UNIVERSIDAD NACIONAL DE ASUNCIN FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS Y NATURALES DEPARTAMENTO DE BIOLOGA

* Cariotipo Animal **Noelia Carolina Filizzola Ruiz

San Lorenzo-Ciudad Universitaria-Paraguay Ao 2013

*Prctica No 5, presentada en la ctedra de Gentica General **Alumna de la carrera de Biologa. Profesora de la Ctedra: Lic. Virginia Fernndez Peralta Encargada de Laboratorio: Lic. Mnica Bentez.

INTRODUCCIN
La determinacin de cariotipos fue una de las primeras tcnicas de diagnstico. Un cariotipo ordinario consiste en una preparacin de los cromosomas durante la metafase, clasificados por longitud, forma la ubicacin de los centrmeros y otros rasgos distintivos. Las anormalidades macroscpicas de su estructura o una alteracin de su nmero pueden detectarse comparando el cariotipo del individuo con un cariotipo estndar de la especie (Starr, S. y Taggart, R. 2008). Un cariotipo es el despliegue de cromosomas condensados dispuestos en pares. El cariotipo se puede emplear para investigar nmeros anormales de cromosomas o cromosomas defectuosos asociados con ciertos trastornos congnitos (Campbell, N. et al 2007). El cariotipo se obtiene de cualquier tejido cuyas clulas sean susceptibles de divisin (sangre perifrica, piel, mdula sea, lquido amnitico, etc.) cultivndolas y detenindolas en mitosis en la etapa de metafase. Tambin se pueden obtener directamente sin cultivar, en clulas con una alto ndice mittico como sucede en algunos procesos hematolgicos. Tras el cultivo celular se procede a tratarlas con colchicina para inhibir la formacin del huso mittico y detener las clulas en metafase. El siguiente paso consiste en tratar las clulas con una solucin hipotnica para romper las membranas y permitir que los cromosomas se extiendan. A continuacin se procede a la fijacin cromosmica con fijador Carnoy (Metanol-Actico 3:1). Finalmente las clulas se extienden sobre un portaobjetos en unas condiciones que favorecen que los ncleos se lisen y sus cromosomas se peguen extendidos sobre la superficie. Para visualizar los cromosomas se procede a su tincin, siendo Giemsa uno de los colorantes ms utilizados. En estas condiciones las metafases ya estn listas para proceder a su fotografa o captura digital para proceder a la obtencin del cariotipo. El esquema de las bandas (patrn de bandas) a lo largo del cromosoma constituye el ideograma del cariotipo (Oliva, R. et al.2004). Con ciertas tcnicas de tincin es posible detectar a lo largo de cada cromosoma bandas alternantes de mayor y menor tincin (o fluorescencia) que forman un patrn estable y caracterstico de cada cromosoma. ste patrn de bandas es de gran utilidad prctica porque permite la identificacin precisa de cada cromosoma y adems posibilita la caracterizacin de regiones particulares dentro de cada brazo cromosmico. El patrn de bandas forma la base para la confeccin del diagrama estandarizado del conjunto de cromosomas humanos (cariotipo) (Solari, A. 2007).

OBJETIVOS
- Observar el cariotipo de Mus musculus.

MATERIALES
Material biolgico: Ratones en edad adulta. 2 tubos cnicos de centrfuga de 15 ml por cada ratn. Equipo de diseccin: cama de diseccin, papel aluminio, bistur (nuevo), tijera, guantes, tapabocas. Pipetas Pasteur 2 pipetas graduadas de 5 ml. 2 hojas de bistur o navajas de afeitar nuevas 2 vasos de precipitado de 100 ml. Mechero Portaobjetos Papel tissue.

REACTIVOS
- KCl 0.075 M incubado a 37C. - Fijador: Carnoy (Metanol-cido Actico 3:1) - Colorante: Giemsa al 4% - Aceite de inmersin.

