa) y conenfermedades hepaticas (cirrosis y cancer). S
ha podido determinar que tal deficiencia y sus sintomas clinicos corresponden a la presencia de algunos de los multiple
alelos existentes para el locus de la aI-AT, denominado locus PI (de Inhibidor de Proteasas) y situado enla band
cromosomica 14q32.1. Estos alelos (se han identificado mas de 75) codifican variantes 0isoformas de la protein<
algunas de las cuales se puedendistinguir por su migracion enelectroforesis 0isoelectroenfoque.
fenotipo (proteina)
isoformas
ligeramente diferentes,
perotodas funcionalmente
normales
aielos
posicion enla secuencia proteica
mas comunes
101 160
213(0)
264 342 376
M1A
Arg Tyr Ala Glu Glu Glu
(elmas antiguoevolutivamente)
M1V
Arg Tyr Val Glu Glu Glu
(elmasfrecuentehoyendial
M2 His Tyr Val Glu Glu Asp
M3 Arg Tyr Val Glu Glu Asp
M4 His Tyr Val Glu Glu Glu
Z
Arg Tyr Ala Glu Lys Glu
.(elmasfrecuentedelos palol6gicos)
concentracion enplasma
reducida 15%)
S Arg Tyr Val Val Glu Glu casi normal
Nulo (variante "Granite Falls") Arg stop forma truncada, nofuncional
(*) Las variantes M1A y Z pueden distinguirse del restopor RFLP (pag. 381), pues
la mutacion GCG (Ala) ~GTG (Val) hace aparecer una diana para Bst Ell.
Se ha podido establecer la base molecular de la alteracion funcional que sufre la isoforma Z. Enla estructur
tridimensional de la proteina normal, el residuo Glu-342 (con carga negativa) se situa proximo al Lys-290 (concarg
positiva) y ambos forman unpuente salino. La mutacion Glu(342)~Lys, caracteristica del alelo Z, impide este puent
salino, provocando la agregacion de la proteina dentro de la celula, que impide su secrecion al plasma, disminuyendo I
actividad y provocando la susceptibilidad a la enfermedad. EI efecto se manifiesta especialmente, comoes logico, en10
homocigoticos ZZ.
26.4.3 Polimorfismo enregiones genicas nocodificantes
Teniendo encuenta la definicion mas completa de gen, la que se establece bajo uncriterio funcional (pag. 244
existen regiones del DNA que forman parte del gen, peronocodifican su producto genico. Tal es el casode las regione
reguladoras (promotores), los intrones y las regiones 5' y 3' que, aunque se conservan enel mRNA, nosontraducida~
Se debe por elloconsiderar la posibilidad de polimorfismos enestas regiones genicas nocodificantes. Evidentemente
aunque tal polimorfismo noafectara a la secuencia de la proteina, puede afectar a su expresion, dependiendo de I
funcion que ejerza la secuencia nocodificante que 10 sufre. Muchos polimorfismos enlos intrones notendran efect
alguno, y seran equivalentes al polimorfismo enregiones nogenicas, estudiado a continuacion. Otros podranafectar (
corte y empalme, resultando un polimorfismo proteico. Las variaciones en secuencias promotoras probablement
perturben la expresion del gen. Por tanto, el polimorfismo enregiones genicas nocodificantes puede manifestarse 0n
enunefectofenotipico.
~Noparece conveniente complicar la exposicion profundizando eneste aspecto, peronodebe dejarse de tener e
cuenta. Como ejemplo similar, se ha mencionado una mutacion ensecuencias reguladoras del gendel factor IX de I
coagulacion, causante de hemofilia B (pag. 348); aunque por su baja frecuencia no entra en la categoria d
polimorfismo, comoya se ha indicado el principio de la mutacion y el polimorfismo es el mismo.
26.4.4 Polimorfismo enregiones nogenicas
La mayor parte de las mutaciones del genoma ocurren enregiones del DNA que nocodifican ningun productc
debido a su mayor abundancia enel genoma humano y de otros eucariotas (tema 10). Por tanto, los cambios de base
eneste DNA notienenefecto fenotipico alguno: nose altera la secuencia, la estructura 0la funcionproteicas, de ahi qu
tampocotengan uninteres patologico directo. Son, sinembargo, polimorfismos de graninteres aplicado; principalmente
para la busqueda de genes relacionados conenfermedades y para la identificacion genetica de individuos.
