Ciencias Naturales e Ingeniería

CINÉTICA DE SISTEMA
INMOVILIZADOS

Victoria Tamayo Galván

vtamayo@cua.uam.mx

M. thermophila laccase – pH = 9.0

Ingeniería de biorreactores II Febrero, 2023
 Sistemas Inmovilizados

Interacción entre transferencia de masa y reacción

Las velocidades de reacción y la transferencia de masa del
sustrato no son independientes en los sistemas heterogéneos.
La tasa de transferencia de masa depende del gradiente de
concentración establecido en el sistema; esto a su vez depende
de la velocidad de agotamiento del sustrato por reacción.

Por otro lado, la velocidad de reacción depende de la disponibilidad de sustrato,

que depende de la velocidad de transferencia de masa. Uno de los objetivos del
análisis de reacciones heterogéneas es determinar las influencias relativas de la
transferencia de masa y la reacción en las velocidades de reacción observadas.

Si una reacción transcurre lentamente incluso en presencia de un sustrato adecuado, es probable que la transferencia de masa sea lo
suficientemente rápida para satisfacer las demandas de la reacción. En este caso, la velocidad observada reflejaría más directamente el
proceso de reacción que la transferencia de masa. Por el contrario, si la reacción tiende a ser muy rápida, es probable que la
transferencia de masa sea demasiado lenta para suministrar sustrato a la velocidad requerida. La velocidad observada reflejaría
fuertemente la tasa de transferencia de masa.

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 Sistemas Inmovilizados

Cinética de sistemas inmovilizados

Considere un catalizador esférico de radio 𝑹 sumergido en un líquido bien mezclado que
contiene el sustrato 𝑨. En el bulk líquido alejado de la partícula, la concentración del
sustrato es uniforme e igual a 𝑪𝑨𝒃 .

Si la partícula estuviera inactiva, después de un tiempo la concentración de sustrato dentro

del sólido alcanzaría un valor constante en equilibrio con 𝑪𝑨𝒃 . Sin embargo, cuando el
sustrato se consume por la reacción, su concentración 𝑪𝑨 disminuye dentro de la partícula

Si las células o enzimas inmovilizadas se distribuyen uniformemente dentro del

catalizador, el perfil de concentración es simétrico con un mínimo en el centro. La
transferencia de masa del sustrato a los sitios de reacción en la partícula está impulsada
por la diferencia de concentración entre la solución en el bulk y el interior de la partícula.
En el bulk del líquido, el sustrato es transportado rápidamente por corrientes convectivas.

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Cinética de sistemas inmovilizados

A medida que las moléculas del sustrato se acercan al sólido, deben ser transportadas desde el bulk del
líquido a través de la capa límite relativamente estancada hasta la superficie del sólido; este proceso se
llama transferencia de masa externa. Se desarrolla un gradiente de concentración a través de la capa
límite desde 𝑪𝑨𝒃 en el bulk de líquido hasta 𝑪𝑨𝒔 en la interfase sólido-líquido.
Si la partícula no fuera porosa y todas las enzimas o células estuvieran confinadas a su superficie externa, la
transferencia de masa externa sería el único proceso de transporte requerido.
Más a menudo, la reacción tiene lugar dentro de la partícula, por lo que la transferencia de masa interna
también debe ocurrir a través del sólido.
La forma del gradiente de concentración puede variar de acuerdo a:
Si la transferencia de masa es mucho más lenta que la reacción, todo el sustrato que ingresa a la
partícula puede consumirse antes de llegar al centro. En este caso, la concentración cae a cero dentro del
sólido (a).
Las células o la enzima cerca del centro carecen de sustrato y el núcleo de la partícula se vuelve inactivo. En
los ejemplos (b) y (c), el coeficiente de reparto del sustrato no es igual a la unidad.

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Cinética de sistemas inmovilizados

Esto significa que, en equilibrio y en ausencia de reacción, la concentración de sustrato en el sólido es mayor
o menor que en el líquido.

En (b), la discontinuidad de concentración en la interfase sólido-líquido muestra que el sustrato se distribuye

preferentemente a la fase sólida. Por el contrario, en (c) se muestran las concentraciones cuando el sustrato
es atraído más por el líquido que por el sólido.

El efecto de la transferencia de masa sobre la concentración intrapartícula puede aumentarse o disminuirse

mediante la partición del sustrato.

