UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA

LABORATORIO DE BIOQUIMICA CELULAR Y TEJIDOS I

ALUMN@S: CASTRO CORTES LINDA PENELOPE HERNANDEZ GONZALEZ EVELYN JAQUELIN LOPEZ CASTAEDA DANIEL RODRIGUEZ NAVA DIANA BERENICE

GRUPO: 1402

EQUIPO: 1

Extraccin y purificacin de DNA de germen de trigo

OBJETIVOS
Analizara el fundamento de la obtencin desoxirribonuclico. Obtendr ADN a partir de germen de trigo. Purificar ADN a partir de germen de trigo. Evaluar el grado de pureza del ADN obtenido. y purificacin del cido

RESULTADOS La muestra de ADN del germen de trigo se le realizo las siguientes pruebas: a) PRUEBA DE DIFENILAMIDA Presentaron los siguientes resultados TUBO COLOR blanco Muestra problema incoloro Azul celeste

b) Prueba de pureza

La muestra se coloco en un espectrofotmetro UV, el cual nos proporciono los siguientes datos: 30.8 microgramos / mililitros Cocientes 260/280 1.77 260/230 1.53 Las absorciones fueron las siguientes 0.402 A en 230 nm 0.616 A en 260 nm 0.348 A en 280 nm
c) Efecto hipercromico

La muestra despus de ser desnaturalizada presento la siguiente absorvancia: 1.077 A en 260 nm

DISCUSIN Y ANLISIS DE RESULTADOS La doble hlice del ADN es desnaturalizada al ser calentada desdoblndose en sus dos hebras y en presencia del TCA se produce la hidrlisis acida que genera dos desoxipentosas, las cuales se convierten en -hidroxilevulinoaldehido altamente reactivo, estas reaccionan con la difenilamina formando un complejo de color azul. Nuestra muestra de ADN se trato con los dos reactivos descritos pero al ser mezclados formaron una solucin de color blanco, lo cual pudo ser debido a que los reactivos fueron mal preparados, pero al ponerlos en un bao Mara la mezcla se volvi incolora y despus de 15 minutos el tubo de ensayo que contena nuestra muestra adquiri un ligero color azul en comparacin con su blancocon esto se comprueba que logramos obtener ADN. Posteriormente se empleo el espectrofotmetro UV para la cuantificacin del ADN ya que una disolucin de este puede cuantificarse directamente en soluciones acuosas, en forma diluida o sin diluir, midiendo la absorbancia A de luz ultravioleta. Si la muestra es pura, es decir, no contiene cantidades significativas de contaminantes como protenas, fenol o agarosa, la medicin espectrofotomtrica de la irradiacin ultravioleta absorbida por las bases es sencillo y exacto. La concentracin de cidos nucleicos suele determinarse midiendo a 260 nm y comparando con un blanco. La interferencia de contaminantes puede determinarse calculando un cociente. Dado que las protenas absorben a 280 nm, se emplea el cociente A260/A280 para calcular la pureza de los cidos nucleicos. Los cocientes respectivos del ADN y el ARN puros son aproximadamente de 1,8 y 2,0. Una absorcin a 230 nm significa que la muestra est contaminada con hidratos de carbono, pptidos, fenoles, compuestos aromticos u otras sustancias. El cociente A260/A230 de las muestras puras es de 2,2 aproximadamente(1).

El efecto hipercrmico es el incremento de absorbancia en un material. Las bases nitrogenadas tienen una absorbancia mxima a 260 nm. Si las bases estn libres la absorbancia es mxima; pero, si se juntan en una hebra de ADN, las molculas de ribosa y fosfato se interponen al paso de la luz y las bases absorben menos, disminuyendo la medida de absorbancia, pero si adems tales hebras se enrollan entre ella la absorbancia es mucho menor. Al medir la absorbancia de ADN que tenamos en nuestra muestra se observo que su absorbancia era menor que la absorbancia de la muestra despus de ser desnaturalizada con esto se pudo observar el efecto hipercromico en la muestra ya que la doble hlice se desdobla, esta tcnica generalmente se utiliza para seguir la desnaturalizacin de la molecula de ADN.

CONCLUSIONES Se pudo obtener el acido desoxiribonucleico a partir de germen de trigo el cual se trato para poder liberar el ADN, este se pudo purificar y se obserbo el efecto hipercromico BIBLIOGRAFA
Zimmermann, A., Lthy, J. y Pauli, U. (1998). Quantitative and qualitative evaluationof nine different extraction methods for nucleic acids on soya bean food samples. Zeitschrift fr Lebensmittel-Untersuchung und -Forschung A 207, 8190. Cesar A. Migoni. Por curiosidad fundamentos de bioquimica descriptiva. Universidad Autonoma de Baja California. Mxico. Pag. 513