La elevada cantidad de loci polimorficos que se encuentran en DNA no codificante, junto a la falta d
trascendencia funcional de sus alteraciones (que permite que se perpetue libremente en sucesivas generaciones
hacen que sea este el DNA que mas difiere de unos a otros individuos. Como consecuencia, una de las propiedade
Los perfiles de Southern obtenidos sobre muestras de distintos individuos, dentro de una cierta similitud propia de
la especie, reflejan la diversidad del genoma en la poblacion. AI disponer hoy dia de miles de enzimas de restriccion y
de sondas, son enormes las posibilidades de combinacion para el analisis genetico; se han detectado muchos sitios
RFLP en el genoma humano. Por ello, adquieren el caracter de marcadores geneticos (pag.218), con multiples
aplicaciones (pag. 384). Por convenio, como ya se ha indicado (pag. 366), esta variacion solo se califica estrictamente
como polimorfismo si aparece en mas del 1% de la poblacion.
(t)
e
Sandas en electroforesis:
(2 cortos) ~
I
,

~
(I corto y I largo)
SS AB AA
(2 largos)
-
-
-
-
hibridaci6n Southern
ANALISIS DE GENES. DETECCI6NY APLICACIONES DE LOS POLIMORFISM
SB
AB
AA
Genotipo: Fragmentos detectados:
ICaso 2: dentro del fragmento de restrieei6n deteetado existe inserei6n 0deleci6n en un alelo I
AleloA: ., mm -
todos los SltlOSdecorte presentes
Alelo B: ---mm'l'l'l'l ---. - ... ----
una mutaci6n inserta un trozo deDNA mserclOn
27.3.1.1 Ejemplo: Polimorfismo en la 13-globina, causante de la anemia falciforme
Se propone como ejemplo uno de los primeros RFLP descritos, el polimorfismo en un solo nucleotido del gen de /3-
globina, que permite el diagnostico (comunmente prenatal) de la anemia falciforme. Esta es una enfermedad hereditaria
(pag. 396) causada por una hemoglobina anormal (hemoglobina S, falciforme 0 a213
s
2) que ejerce un transporte
deficiente de oxigeno y ademas provoca una deformacion caracteristica en los eritrocitos (forma de hoz 0luna
creciente), que dificulta su circulacion por los vasos sanguineos.
EI gen de l3-globina esta situado en el cromosoma 11 y codifica las cadenas 13componentes de la hemoglobina (2
por molecula; las otras 2, cadenas a, estan codificadas por un gen diferente, situado en el cromosoma 16). Su variante
normal, el alelo A (I3A-globina) posee, entre otras, tres dianas (CCTNAGG) para la enzima de restriccion Mst II. Un 87%
de los enfermos de anemia falciforme poseen I3S-globina, proteina anomala codificada por el alelo S (de sickle eel/,
celula falciforme). Este se diferencia del alelo A en un solo nucleotido (mutacion estudiada en pag. 350), cambio que
anula una de las dianas para Mst II. Como consecuencia, los fragmentos de restriccion que se obtienen a partir de
ambos alelos son diferentes, 10 que permite emplear la tecnica RFLP para la deteccion de este polimorfismo y,
consecuentemente, para el diagnostico de la anemia y el rasgo falciformes.
382
los 3sitios derestriccion en el alelo A originan 2fragmentos
cromosoma I I humano
DNA
0,2 kb
--
~H
exon I
I
intron A I exon 2
l t- ...
i
X
10 1
301
"", p=
I
CCTG~GGAG
CCT,T~GG laenzima de
- restriccion
...-Pro-Glu-Glu- ...
: Msl II
I
J -
I
~
J .
1'"m"""'o
J 5 ,
hacequese
CCTGTGGAG CCrrrT~GG
pi erda una
I I
delas dianas
I I
...-Pro-Val-Glu- ...
I
I
.-J
1,4 kb
-----=;--- los 2 sitios derestriccion enel
alelo S originan unsolo fragmento
1,2 kb
'-
x
I
I
I
I
j
X
CCTT~GG
I
CCT'T!CC;'G
Polipeptido:
Polipeptido:
Alelo S
(~S-globina)
Alelo A
(~A-globina)
398
ENFERMEDADES MOLECULARES: ENFERMEDADES MONOGENICAS
Aparte de estas consideraciones, en el caso hipotetico de una enfermedad 0trastorno ligado al cromosoma Y, la~
mujeres no padecerian la enfermedad ni la transmitirian. Los varones la padecerian siempre que tuvieran el alele
patologico (P) y la transmitirian a todos sus hijos varones. No tiene sentido el concepto de dominancia, pues nunCE
coinciden dos alelos en la misma persona.
I
varon enfermo
[Ligadaav i
II
2
Solo los varones son portadores del gen, para los aiel os normal (N) y patologico (P).
