PROCESO BIOTECNOLGICO DEL ALCOHOL

M. Cruz Lpez lvarez

INDICE

INTRODUCCIN ENZIMAS FERMENTACIN BIOTRANSFORMACIONES BIOQUMICA DEL CRECIMIENTO Y METABOLISMO ALCOHOL INDUSTRIAL BIBLIOGRAFA

PAG.3 PAG.5 PAG.6 PAG.9 PAG.10 PAG.11 PAG.21

INTRODUCCIN
La biotecnologa es el uso de la microbiologa, la bioqumica y la ingeniera de una forma integrada con el objeto de utilizar los microorganismos, las clulas y los cultivos de tejidos (o sus partes) para obtener productos tiles. Esta puede ser dividida en dos categoras que son denominadas: Biotecnologa tradicional y Nueva biotecnologa. Los principales productos de la industria de biotecnologa tradicional son alimentos ingredientes saborizantes, alcohol industrial, antibiticos y cido ctrico. La nueva biotecnologa, que supone el uso de las tcnicas ms novedosas de la ingeniera gentica y la fusin celular para obtener organismos capaces de formar productos tiles. En el futuro, se predice que la nueva biotecnologa ser responsable de una fraccin mucho ms grande de la industria biotecnolgica total. La microbiologa industrial, la base fundamental de la biotecnologa, se inici a partir del desarrollo emprico de la produccin del vino, vinagre, cerveza y sake y con las fermentaciones tradicionales de hongos utilizadas en Asia y frica para la produccin de alimentos. El enfoque experimental de la produccin de embolitos microbianos empez solamente a principios del s. XX. Hasta el inicio de la segunda guerra mundial, los principales productos microbianos que se haban desarrollado a partir de este enfoque experimental eran enzimas, como proteasas, amilasas e invertasas. Despus de la segunda guerra mundial se produjo un avance importante en bioqumica e ingeniera gentica como resultado de la produccin a gran escala del primer antibitico, la penicilina. Desde la segunda guerra mundial hasta 1960, los principales productos de la nueva biotecnologa fueron los antibiticos adems en este periodo se desarrollaron procesos para la transformacin qumica de esteroides y se perfecciono el cultivo de clulas animales para la produccin de vacunas vricas. Desde 1960 hasta 1975 se desarrollaron nuevos procesos microbianos para la produccin de aminocidos y 5-nuclesidos como estimuladores del sabor, tambin fueron perfeccionados numerosos procesos para la produccin de enzimas con fines industriales, analticos y mdicos. En este periodo se desarrollaron tcnicas con xito para la inmovilizacin de enzimas y clulas. Un desarrollo adicional fue el uso de la fermentacin continua para la produccin de protena de origen unicelular a partir de levaduras y bacterias, para uso humano y piensos animales. Los procesos para la obtencin de protenas de origen unicelular fueron desarrollados utilizando microorganismos capaces de utilizar materiales basados en el petrleo como materias primas, como el gas-oil, los alcanos y el metanol. En el mismo periodo se desarrollaron tambin polmeros microbianos, como xantano y dextranos, utilizados como aditivos de alimentos. Desde 1975 la biotecnologa ha entado en fases ms importantes. La primer fue el desarrollo de la tecnologa de hibridomas para la produccin de anticuerpos monoclonales de inters en la diagnosis mdica. Despus se inici la produccin de protenas humanas utilizando E.coli manipulado genticamente. El primer producto, la insulina humana, fue introducido en 1982, siendo seguido por el Factor VIII, la hormona de crecimiento humano, interferones y uroquinasa. En la actualidad se encuentran en estado de desarrollo un amplio conjunto de protenas humanas. Aunque la produccin de protenas humanas por bacterias manipuladas genticamente se reconoce como el principal xito del periodo desde 1975, en la actualidad 3

existen otros productos que son ms importantes econmicamente. Por ejemplo, la produccin de etanol por clulas inmovilizadas se ha convertido en un proceso importante. Para colocar en perspectiva las actividades de investigacin entre la biotecnologa tradicional y la nueva biotecnologa se proporciona una tabla con una comparacin del nmero de aplicaciones de patentes en el campo completo de la biotecnologa para tres pases industriales importantes, USA, Japn y Alemania. Como se puede ver todava domina la biotecnologa tradicional, especialmente en Japn. Tabla de aplicaciones de patentes en 1984: Pas Patentes en Biologa Molecular 100 90 12 Patentes en Fermentacin (incluyendo enzimas) 160 700 55

USA Japn Alemania

El objetivo de la biotecnologa es obtener productos metablicos tiles a partir de materiales biolgicos. La biotecnologa comprende dos fases distintas: La fermentacin y la recuperacin de los productos. Para el cultivo de microorganismos en condiciones ptimas, as como para la produccin de microorganismos de los metabolitos o las enzimas deseados, deben ser desarrollados procedimientos de fermentacin. La recuperacin del producto lleva a cabo la extraccin y purificacin de los productos biolgicos. La recuperacin de los procesos bioqumicos difiere de la recuperacin qumica principalmente en que los materiales biolgicos son frecuentemente mucho ms lbiles. Aunque muchas de las tcnicas utilizadas en la recuperacin biolgica o bioqumica del producto solapan con las utilizadas estrictamente en procesos qumicos, est aumentando el uso de mtodos diseados especficamente para productos biolgicos como son la cromatografa o la electroforesis.

