Universidad de Antofagasta

Facultad de Recursos del Mar

Departamento de Acuicultura



Crecimiento y capacidad de biorremediacin de
Chlorella vulgaris cultivada en aguas residuales
generadas en la produccin de Seriola lalandi
(Valenciennes, 1833)


SEMINARIO PARA OPTAR AL TITULO DE:
INGENIERO EN ACUICULTURA

ALUMNO:
ROBERTO ANDRES PIZARRO HUERTA


PROFESOR ORIENTADOR:
DR. ROBERTO OMAR RAMOS DIAZ

Contacto: r.pizarro.huerta@gmail.com


ANTOFAGASTA 2012


ndice
1. RESUMEN 1
1. ABSTRACT 2
2. INTRODUCCIN 3
3. OBJETIVOS 6
3.1 Objetivo General 6
3.2Objetivos Especficos 6
4. MATERIALES Y MTODOS 7
4.1. Local y Periodo de experimentacin 7
4.2. Material Biolgico 7
4.3. Obtencin del Efluente 8
4.4. Condiciones de Cultivo 8
4.4.1 Masificacin 8
4.4.2 Crecimiento y eficiencia de remocin de nutrientes. 9
4.5 Procedimientos Experimentales 11
4.5.1 Crecimiento 11
4.5.2 Eficiencia de Remocin (ER) 12
4.5.3 Determinacin de Amonio !!!
!
!
), Nitrito (NO
2
) Nitrato (NO
3
) Y Fosfato (!!
!
!
! 12
4.5.4 Determinacin de temperatura, salinidad, pH, oxigeno disuelto (OD) e intensidad
de luz 12
4.6 Anlisis Estadstico 13
5. RESULTADOS 13
5.1. Parmetros fsico-qumicos del efluente bruto. 13
5.1.2 Parmetros fsico-qumicos e intensidad de luz. Condicin experimental
indoor 13
5.1.3 Parmetros fsico-qumicos. Condicin experimental outdoor 15
5.1.4 Intensidad de luz. Condicin experimental outdoor 15


5.2 Crecimiento. Condicin experimental indoor 16
5.3 Crecimiento. Condicin experimental outdoor 18
5.4 Remocin de Nutrientes en condiciones experimentales indoor y outdoor 20
6. DISCUSIN 25
7. CONCLUSIN 30
8. SUGERENCIAS 31
9. BIBLIOGRAFA 32



















ndice de figuras

Figura 1. Microalga Chlorophyta Chlorella vulgaris utilizada en los experimentos 8
Figura 2. Etapa de masificacin, cultivo de Chlorella vulgaris 9
Figura 3. Crecimiento y remocin de nutrientes en condiciones indoor 10
Figura 4. Diagrama de la condicin experimental indoor 10
Figura 5. Estanques de crecimiento y remocin de nutrientes en condicin outdoor 11
Figura 6. Diagrama de la condicin experimental outdoor 11
Figura 8. Valores promedios de intensidad de luz en condicin indoor 14
Figura 7.Parmetros fsico qumicos registrados en condicin indoor. 14
Figura 9. Parmetros fsico qumicos registrados en condicin outdoor. 15
Figura 10.Valores promedios de intensidad de luz en condicin outdoor. 16
Figura 11. Crecimiento (n de cel/ mL) de Chlorella vulgaris en condicin indoor 18
Figura 12. Crecimiento (n de cel/ mL) de Chlorella vulgaris en condicin outdoor 20
Figura 13. Proceso de remocin de amonio por Chlorella vulgaris en condiciones indoor y
outdoor. 22
Figura 14. Proceso de remocin de Nitrito por Chlorella vulgaris en condiciones indoor y
outdoor. 23
Figura 15. Proceso de remocin de Nitrato por Chlorella vulgaris en condiciones indoor y
outdoor . 23
Figura 16. Proceso de remocin de Fosfato por Chlorella vulgaris en condiciones indoor y
outdoor . 24






ndice de Tablas

Tabla 1. Crecimiento (ncel/ mL) de Chlorella vulgaris en condiciones indoor. 17

Tabla 2. Crecimiento (n cel/ mL) de Chlorella vulgaris en condiciones outdoor 19

Tabla 3. Eficiencia de remocin de Chlorella vulgaris en efluente 21




































Dedicatoria
Este seminario se lo dedico especialmente
A mis Padres Thelma y Humberto.
A mis hermanos Daniela, Javiera y Pablo.
Los quiero Inmensamente.








AGRADECIMIENTOS

A mis padres quienes me criaron con esfuerzo y cario. Que confiaron en m, para finalizar
mis estudios, que los logre gracias a su enseanza Que toda meta se logra con
perseverancia, tenacidad y amor por uno mismo. A mis queridos hermanos que siempre
nos hemos mantenido juntos y lo estaremos en un futuro.
Tambin Agradecer a mis amigos Sebastin Gallardo, Priscilla Mancilla y Pilar Iribarren,
por los consejos tcnicos acerca del seminario, por la compaa incondicional de Catherine,
Daniel y Juan Pablo.
En los aspectos tcnicos del seminario agradecer a Juan Morales a quien me enseo todo lo
relacionado en la produccin y cultivo de microalgas. A Gloria Segovia por realizar los
anlisis de este seminario.
Finalmente, al Profesor Orientador Dr. Roberto Ramos Daz, quien desde un principio se
mostro interesado en mi propuesta de seminario, otorgndome la completa confianza de
hacer y deshacer, para que finalmente me diera cuenta en donde enfocar de una manera
eficaz en el estudio de efluentes.

Mar- Ciencia - Pasin (Ordenes, 2003)*




*datos sin publicar
1

1. RESUMEN

A escala de laboratorio se evalu el crecimiento y la eficiencia de remocin de nutrientes
disueltos en el efluente producido por la psicultura de Seriola lalandi en la Facultad de
Recursos del Mar por la microalga Chlorella vulgaris. Para el proceso de investigacin se
evaluaron condiciones experimentales indoor y outdoor en un tiempo de 8 das, con un
efluente filtrado, desinfectado e inoculado con una concentracin inicial de
2.06!10
6
4.16!10
3
cel/mL de Chlorella vulgaris cultivada en estanques de 50 litros de
capacidad. El diseo experimental para evaluar el crecimiento y la remocin de nutrientes
se realizo con 6 estanques para cada condicin experimental (indoor y outdoor), de estos 6
estanques 3 fueron para un control de crecimiento, cultivando en estos, Chlorella vulgaris
en agua de mar filtrada, desinfectada y enriquecida con F2, mientras que los 3 estanques
restantes se cultivo Chlorella vulgaris en efluente filtrado y desinfectado en donde se
evalu el crecimiento y la remocin de nutrientes por parte de Chlorella vulgaris. Los
resultados de crecimiento obtenidos en la condicin indoor, los cultivos en efluente
alcanzaron valores mximos de 4.17!10
6
7.57!10
5
cel/mL en el da 6, crecimiento similar
en los cultivos controles que obtuvieron 4.75!10
6
2.29!10
5
cel/mL,