La enfermedad se transmite solo a varones, y a todos ellos.
La enfermedad se manifiesta solo en varones hemicigoticos (P-). Son sanos los varones Por ser ligada al Y
hemicigoticos (N-).
Cada varon afectado tiene su padre afectado.
28.3.4 Enfermedades mitocondriales
Estrictamente, algunas enfermedades mitocondriales (es decir, donde se ve afectada la funcion de esto~
organulos) estan causadas por defectos en la parte del genoma nuclear que codifica proteinas mitocondriales. Sir
embargo, nos centraremos en aquellas cuya causa esta en el genom a mitocondrial. La herencia mitocondrial es una dE
las excepciones a los principios de transmision mendeliana de las enfermedades monogenicas. Esto se debe a dOl
caracteristicas peculiares: la herencia por linea materna y la heterogeneidad genetica 0 heteroplasmia.
a) Herencia materna. Todos los individuos heredan el DNA mitocondrial (mtDNA) de su madre, ya que el ovulo el
muy rico en mitocondrias (entre 100.000 Y 300.000 por ovulo), mientras que el espermatozoide tiene muchal
menos (unos cientos) y ademas se degradan especificamente tras la fertilizacion. Por tanto, una mutacior
patologica en el genoma mitocondrial de una mujer se puede transmitir a toda su descendencia, mientras que e
varon en raras ocasiones transmite una mutacion an810ga.
I
II
III
varon sana mujer enferma
todos los descendientes sanos
[ Mitocondrial J
b) Heteroplasmia. Cada celula tiene varias mitocondrias, y cada una de estas multiples copias del mtDNA. Es decir
en una celula hay muchas moleculas independientes de mtDNA, que no siempre tienen exactamente la mism.
secuencia, en especial debido a su elevada tasa de mutacion (pag. 377). Esta heterogeneidad del mtDNA en cad.
celula, y tambien entre las distintas celulas de un individuo, se llama heteroplasmia. Ademas, cuando la celula Sl
divide por mitosis, sus mitocondrias se reparten de modo aleatorio entre las dos celulas hijas. Como consecuenci.
de todo esto, la proporcion de genomas mitocondriales mutados respecto a los originales es variable dentro dl
cada mitocondria, cada celula, cada tejido y cada individuo. Esto hace que la manifestacion de la enfermedal
asociada a la mutacion sea muy variable y complica los estudios c1inico y genealogico. Las enfermedade:
mitocondriales poseen sintomas muy variados, de gravedad diversa, y afectan a distintos tejidos, incluso para un.
misma causa genetica.
MECANISMOS DE TRANSFORMACION DE CELULA NORMAL EN TUMORAL 411
Receptores de facto res de crecimiento 0de hormonas, presentes en la membrana 0 dentro de la celula. Para el
caso de un factor de crecimiento u hormona estimuladores de la proliferaci6n, la forma oncoproteica del receptor
puede ser aquella con una conformaci6n que la mantiene activa aunque no se Ie una el ligando. Si se trata del
receptor de un factor u hormona inhibidores del crecimiento, la oncoproteina es aquella que no responde a la uni6n
delligando .
Ejemplo: el protooncogen erbB codifica el receptor de membrana para el factor de crecimiento epidermico EGF.
Proteinas citoplasmaticas que intervienen en los sistemas de transducci6n de senales. La mutaci6n hace que
el oncogen exprese una proteina que se mantiene activa sin necesidad de que Ie lIegue la senal.
Ejemplo: el protooncogen ras codifica una proteina G monomerica (pag. 421).
Factores de transcripci6n que controlen la expresi6n de genes que codifican a su vez proteinas implicadas en la
senalizaci6n, el control del cicio celular 0 la apoptosis .
Ejemplos: protooncogenes (os, jun y myc .
EI protooncogen erbA codifica el receptor intracelular para hormonas tiroideas, que es un factor de transcripci6n.
Finalmente, proteinas responsables de la activaci6n directa del cicio celular (tales como las ciclinas 0las
quinasas y fosfatasas activadoras de las Cdk, pag.424) 0de la inhibici6n de la apoptosis (pag.432). Los
oncogenes respectivos expresan proteinas en mayor cantidad 0 con funci6n aumentada .
Ejemplos: el protooncogen bcl-1 codifica la cic/ina D1.
EI protooncogen cdk1 codifica la quinasa dependiente de ciclina Cdk1 (pag. 426) .
EI protooncogen mdm-2 codifica un antagonista de la proteina p53 (pag. 431) .