ENZIMAS
En Japn, la produccin a gran escala de etanol ha sido llevada a cabo creciendo clulas inmovilizadas de levadura Saccharomyces. Las clulas se inmovilizan por reaccin fotoqumica con un gel entrecruzante. El biorreactor, que produce ms de 1,5 mol/l.hde etanol ha sido operado con xito durante largos perodos de tiempo. Un proceso para la produccin de glicerol ha sido desarrollado utilizando Saccharomyces cerevisiae inmovilizado, pero se encuentra todava a escala de laboratorio.

Utilizacin de clulas inmovilizadas y enzimas para bioqumica analtica.

Puede utilizarse un sistema inmovilizado para el desarrollo de un ensayo bioqumico preciso y sensible. El principio bsico consiste en que la enzima acta sobre el sustrato, el aumento de la concentracin de producto o cambios en la concentracin de cofactor pueden ser seguidos utilizando muchos mtodos de ensayo. La reaccin puede ser seguida espectrofotomtricamente,polarimtricamente, fotomtricamente o mediante espectroscopia de masas.Adicionalmente, la reaccin puede ser seguida calorimtricamente midiendo la produccin de calor con un termistor, midiendo la diferencia de potencial con un electrodo. Ejemplos de ensayos bioqumicos mediante un mtodo enzima/termistor: Sustrato Enzima Concentracin (mMol/l)

Etanol Colesterol Glucosa Galactosa

Alcohol oxidasa Colesterol oxidasa Hexoquinasa Galactosa oxidasa

0,01-1 0,03-0,15 0,5-25 0,01-1

Ejemplos sensores que utilizan enzimas o clulas inmovilizadas: Sustrato Cepa/enzima Bases de la medida

Etanol Colesterol Sacarosa

Trichosporon brassica Colesterol oxidasa Invertasa/glucosa oxidasa

Disminucin de O2 Aumento de O2

FERMENTACIN
Hay distintos tipos de fermentacin, podemos encontrar la fermentacin continua, discontinua y el proceso de fermentacin alimentada.

Fermentacin discontinua:
Una fermentacin discontinua puede ser considerada como un sistema cerrado. A tiempo cero, la solucin esterilizada de nutrientes se inocula con microorganismos y se permite que se lleve acabo la inoculacin en condiciones ptimas de fermentacin. A lo largo de toda la fermentacin no se aade nada, excepto oxigeno(en forma de aire), un agente antiespumante y cidos o bases para controlar el pH. La composicin del medio de cultivo, la concentracin de la biomasa y la concentracin de metabolitos cambia generalmente en forma continua como resultado del metabolismo de las clulas. Despus de la inoculacin de una solucin nutritiva estril con microorganismos y su cultivo en condiciones fisiolgicas se observan cuatro fases tpicas de crecimiento: -FASE DE LATENCIA: durante esta fase los microorganismos se adaptan a su nuevo ambiente. Debido a esta transferencia al nuevo medio probablemente sern alterados por las clulas del inculo varios parmetros: cambios en el valor del pH, aumento en el suministro de nutrientes, descenso en los inhibidores del crecimiento. En las clulas deben ser inducidos nuevos sistemas de transporte. Fuera de la clula pueden difundir cofactores esenciales y las enzimas del metabolismo primario deben ajustarse a las nuevas condiciones. -FASE LOGARTMICA: al final de la fase de latencia las clulas se han adaptado a las nuevas condiciones de crecimiento. El crecimiento de la masa celular puede ahora ser descrito cuantitativamente en funcin de la duplicacin de nmero de clulas por unidad de tiempo o por la duplicacin de la biomasa por unidad de tiempo. El nombre de esta fase viene porque representando el nmero de clulas o biomasa frente al tiempo en una grfica semilogartmica se obtiene una lnea recta. Cuando se utilizan soluciones nutritivas complejas, frecuentemente se producen dos fases de logartmicas separadas por una fase de latencia. Este proceso se denomina diauxia y se produce debido a que uno de los dos substratos se cataboliza preferentemente. Las enzimas para el catabolismo de los otro substratos se inducen slo despus de que el primer substrato haya sido completamente metabolizado. -FASE ESTACIONARIA: cuando el substrato es metabolizado o se han formado sustancias txicas, el crecimiento desciende o se detiene completamente. La biomasa aumenta slo gradualmente o permanece constante en esta fase, aunque la composicin de las clulas puede cambiar. Debido a la lisis se liberan nuevos sustratos que pueden servir como fuente de energa para el crecimiento lento de los supervivientes. -FASE DE MUERTE: en esta fase las reservas de energa de las clulas se agotan. La longitud de tiempo entre la fase estacionaria y la fase de muerte dependen del organismo y del proceso utilizado.

Procesos de fermentacin alimentada:

En el proceso discontinuo los sustratos se aaden al principio de la fermentacin. Una mejora del proceso discontinuo cerrado es la fermentacin alimentada, en este proceso los sustratos se aaden escalonadamente a medida que progresa la fermentacin.

