ANALISIS CUALITATIVO

1. Desarrolle el método Beilstein, explicando que permite determinar.

R.
Test de Beilstein
La prueba de Beilstein se usa para
detectar la presencia de halógenos
(CLORO, FLUOR, YODO Y BROMO).
Los compuestos orgánicos que contienen
bromo, cloro, yodo e hidrógeno se
descomponen al quemarse en presencia
de óxido de cobre para producir los
correspondientes halogenuros de
hidrógeno
. Estos gases reaccionan para formar los halogenuros cúpricos correspondientes, lo que
imparte un color verde a la llama. La prueba es muy sensible, pero algunos compuestos
nitrogenados y ácidos carboxílicos también dan la prueba positiva. Como los halogenuros
cúpricos son compuestos inorgánicos volátiles, es por este motivo que si se les expone a
una fuente de calor es posible observar emisión del cobre Halogenado (color verde).
Reacción Halogenuro de Alquilo Primario

Reacción Halogenuro de Alquilo Terciario

Principio prueba de Beilstein

Examinar diversos compuestos orgánicos para determinar su contenido en halógenos.

Este experimento también se llama prueba de Beilstein. Lo que puede aprender:

 Los halógenos son otros elementos que a veces están presentes en los compuestos
orgánicos.
 Los halógenos pueden detectarse en forma de haluros de cobre por su
característica coloración de llama.

Ventajas

 El experimento es parte de un conjunto de soluciones completas con experimentos

para el tema de Química Orgánica que se ajusta al plan de estudios internacional:
se cubren todos los temas

Procedimiento: En la campana extractora, limpie un alambre de cobre en bucle al

meterlo en la punta del cono azul de una llama de quemador Bunsen hasta que brille.
Asegúrese de “quemar” cualquier líquido residual en el cable (asegúrese de que las
llamas verdes de las pruebas anteriores hayan desaparecido antes de comenzar).

Deje que el cobre se enfríe a temperatura ambiente, luego sumerja en un tubo de ensayo
que contenga 5-10 gotas de su muestra, recubriéndola tanto como sea posible. Si la
muestra es un sólido, adhiera parte del sólido al alambre de cobre humedeciendo primero
el alambre con agua destilada y luego tocándolo con el sólido.

Inmediatamente sumerja el alambre con la muestra en el cono azul de la llama. Un

resultado positivo es una llama verde, aunque podría ser efímera y débil (puede ser más
fácil ver si la luz de la campana extractora está apagada). Un resultado negativo es la
ausencia de este color verde
Densidad relativa
La clasificación por densidad con un sistema de flotación se realiza comparando las
densidades del material plástico y sustancias líquidas de densidad conocida.  Si un
plástico flota en una solución con una densidad de 0.94 g/cm³, puede ser un plástico de
polietileno de densidad media o baja. Si la muestra flota en una solución de 0.92 g/cm³,
puede tratarse de un polietileno de baja densidad o polipropileno. Si se hunde en todas
las soluciones por debajo de una densidad de 2.00 g/cm³, la muestra será un plástico de
fluorcarbono. La presencia de cargas u otros aditivos y el grado de polimerización pueden
dificultar la identificación de los plásticos por la  densidad relativa, pues pueden hacer que
cambie bastante la densidad de un plástico. Poliolefinas, iónomeros y poliestirenos de
baja densidad flotarán en el agua (que tiene una densidad de 1.00 g/cm³).
Prueba de Beilstein húmeda
Una prueba húmeda alternativa para haluro es la prueba de fusión de sodio: esta prueba
convierte material orgánico en sales inorgánicas, incluido el haluro de sodio. La adición de
solución de nitrato de plata hace que los haluros precipiten como el haluro de plata
respectivo. La adición de nitrato de plata solución provoca ningún haluros precipiten como
el respectivo haluro de plata.
Solubilidad
Las pruebas para determinar la solubilidad o insolubilidad de los plásticos son métodos
sencillos de identificación. Con la excepción de las poli olefinas, los acetales, las
poliamidas y los fluorplásticos, se puede considerar que todos los materiales
termoplásticos son solubles a temperatura ambiente, el PET por ejemplo es impenetrable
a los solventes químicos mientras el PP se disuelve en tolueno caliente. Los
termoestables por su parte, son resistentes a los disolventes.
 2. Desarrolle el método Carius, explicando que permite determinar

