INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL
DECIENCIASBIOL6GICAS
LABORATORIO DE PRODUCC16N Y CONTROL
DE BIOL6GICOS

t\11celisis v-ntc,-obiologico de
pr-odLtctos far-v-naceLAticos 110
ester-iles
 YJl?f:HJUCTe FAl?mACEUTICe ne E TEl?IL
Las formas farmaceuticas no esterlles son aquellos preparados que permiten la presencia
de una carga bacteriana en cantidad limitada y ausencia de microorganismos especificos.
que estan relacionadas a la forma farmaceutica y via de administraci6n.
Son susceptibles a contaminarse con bacterias, hongos y levaduras durante el transcurso
del proceso de su manufactura. Es.!ffiportante controlar c , o n e s m,crob,an§.P-@rO

Pesado Fabrioaci6n Uenado Almaoen Uso

 Forma Farmaceulica:
Esla disposici6n lfsica que se
SOLIDOS da a los farmacos y adilivos para
conslituir unmedicamento Y
facilitar sudosiflcaci6n y
P0M)s adminlsttaci6n

Cremas

UngUOnlOS
SEMl-s0LIDOS
PfNE
Supos1tonos

Ovulos

LIOUIDOS Susponsionos

AEROSOLES
 ARea de fabRicacien de PReducte faRrnaceutice'Ale
biele9ice --- -- NOM-059-SSA1-2015

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YJJ?eDUCTe FAJ?mACEUTICe ne E
TEJ?IL
Considerar
Proceso de fabricaci6n
Via de administraci6n
Naturaleza del producto
Actividad de agua
Presencia de
preservativos
adecuados
 Son agentes que inhiben el crecimiento de
microorganismos capaces de causar deterioro biol6gico de
sustanclas o materiales.

trt.ra. P.ar-a.bcno,. 4cldo$.4cldob<nN>lco (0,05• 0. I

{0.25"f• Em.ilt.lonu, II,
lodonn.uttnl..s. tJblt:tb. • n l ) . OrllHy i,6p.co,.

0 0
H Aldehldos. Glutaraldehldo (< 0.1 %).
Cosmeticos.
 •
Rocuen10 de
Pruebas para evaluar la calidad microbiol6gica Orgonlsmos
Mesofllicos AerOl>loo (OMA)
de productos de productos farmaceuticos
mediante el recuento de las colonias y la

•
determinaci6n de la ausencia de ciertos Rec:uooto d&Hoogos
microorganismos en funci6n de la via de Rlamentosos y Levaduras (H/l)

admlnistraci6n.

•
lnvestigacionde
mlcroorga
1$mosespecffic0$:
E. d. Solmonella. P,
oe1t19i'nosa, S. aurovs,
C
Olblc-ons.
CUANTITATIVA CUALITATIVA

D Mesofilicos aerobics D E coli

D Hongos D Salmonella

D Levaduras L Candida albicans

Clostridium

P. aeruginosa

S. aureus
Ar>endfce VII.Urnftes establecfdes de acueRde alr>r1educte en elanatfsfs
rnfcr1ebfelegfcede r>Reductesfa11rnaceutfces ne esteRlles
Producto Organlsmo mosoflllcos Hongos fllamontosos Ausoncfa por 1 g o 1 ml do
ocroblos (OMA) (UFC(g o y produclo
ml) fcvoduros (UFC(g o m l )
0'81:Solido 10' 10' E. coll

Lfquic!o 102 101 E. coll

Rectal 10' 102 Nosedeterm1na

Bucat 102 101 S. aurous.. P. aerugmos-

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T6pica (incluyeparches 102 101 S. surous (l g . lmLopsJeho)
transd8rmicos) P. Aon,ginosa (1g. 1mLo parcho)
Nasal 102 101 S. aureus, P. oo.ruglnosa

Otico 102 101 S. aureus, P. aeroginosa

Vaginal 102 101 S. aureus. P. aeroglnosa. C.

sfbicans
Para 102 101 S. aureus, P. servglnosa,
inhalaci6n Bacterias
Gram(-) tolerantes a la blfis
 OMA
HIL
(ORGANISMOS MICROORGANISMOS
MUESTRA ANALIZADA (HONGOSY
MESOFILICOS ESPECIFICOS
Princlpio actlvo LEVADURAS
AEROBICS) (AUSENTES)
UFC/g 6 ml
UFC/g 6 Ml
Clorhidrato de ambroxol.
No mas de 100 No mas de 100 E. coli
Sol. Oral
S. aureus,
Oximetazolina Sol. nasal No mas de 100 No mas de 100
P. aeruginosa
Albendazol jarabe No mas de 100 No mas de 100 E. coli
Amoxicllina polvo para
No mas de 100 No mas de 100 E. coli
suspensi6n
Unguento de S. aureus
No mas de 100 No mas de 100
betamelasona P. aeruginosa
Suposilorio de acelatode
No mas de 100 No mas de 100 Nose
aluminio e hldrocortisona
determina
mrreve DE EcuEnre
Filtraci6n por membrana
Cuenta enplaca<vaciado y
extension> Numero masprobable
CNMP)