Fermentacin continua:
En este fermentacin se establece un sistema abierto. La solucin nutritiva estril se aade continuamente al biorreactor y una cantidad equivalente de solucin utilizada de los nutrientes, con los microorganismos, se saca simultneamente del sistema. Entre las distintas clases de fermentacin continua pueden ser distinguidos dos tipos bsicos: -BIORREACTOR MEZCLADO HOMOGNICAMENTE: este es utilizado como un quimiostato o como un turbidostato. -REACTOR DE FLUJO DE TAPN: en este tipo de fermentacin continua la solucin de cultivo fluye a travs de un reactor tubular sin mezclado. En un proceso continuo en condiciones de equilibrio la perdida de clulas debida al flujo que sale debe ser balanceada por el crecimiento del microorganismo. Los procesos industriales que utilizan fermentacin continua incluyen el tratamiento de las aguas residuales as como la produccin de la cerveza, glucosa-isomerasa y etanol. Otra clasificacin de los mtodos de fermentacin depende de la formacin del producto respecto del metabolismo energtico: -TIPO I: el producto deriva directamente del metabolismo primario utilizando la produccin de energa. El producto puede ser la propia biomasa . La reaccin puede ser expresada de la siguiente forma: Sustrato A---------- Producto Sustrato A------B--------C---------- Producto Los procesos para la produccin de protena de origen unicelular, el etanol y el cido glucnico pertenecen todos a esta categora. Las fermentaciones continuas en reactores sin un sistema en cascada, se incluyen tambin aqu. -TIPO II: el producto deriva tambin del sustrato utilizado para el metabolismo primario, pero la produccin tiene lugar en una va secundaria que esta separada del metabolismo primario. Sustrato A---------B---------C---------D---------Metabolismo primario E----------F----------Producto

-TIPO III: el metabolismo primario y la formacin de producto se producen en tiempos completamente separados. El producto no deriva del catabolismo sino de las vas anfiblicas. Esta clasificacin no puede ser aplicada a todos los procesos de fermentacin. Dependiendo de la produccin de metabolito, las composicin del medio de cultivo y la regulacin en la cepa utilizada hay muchas formas intermedias. La productividad de una fermentacin se define como: Concentracin de producto/l Productividad =------------------------------------Tiempo de fermentacin =Unidades/hl El coeficiente de fermentacin afecta directamente a la productividad. En fermentaciones continuas la productividad mxima es igual a la productividad total ya que el tiempo de establecimiento y la fase de latencia pueden ser despreciados. Monod defini el coeficiente de rendimiento Y como la relacin de clulas producidas a sustrato consumido. Hoy los coeficientes generales de rendimiento se utilizan para caracterizar los procesos de fermentacin. A fin de obtener rendimientos ptimos las fermentaciones deben ser llevadas a cabo a temperatura constante. El coeficiente de produccin de calor para el etanol, metanol e isopropanol es respectivamente 0,18 0,12 0,074 (g clulas/kcal).

SISTEMAS DE FERMENTADORES :
Pueden ser clasificados en cuatro grupos con respecto a la distribucin de gas : -Distribucin de gas por agitacin. -Bombas de distribucin de gas. -Distribucin de gas por medio de gas. -Fase gaseosa continua.

BIOTRANSFORMACIONES
La acidificacin del vino a vinagre fue practicada en Babilonia 500 aos a.C., pero fue solamente en 1894 cuando se percibi el papel de los microorganismos en la acetificacin. Durante la ltima parte del siglo diecinueve se inici un enfoque sistemtico a las transformaciones microbianas y a la vuelta del siglo se haban encontrado las siguientes reacciones: OXIDACIN Etanol a actico Glucosa a cido glucnico Polialcoholes a los correspondientes azucares HIDRLISIS Taninos a cido glico Di y tri sacridos a los monosacridos constituyentes. REDUCCIN cido mlico a cido succnico Fructosa a manitol

RESOLUCIN de mezclas racmicas de: cido tartrico cido lctico, mandlico y glicrico

Varias transformaciones fueron aadidas, incluyendo la oxidacin de isopropanol a acetona, de glicerol a dihidroxiacetona y de D-sorbitol a L-sorbosa. El proceso industrial actual para L-sorbosa est probablemente basado en el primer procedimiento descrito por Wells y sus colaboradores en 1937. Un medio que contiene glucosa, extracto de levadura y un ligero exceso de carbonato clcico que suplementa con 15-30% de D-sorbitol, se inocula con una suspensin de clulas activas de A. Suboxydans y se incuba a 30C. El extracto seco de levaduras puede ser reemplazado por lquido de maceracin del maz, siempre que se utilice octadecanol para controlar la formacin de espuma. Un fermentador con aireacin y agitacin vigorosas es crucial para la mxima eficacia. Rendimientos del 90-95% pueden obtenerse en uno o dos das a partir de concentraciones de D-sorbitol de 20-30%. La recuperacin de L-sorbosa es de aproximadamente un 65% en base al material inicial.

