AISLAMIENTO DE ENTEROBACTERIAS

INTRODUCCIN:
Es la forma comn de denominar a las bacterias Gram Negativas. Reciben este nombre
porque suelen encontrarse en el intestino de los mamferos. Las especies que poseen
flagelos son mviles; el resto, inmviles. La capacidad para fermentar la lactosa y el
tiempo empleado en hacerlo sirven para diferenciar los gneros. Los que no realizan la
fermentacin son patgenos, los fermentadores, saprofitos.

CLASIFICACIN:
Las enterobacterias constituyen la familia Enterobacteriaceae.
Se clasifican en cinco tribus: Escherichieas, Klebsielleas, Proteeas, Yersineas y
Erwinieas. Cada una comprende diversos gneros.

IMPORTANCIA DE RECUENTO DE ENTEROBACTERIAS EN ALIMENTOS:

Enterobacterias patgenas:
La presencia de Enterobacterias patgenas en los alimentos supone un grave riesgo
para los consumidores que van a ingerirlos. Debemos garantizar la ausencia de este
tipo de microorganismos en los alimentos.

Bacillus cereus
Clostridium botulinum
Clostridium perfringens
Escherichia coli
Listeria monocytogenes
Salmonella
Shigella
Staphylococcus aureus
Yersinia enterocolitica

AISLAMIENTO DE LAS ENTEREBACTERIAS:

1. Agar Mc Conkey:
La bacteria E. coli forma colonias rojas por un viraje del indicador de pH (rojo neutro),
dando como resultado lactosa +.
La bacteria Salmonella typhi forma colonias incoloras y no vira el indicador de pH, por
lo que es lactosa - . Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos
de fcil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que
utilizan o no, lactosa en muestras clnicas, de agua y alimentos.
Fundamento:
En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el
desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de
sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de
gran parte de la flora Gram positiva. Por fermentacin de la lactosa, disminuye el pH

alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color

del indicador de pH (rojo neutro), la absorcin en las
colonias, y la precipitacin de las sales biliares. Los
microorganismos no fermentadores de lactosa producen
colonias incoloras.
Preparacin: Suspender 50 g del polvo por litro de agua
destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar.
Calentar suavemente y hervir 1 a 2 minutos hasta
disolver. Esterilizar en autoclave a 121C durante 15
minutos. Incubacin Durante 18-48 horas, a 35-37 C, en atmsfera aerbica
Resultados:

2. Salmonella Shigella Agar:

Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies
de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se
sospeche su presencia.
Fundamento:
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial. La selectividad, est dada por la sales
biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la
mayora de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp. Es diferencial debido
a la fermentacin de la lactosa, y a la formacin de cido sulfhdrico a partir del
tiosulfato de sodio. Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de
desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el
indicador de pH, obtenindose colonias rosadas o rojas sobre
un fondo rojizo. Salmonella, Shigella y otros microorganismos
no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de
cultivo, y producen colonias transparentes.
La produccin de cido sulfhdrico se evidencia como
colonias con centro negro debido a la formacin de sulfuro
de hierro.
Preparacin: Suspender 60 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y
mezclar hasta homogeneizar. Calentar a ebullicin durante 2 o 3 minutos. No esterilizar
en autoclave. Enfriar a 45-50C y distribuir unos 20 ml por placa. Secar la superficie del
medio unos minutos en la estufa.
Resultados:

IDENTIFICACIN DE BACTERIAS GRAM NEGATIVAS:

A. E.coli:
E. coli. est integrada por bacilos Gram negativos no
esporulados, mviles con flagelos peritricos o inmviles,
aerobios-anaerobios facultativos, capaces de crecer en agar
MacConkey y en medios simples con o sin agregado de
NaCl, fermentadores y oxidativos en medios con glucosa u
otros carbohidratos, catalasa positivos, oxidasa negativos,
reductores de nitratos a nitritos, y poseedores de una
proporcin G+C de 39 a 59% en su DNA.
Se trata de bacterias de rpido crecimiento y amplia distribucin en el suelo, el agua,
vegetales y gran variedad de animales. E. coli es la especie tipo del gnero Escherichia.
Incluye grmenes generalmente mviles, que producen cido y gas a partir de la
glucosa, la arabinosa, y habitualmente de la lactosa y otros azcares.
Producen reaccin positiva de rojo de metilo, y negativa de Vogues-Proskauer. Son H2S,
ureasa y fenilalanina negativos, pero en general son indol positivos y decarboxilan la
lisina.
E. coli coloniza el tracto gastrointestinal a las pocas horas de vida del nio, y establece
con el husped una relacin estable de mutuo beneficio.Como integrante de la flora
normal del hombre y de muchos animales, se lo considera un germen indicador de
contaminacin fecal cuando est presente en el ambiente, agua y alimentos, junto con
otros similares agrupados bajo la denominacin de "bacterias coliformes".
B. Salmonella typhi:
Salmonella es un gnero de bacteria que pertenece a la familia Enterobacteriaceae,
formado por bacilos gram negativos, anaerobios facultativos, con flagelos pertricos y
que no desarrollan cpsula ni esporas. Son bacterias mviles que producen sulfuro de
hidrgeno (H2S). Fermentan glucosa por poseer una enzima especializada, pero no
lactosa, y no producen ureasa. Es un agente zoontico de distribucin universal. Se
transmite por contacto directo o contaminacin cruzada durante la manipulacin, en el
procesado de alimentos o en el hogar, tambin por va sexual.
Clsicamente se distinguan tres nicas especies patgenas primarias: S. typhy, S.
cholerae-suis y S. enteritidis.