La partición es importante cuando el sustrato y el sólido están cargados o si las interacciones

hidrofóbicas fuertes causan repulsión o atracción. Debido a que la mayoría de los materiales utilizados
para la inmovilización de células y enzimas son muy porosos y contienen un alto porcentaje de agua, a
menudo se pueden despreciar los efectos de partición. En nuestro tratamiento de la reacción heterogénea,
supondremos que la partición no es significativa.

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Velocidades de reacción verdaderas y observadas (aparentes)

❑ Debido a que las concentraciones varían en los catalizadores sólidos, las velocidades de reacción locales también varían
según la posición dentro de la partícula. Incluso para reacciones de orden cero, la velocidad de reacción cambia con la
posición si se agota el sustrato. Cada célula o molécula de enzima dentro del sólido responde a la concentración de
sustrato en su ubicación con una velocidad de reacción determinada por sus propiedades cinéticas. Esta velocidad local
de reacción se conoce como VELOCIDAD VERDADERA O VELOCIDAD INTRÍNSECA.
❑ Las velocidades de reacción locales verdaderas son difíciles de medir en catalizadores sólidos sin alterar las condiciones
de reacción. Sin embargo, es relativamente fácil medir la velocidad de reacción general para todo el catalizador. En un
sistema cerrado, la velocidad de desaparición del sustrato del bulk del líquido debe ser igual a la velocidad total de
conversión por reacción; en sistemas heterogéneos, esto se llama VELOCIDAD OBSERVADA (APARENTE).

Es importante recordar que la velocidad observada no suele ser igual a la verdadera actividad de cualquier célula o
enzima en la partícula. Debido a que los niveles de sustrato se reducen dentro de los catalizadores sólidos en comparación
con los del medio externo, se espera que la velocidad observada sea más baja que la velocidad que ocurriría si la partícula
entera estuviera expuesta al líquido del bulk.

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Velocidades de reacción verdaderas y observadas (aparentes)

❑ La velocidad de reacción de una enzima inmovilizada que obedece a la cinética de Michaelis-

Menten depende de los valores de 𝒗𝒎𝒂𝒙 y 𝑲𝒎 para la enzima en su estado inmovilizado.

❑ Estos parámetros a veces se denominan parámetros cinéticos verdaderos o parámetros

cinéticos intrínsecos. Debido a que los parámetros cinéticos pueden alterarse durante la
inmovilización, por ejemplo, debido a daño celular o enzimático, cambio conformacional y
impedimento estérico, es posible que no se apliquen los valores medidos antes de la
inmovilización.

❑ Los parámetros cinéticos verdaderos para biocatalizadores inmovilizados pueden ser difíciles de
determinar porque cualquier velocidad de reacción medida incorpora efectos de transferencia de
masa.
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Cinética de sistemas inmovilizados

En algunos casos, la transferencia de masa puede controlar la operación.
Es conveniente clasificar la transferencia de masa como:

✓ Extrapartícula:, relativa al medio externo a la

partícula que contiene la célula.(Resistencia
externa)
✓ Intrapartícula: dentro de la partícula que contiene
la célula.(Resistencia interna)

Las especies que se transforman pueden existir en solución en la fase líquida o como una fase gaseosa separada (p. ej., oxígeno,
dióxido de carbono) o fase sólida (p. ej., celulosa).

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Interacción entre transferencia de masa y reacción

Existen criterios matemáticos para evaluar hasta qué punto la transferencia
de masa influye en la velocidad de reacción observada.

Las reacciones que se ven significativamente afectadas se denominan

reacciones limitadas por transferencia de masa o limitadas por
difusión.

Es posible distinguir la influencia relativa de la transferencia de masa

interna y externa en la velocidad de reacción observada.

Mejorar la transferencia de masa y eliminar las restricciones de

transferencia de masa son objetivos deseados en la catálisis
heterogénea.

Una vez que se identifican el efecto y la ubicación de las principales

resistencias a la transferencia de masa, podemos diseñar estrategias para
reducirlas.
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TRANSFERENCIA DE MASA INTERNA Y REACCIÓN

Caso de células o enzimas inmovilizadas en partículas esféricas
Balance de masa en estado estacionario

Balance de masa de capa en una partícula de catalizador esférica de radio 𝑹.