R. El método de Carius es un método para la determinación cuantitativa

de halógenos en sustancias químicas. Fue inventado por el químico alemán Georg
Ludwig Carius donde desarrolla un método que permite determinar AZUFRE Y
HALÓGENOS en sustancias orgánicas, basado en la conversión de dichos elementos en
sulfato y haluros, respectivamente, mediante un tratamiento común: tratamiento con ácido
nítrico en presencia de cloruro de bario y nitrato de plata, como paso previo a las
correspondientes determinaciones gravimétricas

EL TUBO DE CARIUS

El tubo Carius fue desarrollado para el

análisis elemental de compuestos
orgánicos en respuesta a las carencias
que presentaban los métodos de análisis
elemental usado en esa época. En 1860
publicó un artículo sobre un nuevo
método gravimétrico de análisis
elemental basado en la oxidación total de
la muestra empleando ácido nítrico
fumante a alta temperatura.

En el detallaba su método de análisis que hacia énfasis en los elementos metálicos

presentes en compuestos orgánicos.

Consiste en un tubo de vidrio de pared gruesa donde se deposita otro tubo de menor
tamaño en pared delgada. En el tubo pequeño se encuentra la muestra a analizar y se
coloca en el tubo mayor con acido y una sal de nitrato. Se sella el tubo mayor y se somete
a calentamiento hasta digestión total.

Procedimiento

Se calienta una cantidad medida de algún componente orgánico con ácido nítrico fumante
en presencia de nitrato de plata contenido en un tubo de vidrio duro sellado conocido
como tubo de Carius, en un horno. El carbono y el hidrógeno presente en el compuesto
son oxidados a dióxido de carbono y agua.
El alógeno presente forma el correspondiente haluro de plata (Agx).se filtra, se lava, se
seca y se pesa.

(C,H,X) + AgNo3+O2=(HNO3)Co2+H2O+AgX

Esta prueba química funciona bien para la determinación de azufre pero sin la adición de
nitrato de plata .El intermedio de ácido sulfúrico formado después de la reacción del
Azufre con ácido Nítrico forma Sulfato de bario insoluble al agregar cloruro de bario.

El propósito de agregar ácido nítrico es oxidar el carbono y el hidrogeno.

El ácido nítrico solo oxida el yodo o ácido yódico y no afecta a ningún otro halógeno.
Incluso la oxidación del yodo por el ácido Nítrico concentrado ocurre solo altas
temperaturas.

(C,H,X) + BaCl2+O2=(HNO3)Co2+H2O+BaSO4.

3. Desarrolle paso a paso el método de Kjeldhal

R.
Metodo de Kjeldahl
El método Kjeldahl o digestión Kjeldahl en química analítica es un método para la
determinación cuantitativa del nitrógeno contenido en las sustancias orgánicas más el
nitrógeno contenido en los compuestos inorgánicos amoníaco y amonio (NH 3/NH4+).
Sin modificación a la técnica, otras formas de nitrógeno inorgánico, por ejemplo, el nitrato,
no se incluyen en esta medición. El uso de una relación empírica entre el contenido de
nitrógeno Kjeldahl y el contenido de proteínas es un método importante para analizar las
proteínas. Este método fue desarrollado por Johan Kjeldahl en 1883.

Un poco de historia del método kjeldahl

En 1883, Johan Kjeldahl ideó un método para la determinación del nitrógeno, que se ha
convertido en una medida clásica de la química analítica y se ha utilizado ampliamente
durante los últimos 130 años.

En el método original, se utilizaba únicamente ácido sulfúrico como medio de digestión. El

uso de un catalizador en la digestión Kjeldahl acelera la oxidación y completa la digestión
para permitir la posterior determinación del nitrógeno. Los catalizadores preferidos son el
mercurio (cuyo uso está en declive debido a la preocupación por el medio ambiente), el
selenio y el cobre, aunque para ciertas aplicaciones se ha utilizado el titanio.
Pueden conseguirse tiempos de digestión cortos, asociados a una máxima recuperación
de nitrógeno, utilizando una metodología basada en el diseño experimental y las
superficies de respuesta, con procesos de digestión por microondas, y con la ayuda de la
pareja ácido sulfúrico-peróxido de hidrógeno sin catalizador.
La cuantificación del amoníaco destilado se consigue generalmente por valoración; el
amoníaco se absorbe en un exceso de ácido bórico, seguido de una valoración con ácido
estándar en presencia de un indicador adecuado.