mientras que en la
condicin experimental outdoor el crecimiento mximo obtenido por los cultivos en
efluentes fueron de 2.81!10
6
2.69!10
5
cel/mL alcanzado en el da 2, en comparacin que
los controles tuvieron un crecimiento mximo de 1.83!10
7
2.29!10
5
cel/mL. Los mejores
resultados de remocin de nutrientes se registraron con nitrito, alcanzando valores de
91.67% y 88.41%, en las condiciones indoor y outdoor. Por su parte, el nitrato fue
removido en un 57.47% y 29.31% para las condiciones indoor y outdoor. En cuanto a la
remocin de amonio los valores fueron de 42.22% para ambas condiciones experimentales.
Finalmente, el fosfato registro una remocin del 65.78% en indoor y un 75.78% en outdoor.
Palabras claves: Efluente, Crecimiento, Remocin, Nutriente, Chlorella vulgaris



2

1. ABSTRACT

A laboratory scale assessed the growth and efficiency of removal of dissolved nutrients in
the effluent produced by the psiculture of Seriola lalandi at the School of Marine Resources
by the microalgae Chlorella vulgaris. For the research process were evaluated indoor and
outdoor experimental conditions in a time of 8 days, with an effluent filtration, disinfection,
inoculated with an initial concentration of 2.06 ! 10
6
4.16 ! 10
3
cells / mL of Chlorella
vulgaris cultivated in ponds of 50 liters. The experimental design to assess growth and
nutrient removal was performed with 6 pools for each experimental condition (indoor and
outdoor), of these 6 pools 3 were to control growth, Chlorella vulgaris cultivated in these
filtered sea water, disinfected and enriched F2, while the 3 remaining ponds in Chlorella
vulgaris culture filtration and disinfected effluent which evaluated the growth and nutrient
removal by Chlorella vulgaris. The results obtained in growing crops in indoor condition
effluent reached maximum values of 4.17!10
6
7.57 10
5
cells / mL on day 6, similar
growth in control cultures that were 4.75!10
6
2.29 10
5
cells / mL, while in the outdoor
experimental condition obtained by growth of crops in effluent were 2.81 10
6
2.69!10
5

cells / mL was reached on day 2, compared to controls had a maximum growth of 1.83 ! 10
7

2.29 ! 10
5
cells / mL. The best results were recorded nutrient removal with nitrite,
reaching values of 91.67% and 88.41% in the indoor and outdoor conditions. Meanwhile,
nitrate was removed in a 57.47% and 29.31% for indoor and outdoor conditions. As for the
removal of ammonium values were 42.22% for both experimental conditions. Finally, the
phosphate removal record of 65.78% to 75.78% indoor and in outdoor.

Keywords: Effluent, Growth, Removal, Nutrient, Chlorella vulgaris




3

2. INTRODUCCIN
La acuicultura comercial se inicio en Chile en la dcada de los 80 coherentemente
con la poltica econmica nacional que incentiv la actividad privada, la apertura al
comercio internacional y como respuesta a la situacin de aumento de la sobreexplotacin
de stocks pesqueros de las especies nativas destinadas al mercado internacional. Desde ese
entonces, la acuicultura nacional ha tenido un crecimiento sostenido ayudado por la alta
produccin de los sistemas de cultivos intensivos que son los que ms retornos econmicos
aportan al pas. La produccin representada por este tipo de cultivos est estrechamente
ligada al uso de altas tecnologas y recursos humanos capacitados, que buscan cada da
optimizar an ms los procesos de produccin (FAO, 2012).
Si bien desde los aos 80 a la actualidad, la acuicultura intensiva en Chile ha
generado importantes beneficios econmicos y sociales. Sin embargo, se reconocen pocos
avances en el uso sustentable del ambiente y equidad en el acceso a la actividad para lograr
el desarrollo sustentable (Buschman, 2001).
Como cualquier otra actividad productiva, la acuicultura no deja de generar impacto
en el medio ambiente (Vinatea, 1999). Dentro de esta realidad, el cultivo de peces y
camarones son los que ms impacto provocan en el medio ambiente, debido a las
caractersticas de los efluentes generados en el proceso productivo (Paniagua-Michael &
Garcia, 2003). Entre los contaminantes ambientales ms significativos se encuentran
liberacin de excretas, restos de alimento y medicamentos, hasta contaminantes genticos
(Prado et al, 2006). Dentro de los contaminantes mencionados, el suministro de alimento
es el principal causante del deterioro de la calidad de agua. El aporte de nutrientes en los
estanques no es del todo aprovechado y en el momento de la cosecha gran parte de la
materia orgnica es lanzada a los cuerpos de agua naturales (Boyd, 1992). En muchos
sistemas de produccin en estanques, solamente el 30% de los nutrientes suministrado son
convertidos en producto, el resto es acumulado en los sedimentos o es liberado en el
efluente (Acosta-Nassar et al, 1994). Los efectos que tiene el efluente en el medio
ambiente se pueden resumir en la disminucin en la concentracin de oxigeno (OD),
aumento en la concentracin de slidos (SST), aumento en la demanda biolgica de
oxigeno (DBO), aumento en la demanda qumica de oxigeno (DQO), formas de nitrgeno
4

(amonio, nitrito y nitrato) y fosforo, crecimiento exagerado de algas, eutrofizacin, entre
otros efectos.
Entre los diversos modos de tratar los efluentes y disminuir su impacto ambiental,
se incluye como piedra angular de una acuicultura responsable la utilizacin de buenas
prcticas en la produccin de especies acuticas, adems de procesos fsicos qumicos y
aplicaciones biolgicas. Boyd (1992) recomienda entre las aplicaciones de buenas
prcticas, usar tasas de siembra y de alimentacin no superiores a la capacidad de carga del
sistema de produccin; usar practicas de alimentacin conservadoras, es decir mejorar la
calidad de dietas artificiales con fuentes de nitrgeno y fosforo de alta digestibilidad
(Cho, 2001), fertilizar solamente lo necesario para promover el fitoplancton; reducir el
recambio de agua tanto como sea posible; cosechar sin drenar el estanque y pasar el
efluente por un estanque de sedimentacin antes de la descarga final, para asegurar la
reduccin de los slidos disueltos (Boyd, 1992). Por su parte, las aplicaciones biolgicas
consisten en el uso de humedales artificiales para la remocin de nutrientes (Sanchez-
Carillo & Alvarez-Yepiz, 2008), remocin de materia orgnica e inorgnica mediante la
utilizacin de moluscos filtradores (Jones et al, 2001, 2002; Mugg & Rice, 2003),
remocin de nutrientes por macroalgas y microalgas (Wong et al, 1995; Abalde et al,
1999; Pagand et al, 2000; Nelson et al, 2001), y sistemas combinados de sedimentacin,
moluscos filtradores, macroalgas y microalgas (Neori et al, 1998; Jones et al, 2001; Jones
et al, 2002; Preston et al, 2003; Ramos et al, 2008).
En la actualidad el tratamiento de efluentes representa un costo y un proceso que no
generan ganancia alguna para las empresas de acuicultura, por lo tanto, la investigacin
sobre este tema se debe centrar en el desarrollo de tecnologas eficientes y de bajo costo.
En ese contexto, la utilizacin de microalgas como organismos biorremediadores para
disminuir los productos nitrogenados en el efluente resulta eficiente (Abalde et al. 1999;
Richmond, 2004; Salazar, 2005). Las microalgas son organismos que contienen clorofila
a y otros pigmentos capaces de realizar fotosntesis oxignica (Abalde et al, 1999).
Actualmente el desarrollo del cultivo microalgal en altas densidades tiene un sinfn de
aplicaciones que van desde suplementos alimenticios, tratamiento de enfermedades,
obtencin de pigmentos, aplicaciones biotecnolgicas como la obtencin de biodiesel y el
3