BIOQUMICA DEL CRECIMIENTO Y METABOLISMO

Metano y metanol:
Un nmero pequeo de microorganismos (bacterias y levaduras) que son denominados metilotrofos pueden utilizar los como nica fuente de carbono; la capacidad de utilizar metano ha sido encontrada hasta el momento en el solo un nmero relativamente pequeo de bacterias denominadas metanotrofas. Unos pocos microorganismos pueden utilizar formato como fuente de carbono. Estos tres compuestos estn metablicamente relacionados y pueden ser oxidados en ltimo lugar a CO2. El mecanismo de oxidacin del metano es secuencial: CH4-------CH3OH---------HCHO---------HCOOH---------CO2 La primera etapa se lleva a cabo mediante una oxigenasa con NADH (o NADPH) como cofactor. La enzima (un complejo de tres protenas) oxidar tambin una variedad de otros compuestos incluyendo varios alcanos e incluso metanol. La segunda reaccin en la secuencia es catalizada por el metanol deshidrogenasa, utilizando una pirroloquinolina quinona (PQQ) recin descubierta, como cofactor: CH3OH + PQQ----------------------------HCHO + PQQH2 En algunas bacterias la oxidacin posterior del formaldehdo a cido frmico es catalizada por la misma enzima; en otras puede haber formaldehdo deshidrogenasas separadas, con NAD como cofactor. La etapa final, la conversin de formato a CO2 es llevada a cabo por el formato deshidrogenasa y esta de nuevo ligada a la reduccin de NAD+. La asimilacin de carbn a partir de metano o metanol en materia celular se efecta a nivel de formaldehdo y por al menos dos rutas independientes: El ciclo de la ribulosa monofosfato y la va de la serina. El ciclo de la ribulosa monofosfato es similar al ciclo de Calvin utilizado por la fijacin autotrfica de CO2 en que utiliza las reacciones del ciclo de la pentosa fosfato para regenerar el aceptor para el compuesto C1que entra. Solamente se necesitan dos enzimas adicionales: 3 hexulosa-fosfato sintasa y 3-fosfo-hexulosa isomerasa. Las enzimas clave de la va de la serina son la malil-CoA liasa que produce acetiCoA y glicosalato y la serina transhidroximetilasa, una enzima omnipresente que utiliza tretahidrofolato.La desviacin del glicoxilato opera entonces sobre la aceti-CoA, de forma que la clula esta realmente creciendo sobre un sustrato C2. La isocitrato liasa est dereprimida para asegurar la produccin de unidades C3.

10

ALCOHOL INDUSTRIAL
La fermentacin del contenido real o potencial de azcares de la biomasa es una va principal, bien para la produccin del alcoholes u otros compuestos voltiles que reemplacen a los combustibles convencionales de los automviles, o en una fecha ms lejana para substituir el abastecimiento de gasolina para la manufactura de las olefinas y los compuestos derivados. El etanol se ha convertido en sinnimo de energa. Las consideraciones microbiolgicas no son el nico criterio y las industrias de fermentacin tradicional que estaban siendo sustituidas por reducidas en magnitud por la aparicin de los productos petroqumicos sintticos, no sern necesariamente revitalizadas simplemente por una vuelta a los viejos mtodos de transformacin ya establecidos. el moderno destilador se enfrenta con tres problemas principales: 1-El consumo de energa 2-La eficiencia en la conversin 3-La polucin de los efluyentes Todos ellos estn interrelacionados, comenzando por la naturaleza de la materia prima utilizada y terminando por un ambiente benigno. Sin embargo, dentro de todas las actividades implicadas, el proceso de fermentacin en s es todava la etapa crucial que establece los parmetros y requerimientos operativos para el conjunto de la destilera.

Productos agrcolas para la fermentacin

Las cosechas para energa ms fcilmente utilizables pueden ser agrupadas en cinco categoras bsicas: 1-subproductos del procesamiento de las cosechas de azcar 2-cosechas de azcar 3-cereales 4-tubrculos 5-otras fuentes diversas Menos fcilmente utilizables son los materiales celulosicos que pueden ser clasificados: 1-productos forestales directos 2-residuos celulsicos De todas las posibles fuentes indicadas, los problemas de su disponibilidad real, la estructura de precios y el desarrollo tecnolgico de procesamiento reducen la seleccin en trminos de viabilidad econmica a un nmero muy pequeo. Aunque algunas cosechas como la de caa de azcar, estn siendo actualmente convertidas en etanol. La influencia del comercio del alcohol para consumo ha impuesto su tradicin sobre la manufactura del alcohol industrial incluso aunque las caractersticas del sabor del destilado no estn ya sometidas a consideracin. Demasiado frecuentemente proyectos de alcohol industrial

11

basados en amenazas o el maz parecerse simples extensiones de la fabricacin del ron o del whisky que esto es comprensible. Ya que las industrias para consumo han desarrollado su tecnologa durante un gran nmero de aos hasta conseguir sistemas prcticos, provechosos y seguros. Sin embargo, sirven a un mercado de lujo, de alto precio y operan a una escala menor de produccin que la esperada para los proyectos de futuro orientados a la obtencin de energa a partir del alcohol. La mayor parte de sus tcnicas estaban establecidas cuando los costes de la energa y de la materia prima eran bajos y cuando disminuirla polucin no era considerado una necesidad social. Para sacar ventaja de las tcnicas de fermentacin que ofrecen una conversin eficiente con recuperacin de productos de baja energa y en las que pueden ser empleado un sistema eficiente en el tratamiento de los afluentes de destileras, el sustrato lquido debera poseer las siguientes condiciones: 1- La concentracin de azcares fermentables debera estar correctamente ajustada poseer adecuada a un mtodo particular de fermentacin y para asegurar que los azcares residuales despus de la fermentacin sean mantenidos a un nivel mnimo. 2-El substrato debera clarificarse, aun pH y a una temperatura ptimos y debera contener los nutrientes adecuados para levadura. 3-Los microorganismos diferentes de los del inocul principal deberan ser eliminados por pasteurizacin, tratamiento con antibiticos o antispticos, o esterilizacin., el grado y mtodo de eliminacin dependera del sistema de fermentacin empleado. 4-Las sustancias txicas para las levaduras deberan eliminarse o ser reducidas hasta un nivel aceptable. 5-Los efectos adversos de la presin osmtica deberan mantenerse dentro de lmites aceptables.