El método Kjeldahl puede realizarse con recursos limitados; la determinación del

nitrógeno con el método Kjeldahl no requiere dispositivos caros ni técnicas especializadas
y es precisa y exacta. El este método de análisis se utiliza para calibrar otros ensayos de
proteínas; todavía hoy es el principal método de referencia para el análisis de proteínas.

El método original se ha mejorado de manera continua. Los sistemas de digestión

actuales ofrecen seguridad tanto desde el punto de vista personal como medioambiental.
La determinación del contenido de nitrógeno es un análisis que se realiza con frecuencia
en la industria y el comercio, y numerosas organizaciones disponen de métodos oficiales.

Fundamento químico
El nitrógeno es uno de los cinco elementos principales que se encuentran en materiales
orgánicos como las proteínas. Este hecho fue reconocido por un químico danés, Johan
Kjeldahl, que lo utilizó como método para determinar la cantidad de proteínas en muestras
tomadas de una gran variedad de organismos. En 1883, Kjeldahl presentó a la Sociedad
Química Danesa un método (muy revisado desde su época) para determinar la cantidad
de nitrógeno en mezclas de sustancias que contienen sales de amonio, nitrato o
compuestos orgánicos de nitrógeno.

La base central utilizada en este

procedimiento es la oxidación del
compuesto orgánico utilizando ácido
sulfúrico fuerte. A medida que el material
orgánico se oxida, el carbono que
contiene se convierte en dióxido de
carbono y el hidrógeno se convierte en
agua.
Sistema automático de Kjeldahl, que facilita el empleo de este método

El nitrógeno, procedente de los grupos aminos que se encuentran en los enlaces

peptídicos de las cadenas polipeptídicas, se convierte en iones de amonio, que se
disuelven en la solución oxidante, y posteriormente pueden convertirse en gas amoníaco.

El método Kjeldahl de análisis de nitrógeno es el estándar mundial para calcular el

contenido de proteínas en una amplia variedad de materiales que van desde la
alimentación humana y animal, los fertilizantes, las aguas residuales y los combustibles
fósiles.

El método consiste en calentar una muestra a 360-410 °C con ácido sulfúrico concentrado
(H2SO4), que descompone («digiere» o «destruye») la muestra orgánica por oxidación
para liberar el nitrógeno reducido como sulfato de amonio.

A menudo se añaden catalizadores como el selenio, el Hg 2SO4 o el CuSO4 para que la

digestión sea más rápida. También se añade Na 2SO4 o K2SO4 para aumentar el punto de
ebullición del H2SO4. La digestión se completa cuando el licor se clarifica con la liberación
de humos. Se construye un sistema de destilación como el que se muestra a
continuación.

Montaje de digestión, nótese el uso de un balón Kjeldahl, que

tiene un fondo ovalado que facilita la digestión de la muestra

Montaje de destilación empleado en el

método Kjeldahl. En la parte superior se
debe colocar una trampa para evitar que
el material que se este destilando pase al
condensador y caiga en la trampa,
dañando el procedimiento.
Las tres etapas del método kjeldahl
El método Kjeldahl consta de tres pasos generales, que deben realizarse cuidadosamente
en secuencia, aunque los detalles de cada paso pueden variar según la revisión del
método que se escoja:

1. la muestra se digiere primero en ácido sulfúrico fuerte en presencia de un

catalizador, que ayuda a la conversión del nitrógeno amínico en iones de amonio,
2. a continuación, los iones de amonio se convierten en gas amoníaco, se calientan y
se destilan. El gas amoníaco es conducido a una solución de atrapamiento donde
se disuelve y se convierte de nuevo en ion amonio,
3. por último, se determina la cantidad de amoníaco que ha quedado atrapada
mediante una valoración con una solución patrón, y se realiza un cálculo.
Digestión
Este es el paso que más tiempo consume en el análisis. El objetivo de este paso es
romper los enlaces que mantienen unidos a los polipéptidos y convertirlos en sustancias
químicas más simples, como agua, dióxido de carbono y, por supuesto, amoníaco.

Estas reacciones pueden acelerarse considerablemente con la presencia de un

catalizador y de una sustancia neutra, como el sulfato de potasio (K 2SO4), que eleva el
punto de ebullición del ácido digestor y, por tanto, la temperatura de la reacción.
También se utilizan catalizadores para ayudar en el proceso de digestión; se han probado
muchos, como el selenio, el mercurio, el cobre o los iones de mercurio o cobre.