tratamiento de aguas residuales, entre otros (Abalde et al, 1999; Richmond, 2004;
Salazar, 2005).
La aplicacin de microalgas en el tratamiento de aguas residuales, tiene su
antecedentes en la poca de Caldewell (1940), quien reporta los primeros estudios sobre
la posibilidad de cultivos masivos de microalgas para tratar efluentes industriales (Salazar,
2005). El objetivo fundamental de la aplicacin de microalgas para el tratamiento de aguas
residuales es la utilizacin y transformacin de los nutrientes a biomasa, lo cual trae como
consecuencia, en un proceso global, la remocin de amonio, nitritos, nitratos y orto
fosfatos, el aumento del pH lo cual favorece la precipitacin de los orto fosfatos, la
oxigenacin del agua que favorece la oxidacin de la materia orgnica, accin bactericida
reduciendo la sobrevivencia de organismos patgenos y la recuperacin de CO2 liberado en
los procesos fotosintticos, entre otros beneficios. La biomasa microalgal producida
durante este proceso representa una fuente potencial de alimento y de pigmentos para
mltiples aplicaciones (Borowitza & Borowitza, 1988).
La seleccin de la cepa de microalga es un aspecto muy importante si se quiere
tener un crecimiento adecuado y una ptima capacidad de remocin de los nutrientes.
Existen estudios sobre abundancia de microalgas en aguas residuales, por ejemplo,
Escorihuela (2007) en una laguna de estabilizacin de efluentes report que las
microalgas con mas abundancia en dicha laguna fueron de las divisiones Chlorophyta y
Cianophyta, encontrando valores de abundancia entre 99.5 y el 98.11%, respectivamente.
Por su parte, estudios realizados por Chacn (2004), con el objetivo de probar la eficiencia
de Chlorella sp y Scenedesmus sp, en la remocin de nitrgeno, fosforo y DQO en aguas
residuales, concluyo que la remocin de nitrgeno y el fosfato, entre 44,0% y 48,7%; y la
DQO entre 54,8% y 55,8%, favorecen el uso potencial de Chlorella sp y Scenedesmus sp,
para el tratamiento de aguas residuales.
Con la finalidad de desarrollar tecnologas eficientes y de bajo costo para la
acuicultura el siguiente estudio est orientado en evaluar la capacidad de crecimiento y
biorremediacin de Chlorella vulgaris en los efluentes generados por la produccin de
Seriola lalandi.
6

3. OBJETIVOS

3.1 Objetivo General

Desarrollar tecnologas eficientes y de bajo costo para el tratamiento de aguas
residuales de la acuicultura.
3.2 Objetivos Especficos

Evaluar el crecimiento de Chlorella vulgaris en efluentes generados por la
produccin de Seriola lalandi en condiciones indoor y outdoor.
Evaluar la eficiencia de remocin de nutrientes de Chlorella vulgaris en
condiciones indoor y outdoor.












7

4. MATERIALES Y MTODOS
4.1. Local y Periodo de experimentacin

El proceso de experimentacin se realiz desde mayo del 2011 hasta febrero del 2012,
en las dependencias del Laboratorio de Cultivo de Microalgas del Laboratorio de Estudios
en Acuicultura (LEA), de la Facultad de Recursos del Mar, Universidad de Antofagasta.
Dicho proceso se dividi en dos sub etapas como:
a. Masificacin de Chlorella vulgaris
b. Crecimiento y eficiencia de remocin de nutrientes
La primera etapa se llev a cabo desde mayo a septiembre del 2011, realizando la
masificacin del material biolgico en condiciones de laboratorio, hasta llegar a la
concentracin de 2.06!10
07
4.16!10
+03
cel/mL y volmenes requeridos, partiendo desde
cepa hasta bidn de 20 litros de capacidad.
En la segunda etapa experimental se llevo a cabo desde diciembre 2011 hasta Febrero
del 2012. En esta etapa se prob la capacidad de crecimiento y eficiencia de remocin de
nutrientes de Chlorella vulgaris en condiciones controladas de laboratorio (indoor) y en
condiciones exteriores (outdoor).
4.2. Material Biolgico

La microalga Chlorella vulgaris, (Fig. 1), fue obtenida del cepario del laboratorio de
microalgas del Departamento de Acuicultura para luego ser masificada hasta llegar a
cultivos en bidones de 20 litros.

8


Figura 1. Microalga Chlorophyta Chlorella vulgaris utilizada en los experimentos (disponible sitio:
http://botany.natur.cuni.cz/algo/CAUP/H1998_Chlorella_vulgaris.htm)
4.3. Obtencin del Efluente

El efluente para la segunda etapa de experimentacin se obtuvo a partir de la
piscicultura de reproductores de dorado Seriola lalandi localizado en la Facultad del Mar
(FAREMAR). En esta piscicultura se encontraban 12 reproductores con un peso promedio
15 kilogramos, que eran mantenidos en un estanque de tipo australiano de 180 !
!
.
La obtencin del efluente fue mediante una bomba sumergible ubicada en la cmara de
descarte del estanque de los reproductores. Desde all se bombearon 264 litros de efluente,
utilizados solo una vez, que representaron el volumen total necesario para realizar la
segunda etapa de experimentacin. Posteriormente, el efluente fue filtrado a 1",
desinfectado con cloro y neutralizado con tiosulfato de sodio.
4.4. Condiciones de Cultivo

