12 Lectinas UNFV

Universidad Nacional
Federico Villarreal Facultad de Tecnología Médica
Reglas de convivencia
 Llega temprano a tus clases

 Pon tu celular en modo de vibración.
 Escucha atentamente al profesor.
 Levanta la mano para hacer preguntas.
 Participa activamente.
 Responde individualmente las preguntas.
Cualquier
pregunta que
hagas es buena!!
Microtomía
Detalles para obtener un buen
corte
1.- Cuchilla bien afilada
2.- Bloque frío
3.- Bloque orientado
4.- Eliminar parafina lateral
Microtomía
Baño de flotación
Equipo que permite el
estiramiento de las
secciones histológicas,
a través de agua
temperada a 40 ºC.
Microtomía
Planchas de secado
Equipo que permite el
secado y adherencia
de la sección de tejido
a la lámina
portaobjeto a través
de una temperatura de
70 a 80 ºC.
Xilol Xilol Alcohol Alcohol Alcohol Alcohol Agua de

absoluto absoluto corriente corriente caño
Desparafinar Hidratar
Hematoxilina de Harris
Solución de trabajo de eosina

Agua de Alcohol Alcohol Alcohol Alcohol

Xilol Xilol
caño corriente corriente absoluto absoluto
5 lavadas 5 lavadas 5 lavadas 5 minutos 5 minutos 5 minutos 5 minutos
Deshidratar Desalcoholizar
y montar con
bálsamo de
Canadá
El Anatomopatólogo le pregunta:
Qué método me recomendaría usted para demostrar

monosacáridos o disacáridos u oligosacáridos qué
conforman la membrana celular y el producto de
secreción de la glándula endometrial en este caso de
hiperplasia
1) Hacemos un paréntesis para preguntarnos de donde

podemos obtener la información para responder a esta
pregunta que nos hace el Anatomopatólogo.
2) En donde buscamos la información para responder a estas

preguntas:
• ¿Qué monosacáridos o disacáridos u oligosacáridos conforman la
membrana celular y el producto de secreción de la glándula
endometrial?.
• ¿Qué método aplico para su demostración?.

Azúcares de la membrana
 celular
La química de las membranas celulares:
 Lípidos
 Proteínas
 Glúcidos (hidratos de carbono)
 Se presentan como oligosacáridos
 Las células están “cubiertas de azúcares”.
celular(hidratos de carbono) formando:
 Glúcidos
 Glucolípidos
 Glucoproteínas
 Cara extracelular o cara luminal

 Responsables del proceso de señalización y
reconocimiento celular
celular
 La superficie externa de las células esta cubierta
por el glucocáliz.
 Glucocáliz formado por los hidratos de carbono
provenientes de la membrana celular.
Oligosacáridos ligados a las

proteínas de la membrana celular
Son 9:
 D-glucosa, D-galactosa y D-manosa.
(estereoisómeros)
 L-fucosa (similar a los anteriores, pero con un
átomo menos de oxígeno.)
 L-arabinosa, D-xilosa (estereoisómeros)
Oligosacáridos ligados a las

proteínas de la membrana celular
 N-acetil-D-glucosamina, N-acetil-D-galactosamina.
(estereoisómeros) con un grupo acetilamino (-
NHCOCH3) unido.
 Ácido N-acetilneuramínico (a veces denominado
ácido siálico)
Facultad de Tecnología Médica
Laboratorio y Anatomía Patológica
Lectino-histoquímica
Mg. Eduardo Eulogio Sedano Gelvet
Semestre Académico 2020

Competencias
Una vez finalizada esta clase, el estudiante:

 Reconoce qué son las lectinas
 Define cómo se une la lectina con el carbohidrato
 Reconoce como demostrar carbohidratos en una sección de tejido
aplicando lectinas
 Reconoce las lectinas que se usan para demostrar carbohidratos
en una sección de tejido
Lectinas
 Propuesto por Boy y Sharpleigh en 1954, deriva del latin
legere (seleccionado, escogido) y se refiere a la capacidad
de unión selectiva de azucares particulares.
 Generalizado en 1972 para proteínas ligadoras de

azucares y aglutinadoras de células que no poseen un
origen inmune y son encontradas en animales, vegetales y
microorganismos (Sharon y Lis, 1989).
Lectinas
 Enlazan de forma específica y reversible a carbohidratos
libres (en suspensión) o que forman parte de estructuras
complejas (superficie celular).
 Reconoce carbohidratos específicamente por:

 Enlaces tipo puentes de hidrógeno.
 Iones.
 Interacciones hidrófobicas.
 Complementación espacial
Lectinas
 Precipitan glicoconjugados.
 Poseen al menos 2 sitios de reconocimiento de

carbohidratos, de ahí su capacidad para aglutinar células.
 No poseen actividad enzimática.

Origen:
 Vegetales
 Animales: mamíferos y hemolinfa y órganos sexuales de:
cangrejos, camarones, caracoles, lombrices y moluscos.
 Bacterias.
 Hongos.
 Virus.
Origen vegetal
Vegetales:
 Existen más de 200.
 Se clasifican de acuerdo con la taxonomía (genero) de las
especies vegetales:
 Graminea
 Solanacea.
 Canavalia
 Las semillas de leguminosas son particularmente fuentes

ricas de lectinas (Carlini y Grossi-de-Sa, 2002).
 En cotiledones y endospermos de las semillas:
 Trigo. Concanavalina A
 Frijol.
 Soja
Especie: Canavalia ensiformis (frijol)

Se une a: aD-glucosa y aD-manosa
Propiedade
s:
 La mayoría reconocen y se unen a monosacáridos:
 Manosa.
 Glucosa
 Galactosa
 N-acetilglucosamina
 N-acetilgalactosamina
 Fucosa
Propiedade
s:
 En general, tienen mayor afinidad por los
oligosacáridos.
 No son inhibidas por un solo carbohidrato por lo que
las designa como de especificidad compleja.
Estructur
a:
 Una cadena polipeptidica.
 2 a 15 monosacaridos:
 D-manosa.
 D-galactosa.
 D-glucosa
 L-fucosa.
 N-acetil-glucosamina
Propiedades biológicas:
 Unirse a glicoconjugados presentes en la superficie de
células.
 Aglutinación de:
 Eritrocitos.
 Linfocitos.
 Espermatozoides
 Plaquetas.
 Bacterias.
Propiedades biológicas:
 Inducción de mitosis en linfocitos.
 Efectos citotoxicos en linfocitos.
 La lectina de frijol tépari ha mostrado efectos citotóxicos
sobre diferentes líneas celulares de cáncer humano.
Aplicaciones de las lectinas

vegetales:
 Purificación de glicoconjugados.
 Estudios citogenéticos.
 Ensayos enzimáticos.
 Tipaje de grupos sanguíneos.
 Western blots.
 Actividad antitumoral y anticancerígena1
1 Castañeda-Cuevas, A.L., Yllescas Gasca, L., López Martínez, F.J., Mendiola Olaya, E., Blanco Labra, A., García Gasca T.
“Efecto Antiproliferativo In Vitro de una Lectina De Frijol Tépari sobre Diferentes Tipos de Cáncer Humano”. 2°
Congreso Nacional de Química Médica. México. 2006. RESPYN Edición especial No. 7-2007
Lectinas
(En secciones de tejidos)
 Se une a los residuos glicoproteicos y glicoproteínas
constituyentes de la membrana plasmática de los
organismos vivos (Drikamer y Carver, 1992),
 Podemos detectar la presencia de un glúcido determinado

en la membrana plasmática de la célula mediante la
especificidad de unión de las lectinas con ellos (Slifkin y
Doyle, 1990).
Lectinas
 Visualizar residuos específico de carbohidratos y obtener
información sobre la ubicación y cambios cualitativo y
cuantitativo de este en el tejido.
 Los cambios en la unión de lectina han sido observado en