La digestión se puede llevar a cabo de la siguiente manera:

1. Pesar aproximadamente 1 g de la muestra que contiene proteínas, anotar el peso y

colocar la muestra en un matraz de digestión, junto con 12-15 ml de ácido sulfúrico
concentrado (H2SO4).
2. Añadir siete gramos de sulfato de potasio y un catalizador, normalmente cobre.
3. Llevar el tubo/frasco de digestión y la mezcla a una «ebullición» (entre 370oC y
400oC) utilizando un bloque de calentamiento.
4. Calentar la mezcla en el tubo/frasco hasta que se vean humos blancos, y luego
continuar el calentamiento durante unos 60-90 minutos.
5. Enfriar el tubo/frasco y añadir con precaución 250 ml de agua.
Destilación
El propósito del siguiente paso, la destilación, es separar el amoníaco (es decir, el
nitrógeno) de la mezcla de digestión. Esto se puede hacer de la siguiente manera:
 1. Elevar el pH de la mezcla con hidróxido de sodio (solución de NaOH al 45%). Esto
tiene el efecto de cambiar los iones de amonio (NH4+) (que están disueltos en el
líquido) a amoníaco (NH3), que es un gas.
2. Separar el nitrógeno de la mezcla de digestión destilando el amoníaco
(convirtiéndolo en un gas volátil, elevando la temperatura hasta el punto de
ebullición) y luego atrapando los vapores destilados en una solución atrapante
especial de unos 15 ml de HCl (ácido clorhídrico) en 70 ml de agua.
3. Retirar el matraz de atrapamiento y enjuagar el condensador con agua para
asegurarse de que todo el amoníaco se ha disuelto.
Titulación
Cuando el amoníaco se disuelve en la solución que atrapa el ácido, neutraliza parte del
HCl que encuentra allí. El ácido que queda puede entonces «retrovalorarse», es decir,
valorarse con una solución estándar y conocida de base (normalmente NaOH). De este
modo, se puede calcular la cantidad de amoníaco destilado de la solución digestiva y, por
tanto, determinar la cantidad de nitrógeno de la proteína.

La titulación en el método Kjeldahl tiene las siguientes características

1. Añadir un colorante indicador a la solución de atrapamiento de ácido/amoniaco.

Este tinte debe adquirir un color fuerte, lo que indica que todavía hay una cantidad
significativa del ácido atrapante original.
2. Poner una solución estándar de NaOH (hidróxido de sodio) en la bureta (un tubo
largo con un grifo en el extremo), y añadir lenta, lentamente, pequeñas cantidades
de la solución de hidróxido de sodio a la solución de ácido con el colorante.
3. Observar el punto en el que el colorante se vuelve naranja, lo que indica que se ha
alcanzado el «punto final» y que ahora todo el ácido ha sido neutralizado por la
base.
4. Registrar el volumen de la base neutralizadora (solución de hidróxido de sodio) que
fue necesario para alcanzar el punto final.
5. Realizar un cálculo para encontrar la cantidad de amoníaco, y por tanto de
nitrógeno, que procedía de la muestra original.
Cálculos
Un mol de amoníaco procedente de la mezcla de digestión (y, por tanto, de la proteína
original) neutralizará exactamente un mol de ácido en el matraz de captura.
Por lo tanto, el primer cálculo consiste en encontrar el número de moles de amoníaco que
se han producido y atrapado de su(s) muestra(s).

Esto se hace calculando el número de moles de ácido que había en el matraz de captura
originalmente (antes de atrapar cualquier amoníaco) multiplicando la molaridad de la
solución ácida por el volumen de la solución de captura.

Calcular el número de moles de base (NaOH) que se añadieron desde la bureta para
neutralizar el ácido restante (que NO neutralizado por el amoníaco).

restando los «moles de base» añadidos de los «moles de ácido» presentes al principio,
para obtener, el número de «moles de amoníaco» procedentes de la proteína, el número
de «moles de amoníaco» es el mismo que los «moles de nitrógeno», entonces, para
calcular el número de gramos de nitrógeno en la muestra original de proteína, multiplique
los «moles de nitrógeno» por la masa atómica del nitrógeno.