4.4.1 Masificacin
La masificacin de Chlorella vulgaris fue, desde cepa a bidn de 20 L en condiciones
controladas de aireacin y una intensidad lumnica constante de 15.711.09 mol/!
!
/seg.
Para lograr este cultivo, se inocul la cepa en matraces de 2 L con agua de mar filtrada a 1"
autoclavada y enriquecida con medio de cultivo general F2 (Guillard, In: Stein, 1979),
posteriormente se sigui el crecimiento durante 10 das, finalizando cuando los matraces
9

alcanzaron el crecimiento exponencial. Luego los matraces que registraron un crecimiento
exponencial con una concentracin de 2.01!10
6
cel/ml aproximadamente, fueron
inoculados en bidones de 20 litros con agua filtrada a 1", desinfectada con cloro y
neutralizada con tiosulfato de sodio, enriquecida con medio de cultivo general F2
(Guillard, In: Stein, 1979). Este cultivo tambin estuvo en condiciones controladas de
aireacin e intensidad de luz constante de 15.711.09 mol/!
!
/seg. El crecimiento fue
monitoreado por 10 das. Aquellos que se encontraban en la fase exponencial, fueron
desdoblados y mantenidos en un stock de 80 litros de biomasa microalgal con una
concentracin de 2.06!10
7
4.16!10
3
cel/mL.
El volumen del inoculo para los matraces y bidones fue del 10% del volumen total del
recipiente (Fig. 2)

Figura 2. Etapa de masificacin, cultivo de Chlorella vulgaris en bidones de policarbonato
con capacidad de 20 L.

4.4.2 Crecimiento y eficiencia de remocin de nutrientes.
En la determinacin del crecimiento y remocin de nutrientes se utilizaron 12 estanques
cilindro cnicos transparentes de 50 litros de capacidad, utilizando un volumen de 44 L. El
experimento se realiz en dos condiciones experimentales, indoor y outdoor. El diseo
experimental para evaluar el crecimiento y la remocin de nutrientes se realizo con 6
estanques para cada condicin experimental (indoor y outdoor), de estos 6 estanques, 3
fueron para un control de crecimiento, cultivando en estos Chlorella vulgaris en agua de
mar filtrada, desinfectada y enriquecida con medio de cultivo general F2, mientras que los
10

3 estanques restantes se cultivo Chlorella vulgaris en efluente filtrado y desinfectado en
donde se evalu el crecimiento y la remocin de nutrientes por parte de Chlorella vulgaris.
(Fig. 3, 4, 5 y 6).

Figura 3. Crecimiento y remocin de nutrientes en condiciones indoor

Figura 4. Diagrama de la condicin indoor
11


Figura 5. Estanques de crecimiento y remocin de nutrientes en condicin outdoor.
Figura 6. Diagrama de la condicin experimental outdoor

4.5 Procedimientos Experimentales
4.5.1 Crecimiento
Para las etapas de masificacin, crecimiento y remocin de nutrientes, se utiliz el
mtodo de recuento celular mediante la cmara de Neubauer. Las muestras para el recuento
12

celular eran extradas cada dos das de cultivo en tubos Eppendorf de 50 mL. Una vez
extradas las muestras de las unidades experimentales se colocaba 1mL en la cmara de
Neubauer para realizar el contaje utilizando un microscopio con un aumento de 40x.
El procedimiento para cuantificar la concentracin celular fue el siguiente:
!"#$%#&!"#$%& !"#$#%&
!"#
!"
!
!"!!"!!"!!"
!
! ! ! !"
!
, donde
C= Numero de clulas por cuadro, de medida de 1mm por lado.
4.5.2 Eficiencia de Remocin (ER)

Para evaluar la eficiencia de remocin de nutrientes se utiliz la relacin propuesta por
Paniaguia-Michel & Garca (2003):
ER (%) =
!"!!"
!"
! !"", donde
Ca= Concentracin del Afluente
Ce= Concentracin del Efluente
4.5.3 Determinacin de Amonio !!!
!
!
), Nitrito (!!
!
), Nitrato (!!
!
) y Fosfato (!!
!
!
!

Para la determinacin de la eficiencia de remocin de nutrientes, se extrajeron
muestras de 50 mL cada dos das de cultivo, para luego ser centrifugadas a 2000 G por 5
minutos en una centrifuga Eppendorf modelo 5804, el sobrenadante se analiz en el
Laboratorio de Anlisis Qumicos del LEA, utilizando un test de anlisis en cubetas de
!"#$
!"
, para ser finalmente ledo en un fotocolormetro Nova 60 Espectroquant.
4.5.4 Determinacin de temperatura, salinidad, pH, oxigeno disuelto (OD) e
intensidad de luz

Los parmetros de temperatura (T), salinidad (), pH y oxgeno disuelto (OD),
fueron medidos todos los das en la etapa de crecimiento y remocin de nutrientes,
13

mediante la utilizacin de un equipo multiparmetro HANNA Instruments modelo HI9828,
para la medicin de intensidad de luz se utiliz un Luxmetro HANNA modelo HI97500.
4.6 Anlisis Estadstico

En el anlisis estadstico de los resultados fue utilizado el software Assistat versin
7.5 beta (Silva & Azevedo, 2006).
Se aplic el anlisis de varianza (ANOVA) de una va para determinar diferencias
significativas en los resultados de crecimiento y eficiencia de remocin. Cuando se verific
diferencias significativas entre los tratamientos se aplic el test de TUKEY (P<0.05). El
anlisis estadstico para los resultados de crecimiento y remocin de nutrientes se realiz
comparando los resultados da a da, tanto en las condiciones indoor como en la outdoor.

5. RESULTADOS
5.1. Parmetros fsico-qumicos del efluente bruto.

En el efluente bruto, antes de ser filtrado, desinfectado y neutralizado con tiosulfato
de sodio, se controlaron los parmetros fsico qumicos, oxigeno disuelto, pH, temperatura
y salinidad, registrando valores de 4.8 mgO
2
/L, 8.30, 27.26C y 35.03, respectivamente.