El sustrato que se difunde hacia la esfera debe cruzar la coraza para llegar al centro. Se realiza un balance de
masa del sustrato alrededor de la coraza considerando los procesos de transferencia de masa y reacción
que ocurren en el radio 𝒓. El sistema considerado para el balance de masa es solo la coraza (Elemento
diferencial de volumen).

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TRANSFERENCIA DE MASA INTERNA Y REACCIÓN

Balance de masa en estado estacionario - Consideraciones
1. La partícula es isotérmica. Si la temperatura en la partícula no es uniforme, se deben aplicar diferentes valores de los
parámetros cinéticos. Sin embargo, dado que los gradientes de temperatura generados por las células y enzimas
inmovilizadas son generalmente insignificantes.
2. La transferencia de masa ocurre solo por difusión. Supondremos que la partícula es impermeable al flujo, por lo que
la convección dentro de los poros es insignificante. Esta suposición es válida para muchos biocatalizadores en fase
sólida. Según el tamaño de los poros, los gradientes de presión pueden inducir la convección del líquido a través de la
partícula y esto mejora significativamente el suministro de nutrientes.
3. La difusión se puede describir usando la ley de Fick con difusividad efectiva constante. Se ignoran la interacción
del sustrato con otros gradientes de concentración y los fenómenos que afectan el transporte de especies cargadas. Se
aplicará la ley de Fick utilizando la difusividad efectiva del sustrato en el sólido, 𝕯𝑨𝒆 . El valor de 𝕯𝑨𝒆 es una función
compleja de las características de difusión molecular del sustrato, la tortuosidad del camino de difusión dentro del sólido
y la fracción del volumen de partículas disponible para la difusión. Supondremos que 𝕯𝑨𝒆 es constante e independiente
de la concentración de sustrato en la partícula; esto significa que 𝕯𝑨𝒆 no cambia con la posición. Se supone que las
enzimas o células inmovilizadas se distribuyen uniformemente dentro de la partícula. Las propiedades de la matriz de
inmovilización también se consideran uniformes.
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TRANSFERENCIA DE MASA INTERNA Y REACCIÓN

Balance de masa en estado estacionario - Consideraciones

4. La partícula es homogénea. Se supone que las enzimas o células inmovilizadas se distribuyen uniformemente dentro
de la partícula. Las propiedades de la matriz de inmovilización también se consideran uniformes.
5. El coeficiente de partición del sustrato es la unidad. Esta suposición es válida para la mayoría de los sustratos y
partículas, y asegura que no haya discontinuidad de concentración en la interfase sólido-líquido.
6. La partícula está en estado estacionario. Esta suposición suele ser válida si no hay cambios en la actividad del
catalizador debido, por ejemplo, a la desactivación de enzimas, al crecimiento celular o a la diferenciación celular. No
es válido cuando el sistema presenta cambios transitorios, como cuando las células consumen y almacenan
rápidamente sustratos para el metabolismo posterior.
7. La concentración de sustrato varía con una sola variable espacial. Supondremos que la concentración de sustrato
varía solo en la dirección radial y que el sustrato se difunde radialmente a través de la partícula desde la superficie
externa hacia el centro.

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 Sistemas Inmovilizados

TRANSFERENCIA DE MASA INTERNA Y REACCIÓN

Balance de masa en estado estacionario - Consideraciones
✓ El sustrato se transporta dentro y fuera de la coraza por difusión; por lo tanto, el primer y
segundo término se expresan usando la ley de Fick con difusividad efectiva constante.
✓ El tercer término es cero ya que no se genera sustrato.
✓ El sustrato se consume por la reacción dentro de la cubierta a una velocidad igual a la
velocidad volumétrica de reacción 𝒓𝑨 multiplicada por el volumen de la cubierta.
✓ El sistema se encuentra en estado estacionario. Por lo tanto, su masa y composición no
deben cambiar, el sustrato no puede acumularse en la coraza y el lado derecho de la
ecuación es cero.