El porcentaje de nitrógeno encontrado en la muestra original puede calcularse ahora

dividiendo la masa de nitrógeno hallada en la masa de la muestra digerida y multiplicar
por 100.
 4. Confeccione una guía de laboratorio del método para la aplicación del
método Kjeldhal.
METODO KJENDHAL
1. Objetivos
 Determinar el Nitrógeno por el Método Kjeldahl
 Conocer el manejo de los materiales en la experiencia
2. Marco teórico

El método Kjeldahl se utiliza para la determinación del contenido de nitrógeno en

muestras orgánicas e inorgánicas. Desde hace más de 100 años se está utilizando el
método Kjeldahl para la determinación del nitrógeno en una amplia gama de muestras. La
determinación del nitrógeno Kjeldahl se realiza en alimentos y bebidas, carne, piensos,
cereales y forrajes para el cálculo del contenido en proteína.

También se utiliza el método Kjeldahl para la determinación de nitrógeno en aguas

residuales, suelos y otras muestras. Es un método oficial y descrito en múltiples
normativas: AOAC, USEPA, ISO, DIN, Farmacopeas y distintas Directivas Comunitarias.
El método Kjeldahl consta de tres etapas:

DIGESTION DESTILACION VALORACION

es destilado y
el nitrogeni recojido en un Se determina el
organico se recipiente nitrogeno
convierte en receptor

2.1. Digestión

El objetivo del procedimiento de digestión es romper todos los enlaces de nitrógeno de la

muestra y convertir todo el nitrógeno unido orgánicamente en iones amonio (NH4 +). El
carbono orgánico y el hidrógeno forman dióxido de carbono y agua. En este proceso la
materia orgánica se carboniza dando lugar a la formación de una espuma negra. Durante
la digestión, la espuma se descompone y finalmente se convierte en un líquido claro que
indica que la reacción química ha terminado. Para ello, la muestra se mezcla con ácido
sulfúrico a temperaturas entre 350 y 380 ºC. Cuánto más alta sea la temperatura, más
rápido será el proceso de digestión. La digestión también se puede acelerar con la adición
de sales y catalizadores. Se añade sulfato de potasio para aumentar el punto de ebullición
del ácido sulfúrico y se añaden catalizadores para aumentar la velocidad y la eficiencia del
procedimiento de digestión. También se pueden añadir agentes oxidantes para mejorar
aún más la velocidad.

MUESTRA CATALIZADOR

Proteína (−N ) + H 2 SO 4 ( NH 4)2 SO4 +CO 2 + H 2 O

Una vez la digestión ha finalizado, se deja enfriar la muestra a temperatura

ambiente, se diluye con agua y se trasvasa a la unidad de destilación.

2.2. Destilación
Durante el proceso de destilación los iones amonio ( N H 4 +) se convierten en
amoniaco (( N H 3 ) mediante la adición de un álcali (NaOH). El amoniaco ( N H 3) es
arrastrado al vaso receptor por medio de una corriente de vapor de agua.

El vaso receptor para el destilado se llena con una solución absorbente para
capturar el gas amoniaco disuelto.
 La solución absorbente más común es el ácido bórico [ B ¿ ] en solución
acuosa al 2-4%. El amoniaco es capturado cuantitativamente por la solución
de ácido bórico formando iones amonio solvatados.

B¿

 También pueden utilizarse otros ácidos, dosificados con precisión, como el

ácido sulfúrico o clorhídrico para capturar el amoniaco en forma de iones
amonio solvatados.

+ ¿¿
2−¿+2 N H 4 ¿
H 2 S O 2 ( total )+2 N H 3 S O4
2.3. Valoración

La concentración de los iones amonio capturados puede determinarse por medio de dos
tipos de valoración:

 Cuando se utiliza el ácido bórico como solución absorbente, posteriormente

se lleva a cabo una valoración ácido-base utilizando una solución
estandarizada de ácido sulfúrico o clorhídrico y una mezcla de indicadores.
El rango de concentración de la solución utilizada varía entre 0,01N a 0,5N
dependiendo de la cantidad de iones amonio presentes. El punto final de la
valoración también se puede determinar potenciométrica mente con un
electrodo de pH. Esta valoración se llama valoración directa.

−¿B¿¿

B(OH )4−¿+HX X ¿

HX =ácido fuerte (X =Cl , etc .)