5.1.2 Parmetros fsico-qumicos e intensidad de luz. Condicin experimental
indoor
Los parmetros fsico-qumicos fueron medidos diariamente a las 11:00, 16:00 y
18:00 h, respectivamente (Fig. 7). En la condicin indoor los parmetros de oxgeno
disuelto (OD), pH, temperatura (C) y salinidad (), se mantuvieron estable a lo largo del
experimento. Los valores promedio de oxigeno disuelto fueron de 5.370.16 mgO
2
/L, el pH
alcanz 8.320.06, la temperatura alcanz 27.260.05C y la salinidad registr un valor
promedio de 36.340.05. Mientras que la intensidad de luz tuvo un comportamiento
estable registrando 15.710.005 "mol/m
2
/s (Fig. 8).
14


Figura 8. Valores promedios de intensidad de luz durante en el da medida en mol/m2/s. En condicin indoor



0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
11:00 13:00 18:00 20:00 11:00 13:00 18:00 20:00 11:00 13:00 18:00 20:00
"
#
$
%
#
&
'
(
)
(

(
%

*
+
,

-./)& (%0 1')
11:00
16:00
18:00
0
3
10
13
20
23
30
33
40
Sallnldad 1emperaLura h Cxlgeno ulsuelLo
11:00
16:00
18:00
Figura 7. Parmetros fsico qumicos registrados en condicin indoor, en diferentes horas de da
13

5.1.3 Parmetros fsico-qumicos. Condicin experimental outdoor

Al igual que la condicin experimental anterior, se sigui la misma frecuencia de
tiempo en las mediciones de los parmetros fsico-qumicos. En esta condicin
experimental los parmetros de oxgeno disuelto (OD), pH, temperatura (C) y salinidad
(), registraron variaciones a lo largo del tiempo. Los valores alcanzados para el oxigeno
disuelto alcanzaron un valor mnimo 4.060.57 mg O
2
/L a las 18:00 h y 5.400.30 mg O
2
/L
como valor mximo las 11:00 h, por su parte el pH vari entre 8.140.19 a las 16:00 h y
9.810.14 a las 18:00 h, la temperatura alcanz un valor mnimo de 27.932.19C y un
mximo de 39.520.75C, la salinidad registr un valor mnimo y mximo de 36.250.16 y
38.650.36, respectivamente. (Fig.9)

Figura 9. Parmetros fsico qumicos registrados en la condicin outdoor, en diferentes horas de da

5.1.4 Intensidad de luz. Condicin experimental outdoor

Los resultados de intensidad de luz en la condicin experimental outdoor, se
muestran en la figura 10.
11:00
16:00
18:00
0
10
20
30
40
Sallnldad 1emperaLura h Cxlgeno dlsuelLo
11:00
16:00
18:00
16

Los valores ms elevados de la intensidad de luz fueron registrados a las 11:00 y
15:00 h con 1508.12 25.51 y 1672.25 22.69 mol/m
2
/s, respectivamente. Mientras que
los menores valores fueron registrados a las 18:00 y 20:00 h con 755.1769.92 y
164.9466.65 mol/m
2
/s respectivamente, como se aprecia en la figura 10.

Figura 10.Valores promedios de intensidad de luz durante en el da medida en mol/m2/s. En condicin Outdoor

5.2 Crecimiento. Condicin experimental indoor

Los resultados de crecimiento en la condicin experimental indoor, se muestran en
la Tabla 1 y Figura 11.
Con los datos de crecimiento se elabor una ecuacin de regresin entre la
concentracin celular y los das de cultivo. Verificndose que la relacin entre las dos
variables es lineal. Y fue representada por la ecuacin Y= 0.601x+2.044 con un ndice de
correlacin positivo r
2
= 0.9148 para el cultivo control, (cultivo con F2), mientras que el
cultivo con efluentes fue definido por la ecuacin Y= 0.27x+1.87 con un ndice correlacin
positivo r
2
= 0.7866 (Fig.11).

0
200
400
600
800
1000
1200
1400
1600
1800
2000
"
#
$
%
#
&
'
(
)
(

(
%

*
+
,

-./)& (%0 (')
17

El cultivo de Chlorella vulgaris con efluente (EF) y enriquecidos con F2 (control),
se inici con una concentracin promedio de 2.06!10
6
4.16!10
3
cel/mL. El crecimiento
experimentado por Chlorella vulgaris en ambos medios, fue gradual, se identificaron las
fases de inicio y exponencial de crecimiento, que en el caso de Chlorella vulgaris con
efluentes fue hasta el da 6 de cultivo, mientras que los estanques con F2 (controles) fue
hasta el da 8 la fase exponencial de crecimiento. La fase estacionaria para el tratamiento
con efluente se inici el da 6 hasta 7, mientras que el tratamiento con F2 esta fase se
verific despus del da 8. Por su parte, la fase de cada de la curva de crecimiento
microalgal, en los estanques con efluentes se inicia al finalizar el da 7, mientras que en los
estanques con F2 fue al da 15.
Durante el experimento de crecimiento de Chlorella vulgaris, en ambos
tratamientos, estos presentaron diferencias significativas (P<0.05) en los das 2,4 y 8,
mientras que en el da 6 no se observan diferencias significativas (P >0.05), porque ambos
tratamientos registraron un crecimiento similar, es decir, los estanques con efluente (EF)
registraron 4.17!10
6
7.57!10
5
cel/mL en comparacin con el estanque control que registr
un crecimiento de 4.75!10
6
2.29!10
5
cel/mL (Fig.11).

Tabla 1. Crecimiento (ncel/ mL) de Chlorella vulgaris en condiciones indoor.

Das de Cultivo
Tratamientos 0 2 4 6 8

Efluente
2.06!10
6
a
4.1!10
03

2.23!10
6
b
1.81!10
5

2.50!10
6
b
1.57!10
5

4,17!10
6
a
7.57!10
5

3.71!10
6
b
6.92!10
5


Control

2.06!10
6
a
6.60!10
3

3.59!10
6
a
1.76!10
5

4.35!10
6
a
5.50!10
5

4.75!10
6
a
2.29!10
5

7.49!10
6
a
4.71!10
5

Letras diferentes en la misma columna muestran diferencias significativas (p < 0,05)
18


Figura 11. Crecimiento (n de cel/ mL) de Chlorella vulgaris en ambos medios de cultivo
(EF = Efluente ; Control = F Medio).

5.3 Crecimiento. Condicin experimental outdoor

Los resultados de crecimiento de la condicin experimental outdoor, se muestran en
la Tabla 2 y Figura 12.
Con los datos de crecimiento se elabor una ecuacin de regresin entre la
concentracin celular y los das de cultivo. Verificndose que la relacin entre las dos
variables es lineal. Y fue representada por la ecuacin Y= 2.3525x+0.47 con un ndice de
correlacin positivo r
2
= 0.9057 para el cultivo control, (cultivo con F2), mientras que el
cultivo con efluentes fue definido por la ecuacin Y= -0.0285x+2.498 con un ndice
correlacin positivo r
2
=0.0642 (Fig.11).

El cultivo de Chlorella vulgaris en ambos tratamientos, estanques con efluente (EF)
y estanques con F2 (control), se inici con una concentracin promedio de
2.07!10
6
2.65!10
3
cel/mL.
y = 0,267x + 1,876
r = 0,7797
y = 0,601x + 2,044
r = 0,9148
0
1
2
3
4
3
6
7
8
0 2 4 6 8 10
2
.
#
3
%
#
$
/
)
3
'
.
#

2
%
0
+
0
)
/


4
5
6
7


1')&
Ll
ConLrol
Llneal (Ll)
Llneal (ConLrol)
19

El crecimiento experimentado por Chlorella vulgaris en los estanques con efluentes
y F2 fue gradual, en el que se identificaron las fases de inicio, exponencial, estacionaria y
de cada, respectivamente.
Se puedo observar que el crecimiento de Chlorella vulgaris en los estanques con
efluente y F2, presentaron diferencias significativas (P<0.05) a lo largo del periodo de
experimentacin.
El periodo de crecimiento de Chlorella vulgaris fue relativamente corto en los
estanques con efluentes (EF), donde el mximo crecimiento registrado fue en el da 2 con
una concentracin de 2.81!10
6
3.98!10
5
cel/mL, mientras que en los estanques con F2 el
mximo crecimiento se registr en el da 6 con una concentracin de 1.80!10
7
2.32!10
5

cel/mL (Fig.12).