Substratos especficos JUGOS AZUCARADOS

Los jugos azucarado, sean de azcar de caa, de remolacha o de tallos de sorgo 12 son productos agrcolas interesantes ya que proporcionan inmediatamente un suministro de substratos fcilmente fermentables, aunque esto tambin puede tener sus inconvenientes. Convencionalmente, una destilera de jugos de azcar solamente opera durante la estacin de la cosecha con la consiguiente utilizacin ineficiente de la planta y de la mano de obra. Adems, en la preparacin del jugo de azcar como sustrato para la produccin de alcohol, la tecnologa de los mtodos convencionales de fabricacin normalmente ha predominado, sean o no apropiados. Una destilera convencional de caa de azcar que produce 60-70 l de etanol por tonelada de caa es necesariamente una instalacin sencillo, basada mtodos tradicionales, que utiliza grandes cargas de vapor para la recuperacin del etanol, gran nmero de vasijas fermentadoras y que libera a un gran volumen de efluente contaminante. La energa obtenible del bagazo hmedo hace econmicas instalaciones tan trmicamente ineficientes y por consiguiente para impedir la acumulacin de bagazo, resulta en ltimo trmino esencial operar los generadores de vapor ineficientemente. para la Carmen del alcohol, el proceso de adicin de cal es una etapa negativa, ya que:

12

1-Las condiciones de pH ptimo para la fermentacin son de 4,5 a 5,0, ms cercanas a las del pH del jugo original. 2-La sala custicas ocasionarn una severa incrustacin en los cambiadores de calor y en el equipo de destilacin. 3-La diccin de cal elimina los compuestos de nitrgeno y los fosfatos del jug, que son nutrientes para la levadura. 4-La inversin de la sacarosa es beneficiosa. En consecuencia, para la produccin de alcohol, en Brasil se ha convertido en prctica estndar mantener el sistema normal de limpieza mediante filtros y sedimentacin, pero utilizando jugo crudo fro y sin cal. El jugo limpiado es todava relativamente turbio, conteniendo coloides y pequeas partculas fibrosas s que retienen frecuentemente a las bacterias y tienden a causar obstrucciones en las boquillas de las centrfugas de las levaduras cuando stas son utilizadas.

MELAZAS A
La manufactura de azcar se produce en tres etapas en las que los azcares A, B y C se cristalizan y recuperan dejando unas mezclas finales C. Muchos tecnlogos de azcar han propuesto el concepto de produccin doble, de azcar A y de etanol, para combatir la volatilidad de los precios del azcar, ya que el precio del etanol es relativamente estable en el mercado y puede solamente mejorar. Las melazas A son un substrato ideal para la fermentacin. Tiene una alta pureza en sacarosa y con aproximadamente 85% de contenido en slidos deberan poder producir 385 l de etanol por tonelada. Su estabilidad durante el almacenamiento reduce las prdidas anuales del coste de las destileras.

MELAZAS C
Pese a la produccin real de melazas que se destinan a la produccin de azcar cristalino, haciendo de esta forma su suministro limitado, este substrato es extensamente utilizado tanto para obtener alcohol industrial como de consumo. Si las amenazas C se utilizan para la produccin de alcohol, la relacin global azcar: alcohol es aproximadamente 12:1. Los residuos no fermentables se concentran en la melaza es y causan problemas en las operaciones de la destilera. En particular el calcio suspendido y las sales inorgnicas, los coloides, fibras, gomas, cidos orgnicos y los residuos de tierra. Por consiguiente al diluir para conseguir un substrato adecuado para la fermentacin, los slidos en suspensin deberan ser eliminados hasta un nivel razonable y el crecimiento de las bacterias debera reducirse.

CEREALES
En base a peso seco el maz, el trigo, el sorgo y otros granos contienen alrededor de 60-75% w/w de almidn hidrolizable a hexosas con un significativo aumento de peso y constituyen una fuente de alto rendimiento en etanol.

13

La mayor parte de almidn de cereales contienen una mezcla de alfa-amilasa (2030%) y amilopeptina (70-80%). La primera es un polmero lineal soluble en agua, mientras que la segunda es un polmero ramificado insoluble en agua. La sacarificacin de la amilosa es mucho ms rpida que la de la amilopeptina, pero puesto que la amilopeptina predominan, la conversin global de azcares fermentables est gobernada por su degradacin. A medida que la fermentacin aminora, cuando la concentracin de etanol aumenta, la reaccin de la glucoamilasa puede hacerse limitante del conjunto. Cuando la sacarificacin no es completa antes de la fermentar, el tiempo de residencia durante la fermentacin se extender hasta alcanzar concentraciones finales razonables de etanol. Algunas de las nuevas tcnicas de fermentacin muestran posibilidades interesantes. Cuando el etanol se puede separar a medida que se forma, la rpida velocidad de fermentacin puede ser mantenida continuamente, con una mejora correspondiente en la cintica de la sacarizacin enzimtica. Cuando se elimina el etanol y el reciclaje de los substratos consumido puede ser llevado a cabo sin destruccin trmica de la glucoamilasa, puede llegar a producirse una alta concentracin de enzima para la misma dosis total enzimtica.

RETENCIN DE LA PASTA
En el procesamiento convencional de los cereales, los granos triturados fermentadas se mantienen suspensin y se bombea directamente a la columna primaria de destilacin en la que, en la seccin de aligeramiento, se lavan efectivamente los slidos suspendidos y se eliminan las trazas finales de etanol. El grano molido utilizado se recupera como alimento para animales mediante cribado y separacin por decantacin. El sistema es sencillo y barato y es el mtodo tradicional , sin embargo la retencin de la papilla tiene desventajas: 1-La presencia de fibras y otros slidos suspendidos entorpece la fermentacin. 2-Los mtodos de fermentacin quedan restringidos a operaciones tradicionales discontinuas en las que se necesita una inoculacin nica de levaduras. En comparacin con las condiciones de fermentacin de substratos clarificados, en los que es posible recuperar y reciclar a la levadura, la fermentacin es de papillas de cereales son menos eficientes en la produccin de etanol y requieren tiempos ms largos de residencia en vasijas de mayor tamao.

