Espectrofotometría UV-Vis

Almir Frank Segura S.

Contenido
Cómo se muestra en la tabla en los métodos basados en a emisión,
luminiscencia y dispersión, la potencia de la radiación emitida por el analito
tras la excitación es, en general, directamente proporcional a la
concentración C (S = KC), donde K es una constante que puede calcularse
con estándares.
 Métodos Basados en la Absorción

Los métodos cuantitativos basados en la Absorción requieren

de dos mediciones de potencia: Una antes de que el haz pase
por la muestra (Po) y otra después de pasar por el medio que
contiene al analito (P).

La Transmitancia y la Absorbancia son los términos utilizados.

La Transmitancia
b
𝑷
𝑻=
𝑷𝟎
𝑷 C
%𝑻 = ∗𝟏𝟎𝟎
𝑷𝟎
 La Absorbancia del medio se define como:

𝑃0
𝐴=− 𝑙𝑜𝑔𝑇 =log
𝑃

La Ley de Beer

Para una radiación monocromática la Absorbancia es

directamente proporcional al camino óptico (b) y a la
concentración (c) de la especie absorbente.

A = abc
a es la constante de proporcionalidad llamada absortividad. Si
la concentración es molar, se llama absortividad molar (ε). A
no tiene unidades.
 Hasta el 8.5% de la luz
amanilla se pierde por
refle-xiones con las
interfaces.

Para compensar las pérdidas se compara la Potencia de la luz al pasar

por la solución con la P emergente al pasar por el solvente.
 Aplicaciones de la ley de Beer a mezclas

La ley de Beer también se puede aplicar a un medio que

contenga mas de una clase de sustancias absorbentes.
Siempre que no exista interacción entre las distintas especies,
la AT vendrá determinada por:

Limitaciones de la Ley de Beer

La linealidad entre A y b (camino óptico) casi siempre se

conserva, pero sí se observan desviaciones entre A y C a b
constante.
 Calcular los valores de
absorbancia para las
disoluciones no
tamponadas (b = 1 cm)
cuyas concentraciones
totales del Indicador
estén entre 2x10-5 y
1.6x10-4 M.
𝐴 430 = 𝐴 𝐻𝐼𝑛 + 𝐴 𝐼𝑛 −
𝐴 430 = 𝐴 𝐻𝐼𝑛 𝑎 𝑝𝐻 =1
𝐴 430 =𝜖 𝐻𝐼𝑛 . . 𝑏 . 𝐶
 𝐻𝐼𝑛+ 𝐻 2 𝑂 ❑ 𝐼𝑛 − + 𝐻 3 𝑂+¿¿ ¿
↔

𝐾 𝑎= [ 𝐼𝑛 ]¿¿
−
2.10-5 -1.12.10-5 = 8.8x10-6 M

¿ 𝐴 430 = 𝐴 𝐻𝐼𝑛 + 𝐴 𝐼𝑛 −

𝐶 𝐻𝐼𝑛= [ 𝐻𝐼𝑛 ] + [ 𝐼𝑛 ]
−

6.3x102.8.8x10-6 +2.06x104.1.12x10-5
[ 𝐻𝐼𝑛 ] = 𝐶 𝐻𝐼𝑛 − ¿
𝐴430 =0.236

𝐾 𝑎=¿ ¿ ¿
0.073
𝐾 𝑎=¿ ¿

¿ Iterar
 −

𝐻𝐴+ 𝐻 2 𝑂 𝐴 − + 𝐻 3 𝑂+¿ ¿ 2 𝐻 2 𝑂❑ 𝐻 3 𝑂+¿+𝑂𝐻 ¿

↔ ↔

𝐾 𝑎=¿ ¿ 𝐶= [ 𝐻𝐴 ] + [ 𝐴 ]
−

¿
𝐾 𝑎=¿ ¿ ¿ 𝐶 −¿
𝐶=2 𝑥 10 𝑀 −5 𝐾 𝑎=1.42 𝑥 10−5

𝐾 𝑎 ¿ √ 𝐾 𝑎 ¿¿

√ 1.42 𝑥 10 − 5 ¿ ¿
Algoritmo
√ 1.42 𝑥 10 −5
( 2 𝑥 10 −5 − 𝐴𝑁𝑆 ) =1.12 𝑥 10 −5 𝑀

1 Si C NaCl = 0.1 M y K2SO4 0.05 M, calcular la fuerza

𝜇= ∑ [ 𝑋 𝑗 ] . 𝑧
𝑧 2
2 iónica
¿ 𝜇=
1
¿
2
¿ 𝜇=0.2 𝑀
[ 𝑆 𝑂 24 − ] =0.05 𝑀
Hay desviaciones asociadas al fundamento de la ley de Beer.
Otras surgen por la forma en que se realizan las medidas
(Instrumentales) o por cambios químicos con cambios en
concentración (desv. Químicas)

La linealidad entre A y C se cumple generalmente para C ≤ 0.01 M.