Tabla 2. Crecimiento (n cel/ mL) de Chlorella vulgaris en condiciones outdoor

Das de cultivo
Tratamientos 0 2 4 6 8

Efluente
2.07!10
6
a
3.27!10
3

2.81!10
6
b
2.69!10
5

2.65!10
6
b
3.98!10
5


2.40!10
6
b
4.41!10
4


1.99!10
6
b
1.01!10
5


Control

2.07!10
6
a
2.65!10
3

3.55!10
6
a
8.39!10
4

7.54!10
6
a
9.03!10
4

1.80!10
7
a
2.32!10
5

1.83!10
7
a
2.29!10
5

Letras diferentes en la misma columna muestran diferencias significativas (p < 0,05);
20

Figura 12. Crecimiento (n de cel/ mL) de Chlorella vulgaris en ambos medios de cultivo
(EF = Efluente ; Control = F2).

5.4 Remocin de Nutrientes en condiciones indoor y outdoor

Los valores de remocin de nutrientes en las condiciones indoor y outdoor se
muestran en la Tabla 3 y Figuras 13, 14,15 y 16.
y = -0,0283x + 2,498
r = 0,0642
y = 2,3323x + 0,47
r = 0,9037
0,00
3,00
10,00
13,00
20,00
23,00
0 1 2 3 4 3 6 7 8 9
C
o
n
c
e
n
t
r
a
c
i
o
n

C
e
l
u
l
a
r


!
1
0
6

1')&
Ll
ConLrol
Llneal (Ll)
Llneal (ConLrol)
21

Letras diferentes en la misma fila muestran diferencias significativas (p < 0,05);

Concentracin expresada en mg/L;
*Cada del cultivo antes de llegar al da 8
Da 0 = Concentracin inicial.
ER% = Eficiencia de remocin.
Nd = Valores no detectados por el mtodo analtico utilizado.


Tabla 3. Eficiencia de remocin de Chlorella vulgaris en efluente


Nutriente

Da
Condiciones experimentales
Indoor ER% Outdoor ER%

Amonio
!!!
!
!
)
0 0.45 - 0.45 -
2 0.350.06b 21.48 0.260.00a 42.22
4 nd 0 nd 0
6 nd 0 nd 0
8 nd 0 * *

Nutriente

Da
Condiciones experimentales
Indoor ER% Outdoor ER%

Nitrito
(!!
!
)
0 1.64 - 1.64 -
2 1.350.50a 17.68 1.640.00a 0
4 0.210.03a 87.40 0.260.00a 87.40
6 0.170.02a 89.63 0.190.03a 88.41
8 0.140.03 91.67 * *

Nutriente

Da
Condiciones experimentales
Indoor ER% Outdoor ER%

Nitrato
(!!
!
)
0 0.58 - 0.58 -
2 0.380.09a 35.06 0.410.07a 29.31
4 0.380.02a 33.91 0.560.11b 2.87
6 0.310.03a 46.55 0.450.07b 22.41
8 0.250.05 57.47 * *

Nutriente

Da
Condiciones experimentales
Indoor ER% Outdoor ER%

Fosfato
(!!
!
!
!
0 3.4 - 3.4 -
2 2.830.31a 16.67 1.880.54a 44.61
4 2.440.57a 28.14 1.840.40a 45.88
6 1.290.13a 62.16 0.820.30a 75.78
8 1.160.07 65.78 * *
22

Respecto al porcentaje de remocin de Amonio !!!
!
!
), en el da 2 en ambas
condiciones experimentales presentaron diferencias significativas (p < 0,05), registrando
la condicin indoor un 21.48% de remocin y la condicin outdoor un valor mximo de
remocin de este nutriente de un 42.22%. Despus del da 2 los valores no fueron
registrados por el mtodo analtico utilizado, puesto que el mnimo de lectura era 0.02
mg/L (Fig.13).

Figura 13. Proceso de remocin de amonio por Chlorella vulgaris en condiciones indoor (EI) y outdoor (EO).

La remocin de Nitrito (!!
!
) en ambas condiciones experimentales no presentan
diferencias significativas en el transcurso de los das de cultivo, logrando en indoor una
remocin total de 91.67%, mientras que en outdoor present una remocin del 88.41%. Sin
embargo, el inicio de la remocin en outdoor comienza despus del da 2, al contrario de la
condicin indoor que en el da 2 ya registraba una remocin de nitrito de un 17.68%.
(Fig.14).
0
0,03
0,1
0,13
0,2
0,23
0,3
0,33
0,4
0,43
0,3
0 2 4 6 8 10
2
.
#
3
%
#
$
/
)
3
'
.
#

8
9
:
;
0
<

1')&
Ll
LC
23


Figura 14. Proceso de remocin de Nitrito por Chlorella vulgaris en condiciones indoor (EI) y outdoor (EO).

En la remocin de Nitrato (!!
!
), se observaron diferencias significativas (P<0.05) a
partir del da 3 en adelante, para ambas condiciones experimentales. Los niveles de nitrato
en indoor registraron una baja significativa durante los das de experimentacin logrando
una remocin total del 57.47%. Mientras que en outdoor, el comportamiento de la remocin
no fue gradual, registrando una mxima remocin en el da 2 con 29.31%, luego en el da 3
baja a un 2.87% y finalmente en el da 6 logra una remocin del 22.41% (Fig.15).

Figura 15. Proceso de remocin de Nitrato por Chlorella vulgaris en condiciones indoor (EI) y outdoor (EO).
Por su parte, la remocin de Fosfato (!!
!
!
! en ambas condiciones fue gradual y sin
registrar diferencias significativas en el tiempo (P>0.05). En la condicin outdoor se
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
1,6
1,8
2
0 1 2 3 4 3 6 7 8 9
2
.
#
3
%
#
$
/
)
3
'
.
#

8
9
:
;
0
<

1')&
Ll
LC
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,3
0,6
0 2 4 6 8 10
2
.
#
3
%
#
$
/
)
3
'
.
#

8
9
:
;
0
<

1')&
Ll
LC
24

alcanza una remocin final del 75.78% en el da 6, mientras que en la condicin indoor se
alcanza una mxima remocin en el da 8 con un 65.78% (Fig.16).

