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Bioprocesos II
Tema:
Escalado: scale-down
Universidad Nacional de Quilmes
Roque Senz Pea 352
Bernal, 2010
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Escalado de bioprocesos
Los bioprocesos se desarrollan e implementan de diferentes
maneras, en sus escalas de laboratorio, piloto, y manufactura
El escalado puede definirse como el procedimiento para disear y
construir un sistema de GRAN ESCALA base de los resultados de
experimentos con equipamiento de PEQUEA ESCALA
El desempeo de los bioprocesos es afectado por varios parmetros:
El diseo geomtrico
Las variables de operacin
Propiedades del fluido
Procesos de transporte
Cintica de los organismos
El diseo de un prototipo optimizado
para lograr la mayor produccin debe
ser transladado a gran escala,
considerando toda esta complejidad
de parmetros (esto es el Objetivo del
escalado)
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Efectos que puede tener el cambio de
escala:
Disminucin del rendimiento
Cambio de cintica
Efecto de la esterilizacin
Efecto del inculo
Problemas de transporte
(homogenizacin)
Cambiando del
laboratorio a la
produccin
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La informacin sobre la cintica referido al metabolismo del
cultivo o microorganismo obtenido a pequea escala es
independiente de la escala (pH, temp, medio de cultivo, calidad
de las materias primas) y no es necesario tenerlas en cuenta
para determinar la estrategia de escalado
(de hecho, los fenmenos de transporte son los nicos
fenmenos que son dependientes del escalado)
Las reglas generales para el escalado son una extensin de las
utilizadas en los reactores qumicos, y estn basados en
aquellos parmetros que se pueden mantener constantes
(nmeros adimensionales y correlaciones empricas)
Cambiando del laboratorio a la produccin
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Cantidades medibles
Para asegurar la similitud, del reactor de
produccin con el prototipo, se debe cumplir
con la condicin de ser geomtricamente
similares
en sus lmites fsicos (mismo tipos de
reactores)
en sus dimensiones, xej H/D
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Escalado en tanque con agitacin
Mediante el anlisis dimensional se han establecido varias correlaciones sobre
la prediccin de las dinmicas de fluido caractersticas del reactor (gas holdup,
velocidad del lquido, tiempo de mezclado, y coeficiente de dispersin axial) y
del coeficiente de transferencia de masa y calor (factores fsicos).
Aunque algunos de estos factores fsicos pudieran comportarse en forma
similar en procesos de produccin, es dificultoso conservar su similitud con el
cambio de escala, si adems se suma la presencia de un proceso biolgico.
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Criterios de escalado
Los ms tpicos son:
Mantener constante la potencia por volumen utilizada, P/V
Mantener constante el coeficiente volumtrico de transferencia de masa, kLa
Mantener constante la velocidad de la punta de las paletas del agitador, n . d
Mantener constante el tiempo de mezclado
Mantener constante el nmero de Reynolds, Re
En los casos de procesos donde el producto es muy viscoso (plsticos,
polisacridos) o el crecimiento es filamentoso, la limitacin la plantea la relacin P/V
(o la agitacin) del fluido
En general en el caso de procesos aerbicos (como produccin de amino cidos,
levaduras de panificacin y antibiticos) se debe mantener constante la
transferencia de oxigeno (kLa) como objetivo del escalado
Se estima que un tercio de los proyectos de produccin emplean la regla de
mantener P/V, aprox 20% usan la velocidad de la punta del agitador, otro 20% de las
plantas industriales realiza sus escalados en base al tiempo de mezclado. El resto
de los escalados utiliza la concentracin de sustrato o producto limitante o
inhibitorio, ms comunmente sobre la base de la concentracin del oxgeno disuelto
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Igual consumo de potencia
Basado en la historia prctica del escalado, la mayora de los procesos
fermentativos para la produccin de alcohol y cidos orgnicos han seguido el
concepto de la similitud geomtrica y mantener constante la relacin de potencia
por volumen
Para el consumo de potencia en un tanque agitado existe una relacin fija entre
la velocidad (N) y el dimetro del agitador (Da)
Esta relacin esta expresado en la siguiente ecuacin:
P = . N
3
Da
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para Re > 10
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V Da
3
Igual Potencia por volumen
Del consumo de potencia en un biorreactor de escala pequea (de laboratorio) la
velocidad de agitacin necesaria es calculada para la razn o tasa de escalado
La siguiente ecuacin expresa la relacin de tamao de agitador y velocidad de
agitacin en bioreactores pequeos (de Laboratorio) y grandes (de Produccin)
N
L
3
Da
L
2
= N
P
3
Da
P
2
P potencia = W
N velocidad del agitador = s
-1
Da dimetro agitador = m
V volumen del reactor = L
densidad del fluido = kg . m
-3
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Algunos fundamentos fsicos del escalado
Para consideraciones del principio de similitud, la correlacin de
desempeo para una geometra dada se escribe la siguiente ecuacin:
P potencia = W
n velocidad del agitador = s
-1
Di dimetro agitador = m
V volumen del reactor = L
densidad del fluido = kg . m
-3
Ne = f ( Re, Fr, Q )
La fuerza de agitacin que produce el campo de flujo tridimensional puede
ser calculado con el nmero adimensional de Potencia
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Velocidad de agitacin constante
La velocidad de agitacin es proporcional al dimetro del agitador a la potencia 2/3
N
P
= N
L
Da
L
2/3
Da
P
En forma equivalente esto es igual para la velocidad de rotacin del agitador de
un tanque grande el cual estar en relacin a un tanque pequeo
rpm
P
= rpm
L
Da
L
2/3
Da
P
N velocidad del agitador = s
-1
Da dimetro agitador = m
N
L
3
Da
L
2
= N
P
3
Da
P
2
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Criterios fsicos de escalado
El escalado basado en mantener constante una condicin de
operacin tienen diversos efectos sobre las otras cantidades. No
es posible conformar o cumplir con varios de los criterios en forma
simultnea.
