Microscopio Optico Compuesto:

• Definiciones de:
– Microscopio y microscopía
– Amplificación de la imagen • Definición de Microscopio
– Poder de resolución electrónico:
– Longitudes de onda útiles para la microscopía de luz
– Importancia de la microscopía en la biología – Formación de la imagen
– Microscopía de luz y Microscopio electrónico – Poder de resolución
• Microscopio óptico compuesto (MOC):
– Localización y función de las partes del MOC – Tipos de microscopio electrónico
• Ópticas y sus aplicaciones:
• Mecánicas
• Manejo y mantenimiento del microscopio óptico compuesto
• De barrido
– Formación de la imagen • De transmisión.
• a. Real y Virtual
– Poder de resolución (magnificación)
• PREPARACIONES TERMPORALES Y
– Tipos de microscopio óptico y sus aplicaciones: PERMANENTES
• Campo claro
– Tinciones
• Contraste de fases
• Fluorescente – Medios de montaje
• Luz polarizada
• Campo oscuro
– Elaboración de informes de
• Confocal laboratorio
• Videomicroscopía digital
 Microscopio, del griego: "mikro" = pequeño y
"scopeõ" = mirar (para mirar cosas pequeñas)

se clasifican en:

MICROSCOPÍA MICROSCOPÍA
MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA
DE LUZ

De acuerdo con la radiación que

utilizan
 La naturaleza de la luz
• Puede ser descrita mediante dos modelos:
– Por su forma de propagación, naturaleza ondulatoria (James
Clerk Maxwell)
– Por su forma de interactuar con la materia, naturaleza
corpuscular ó fotónica (Albert Einstein)
• Forma parte del espectro electromagnético
• Luz blanca está constituida por varios colores diferentes (Isaac
Newton)

Espectro electromagnético
 Luz visible
 Forma parte de una estrecha franja que va
desde longitudes de onda de 400 nm (violeta)
hasta los 700 nm (rojo). (0.4 – 0.7 m)
ESPECTRO
ELECTROMAGNÉTICO
ESPECTRO VISIBLE
 El espectro de luz visible puede ser percibido
por el ojo humano y su frecuencia determina su
color.
Medidas Microscópicas
• Milímetro: milésima parte del metro (mm)
• Micrómetro: milésima parte del milímetro (m)
• Nanómetro: milésima parte del micrómetro (nm)
• Angstrom: décima parte del nanómetro (Aº)
 Las Lentes
• Objetos que concentran o
divergen los rayos de luz

• Existen dos tipos principales

de lentes:
 Convergentes: forman
Lentes convergentes
imágenes reales
 Divergentes: forman
imágenes virtuales

Lentes divergentes
Conceptos en microscopía Ocular 10x
Objetivo 10x
 Amplificación: Aumento del tamaño Aumento Total 100x
de la imagen.
Amplificación total: Dado por el producto
de la lente ocular por el objetivo.

 Amplificación Vacía:
Incremento de la imagen sin que pueda
percibirse mayores detalles.

Poder de Resolución: capacidad para

ver puntos vecinos como entidades
diferentes.
El límite de resolución del microscopio
de luz es de 0.2 micrómetros (0.22 μm)
ó 200nm.
Microscopio
compuesto
fabricado en
1751 por
Magny.
 El microscopio compuesto
• Instrumento óptico que se usa para
aumentar o amplificar las
imágenes de objetos y organismos
no visibles a simple vista.
• Se utiliza para examinar objetos
transparentes o cortados en
láminas tan finas que se
transparentan

• Está conformado por tres sistemas:

1. Iluminación
2. Óptico
3. Mecánico
Formación de la imagen
 1. Campo claro, brillante o luminoso:
La luz proveniente de la fuente converge sobre la
muestra se forma un campo brillante alrededor de la
imagen de la muestra.
• El contraste lo provee la tinción de
las muestras

Imágenes con
microscopio de
campo claro
MICROSCOPIOS DE CAMPO CLARO, BRILLANTE Ó LUMINOSO

                                                                                                                
        

Microscopio óptico Microscopio óptico convencional con doble

convencional óptica para aprendizaje
TEMPORALES Muestra +Colorante +
Medio de Montaje
Muestra + Fijadores +
PERMANENTES Tinción + Medio de
Montaje

Cubreobjeto

Portaobjeto
2. Contraste de Fases:
Detecta diferencias en el
índice de refracción y de
grosor.