ELECCION
DELMETODO
Naturaleza y
Analizarla cant,dad
especificac10nes del
demuestra sufic,ente
produclo

Cualquiera que sea el metodo elegido sedebe probar su

aptitud.
 NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-092-SSA1-1994,BIENES Y
SERVICIOS. METODO PARA LA CUENTA DE BACTERIAS AEROBIAS
EN PLACA
El fundamento de la tecnica consiste en contar las colonias, que sedesarrollan en el medic
de elecci6n despues de un cierto tiempo y temperatura de incubaci6n, presuponiendo
que cada colonia proviene de un microorganismo de ta muestra bajo estudio. El metodo
admite numerosas fuentes de variaci6n. algunas de ellas controlables. pero sujetas a la
influencia de varies factores.
Expresi6n de resultados:Consid9faciones
En la lectura. seleccionar aquellas placas donde aparezcan entre 25 a 250 UFC. para
disminuir et error en la cuenta, Calcular la cuenta promedio por gramo o miULitro de
dicha diluci6n y reportar.
Placas sin colonias - Cuando las placas de todas las dlluciones no muestran colonlas,
reportar ta cuenta en placa come menor que una vez el valor de la diluci6n mas
baJa usada
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM--092-SSA1-1994,
BIENES Y SERVICIOS, METOOO PARA LA
CUENTA OE BACTERIAS AEROBIAS EN PLACA.
L O
G
• •
• El estudiante sen§ capaz de !Levar a cabo el control microbiol6gico de
materias primas y productos farmaceuticos no esteriles manejando las
tecnicas
adecuadas descritas en lasmetodologias oficiales.
• Tendra la capacidad para analizar, discutir y concluir sobre Los diferentes casos
que se le presenten para resolver este tipo de anaLisis
NtUCIA IX APffl\lO
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IHIClAL
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EVALUACl6NDE LAAPTITUDDEL
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 CRiteRia ae vauaez ael Recuenta
rnicRabiana
Validez de la prueba de recuento microbiano.
Para demostrar la aptitud del metodo es necesario recuperar a los
microorganismos control previamente inoculados en la muestra bajo las
condiciones de prueba.
Para prueba de aptitud del metodo para OMA. H/L:nomas de 100UFC.
• Y para microorganismosespecificos:Recuperar el microorganismo de prueba.
 FacteR de 2 lfrniteureRieR e
Cuandoinf eRieR
se verifica la aptitud del metodo por el metodo de cuenta en placa. el
promedio de la cuenta de Los microorganismos de referencia en presencia del
producto no debe diferir por un factor mayor que 2deLos valores delcontrol
Por ejemplo. Si lacuenta controles de 100UFC:

o El limite inferior aceptable es10012 - soUFC

o Ellimitesuperior es de 100 x 2 - 200 UFC

Si la muestra inhibe el crecimiento. adicionar la suspension microbiana

despues de neutralizar o diluir la actividad antlmicrobiana.
 0 I 0
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Staphylococcusaureus ATCC 6538

Baell/us subtllls ATCC 6633

ENUMERACION OE ORGANISMOS
Candida albicans ATCC 10231
MESOFiLICOS AEROBIOS (OMA)

Aspergiflus brasiliensis ATCC 16404

Pseudomonas aeruglnosa ATCC 9027

ENUMERACION DE HONGOS
Candida slbicsns ATCC 10231
FILAMENTOSOS Y LEVAOURAS (H/L)
Aspergl/Jus brasll/ensis ATCC 16404
t?r!UEBA DE At?TITUD t?Ar!A BU &UEDADEm.e.E t?
ECfFICe
METODO MICROORGANISMOS

Escherichia coll ATCC 8739

Salmonella enter/ca ATCC 14028

DETERMINACION DE
Candida alb/cans ATCC 10231
MICROORGANISMOS ESPEC(FICOS
Asperg/1/us bras/1/ens/s ATCC 16404

Clostrld/um sporogenes ATCC 11437

Pseudomonas aeruglnosa ATCC 9027

DETERMINACION DE BACTERIAS GRAM
NEGATIVAS BILIS TOLERANTES
Escherichia coll ATCC 8739
 f) UE A DE At?TITUD DEL mETeDe fJA A emA !
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 CULTIVO IDI fL•I I ESPECIFICOS
MICROORGANISMOS

(r.>Ractlca: ldentlflcaclen de mlcRflflR9anlsmfls e

r>ecffice l
AGAI/
cmtmlDA
Uso: Medio de cu!Uvo s61ido setectivo. diseiiado para et aislamiento
de Pseudomonos aeruginoso Esta basado en poner en evldencia la
producci6n de pigmentos caractertst,cosde esta especie.
Morfotogia colonial esperada: Colonias que estan rodeadas de
pigmentos azut-verdoso y presentan fluorescencla a la tuz
ultravioteta<254 nm>.

