Tinción de parásitos

Tinción y Fijación: Estrategia para analizar las

estructuras de protozoarios.

El objetivo es teñir la preparación para resaltar

características citológicas de los parásitos y
diferenciarlos de estructuras presentes en la
materia fecal
 Tinción de parásitos

Efímera Permanente
Fácil, rápida y útil para Para observaciones
el diagnostico. Se exhaustivas, se utilizan
realiza después del colorantes que permiten
método CPS. mayor contraste.
Lugol Giemsa, hematoxilina
ferrica, tricromica, Ziehl-
Neelsen.
 Fijadores

•Penetra al parasito con rapidez

•Detiene el metabolismo

•Provoca pocos o nulos cambios morfológicos

Fijadores
 Fijadores

• Formaldehido: al 5% para esporas, quistes y

ooquistes y al 10% para larvas y huevos de helmintos
• Schaudinn: quistes, trofozoítos, huevos y larvas
• Alcohol polivinílico: quistes y trofozoítos
• Merthiolate. Yodo. Formaldehido: quistes,
trofozoítos, huevos y larvas
• Fenol-alcohol-formaldehido: quistes y trofozoítos
• Alcohol-Formaldehido-Acido Acético: metazoarios
 Aclaradores

• Lactofenol de Amman
• Liquido de Lent
• Glicerina
• Gelatina glicerada
 Tinción de Giemsa
Útil para contrastar parásitos hemáticos e
intestinales

Reactivos

Solución concentrada: Amortiguador de fosfatos

Giemsa en polvo 3.0g.
Glicerina 250mL
Metanol 250mL Amortiguador pH 7.2

Solución de trabajo: Solución concentrada 1mL

Amortiguador 0ml
 Método
Fijar el frotis con metanol durante un minuto

Introducir la preparación en la solución de trabajo de 20-30 minutos

Lavar con amortiguador de fosfatos y posteriormente con agua

destilada

Secar a temperatura ambiente

Montar con resina

Entellan

Observar al microscopio con aceite de inmersión

Los núcleos se tiñen de rojo

brillante y el citoplasma de color
azul.
 Tinción hematoxilina férrica modificada

Es la más utilizada en Parasitología

Reactivos
Solución concentrada B:
Solución concentrada A:
Sulfato ferroso de amonio 10g
Hematoxilina 10g Sulfato férrico de amonio 10g
Etanol 1L Acido clorhídrico 10mL
Agua destilada 1L

Solución de trabajo: Solución concentrada A 15mL

Solución concentrada B 15mL
 Método
Fijar el frotis con Schaudinn durante 60 minutos

Colocar en una solución de etanol 70%-Iodo durante 5 minutos

Colocar la preparación en solución de trabajo durante 5 minutos

Lavar con agua durante 10 minutos

Se deshidratan en etanol al 70% y al 95%. Cada paso de 5 minutos

Las laminillas se transfieren a xileno durante 10 minutos, se cubren con bálsamo

de Canadá, se coloca un cubreobjetos y se observa al microscopio.

Los núcleos se tiñen de azul

oscuro y el citoplasma de color
azul.
 Tinción Negro de clorazol
Es útil en las muestras de materia fecal sin fijar,
ya que el método fija y tiñe simultáneamente

Reactivos
Solución A:

Solución B:
Etanol 90% 170mL
Metanol 160mL Negro de clorazol 5g
Acido acético glacial 20mL Solución A 1L
Fenol liquido 20mL
Acido fosfotúngstico 1% 12MmL
Agua destilada 618mL
 Método
Sumergir el frotis en el colorante de 1 a 2 horas

Colocar en una solución de etanol 95% durante 5 minutos

Colocar en una solución de etanol 100% durante 5 minutos. Repetir

este paso.

Transferir a xileno durante 5 minutos.

Repetir este paso.

Las laminillas se cubren con bálsamo de Canadá, se coloca un cubreobjetos y se

observa al microscopio.

Los protozoarios se tiñen de verde a verde grisáceo.

 Tinción Tricromica
Es útil en las muestras de materia fecal sin fijar,
ya que el método fija y tiñe simultáneamente
Reactivos

Solución concentrada:

Cromotropo 2R 0.6g
Verde brillante SF 0.3g
Acido acético glacial 1.0mL
Acido fosfotúngstico 1% 0.7g
Agua destilada 100mL
 Método
Fijar el frotis con Schaudinn durante 30 minutos

Colocar en una solución de etanol 70%-Iodo durante 1 minuto

Lavar con etanol 2 veces durante un minuto

Colocar en la solución concentrada de 5 a 10 minutos

Transferir a etanol al 90%-acido acético 1% de 10-15 segundos

Sumergir 2 veces en etanol absoluto

Transferir a xileno durante 1 minuto

Las laminillas se cubren con bálsamo de Canadá, se coloca un cubreobjetos y se

observa al microscopio.

El fondo se observa rojo o verde, los parásitos se

observan mas neutros y el núcleo de un color mas
oscuro.
 Tinción de Ziehl- Neelsen
Es útil para la tinción de organismos resistentes
al acido y al alcohol.
Reactivos
Carbolfucsina: Azul de metileno alcalino Alcohol ácido:
de Löefler:
Solución A: Acido clorhídrico
Fucsina básica al 0.3% Solución A: al 3% en etanol
en etanol al 95% Azul de metileno al 1% en al 95%.
Solución B: etanol al 95%
Fenol al 5% en agua Solución B:
destilada Hidróxido de potasio 0.1%

Se mezclan ambas Se mezclan ambas

soluciones y se dejan soluciones
reposar una semana
 Método
Fijar el frotis con metanol absoluto y cubrir el frotis con papel filtro

Aplicar de 5 a 7 gotas de carbolfuccina hasta empapar el filtro y calentar durante 5

minutos, evitando que se seque. (aplicar mas carbolfuccina).

Retirar el papel filtro, lavar con agua y dejar secar.

Decolorar con alcohol acido hasta que el residuo sea limpio.

Lavar con agua de la llave.

Aplicar el azul de metileno durante un minuto.

Lavar , secar con aire y observar a l microscopio.

Los parásitos se tiñen de rosa tenue a rojo

intenso.