A mayores concentraciones aparecen cambios en la absortividad
molar debidos a efectos electrostáticos entre las moléculas. De allí
q. ε es sensible a la fuerza iónica de la solución.

Por ejemplo el azul de metileno en disoluciones acuosas a 436 nm

aumenta un 88 % el valor de ε cuando la concentración pasa de 10-
5
a 10-2 M e incluso no presenta buena linealidad a concentraciones
de 10-6 M.
 También ε depende del índice de refracción del medio (pero el
efecto es pequeño para C ≤ 0.01 M); se puede corregir dicho
efecto reemplazando ε, en la ecuación de Beer, por:
𝜀 .𝑛  
2
( 𝑛 2+ 2 )

Desviaciones Químicas

Analitos fluorescentes o
fosforescentes emiten radicación que
llega al detector.

Analitos que disocian o reaccionan

con el solvente generando productos
con un espectro de absorción
diferente.
 Desviaciones Instrumentales originadas por
la radiación policromática

Los equipos aíslan porciones de la señal de salida de una fuente

continua, estas porciones son bandas de λs mas o menos
centradas en la λ deseada
Experimental mente se observan pocas desviaciones si se
seleccionan máximos de absorción de picos estrechos y si la
anchura efectiva del monocromador (Δλef) es menor a 1/10 el
ancho de pico medio de la absorción.
 Desviaciones Instrumentales originadas por
radiaciones parásitas

La radiación que emerge

del monocromador suele
estar contaminada con
pequeñas cantidades de
radiación dispersada o
parásita. Esta radiación
difiere de la λ de la
radiación principal.

PS es la potencia de la rad
parásita.
Las desviaciones instru-
mentales conducen a errores
negativos en la absorbancia
 EFECTO DEL RUIDO INSTRUMENTAL EN LA
PRECISIÓN DE LOS ANÁLISIS
ESPECTROSCOPICOS

La exactitud y precisión de los análisis espectrocópicos

frecuentemente están limitados por la incertidumbre o ruido
asociado al instrumento.

Una medida espectrofotométrica conlleva tres etapas: el ajuste del

0% de T, el ajuste del 100 % de T y la medición de la muestra; en
cada etapa se genera una incertidumbre (reflejado como ruido)
que se suman en la incertidumbre de la medida de T obtenida.

Esta incertidumbre es llamada error Fotométrico.

 ERROR FOTOMÉTRICO

A bajas absorbancias la intensidad del haz incidente y

transmitido es prácticamente igual y el detector incurre en un
error grande al percibir la intensidad de dos haces muy
semejantes. A altos valores de absorbancia la energía
transmitida es tan pequeña que no es posible medirla con
precisión . La Mayor precisión es obtenida en un rango de 15 %
de transmitancia ( A= 0.8 ) a 65% de la misma ( A=0.20 ), por lo
que si se desea obtener resultados de alta precisión, es
conveniente diluir o concentrar la muestra hasta que su
absorbancia o transmitancia esté dentro de este rango.
 Instrumentación

Los instrumentos para medir la absorción de la radiación UV,

visible e IR cercano están compuestos por uno o mas de los
siguientes componentes:

• Fuente: D2/H2 (160 nm a 350 nm)

Filamento de wolframio: 350 a 2500 nm (temp de
2870 °C)
Arco de Xenón: 200 a 1000 nm con un máximo de
intensidad de 500 nm.
• Selectores de longitud de onda
• Recipientes para la muestra
• Detectores de radiación
• Procesadores de la señal y dispositivos de lectura
Instrumentación
 Espectros

Un espectro es una gráfica de alguna medida de la radiación EM

absorbida por la muestra versus la λ o la energía de la radiación EM.
 Aplicaciones de la espectroscopia de
Absorción Molecular Ultravioleta /
Visible

Qué significa el valor de la absortividad molar (ε)?

Para un pico de absorción particular ε depende de la

probabilidad de la transición (P) y de la sección transversal de
captura (A).