METODOLOGA
- Se coloc lminas bien limpias y sin rastros de grasa o impurezas en agua destilada y se llev a la heladera para enfriar. - Se inyect intraperitonealmente a un ratn colchicina al 0,0030%. Se utilizan 0.24 ml por el peso del animal que era de 24 g (son 0,5 ml por cada 100 g). - Se sacrific al ratn una hora despus por traccin cervical. - Se retir los fmures y posteriormente se limpiaron. - Se cort la epfisis. Luego con solucin hipotnica de KCl 0.075 M a 37C. Se extrajo cuidadosamente la mdula sea de cada fmur, que fue depositada en un tubo de centrfuga. - Se realiz la resuspensin - Luego se Incub por 10 minutos a 37C (en bao mara). - Despus se centrifug a 1000 rpm durante 10 minutos - Se extrajo cuidadosamente el sobrenadante sin alterar el pellet (sedimento). - Luego de extraer el sobrenadante, se agreg fijador y se realiz nuevamente una resuspensin. - Se centrifug a 1000 rpm por segunda vez durante 10 minutos - Se extrajo cuidadosamente el sobrenadante sin alterar el pellet. - Se agreg fijador y Se realiz nuevamente una resuspensin. - Se volvi a centrifugar a 1000 rpm por ltima vez durante 10 minutos - Se extrajo cuidadosamente el sobrenadante sin alterar el pellet. - Nuevamente se agreg fijador y se realiz una resuspensin. - Se procedi al sembrado a una distancia vertical de 15 cm en lminas fras y hmedas inclinadas. - Se pas por la llama de un mechero. - Se colore con Giemsa 4% durante aproximadamente 3 minutos.

DESCRIPCIN Y NALISIS DE LOS RESULTADOS

Fig. 1: Cariotipo de Mus musculus Se observ a travs del microscopio con aumento de 1000X el cariotipo de un ratn macho (Mus musculus) no muy adulto; ste present 40 cromosomas; es decir, 20 pares de cromosomas homlogos. Para observar los cromosomas, se trat al ratn con colchicina 0,0030%, que detiene el ciclo en C-Metafase; la coloracin se realiz con Giemsa. El ratn comn (Mus musculus) tiene un cariotipo estndar de 20 cromosomas, cada uno con un patrn de bandas especfico. Todos los cromosomas excepto el X son acrocntricos, con el centrmero bien al final (Passarge, E. 2010).

CUESTIONARIO
- Cuntos cromosomas posee la especie observada? La especie observada, Mus musculus posee 40 cromosomas, 20 pares homlogos. - Cules son los tipos de cromosomas observados (segn la posicin del centrmero)? Segn Passarge (2010), en la especie observada (Mus musculus), todos los cromosomas excepto el X son acrocntricos. - Cul es la utilidad de las tcnicas de bandeo cromosmico? ste patrn de bandas es de gran utilidad prctica porque permite la identificacin precisa de cada cromosoma, adems posibilita la caracterizacin de regiones particulares dentro de cada brazo cromosmico. El patrn de bandas forma la base para la confeccin del diagrama estandarizado del conjunto de cromosomas humanos (cariotipo) (Solari, A. 2007). Permiten identificar a cada cromosoma, localizar los puntos de rotura en las cromosomopatas estructurales, la obtencin de mapas citogenticos y la localizacin de los loci gnicos de diferentes enfermedades mendelianas (Oliva, R. et al.2004).

CONCLUSIN
Finalizada la prctica realizada se logr la observacin del cariotipo del ratn comn Mus musculus, ste present 40 cromosomas (que es el nmero de cromosomas estndar de sta especie) bien distinguibles, mediante sta prctica se adquiri conocimiento sobre la tcnica utilizada para observar cariotipo animal; y con los textos bibliogrficos, se aument el conocimiento sobre los conceptos de cariotipo, bandas cromosmicas e ideograma; y, la importancia de este procedimiento, para el estudio de anormalidades.

BIBLIOGRAFA
Campbell, N. et al 2007. Biologa Mdica Panamericana. 7 Ed. Argentina. Pgs.: 240. Oliva, R. et al. 2004. Gentica Mdica. 3a Ed. Editorial de la Universidad de Barcelona. Espaa. Pg.: 120 y 122. Passarge, E. 2010. Gentica Texto y Atlas. 3a Ed. Editorial Mdica Panamericana. Alemania. Pg.: 192. Solari, A. 2007. Gentica Humana: Fundamentos y Aplicaciones en Medicina. 3a Ed. Editorial Mdica Panamericana. Buenos Aires. Pg.:376. Starr, S. y Taggart, R. 2008. Biologa La unidad y diversidad de la vida. 11 Ed. Editorial Progreso. Mxico. Pg.: 188.

ANEXO

Cariotipo de Mus musculus.