TEORÍAS SOBRE LA
REPLICACIÓN DEL DNA

                              
MODELO DE REPLICACION SEMICONSERVATIVA

MESELSON Y STAHL(1958)
EXPERIMENTO DE MESELSON Y STAHL

.
 
 
ULTRACENTRIFUGACIÓN EN GRADIENTES DE DENSIDAD DE CsCl
1,7g/cm3
+DNA

N-15 N-14
Replicación
semiconservativa: N15
Experimento de
Meselson y Stahl
Generación 0

N14

Generación 1

Análisis del DNA Interpretación

del resultado

Generación 2
                                                 

                                                                                                                     
nucleosoma
COMPOSICIÓN DEL
NUCLEOSOMA:
EXPERIMENTO DE
DIGESTIÓN CON
NUCLEASAS

Nucleosoma
límite o “core”
146 pb

Mathews
146
 Nucleosoma
DNA 200 pb + Histonas:
2 x (H2A,H2B,H3,H4)+ H1

Nucleosoma límite:
DNA146 pb + Histonas: 2 x
(H2A,H2B,H3,H4)
DNA espaciador 54pb
Histona H1
LAS HISTONAS
 Ensamblaje del núcleo de
histonas del nucleosoma

Figure 4-26 Molecular Biology of the Cell (© Garland Science 2008)

El CICLO CELULAR EUCARIOTA
FASES DEL CICLO CELULAR : INTERFASE Y MITOSIS
LAS FASES DE LA MITOSIS
NIVELES DE COMPACTACIÓN DEL DNA EUCARIÓTICO DURANTE EL
CICLO CELULAR
NIVELES DE COMPACTACIÓN DEL DNA EUCARIÓTICO DURANTE EL
CICLO CELULAR
COMPACTACIÓN DE LA CROMATINA: FIBRAS DE 10 y 30 nm
(solenoide)
FIBRA DE 300nm: organización en rosetas (6 bucles / vuelta)
COMPACTACIÓN DEL CROMOSOMA EN METAFASE (700 nm cada
cromátida)

1 vuelta 30 rosetas

ROSETA (6 bucles / vuelta)

SOLENOIDE (6 nucleosomas / vuelta)

LA REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR) Y SUS
APLICACIONES
PCR (Polymerase Chain Reaction)

Kary Mullis 1986

OBTENCIÓN IN VITRO UN GRAN NÚMERO DE COPIAS DE UN FRAGMENTO
DE DNA

DNA
PCR
Muchas
moleculas
amplificación
 COMPONENTES DE UNA REACCIÓN DE PCR

•DNA a amplificar (diana)

•primers (18-25 nts)
•dNTPs
•DNA polimerasa termoestable

DNA Taq pol (Thermus aquaticus)

Activa a 95ºC .

CICLO DE AMPLIFICACIÓN: ETAPAS

DESNATURALIZACION:90-95ºC, 1 min.

HIBRIDACION DE LOS CEBADORES: 40-

60ºC (esta temperatura depende de la Tm del
cebador), 30 - 45 segundos.

EXTENSION: 70-75ºC, 1-2 min.

NUMERO DE CICLOS: 20-40

ETAPAS DE LA REACCION DE PCR

DESNATURALIZACION
Separación de las cadenas
del DNA molde

HIBRIDACION
Unión de los cebadores a
las secuencias
complementarias del DNA
molde

ELONGACION
Elongación de los
cebadores mediante la
Taq DNA polimerasa
SÍNTESIS DE DNA EN EL PRIMER CICLO DE AMPLIFICACIÓN
REPETICIÓN DE CICLOS DE AMPLIFICACIÓN
PCR: AMPLIFICACIÓN EXPONENCIAL DE UNA SECUENCIA DE DNA

•La repetición de ciclos sucesivos consigue una amplificación exponencial

del fragmento de DNA deseado
ANÁLISIS DEL DNA AMPLIFICADO POR PCR

TERMOCICLADOR: realiza los ciclos de

amplificación del DNA a las temperaturas
y tiempos programados de forma exacta.

ANÁLISIS DE LOS FRAGMENTOS DE DNA AMPLIFICADOS

MEDIANTE ELECTROFOREISIS

Electroforesis en gel de agarosa

APLICACIONES DE LA PCR
• SECUENCIACIÓN GENÓMICA: PROYECTO GENOMA HUMANO

• MEDICINA
-DIAGNOSTICO DE ENFERMEDADES GENÉTICAS. Diagnóstico de mutaciones génicas
- DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS. Genotipado de microoganismos.

• HUELLA GENÉTICA
- IDENTIFICACIÓN DE PERSONAS. Pruebas de paternidad y Medicina forense

• INGENIERIA GENÉTICA
-TERAPIA GÉNICA. BIOTECNOLOGÍA. TRANSGÉNICOS

• DNA FOSIL
-Caracterización genética de individuos y poblaciones del pasado.