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Cromatografa Robusta
Buenas Prcticas para la Creacin de un Mtodo Cromatogrfico Robusto: 1. Optimizacin del inyector S/SL
- El inyector es la fuente de muchos problemas de un sistema GC o GC-MS -Requiere optimizacin -Usar programa FlowCalc
VALVULA DE SPLIT
Una inyeccin de disolvente de gran expansin de volmen puede provocar una sobrecarga del liner del portal de inyeccin Esto puede resultar en la prdida de muestra por la VALVULA DE PURGA as como contaminacin de la lnea de gas portador entrante.
COLUMNA
Clculo aproximado del volumen de vapor para otras condiciones de Presin y Temperatura:
Inlet Liners
Utilizar un tipo de liner adecuado a las condiciones de trabajo
Diagnsticos Tpicos por Mala Instalacin Columna: Columna mal instalada en inyector: dar problemas con picos no retenidos o del principio del cromatograma. Columna mal instalada en detector: suelen dar ms bien problemas los picos del final del cromatograma.
104 mL/min
Proportional valve 1
FS
3 mL/min
Column head pressure control loop
Flow sensor
muestra, la relacin de split deber ser lo suficientemente grande como para proporcionar una inyeccin puntual (tiempo de barrido del liner despreciable con respecto al ancho del pico). Mnimo Split ratio recomendado: 0.18- 0.25mm : 1:10 1:20 0.32mm : 1:8 1:15 0.53mm : 1:2 1:5
Split vent
100 mL/min
Con un volumen de liner de 300-900 L se recomienda un split flow de al menos unos 20 ml/min para efectuar una inyeccin puntual. Las frrulas de grafito/vespel se deben de reapretar despus de utilizarlas por primera vez (las de grafito slo no lo requieren)
1 mL/min
3 mL/min
Septum purge vent
4 mL/min
Proportional valve 1
FS
Flow sensor
Pressure sensor
En splitless para focalizar la muestra (introducida lentamente en la columna) se deber: trabajar con una temperatura inicial de horno 10-20 C por debajo del punto de ebullicin del disolvente de la muestra (no utilizar mezclas de disolventes). Si la temperatura es demasiado baja (30-60C por debajo del p.eb.) pueden deformarse los picos ms voltiles. y/o bien, los puntos de ebullicin de los analitos estn ms de 150 C por encima de la temperatura inicial de la columna.
1 mL/min
Split vent
0 mL/min
isooctano con p.eb. de 99C), permite acortar los ciclos de enfriamiento al no tener que empezar a temperaturas prximas a la ambiente. En splitless con el tiempo se requerir cortar de 0.51m de columna para restablecer sus prestaciones. La optimizacin fina (en intevalos 0.1 min) del tiempo de inicio de la purga puede permitir reducir el tamao del pico del disolvente
Vlvula en posicin cerrada (CLOSED) Todo el flujo, excepto el de la purga de septum, va a la columna
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Un tiempo de splitless insuficiente afectar a la sensibilidad y reproducibilidad del mtodo El tiempo de splitless deber ser tanto mayor cuanto menor sea el flujo por columna, mayor el volumen
que ocupe la muestra vaporizada en el liner y cuanto mayor sea el volumen de ste, por tanto tambin depende del tipo de liner usado.
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Cmo Aumentar el Volumen de Inyeccin? Ventajas de la Programacin de Pulsos de Presin durante la Inyeccin
V = nRT / P (1 ul hexano a 250C y 1 atm ocupa 329 l) Volumen splitless liner clsico: 250 ul / tapered/split: 800-900 ul. Volmenes iny. mx. splitless liner clsico: 1 ul / tapered/split: 2 ul. 1 ul hexano a 250C y 5 atm ocupa 66 ul=> poder inyectar con EPC p.e. hasta 5ul
Posibilidad de mejorar la resolucin cromatogrfica. Incrementa la vida media del liner
Transferencia ms rpida de muestra de inyector a columna Disminucin de la degradacin trmica Disminucin de la discriminacin
200 Kpa.
0.3 min.