EI protooncogen bcl-2 codifica una proteina mitocondrial que bloquea la apoptosis al inhibir las caspasas
(pag.433).
Ejemplo de
protooncogen
que impulsa el
cicio celular
Gen estimulador:
gen cuya proteina contribuye al avance
del cicio, directa 0indirectamente; por
ejemplo, ayudando a superar los
P O " ,O 'D ootrO I
~<E3
mutacion
inactivadora
gen mutado, laproteina
no se sintetiza 0es inactiva:
la celula no avanza por el
cicio, 010hace con menor
frecuencia
..
P roliferaci6n celular excesiva e incontrolada, basta con que
el individuo sea heterocig6tico para el gen mutado.
En este caso, al gen mutado se I ellama O NCO GEN
y al gen normal, P RO TO O NCO GEN.
La celula se divide menos de 10normal 0no la
hace: deficiente crecimiento y proliferaci6n, grave
s6lo si el individuo es homocig6tico para el gen
mutado (posible muerte celular)
;J Caracteristicas de la expresi6n de los oncogenes
Puesto que existe ganancia de funci6n en la oncoproteina, basta con que este mutado uno de los dos alelos del
otooncogen para que se exprese el efecto de la oncoproteina anormal. En consecuencia, los oncogenes se expresan
caracter dominante (pags. 96 y 395), Y los individuos heterocig6ticos para un oncogen (genotipo protooncogen-
gen, 0 nP) sufren sus efectos de forma similar a los homocig6ticos (genotipo oncogen-oncogen, 0 PP). La~herencia
oS oncogen sera acorde con este caracter, pero s610 si la mutaci6n del protooncogen afecta a celulas germinales
'g.434).
,
REGULACION DEL CICLO CELULAR
425
Una vez fosforiladas por las Cdk, las proteinas ~sustrato pueden, perder';lps grupos fosfato P.o~acclo_n d~
fosfoproteina fosfatasas igualmente especificas. Esta reversibilidad de la fosforilaci6n es crucial para el control del
:iclo celular. '
Dostiposde
quinasasque
actuansobre
proteinas
proteina fosfatasa
(0fosfoproteina fosfatasa)
del tipo
fosfotirosina fosfatasa
proteinafosfatasa
(0fosfoproteina fosfatasa)
del tipo
fosfoserina/fosfotreonina
fosfatasa
fosfoproteina,
sustratopara
lafosfatasa
Q
fosfoproteina,
Ho.Ser TyrfP\ sustratopara
'-J lafosfatasa
( D s Q "
(6p-Thr)
proteina,sustrato
Q
paralaquinasa
Ho.Ser Tyr-oH
proteina, sustratO
Q
paralaquinasa
Ho.Ser Tyr.oH
(6Ho.Thr)
proteina quinasa
del tipo
~ serina/~reonina
r"'"qumasa
r:L-a-s-p-ro-te"""in-a-s ....
Cdk
pertenecena
estegrupo
proteinaquinasa
del tipo
tirosina quinasa
A diferencia de las ciclinas, la concentraci6n de las Cdk no varia de forma importante durante el cicio celular,
aunque puede estar regulada por ciertas senales estimuladoras 0 inhibidoras del crecimiento.
Actividad como quinasa
de las quinasas dependientes
de ciclinas (Cdk)
activas al unirse aciclinas mitoticas
Cactivas al unirse aciclinas deinicioJ
Las quinasas dependientes deciclina
estan presentes encantidad similar a10
largo detodoel ciclo, pera s610son
activas cuando estan unidas aciclinas.
Cantidad de quinasas
dependientes de ciclinas (Cdk),
esten activas 0no como quinasa
EI grasor del anillo
extemo (amarillo)
indica lacantidad 0
laactividad delas
Cdk enlacelula en
cadamomento del
ciclo celular.
En algunos organismos (Ievaduras, por ejemplo) existe una sola Cdk, que actua tanto en el punto decontrol G1
/S
como en el G2/M (uniemdose a distintas ciclinas), mientras que en otros (mamiferos) esas funciones se distribuyen entre
varias Cdk. En humanos se han encontrado al menos B miembros de esta familia, denominados Cdk1 a CdkB,eada uno
de los cuales forma complejos quinasa activos con ciclinas distintas.
Resumen de las distintas ciclinas y quinasas dependientes de ciclina (Cdk) conocidas en
humanos, Se indica las parejas que se asocian y los puntos de control del cicio en los que actuan,
Observaciones:
La asignaci6n exacta de puntos de control difiere segun las fuentes; las indicadas entre parentesis estan
menos confirmadas .
