OBSERVACIÒN

MICROSCOPICA

M. V. Z.: JESUS CAMPERO ROJAS

El ensamblado de distintas lupas dentro de un
tubo metálico facilito la observación y el
estudio de elementos cercanos pero
sumamente pequeños para el ojo humano,
este procedimiento dio origen al primer
microscopio en el siglo XVI. Por su
corrección óptica se diferencian cuatro
clases de lentes objetivos.
 Acromáticos. Culto que carece de color
 Apocromáticos. Logra corregir casi totalmente
la aberración cromática pues hacen coincidir tres
colores en un mismo foco.
 Monocromáticos. Se emplea para la realización de
microfotografía en donde se utiliza radiaciones
espectrales de muy escasa longitud de ondas.
 De corrección. Este defecto es corregido debido a la
distancia que separa la lente frontal de las demás, ya
que presentan un espesor estándar (0.15 y 0.17 mm).
Los lentes objetivos presentan las siguientes propiedades:
 Poder Definidor: Es la aptitud de formar imágenes claras.
 Poder de Resolución: Es revelar los detalles más finos de la
estructura de los objetos, depende de la apertura numérica y de
la longitud de onda de la luz utilizada.
 Apertura Numérica. A mayor apertura mayor resolución,
mientras que la longitud de ondas actúa de manera inversa (a
menos longitud de onda mayor poder resolutivo).
 Aumento. A la relación entre el tamaño del objeto y la imagen
formada por el objeto.
 Distancia Frontal. Se denomina así a la distancia media entre
la cara superior de la lente frontal y la cara superior del cubre
objeto, es un enfoque realizado directamente.
 Poder de Penetración. Permite la observación simultánea de
varios planos, por encima y por debajo del plano enfocado es
inversamente proporcional al aumento y a la apertura numérica
Finalmente se distinguen dos clases de lentes objetivos:
 SECO.- Es todo aquella lente que se utiliza directamente sin
la interposición de ninguna clase de sustancia entre ella y el
objeto, el aumento varía entre x4 y x45.
 DE INMERSION.- Se aumenta unas mil veces del tamaño
original del objeto en estudio siendo el límite máximo de
unos 2000 aumentos utilizando un líquido de distinto índice
de refracción similar al de la lente frontal por ejemplo el
aceite de cedro.
MEDICION DEL AUMENTO DEL
MICROSCOPIO
 Este aumento depende de cuatro factores:
aumento del objeto, aumento del ocular, longitud
óptica del tubo y diferentes distancia de visión.

MEDICION DEL OBJETO

 Para obtener el tamaño de los objetos observados,
después de determinar el aumento del
microscopio bastara con sustituir el micrómetro
objetivo con el objeto a medir propiamente dicho.
METODOS DE OBSERVACION
MICROSCOPICA –

OBSERVACION EN FRESCO

OBSERVACION PREVIA COLORACION

Características de la coloración simple:

 Simple.

 Directa.

 Progresiva.
Características de la coloración compuesta:

 Compuesta.

 Indirecta.

 Regresiva.
Pasos previos a la tinción:
 Extendido:

 Secado:

 Fijado:
TINCIONES ACIDORRESISTENTES.
 Las bacterias acidorresistentes son las que retiene
la carbolficsina, aun cuando intente descolorarlas
con una mezcla de alcohol y acido clorhídrico.
Las bacterias acidorresistentes se tiñen de color
rojo; el resto adquiere el color del colorante de
contraste en este caso el verde o azul.
METODOS DE RUTINA

1.- SIMPLE
Materiales: soluc. Hidroalcohólica de azul metileno
Técnica: extendido, secado y fijado clásico.
Coloración: azul metileno 1min. Lavado con agua, secado y
observación.
Interpretación: todas las bacterias se tiñen con el colorante aplicado.
2.- TINCION DE GRAM
 La tinción de Gram o coloración Gram es un tipo de tinción
diferencial empleado en microbiología para la visualización de
bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al
bacteriólogo danés Christian Gram, que desarrolló la técnica en
1884. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular
bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la
diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram negativa
a las que se visualizan de color rosa.
Materiales:
Colorante principal: soluc. Hidroalcohólica de violeta de genciana.
Mordiente: solución de Lugol
Decolorante: alcohol acetona
Colorante de contraste: soluc. Madre de safranina.
Soluc, de safranina para uso inmediato: (dilución 1:5 o 1:10)
Técnica: extendido, secado y fijado clásico.
Coloración:
Violeta genciana 1min
Lavado con agua
Lugol 1min
Lavado con agua
Alcohol acetona 3-5 seg
Lavado con agua
Safranina 45 seg
Lavado con agua, secado y observación.
Interpretación: + violeta; - rojo.
3.- TINCION DE ZIEHL NEELSEN
 La tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una
técnica de tinción diferencial rápida y económica,
para la identificación de microorganismos
patógenos, por ejemplo M. tuberculosis.
 Fue descrita por primera vez por dos médicos
alemanes, Franz Ziehl (1859 a 1926), un
bacteriólogo y Friedrich Neelsen (1854 a 1894),
un patólogo.
Materiales:
Colorante principal: fucsina fenicada de Ziehl.
Decolorante: alcohol acido.
Colorante de contraste: soluc, acuosa de azul de metileno.
Técnica: extendido, secado y fijado clásico.
Coloración:
Fucsina fenicada de Ziehl (en caliente) 5min
Lavado con agua
Alcohol acido 2min
Lavado con agua
Azul de metileno 1min
Lavado con agua, secado y observación
Interpretación: + rojo; - azul.
METODOS ESPECIALES
 TINCION DE CAPSULA
 Función: Sirve para teñir capsulas. Las capsulas
son un factor de virulencia (capacidad de producir
infección).
Métodos:
 Método de Hiss:
 Extender, secar, fijar.
 Cristal Violeta vapor fluente durante 1 minuto.
 Lavar con solución de Sulfato de Cobre.
 Secar y observar al microscopio con el objetivo de
inmersión.
METODO DE GIEMSA
 Este método es útil para poner de manifiesto las
Ricketsias localizadas dentro de la célula
huésped. Estos organismos adquieren una
coloración diferencial y se ven dentro del
citoplasma de dicha célula.
 También tiene utilidad, para teñir frotis de sangre
en el examen de protozoos, para visualizar
inclusiones virales o de otros organismos en las
células infectadas, así como la presencia de otros
parásitos como toxoplasmas en tejido.
TINCION DE MOELLER
 Las esporas permiten a las bacterias pasar a un
estado latente en condiciones ambientales
adversas. Su principal componente es Ca2+
fijado a acido dipicolínico.
 El calor después de la tinción con carbol-fuscina
con permite que rompa la estructura que protege
la espora para que así pueda penetrar el
colorante. Con el lavado de agua se retira todo
tinte que se adhirió a la bacteria, para después
teñirse con azul de metileno. Resalta de color
rojo la espora y de color azul, la bacteria.
GRACIAS……¡