ε = 8.7x1019. P.A P є (0.1, 1) para transiciones permitidas y A

en moléculas orgánicas comunes es ≈10-15 cm2

Esto permite calcular un εmax de 104 a 105 para las transiciones

permitidas. Valores de ε < a 103 corresponden a transiciones
prohibidas (P < 0.01)
 Especies Absorbentes

La absorción de la radiación UV-vis por parte de una especie M

puede verse como un proceso de dos etapas
El tiempo de vida de la
especie excitada M* es
pequeño (10-8 a 10-9 s)
Proceso de relajación
También puede darse
fluorescencia, fosforescencia
y reacciones fotoquímicas.
Todas estas no deseadas en
la técnica

La Absorción de la radiación UV-vis resulta, generalmente, de la

excitación de los electrones de enlace o de la capa de valencia, por
lo que los picos pueden relacionarse con los tipos de enlace.
 Es importante reconocer los tipos de transiciones:

1. Electrones π, σ y n
2. Electrones d y f
3. Electrones de transferencia de carga

Especies absorbentes que contienen electrones π, σ y n

Todas las especies orgánicas absorben radiación EM pues todos tiene
electrones de valencia y de enlace. La E de excitación electrónica de un
enlace sencillo es tan alta que suele tener una λ < 185 nm (UV de vacío)
donde también absorben los gases atmosféricos. Los grupos funcionales
que abs a λ > 185 nm son llamados Cromóforos
 Tipos de electrones
absorbentes

1. e- que participan en el
enlace
2. e- no enlazantes

Los enlaces covalentes

se forman porque los e-s
que contribuyen al enlace
se mueven en la zona
que rodea a los centros
atómicos. El lugar en
Los enlaces sencillos están
donde es mas probable
caracterizado por orbitales σ (sigma).
encontrar a los electrones
Estos tienen una simetría rotacional.
se denomina orbital
Los enlaces dobles tienen asociado
atómico y para los e- del
dos enlaces, uno σ y uno π.
enlace se denomina
orbital molecular.
Transiciones Electronicas

Transiciones σ σ*

Es común en todos los

compuestos orgánicos.
La E requerida corresponde a
λ < 185 nm UV- de vacío y
nunca se observan en el
visible.
Los compuestos saturados solo contienen enlaces simples por lo
que solo es posible este tipo de transiciones.
P.e. El Metano tiene un λmax = 125 nm mientras que el etano de
135 nm, la diferencia se debe a que el enlace C-C es de menor
energía que el enlace C-H apareciendo a una mayor λ.
 Transiciones n σ*

Compuestos saturados con pares de e- no compartidos. Las λ є

(150 y 250 nm) apareciendo la mayoría de las señales por debajo
de 200 nm, valor que depende de la fuerza del enlace. El valor de
permitividad es de bajo a medio (100, 3000) L.cm-1mol-1. Debe
existir un O, N, S, halógeno, etc ya que estos tienen e- libres.
 Transiciones π π *y n π*

La mayoría de las aplicaciones de E. de Absorción se basa en los

compuestos que tienen estas transiciones ya que son mayores a
200 nm (200 y 700) nm. Se dan en compuestos con
insaturaciones y/o electrones libres no enlazados como los
cromóforos carbonilo, azo, nitro y tiocarbonilo.

Los valores de ε (nπ*) es baja (10, 100 ) L.cm-1.mol-1 mientras que

las transiciones π π* tiene absortividades muy altas (1000,
10000).
 Qué afecta el valor de la λMax de absorción?

• La conjugación
• Solvente
• La estructura
• Grupos sustituyentes

Efecto de la conjugación
Un compuesto conjugado es aquel que alterna enlaces sencillos
y dobles.
Efecto de la conjugación
Efecto de la conjugación
 Influencia de los heteroátomos – La sustitución

Los heteroátomos como O, N, S y Halógenos introducen

electrones libres por lo que las transiciones son nπ*. La E de la
transición depende de la E del par libre que disminuye con el
incremento de la electronegatividad.
 Efecto del solvente
Los solventes polares afectan de manera distinta la absorción máxima de las
transiciones nπ* y π π*

Hipsocrómico Batocrómico
λ λ
Polaridad del

disminuye

aumenta
solvente

n π*

π π*
Efecto del solvente - Ejemplo
Efecto Estérico
 Los Auxocromos

Son grupos funcionales con átomos que tienen pares de

electrones solitarios (n), que cuando se unen a un cromóforo
alteran tanto λ como ε. Si estos electrones están en conjugación
directa con un sistema π del cromóforo, pueden aumentar el
valor de la λ de absorción.
 B es un
auxocromo
electroactivo