Cdkl se llama comunmente Cdc2, par ser hom610ga de la Cdc2 de levaduras,
EI complejo Cdk2/ciclina A parece actuar a 10largo de toda la fase S, mientras que los demas actuan
principal mente en las transiciones entre G
J
Y S 0entre G
z
Y M (puntos de control) .
CdkIlB parece actuar tambien durante la fase M,
Cdk7 Y ciclina H son subunidades componentes de TFIIH, factor de transcripci6n (pag:267) que ademas
interviene en lareparaci6n del DNA (pig. 360),
MARCADORES TUMORALES
431
Otras enzimas
Can ceres diversos
Isoenzimas de la creatinquinasa (CK): SS 0CKI, en cerebro; MS 0CK2, en musculo cardiaco, yMM 0CK3, en
musculo esqueletico. La isoenzima SS aparece en neoplasias malignas de prostata, pulmon ysangre.
Isoenzimas IV y V de la lactato deshidrogenasa (LDH). Cancer de prostata metastasico.
Ribonucleasa: cancer de prostata.
Hexosa fosfato isomerasa: carcinoma hepatico, de tubo digestivo 0de pulmon.
5' -Nucleotidasa: cancer de ovario y metastasis hepaticas.
Aspartato aminotransferasa y y-giutamiltranspeptidasa: metastasis hepaticas.
b) Citocinas 0mediadores solubles de origen celular
De acuerdo con su acci6n especifica, tambiiln se subdividen en: linfocinas, monocinas, interferones, factores de
necrosis tumoral, factores estimulantes de colonias y factores de crecimiento. La concentraci6n serica de varias de elias
aumenta en determinadas situaciones clinicas, algunas de elias canceres.
30.9.2.2 Marcadores tisulares
(pag.416)
(pag.418)
Los mas conocidos son los receptores de estr6genos yde progesterona,
presentes en el citosol. Se yen alterados en los tumores malignos de mama.
Algunas proteinas de choque termico (muchas de elias carabinas moleculares
que facilitan el plegamiento adecuado de otras proteinas, pag. 337).
Proteina pS2, inducida por estr6genos.
Filamentos intermedios.
Queratinas de tipo 8 (antigeno polipeptidico tisular, TPA).
Queratinas de tipo 18 (antigeno polipeptidico especifico tisular, TPS).
Estan presentes en el citoesqueleto de celulas epiteliales, normales y malignas,
pero se determinan en Iiquidos biol6gicos (suero). En general, no son
especificas de ningun tipo histol6gico, pero son utiles como indicador de
proliferaci6n y para el diagn6stico yseguimiento de muchos tumores.
Oligosacaridos Lex, sial ii-Lex, sialil-Lea, sialil-Tn y sialosil-Tn.
Glicoproteina P.
TGFa, FGFI3, IGF-1 Y TGF-131.
Integrinas, cadherinas y selectinas.
Proteinas asociadas a los
receptores de estero ides
Componentes del
citoesqueleto
Antigenos de membrana
Factores de crecimiento
Receptores de los facto res
de crecimiento
Moleculas de adhesi6n
Proteasas ysus
inhibidores
Aunque son a veces indistinguibles de los marcadores tumorales, estan mas relacionados con la propia biologia
neoplasica y vienen dados por parametros de definici6n imprecisa, no referidos a alteraciones bioquimicas. Su
detecci6n se basa, en general, en el empleo de anticuerpos monoclonales. Aun no se ha lIegado a un reconocimiento
generalizado de su utilidad c1fnica, aunque tienden a usarse de forma creciente.
Ejemplos:
Oncogenes
Genes oncosupresores
Receptores de hormonas
esteroides
30.9.3 Marcadores genotipicos 0moleculares
En la busqueda del marcador tumoral "perfecto" se plantea en la actualidad una clasificacion molecular de los
tumores basad a en la detecci6n directa de los cambios genotipicos responsables del cancer. En definitiva, ello supone
un analisis molecular de las mutaciones en todo tipo de secuencias del genoma, tanto genicas (oncogenes, genes
oncosupresores) como no genicas (secuencias repetidas) e incluso en las regiones telomericas (pag. 92). Esto seria de
gran validez para el diagn6stico (confirmaci6n y seguimiento del desarrollo del tumor), la prevenci6n (aparici6n precoz,
cancer asintomatico, evaluaci6n del riesgo y la susceptibilidad hereditaria) y la terapia (tratamiento farmacol6gico y su
seguimiento). Este anal isis molecular de los marcadores tumorales se esta potenciando enormemerite. como
consecuencia del desarrollo de los biochips (pag. 387).