 Cuando se utiliza una solución valorada de ácido sulfúrico como solución

absorbente, el ácido sulfúrico residual (es decir, el exceso que no reacciona
con NH3 ) se valora con una solución estandarizada de hidróxido sódico y la
cantidad de amoniaco se calcula por diferencia. Esta valoración se llama
valoración indirecta o por retroceso.
+ ¿+2 H 2 O ¿
2−¿+2 N a ¿
H 2 S O4 ( residual )+2 NaOH S O 4
 
2.4. Aplicaciones

Desde 1883 en que John Kjeldahl presentó sus trabajos, su método ha ganado una gran
aceptación y se aplica en una amplia variedad de trabajos para los análisis de alimentos,
bebidas, piensos, grano, carnes, aguas residuales, suelos para cultivos y otros. Hoy por
hoy es el método más usado para el análisis de proteínas y se efectúa mediante la
determinación de nitrógeno orgánico. Esto es así porque los diferentes tipos de proteínas
coinciden todas ellas en una proporción similar de dicho nitrógeno orgánico. En la mayoría
de los casos de utiliza el factor de cálculo siguiente:
En esta técnica se digieren las proteínas y otros compuestos orgánicos de los alimentos
en una mezcla con ácido sulfúrico en presencia de catalizadores. El nitrógeno orgánico
total se convierte en sulfato de amonio mediante la digestión. La mezcla resultante se
neutraliza con una base y se destila. El destilado se recoge en una solución de ácido
bórico. Los aniones de borato así formado se titulan con HCL estandarizado para
determinar el nitrógeno contenido en la muestra. En general, el método Kjeldahl tiene la
ventaja de poderse ejecutar mediante equipos no muy sofisticados y puede ser realizado
por técnicos poco experimentados.

2.4.1. Ventajas del método

 Apropiado para varios tipos de pro ductos.
 Alta confiabilidad.
 Usado como método de referencia.

2.4.2. Desventajas del método

 Interfieren compuestos nitrogenados no proteicos.
 Uso de catalizadores tóxicos o caros.
 Elección del factor de conversión.

3. Material y reactivos
 1 balón de Kjeldahl con capacidad de 500 ml.
 2 matraz de Erlenmeyer de 10 de 125 ml.
 1 mechero de Bunsen.
 2 pinzas (nueces).
 1 soporte universal
 1 pipeta de 10 ml.
 1 frasco gotero de 25 ml.
 2 botellas de plástico de capacidad 500 ml.
 1 piseta grande con agua destilada.
 1 bureta.
 3 tamaras de ebullición.
 1 par de guantes.
 1 pinzas largas.
  1 embudo de cristal.
 1 papel filtro
 

Muestra vegetal

 MATERIA ORGANICA

Reactivos

 Sulfato de cobre (0,6gr)

 Sulfato de potasio (7,5gr)
 Acido sulfúrico 12.5 ml (96%)
 Acido sulfúrico 0.25N-12,5 ml
 NaOH 50 ml (40%)
 NaOH 0,25 N
 Fenolftaleina
 Vaselina (para lubricar los instrumentos)

4. Desarrollo practico
Antes de iniciar con el método Kjeldahl.
1. Pesar 0,50 gr de la muestra seca y triturada de material orgánico
2. Colocar la muestra en un cartucho pequeño de papel filtro
4.1. Digestión
 Colocamos el cartucho con la muestra orgánica (de acuerdo al contenido
estimado de nitrógeno) de 0,5gr con una precisión de  1 mg, en un balón
Kjeldahl de 500 ml.

 Agregamos sulfato de sobre (CuSO4) 0,6gr y Sulfato de potasio (K2SO4)

7,5gr como catalizadores, y 12,5 ml de H2SO4 (96%).
 Todo el material debe estar sumergido en el ácido para que no haya
pérdidas de nitrógeno.

 Conectar el balón al soporte universal y debajo colocamos el mechero de

Bunsen; luego calentar enérgicamente hasta completar la digestión de la
 materia orgánica (no se observan partículas carbonosas sin oxidar y el
líquido queda translúcido y de color débilmente verdoso o azul-verdoso).

 La digestión demanda entre 1 y 2 hs. Enfriar y agregar cuidadosamente al

menos 100ml de agua hirviendo con 3 tamaras de ebullición.

IMPORTANTE: el balón de Kjeldahl debe

estar en una posición de 45° en todo
momento desde que contiene los
reactantes hasta finalizar la digestión.