ACAi/ )(lrJ
Uso: medio moderadamente setectivo y de diferenciaci6n para et
aislamiento y la diferenaaci6n de pat6genos entencos Gram
negativos /Salmonella y ShigellaJ
Morfotogra colonial esperada· Colonias roJas con centtos de color
negro.
AGAI/
SALmAnrreL
Uso: se utiLiza para el aislamfento selective de estafilococos y para la
deteccion de Stophyiococcusaureus.
Morfolofia colonial esperada· Los estafilococos pos1tivos a la
coagulasa !Staphyiococcus aureusi producen colonias de color
amarillo y un medlo circundante de color amarillo, mientras que los
estafilococos negabvos a 1a coagulasa producen colonias de color
rojoy no producencambiode color enel indicador de rojo fenol

ACAi/ mceenke
Uso: Siive coma un indicador visual de pH. distinguiendo asi las
bacterias gram negativas que pueden fermentar la lactosa (Lac+,
Escherichia coll, Enterobacter y K/ebsielloJ y las que no pueden
(Lac-, Salmonella. Protevs yShigel/aJ.
Morfologiacolonialesperada·colonias de colorrosadaso rojas.
 caldel?aPPBP8RL
Uso:medioliquido para el enriquecimientosetecUvo deSalmonellas.
Creclmiento esperado:Creamiento homogeneo.Turbldez.

CALOO mccen eY
Uso: Medio de cultivo se!ectlvo y diferenclal para bacterias disei\
ado para aistar se!ectivamente bacilos Gram negatives y
diferenciarlos sobre la basede la fermentaci6nde la tactosa
Crecimiento esperado. Los colif0<mes fermentan la tactosa con
producci6n de ilcido y gas. al acidlficar el medio se produce un we
de!indicadorde pHde color ptirpura al amanllo.
Euherlc.111• coH
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AGAI?DEXTl?fJSA SAefJUl?
AUD Es un medio no selective para et cultivo, recuento y
Uso:
mantenimiento de hongospat6genos y nopat6genos ylevaduras.
logra selectividad medrante laadicion de cloranfenicol
lnvestigaci6n paraCandido o/bicons.
Morfologia colonial esperada: Colonias crernosas de color blanco
amarillento. opacas. pocoelevadas y de bordesbiendefinidos.

CALOO D£JaPfJSA SABIJUl?AUD

uso·aislam1ento. idenUficad6n y conservad6n de hongos pat6genos
ysapr6filos. Tambien es ulllpara el cultivo de levaduras
lnvestigacion paraCandidoa/bicons.
Crecimiento esperado Crecimientohomogenea. Turb1de2.
AOAl? CfJLUml'l!ACflAn
nOl?E
Uso: Detecci6n de microorganismos de crecim1ento dificil.
recuento totaly ambiental lnvesligaci6n paraC/ostridivm
sporogenes
Morfolofia colonialesperada:Coloniasgrises. hemotiticas o no.

CtoJ.trldJos

mEPlfl OE rn111&uEC1m1rnrn OE ClfJ!:Tl?IPff)

Uso:medio de uso generalpara etcultivo de organismos
anaerobios obtigados. en especialCtostridlumspp.
Creamiento esperado.Et ctecimiento se indica mediante turbidez y,
en el caso de algunos organismos. con ta presencla de burbujas
de gas enetmedio
PRUE BAS m
, EL eoucre r>(IE5:EnTA A!i:TIVIOAO
NEUTRALIZANTE
AnTlmlC(lerJIAnA
 Actlvldad antlrnlcReblanadel r->Rectucte !:I suneutRaUzacisn/eUrnlnaclim
Si la recuperaci6n de los microorganismos inoculados no es posible debido a la actlvidad
antimicrobiana del producto (preservatlvos o activldad per se), se modifica el procedimiento para
garantizar la valldez de los resultados.
AGENTES NEUT RAL IZ ANT E S PA R A SUSTANCIAS CON
ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA

SUSTANCIAS CON ACTIVlOAO NEUTRALIZA , TES POTENClALES

ANTIMICR081ANA
Olutnmldchido. meNuri11lcs Sulfi1oOcidode:sodio (bisulfito de sodKl)
Fc:nolcs.,Alcohol i-\hkhidos. Sorbo! DiluciOn
Ald bld<-it'i Glkh'll1
Suli:swt1h:marl:as de11monio.p«rul:Udrox1berr£oo'l
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Calculo de UFC/ml:

U F C / m l • UFC x 1 / dlluci6n x 1 / alicuota

Si no se presenta crecimiento en las cajas registrar como o (Cerol

pero para emitir un resultado final en la columna de U F C / m l se
debe expresar como < 10 UFC/ml.por ser esta la menor diluci6n.
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