Patogenia:
Produce salmonelosis con un perodo de incubacin de entre 5 horas y 5 das, diarrea y
dolor abdominal, a travs de las heces del enfermo se elimina un gran nmero de esta
bacteria y fiebre entrica con un periodo de incubacin de 7 a 28 das, causante de
dolor de cabeza, fiebre, dolor abdominal y diarrea, erupcin mculo-papulosa en pecho
y espalda, los enfermos presentan un perodo de convalecencia entre 1 y 8 semanas,
las personas curadas eliminan Salmonella. Tambin puede ocasionar fiebres entricas o
infeccin intestinal por intoxicacin con algunos alimentos.
Resultados de Pruebas:

PRUEBAS BIOQUIMICAS:
I.

Prueba del indol

La prueba del indol es una prueba bioqumica realizada en especies bacterianas para
determinar la habilidad del organismo de romper el indol del aminocido triptfano.
Esta divisin molecular es lograda por una serie de enzimas intracelulares diferentes,
un sistema que en conjunto se le llama con frecuencia triptofanasa. Se genera el indol
por una desaminacin reductiva del triptfano via la molcula intermediaria cido
indolpirvico.
Las triptofanasas catalizan la reaccin de desaminacin,
durante el cual se remueve el grupo amino (NH2) de la
molcula de triptfano. Los productos finales de la reaccin
son el indol, cido pirvico, amonaco (NH3) y energa. Como
coenzima de la reaccin se requiere al fosfato de piridoxal Tal
como ocurre con muchas pruebas bioqumicas, los resultados
de una prueba de indol se indican con el cambio de color que
sigue a la reaccin. Esta prueba es positiva cuando se
muestra un anillo de color anaranjado. Ello es debido a la
presencia de escatol, tambin conocido como metil-indol o
indol metilado, otro posible producto de la degradacin del triptfano
Bacteria indol positiva
Escherichia coli
La mayora de los Proteus spp.

Plesiomonas shigelloides,
Pasturella multocida, Pasturella
Bacteria indol negativa

 La mayora de los Bacillus spp.,

Actinobacillus spp., ureae,

Pasturella haemolytica, Pasturella

Salmonella spp.,

II.

Prueba del Citrato:

En el medio de cultivo, el fosfato monoamnico es la nica fuente de nitrgeno y el

citrato de sodio es la nica fuente de carbono. Ambos componentes son necesarios
para el desarrollo bacteriano. Las sales de fosfato forman un sistema buffer, el
magnesio es cofactor enzimtico.
El desdoblamiento del citrato da progresivamente, oxalacetato y piruvato. Este ltimo,
en presencia de un medio alcalino, da origen a cidos orgnicos que, al ser utilizados
como fuente de carbono, producen carbonatos y
bicarbonatos alcalinos. El medio entonces vira al azul y
esto es indicativo de la produccin de citrato permeasa.
Resultados:
-Positivo: crecimiento y color azul en el pico, alcalinidad.
-Negativo: el medio permanece de color verde debido a
que no hay desarrollo bacteriano y no hay cambio de color.

CONCLUSIONES:
Las enterobacterias son Gram negativas y contienen ms de 30 gneros y ms
de 100 especies que pueden tenermorfologa de bacilos o cocos.
La capacidad para fermentar la lactosa y el tiempo empleado en hacerlo sirven
para diferenciar los gneros. Los que no realizan la fermentacin son patgenos,
los fermentadores, saprofitos.
La capacidad para fermentar la lactosa y el tiempo empleado en hacerlo sirven
para diferenciar los gneros. Los que no realizan la fermentacin son patgenos,
los fermentadores, saprofitos.
Algunos de las enterobacterias que se encuentran en los alimentos no son
patgenos, pero se debe tener cuidado con los patogenos ya que provocan
muchas enfermedades. Esa es la razn por la cual se debe hacer un buen
manejo de los alimentos y tener buena higiene.