4.2. Destilación
 Presentar el balón con la muestra digerida a un refrigerante por medio de una
trampa adecuada.

 Preparar un erlenmeyer con 12,5 ml de H 2SO4 0,25N (sobre el cual se va a

recoger el NH3 destilado), y colocarlo a la salida del refrigerante cuidando que el
extremo del mismo quede sumergido en la solución ácida.

 Antes de conectar completamente el balón se va agregando con cuidado la

cantidad necesaria de solución de NaOH 40% como para neutralizar el ácido
sulfúrico, primero sin agitar para que se ubique en el fondo, y una vez agregado
todo, conectar bien el balón, agitar para lograr la mezcla (el medio se hace
fuertemente alcalino que se detecta por formación de un precipitado pardo oscuro,
dispersado por efecto de la ebullición) y simultáneamente se comienza el
calentamiento a ebullición del contenido del balón. Se sigue destilando hasta llegar
a aproximadamente 200 ml en el erlenmeyer colector (los primeros 150 ml de
destilado contienen generalmente la totalidad del NH3). Una vez alcanzado dicho
 volumen, se retira el erlenmeyer enjuagando dentro del mismo el extremo del
refrigerante, para no perder nitrógeno y luego se apaga el calentamiento.

4.3. Valoración

El destilado se valora con solución de NaOH 0.25 N, hasta lograr el viraje del indicador
fenolftaleína al color inicial rosado

5. Analisis de datos

Los cálculos para él % de nitrógeno o de proteína deben tener en cuenta qué tipo
de solución receptora se utilizó y qué factores de dilución se usaron durante el
proceso de destilación. En las fórmulas siguientes, “N” representa la normalidad.
“ml blanco” se refiere a los mililitros de álcali consumidos en la valoración por
 retroceso de un blanco, si la solución receptora es ácido clorhídrico o ácido
sulfúrico estandarizados, o se refiere a mililitros de solución valorada de ácido para
titular un blanco si la solución receptora es ácido bórico.
 Cuando se utiliza ácido bórico como solución receptora, la fórmula es:

(ml ácido valorante−ml blanco) x N del ácido x 1,4007

% Nitrógeno=
peso de la muestra en gramos
 Cuando se utiliza solución valorada de ácido como solución receptora, la fórmula es:

[(ml de ácido x N del ácido)−(ml blanco x N del álcali)]−( ml álcali x N del álcali) x
% Nitrógeno=
peso de la muestra en gramos
 Proteína total
V muestra∗N acido∗14∗f ∗100
proteinatotal=
1000∗gr de muestra
Siendo:
 VMuestra ml de NaOH gastados en la valoración de la muestra
 NAciodo normalidad del NaOH
 F factor de conversión de nitrógeno a proteína(6,25)

 gmuestra peso en g de la muestra

dato: Si se desea determinar el % de proteína en lugar de nitrógeno, el % de N calculado

se multiplica por un factor que depende de la matriz de la muestra. Se han desarrollado
muchos factores de proteínas para usar con varios tipos de muestras.

A continuación se encuentra el factor a utilizar según el tipo de alimento

6. bibiografia

-, B. -P. (s.f.). BLOG - PRODUCTOS Y NOVEDADES -. Obtenido de

https://esp.labbox.com/metodo-kjeldahl/

ayala, g. q. (17 de noviembre de 2017). scribd. Obtenido de

https://es.scribd.com/document/364671187/Determinacion-Del-Contenido-de-
Proteinas-Por-El-Metodo-de-Kjeldahl#

PanReacAppliChem. (s.f.). Determinación de Nitrógeno. Obtenido de

https://www.itwreagents.com/uploads/20180122/A173_ES.pdf

5. Desarrolle paso a paso el método Dumas

El método Dumas, también conocido como método de combustión, es un método primario
de determinación de nitrógeno y proteínas que garantiza resultados rápidos, facilidad de
uso y seguridad.
Sin embargo, a menudo se considera una alternativa al método clásico de Kjeldahl.
Ambos métodos están validados por diversas organizaciones internacionales.

En algunos países, las directrices locales recomiendan un método sobre el otro. Es por
eso que muchos tomadores de decisiones y usuarios no están decididos entre los dos
métodos y entre seguir las pautas locales o los estándares internacionales.

Se aplican reglas estrictas sobre la composición de alimentos y piensos en mercados en

constante expansión. El análisis preciso de estos componentes es ahora fundamental
para cualquier empresa que quiera comercializar sus productos, especialmente a nivel
internacional.