Los auxocromos mas efectivos son aquellos que contienen N y S

ya que son ricos en e- no enlazantes
Absorción por iones Inorgánicos

NO3- (313 nm), NO2- (360 y 280 nm), CO32- (217 nm), N3- (230 nm), CS32- (500 nm)

La mayoría de los iones metálicos

de transición y transición interna
absorben en el UV-vis. Estas abs
se deben a transiciones de los
electrones 3d, 4d (elementos de
transición), 4f o 5f (lantánidos y
actínidos).
Teoría del campo ligando

La
Losseparación se encuentra
e- no enlazantes afectada
del ligando por los
producen
siguientes
repulsionesfactores:
sobre los e- del catión central
s
•lo La
quenaturaleza
deforma del
los ion
orbitales degenerados
metálico.
•d oElf estado de oxidación del metal.
• El arreglo geométrico de los ligandos en
torno al ion metálico.
• La naturaleza de los ligandos que rodean
al ion metálico -a mayor efecto del ligando,
mayor diferencia entre los grupos de baja y
alta energía de orbitales d.

La magnitud del ΔE depende de la carga

del ion metálico, la posición de éste en la
tabla periódica y de la fortaleza del
ligando, esta última es llamada la fuerza
del campo ligando.
 Fuerza el campo ligando
I- < Br- < Cl- < F- < OH- < C2O4 2- ≈ H2O < SCN- < NH3 < etilendiamina < NO2- < CN-
Tipos de transiciones que se dan en los complejos de
coordinación
 Reglas de Woodward - Fiesher

Reglas empíricas que se aplican a dienos homo anulares y hetero

anulares. Permiten predecir su λMax de absorción.

trans
Cis

6
 1

2
OAc
3 1

3 1
 d d
R c
b
a c
Ejercicios Propuestos. Aplicación de las Reglas de Woodward para dienos
 Base = 246

Ejemplos
m
Y o
p

m X
o
 m o
p

m
o
 Despejar y

𝐾 𝑎=[ 𝐼𝑛 ] ¿¿
= C-

= C+

+
𝐴=𝜖 .𝑏 . 𝐶 𝐶𝑢𝐴 2=𝜖 . 𝑏 . 𝐶 𝐶𝑢 =𝜖 . 𝑏 .2.3 𝑥 10 −4

𝐴
∈= =3000
𝐶 𝐶𝑢

𝐴 0.54
[ 𝐶𝑢𝐴 2 ] = = =1.8 𝑥 10− 4 𝑀
∈ 3000

[ 𝐶𝑢 𝐴2 − ]
𝐾𝑓=
¿¿
 𝐴( 𝑀𝑛) ∈ 𝑀𝑛 𝑏 𝐶 𝑀𝑛 10.2 ∈ 𝑀𝑛 5
= = =
𝐴( 𝐹𝑒 ) ∈𝐹𝑒 𝑏 𝐶 𝐹𝑒 8.0 ∈ 𝐹𝑒 𝐶 𝐹𝑒 1

𝐴 ( 𝑀𝑛) ∈ 𝑀𝑛 𝑏 𝐶 𝑀𝑛 12.5 ∈𝑀𝑛 5

= = =
𝐴( 𝐹𝑒 ) ∈𝐹𝑒 𝑏 𝐶 𝐹𝑒 8.2 ∈𝐹𝑒 𝐶 𝐹𝑒 2

12.5 ∈𝑀𝑛 𝐶 𝑀𝑛
8.2 ∈ 𝐹𝑒 𝐶 𝐹𝑒 2 𝐶 𝑀𝑛
= =
10.2 ∈ 𝑀𝑛 5 5
8 ∈ 𝐹𝑒 𝐶 𝐹𝑒 1
Ejercicios

1
2

𝑪𝒔 VT =100 mL
𝑨𝟏 =𝜺 𝒃 𝑪 𝑨 𝑅 −1= 4
𝑪𝑨 𝐶 𝑆 =3.82. =0.1528
100
𝑨𝟐 =𝜺 𝒃 𝑪 𝑨 + 𝜺 𝒃 𝑪 𝒔
𝐶𝑆
𝐶 𝐴=
𝑅−1

p/p