Reduce la posibilidad de prdida de voltiles por la purga de septum. Facilita la transferencia a la columna de los compuestos ms pesados. Al poder trabajar con relaciones de split mucho ms pequeas f. col.= 0.5 split vent = 10 ===> relacin split 1:20 Se inyecta 6 veces ms f. col.= 2.5 split vent = 8 ===> relacin split 1:3 Poder "ensuciar" menos el "liner" inyectando volmenes ms pequeos.
50 Kpa.
t
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1 2 3 4 5 6 7
5 7 1 6 2 4 3
on column
splitless
Tipo de Inyeccin
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Cuanto mayor es la presin del pulso: se puede inyectar un mayor volumen de muestra se efecta una inyeccin ms puntual. menor degradacin trmica menor discriminacin se puede trabajar con relaciones de split ms pequeas (mejor sensibilidad)*
* SI al terminar el pulso el Total Flow se reduce a menos de 15-20mL/min. activar el Gas Saver justo cuando termine el pulso.
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Establecer el volumen de inyeccin y los lavados de jeringa Pulsar Configure para fijar el tamao de jeringa Pusar More para fijar la velocidad de la jeringa
Lavados microjeringa
Solvent A (wetting solvent): Metanol, Tolueno, Isooctano, o mezcla miscible con disolvente inyeccin. Evitar dry solvents tipo: Acetona, Diclorometano o Hexano. Acortan la vida de la jeringa Solvent B : disolvente de la muestra utilizado en la inyeccin
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unas pocas centsimas de minuto. Permite utilizar bases de datos de tiempos de retencin: se dispone de bases de pesticidas (567HP5ms), PCBs (209-HP5ms), organo-estnnicos (15--HP5ms), aromas (409-HP5ms), toxicolgica (277-DB-17MS.), cidos grasos (37-DB-Wax y DB-23), VOCs ,...., y propias. Facilita muy considerablemente la operacin con muestras complejas: Mantenimiento de programaciones en el tiempo (condiciones de Integracin / tablas calibracin / SIM con MSD) Envejecimiento / Recortes de columna.
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Septum Vent
Trampa
Vlvula on/off ON
Split Vent
Vlvula Proporcional
Al Detector
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Detector FID aire Extremo columna capilar (1-2 mm desde la parte superior del jet) H2+ gas auxiliar Jet
Recomendaciones:
agua)
Si se cambia a menudo de columna, mejor usar frulas vespel-grafito que 100% grafito (no dejan residuos) Al intercambiar los jets de packed y capilares apretar sin forzar en exceso
(si se cambia con frecuencia con el tiempo se deber renovar)
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Gas Type Carrier Gases (H2, He, N) Packed columns Capillary columns Hydrogen Air Column + Makeup
Flow Range 10 60 ml/min 0.5 5 ml/min 24 60 ml/min 200 600 ml/min 10 60 ml/min
Typical Flow 30 ml/min (1/8 column) 1.5 ml/min (0.32 mm column) 40 ml/min 400 ml/min 30 ml/min
Detector Gases
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No
Comprobar/limpiar/sustituir: Conexin de interconexin o del colector Colector y aislantes Interconexin del detector Tarjeta del detector
Comprobar/limpiar/sustituir: Filtros, trampas y gases Jet del FID Columna y sus conexiones Inyector y fungibles
Problema elctrnico
Problema de contaminacin
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Consejos generales:
En la medida de lo posible, deberamos conocer los niveles de concentracin de los analitos que queremos analizar y siempre inyectar la menor cantidad posible. Si no es posible y disponemos de un sistema GCFID, analizarlo previamente en ste. Evitar columnas de dimetro ancho Evitar columnas de gran espesor de pelcula. Usar patrones para evaluar el sistema Realizar tareas de mantenimiento preventivo para minimizar los posibles problemas. Mantener un registro (logbook)
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Part #
Remarks
Keep as record of system performance Refill as necessary. DO NOT overfill. Replace as scheduled
05972-60053, G2590-60053
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69
50 131
F3 C - F2C - F2C - F2 C
219
.. N
F3 C - F2C - F2C - F2 C
414 (GCD)
450 500
502
550 600
614 650
Mass Abund Rel Abund Iso Mass Iso Abund Iso Ratio
70.00 503.00
20344
1.03 3.96
219.95 45968
5690 10.04