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 Sistemas Inmovilizados

TRANSFERENCIA DE MASA INTERNA Y REACCIÓN

Balance de masa en estado estacionario - Consideraciones

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 Sistemas Inmovilizados

TRANSFERENCIA DE MASA INTERNA Y REACCIÓN

Balance de masa en estado estacionario - Consideraciones

Lo que se obtiene es una ecuación diferencial que representa la difusión y la reacción en un biocatalizador esférico. Dicha ecuación
diferencial es de segundo orden. En principio, puede resolverse por integración para producir una expresión para el perfil de
concentración en la partícula, 𝑪𝑨 como una función de 𝒓. Sin embargo, no es posible integrar la tal como está porque la velocidad de
reacción 𝒓𝑨 es en la mayoría de los casos una función de 𝑪𝑨 .

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 Resistencia interna de la Transferencia de Masa

TRANSFERENCIA DE MASA INTERNA Y REACCIÓN

Perfil de concentración: CINÉTICA DE PRIMER ORDEN Y GEOMETRÍA ESFÉRICA
Integración de la ecuación diferencial de segundo orden con
condiciones de frontera dan la siguiente expresión para la
concentración de sustrato en función del radio:
𝒌𝟏 es la constante de velocidad intrínseca de primer orden con
dimensiones 𝑻−𝟏 . Para reacciones biocatalíticas, 𝒌𝟏 depende de la
cantidad de células o enzima en la partícula. 𝒌𝟏 y 𝕯𝒆 para una
partícula determinada pueden considerarse constantes. En
consecuencia, como las únicas variables en la ecuación son 𝑪𝑨 y 𝒓, la
ecuación está lista para la integración. Debido a que se tiene una
ecuación diferencial de segundo orden se requieren dos condiciones de
frontera para resolverlo:

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 Resistencia interna de la Transferencia de Masa

EJEMPLO
La enzima se inmoviliza en perlas de agarosa de 8 mm de diámetro. La concentración de enzima en las perlas es de 0.018
kg de proteína por m3 de gel. Se sumergen diez perlas en una solución bien mezclada que contiene sustrato a una
concentración de 3.2  10-3 kg m-3. La difusividad efectiva del sustrato en el gel de agarosa es de 2.1  10-9 m2 s-1. La
cinética de la reacción enzimática se puede aproximar como de primer orden con una constante de velocidad específica de
3.11  105 s-1 por kg de proteína. Los efectos de transferencia de masa fuera de las partículas son despreciables. Trace el
perfil de concentración de sustrato en estado estacionario dentro de las perlas en función del radio de la partícula.

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TRANSFERENCIA DE MASA INTERNA Y REACCIÓN

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 Resistencia interna de la Transferencia de Masa

Perfil de concentración: cinética de orden cero y geometría esférica

donde 𝑘0 es la constante de velocidad intrínseca de orden cero con

unidades de, por ejemplo, 𝑔𝑚𝑜𝑙ൗ𝑠 𝑚3de partícula. Al igual que 𝑘1 para las
reacciones de primer orden, 𝑘0 varía con la densidad celular o enzimática.
Las reacciones de orden cero son únicas en el sentido de que, siempre que
esté presente el sustrato, la velocidad de reacción es independiente de la
concentración del sustrato.
Se debe tener en cuenta la posibilidad de que el sustrato se agote dentro de
la partícula. Se supone que esto ocurre en algún radio 𝑅0 , la velocidad de
reacción para 0 < 𝑟 ≤ 𝑅0 es cero. En cualquier otro lugar dentro de la
partícula (es decir, 𝑟 > 𝑅0 ) la velocidad de reacción volumétrica es constante
e igual a 𝑘0 independientemente de la concentración de sustrato.

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 Resistencia interna de la Transferencia de Masa

Perfil de concentración: cinética de orden cero y geometría esférica

La ecuación se puede simplificar si 𝐶𝐴 permanece >
0 en todas partes para que 𝑅0 ya no exista.
Para reacciones de orden cero, podemos calcular
el radio de partícula máximo para el cual 𝐶𝐴
permanece > 0 . En tal partícula, el sustrato se
agota justo en el punto central. Por lo tanto,
calculando 𝑅

donde 𝑅𝑚𝑎𝑥 es el radio máximo de partículas para

𝐶𝐴 > 0.