Permite observar muestras vivas, o carentes de color sin usar colorantes

3. Fluorescencia:
Utiliza moléculas fluorescentes que al iluminarlas con
radiación invisible, emiten radiación visible.
Utiliza luz de longitud de onda corta (UV) para activar los
electrones de la muestra.

Bacillus subtilis
esporulando teñidos Fibroblastos teñidos con el
con FITC, DAPI y fluorocromo FITC
βgalactosidasa.
La muestra se “tiñe” con una sustancia fluorescente (fluorocromos) que
absorbe la energía de las ondas cortas de la luz y emite la luz de
longitudes de ondas más largas (verde).
 4. DE LUZ POLARIZADA:
• Se basa en la birrefringencia (emite
. brillantez) de los objetos.
• Utiliza luz polarizada plana.
• Las muestras se colocan entre dos
láminas polaroid que tienen sus
direcciones de vibración
perpendiculares

Cristales de ácido urico observados con

microscopio de luz polarizada
 5. MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO

• Dispositivo que permite transmitir la luz de forma

circular, dejando el centro oscuro.
• Con esto conseguimos que el fondo de la muestra
aparezca negro y los especímenes brillantes.
• El objeto iluminado dispersa la luz y se hace así
visible contra el fondo oscuro que tiene detrás, como
las partículas de polvo iluminadas por un rayo de sol
que se cuela en una habitación cerrada.
• Las porciones transparentes del
espécimen quedan oscuras,
mientras que las superficies y
partículas se ven brillantes, por la
luz que reciben y dispersan en
todas las direcciones
• Se utiliza para analizar elementos
biológicos transparentes y sin
pigmentar, invisibles con
iluminación normal, sin fijar la
muestra, es decir, sin matarla.
6. Confocal: Combina la microscopía fluorescente con
el análisis electrónico de la imagen para obtener
imágenes tridimensionales.

Utiliza muestras
de cortes seriados
teñidas con
fluorescencia, para
reconstruir una
imagen
tridimensional
Microscopio
confocal
 HA
ELEC Z DE
TRON
ES

CÁMARA AL VACÍO

LENTES: ELECTROIMANES

MICROSCOPIO
ELECTRÓNICO

IMAGEN: EN UNA PANTALLA

• El factor limitante del poder de resolución del
microscopio compuesto, es la longitud de onda de
la luz

Imagen en microscopio
compuesto Imagen en microscopio
Debido a que el microscopio electrónico
utiliza electrones y los electrones tienen
una longitud de onda de 0.004 nm
(100,000 más corta que la de la luz),
pueden mostrar estructuras mucho más
pequeñas, por lo que presentan alto
poder de resolución.
Hay dos tipos básicos de Microscopios
Electrónicos, en ambos

• El de transmisión (Transmission Electron

Microscope, TEM)

• El de barrido (Scanning Electron Microscope,

SEM).
Microscopía de transmisión: Los electrones pasan
a través de la muestra, la cual debe cortarse
en finas capas. Límite de Resolución de 1 a 2 nm
Microscopía de Barrido o tridimensional:
Los electrones chocan (barren) con la muestra,
En lugar de atravesarla. Produce imágenes
Tridimensionales de la superficie del objeto.
Límite de Resolución de 10 nm
Óvulo de hámster sin zona
pelúcida con espermatozoides

Criofractura de epitelio gástrico vista por

microscopia de barrido
 Microscopio Electrónico
de Barrido
SS-550

Imagen de electrones secundarios en

una muestra de cerámica:
Ampliación: 10.000x
Aceleración: 15.0 kV