Figura 16. Proceso de remocin de Fosfato por Chlorella vulgaris en condiciones indoor (EI) y outdoor (EO).













0
0,3
1
1,3
2
2,3
3
3,3
4
0 1 2 3 4 3 6 7 8 9
2
.
#
3
%
#
$
/
)
3
'
.
#

8
9
:
;
0
<

1')&
Ll
LC
23

6. DISCUSIN

El crecimiento microalgal se rige por la ley del mnimo, es decir, el factor limitante
del crecimiento es aquel que est presente en cantidades ms prximas al mnimo crtico
necesario para la microalga. Tal y como lo defini Leibig, el concepto de factor limitante
solo se aplica a deficiencias en nutrientes qumicos. Sin embargo, el concepto se ha ido
ampliando hasta incluir parmetros fsicos qumicos como Luz, Temperatura, pH, etc.
(Abalde et al, 1999).
En la etapa experimental indoor, la intensidad de luz siempre se mantuvo con un
promedio constante 15.711.09mol/!
!
!!"#, mientras que en la etapa experimental
outdoor los valores mximos de intensidad fueron a las 11:00 y 15:00 horas, con
1580.1225.51 y 167222.69 mol/!
!
!!"#, respectivamente. La gran diferencia en las
intensidades entre las condiciones experimentales evaluadas reflej que la densidad
microalgal tambin fuera distinta, registrando 4.17!10
6
7.57!10
5
cel/mL para indoor
alcanzada en el da 6 de cultivo y 2.81!10
6
3.98!10
5
cel/mL para outdoor en el da 2 de
cultivo. Autores como Mora et al, (2002 y 2005), observaron que Chlorella vulgaris fue
capaz de crecer en un rango de 58 y 576 mol/!
!
!!"#, sin embargo, agregan que a bajas
intensidades de luz Chlorella vulgaris tiene un mejor rendimiento fotosinttico que a
intensidades de luz altas, lo que explica que en la condicin experimental indoor Chlorella
tuvo un crecimiento estable. En la condicin experimental outdoor, la microalga
experiment un proceso de inhibicin del proceso fotosinttico o foto inhibicin, que
segn Darley (1987), estn relacionados con la detencin del crecimiento debido a
intensidades de luz supra ptimas, lo cual se reflejo que el cultivo en el da 2 al 4 decayera
abruptamente. Por lo tanto, la luz representa la fuente de energa para la fotosntesis, y
tanto la intensidad luminosa, como la longitud de onda y el fotoperiodo afectan al
crecimiento y metabolismo microalgal (Lips & Avissar, 1986).
Respecto de los parmetros fsicos qumicos en la condicin experimental indoor, se
observ que los valores de temperatura, pH, OD y salinidad se mantuvieron constantes.
Mientras que para los mismos parmetros los valores en la etapa experimental outdoor
registraron fluctuaciones durante el da. En el caso de la temperatura su mximo valor fue
26

de 39C, la cual excede al rango ptimo de temperatura propuesto para el aumento de la
tasa de crecimiento. Para la mayora de las microalgas, el rango ptimo de temperatura se
sita entre los 18 y 25C y para las microalgas ms resistentes como Chlorella vulgaris
estos valores llegan hasta los 36C. (Laing & Ayala, 1990 y Richmond, 2004). Segn
Abalde (1999), a altas temperaturas el crecimiento se detiene, puede ser debido a la
interrupcin de la regulacin metablica o muerte celular, lo cual fue constatado por la
cada del cultivo en el da 2 experimentado en la etapa experimental outdoor (39C).
Los valores de pH en la etapa experimental indoor se mantuvieron estables
registrando un valor promedio de 8.320.06 mientras que en la etapa experimental outdoor
el valor del pH tuvo un valor mnimo de 8.250.24 a las 11:00 horas y un mximo de
9.810.14 a las 18:00 horas. El pH es uno de los factores ms importantes en el cultivo,
puesto que las microalgas muestran una dependencia respecto al pH del medio de cultivo
variando su respuesta a este parmetro segn la especie de microalga.
Al respecto, cada microalga presenta un pH ptimo para su cultivo (entre 7 y 8). Un
descenso de pH suele ser letal, en cambio suelen soportar mejor los incrementos del pH,
hasta un cierto lmite (Richmond, 2004), as lo expone Mora et al. (2005) quien concluy
que los mayores crecimientos experimentados por Chlorella vulgaris se encontrara en un
rango de pH 8.0 y 9.0.
En el caso de la salinidad en la condicin experimental indoor tuvo un
comportamiento constante de 36.040.18, mientras que en la condicin outdoor la
salinidad registro un valor mximo de 38.650.36 a las 18:00 h, este valor se explica por
las altas temperaturas registradas para esta condicin, provocando evaporacin del medio y
as aumentando la concentracin de sales. Los valores de salinidad en las dos condiciones
exceden al rango de salinidad para el crecimiento ptimo de las microalgas, que van desde
25-35, por lo que es deducible que Chlorella vulgaris es una especie de microalga
halotolerante.
Los niveles de OD en la condicin experimental indoor registr un valor constante
de 5.370.16 mgO
2
/L, lo que constituye un valor normal, segn Neori et al. (1996), que
indica que el cultivo de microalgas y macroalgas hacen aportes de OD al sistema. Por su
parte, el valor OD de la condicin indoor se mantuvo constante, debido a que no se aplic
27

fotoperiodo, es decir la intensidad de luz siempre fue constante en el transcurso del
experimento. Por su parte, los valores en la condicin experimental outdoor presentaron
variaciones, registrando un valor mnimo de 4.060.57 mgO
2
/L a las 18:00 horas y un
valor mximo de 5.400.30mgO
2
/L a las 11:00 horas, esto se explica por las altas
intensidades de luz que se registraron en esta condicin experimental, ayudando a la
produccin de oxigeno a travs de la fotosntesis, mientras que la disminucin de oxigeno
al finalizar el da se explica por el proceso de respiracin, que experimentan las microalgas
durante la fase oscura del proceso de fotosntesis (Borowitza&Borowitza, 1988 y Abalde
et al, 1999).
Entre los factores ms importantes que ayudan al proceso de absorcin de las
microalgas, sin duda que est la concentracin microalgal y la intensidad de luz
(Richmond, 2004). Tambin existen otros factores que incluyen el periodo de adaptacin
por parte de la microalga; composicin del efluente y tratamiento del efluente (Hernndez,
2010).
Al respecto, el proceso de remocin de nutrientes se evidenci desde las primeras
horas de cultivo, logrando remover gran parte de la concentracin de los nutrientes,
corroborando los estudios hechos por Hernandez. (2010) y Chacn et al, (2002), los
cuales concluyen que al usar un efluente bruto, es decir sin tratamiento, las microalgas del
genero Chlorella vulgaris, tienen un proceso de adaptacin para realizar la absorcin de
nutrientes, como lo expresado por Hernandez (2010), quien describe una adaptacin de 13
das para iniciar la absorcin de nutrientes por Chlorella vulgaris. Mientras que un efluente
filtrado y desinfectado Chlorella vulgaris comienza la absorcin de nutrientes a partir del
segundo da de cultivo.
La remocin del nitrgeno en forma oxidada es decir como amonio, nitrito y nitrato,
en un cultivo microalgal tiene un comportamiento secuencial, es decir el nitrito y nitrato no
son absorbidos por las microalgas hasta que el amonio en su gran mayora es consumido
(Abalde, 1999), hecho que en la condicin outdoor la remocin de nitrito comenzara en el
da 3, mientras que el nitrato la remocin comenz en el da 2. En la condicin indoor la
remocin de nitrito y nitrato comenz a partir del da 2, pero con valores ms bajos que la
remocin de amonio que registr un 42.22% comparado con 17.68% para el nitrito y un
28