TUBERCULOS
Las cosechas de races de las zonas templadas tienen poca o ninguna aplicacin en la produccin de alcohol industrial a causa de su mayor valor en los usos, bien establecidos, como alimento. Sin embargo, ste no es el caso con la cosecha de races de la casava que es ampliamente cultivada en la mayor parte de los pases tropicales. Puesto que es fcil de crecer, resistente a pestes y sequas, y puede aclimatarse a suelos pobres en nutrientes fertilizantes, proporciona un alimento bsico pero con un contenido en protena muy bajo. Los intentos de aumentar su valor nutritivo han tenido poco xito. Sin embargo, comparada con la caa de azcar, la mandioca tiene un potencial de producir hasta 2 1/2 veces la cantidad de alcohol por tonelada de cosecha recogida y es

14

mucho ms barata de crecer. De nuevo esto debe ser equilibrado frente a dos factores principales adversos. La produccin de las cosechas tradicionales por rea cosechada es baja y se necesitan fuentes de energa exgena para su procesamiento.

SUBSTRATOS CELULSICOS
La hidrlisis cida de la celulosa a azcares fermentables es tcnicamente posible y fue utilizada ampliamente en economas controladas por el estado en tiempos de guerra, pero la utilizacin de la tecnologa primitiva con carcter prctico en una economa libre es dudosa. Sin embargo, se realiza mucha investigacin y parece probable el desarrollo con xito de uno o ms procesos que convienen un pretratamiento econmico con la hidrlisis rpida y la recuperacin eficiente de los azcares utilizables. El desarrollo con xito de formas puramente enzimticas para la hidrlisis de la celulosa parece ms problemtico, pero existe un considerable inters, unido a una posibilidad de la conversin directa de la celulosa adecuadamente pretratada a etanol u otros compuestos voltiles de fermentacin, utilizando cultivos mixtos seleccionados de bacterias celulolticas y fermentadas, tales como especies de Clostridium algunas de las cuales para mayor utilidad son termfilas. Sin embargo, ninguno de estos progresos ha producido todava impacto en la produccin prctica de etanol.

MECANISMO DE CONVERSIN DE LA FERMENTACIN

El mecanismo de la fermentacin fue cuantificado por primera vez por Gay-Lussac, basndose en la estequiometra de la conversin de una hexosa en etanol y anhdrido carbnico: C6H12O6---------2C2H5OH + 2CO2 Rendimiento en la fermentacin alcohlica ideal de Pasteur: Peso % ________________________________________________________________ Etanol Anhdrido carbnico Glicerol cido succnico Materia celular Total 48,4 46,6 3,3 0,6 1,2 100,1

Por consiguiente, 100 kg de azcar-hexosa = 51,1 kg de etanol + 48,9 kg de anhdrido carbnico. Una apariencia ms grande de productos comparada con el azcar original se debe al oxgeno y a los nutrientes procedentes de una fuente externa que es necesaria para el

15

crecimiento celular. El coeficiente de Pasteur de aproximadamente 94,7% del rendimiento terico GL (de Gay-Lussac) se considera la mxima posible reduccin de etanol que puede ser alcanzada por fermentacin. El coeficiente de Pasteur puede ser sobrepasado por la reutilizacin de las levaduras, o cuando el crecimiento pueda ser llevado a cabo a partir de carbohidratos no naturalmente fermentables hasta etanol. En la prctica comercial, en la que no se utiliza un substrato ideal, las deficiencias de conversin mantenidas durante un perodo razonable de tiempo se encuentra normalmente en la regin del 90% GL. La concentracin tpica de productos por 100g de glucosa fermentadas a etanol mediante levaduras se presenta: Producto Variacin en la concentracin (g por 100g de glucosa fermentada) ____________________________________________________________ Etanol 45-49 Anhdrido carbnico 43-47 Glicerol 2-5 Succinato 0,5-1,5 Alcoholes superiores 0,2-0,6 Butilenglicol 0,2-0,6 Materia celular 0,7-1,7 ____________________________________________________________ Las propiedades especficas de las levaduras, como la tolerancia a altas concentraciones de alcohol y CO2, el crecimiento rpido y la capacidad de fermentacin reducen el nmero de microorganismos adecuados viables para la operacin a escala industrial a un nmero pequeo, de los cuales hasta el momento los ms importantes son cepas selectas de Saccharomyces cerevisiae y Saccharomycees carlsbergensis. Resumiendo: para la produccin de etanol a gran escala y cuando las caractersticas del sabor no son un criterio en el mtodo de fermentacin, generalmente se acepta que una destilera debera ser totalmente continua en todas sus unidades de operaciones lo cual independientemente de la fermentacin, puede ser conseguido fcilmente. Las ventajas de la fermentacin continua son: 1-Los fermentadores son de tamao (o en nmero) reducido no siendo requeridos los de capacidades intermedias. 2-La destilera de ser operada en condiciones de equilibrio y controlada dentro de lmites ms finos en puntos establecidos, con mayor facilidad de operacin. 3-Sin fluctuaciones durante las operaciones, los requerimientos de servicios son constantes, dando una mayor economa de utilizacin. Sin saltos de demanda, los costes del equipo relacionado pueden reducirse. 4-Alta productividad comparada con la de la fermentacin discontinua. 5-Reduccin en mano de obra.