una variedad de células y tejido en el curso de la división
celular, maduración y diferenciación1
1. Brooks SA, Leathem AJC, Schumacher U. Lectin Histochemistry: A Concise Practical Handbook. Oxford,
England: Bios Scientific Publishers, Ltd; 1997.
Lectinas
 Detectar y estudiar:
 Cambios estructurales de glicoproteínas;
 Carbohidratos en células y orgánulos subcelulares
 Cambios en la glicosilación de la glicoproteína
 Mapeo de vías neuronales
 Identificación celular.
Lectinas
 Identificación, localización y diferenciación in situ de los

carbohidratos tisulares con especificidad y selectividad,
tanto en tejidos normales como patológicos y
constituyéndose en pruebas histoquímicas sensibles para
definir cambios en el comportamiento celular2.
 Como alternativa al uso de las técnicas inmunohistoquímica.
2. Damjanov I. Biology of disease. Lectin cytochemistry and histochemistry. Lab Invest 1987; 57: 5-20
Aplicaciones histoquímicas
Las lectinas son carbohidratos unidos a proteínas, de
origen no inmune, que aglutinan y/o precipitan
glucoconjugados, permitiendo la identificación,
localización y diferenciación in situ de los carbohidratos
tisulares con especificidad y selectividad, tanto en tejidos
normales como patológicos y constituyéndose en pruebas
histoquímicas sensibles para definir cambios en el
comportamiento celular(2).
2 Damjanov I. Biology of disease. Lectin cytochemistry and histochemistry. Lab Invest 1987; 57: 5-20
Federico Villarreal Aplicaciones histoquímicas Facultad de Tecnología Médica
 Ensayos histoquímicos:
 Estudio de la estructura de las membranas.
 Cambios o diferencias estructurales en los glicoconjugados presentes

en las superficies celulares.
 Detectar cambios morfológicos ocurridos, para analizar la

distribución subcelular de epitopes y terminales glicoproteicos.

 Subpoblaciones de leucocitos humanos pueden diferenciarse mediante el empleo
de lectinas fluorescentes (Lee et al., 1987)
 Lectina obtenida del tomate (Lycopersicum esculentum) se une al residuo glucosilado N-

acetil- lactosamina, que se encuentran en la membrana citoplasmática de las células de
microglía o en las células macrofágicas.

 Glándulas salivales para estudiar el patrón de glicosilación de los glucoconjugados
de los gránulos secretorios en células parenquimatosas de una gran variedad de
especies2.
2
.
Garret J, Proctor G, Zhang X, Shori D, Schulte BA. Use of lectin-probes for correlative histochemical and biochemical assessment of the
glycosylation patterns of secretory proteins, including kallikreins, in salivary glands and saliva. Histol Histopathol 1996; 11: 503 - 512
 Detección de transformaciones malignas en células:
• Las células cancerígenas comúnmente cambian sus patrones de

glicosilación en la superficie celular, razón por la cual son
reconocidas de forma diferencial por lectinas.
• Identificación de oligosacáridos en sustancias mucinosas, en

procesos tumorales.
Conjugados:
 Lectina-fluorocromo (Lee et al., 1987)
 Lectina-enzima
 Lectina-oro coloidal (Eguchi et al., 1989; Nakajima et al.,
1988).
Conjugados:
Corte de colon. La lectina WGA se

observa con fluorescencia naranja
indicando la presencia de hidratos
de carbono con N-acetilglucosamina
Conjugados:
Corte de colon. La lectina PNA se

observa con fluorescencia verde
indicando la presencia de hidratos de
carbono con galactosil N-
acetilgalactosamina.
Conjugados:
 Lectina-enzima
Conjugados:
 Lectina-enzima
Conjugados:
 Lectina-enzima
Conjugados:
 Lectina-enzima
Conjugados:
 Lectina-enzima
Conjugados:
 Lectina-enzima
Epitelio de la tráquea Las células