VELP Scientifica ha desarrollado e introducido analizadores de nitrógeno Dumas basados

en la determinación de nitrógeno desde 2011. A diferencia del método Kjeldahl de uso
común, el método Dumas, también conocido como método de análisis elemental o
método de combustión, detecta el contenido total de nitrógeno, no solo el contenido en las
proteínas.

Un poco de historia del método Dumas

El método Dumas para la determinación de nitrógeno, desarrollado en 1831, es más

antiguo que el Kjeldahl, desarrollado en 1883, pero más barato en muchos aspectos,
como velocidad, seguridad, limpieza, productividad y coste por análisis.

El problema en el pasado era que no era fácil reproducir las condiciones requeridas por el
método Dumas y, por esta razón, la técnica de Kjeldahl se aprovechó y fue considerada
como el método clásico para la determinación de nitrógeno/proteínas.

Hoy, gracias a los avances tecnológicos, la determinación de nitrógeno mediante el

método  Dumas se está extendiendo cada vez más. Los resultados obtenidos con la
determinación de nitrógeno de Dumas suelen ser algo superiores a los obtenidos con
Kjeldahl, ya que también se detectan compuestos heterocíclicos y compuestos
nitrogenados (por ejemplo, nitritos y nitratos).

En el método Kjeldahl, tales compuestos se convierten de forma incompleta en el ión

amonio o no se convierten en absoluto. También podría suceder lo contrario (raramente)
porque en este tipo de análisis hay muchas variables que podrían influir en el resultado
final.

De hecho, existen muchas variaciones menores del método Kjeldahl, que implican el uso
de diferentes catalizadores, tiempos de calentamiento, volúmenes y distribución de ácido
sulfúrico y masas de las porciones de prueba: esto demuestra que el procedimiento
Kjeldahl puede verse afectado por errores experimentales. La recuperación es la misma
para ambos métodos (≥ 99,5%), mientras que el límite de detección es menor para
Dumas que para Kjeldahl (0,001 mg N absoluto frente a ≥ 0,1 mg N absoluto).

Datos acerca del método

Ventajas

 La automatización altamente eficiente de los lotes permite a los operarios cargar

las muestras y luego dedicarse a otras tareas del laboratorio.
 Muestra equivalencias satisfactorias al compararlo con el método de Kjeldahl en
análisis de forrajes, aunque con valores levemente mayores.
 Rapidez del proceso

Desventajas

 Este método no puede aplicarse a material húmedo por lo que debe efectuarse un
secado previo.
 Costo del equipo

Principios de funcionamiento

La determinación de nitrógeno con la técnica Dumas requiere muestras bien

homogeneizadas, calentadas en un horno de alta temperatura donde la combustión
ocurre rápidamente a más de 1000 °C en presencia de oxígeno puro. Esto produce
principalmente agua, dióxido de carbono y nitrógeno en forma de diferentes óxidos
(NyOx). Esta mezcla de gases pasa a través de una cámara de reducción que contiene
cobre calentado a unos 650 °C. Este paso convierte los óxidos de nitrógeno en nitrógeno
elemental y recoge el exceso de oxígeno. Las trampas específicas eliminan el agua
residual y el dióxido de carbono. El contenido total de nitrógeno se mide con un detector
de conductividad térmica.

Las etapas del método Dumas

Combustión
La muestra se pesa y se purifica de los gases atmosféricos, se introduce en un horno de
alta temperatura y se quema rápidamente en presencia de oxígeno puro a unos 1.000 ºC.
Esto conduce a la liberación de sustancias como dióxido de carbono, agua y, sobre todo,
nitrógeno en forma de diferentes óxidos (NyOx).
Muestra + O2 → CO2 + H20 + NxOy + O2 + otros óxidos

Reducción y separación
Los gases de combustión se recogen y pasan a un horno de alta temperatura y pasan a
través del cobre caliente para eliminar el oxígeno y convertir los óxidos de nitrógeno en
nitrógeno molecular. Las trampas específicas eliminan el agua y el dióxido de carbono.
CO2  +  H20 + NxOy + O2 + Cu →  CO2  +  H20 + N2 → N2

Detección 
La señal medida por el detector de conductividad térmica se convierte en contenido total
de nitrógeno. Se pueden usar EDTA, ácido aspártico, acetanilida, urea, atropina y otros
reactivos para crear curvas de calibración en el software DUMASoft TM  para traducir la
señal recibida por el TCD en mgN.