16

Contra esto, las operaciones discontinuas tienen las siguientes ventajas: 1-Concentracin ms alta del producto final. 2-En muchos pases, las condiciones intensivas de mano de obra pueden ser de la mayor importancia. 3-Menos dependencia del control automtico y menos demanda de competencia tcnica. 4-Abaratamiento del conjunto y sencillez en la construccin y en el mantenimiento de la planta. La fermentacin continua requiere un alto grado de asepsia para impedir la entrada y el desarrollo de contaminantes. Los sistemas discontinuos tienen flexibilidad para la limpieza rigurosa durante la vuelta completa del ciclo. El elemento ms costoso en la produccin del alcohol es el coste de la materia prima, unos 2/3 a 3/4 del total.

TEMPERATURA DE LA OPERACIN DE FERMENTACIN

Existe una temperatura ptima para el crecimiento de la levadura. El panorama es ms complicado si se mide la velocidad de produccin de etanol ya que la temperatura ptima para la produccin de etanol es 2-4 C ms alta que la de crecimiento. La temperatura afecta la sensibilidad, tanto de crecimiento como de la produccin de etanol, a la inhibicin por el etanol. La temperatura ideal para una fermentacin discontinua vara a lo largo del perodo de fermentacin, mientras que para una fermentacin continua depender del balance entre crecimiento y produccin de etanol en el estado de equilibrio. Con la mayor parte de las cepas comerciales de levadura se mantienen temperaturas entre 32 y 38 C, pero cuando existe peligro de contaminacin bacteriana, como los pases tropicales, se recomiendan temperaturas ms bajas. Bajo estas condiciones la operacin a pH 4,5-5,0 tambin ayuda a restringir el crecimiento bacteriano. El control adecuado de la temperatura debe tener en cuenta la evolucin relativamente pequea del calor asociado con el proceso anaerbico, y tambin, la evolucin mucho mayor del calor asociado con la propagacin aerbica de la levadura.

EFECTOS INHIBIDORES DEL ETANOL

Los efectos inhibitorios ms importante sobre la fermentacin de los azcares por las levaduras son debidos al propio etanol. La conversin de la glucosa en etanol y CO2 tambin produce ATP en la proporcin de 2 moles de ATP por mol de glucosa transformada. A bajos niveles de etanol, este ATP se utiliza para la asimilacin de ms azcar por nuevas clulas y la velocidad de crecimiento es ahora la ms alta fraccin posible de la velocidad de utilizacin del substrato. A niveles mayores de etanol es decir, a medida que procede la fermentacin, suceden dos cosas. Primero, la velocidad de utilizacin del substrato disminuye. Segundo, la extensin a la que el catabolismo del azcar proporciona energa para el crecimiento de las levaduras tambin resulta, sin embargo, reducido. Al elevarse los niveles de etanol, los efectos sobre el crecimiento de la levadura son incluso ms marcados que los efectos sobre la velocidad de produccin de etanol.

17

Si el nivel inicial de azcar es suficientemente alto, el nivel de alcohol se hace finalmente tan alto que las clulas dejan de crecer en absoluto; de hecho comienzan a morir y su viabilidad depende del tiempo y severidad de su exposicin a niveles ms altos de etanol. Sin embargo, la produccin de etanol por las clulas que no crecen contina, y de hecho no se para del todo hasta que se alcanza un nivel considerablemente ms alto. Una consecuencia importante es que cualquier fermentacin continua de etapa nica, que depende de que exista algn crecimiento para sostener su operacin y puede ser llevada a cabo solamente a niveles de etanol menores que el lmite de tolerancia del crecimiento, mientras que una fermentacin discontinua correspondiente puede dar mayores niveles de etanol.

SEPARACIN DE LAS LEVADURAS

Las tcnicas ms rpidas de fermentacin estn basadas en el principio de MelleBoint en el que las clulas de la levadura al final de la fermentacin son cosechadas y recicladas a un substrato fresco. Si todas las levaduras fueron recuperadas y retuvieran su nivel original de actividad, pueden ser mantenidos altos niveles de levadura, dando velocidades de conversin rpidas y ningn azcar se utiliza para el crecimiento de las levaduras, lo que origina un aumento de eficacia de conversin. La recuperacin de las levaduras es igualmente esencial para la conversin rpida en los procesos de fermentacin continua. En la prctica, la recuperacin nunca es total, una proporcin de la levadura muere por causas naturales y parte de la levadura separada debe siempre ser eliminada para impedir la acumulacin de materia en suspensin. La mayor parte de las levaduras utilizadas industrialmente tienen un rango de tamao de entre 5 y 20 micrasm y su densidad no es mucho mayor que la del agua. Tales clulas no sedimentan a partir de la suspensin a ninguna velocidad adecuada. Solamente por flocuacin, cuando las clulas forman flculos con un tamao de partcula combinado adecuado para una velocidad de sedimentacin razonable puede ser recogida la levadura de residuo del fermentador por mtodos naturales. La habilidad para flocular naturalmente esta determinada genticamente. Una desventaja es que las levaduras floculantes tienden a separarse antes de que la fermentacin se haya completado; algunas levaduras con bajas propiedades de floculacin pueden ser separadas solamente por centrfugacin mecnica.