Por eso se hace necesario restringirnos a solo algunas similitudes
parciales.
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Scale down
Proveer un sistema experimental mas pequeo que replique las
condiciones que existen en la gran escala.
Imitar o reproducir las instalaciones a una escala mas chica
Los parmetros pueden ser evaluados mas rapidamente, y a menor costo
Los clculos usados en scale down son los mismos que para el scale up
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Optimizacin de las condiciones de cultivo de
clulas CHO
Este ejemplo: produccin de anticuerpos
monoclonales en cultivo clulas CHO
(Chinese hamster ovary).
Objetivo: optimizar las condiciones de
crecimiento para maximizar su produccin de
Mabs.
Sistema: scale-down en reactores paralelos
(Dasgip), 4 recipientes de 700 ml, con control
de temperatura, CO2, pH (dosificacin de 1M
HCl o 1M NaOH, y O2 (mezclador de gases).
C. Sellick et al. Faculty of Life Science, University of Manchester, UK.
Genetic engineering & biotechnology news. Vol 29, N17, Oct 1, 2009
Para desarrollar de los sistemas de produccin se usa el modelo de
reactores scale-down, para reproducir lo que sucede en los
bioreactores de gran escala (>5,000 L).
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En el modelo se usaron clulas GS-CHO que secretan IgG4 mAb,
cultivadas en medio CD-CHO (Invitrogen, Life Technologies) en
cultivos en batch.
Experimento 1: probar el efecto de la velocidad del agitador
Experimento 2: probar el efecto del pH
Experimento 3: probar el efecto de la temperatura
Experimento 4: probar el efecto de la concentracin de O2 disuelto
sobre
el crecimiento
la produccin de Mabs de las clulas
Condiciones iniciales: temperatura 37C, pH 7.0, velocidad agitador 80
rpm, DO mnimo sin controlar.
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Experimento 1: efecto de la velocidad del agitador
El aumento de la agitacin produce una mas larga fase inicial, por el estrs hidrodinmico. La
disminucin fue mas visible a 110 rpm.
Cuando el agitador gira a 140 rpm, el patrn de crecimiento cambia en 3 4 das, aunque la
mxima densidad celular se mantiene.
Una disminucin significativa del crecimiento y nmero de clulas viables se observa
incrementando el agitador a 170 rpm.
La mxima produccin de anticuerpos es similar a 80, 110, y 140 rpm, pero decrece a 170
rpm.
Condicin ptima: 80 rpm, porque combina el mejor crecimiento y la mejor produccin de
mabs.
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Experimento 2: efecto del pH
El pH ptimo fue entre 7.0 y 7.2, Los valores mas altos (pH 7.6) y
mas bajos (pH 6.8) resultaron en una disminucin de la tasa de
crecimiento, nmero de clulas viables asi como tambin menores
ttulos de anticuerpos.
Condicin ptima: los experimentos subsecuentes se llevaron a cabo
a 7.0.
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Experimento 3: efecto de la temperatura
El cultivo a 34C produce una fase inicial mas larga, y un menor numero de
clulas vivas. Sin embargo se observo un incremento de la fase estacionaria de
1 a 3 das, extendiendo la duracin del cultivo en 2 das. Alcanza los niveles de
produccin comparables al cultivo a 37C en el da 12.
Por el contrario las clulas cultivadas a 39C crecieron inicialmente mas rpido
pero alcanzaron menor nmero de clulas viables y produccin de anticuerpos.
A 30C las clulas no crecieron y simplemente entraron en un descenso continuo
con una pequea produccin de Mabs.
Condicin ptima: 37C.
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Experimento 4: efecto de la concentracin de O2 disuelto
Luego de airear toda la noche con aire, el nivel inicial de DO fue seleccionado a 100%. A
medida que las clulas crecan el DO en el medio fue disminuyendo.
En la condicin sin control las clulas crecieron sin intervencin, y consecuentemente el
DO cay a niveles mnimos. En el resto de los reactores el controlador fue seteado para
que la DO mnima no baje de la condicin deseada
Aumentando la DO result en un incremento mximo de clulas viables (de 1 x 107 a 1.4 x
107) y duracin del cultivo (desde 12 a 16 das). El incremento de la viabilidad no fue
acompaado por un aumento de la produccin de Mabs.
Mientras que a 30% mejor ambos, crecimiento y productividad, esto no ocurri a los
mayores niveles de DO (50% y 70%) resultando en una disminucin del ttulo de
anticuerpos.
Condicin ptima: mnimo de DO 30%
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Comparacin de reactores con cultivo en frascos agitados
Se observ que las caractersticas de
crecimiento y produccin en frascos
agitados fueron similares a la en los
primero 5 das de cultivo, condicin de
DO sin control en los bioreactores.
El incremento de DO en los reactores
result en una mejor del rendimiento.
Los frascos agitados no pueden
mantener la aireacin apropiada para
sostener la viabilidad mas all de una
semana de cultivo
Los reactores paralelos es un mejor
modelo para el desarrollo del sistema
de produccin, y comparar con los
reactores de gran escala.
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