35.06% para el nitrato. Posteriormente la remocin de nitrito y nitrato en ambas
condiciones aument, despus que la remocin de amonio se mantuviese constante en
42.22%, llegando a una remocin final de nitrito de 91.67% en indoor en el da 8 y un
88.41% en el da 6 en la condicin outdoor. Mientras que en la condicin indoor el nitrato
registr una remocin final 57.47% en el da 8, por el contrario en la condicin outdoor la
mxima remocin se registr en el da 2 con un 29.31%, puesto que en los da 4 y 6 fue
menor, por aumentar la concentracin de nitrato en el medio.
La remocin de fosfato se inici dentro los primeros das llegando a una remocin
final del 65.78% en el da 8 en la condicin indoor, mientras que para condiciones outdoor
alcanz un valor de 75.78% en el da 6. Estos resultados se diferencian a lo presentado por
Hernndez (2010) que en 20 das de cultivo en la condicin experimental indoor, la
remocin de fosfato por Chlorella vulgaris alcanz un valor final de 24%.
Si bien lo expuesto por Hernandez (2010) y Chacon et al (2002) en el sentido que
los mejores resultados de crecimiento y remocin se obtienen con un efluente filtrado y
desinfectado, tambin hay otros aspectos que deben ser considerados en la asociacin
microalgas/efluentes, como el tipo de cultivo y la interaccin microalgas/bacterias, lo que
constituye un consorcio microbiano. Estudios realizados por de-Bashan et al (2002) y
Hernandez (2004), concluyen que el uso de un consorcio microbiano teniendo como base
la asociacin de Chlorella vulgaris y la bacteria Azospirillum brasilense, en sistema de
cultivos Batch (discontinuos), reportan un crecimiento de 4!10
6
cel/mL en el segundo da
de cultivo, comparado con los sistemas semi continuos que logran crecimientos de 3!10
6

cel/mL y en sistema continuo con 1!10
6
cel/mL. Por su parte, la absorcin de nitrgeno en
su forma oxidada comenz a partir del segundo da de cultivo, removiendo el 93% del
total, comparado con este estudio que en el da 2 las formas de nitrgeno es decir Amonio
!!!
!
!
), Nitrito (NO
2
), Nitrato (NO
3
), fueron removidas en un 74.22% en condiciones
indoor y un 71.53% en outdoor. La absorcin de fosfato por Chlorella vulgaris asociada
con Azospirillum brasilense logra tener una absorcin del 65% despus de dos das de
cultivo, sin aumentar despus de ese periodo. En este estudio los valores de remocin de
fosfato fueron en aumento al transcurrir el periodo de experimentacin, logrando valores
29

mximos de 65.78% y 75.78%, en los das 8 y 6 en condiciones indoor y outdoor,
respectivamente.
Ramos et al (2008) y Gac & Virreira (2008) recomiendan que para el proceso
de absorcin de nutrientes nitrogenados la utilizacin de macro y microalgas es una
alternativa viable. Por su parte, Gallardo (2008), quien trabajo con procesos de
sedimentacin y absorcin de macroalgas, con un efluente similar a este estudio, concluye
que la aplicacin de un sistema integrado de sedimentacin y absorcin por macroalgas,
en el sptimo da de experimentacin en condiciones indoor, alcanza una remocin del
nitrgeno inorgnico total de 68.24% y un 47.03% de fosforo, mientras que en condiciones
outdoor las macroalgas remueven el 51% del nitrgeno inorgnico total y un 48.41% del
fosfato.
Los resultados anteriores demuestran que la aplicacin de macroalgas para la
absorcin de nutrientes es eficaz, al igual que la aplicacin de microalgas, no obstante estas
ltimas presentan una velocidad de absorcin de nutrientes mayor que las macroalgas, ya
que los resultados alcanzados con la aplicacin de macroalgas en el sptimo da son
similares a los resultados alcanzados por este estudio en el segundo da de experimentacin.









30

7. CONCLUSIN

A partir de los resultados obtenidos en las condiciones experimentales indoor y outdoor se
puede concluir que:
La microalga Chlorella vulgaris experimenta un mayor crecimiento en los cultivos
controles enriquecidos con F2, en comparacin con los cultivos con aguas residuales, en
ambas condiciones experimentales. No obstante, en aguas residuales, se logra constatar
que el crecimiento de Chlorella vulgaris es significativamente mayor en la condicin
experimental indoor que en la condicin outdoor, lo que se atribuye a los factores
ambientales intensidad de luz y temperatura que influyeron negativamente.
En ambas condiciones experimentales, la utilizacin de Chlorella vulgaris es efectiva
en la remocin de nutrientes disueltos generados en la piscicultura de dorado Seriola
lalandi. Logrando reducir entre 50% y 91% la concentracin de todos los nutrientes en
estudio.
En las condiciones indoor y outdoor, los mximos crecimientos alcanzados por
Chlorella vulgaris son directamente proporcionales a la mxima remocin de
nutrientes.











31

8. SUGERENCIAS

Para aumentar el crecimiento y la eficiencia de remocin de nutrientes, por parte de
Chlorella vulgaris en aguas residuales, se sugiere trabajar en cultivos discontinuos
en sistemas race-way, para evitar el incremento de temperatura del agua de cultivo,
en la condicin experimental outdoor.
Realizar estudios de escalamiento, de modo evaluar los resultados obtenidos en
volmenes mayores.
Si bien el proceso de crecimiento y remocin de nutrientes por parte de Chlorella
vulgaris fue eficiente, es necesario considerar en un prximo estudio la
caracterizacin bioqumica de la biomasa de microalga, puesto que Chlorella
vulgaris presenta compuestos de inters nutricional (protenas, aminocidos,
vitaminas, pigmentos, entre otros) que podran ser utilizados en un sinfn de
intereses.











32

9. BIBLIOGRAFA

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