RECUPERACIN DEL ETANOL

Conseguir una concentracin alta de etanol al final de la fermentacin es un requerimiento esencial para mantener bajos los costes. A medida que aumenta la concentracin de etanol, se requiere menos vapor para la destilacin primaria y el volumen del destilado que sale es menor.

CLULAS INMOVILIZADAS
Se han llevado a cabo una investigacin y desarrollo considerables sobre el uso de clulas inmovilizadas mantenidas en portadores adecuados por las que se pasa el substrato a otras zonas de conversin altamente reactivas.

18

ELIMINACIN CONTINUA DEL ETANOL

Si el etanol pudiera ser eliminado continuamente del fermentador a medida que se forma, la fermentacin podra proceder a concentraciones bajas de etanol, es decir, sin inhibicin significativa. No solamente dara esto velocidades ms rpidas de conversin sino que puede esperarse una calidad ms alta del etanol ya que la mayora de las impurezas voltiles, como mezclas de alcoholes superiores, steres, se producen en las condiciones finales de fermentacin. Las reducciones globales en energa y coste de equipo debera mejorar la economa del proceso manteniendo el fermentador como una vasija a presin atmosfrica con salida normal del anhdrido carbnico y aplicando presin reducida a una estela circulante del lquido. Incluso con estas mejoras la levadura est en contacto con el lquido que est sufriendo la evaporacin a presin reducida por lo que la temperatura no debera exceder los 47 C. El sistema requiere un alto grado de asepsia ya que la evaporacin se lleva a cabo a temperaturas ptimas para la multiplicacin de las bacterias mesofilas. En la tcnica de Biostil, se separan previamente las levaduras de la estela circulante de la que se elimina el etanol. La evaporacin del etanol ya no est restringida por la necesidad de mantener la viabilidad de las levaduras y por tanto la evaporacin se acompaa de pasteurizacin.

METODOS DE DESTILACIN
A considerar la relacin neta de energa para la fabricacin del etanol, el coste del procesamiento es el componente ms caro, comparado con el coste agrcola y el transporte. Una alta proporcin de esta energa de procesamiento se necesita para la recuperacin del etanol por destilacin.

PROCESAMIENTO DE LOS EFLUENTES

Un proceso ideal de fermentacin de una hexosa dar lugar a una carga de polucin PE en el efluente de las aguas residuales de 1,5 por litro de etanol producido. Con substratos impuros, como las malezas, esta carga de polucin puede subir hasta un PE de 15. Por consiguiente, una destilera de melazas de tamao razonable produce 60.000 l de etanol por da, puede aportar una carga de polucin igual al de una ciudad de hasta un milln de habitantes. En el tratamiento de los efluentes de las destileras existen: solamente tres sistemas prcticos que puedan ser considerados: 1-La aplicacin directa al suelo 2-La digestin anaerbica para la generacin da gas rico en metano 3-La evaporacin hasta un jarabe para uso como pienso animal o como combustible.

19

La cantidad y calidad de este residuo de destilacin, altamente polucinante depende de la materia prima que est siendo procesad, de la tcnica de fermentacin y del mtodo particular de destilacin.

USO DIRECTO EN LA TIERRA

Solamente cuando la cantidad y la calidad de los componentes en el residuo de destilera es beneficioso para un suelo especfico puede ser ventajosa la aplicacin sobre el suelo. Para la mezcla de residuo destilera en el suelo, su pH, su temperatura y la profundidad de penetracin son tambin factores importantes.

DIGESTIN ANAERBIA
Este sistema se ha vuelto cada vez ms popular ya que alrededor del 95% de la carga con demanda biolgica de oxgeno puede ser convertida en combustibles gaseosos y en fangos. Sin embargo, el metano en el caso solamente representa aproximadamente el 60% de la materia orgnica original en trminos del valor calorfico disponible. La principal desventaja es que el BOD en los efluentes tratados puede no estar suficientemente degradado en trminos legislativos y es frecuentemente necesaria una terminacin aerbica final.

EVAPORACIN
La produccin de jarabes para la alimentacin animal a partir de residuos de destilera ha sido el mtodo de tratamiento ms comn en los pases industrializados, particularmente cuando los cereales constituyen la materia prima para la fermentacin. El residuo de la destilacin de melazas est en una categora diferente. Las sales disueltas al ser concentradas a un alto nivel tienen efecto laxante sobre los animales y un jarabe de residuos de destilera debe ser dosificado en pequea proporcin con otras raciones. La evaporacin es cara.

COMBUSTIN DEL JARABE DE RESIDUOS DE DESTILACIN

Las modernas calderas de combo de jarabe de residuos de destilera deben ser capaces de tener una alta eficiencia trmica sin excesiva obstruccin por las cenizas inorgnicas. Utilizando las nuevas tcnicas de fermentacin ser posible producir residuos de destilera con alto contenido en slidos disueltos por lo que la evaporacin hasta una concentracin adecuada para la combustin puede ser llevada a cabo por depuracin de los gases calientes de desecho de la combustin de los residuos que se eliminan por las chimeneas. En este caso, se consigue una economa en equipo y en eficiencia trmica. Dependiendo del substrato utilizado, una destilera debera ser capaz de operar sin fuente exterior de combustibles y a la vez destruyendo sus propios residuos polucinantes. 20

BIBLIOGRAFA
-BIOTECNOLOGA BSICA. J.BULOCK B.KRISTIANSEN -MANUAL DE MICROBIOLOGA INDUSTRIAL WULF CRUEGER ANNELIESE CRUEGER

21