PRACTICA 3.

DETERMINACION DE GLUCOSA EN
PLASMA

Clase 1
Mg. Edwin Zarzosa Norabuena
 METABOLISMO DE LA GLUCOSA

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 REGULACION HORMONAL DE LA
GLUCOSA

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 GLUCOSA EN PLASMA

50 80 160
mg/dL mg/dL mg/dL

HIPOGLICEMIA NORMAL HIPERGLICEMIA

70 – 100 mg/dL
DIABETES MELLITUS

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 HIPOGLICEMIA

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 DIABETES MELLITUS

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 GUIA ALAD 2019

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 OBJETIVOS DE LA PRACTICA
• Determinar la concentración de glucosa en plasma mediante un
método espectrofotométrico y compararlo con los rangos de
referencia.

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 FUNDAMENTO DE LA REACCION
GLUCOSA
OXIDASA

O2 H2o H2O2

GLUCOSA ACIDO GLUCONICO

PEROXIDASA
REACCION DE TRINDER
2H2O2

4-AMINOFE 4-HIDROXI QUINONIMINA

NAZONA BENZOATO

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 EQUIPOS

Espectrofotómetro

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 El espectrofotómetro
https://www.youtube.com/watch?v=wS0va4G2UMA

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 EQUIPOS

Cronometro
Centrifuga Estufa

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 MATERIALES
Micropipetas

Tubos de vidrio Cubetas del

13x100 ml espectrofotómetro

Recipiente de
bioseguridad
Tips amarillos (10 – 200uL) y
25/04/2023 Mg. Edwin Zarzosa Norabuena azules (100-1000uL).
 MUESTRA
Suero o plasma.
Centrifugar y separar
en la hora siguiente de
su obtención.
Disminuye la glucosa
5-7% cada hora por
glicolisis de los
hematíes y leucocitos.
Para evitarlo, se
emplean tubos con gel
o tubos con fluoruro
sódico.
En ayuna de 8 horas.

1. Se toma una muestra de 2. Se coloca el tubo en una

sangre de la vena del centrifuga a 3000 rpm
antebrazo, con una aguja y durante 5 minutos
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un tubo sin anticoagulante
 TOMA DE MUESTRA DE SANGRE VENOSA
https://www.youtube.com/watch?v=zq06IfQHKEk&feature=youtu.be

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 REACTIVOS

Kit de reactivo para determinar glucosa.

Contiene:
Estándar: solución de glucosa 100 mg/dL
Reactivo: solución conteniendo glucosa oxidasa (GOD), peroxidasa (POD), 4-
aminofenazona (4-AF), buffer fosfatos pH 7,0 y 4-hidroxibenzoato.
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 PROCEDIMIENTO
1. En tres tubos de ensayo
previamente rotulados adicione 4. Anotar los resultados de
según el siguiente esquema: absorbancia (A) de los tubos
ST y M

B ST M 2. Mezclar e incubar
durante 5 minutos a
37ºC.

Reactivo A (mL) 1.0 1.0 1.0

3. Colocar en una cubeta y

Standar (uL) 10
realizar la lectura en el
espectrofotómetro a 505 nm,
Muestra (uL) 10 frente al blanco
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 CALCULO DE LOS RESULTADOS
5. Calcule la concentración de glucosa en la muestra con la siguiente formula:
• Concentración muestra (mg/dL) = A M x Concentración estándar
A ST
• A del estándar (ST): 0.300
• A de la muestra (M): 0.179
• Concentración del estándar = 100 mg/dL

6. Determine si el valor se encuentra dentro del rango de referencia:

70 - 100 mg/dL
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 BIBLIOGRAFIA
• Alvaro Gonzales Hernandez. Principios de bioquímica clínica y
patología molecular. 3ª ed. Elsevier España. 2019.
• Murphy M, Srivastava R, Deans K. Bioquímica clínica. Texto y atlas en
color. 6ª ed. Elsevier España. 2020.
• Asociación Latinoamericana de Diabetes. Guías ALAD sobre el
diagnóstico, control y tratamiento de la Diabetes Mellitus Tipo 2 con
Medicina Basada en Evidencia Edición 2019. En:
• http://www.revistaalad.com/guias/5600AX191_guias_alad_2019.pdf

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