glandulares presentan una
acumulación apical de hidratos
de carbono ricos en galactosil y
N-acetilgalactosamina. Se utilizó
la lectina PNA, que fue
evidenciada mediante reacción
enzimática para peroxidasa.
Caso 1
Un grupo conformado de 60 mujeres de 35 años que en
horas de la mañana son auscultadas por el ginecólogo
quien indica frotis de secreción cervicovaginal y biopsia
endometrial. El resultado de los exámenes citológicos e
histopatológicos es hiperplasia endometrial
Caso 1
A las biopsias endocervicales de este grupo conformado
de 60 mujeres de 35 años, se le aplica un panel de
lectinas. Dando positivo a la L fucosa 10 pacientes.
Caso 1
Después de un año sin recibir tratamiento se les vuelve a
tomar biopsias endocervicales a este grupo conformado
de 60 mujeres pero ya de 36 años, se le aplica un panel
de lectinas. Dando positivo a la L fucosa las mismas 10
pacientes, pero ahora con diagnóstico de
adenocarcinoma endometrial.
Carcinoma de endometrio (L fucosa +) (lectina ULEX 1)

Conclusión
Método de coloración de H-E. Reacción de PAS-hematoxilina. Método del alcian blue-hematoxilina. Método del lectina-peroxidasa.
El polo apical aparece como Mediante esta reacción Mediante esta método comprobamos Mediante esta método
vacío. Nada nos dice sobre la comprobamos la presencia de que el material secretorio contiene comprobamos que el
naturaleza química del hidratos de carbono en el glucosaminoglucanos ácidos. glucosaminoglucano ácido
producto de secreción. material a secretar. la flecha contiene galactosil y N-
azul señala la membrana basal. acetilgalactosamina.
Sociedad Peruana
de Histotecnología
SPHT
Muchas gracias a ustedes por compartir
conmigo lo más importante que tienen………..
vuestro tiempo*
Alguna pregunta
*Mónica Guevara Vargas . Asesor Científico. SIMED Perú SAC

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Xilol Xilol Alcohol Alcohol Alcohol Alcohol Agua de

Solución de trabajo de eosina

Agua de Alcohol Alcohol Alcohol Alcohol

5 lavadas 5 lavadas 5 lavadas 5 minutos 5 minutos 5 minutos 5 minutos

Qué método me recomendaría usted para demostrar

1) Hacemos un paréntesis para preguntarnos de donde

2) En donde buscamos la información para responder a estas

• ¿Qué método aplico para su demostración?.

 Cara extracelular o cara luminal

Oligosacáridos ligados a las

Oligosacáridos ligados a las

Mg. Eduardo Eulogio Sedano Gelvet

Semestre Académico 2020

Una vez finalizada esta clase, el estudiante:

 Generalizado en 1972 para proteínas ligadoras de

 Reconoce carbohidratos específicamente por:

 Poseen al menos 2 sitios de reconocimiento de

 No poseen actividad enzimática.

 Las semillas de leguminosas son particularmente fuentes

Especie: Canavalia ensiformis (frijol)

Aplicaciones de las lectinas

 Podemos detectar la presencia de un glúcido determinado

 Los cambios en la unión de lectina han sido observado en

 Identificación, localización y diferenciación in situ de los

 Como alternativa al uso de las técnicas inmunohistoquímica.

 Cambios o diferencias estructurales en los glicoconjugados presentes

 Detectar cambios morfológicos ocurridos, para analizar la

 Cambios o diferencias estructurales en los glicoconjugados presentes

 Lectina obtenida del tomate (Lycopersicum esculentum) se une al residuo glucosilado N-

 Cambios o diferencias estructurales en los glicoconjugados presentes

• Las células cancerígenas comúnmente cambian sus patrones de

• Identificación de oligosacáridos en sustancias mucinosas, en

Corte de colon. La lectina WGA se

Corte de colon. La lectina PNA se

Epitelio de la tráquea Las células

Carcinoma de endometrio (L fucosa +) (lectina ULEX 1)

*Mónica Guevara Vargas . Asesor Científico. SIMED Perú SAC

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