TINCION DE AMEBAS

Preparaciones efimeras
Las preparaciones efímeras son fáciles, rápidas y útiles paraobservar, discriminar y
diagnosticar estructuras parasitarias después de realizar los métodos coproparasitoscópicos
(cps): directo en fresco, de concentración/flotación (Faust, Ferreira) o concentración
sedimentación (Ritchie). La solución de lugol es de uso generalizado.

Lugol

Solución concentrada
Yoduro de potasio 10.0 g
Cristales de yodo 5.0 g
Agua destilada 100.0 ml
Solución de trabajo
Solución concentrada 5.0 ml
Agua destilada 15.0 ml

La solución concentrada debe almacenarse en la oscuridad y en frascos ámbar; quizá queden

cristales de yodo sin disolver, pero mientras éstos sean visibles la solución concentrada de
lugol está en buen estado para su uso. Cuando se prepara la solución de trabajo se debe
mantener la relación 1:3 de solución concentrada y agua, debe almacenarse en frascos ámbar
y evitar exceso de luz porque el yodo reacciona con la luz y pierde su color.

a) El procedimiento consiste en colocar la muestra sobre

un portaobjetos, emulsionarla con una gota de lugol,
cubrirla con un cubreobjetos y observarla al microscopio
con los objetivos de 10×, 20× y 40×. La figura
39-1 muestra trofozoítos de Blastocystis hominis teñidos
con lugol.

Preparaciones permanentes

Para observaciones exhaustivas es preferible hacer preparaciones permanentes con

colorantes que permitan mayor contraste, como Giemsa, hematoxilina férrica, negro de
clorazol, tricrómica de Gomori-Wheatley y Ziehl-Neelsen.

Giemsa

La tinción de Giemsa se utiliza para contrastar protozoarios hemáticos o intestinales.

Solución concentrada
Giemsa II-eosina 0.4 g
Giemsa II 0.2 g
Giemsa B-eosina 0.2 g
Glicerina 50.0 ml
Metanol 50.0 ml

La glicerina se coloca en baño María a 50 °C, se agrega el polvo de Giemsa y se mezcla

periódicamente durante 30 minutos. La solución se deja enfriar y se añade metanol. Se filtra y
almacena hasta su uso.
Para la elaboración de la solución concentrada también
es posible utilizar la siguiente fórmula, siguiendo la estrategia
antes descrita.
Solución concentrada
Giemsa en polvo 3.0 g
Metanol 250.0 ml
Glicerina 250.0 ml

Tricromica de Gomori-Wheatley

Al principio, la tinción de Gomori se utilizó en tejidos y Wheatley la usó en parásitos; este

método es más rápido que el de hematoxilina férrica. Es útil para diferenciar protozoarios
intestinales en donde se pueden ver algunos detalles del citoplasma y el núcleo. La tinción se
puede hacer en frotis de muestras antes preservadas en pva o en frotis con muestras frescas
y fijadas con Schaudinn.

Solución concentrada
Cromotropo 2R 0.6 g
Verde brillante SF 0.3 g
Ácido fosfotúngstico 0.7 g
Ácido acético 1.0 ml
Agua destilada 100.0 ml
Los reactivos secos son colocados en un frasco, se añade
el ácido acético, se mezcla y debe dejarse reposar durante 30
minutos. Luego se agrega el agua y se mezcla. Esta solución
puede durar varios años.

Procedimiento:
a) La preparación de las laminillas y la fijación se realizan
de manera similar al descrito en la tinción de hematoxilina.
b) Para eliminar el exceso de cloruro de mercurio del fijador
de Schaudinn, las laminillas son colocadas en alcohol a
70%-yodo durante un minuto.
c) Se lavan dos veces con etanol a 70%, durante un minuto.
d) Las laminillas son colocadas en la solución concentrada
de cinco a 10 minutos.
e) Se transfieren a etanol a 90% con 1% de ácido acético (10
a 15 segundos).
f ) Se sumergen dos veces en etanol absoluto.
g) Se ponen en etanol absoluto durante 30 segundos.
h) Se meten en xileno durante un minuto.
i) Las preparaciones se cubren con resina o bálsamo de Canadá,
se les coloca un cubreobjetos del número 1 y se
dejan secar.

Nota: Los portaobjetos se pueden teñir con rapidez,

pasándolos por una serie de frascos Coplin que contengan
cada uno de los reactivos. Otra estrategia es usar un solo
frasco Coplin, al que se le van cambiando los reactivos.

Con cualquiera de estas dos maniobras se pueden colorear

por lo menos 10 laminillas en un solo tren de tinción. Los
protozoarios adquieren diferentes tonalidades. El fondo se
ve sobre todo rojo o verde, en tanto que los protozoarios
toman un color más neutro, casi siempre gris o verde pálido.
Los cuerpos cromatoides y eritrocitos toman tanto
el color rojo como el colorante verde, con lo que se genera
un fuerte contraste en el citoplasma; por lo regular
los elementos nucleares se tiñen de un color más oscuro.
En la figura 39-3 se observan arenillas hidatídicas teñidas
mediante este método.