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 Resistencia interna de la Transferencia de Masa

EJEMPLO
Se inmovilizan células no viables de levadura en perlas de alginato. Las perlas se agitan en medio de
glucosa en condiciones anaeróbicas. La difusividad efectiva de la glucosa en las perlas depende de la
densidad celular según la relación:

10 𝑚2Τ
donde 𝔇𝐴𝑒 es la difusividad efectiva × 10 𝑠 y 𝑦𝐶 es la fracción másica de levadura en el gel.
Se puede suponer que la velocidad de consumo de glucosa es de orden cero; la constante de
velocidad de reacción a una densidad de levadura en las perlas del 15 % en peso es de 0.5 𝑔Τmin 𝑙.
Para que el catalizador se utilice de manera efectiva, la concentración de glucosa dentro de las
partículas debe permanecer por encima de cero.
(a) Grafique el tamaño de partícula máximo permitido en función de la concentración de glucosa en
el bulk entre 5 𝑔Τ𝑙 y 60 𝑔Τ𝑙.(b) Para un medio que contenga 30 g de glucosa l-1, grafique 𝑅𝑚𝑎𝑥 en
función de la carga celular entre 10 y 45% en peso.
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Perfil de concentración: cinética de orden n y geometría esférica

Cinética de orden uno – Edo estacionario

𝑘
donde 2
𝜆 =
𝐷𝑒

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TRANSFERENCIA DE MASA INTERNA Y REACCIÓN

Perfil de concentración: cinética de Michaelis-Menten – Geometría esférica
❑ Debido a la no linealidad de la expresión de Michaelis Menten, la
integración analítica simple de la ecuación última no es posible.

❑ Sin embargo, los resultados de 𝐶𝐴 en función de 𝑟 se pueden obtener

usando métodos numéricos, generalmente por computadora.

❑ Debido a que la cinética de Michaelis-Menten se encuentra entre la

Adimensionalizar: cinética de orden cero y de primer orden, las soluciones explícitas para
estos casos se pueden usar para estimar los límites inferiores y
superiores del perfil de concentración para las reacciones de Michaelis-
Menten.

𝛽→0 𝐾𝑚 ≫ 𝑆0 Primer orden

𝛽→∞ 𝐾𝑚 ≪ 𝑆0 Orden cero

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 Resistencia interna de la Transferencia de Masa

TRANSFERENCIA DE MASA INTERNA Y REACCIÓN

Predicción de la tasa de reacción observada
Las ecuaciones para las concentraciones de sustrato intracatalizador, permiten predecir la velocidad de reacción
general u observada en el catalizador.
1. Cinética de primer orden. La velocidad de reacción en cualquier El resultado es una ecuación para la velocidad de reacción
punto de un catalizador esférico depende de la constante cinética de observada 𝒓𝑨,𝒐𝒃𝒔 en una sola partícula:
primer orden 𝒌𝟏 y de la concentración de sustrato en ese punto. La
velocidad global para toda la partícula es igual a la suma de todas las
velocidades en cada lugar del sólido. Esta suma equivale
matemáticamente a integrar la expresión 𝒌𝟏 𝑪𝑨 sobre todo el volumen
de la partícula, teniendo en cuenta la variación de 𝑪𝑨 con el radio
expresada:

Ingeniería de biorreactores II 𝒓𝑨,𝒐𝒃𝒔 es la velocidad de reacción observada por partícula con unidades de, por ejemplo, 𝑘𝑔Τ𝑠 29
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TRANSFERENCIA DE MASA INTERNA Y REACCIÓN

Predicción de la tasa de reacción observada
2. Cinética de orden cero. Siempre que el sustrato esté presente, las reacciones de orden cero ocurren a una velocidad
fija que es independiente de la concentración del sustrato. Por lo tanto, si 𝐶𝐴 > 0 en todas partes de la partícula, la
velocidad de reacción observada es igual a la constante de velocidad de orden cero 𝑘0 multiplicada por el volumen de la
partícula:

4 3
Sin embargo, si 𝐶𝐴 cae a cero en algún radio 𝑅0 en la partícula, el volumen interno 𝜋𝑅0 está inactivo. En este caso, la velocidad de
3
reacción es igual a 𝑘0 multiplicado por el volumen de partículas activas:

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TRANSFERENCIA DE MASA INTERNA Y REACCIÓN

Predicción de la tasa de reacción observada
3. Cinética de Michaelis Menten. Las velocidades observadas para las reacciones de Michaelis Menten no se pueden
expresar explícitamente porque no se tiene una ecuación para 𝐶𝐴 como una función del radio. Sin embargo,
𝒓𝑨,𝒐𝒃𝒔 puede evaluarse utilizando métodos numéricos.

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